Entre 1945 e 1955, a socióloga, visitadora psiquiátrica e psicanalista negra Virgínia Leone Bicudo escreve dois trabalhos sobre relações raciais no Brasil: o primeiro é a tese Estudo de atitudes raciais de pretos e mulatos em São Paulo (1945), sua dissertação de mestrado concluída na Escola Livre de Sociologia e Política (ELSP). Nela, a autora discute a importância da formação de associações negras, como a Frente Negra Brasileira, na mobilização contra os obstáculos para ascensão social dos negros. O segundo trabalho, publicado em 1955, é Atitudes de Alunos de Grupos Escolares em Relação com a Cor dos seus Colegas, resultado das suas pesquisas durante a realização do Projeto Unesco-Anhembi em São Paulo. Ao trabalhar as dimensões subjetivas do preconceito, ela se aproxima dos discursos de intelectuais negros como Frantz Fanon e Guerreiro Ramos. Nosso objetivo é analisar como os estudos de atitudes impactaram as pesquisas sobre relações raciais no Brasil durante o período em que Virgínia escreveu os seus trabalhos, bem como pensar nos processos de legitimação do intelectual negro na universidade. / The black sociologist and psychoanalyst Virginia Leone Bicudo wrote two works on race relations in Brazil. The first was Study of racial attitudes of blacks and mulattos in São Paulo (1945), - her thesis at Escola Livre de Sociologia e Política (ELSP). The author analyses the brazilian black associations, such as the Frente Negra Brasileira. The second study, published in 1955, Attitudes of Students in School Groups in Relation to Color of their Colleagues, results of her research during the Sao Paulo UNESCO-Anhembi Project. Her research about the subjective dimensions of racial prejudice approaches her of the discourses of black intellectuals like Frantz Fanon and Guerreiro Ramos. Our thesis intend to know how the studies of attitudes impacted research on race relations in Brazil during the period in which Virginia wrote their works, as well as thinking about the processes of legitimation of black intellectuals in the university.

Orientador: Nilza Maria Martinelli / Coorientador: Marcelo da Costa Ferreira / Banca: Antonio Carlos Busoli / Banca: Ana Lúcia Benfatti González Peronti / Banca: Leila Luci Dinardo-Miranda / Banca: Fernando Cesar Pattaro / Resumo: O objetivo foi descrever características morfológicas para reconhecimento de adultos de Sphenophorus levis, e avaliar o inseticida mais adequado de acordo com a época de aplicação para o controle. Para as análises morfológicas foram coletados 20 machos e 20 fêmeas de S. levis e de Metamasius hemipterus. A caracterização macroscópica das espécies foi realizada a partir de revisão da literatura e observações adicionais de caracteres de importância taxonômica nos espécimes estudados. A eficiência de inseticidas no controle de S. levis foi avaliada em dois experimentos, um com aplicação em dezembro e outro com aplicação em junho. Foram realizados nove tratamentos, compostos por oito controles químicos e uma testemunha. Realizou-se amostragem prévia antes das aplicações, as quais foram realizadas em filete continuo, e três avaliações após a aplicação dos inseticidas, contabilizando o número de formas vivas do inseto e número de tocos totais e atacados. No final da safra foi realizado biometria e análise tecnológica. O delineamento estatístico utilizado foi em blocos ao acaso com quatro repetições, em soqueira. Os dados foram analisados a Tukey a 5% de significância. A descrição dos caracteres presentes na antena, pronoto, abdômen e forma do pigídio, foram importantes para a diagnose de cada espécie. As formas do pigídio, bem como a distribuição das cerdas no mesmo, propiciaram a determinação do sexo para ambas as espécies. Os produtos/misturas utilizados não sofreram influência da época de aplicação e não foram eficientes para o controle de Sphenophorus levis com a metodologia empregada. Faz-se necessários trabalhos com outras metodologias de aplicação para observar o efeito dos produtos/misturas utilizados / Abstract: The objective was to describe morphological characteristics for recognition Sphenophorus levis adults, as well as to assess the most appropriate insecticide according to the time of application for the control this pest. For morphological analysis were collected 20 males and 20 females of S. levis and Metamasius hemipterus. The macroscopic characterization of these species was started from literature review and additional comments from characters of taxonomic significance about the studied specimens. The efficiency of insecticides the controlling S. levis was evaluated in two experiments with application in december and the other with application in june. Were performed nine treatments, composed by eight chemical controls and a control. Was conducted previous sampling, the aplications were performed under continuous fillets. Three evaluations were carried out after the application, counting the number of insect life forms and the total number of stumps and attacked stumps. At the end of the harvest it was held biometrics and technological analysis. The design utilized was randomized block design with four replications, in ratoon. The data were analyzed by Tukey test at 5% significance. The characters present at the antenna, pronotum, abdomen, and description of the pygidium, were important for the diagnosis of each species. The pygidium form and the distribution of the bristles led to the determination of sex in both species. Products/mixtures used do not suffer from influence of application time and were not efficient for control Sphenophorus levis with the methodology employed. It is necessary, work with other application methods to observe the effect of products/mixtures used / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-15Bitstream added on 2014-06-13T18:44:29Z : No. of bitstreams: 1 abreu_il_dr_jabo.pdf: 406152 bytes, checksum: 68b3c6cb5d92e815f953857099241db8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os países industrializados apresentam uma forte tendência em buscarem, cada vez mais, sistemas de controle biológico eficiente e específicos sendo menos tóxicos para os humanos e o ecossistema em geral. Os bioinseticidas à base de microrganismos entomopatogênicos não encontram grandes restrições quanto a sua utilização. Dentre as bactérias que possuem atividade entomopatogênica, Bacillus thuringiensis é a que apresenta maior valor potencial no controle dos insetos-praga, por apresentar vários genes cry e possuir mecanismos de recombinação genética como: conjugação e transformação. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar a linhagem B. thuringiensis var. londrina. A análise morfológica dos cristais indica uma nova proteína Cry. Para comparação foram utilizadas as linhagens de B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi e var. kurstaki - HD1 que possuem os genes cry3Aa, cry3Ba e cry1Aa, respectivamente. Foi realizada a extração do DNA total das quatro linhagens, em seguida esse material foi submetido à reação de PCR com os oligonucleotideos iniciadores específicos dos genes acima citado. Para a confirmação dos resultados utilizou-se a técnica de hibridização por Southern blotting e seqüenciamento dos amplicon. O amplicom para o gene cry3 obtido pela linhagem padrão B. thuringiensis var. tenebrionis foi igual ao tamanho esperado, porém o obtido pela linhagem var. londrina foi maior em números de nucleotídeo que o esperado, indicando uma possível recombinação. A técnica de Southern blotting confirmou a recombinação do gene mostrando diferenças entre as bandas das linhagens padrão e da linhagem var. londrina, confirmando assim um novo gene cry3. Os bioensaios executados com esse novo gene não indicaram eficiência para alguns insetos-praga de lavoura da ordem Lepidoptera e foram eficientes... / Industrialized countries show a strong tendency to look for efficient and specific biological control systems that are less toxic to humans and ecosystems. Bioinsecticides based on entomopathogenic microorganisms are well accepted by the public. Among those, bacteria that exhibit such entomopathogenic activities, Bacillus thuringiensis is the one with major potential over the pests, since it harbors several cry genes and holds genetic recombination mechanisms such as bacterial conjugation and transformation in order to accomplish these control procedures. The aim of this research was to identify and characterize the strain of B. thuringiensis var. londrina. As a comparison some other strains of B. thuringiensis such as B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi and var. kurstaki - HD1 that holds the genes cry3Aa, cry3Ba and cry1Aa, were used respectively. Alkaline lysis procedure was used for the DNA extraction from the four bacterial strains followed by its use on PCR reactions using the specific primers for the genes. To confirm the results were utilized the techniques of Southern blotting hybridization and DNA sequencing. The obtained amplicons have shown a difference in size considering the pattern strains compared to the var. londrina. The genetic recombination that took place so as to generate the var. londrina cry gene was detected by Southern blotting analysis, the hybridization results confirm the genetic recombination showing the banding pattern differences that took place generating the new cry3 gene. The bioassays showed that the recombinant gene was efficient to control Sphenophorus levis (Coleopteran).

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Vivian Boter Bergamasco / Banca: Jackson Antonio Marcondes de Souza / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito inseticida das proteínas Cry1Ia10 e Cry8 contra larvas de Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), buscando por potencial sinérgico. Para tanto, o gene cry8 foi amplificado por PCR a partir de um clone previamente construído, obtendo-se um fragmento de aproximadamente 3531 pb e subclonado no vetor de expressão pET-SUMO. Para a expressão dos genes cry1Ia10 e cry8, os DNAs recombinantes foram inseridos em células de Escherichia coli BL21 (DE3) e induzidos por isopropil-β-D-tiogalactopiranosídeo (IPTG), resultando em proteínas de 94 kDa e 143 kDa, respectivamente, visualizadas em SDS-PAGE. As proteínas foram quantificadas através do software ImageQuant TL 8.1" (GE Healthcare), para que fosse possível a realização dos cálculos de diluição nas respectivas concentrações incorporadas à dieta artificial, a fim de estimar a CL50 e CL90 das duas proteínas testadas sozinhas e em conjunto. Com base na sequência de aminoácidos de proteínas da classe Cry8, análises filogenéticas foram realizadas para investigar proximidade evolutiva da proteína Cry8 utilizada neste trabalho com as demais proteínas na mesma classe. Através dessas análises, sugerimos que a proteína em questão pertence à subclasse Cry8Pa devido a elevada proximidade filogenética e similaridade com a proteína Cry8Pa2. Observou-se que as proteínas Cry1Ia10 e Cry8 apresentaram ação inseticida contra larvas neonatas de A. grandis, obtendo-se as CL50 de 7,232 µg ml-1 e ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to evaluate the insecticidal effect of Cry1Ia10 and Cry8 proteins against Anthonomus grandis Boheman larvae (Coleoptera: Curculionidae), searching for synergistic potential. To do so, the cry8 gene was amplified by PCR from a previously constructed clone, obtaining a fragment of approximately 3531 bp and subcloned into the pET-SUMO expression vector. For the expression of the cry1Ia10 and cry8 genes, the recombinant DNAs were inserted into Escherichia coli BL21 (DE3) and isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside (IPTG) cells, resulting in 94 kDa and 143 kDa proteins, respectively, visualized on SDS-PAGE. The proteins were quantified using ImageQuant TL 8.1 software (GE Healthcare) to allow the calculation of dilution in the respective concentrations incorporated into the artificial diet in order to estimate the LC50 and CL90 of the two proteins tested alone and together. Based on the amino acid sequence of Cry8 class proteins, phylogenetic analyzes were performed to investigate evolutionary proximity of the Cry8 protein used in this work with the other proteins in the same class. Through these analyzes, we suggest that the protein in question belongs to the subclass Cry8Pa due to its high phylogenetic proximity and similarity to the Cry8Pa2 protein. It was observed that the proteins Cry1Ia10 and Cry8 showed insecticidal action against neonatal larvae of A. grandis, obtaining the LC50 of 7.232 μg ml-1 and 4.422 μg ml-1 for Cry1Ia10 and Cry8 respectively. When combined the proteins at LC50 is reduced to 2,664 μg ml-1 and CL90 to 13,535 μg ml1 showed synergism, potentiating the insecticidal action of the same. This study concludes that A. grandis larvae are susceptible to Cry1Ia10 and Cry8 proteins and that the combination between them increa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by MARINA APARECIDA VIANA DE ALENCAR null (vianama@yahoo.com.br) on 2016-02-26T17:04:47Z No. of bitstreams: 1 Tese_Marina_Aparecida_Viana_de_Alencar.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T19:15:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alencar_mav_dr_jabo.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T19:15:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alencar_mav_dr_jabo.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo foi descrever características morfológicas para reconhecimento de adultos de Sphenophorus levis, e avaliar o inseticida mais adequado de acordo com a época de aplicação para o controle. Para as análises morfológicas foram coletados 20 machos e 20 fêmeas de S. levis e de Metamasius hemipterus. A caracterização macroscópica das espécies foi realizada a partir de revisão da literatura e observações adicionais de caracteres de importância taxonômica nos espécimes estudados. A eficiência de inseticidas no controle de S. levis foi avaliada em dois experimentos, um com aplicação em dezembro e outro com aplicação em junho. Foram realizados nove tratamentos, compostos por oito controles químicos e uma testemunha. Realizou-se amostragem prévia antes das aplicações, as quais foram realizadas em filete continuo, e três avaliações após a aplicação dos inseticidas, contabilizando o número de formas vivas do inseto e número de tocos totais e atacados. No final da safra foi realizado biometria e análise tecnológica. O delineamento estatístico utilizado foi em blocos ao acaso com quatro repetições, em soqueira. Os dados foram analisados a Tukey a 5% de significância. A descrição dos caracteres presentes na antena, pronoto, abdômen e forma do pigídio, foram importantes para a diagnose de cada espécie. As formas do pigídio, bem como a distribuição das cerdas no mesmo, propiciaram a determinação do sexo para ambas as espécies. Os produtos/misturas utilizados não sofreram influência da época de aplicação e não foram eficientes para o controle de Sphenophorus levis com a metodologia empregada. Faz-se necessários trabalhos com outras metodologias de aplicação para observar o efeito dos produtos/misturas utilizados. / The objective was to describe morphological characteristics for recognition Sphenophorus levis adults, as well as to assess the most appropriate insecticide according to the time of application for the control this pest. For morphological analysis were collected 20 males and 20 females of S. levis and Metamasius hemipterus. The macroscopic characterization of these species was started from literature review and additional comments from characters of taxonomic significance about the studied specimens. The efficiency of insecticides the controlling S. levis was evaluated in two experiments with application in december and the other with application in june. Were performed nine treatments, composed by eight chemical controls and a control. Was conducted previous sampling, the aplications were performed under continuous fillets. Three evaluations were carried out after the application, counting the number of insect life forms and the total number of stumps and attacked stumps. At the end of the harvest it was held biometrics and technological analysis. The design utilized was randomized block design with four replications, in ratoon. The data were analyzed by Tukey test at 5% significance. The characters present at the antenna, pronotum, abdomen, and description of the pygidium, were important for the diagnosis of each species. The pygidium form and the distribution of the bristles led to the determination of sex in both species. Products/mixtures used do not suffer from influence of application time and were not efficient for control Sphenophorus levis with the methodology employed. It is necessary, work with other application methods to observe the effect of products/mixtures used.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:25:31Z : No. of bitstreams: 1 alves_mc_me_jabo.pdf: 784728 bytes, checksum: a9d8c2237ee21059f774f2a73b627b7f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O controle biológico utilizando microrganismos vem sendo estudado como uma alternativa ao uso de agroquímicos. Estes pesticidas poluem o ambiente, além de serem tóxicos a diversas espécies vegetais e animais. Diante disso, a bactéria Bacillus thuringiensis é um importante entomopatógeno que vem sendo utilizado na agricultura pelo fato de secretar proteínas que são tóxicas a insetos pertencentes a diversas ordens. Dentre os diversos genes de B. thuringiensis que codificam proteínas tóxicas, as classes vip1, vip2 e cry3 destacam-se como alternativa para o controle de insetos-praga da ordem Coleoptera. O presente trabalho objetivou a identificação e caracterização molecular, por meio da técnica de PCR-RFLP, dos genes cry3, vip1, vip2 e vip1/vip2 em uma coleção de B. thuringiensis, quanto a possíveis polimorfismos existentes, procurando relacioná-los à toxicidade em larvas de Anthonomus grandis. Da análise de 1078 isolados de B. thuringiensis, foram encontrados 151 isolados positivos para os genes em estudo e 14 perfis polimórficos, indicando a presença de subclasses destes genes. Os resultados obtidos nos ensaios de toxicidade indicam que os polimorfismos gênicos podem apresentar interferência na toxicidade das proteínas, sendo que a toxina Cry3 apresentou uma maior efetividade na mortalidade em larvas de A. grandis. Os resultados também evidenciaram que a PCR-RFLP mostrou-se apropriada para a detecção da variabilidade genética em B. thuringiensis, permitindo a identificação de haplótipos / Biological control using microorganisms is being studied as an alternative to the use of agrochemicals. These pesticides pollute the environment, being toxic to many species of plants and animals. For these reasons, the bacterium Bacillus thuringiensis is an important entomopathogen that has been used in agriculture, once it produces proteins that are toxic to many target insect orders. Among several genes from B. thuringiensis that encode toxic proteins there are vip1, vip2 and cry3 classes that stand as an alternative for controlling insect pests belonging the Coleoptera order. The objective of this work was to identify and characterize molecularly, through PCR-RFLP, the genes cry3, vip1, vip2 and vip1/vip2 in a collection of B. thuringiensis, for possible polymorphisms exist, trying to relate them to the toxicity in Anthonomus grandis larvae. Analysis of 1078 isolates of B. thuringiensis, were found 151 positive isolates for the genes under study and 10 polymorphic profiles, which indicate the presence of subclasses of the genes. These results obtained in tests toxicity indicate that polymorphisms gene may have interference with the toxicity of the protein, and the toxin Cry3 showed a greater effectiveness in mortality in A. grandis larvae. These results also showed that the PCR-RFLP proved to be suitable for the detection of genetic variability in B. thuringiensis, allowing the identification of haplotypes

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-12Bitstream added on 2014-06-13T20:43:08Z : No. of bitstreams: 1 rossi_jr_dr_jabo_parcial.pdf: 88852 bytes, checksum: f0badc33849f0f480aac58f70772e600 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:50Z: rossi_jr_dr_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000671176.pdf: 1093299 bytes, checksum: d1fd5a36d749654ea04ac75ca09f863d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A caracterização molecular de 46 isolados de Bacillus thuringiensis foi realizada por meio da técnica de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores gerais Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r), resultando na identificação do isolado BT_I622 como portador do gene cry8 (coleóptero-específico). O fragmento obtido de aproximadamente 376 pares de base (pb), localizado na porção inicial do gene, foi clonado em vetor pGEM®-T Easy, sequenciado e analisado por bioinformática. A determinação da sequência completa do gene cry8 presente no isolado BT_I622, foi realizada pela estratégia de “primer walking” com a utilização de oligonucleotídeos específicos. Os iniciadores foram elaborados através do programa Primer3, com base nas sequências de genes cry8 depositadas no banco de dados público GenBank (NCBI) e, por meio da análise das sequências geradas com o par de oligonucleotídeos gerais utilizados inicialmente na caracterização dos isolados. As amplificações com diferentes combinações de iniciadores resultaram na obtenção de fragmentos em torno de 1420, 3302, 628, 1580, 508 e 510 pb, os quais foram clonados, sequenciados e analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed visando a montagem do gene. A sequência contendo 3531 pb foi comparada ao GenBank pela ferramenta BLASTn, apresentando 98% de similaridade com o gene cry8Ka2. Paralelamente, a sequência de aminoácidos deduzida (1176 aa) revelou 75% de identidade com a proteína Cry8Ba1 na análise com o algoritmo BLASTp, demonstrando que o isolado BT_I622 é portador de um novo gene cry8. Os bioensaios indicaram que as larvas de Sphenophorus levis são sensíveis a nova proteína Cry8 de B. thuringiensis / The molecular characterization of 46 Bacillus thuringiensis isolates was carried out using the PCR technique with primers designed to detect cry8 genes (Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r)), resulting in the identification of the isolate BT_1622 as a cry8 gene carrier (coleopteran specific). The ca. 376 base pairs (bp) fragment obtained was located in the initial part of the gene, which was cloned into the plasmid pGEM®-T Easy, sequenced and analyzed by bioinformatics. The complete sequence determination of this gene found within isolate BT_1622 was done using the “primer walking” strategy. The primers were designed using the software Primer3, comparing to previously sequenced cry8 genes found in the public database GenBank (NCBI) and analyzing the sequences generated with the pair of general primers used initially in the characterization of isolates. The amplifications with different primer combinations resulted other fragments of this gene with 1,420; 3,302; 628; 1,580; 508 and 510 bp, which were cloned, sequenced and analyzed using the software Phred/Phrap/Consed to obtain the full gene. The 3,531 bp sequence was compared to the GenBank using the BLASTn tool, and showed 98% of similarity with the gene cry8Ka2. Also, the deduced amino acid sequence (1,176 amino acids) showed 75% identity to the Cry8Ba1 using the algorithm BLASTp, demonstrating that the isolate BT_1622 carriers a new cry8 gene. The bioassay results indicated that the Sphenophorus levis larvae are sensitive to the new Cry8 protein of B. thuringiensis

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-03T14:46:13Z No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 1375046 bytes, checksum: c126bf586c468cd419bdfca6216af06b (MD5) / Rejected by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br), reason: Retirar o restante do capítulo 3. on 2015-06-03T18:28:49Z (GMT) / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-03T18:35:35Z No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-03T19:22:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-03T19:22:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / O Brasil é o quinto maior produtor de algodão do mundo, e também um dos maiores produtores mundiais de fibra, contribuindo positivamente para a balança comercial. O algodão é atacado por uma série de pragas, sendo o bicudo-doalgodoeiro, Anthonomus grandis, um dos insetos-pragas mais destrutivos. Além do bicudo-do-algodoeiro, o nematoide das galhas Meloidogyne incognita é uma praga importante desta e de outras culturas. O presente trabalho foi realizado visando o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas para o controle destas duas pragas agrícolas. No caso de A. grandis, a técnica do silenciamento gênico por RNAi foi utilizada para estudar a importância da Vitelogenina (proteína envolvida na reprodução dos insetos) para este inseto-praga. A técnica de RNAi é utilizada como ferramenta de validação funcional de genes e para o controle de pragas, e vem sendo utilizada na nova geração de plantas transgênicas. Isto em vista, no presente trabalho foram avaliados os efeitos do silenciamento gênico da vitelogenina de A. grandis (Agvtg) na biologia e no desenvolvimento do inseto adulto e da progênie. Inicialmente, foi realizado um estudo para identificar os melhores genes referência a serem utilizados em estudos gerais de qRT-PCR com este inseto. Após esta identificação, foi determinado o padrão de expressão do gene Agvtg e verificou-se a presença de transcritos em diferentes fases do desenvolvimento do inseto através de qRT-PCR. A proteína (AgVtg) foi localizada, por imunocitoquímica, em oócitos em desenvolvimento. Após microinjeção de dsRNA para Agvtg (dsVtg) em fêmeas de A. grandis, foi verificada uma significativa diminuição no acúmulo de transcritos deste gene. Além disto, verificou-se que as fêmeas tratadas com o dsVtg são capazes de produzir ovos na mesma quantidade dos tratamentos controle, porém, a maior parte dos ovos era inviável. Estudos realizados por meio de microscopia dos ovos oriundos de fêmeas tratadas com dsVtg revelaram, ainda, diferentes fenótipos, correspondentes a paralização do desenvolvimento do embrião em diferentes estágios de desenvolvimento, indicando, provavelmente, diferentes níveis desilenciamento gênico. Os estudos realizados com M. incognita, por sua vez, foram feitos utilizando uma estratégia distinta da anterior. Sabe-se que o nematoide das galhas estimula o ciclo celular das células hospedeiras das plantas, assim, foram utilizadas linhagens de plantas de Arabidopsis thaliana superexpressando proteínas inibidoras do ciclo celular de plantas (KRPs) e mutantes que não expressam estas proteínas para avaliar o efeito no ciclo de vida do patógeno. Esse trabalho nos permitiu demonstrar a possível função de KRP3, KRP5 e KRP7 em galhas induzidas por nematoides. Nossos resultados demonstram que todos os membros desta família afetam a progressão do ciclo celular durante a formação de galhas de forma diferente, afetando o ciclo de vida do nematoide. Assim, os dados gerados neste trabalho certamente contribuirão consideravelmente para o desenvolvimento de novas técnicas e ferramentas para o controle da principal praga do algodão no país, o bicudo-do-algodoeiro, e do nematoide de galhas, Meloidogyne incognita. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil is ranked as the fifth world cotton producer, being also one of the largest fiber producers in the world, leading in high contribution to the commercial trade. Cotton is produced in monoculture system, and it is attacked by a large number of pests. The cotton boll weevil, Anthonomus grandis, is one of the most destructive pests of cotton. Also, the root-knot nematode Meloidogyne incognita is an important pest that infect many plants species including cotton. The present work was conducted to develop biotechnological tools for the control of these two agricultural pests. In the case of A. grandis, the technique of gene silencing by RNAi was used to study the importance of vitellogenin (protein involved in reproduction) for this insect pest. The RNAi technique is used as a tool for validation of gene function and pest control, and is used in the new generation of transgenic plants. The present study evaluated the effects of gene silencing of vitellogenin in A. grandis (Agvtg) in biology,development of the adult insect and its progeny. Initially, a study was conducted to identify the best reference genes to be used in general studies qRT-PCR with this insect. After, it was determined the expression pattern of Agvtg gene and the presence of transcripts at different stages of insect development was verified by qRT-PCR. The protein (AgVtg) was located by immunocytochemistry in developing oocytes. After microinjection of dsRNA for Agvtg (dsVtg) in A. grandis females, there was a significant decrease in transcripts accumulation of this gene. Furthermore, it was found that females treated with dsVtg are able to produce eggs in the same amount of control treatments, however, most of the eggs was not viable. Studies performed by microscopy of the eggs that came from females treated with dsVtg also revealed different phenotypes, corresponding to paralysis of embryo development in different stages of development, probably indicating different levels of gene silencing. Studies realized with M. incognita, were made using a different strategy from above. It is known that the root-knot nematode stimulates the cell cycle of the host cells in plants. So Arabidopsis thaliana lines overexpressing cell cycle inhibitory proteins from plants (KRPs) and also mutants which do not express these proteins were used to evaluate the effect the pathogen life cycle. This work allowed us to demonstrate the possible role of KRP3, KRP5 and KRP7 in galls induced by nematodes. Our results demonstrate that all members of this family affect cell cycle progression during gall formation differently, thus affecting the nematode life cycle. Thus, the data generated in this study will certainly contribute significantly to the development of new techniques and tools for the control of major cotton pest in the country, cotton boll weevil, and the root-knot nematode, Meloidogyne incognita.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:48:09Z : No. of bitstreams: 1 grigolli_jfj_me_jabo.pdf: 355083 bytes, checksum: 9d8e7b89c1a1a845a5387f948235891d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O conhecimento do comportamento de uma praga é fundamental para o entendimento da intensidade de seus danos. O objetivou deste trabalho foi estudar o comportamento de alimentação e produção de danos por Anthonomus grandis em cinco cultivares de algodoeiro, avaliando as épocas de maior e menor preferência alimentar e de oviposição de A. grandis, a distribuição vertical no dossel das plantas de botões florais com orifícios de alimentação e oviposição, a preferência alimentar por botões florais de diferentes idades e o respectivo tempo de abscisão. Utilizou-se o delineamento em blocos ao acaso em esquema de parcelas subdivididas com oito repetições. Semanalmente foram avaliadas 5 plantas/parcela. Para o estudo da preferência alimentar por botões florais de diferentes idades e o tempo para sua abscisão, utilizou-se 20 botões florais ao acaso por cultivar, avaliados acompanhados diariamente. NuOPAL, DeltaOPAL e FMX-910 foram utilizadas para alimentação em todo período de florescimento e frutificação das plantas e FMT-701 e FMX-993 apenas no início e no final deste período. DeltaOPAL, FMX-910 e FMX-993 foram utilizadas para oviposição em todo período de florescimento e frutificação das plantas e NuOPAL e FMT-701, apenas no início e no final deste período. Botões florais do terço superior foram mais preferidos para oviposição e botões florais dos terços médio e superior para alimentação. A preferência alimentar foi maior sobre botões florais com 2 dias em NuOPAL e FMX-910 e com 7 dias em DeltaOPAL, FMT-710 e FMX-993. Nas 5 cultivares o tempo para abscisão dos botões florais foi 1 a 2 dias após a primeira punctura de alimentação / The knowledge of a pest behavior is essential for the damage intensity understanding. The objective was to study the feeding behaviour and damage output by Anthonomus grandis in five cotton cultivars. It was evaluated the period of A. grandis major and minor feeding and oviposition preference, the within-plant distribution of flower buds with feeding and oviposition punctures on the plant canopy, the feeding preference for squares at different ages and also the square abscission time after the first feeding puncture. It was used a randomized block design in a split plot design with eight repetitions. Evaluations were performed weekly on five plants per plot. For feeding preference for squares at different ages and the time for its abscission after the first feeding puncture study, were observed in 20 plants/cultivar 20 randomly squares, which were monitored daily. NuOPAL, DeltaOPAL, and FMX-910 were used for feeding throughout the flowering and fruiting period, and FMT-701 and FMX-993 only at the beginning and end of this period. DeltaOPAL, FMX-910, and FMX-993 were used for oviposition throughout the flowering and fruiting period, and NuOPAL and FMT-701 only at the beginning and end of this period. It was observed a feeding preference for flower buds on the medium ans upper parts of the plants and oviposition preference for flower buds on the upper part of the plants for all five cultivars. The boll weevil feeding preference was on squares with two days on NuOPAL and FMX-910 and seven days on DeltaOPAL, FMT-701, and FMX-993. The square abscission time was 1 to 2 days after the first feeding puncture in all cultivars

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Coorientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Banca: Fernando Hercos Valicente / Banca: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: A caracterização molecular de 46 isolados de Bacillus thuringiensis foi realizada por meio da técnica de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores gerais Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r), resultando na identificação do isolado BT_I622 como portador do gene cry8 (coleóptero-específico). O fragmento obtido de aproximadamente 376 pares de base (pb), localizado na porção inicial do gene, foi clonado em vetor pGEM®-T Easy, sequenciado e analisado por bioinformática. A determinação da sequência completa do gene cry8 presente no isolado BT_I622, foi realizada pela estratégia de "primer walking" com a utilização de oligonucleotídeos específicos. Os iniciadores foram elaborados através do programa Primer3, com base nas sequências de genes cry8 depositadas no banco de dados público GenBank (NCBI) e, por meio da análise das sequências geradas com o par de oligonucleotídeos gerais utilizados inicialmente na caracterização dos isolados. As amplificações com diferentes combinações de iniciadores resultaram na obtenção de fragmentos em torno de 1420, 3302, 628, 1580, 508 e 510 pb, os quais foram clonados, sequenciados e analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed visando a montagem do gene. A sequência contendo 3531 pb foi comparada ao GenBank pela ferramenta BLASTn, apresentando 98% de similaridade com o gene cry8Ka2. Paralelamente, a sequência de aminoácidos deduzida (1176 aa) revelou 75% de identidade com a proteína Cry8Ba1 na análise com o algoritmo BLASTp, demonstrando que o isolado BT_I622 é portador de um novo gene cry8. Os bioensaios indicaram que as larvas de Sphenophorus levis são sensíveis a nova proteína Cry8 de B. thuringiensis / Abstract: The molecular characterization of 46 Bacillus thuringiensis isolates was carried out using the PCR technique with primers designed to detect cry8 genes (Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r)), resulting in the identification of the isolate BT_1622 as a cry8 gene carrier (coleopteran specific). The ca. 376 base pairs (bp) fragment obtained was located in the initial part of the gene, which was cloned into the plasmid pGEM®-T Easy, sequenced and analyzed by bioinformatics. The complete sequence determination of this gene found within isolate BT_1622 was done using the "primer walking" strategy. The primers were designed using the software Primer3, comparing to previously sequenced cry8 genes found in the public database GenBank (NCBI) and analyzing the sequences generated with the pair of general primers used initially in the characterization of isolates. The amplifications with different primer combinations resulted other fragments of this gene with 1,420; 3,302; 628; 1,580; 508 and 510 bp, which were cloned, sequenced and analyzed using the software Phred/Phrap/Consed to obtain the full gene. The 3,531 bp sequence was compared to the GenBank using the BLASTn tool, and showed 98% of similarity with the gene cry8Ka2. Also, the deduced amino acid sequence (1,176 amino acids) showed 75% identity to the Cry8Ba1 using the algorithm BLASTp, demonstrating that the isolate BT_1622 carriers a new cry8 gene. The bioassay results indicated that the Sphenophorus levis larvae are sensitive to the new Cry8 protein of B. thuringiensis / Doutor