Orientador: Marcos Rogério André / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho / Resumo: Doenças transmitidas por vetores artrópodes tem se tornado cada vez mais importantes para a saúde humana e animal. Neste sentido, o papel dos animais selvagens como reservatórios na transmissão destas enfermidades vem sendo investigado. A ordem Chiroptera é considerada o segundo maior grupo de mamíferos no mundo, hospedando importantes patógenos zoonóticos, tais como vírus e bactérias. Bartonella spp. e Mycoplasma spp. são bactérias que parasitam eritrócitos de diferentes espécies de mamíferos, incluindo humanos, podendo causar manifestações clínicas diversas. O presente estudo objetivou pesquisar a ocorrência e analisar filogeneticamente Bartonella spp. e Mycoplasma spp. em quirópteros amostrados no Brasil. Para tal, foram colhidas 325 amostras de sangue e/ou tecidos (fígado, coração e baço) de 162 quirópteros pertencentes a 19 espécies distribuídas em quatro famílias distintas de cinco estados: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo e Tocantins. Destas, três amostras mostraram-se negativas para o gene endógeno de referência (GAPDH), sendo excluídas das análises. Portanto, do total de 322 amostras, 17 (5,28%) mostraram-se positivas para Bartonella spp. por meio da PCR em tempo real baseada no gene nuoG. A quantificação de um fragmento do gene nuoG de Bartonella spp. por microlitro variou de 4,4 x 10⁰ a 6,95 x10³ cópias/μL nas amostras de sangue e teciduais dos quirópteros. Ainda, 45 amostras (13,97%) mostraram-se positivas para hemoplasmas por meio da PCR convencional baseada ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vector-borne diseases have become increasingly important to human and animal health. The role of wild animals as reservoirs in the transmission of these diseases has been investigated. The Chiroptera Order is considered the second largest group of mammals in the world, hosting important zoonotic virus and bacteria. Bartonella spp. and Mycoplasma spp. are bacteria that parasites different mammals species' erythrocytes, including humans, causing different clinic manifestations. The present work aimed at investigating the occurrence and assessing the phylogenetic positioning of Bartonella spp. and Mycoplasma spp. in bats sampled in Brazil. A total of 325 blood and/or tissue (liver, spleen and heart) samples were collected from 162 bats belonging to 19 species distributed in four different families from five states: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo and Tocantins. Three samples showed negative results in the conventional PCR based on GAPDH gene and excluded from analysis. Seventeen (5,28%) out of 322 bats' samples were positive to qPCR for Bartonella spp. based on nuoG gene. The quantification of a Bartonella spp. nuoG gene fragment per microlitro in bats' blood and tissues ranged from 4,4 x 10⁰ a 6,95 x10³ copies/μL. On the other hand, 45 (13,97%) samples were positive to cPCR assays for hemoplasmas based on 16S rRNA gene. Seven sequences were obtained for Bartonella spp. (nuoG [n=3], gltA [n=2], rpoB [n=1], ftsZ [n=1]), and five 16S rRNA sequences were obtained for Mycoplasm... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Quefír é uma bebida láctea originada do Cáucaso, produzida a partir da fermentação alcoólica e ácido-lática dos grãos de quefír, que são microrganismos que vivem em perfeita simbiose. Assemelhando-se ao iogurte natural quanto ao sabor, aroma, consistência, o quefír é um alimento muito rico e por isso indicado para crianças e idosos. Possui inúmeras indicações terapêuticas, mas ainda é pouco conhecido no país. Quefír foi durante muito tempo conhecido apenas pelos povos montanheses da região Caucásica, onde é preparado com leite de ovelha ou de cabra e recebe também o nome de "milho do profeta", em alusão a Maomé, no referencial islâmico. Com base nos resultados apresentados em diversos trabalhos, comprovando a ação antimicrobiana dos grãos de quefír, prosseguiram-se os estudos pesquisando a ação antibacteriana do filtrado esterilizado de quefír artesanal, frente a diversas situações problemas. Estudou-se a possibilidade de utilizar o filtrado de quefir tradicional (artesanal ou não industrializado), previamente esterilizado, como antisséptico/desinfetante em agroindústria familiar ou produção animal; forma alternativa aos desinfetantes químicos convencionais, considerando sua eficácia (benefício esperado/ benefício obtido), através da determinação de sua atividade antibacteriana. Foi determinada as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) e concentrações bactericidas mínimas (CBMs) do filtrado de quefir tradicional frente a duas bactérias Gram-positivas {Staphylococcus aureus ATCC 25923, e Enterococcus faecalis ATCC 19433) e duas bactérias Gram-negativas {Escherichia coli ATCC 11229 e Salmonella enteritidis ATCC 11076 ), levando em consideração três técnicas diferentes de esterilização do filtrado, no sentido de avahar a ação antibacteriana qtianto ao tempo de exposição (cinco, quinze, trinta e sessenta minutos), presença ou ausência de suporte (aço inoxidável e pano de algodão), presença ou ausência de matéria orgânica (albumina sérica bovina, simulando sujidades de uma agroindústria). Utilizou-se a diluição serial com a técnica de sistema de tubos múltiplos e a técnica de suspensão do inóculo. Para esterilizar o filtrado de quefir utiHzaram-se três diferentes técnicas: fervura convencional por quinze minutos, tindalização durante cinco minutos, por três dias consecutivos e autoclave por quinze minutos. Estas três técnicas de esterilização não apresentaram diferenças significativas entre elas. Os resultados demonstram um maior efeito bacteriostático frente a bactérias Gram-negativas e um melhor efeito bactericida frente a bactérias Gram-positivas. Staphylococcus aureus foi a bactéria que demonstrou maior resistência para a inibição (bacteriostasia); porém após sessenta minutos exposta ao quefir (75%), a inativação (bactericidia) ocorreu em 100 UFC/mL. Enquanto que a Salmonella demonstrou sensibilidade à inibição, mas nas mesmas condições, ou seja, aos sessenta minutos exposta ao quefir (75%), a inativação ocorreu em somente 10 UFC/mL. Nas primeiras vinte e quatro horas houve diferença muito significativa no desempenho do filtrado de quefir entre as linhas com e sem desinibidores bacterianos. Eis a importância do uso de desinibidores na técnica para evitar interpretações errôneas de resultados "falsos-negativos", ou seja, evitar uma leitura de morte bacteriana, quando na verdade o que ocorreu foi inibição bacteriana. Estes resultados despertam o interesse em prosseguir a avaliação de desinfetantes biológicos a serem usados na agroindústria, na saúde e na produção animal, visando à desinfecção como um controle direcionado aos microrganismos indesejáveis em situações problemas específicos, dificultando a transmissão ou a redução da dose infectante. / Kefir is a milky beverage originated of Caucasu, made by lacteo-acid and alcoholic fermentation ofkefir grams which are microorganisms that live tn perfect symbiosis. It seems like natural yogurt as taste, smell, consistence, kefir is a food very rich and that 's because it 's indicated for children and old ages. It has countless therapeutical indications, but it '5 still unknown in Brazil. Kefir was, during a very long time, known only by montainese people from the Caucasus' region, where is made with sheep or she-goat milk and it also recives the name of "prophet com in Maome allusion, on the Islamic reference. Throughout the shown results in several works, proving kefir grains' antimicrobian action, the studies went on searching the artisan kefir sterilized filtered's antibacterial action, front the several situations problems. Showed the possibility of use the tradicional kefir's filtered (artisan or not industrialized), previous sterilized, as antiseptic/disinfectant in familiar agroindustrial or animal production; alternative from to the conventional chemical desinfectants, considering its efficíency (expect benefit/gotten benefit), throughout the determination of its antibacterial activity. The Minimum Concentrations Inhibitions (CIMs) were determined and the Minimum Concentrations Bactericide (CBMs) of the tradicional kefir 's filtered front the two positives-Gram bactérias (Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Enterococcus faecalis ATCC 19433), and two negatives-Gram bactérias (Escherichia coli ATCC 11229 and Salmonella enteritidis ATCC 11076), taking into consideration three different technics to sterilize the kefir 's filtered, in perceive of evaluate the antimicrobian action as to in the exposition of time (five, fifteen, thirty and sixty minutes), presence or absence of support (stainless steel and cotton of cloth), presence or absence of organic material (albumin bovine in simulation dirts of one agroindustrial). The utilized methodology was the serial dilution with the multiple tube system technic and the tnocul suspension technic. To sterilize the kefir 's filtered was used three different technics: the convencional effervescence by fifteen minutes, the tindalization during five minutes, by three days successives and the autoclave by flfteen minutes. These three technics of sterilization didn 't show differences significatives among them. The results shown in a bigger bacteriostatic effect into negatives-Gram bactérias and a better bactericid effect in to positives-Gram bactérias. Staphylococcus aureus demonstrated the bigger resistance bactéria of inhibition, but qfíer the sixty minutes exposed in the kefir (75%), inactived in 100 UFC/mL. While Salmonella showed sensitivity of inhibition, but equal condition, or then, for the sixty minutes exposed in the kefir (75%), inactived just in 10 UFC/mL. At the first twenty-four hours there was very significative difference in performance of kefir's filtered among the Unes with and without bacterial desinhibition. It is the importance to use desinhibition in technic to avoid false tnterpretation of results, or then, to avoid readmg of dead bacterial, when actually what happened was bacterial inhibition. These results awake the interesting to go on the biologics disinfectants valuation to use in agroindustrial, in health and animal production, looking at disinfection how a control in to conduce undesirable microorganisms on specific situations problems, to make difftcult the transmission or the reduction of infect dose.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Optimizar la fermentación ácido láctica (FAL) del ají “Charapita”. El análisis de azúcares y acidez total titulable se utilizaron para el seguimiento de las FAL. Para el análisis microbiológico, contaje por microscopio y contaje por placa en medio MRS para bacterias ácido lácticas (BAL), YPD para levaduras, McConkey para enterobacterias y Cetrimide para pseudomonas fueron realizados. En el primer estudio, las concentraciones de NaCl más adecuados fueron determinados, siendo 5% y 10% de NaCl puesto que la velocidad de acidificación fueron las más altas (0.05% de acidez/día) y, las BAL y levaduras fueron las predominantes durante la FAL. La recuperación de enterobacterias y pseudomonas fue menor en ambas condiciones. En el segundo estudio, las FAL del ají “Charapita” fueron optimizadas mediante el método Superficie Respuesta. Los resultados mostraron que el R2 para la velocidad de acidificación fue 0.8371 (p = 0.004). Según el “optimizador de respuesta”, las condiciones de fermentación que favorecen con una mayor velocidad de acidificación fue NaCl 6.25% y glucosa 1.77%. Sin embargo, experimentalmente, las condiciones de NaCl de 5% y glucosa 2.5% fueron ligeramente superior. Las BAL fueron las predominantes durante la FAL, excepto en el 0 día donde las enterobacterias y pseudomonas fueron las predominantes. Las levaduras fueron recuperadas en bajas poblaciones. En el tercer estudio, los componentes del medio MRS fueron añadidos a las condiciones de FAL. Los resultados mostraron que la FAL con NaCl 5% y glucosa 2.5% aumentó la velocidad de acidificación a 0.194% de acidez/día. Las BAL y levaduras fueron las predominantes. Sin embargo, la recuperación de enterobacterias y pseudomonas aumentaron considerablemente. En el cuarto estudio, la FAL con las condiciones óptimas fue realizada a escala piloto. La FAL espontánea fue comparada con FAL controlada. Los resultados mostraron que la acidez final en la FAL espontánea fue mayor a la FAL controlada. Las 14 BAL y levaduras fueron las predominantes en FAL espontánea; mientras que las levaduras y enterobacterias en la FAL controlada. La recuperación de enterobacterias fue más alta que las pseudomonas en la FAL espontánea. En conclusión, las condiciones óptimas para la FAL del ají “Charapita” son de NaCl 5% con glucosa 2.5% (p/v). La máxima velocidad de acidificación fue obtenida en estas condiciones. Las BAL y levaduras son los microorganismos responsables de la FAL. / Tesis

El semen de verracos aparentemente sanos provenientes de granjas de crianza tecnificada y semitecnificada fueron evaluados bacteriológicamente para investigar la cantidad de microorganismos presentes. Se analizó 60 muestras de semen extraídas de 30 verracos, procedentes de tres granjas porcinas de Lima, dos granjas de crianza tecnificada y una semitecnificada. Cada muestra de semen fue sembrada en medios de cultivo y las muestras que tuvieron desarrollo bacteriano, fueron identificados bioquímicamente. En el 73% (11/15) de muestras de granjas tecnificadas se encontró crecimiento bacteriano y los gérmenes aislados según su frecuencia fueron Pseudomona aeruginosa, Citrobacter spp, Proteus vulgarís, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis y Micrococcus spp.. En el 100% (15/15) de las muestras de granjas semitecnificadas hubo crecimiento bacteriano, encontrándose Pseudomona aeruginosa con mayor incidencia y le siguieron Escherichia coli, Proteus vulgarís, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Klebsieila spp. y Citrobacter spp. En las granjas tecnificadas, el 13% (2/15) de reproductores sobrepasaron el límite de unidades formadoras de colonias por mililitro de semen (UFC/ml) establecido por la Oficina Internacional de Epizootias (OIE) (no >5103 UFC/ml) y en ia semitecnificada el 60% (9/15) superaron estos límites. Existen muchos factores que pueden actuar negativamente sobre la calidad espermática dei semental provocando ciertas alteraciones cualitativas y cuantitativas que van a repercutir a corto plazo en una disminución de la eficiencia reproductiva del animal. / Tesis

Tesis para optar al Título profesional de Ingeniero Agrónomo y Grado de magíster en Enología y Vitivinicultura / El vinagre ha formado parte de la alimentación humana desde la antigüedad, siendo utilizado principalmente como condimento y conservador de alimentos; también ha sido utilizado como base de medicamentos sencillos para hombres y animales, siendo un producto habitual en la mayoría de los países mediterráneos (Morales et al., 2003; Pujolá et al., 2003). En Francia en el siglo XVI, el vinagre se elaboraba a partir de uvas, tanto para el consumo del hogar como para la exportación. En Inglaterra, el vinagre era hecho de malta y en América no se sabe con certeza desde cuando, aunque se piensa que se utilizó desde muy temprano como un producto del hogar, siendo el jugo de manzana el que se ha utilizado para este fin en los Estados Unidos (Proluxsa, 2008).

Evidencias recientes sugieren que la microbiota comensal del intestino constituye un factor dinámico que se relaciona activamente con el hospedador, mediante sistemas específicos de reconocimiento bacteriano, y participa en la regulación de funciones sensoriales, motoras y secretoras gastrointestinales. En particular, la microbiota comensal del intestino se ha implicado en los mecanismos fisiopatológicos de la enfermedad inflamatoria intestinal. Este trabajo de investigación tiene como objetivo principal demostrar como variaciones en las condiciones ambientales llevan a cambios adaptativos espontáneos de la microbiota comensal del intestino de la rata, y como estos cambios afectan a los mecanismos intestinales de reconocimiento de la microbiota y modulan las respuestas inflamatorias y la expresión de sistemas endógenos sensoriales (en particular del sistema canabinoide).En primer lugar se ha caracterízado de la microbiota cecal comensal en ratas criadas en condiciones de barrera (SPF) y en ratas criadas en condiciones convencionales y los cambios espontáneos que se producen en el proceso de adaptación de uno a otro ambiente (ratas criadas en barrera adaptadas a condiciones convencionales). Para ello, se emplearon técnicas de hibridación in situ fluorescente (FISH) para los principales grupos bacterianos descritos en la microbiot intestinal y análisis de polimorfismos de fragmentos terminales de restricción (t-RFLP). Con la intención de correlacionar la microbiota con los sistemas de reconocimiento bacteriano se determinó también la expresión de los receptores de tipo Toll (Toll like receptors) 2 (TLR-2) y 4 (TLR-4); para ello se emplearon técnicas de RT-PCR. Los resultados obtenidos demuestran que las ratas criadas en barrera tienen mayor cantidad de Bacteroides spp y Clostridium spp y menor cantidad de bifidobacterias y lactobacilos que las ratas criadas en condiciones convencionales. Las ratas adaptadas a un ambiente convencional tienen las mismas poblaciones bacterianas pero en cantidades intermedias. Según el análisis de t-RFLP, la biodiversidad de las poblaciones bacterianas fue similar los tres grupos de animales. En particular, se observo una alta homogeneidad en el tiempo de las poblaciones bacterianas en el grupo barrera. La expresión de TLR-2 fue similar en los tres grupos, mientras que el TLR-4 mostró una clara tendencia a la sobre-expresión en condiciones de barrera y una reducción progresiva en la adaptación a condiciones convencionales. En general, los niveles de expresión no se correlacionaron con ninguno de los grupos bacterianos cuantificados.A continuación, se ha empleado un modelo de enteritis (íleitis) aguda inducida por indometacina para valorar variaciones de la microbiota comensal asociadas a la inflamación así como diferencias en la susceptibilidad a la inflamación entre ratas criadas en condiciones extremas de higiene (SPF) adaptadas a un ambiente convencional y ratas criadas en condiciones convencionales. Los resultados obtenidos muestran, que durante la inflamación aguda la microbiota comensal, tanto del ileon como del ciego, varía cualitativa y cuantitativamente. Además, se afectan los sistemas intestinales de reconocimiento bacteriano, con una sobre-expresión de los receptores TLR-2 y TLR-4 durante la inflamación. Con respecto a la respuesta inflamatoria propiamente dicha, las ratas criadas en condiciones convencionales mostraron, en general, una mayor susceptibilidad a la inflamación aguda que los animales SPF adaptados, tal y como mostró la evaluación clínica, histológica y bioquímica de la inflamación. Finalmente, se ha evaluado como la microbiota comensal del intestino puede afectar otros mecanismos sensoriales intestinales; en particular, mecanismos dependientes de receptores canabinoides. Para ello, se ha determinado la expresión intestinal de receptores canabinoides, CB1 y CB2, en ratas mantenidas en condiciones de barrera (SPF), ratas mantenidas en condiciones convencionales y animales criados en barrera y adaptados a condiciones convencionales. En general, los dos receptores se expresaron en tejido cecal, aunque los niveles de CB2 fueron mayores a los de CB1. Además, independientemente del receptor considerado, la expresión se reduce en el paso de un ambiente de barrera a un ambiente convencional. Estas variaciones en la expresión se correlacionaron positivamente con los cambios espontáneos en las poblaciones de Bacteroides spp y Clostridium spp y negativamente con la población de Bifidobacterium spp.En su conjunto, estos resultados muestran que la microbiota intestinal es un sistema dinámico, que varía y se adapta espontáneamente a las condiciones ambientales en las cuales se mantienen los animales de experimentación. Estos cambios implican variaciones en la homeostasis intestinal que afecta a la expresión de receptores de reconocimiento bacteriano (TLR-2 y TLR-4) o de receptores canabinoides, así como a la susceptibilidad a la inflamación, al menos en su fase aguda. Estas observaciones indican que la microbiota intestinal es un factor de variabilidad que puede afectar a los resultados experimentales y debe tenerse en cuenta en la interpretación de resultados experimentales, particularmente en el área de gastrointestinal. / Recent data suggest that gut commensal microbiota is a dynamic factor with an active relationship with the host, through the interaction with specific bacterial recognition systems, and directly involved in the regulation of gastrointestinal sensory, motor and secretory responses. In particular, gut commensal microbiota has been implicated in the pathophysiology of inflammatory bowel disease (IBD). This work aims to demonstrate how environmental variations lead to spontaneous adaptive changes of gut commensal microbiota in rats, and how these changes affect the expression of bacterial recognition systems and modulate gut inflammation and the expression of endogenous sensory systems (in particular the cannabinoid system).First, we determined changes in cecal commensal microbiota and expression of Toll Like Receptors (TLR), (TLR-2) and (TLR-4) in rats bred under microbiologically-controlled conditions (barrier), under standard conditions (conventional) and in barrier animals adapted to standard conditions (barrier/conventional). In these groups, cecal microbiota was analyzed by fluorescence in situ hybridization (FISH) and microbial profiles were assessed by terminal restriction fragment length polymorphism (t-RFLP). As to correlate microbiota and bacterial recognition systems within the gut, cecal expression of TLR-2 and TLR-4 was also determined by RT-PCR. Total number of cecal bacteria was similar in the three groups. However, the barrier group showed a higher number of strict anaerobic bacteria, namely Bacteroides spp and Clostridium spp, while Bifidobacterium spp and Lactobacillus spp were scarce. Re-housing the barrier-bred rats into conventional conditions led to a microbiota with intermediate characteristics between the barrier and the conventional groups. Richness of the cecal microbial ecosystem was similar in the three groups. Although a relative time-dependent variation was observed in microbiota composition, the barrier group showed high consistency over time. Expression levels of TLR-2 and TLR-4 were relatively low, without clear correlation with the microbiota. Only TLR-4 showed a tendency to be over-expressed in the barrier group.Thereafter, a model of indomethacin-induced acute enteritis (ileitis) in rats was used to assess inflammation-induced changes in gut commensal microbiota as well as differences in the susceptibility to inflammation between rats bred under high hygienic conditions (SPF) adapted to conventional conditions and rats bred and maintained under conventional conditions. Results obtained show specific, inflammation-induced, qualitative and quantitative changes of ileal and cecal comensal microbiota. Moreover, gut bacterial recognition systems are also affected by acute inflammation, with an over-expression of both TLR-2 and TLR-4. As it relates to inflammation per se, rats breds under conventional conditions showed, in general, higher susceptibility to inflammation than SPF animals adapted to the conventional environment; as demonstrated using clinical histological and biochemical parameters.Finally, we assessed how gut comensal microbiota affects other intestinal sensory mechanisms, in particular cannabinoid receptor-dependent mechanisms. For this, we determined the cecal expression of cannabinoid receptors 1 (CB1) and 2 (CB2) in the same groups of rats described above: 1) maintained under barrier conditions (SPF); 2) maintained under conventional conditions; and 3) bred under barrier conditions but adapted to a conventional environment. In general, both receptors were expressed in cecal tissues, although levels of expression of CB2 were higher than those of CB1. Moreover, independently of the receptor subtype considered expression levels diminished with the change from barrier to conventional conditions. These variations correlated positively with spontaneous changes in the counts of Bacteroides spp and Clostridium spp and negatively with the counts of Bifidobacterium spp.As a whole, these results show that gut commensal microbiota is a dynamic system, which varies and adapts spontaneously to the environmental conditions of maintenance of laboratory animals. These changes involve variations in gut homeostasis and affect the expression of bacterial recognition receptors, namely TLR-2 and TLR-4, and cannabinoid receptors (CB1 and CB2) and the susceptibility to acute intestinal inflammation. These observations suggest that gut commensal microbiota is a variable factor that can affect the experimental output and that, therefore, must be considered in the interpretation of studies, particularly in the field of gastrointestinal.

En la producción de vinagres no se cuenta con cultivos iniciadores en los que se conozca su composición microbiológica y tampoco se conocen las propiedades oxidativas que presentan. La falta de cultivos iniciadores en la producción de vinagres se ve reflejada en una iniciación lenta de la acetificación o en paradas de acetificación. La utilización de inóculos permite, a la vez, la uniformización en la calidad final del producto, asegurando los parámetros de calidad predeterminados. Las bacterias acéticas son los microorganismos responsables de la biotransformación de vino a vinagre gracias a su capacidad para oxidar el etanol a ácido acético y acumularlo en el medio sin gran toxicidad para ellas. Esta oxidación tiene lugar en dos pasos iniciándose por la acción de la enzima ADH (Alcohol deshidrogenasa). Este trabajo estudia las diferencias en la expresión de la ADH-PQQ en medios con diferentes fuentes de carbono. Las diferencias en la expresión pueden ser utilizadas como indicador de la capacidad acetificadora de diferentes especies de bacterias acéticas. Se propone el uso de la RT-QPCR (real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction), como técnica para cuantificar la expresión relativa de la ADH. Esto permite poner a punto la metodologia para el análisis de la expresión relativa de la ADH y aplicarla posteriormente a otros genes de las bacterias acéticas. Se logró establecer la relación entre la actividad de la ADH con la producción de ácido acético en la producción de vinagres. Esta relación se observo especialmente en el género Acetobacter. Siendo la primera vez que se utiliza esta técnica en el área de las acetificaciones, proponemos esta técnica como una herramienta para el estudio del metabolismo de las bacterias acéticas.

La necrosis pulpar con reacción periapical es una enfermedad polimicrobiana, cuyos agentes etiológicos mas importantes son las bacterianas anaerobias entre ellas los géneros: Porphyromona, Prevotella, Peptostreptococcus(anaerobias estrictas) y Actinomyces (anaerobias facultativa). Por otra parte el uso de medicación intraconductos se esta centrando al uso de un producto como el paramonoclorofenol cuyos efectos antibacterianos no son siempre exitosos, se ha comprobado su efecto citotoxico a nivel periapical. Hoy en día, tanto en medicina general como odontológica, se está investigando nuevas alternativas de tratamientos antimicrobianos, dado el continuo aumento de la resistencia bacteriana a los antibióticos convencionales y por las reacciones adversas que estos producen en algunos pacientes. El propoleo es un producto natural fabricado por la abeja Apis mellífera con variadas propiedades medicinales, entre ellas la antimicrobiana. En el siguiente estudio se determinó la actividad antibacteriana del cuatro soluciones de extracto de propóleo (50ug, 100ug, 200ug y 500ug) frente a cepas ATCCR de Porphyromona gingivalis, Prevotella melanogenica, Peptostreptococcus anarobius y Actinomyces odontolyticus, en comparación con la actividad antibacteriana del paramonoclorofenol alcanforado. / The necrosis to pulpar with periapical reaction is a polimicrobian disease, whose more important etiológics agents are the anaerobic bacterial among them the sorts: Porphyromona, Prevotella, Peptostreptococcus (anaerobic strict) and Actinomyces (anaerobic facultative). On the other hand the use of intraconducts medication is being centered to the use of a product as paramonoclorofenol whose antibacterial effects are not always successful because its cytotoxic effect has been verified at periapical level. Nowadays, as much in general medicine as dentistry, is being investigated new alternatives of antimicrobial treatments, given the continuous increase of the bacterial resistance to conventional antibiotics and by the adverse reactions that these produce in some patients. The propenny royal is a natural product made by the Apis mellífera bee with varied medicinal properties, among them the antimicrobial one. In the following study the antibacterial activity of the four solutions of extract of propenny royal (50ug, 100ug, 200ug and 500ug was determined) in front of stocks ATCCR of Porphyromona gingivalis, melanogenica Prevotella, Peptostreptococcus anarobius and Actinomyces odontolyticus, in comparison with the antibacterial activity of paramonoclorofenol alcanforado.

El sistema Copahue-Caviahue, que comprende el Volcán Copahue, el Río Agrio, varias manifestaciones geotermales de distintas temperaturas además de lagunas, lagos y otros cursos de agua, es un ambiente natural de características principalmente termales y ácidas, derivadas de su origen volcánico. Estos hábitats están colonizados por microorganismos especialmente adaptados para sobrevivir en condiciones extremas, por lo que son denominados extremófilos. Los extremófilos participan activamente en la geoquímica del lugar, formando parte de los ciclos naturales de varios elementos químicos. Muchas de las arqueas y bacterias que habitan en ambientes extremos son especies nuevas, no conocidas para el hombre, aunque algunas de ellas están ahí desde los orígenes de la vida en la Tierra. La biodiversidad de estos ambientes constituye un patrimonio que debe conocerse y valorarse. Ese conocimiento puede ser aplicado para estudiar los procesos evolutivos que se tuvieron lugar en la Tierra, conocer los mecanismos moleculares que hacen resistentes a los extremófilos y entender cómo participan en los ciclos biogeoquímicos del ambiente. Los microorganismos que pudieran ser aislados de estos ambientes podrían ser usados posteriormente para desarrollar nuevos procesos biotecnológicos u optimizar los ya existentes. El estudio de la biodiversidad extremófila no es tarea sencilla. Los microorganismos de ambientes extremos crecen en condiciones difíciles de reproducir en el laboratorio y pueden tener requerimientos nutricionales que desconocemos. Es por eso que las técnicas de biología molecular cultivo-independientes se vuelven herramientas indispensables. A partir de estas premisas e inquietudes se formularon las hipótesis del presente Trabajo de Tesis Doctoral que se canalizaron a través de los objetivos que se describen a continuación. Objetivo general Realizar la prospección de la diversidad microbiana de la región volcánica de Caviahue-Copahue, un ambiente extremo con altas temperaturas y bajos valores de pH, utilizando herramientas de biología molecular cultivo independientes. Objetivos específicos: ♦ Realizar la prospección de la biodiversidad procariota del Río Agrio, un sistema donde las condiciones fisicoquímicas cambian a lo largo de su recorrido. ♦ Realizar la prospección de la biodiversidad en algunos pozos geotermales representativos de acuerdo a sus condiciones fisicoquímicas y su nivel de intervención antropogénica. ♦ Relacionar la diversidad y las especies procariotas presentes en cada sitio con sus condiciones fisicoquímicas, la geoquímica del lugar y los ciclos de elementos importantes en la zona como los del azufre y del hierro. ♦ Detectar posibles nuevas especies extremófilas. ♦ Predecir condiciones para el aislamiento de nuevas especies. ♦ Predecir posibles características fisiológicas y aplicaciones biotecnológicas de nuevas especies.

Pseudomonas aeruginosa es un bacilo gram-negativo, patógeno oportunista, ampliamente distribuído en la naturaleza. Se investigó la presencia de dicho microorganismo en el bioterio convencional de la sección Leucemia Experimental del Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano Castex" de la Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. La finalidad del estudio fue establecer las medidas necesarias para su erradicación. Se detectó la presencia del microorganismo en el ambiente (jaulas, estanterías, en un pequeño porcentaje de los animales, y en uno de los 4 miembros de personal). Se estableció la asociación entre endoparasitosis y colonización intestinal por P. aeruginosa. Los niveles séricos de IgG anti-P. aeruginosa estaban aumentados en animales portadores de P. aeruginosa. Se tomaron medidas tendientes a la erradicación del microorganismo. Se cambió el desinfectante usado en el bioterio y se erradicaron los ectoparásitos por tratamiento con piretrina y limonero, y los endoparásitos con piperacina. Se mejoró el estatus sanitario de los animales y se calificó a la colonia de ratones de la Academia Nacional de Medicina como convencional monitoreada grado II.