As bactérias Gram-negativas das famílias Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae são os patógenos mais comumente isolados de infecções. Devido ao crescente aparecimento de micro-organismos resistentes aos antimicrobianos disponíveis para terapêutica, a busca de novos compostos tornou-se eminente, principalmente oriundos de fontes naturais cultiváveis. Os actinomicetos são uma das principais fontes de metabólitos secundários com atividade antibacteriana. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial do actinomiceto endofítico R18(6) em produzir metabólitos ativos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes. Para isto, utilizou-se o teste de dupla camada para avaliar a capacidade de produção de metabólitos ativos pelo actinomiceto. As condições de cultivo, como fontes de carbono, temperatura, pH, modo de incubação e tempo de incubação do isolado, sob cultura submersa, foram otimizadas. A atividade antimicrobiana do isolado foi avaliada a cada 24 horas durante 10 dias utilizando a técnica de difusão em poço, na qual foram medidos os halos de inibição. O actinomiceto mostrou melhor atividade contra as bactérias Gram-negativas testadas quando cultivado em meio base contendo glicose como fonte de carbono, pH ajustado para 6.5, incubação a 30ºC sob agitação constante durante 96 horas. No ensaio de concentração inibitória mínima do extrato bruto, esta variou entre 1/32 e 1/256, e mostrou atividade bactericida ou bacteriostática de acordo com o isolado Gram-negativo. O extrato ativo foi avaliado quando à sua estabilidade térmica e enzimática, o qual se apresentou estável a altas temperaturas e instável às enzimas proteolíticas. O extrato bruto foi submetido à extração com solventes e a acetona mostrou-se eficiente como solvente extrator. A micromorfologia do isolado foi observada em microscopia óptica e de varredura, nos quais apresentou características semelhantes ao gênero Streptomyces. O actinomiceto endofítico R18(6) mostrou ser uma nova fonte promissora para a produção de compostos ativos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes. / Gram-negative bacteria of the Enterobacteriaceae and Pseudomonadacea family are the most common pathogens isolated from infections. Due to the increase of microorganisms resistant to antimicrobial agents available for treatment, the search for new compounds, mainly from natural and culturable sources, has become an important issue. The actinomycetes are a major source of secondary metabolites with antibacterial activity. The aim of this work was to evaluate the potential production of active metabolites by the endophytic actinomycete R18(6) against Gram-negative bacteria multiresistant. For this, the double layer method was used to assess the ability of production of active metabolites by the isolate. Based on this assay the culture condition growth of the isolate in submerged culture was optimized. For that as carbon source, temperature, pH, incubation way and incubation time were tested looking for a better metabolite production. The antimicrobial activity of the isolate was evaluated every 24 hours for 10 days by the well diffusion assay, where the inhibition halo was measured. The actinomycete showed the best activity against Gram-negative bacteria when cultured in base medium supplemented with glucose, adjusted in pH 6,5, incubation temperature of 30ºC for 96 hours with agitation. In the microdilution assay the concentration of crude extract varied from 1/32 to 1/256, and it showed bactericidal or bacteriostatic activity according to Gram-negative tested isolate. The thermal and enzymatic stability of crude extract were evaluated, where it exhibited thermal stability in high temperature and it was unstable to proteolytic enzymes. The crude extract was subjected to solvent extraction and acetone was efficient as extractor solvent. The isolate showed similar characteristics of the genus Streptomyces when evaluated by optical and scanning microscopy. The endophytic actinomycete R18(6) showed to be a new and a promising source of active metabolites production against Gram-negative bacteria multidrug resistant.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-15T22:37:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 222131.pdf: 1388356 bytes, checksum: ec3e45feb5317df995c748f9a8eb33f4 (MD5) / Uma classe de polímeros bacterianos que se destaca pela proximidade de suas características com as de plásticos de origem petroquímica são os polihidroxialcanoatos (PHA's). PHA sintases são enzimas chave para a biossíntese destes polímeros. A PHA sintase de Chromobacterium violaceum, que é do tipo I, utiliza como substrato hidroxiacil-CoA (HA-CoA) de 3 a 5 carbonos, enquanto a PHA sintase do tipo II de Pseudomonas aeruginosa, utiliza HA-CoA contendo de 6 a 14 carbonos. Com o objetivo de modificar a especificidade da PHA sintase de C. violaceum, buscou-se determinar sítios específicos para mutação, por técnica de DNA recombinante, de maneira a torná-la capaz da biossíntese de copolímeros contendo HA's de cadeia curta e média. O conhecimento da estrutura terciária, e particularmente, do sítio ativo da proteína, é uma etapa importante para o estudo de possibilidades de mudança de sua especificidade. Com base neste propósito, o modelo teórico para a PHA sintase de C. violaceum foi obtido através das técnicas de modelagem por homologia, utilizando-se uma lipase gástrica humana como referência (Depositada no PDB, Protein Data Bank, com o código de acesso 1HLG). O modelo foi desenvolvido baseado no alinhamento entre as seqüências primárias da PHA sintase de C. violaceum e P. aeruginosa, e a lipase, e validado através do gráfico de Ramachandran, apresentando 94% e 96% dos resíduos modelados com ângulos espacialmente possíveis, respectivamente para C. violaceum e P. aeruginosa. A estrutura 3D resultante apresenta uma díade catalítica composta pelos aminoácidos C292 e H478. O aminoácido D448, proposto como uma base geral catalítica que ativa o grupamento 3-hidroxil do HB-CoA para formar o intermediário tioéster pode, na verdade, ter o papel de auxiliar no transporte do substrato e na estabilização do estado de transição. Não foi possível confirmar que este faz parte de uma tríade catalítica, conforme sugerido na literatura. Os resultados obtidos pela modelagem da estrutura serviram de base para a escolha de mutações sítio-específicas, testadas neste trabalho. O gene phaCCv do genoma da C. violaceum (ATCC12472) foi amplificado por PCR, utilizando-se um par de oligonucleotídios complementares às extremidades 3' e 5' do gene phaC contendo sítios de restrições apropriados à ligação ao vetor. O plasmídio pBHR69 continha, além do gene de resistência à ampicilina, os genes phaA e phaB, codificando para a b-cetotiolase e acetoacil-CoA redutase de R. eutropha, respectivamente. O produto de PCR foi purificado e ligado ao pBHR69 previamente digerido com SmaI/BamHI; uma alíquota da reação de ligação foi utilizada para transformar as células competentes DHa5TM-TR. Os transformantes foram selecionados através da utilização de meio agar LB contendo ampicilina. A sintase de C. violaceum clonada e expressa em E. coli produziu PHB, e a diferença na produção de PHB pela PHA sintase não mutada e nos mutantes sugere uma possível mudança na afinidade enzima-substrato.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2012. / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317849.pdf: 2943550 bytes, checksum: 36518aec46632ea3bd10be270a250573 (MD5) Previous issue date: 2012 / O modelo atualmente empregado de produção intensiva de suínos implica na utilização de grande quantidade de antimicrobianos para manter a sanidade do rebanho, os quais são utilizados tanto de forma terapêutica como também na forma de promotores de crescimento, neste último caso empregado de forma contínua e em concentrações mais reduzidas que quando utilizado como agente terapêutico. Muitos destes agentes antimicrobianos chegam aos sistemas de tratamento de dejetos ainda sob sua forma ativa, podendo interferir nos processos microbianos envolvidos no tratamento. Os efeitos destes agentes antimicrobianos sobre as comunidades microbianas relacionadas ao tratamento dos efluentes são ainda pouco conhecidos. Este trabalho tem como objetivo geral investigar a toxicidade do antibiótico sulfato de colistina sobre a microbiota nitrificante e metanogênica, os quais são grupos considerados bons indicadores de toxicidade e responsáveis por etapas importantes em sistemas de tratamento de efluentes aeróbios e anaeróbios, respectivamente. Análises de toxicidade aguda revelaram que a colistina possui toxicidade relevante apenas sobre o grupo das bactérias oxidadoras de amônia (BOA), possuindo muito pouca atividade sobre as bactérias oxidadoras de nitrito (BON). Os testes de toxicidade crônica sobre a nitrificação apresentaram resultados similares aos obtidos nos experimentos de toxicidade aguda em relação às concentrações da CI50, com concentrações da ordem de 60 a 70 mg colistina.L-1, porém em concentrações mais elevadas a toxicidade crônica mostrou-se mais severa que a aguda. As concentrações inibitórias encontradas para o grupo das BOA são da mesma ordem de grandeza que aquelas propostas para uso na água como agente terapêutico, sugerindo que nestes casos a colistina poderia representar riscos potenciais para a operação estável de processos de nitrificação, uma vez que a colistina é eliminada pelas fezes quase totalmente sob a forma inalterada. Os testes de toxicidade crônica sobre as arqueas metanogênicas, realizados em reator do tipo UASB, não evidenciaram qualquer toxicidade da colistina sobre este grupo.<br> / Abstract: Intensive pig farming currently employed involves the use of a large quantity of antimicrobial agents to keep the herd healthy, being used both as therapeutic agents and also as growth promoters, in this latter case used on a continuous basis and also in lower concentrations than when used for therapeutic purposes. Many of these antimicrobial agents get to the wastewater treatment system still in their active forms, and as such they can interfere with the microbial processes involved in the treatment. The effects of these antimicrobial agents on the microbial communities related to wastewater treatment are still not well known. The main aim of this work is to investigate the toxicity of the antibiotic colistin sulfate on the nitrifying and methanogenic microbiota, groups that are considered good indicators of toxicity and also responsible for important biological process within aerobic and anaerobic treatment systems, respectively. Analyses of acute toxicity have shown that colistin has relevant toxicity only on the group of ammonia-oxidizing bacteria (AOB), but have very little activity in relation to nitrite oxidizing bacteria (NOB). Tests of chronic toxicity on nitrification have shown results similar to those obtained in acute toxicity experiments in relation to concentrations of the CI50, with concentrations between 60 and 70 mg.L-1 of colistin, but at higher concentrations the chronic toxicity showed to be more severe than the acute toxicity. The inhibitory concentrations found for the AOB group are at the same order of magnitude as those proposed for use in water as therapeutic agent, suggesting that in these cases colistin could pose a possible risk for the stable operation of nitrification processes, as colistin is eliminated in the faeces almost entirely in unaltered form. The chronic toxicity tests on methanogenic archaea, carried out in a UASB reactor, did not show any toxic effect of colistin on this group.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 322367.pdf: 1265184 bytes, checksum: f7464f5d10d89d4ba66ed4f90469c4ab (MD5) Previous issue date: 2013 / Atualmente, tem-se evidenciado significativo progresso na produção deembutidos pelas indústrias que têm investido cada vez mais naindustrialização dos produtos cárneos, apresentando novas formulaçõesvisando á melhoria da qualidade e principalmente, a segurança noconsumo de produtos alimentares. O presente trabalho teve comoobjetivo utilizar a microbiologia preditiva para avaliar o crescimento debactérias ácido lácticas em linguiça frescal de frango, armazenadas atemperatura de 4ºC. Para tanto, foi analisada a influência dos fatorescloreto de sódio (NaCl) e lactato de sódio (Na-lactato) no crescimentode Lactobacillus plantarum em caldo MRS. Desta forma foram geradasas curvas de crescimento da bactéria estudada expressas pela variaçãodo diâmetro da colônia (mm) em função do tempo (h). Os parâmetros decrescimento, duração da fase de adaptação (l), velocidade específicamáxima de crescimento (µmax) e diâmetro máximo atingido pela colônia(A), foram obtidos através do ajuste dos dados experimentais aomodelos primário de crescimento de Gompertz Modificado. Umplanejamento fatorial fracionado completo foi selecionado para estudaros efeitos dos fatores nos parâmetros de crescimento (l, µmax e A). Odesempenho do modelo foi avaliado pela comparação dos índicesestatísticos, coeficiente de regressão (R2), erro médio quadrático (MSE),levando à escolha do modelo com melhor ajuste aos dadosexperimentais (Gompertz Modificado). As análises estatísticas foramfeitas utilizando o software Statistica 7.0 com análise de variância de p< 0,1 para o cálculo dos efeitos. A avaliação do crescimento de bactériasácido lácticas na linguiça frescal de frango foi realizada através daelaboração das formulação A (com lactato) e formulação B (semlactato). Os resultados evidenciaram a importância do lactato de sódio,já que estes atingiram a fase estacionária em 32 dias a 4ºC. A partir deentão, nota-se que as amostras contendo 1,0% Nacl e 4,0% de Lactatode sódio apresentaram uma inibição no crescimento microbiano,demonstrando a ação inibitória do lactato sobre os microrganismos. <br> / Abstract : Currently, we have shown significant progress in sausage production by industries that have increasingly invested in the manufacturing of meatproducts, with new formulations, aiming at improving the quality and especially the safety of food consumption. This study aimed to use thepredictive microbiology to evaluate the growth of lactic acid bacteria insausage chicken fresh, stored at 4°C. Therefore, we analyzed the influence of sodium chloride (NaCl) and sodium lactate (Na-lactate) on the growth of Lactobacillus plantarum in MRS broth. Thus were generated growth curvesof the bacteria studied expressed by the variation of the colony diameter(mm) versus time (h). The growth parameters, duration of the adaptation phase (l), maximum specific growth rate (µmax) and maximum diameter reached by the colony (A) were obtained by fitting the experimental data to the models primary Modified Gompertz growth. A fractional factorialdesign was complete selected to study the effects of the factors on growth parameters (l, µmax and A). Model performance was assessed by comparingthe statistical indices, regression coefficient (R2), mean square error (MSE), leading to the choice of the model with the best fit to the experimental data (Modified Gompertz). Statistical analyzes were performed using Statistica 7.0 software with analysis of variance p <0.1 for the purpose of calculation.The evaluation of growth of lactic acid bacteria in chicken fresh sausagewas made by preparing the formulations A (with lactate) and formulation B(without lactate). The results showed the importance of sodium lactate, as they reached the stationary phase in 32 days at 4° a.i There after, it was noted that the samples containing 1.0% NaCl and 4.0% lactate showed aninhibition in microbial growth, demonstrating the inhibitory action of lactate on microorganisms.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas. / Made available in DSpace on 2012-10-21T20:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 221314.pdf: 1302524 bytes, checksum: bee00a8e66e37102170fa4455689c715 (MD5) / A infecção urinária é uma situação freqüente em Urologia e caracteriza-se pela sua gravidade quando associada a obstrução ureteral. O objetivo desse estudo foi avaliar a relação entre a obstrução ureteral e a população bacteriana no trato urinário superior de ratos Wistar. Quarenta ratos foram distribuídos em dois grupos iguais: Experimento (E) e Sham (S). Cada um destes grupos foi subdividido em outros dois subgrupos de dez animais, sacrificados no segundo e sétimo dias após o procedimento, denominados: E2, E7, S2 e S7. No início do procedimento foi coletada, por punção, a urina da bexiga, em todos os ratos. Em seguida os animais do experimento foram submetidos à ligadura e secção do ureter esquerdo. Os animais do grupo Sham foram submetidos apenas à laparotomia. Na eutanásia foi realizada a nefrectomia esquerda em todos os animais, encaminhando-se um segmento do rim para o laboratório. A comparação entre os subgrupos E2 e S2 não demonstrou diferença estatística em relação às culturas de urina em oposição à análise das culturas dos segmentos renais onde foi evidenciada diferença significante. O mesmo aconteceu na comparação dos subgrupos E7 e S7. Os resultados das culturas de segmento renal dos subgrupos E2 e E7 não apresentaram diferença estatística significante. A obstrução ureteral unilateral determinou o aumento da população de bactérias aeróbicas, na unidade renal acometida, em ratos Wistar.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Enfermagem. / Made available in DSpace on 2012-10-20T02:31:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:11:39Z : No. of bitstreams: 1 187304.pdf: 2212172 bytes, checksum: 549a634e457905899a30e9d186c6dde2 (MD5) / A Tese revela a pesquisa feita sobre os significados dos conhecimentos teóricos / práticos de profissionais de saúde em relação ao uso indiscriminado de antibióticos na ecologia das bactérias-antibiótico-resistentes associadas à problemática da infecção hospitalar à luz da Ética da Responsabilidade, de Hans Jonas. Assim, para poder interpretar tão complexo problema, este trabalho adotou a metodologia da Pesquisa Qualitativa-Hermenêutica-Dialética usando como instrumento a entrevista dialogada semi-estruturada. Os 29 Atores Sociais que participaram deste estudo são médicos, enfermeiros, farmacêuticos, bioquímicos e cirurgiões dentistas que trabalham no Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina, na cidade de Florianópolis. Após a análise e discussão das "falas" dos Atores Sociais, do levantamento dos conhecimentos emergidos, das contradições observadas, estabeleceram-se princípios orientadores e um novo referencial teórico /filosófico sobre o uso indiscriminado de antibióticos. Conclui-se que os conhecimentos e práticas em relação ao uso de antibióticos, a ecologia das bactérias, a infecção hospitalar e a ética da responsabilidade são a chave para o desempenho prudente da prática de profissionais de saúde no Hospital Universitário

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:31:01Z : No. of bitstreams: 1 000855108.pdf: 5251596 bytes, checksum: d3674a86d5c8919bdac9bb7f5be66b36 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O cobia (Rachycentron canadum) é forte candidato para piscicultura marinha no Brasil. Como em qualquer atividade de produção, a intensificação submete os peixes a elevada densidade de estocagem e alteração do hábito natural da espécie. Estes fatores acarretam estresse, reduz a eficiência do sistema imune e predispõe os peixes às doenças. O presente estudo teve como objetivo estabelecer o diagnóstico da elevada mortalidade em juvenis de cobias criados em tanques-rede no litoral norte do Estado de São Paulo. A maricultura iniciou em novembro de 2010, o primeiro ciclo de engorda de cobias com 24.000 alevinos e em setembro de 2011 restavam cerca de 500. O plano diagnóstico iniciou em março de 2011, com necropsia e coleta de tegumento, brânquias, coração, fígado, baço, rim e cecos pilóricos para análise histopatológica (n=8). Pela análise suspeitou-se tratar de pasteurelose, doença bacteriana septicêmica causada pela Photobacterium damselae subsp piscicida. Em maio, julho e setembro, foram coletadas fígado, baço, coração e rim para exame bacteriológico (n=15) e histologico (n=38). As bactérias isoladas foram submetidas a análise molecular confirmando a doença. Não houve isolamento de Mycobacterium sp. Na macroscopia, nódulos esbranquiçados com cerca de 0,5 milímetro foram observados no fígado e rim. Parasitas identificadas como Neobenedenia melleni e Tuxophorus caligodes estavam presentes principalmente, na cabeça. Na microscopia, 94% apresentavam granulomas no fígado contendo centro necrótico e aglomeração de bactérias delimitadas por células epitelióides e extensa fibroplasia. A coloração de Ziehl Neelsen foi negativa para bactérias álcool ácido resistente. O fígado de 92% dos peixes apresentava extensa e severa vacuolização no citoplasma dos hepatócitos. A coloração de Sudan Black identificou presença de lipídios confirmando o quadro de esteatose. A regressão da esteatose foi... / The cobia (Rachycentron canadum) shows great potential for marine fish farming in Brazil. As in any production activity, the intensification submit the fish to the high stocking density and alteration of the natural habit of the species. These factors cause stress, reduce the efficiency of the immune system and predispose fish to diseases. This study aimed to establish the diagnosis of high mortality in juvenile cobias raised in cages on the northern coast of São Paulo. The mariculture began in November 2010, the first cycle of fattening cobias with 24,000 fingerlings and in September 2011 remained about 500. The diagnostic plan began in March 2011, with necropsy and collection integument, gills, heart, liver, spleen, kidney and pyloric caeca for histopathological analysis (n = 8). After analysis, the fish mortality was related to pasteurellosis, a septicemic bacterial disease caused by Photobacterium damselae subsp piscicida. In May, July and September were collected liver, spleen, heart and kidney for bacteriological examination (n = 15) as well as same samples collected in March to histopathology (n = 38). Bacterial isolates were subjected to molecular analysis to confirm disease. No Mycobacterium sp. In macroscopic, whitish nodules with about 0.5 mm were observed in the liver and kidney. Neobenedenia melleni and Tuxophorus caligodes were the parasites identified mainly present in the head. In microscopy, we evaluated 46 fish of which 94% had liver granulomas containing necrotic center and agglomeration of bacteria delimited by epithelioid cells and extensive fibroplasia. The Ziehl Neelsen was negative for alcohol acid resistant bacteria. The liver of 92% of fish had severe and extensive vacuolization in the cytoplasm of hepatocytes. The Sudan Black stain identified the presence of lipids confirming steatosis. The regression of steatosis was noted from July, when the trash fish was included in the diet. The diagnosis of high ... / CAPES: 23038.05168/2009-69

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-04. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:45Z : No. of bitstreams: 1 000860186_20160804.pdf: 237722 bytes, checksum: 99252673c7b9a303744a1706fa82e67b (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-05T12:20:24Z: 000860186_20160804.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-05T12:20:59Z : No. of bitstreams: 1 000860186.pdf: 1059222 bytes, checksum: e6bebf67ecb2875c260948e57fba3979 (MD5) / A produção de laranja e de suco concentrado é uma atividade agrícola que tem uma grande importância para o Brasil, em especial para o estado de São Paulo. Entretanto, o cancro cítrico é uma doença que causa grandes prejuízos à citricultura brasileira e mundial, sendo que até o momento não há nenhum método curativo para esta doença e o principal controle é a erradicação das plantas contaminadas. O cancro cítrico é originário da Ásia e tem como agente causal a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), a qual ataca todas as espécies comerciais de citros. Em um estudo de expressão gênica em dois mutantes de Xac que apresentavam diminuição ou ausência total de sintomas de cancro cítrico, a proteína XAC1008 se mostrou altamente expressa, pelo que o objetivo deste trabalho foi a caracterização funcional da ORF XAC1008 de Xac. A estratégia utilizada foi a produção de um mutante desta ORF e avaliação da sua patogenicidade quando comparada com a do isolado 306 de Xac selvagem em plantas de limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbek) e laranja Pêra (Citrus sinensis (L.) Osbeck). A técnica utilizada para a obtenção do mutante foi a da mutagênese sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1, seguida de recombinação homóloga. Os ensaios de patogenicidade do mutante ΔXAC1008 mostraram que a mutação alterou a coloração e o formato das colônias e impediu a multiplicação da bactéria in planta, embora ela ainda seja capaz de crescer em meio de cultura. O mutante diminuiu de maneira significativa a formação de biofilme e não foi capaz de causar doença em laranja 'Pêra Rio' (Citrus sinensis (L.) Osbeck) e em limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbek), dois de seus hospedeiros citros, enquanto que a Xac 306 selvagem apresentou os sintomas característicos do cancro cítrico nos dois hospedeiros. Os resultados indicam que a proteína XAC1008 não está diretamente relacionada... / The production of frozen concentrated juice from sweet orange is an agricultural activity that is of great importance to Brazil, especially for the state of São Paulo. However, citrus canker is a disease that causes bigger losses to the Brazilian and global citrus industry, and to date there is no curative method for this disease and the main control is the eradication of infected plants. The citrus canker originated in Asia and its causal agent is the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), which attacks all commercial species of citrus. In a study of gene expression in two Xac mutants with impaired or total absence of symptoms of citrus canker, the ORF XAC1008 was highly expressed, so the aim of this study was the functional characterization of the protein encoded by ORF XAC1008 from Xac. The strategy used was the construction of a mutant of the ORF XAC XAC1008 and evaluation of its pathogenicity in plants of Rangpur lime (Citrus limonia Osbek) and sweet orange 'Pêra Rio' (Citrus sinensis (L.) Osbeck) compared with the wild isolate strain Xac 306. The technique used for obtaining the mutant was PCR-based site-directed mutagenesis using the suicide vector POK1, followed by homologous recombination. Pathogenicity tests of the mutant ΔXAC1008 showed that the mutation affected the color and shape of colonies, and prevent multiplication of bacteria in the plant, though it is still able to grow in the culture medium. The mutant decreased significantly biofilm formation and was not able to cause disease in sweet orange 'Pêra Rio' orange and Rangpur lime, two of its citrus hosts, while the wild isolate strain Xac 306 showed the characteristic symptoms of citrus canker in both hosts. The results indicate that the protein XAC1008 is not directly related to the virulence or pathogenicity of Xac in citrus but is essential for the proliferation and survival of the bacteria in the host. Although the presence of the ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T21:02:29Z : No. of bitstreams: 1 saade_eg_dr_arafo_parcial.pdf: 275737 bytes, checksum: d6de623c5f0fece61f65bd29ad4b8aad (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-28T18:32:05Z: saade_eg_dr_arafo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-28T18:32:39Z : No. of bitstreams: 1 000706823.pdf: 789247 bytes, checksum: 6eac4360278a3a68a8dc9b6abcc62ca8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desta pesquisa foi avaliar in vitro através de experimentos microbiológicos a ação bactericida e bacteriostática das nanopartículas TiO2, TiO2 e Ag e somente Ag no recobrimento de pinos intra-radiculares metálicos fundidos e de fibra de vidro. Foram utilizados 120 pinos intra-radiculares, 60 metálicos fundidos confeccionados em laboratório especializado, e 60 pinos pré-fabricados de fibra de vidro. Esses materiais foram recobertos pelo processo de dip coating, e tratados termicamente com nanopartículas de dióxido de titânio (TiO2), com um compósito de titânio/prata (TiO2/Ag) e somente prata (Ag). Os pinos recobertos apenas com nanopartículas de dióxido de titânio (TiO2) foram submetidos a fotocatálise heterogênea com o auxílio de uma luz ultravioleta (lâmpada Starlux 25w-F). Os pinos intra-radiculares sem nenhum tratamento de nanopartículas foram imersos na solução de clorexidina 2% por 5 minutos, devido à eficácia conhecida desse antimicrobiano, para podermos comparar com os demais grupos, sendo nosso controle positivo. No grupo controle negativo os pinos intra-radiculares foram removidos do dispositivo e diretamente testados. Para os experimentos realizados utilizamos o meio de cultura BHI (Brain Heart Infusion) e a bactéria Enterococcus Faecalis. O primeiro experimento realizado foi para avaliar a descontaminação dos pinos intra-radiculares através do teste de turvação no meio BHI caldo. As amostras (n=6) foram colocadas em estufa a 37°C, e as leituras foram realizadas após 24hs e 48hs. A análise foi através da presença ou não de turvação, sendo positivo: presença de turvação igual a crescimento bacteriano e negativo: ausência de turvação. Em seguida foi avaliada a ação antimicrobiana dos pinos intra-radiculares sob a Enterococcus Faecalis em meio BHI Agar. Os pinos foram... / The objective of this research was to evaluate in vitro experiments using microbiological bacteriostatic and bactericidal action of TiO2 nanoparticles, TiO2 and Ag and only Ag in the coating of the intraradicular molten metal and fiberglas post. 120 posts were used intraradicular, and 60 posts made of cast metal, made in a specialized laboratory, and 60 posts prefabricated fiberglass. These materials were coated by the process of dip coating and heat-treated with nanoparticles of titanium dioxide (TiO2) with a composite of titanium / silver (TiO2/Ag) and only silver (Ag). The posts covered with only nanoparticles of titanium dioxide (TiO2) were submitted to heterogeneous photocatalysis with the aid of an ultraviolet light (lamp 25w Starlux-F). The intraradicular pins without any treatment of nanoparticles were immersed in 2% chlorhexidine solution for 5 minutes due to the known efficacy of that antibiotic, in order to compare with the other groups, as our positive control. In the negative control group intraradicular posts were removed from the device and directly tested. For the experiments we performed using the BHI (Brain Heart Infusion) culture medium and the bacteria Enterococcus faecalis The first experiment was conducted the decontamination of intraradicular were evaluated by testing turbidity in the BHI broth. The samples (n = 6) were placed in an incubator at 37 ° C, and the readings will be made after 24 hours and 48 hours. The analysis was through the presence or absence of turbidity, if positive: the presence of tubidity equal to bacterial growth and negative: the absence of turbidity. Antimicrobial activity of intraradicular posts were assessed next under the Enterococcus faecalis in BHI Agar. The pins were inserted in the contaminated atmosphere with the bacteria, and the samples were placed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-05Bitstream added on 2014-06-13T19:43:38Z : No. of bitstreams: 1 troncarelli_mz_dr_botfmvz.pdf: 4588450 bytes, checksum: a779f6cb9a1e51d0648806d5715dc5d8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de normatizar a cadeia produtiva visando à melhoria da qualidade do leite no Brasil, o MAPA delineou a IN n° 51, em vigor desde julho de 2005. Em linha com estes parâmetros, objetivou-se, no presente estudo, padronizar o método de mPCR para a detecção de S. aureus, S. agalactiae e E. coli em amostras de leite bovino obtidas de tanques de expansão, e avaliar esta técnica como possível recurso diagnóstico a ser empregado em programas de controle de qualidade do leite oferecido para consumo. Foram visitadas 20 propriedades leiteiras do Estado de São Paulo, com sistema de ordenha mecânica e tanque de expansão próprio, nas quais foram colhidas amostras de leite para a realização da mPCR, cultivo microbiológico, CCS e CBT. S. aureus, S. agalactiae e E. coli foram isolados, em 30%; 10% e 40% das amostras de leite dos tanques de expansão, respectivamente, e detectados pela mPCR em 0; 10% e 35%, respectivamente. A mPCR apresentou acurácia de 78,3%; sensibilidade de 37,5% e especificidade de 93,2% e limiar de detecção de 100 picogramas. A CCS apresentou mediana de 395.000 células/mL, e 55% das amostras avaliadas resultou em valores de CBT satisfatórios para mesófilos. O índice de mastite subclínica nos rebanhos avaliados pelo CMT foi de 28,3%. Conclui-se que a mPCR para a detecção de S. aureus, S. agalactiae e E. coli foi padronizada com êxito no presente estudo, e pode ser indicada como método complementar aos utilizados na rotina diagnóstica de mastite bovina e qualidade do leite / Brazilian Ministry of Agriculture and Supply, objecting the improvement of milk quality in Brazil, published the Normative Instruction n. 51, a technical group of rules for milk business that has been attended since July 2005. In line with these parameters, the aim of the present study was to standardize the mPCR test for S. aureus, S. agalactiae and E. coli detection in bovine milk samples obtained from bulk tanks, in order to evaluate this method as a possible tool to be used in milk quality control programs. Twenty milk farms with milking machine system and individual bulk tank, of different regions of Sao Paulo state were sampled. Bulk milk samples were collected for mPCR, microbiological culture, Somatic Cell Count and Total Bacterial Count. S. aureus, S. agalactiae e E. coli were isolated in 30%; 10% and 40% samples, respectively, and detected by mPCR in 0; 10% and 35% samples, respectively. mPCR presented 78,3% accuracy; 37,5% sensitivity and 93,2% specitivity and detection lower of 100pg for each pathogen. CCCs presented medium of 395.000 cells/mL and 55% of evaluated samples resulted in TBC satisfactory values for mesophilus. Subclinical mastitis index in evaluated cattle, by CMT, was 28,3%. In conclusion, mPCR for S. aureus, S. agalactiae and E. coli detection was successfully standardized in the present study and can be indicated as a complementary diagnosis to the routine methods for bovine mastitis and milk quality’s monitoring