It is well established that biofilm formed on tooth surfaces is the major culprit for caries and periodontal disease development. The critical early event of biofilm formation is the specific interaction of microorganisms with the acquired enamel pellicle. This pellicle is formed from adsorbing proteins from saliva, and perhaps also from gingival crevicular fluid. The purpose of this project was two fold: first, to investigate the extent of serum protein adsorption in a salivary protein environment, and second, to investigate the colonization of salivary pellicles by early microbial colonizers. Hydroxyapatite (HA) was incubated with saliva and serum and adsorbing proteins were identified by LC-ESI-MS/MS. To investigate competition among salivary and serum proteins for adsorption to HA proteins were labeled with specific CyDyes, mixed in various ratios and incubated with HA. The early phase of oral biofilm formation in vivo was studied on teeth exposed to the oral environment. The harvested biofilm samples were analyzed with the Human Oral Microbiome Identification Microarray containing 407 different microbial probes. In the pure saliva- and serum-derived pellicles eighty-two and eighty-four proteins were identified. Concomitant presence of salivary and serum proteins showed that salivary protein adsorbers effectively competed with serum proteins adsorbers for the HA surface. Specifically acidic proline-rich protein, cystatin, statherin and amylase proteins in saliva competed off apolipoprotein, C-reactive protein, peroxiredoxin-1 and albumin. In vivo evidence supported the replacement of serum proteins by salivary proteins. The studies with oral biofilm formed in vivo led to the identification of 92 species with streptococci being the most abundant early colonizers. High frequency detection was furthermore made with Haemophilus parainfluenzae, Gemella haemolysans, Slackia exigua and Rothia species. Eight uncultivated phylotypes were detected. While there is a significant amount of serum protein emanating from the gingival sulcus, their ability to participate in dental pellicle formation is likely reduced in the presence of strong salivary protein adsorbers. Furthermore, the early pellicle colonizers exhibit considerable bacterial diversity and include non-cultivable species. These findings will be helpful in designing target-specific approaches for the prevention of and/or intervention in diseases exhibiting an oral-biofilm-based etiology.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-09-06T21:25:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Jorge Bermudez.pdf: 16940162 bytes, checksum: f38c4129fa53cc28958626daecff3dc7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T21:25:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Jorge Bermudez.pdf: 16940162 bytes, checksum: f38c4129fa53cc28958626daecff3dc7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Este estudo in vitro, avaliou a aderência microbiana em discos de titânio submetidos a diferentes tratamentos de superfície antes e após procedimentos de escovação simulada. Material e método: Grupo 1: Discos de titânio lisos (Li) (n=21); Grupo 2: Discos de titânio submetidos ao jateamento por ataque ácido (Jat) (n=21); Grupo 3: Discos de titânio submetidos à oxidação anódica (OA) (n=21); Grupo 4: Discos de titânio submetidos ao jateamento seguido por ataque ácido e oxidação anódica (JT) (n=21). Caracterização inicial: Microscopia de força atômica (rugosidade superficial) (MFA), Microdureza Vickers (MV), Microscopia Eletrônica de varredura com emissão de campo (FEG). Estas análises foram realizadas em diferentes fases – FI: caracterização inicial; FII- Após formação de biofilme; FIII – após escovação; FIV: após escovação e formação de biofilme. Os espécimes tratados por oxidação anódica foram obtidos por meio de um sistema que consiste em fonte programável DC 600 V 8 A microcomputador para controle,osciloscópio e cuba eletrolítica. Análise da aderência de microrganismos antes e após escovação simulada: Espectrofotômetro e contagem das UFC/mL. Novas avaliações: MV; MFA; FEG –avaliação qualitativa da aderência de E. coli. As análises MV, MFA e FEG foram realizadas antes e após formação de biofilme e também antes e após escovação simulada. A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA de um fator e pós-teste de Tukey (α = 0,05) para os dados considerados normais e o teste de Kruskal Wallis (α = 0,05) foi utilizado para os dados que não mostraram normalidade. Nos resultados observamos formação de biofilme em todos os grupos avaliados, no entanto, uma leve diminuição na aderência de E. coli foi observada após realização de escovação simulada. Diferenças estatisticamente significantes foram encontradas entre: o grupo Li (FII) e os grupos Jat e JT da (FII); os grupos Jat e JT da (FII) e o grupo Li (FIV); o grupo Li da (FIV) e os grupos JT (FII) e OA (FIV). Na análise de MV não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos nas diferentes fases do estudo. Com relação à rugosidade superficial, os discos tratados por jateamento seguido de ataque ácido apresentaram-se mais rugosos. Conclui-se que, os discos jateados apresentaram maior aderência de microrganismos quando comparados aos demais discos avaliados. Embora os discos lisos tenham tido menor acúmulo de E. coli, as imagens em FEG mostraram aglomerações sugerindo a presença de formação de biofilme. Diferentemente, nos discos tratados as bactérias se apresentaram mais isoladas. A rugosidade influenciou na quantidade de microrganismos aderidos aos discos. O tratamento de superfície por oxidação anódica demonstrou pequena aderência bacteriana. / This in vitro study evaluated the microbial adhesion on titanium discs subjected to different surface treatments before and after simulated toothbrushing procedures. Methods: Group 1: smooth titanium disks (Li) (n = 21); Group 2: titanium discs submitted to blasting by acid etching (Jat) (n = 21); Group 3: Titanium discs submitted to anodic oxidation (OA) (n = 21); Group 4: Titanium discs submitted to blasting followed by acid etching and anodic oxidation (JT) (n = 21). Initial characterization: Atomic force microscopy (surface roughness) (AFM), Vickers Microhardness (VM), field emission scanning electron microscope (FEG). These analysis were performed at different stages - FI: initial characterization; FII: After biofilm formation; FIII: after brushing; FIV: after brushing and biofilm formation.The specimens treated by anodic oxidation have been obtained by a system consisting of programmable source DC 600 V 8 A, microcomputer control, oscilloscope and electrolytic tank. Analysis of microorganisms adhesion before and after simulated toothbrushing: spectrophotometer and counting of UFC / mL. New evaluation: VM; AFM FEG- qualitative evaluation of E. coli adhesion AFM, MV and FEG analysis were performed before and after the biofilm formation and the simulated toothbrushing procedures. Statistical analysis were performed using ANOVA and posttest of Tukey (α = 0.05) for the data considered normal, and the Kruskal Wallis test (α = 0.05) was used for the data that did not show normality. The results showed biofilm formation in all groups evaluated, however a small decrease in adherence of E. coli was observed after conductingsimulated toothbrushing. Statistically significant differences were found between: the group Li (FII) and the groups Jat and JT (FII); the groups Jat and JT (FII) and the group Li (FIV); the group Li (FIV) and the groups JT (FII) and OA (FIV). The analysis MV did not showed statistically significant differences between groups in different phases of the study. Regarding the surface roughness, the discs treated by blasting followed by acid attacks had become more wrinkled. We conclude that, the sandblasted disc presented greater adherence of microorganisms when compared to other evaluated discs. Although the flat discs have had less accumulation of E.coli, the images in FEG showed agglomerations suggesting the presence of biofilm formation. Differently, the disks treated bacteria performed more isolated. The roughness influenced the amount of microorganisms adhered to the discs. The surface treatment by anodic oxidation demonstrated small bacterial adhesion.

Foi conduzido no “Centro Espírita Nosso Lar Casas André Luiz” (Guarulhos, São Paulo) um ensaio clínico aleatório, de desenho paralelo, duplo-cego, para investigar o efeito de um dentifrício contendo Triclosan e Flúor na redução de placa bacteriana e gengivite. Cinqüenta e cinco internos da instituição foram aleatoriamente divididos em dois grupos: teste (n=28, Colgate Total) e controle (n=27, dentifrício convencional contendo Flúor). A alocação dos sujeitos aos grupos foi conduzida pela farmácia “Fórmula e Ação”, que distribuiu os dentifrícios em tubos de acordo com o grupo experimental. A identidade de cada grupo foi mantida sob sigilo pela farmácia até o final da fase experimental da pesquisa. Os critérios de inclusão foram: presença de pelo menos 20 dentes na cavidade bucal e idade entre 15 e 45 anos. Os critérios de exclusão foram: presença de doença periodontal avançada e histórico de hipersensibilidade ao triclosan. Não se permitiu que os sujeitos da pesquisa utilizassem qualquer outro produto para controle de placa durante o estudo. Os sujeitos da pesquisa foram examinados por Um investigador calibrado, no início da pesquisa, três meses e seis meses após o início. Avaliou-se a quantidade de placa bacteriana pelo Índice de Placa (IP) de Quigley-Hein (1962) modificado por Turesky et al (1970). Após evidenciação da placa, cada dente foi aferido em quatro sítios: MV, V, DV e P ou L, com exceção dos terceiros molares. Aferiu-se a gengivite pelo Índice Sangramento Interdental (ISI). O grupo teste apresentou redução significativa (p<0,001) no IP aos três meses, seguida de uma nova redução deste índice de três para seis meses (p<0,001). Houve uma redução significativa no IP do grupo controle (p<0,001) aos três meses, seguida por redução significativa aos seis meses. Não houve diferença entre os grupos em qualquer momento. Houve redução significativa do ISI no grupo teste após três meses (p<0,001) e embora tenha ocorrido uma diminuição de ISI entre três e seis meses , esta não foi significativa (p=0.07). No grupo controle houve redução no ISI após três meses (p=0,001) e após seis meses (p=0,001). No entanto, não houve diferença estatisticamente signifacante entre os grupos, em qualquer momento do estudo. Não foram observadas reações adversas durante o estudo. Os autores concluíram que o dentifrício contendo triclosan e flúor não promoveu benefícios adicionais ao dentifrício convencional na redução de placa bacteriana e gengivite interproximal. / A randomized, double-blind, parallel design clinical trial, was conducted at "Centro Espírita Nosso Lar Casas André Luiz" to evaluate the effect of a dentifrice containing Triclosan and Fluoride in the reduction of plaque and gingivitis. Fifty five volunteers were randomly allocated in the following groups: test (n=28, Colgate Total) and control (n=27, conventional dentifrice containing fluor). The independent Pharmacy "Fómula e Ação" distributed the dentifrices according to the allocated group and was responsible for the allocation concealment. The sealer code breakers for the dentifrices were kept until the end of the study. Participants were enrolled in the study if they met the following inclusion criteria: minimum of 20 natural teeth and age between 15 and 45 years. Exclusion criteria were advanced periodontal disease and history of hipersensitivity following triclosan usage. Volunteers were not allowed to use any other product for plaque control during the study. Subjects were examined bu a calibrated invetigator, at baseline, three and six months. The clinical scoring procedure used to assess plaque formation was the Turesky (1970) modification of the Quigley-Hein (1962) index plaque scoring index. The clinical scoring procedure used to assess gingivitis was the interdental bleeding index of Caton and Polson (1985). There was a significant reduction in plaque index (p<0,001) at three and six months in both groups, but there were no differences between them. In the test group there was a significant reduction in interdental bleeding at three months (p<0,001), but there was no difference between the third and sixth month (p=0,07). The control group showed significant reduction in the bleeding index at three and six months (p<0,001), but no differences were found between the groups. No adverse effects were observed during the entire study. The autor concluded that the dentifrice containing triclosan and fluoride did not promote any additional effect on plaque and gingivitis reduction.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano e a dissolução de biofilme promovido pela terapia fotodinâmica (PDT) associada com o hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5% e a clorexidina (CHX) sobre biofilmes mono-espécie e multi-espécies. No modelo de biofilme mono-espécie, quarenta e seis prémolares inferiores foram contaminados com cepas de Enterococcus faecalis (ATCCC 29212) por 21 dias. Os espécimes foram divididos em três grupos de acordo com a solução irrigadora utilizada: soro fisiológico, CHX 2% e NaOCl 2,5%. Após irrigação com 5 mL de cada irrigante, a PDT foi realizada. Amostras foram coletadas previamente aos protocolos de irrigação (S1), após irrigação (S2) e após PDT (S3). No modelo de biofilme multi-espécies, sessenta blocos de dentina bovina foram infectados intraoral e divididos em seis grupos: soro fisiológico, soro fisiológico/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT. Microscopia confocal a laser foi usada para avaliar a porcentagem e o biovolume de células vivas e o volume total de biofilme. Todos os grupos reduziram as contagens de UFCs após os procedimentos de irrigação (S1-S2); porém a CHX e o NaOCl promoveram as menores contagens de UFCs (P < 0,05). A PDT diminuiu significativamente a contagem bacteriana no grupo do soro fisiológico (S2-S3; P < 0,05). No modelo de biofilme multi-espécies, a menor quantidade de células vivas foi observada nos grupos CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT, sem diferenças entre si (P > 0,05). A PDT não reduziu o volume total de biofilme (P > 0,05); porém parece diminuir o biovolume e a quantidade de células vivas após irrigação com CHX 2% e NaOCl 2,5%. A terapia fotodinâmica associada ao soro fisiológico reduziu a carga bacteriana em canais infectados com E. faecalis. A PDT parece reduzir a quantidade e o volume de células vivas, mas não o volume total de células em biofilme multiespécies induzido in situ. Finalmente, o tipo de irrigante foi decisivo para dissolver biofilme multi-espécies. / The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect and the biofilm dissolution promoted by photodynamic therapy (PDT) associated with 2.5% NaOCl and 2% CHX over monospecies and multispecies biofilms. In monospecies biofilm model, forty-six mandibular premolars were contaminated with Enterococcus faecalis strains (ATCC 29212) broth culture for 21 days. Specimens were divided into three groups according to the irrigant used: saline, 2% of CHX and 2.5% of NaOCl. After irrigation with 5 mL of each irrigant, PDT was performed. Samples were collected at baseline (S1), after irrigation (S2) and after PDT (S3). In multispecies biofilm model, sixty bovine dentin blocs were infected intraorally, and divided into six groups: saline, saline/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT. Confocal laser scanning microscopy was used to assess the percentage and the biovolume of live cells and the total biovolume. All groups reduced UFC’ counts after irrigation procedures (S1-S2); however CHX and NaOCl promoted the lowest UFCs counts (P < 0.05). PDT significantly reduced the bacterial counts in saline group (S2-S3; P < 0.05). In multispecies biofilm model, the lowest amount of live cells was observed in CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT groups, with no differences among them (P > 0.05). PDT did not reduce the total biovolume (P > 0.05); however it appears to decrease the biovolume and the amount of live cells after irrigation with 2% CHX and 2.5% NaOCl. PDT associated with saline reduced the bacterial load in canal infected with E. faecalis. PDT seems to reduce the amount and the biovolume of live cells, but did not reduce the total biovolume of cells in multispecies biofilm induced in situ. Finally, the irrigant was decisive to dissolve multispecies biofilm.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, em aparelhos disjuntores de Haas, a contaminação in situ por estreptococos do grupo mutans, sob a forma de colônias/biofilmes, nas diferentes superfícies (acrílico, fios, bandas e parafusos), com e sem o uso de bochechos com gluconato de clorexidina a 0,12%, por meio de Cultura Microbiana e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Adicionalmente, a corrosão na área da união entre o fio, a solda de prata e a banda dos aparelhos foi avaliada por meio de Estereomicroscopia Ótica, MEV e análise em Espectrometria de Energia Dispersiva (EDS). Foram selecionados 34 pacientes de 7 a 12 anos de idade, que compareceram à clínica de Ortodontia Preventiva da FORP/USP, com necessidade de correção com aparelho disjuntor de Haas por problemas transversais da maxila (mordida cruzada posterior). Em seguida, utilizando uma tabela de números randômicos, os pacientes foram aleatoriamente divididos em dois grupos de 17 indivíduos cada (Grupos I e II). Durante todo o período de permanência dos aparelhos na cavidade bucal, no Grupo I (controle; n=17) os pacientes foram orientados a utilizar dentifrício fluoretado para escovação diária e não empregar bochechos com soluções antimicrobianas. Por outro lado, no Grupo II (experimental; n=17) os pacientes foram orientados a realizar, além da escovação diária com o uso de dentifrício fluoretado, 2 bochechos por semana com solução de gluconato de Clorexidina a 0,12% (Periogard®). Decorridos cerca de 4 meses da permanência na cavidade bucal, os aparelhos foram removidos. Sendo seccionadas, aleatoriamente, partes dos aparelhos constituídas de uma banda com fio soldado, para análise em estereomicroscopia ótica, MEV e EDS. Os resultados em estereomicroscopia foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Fisher, com nível de significância de 5%. Em seguida, os aparelhos foram submetidos ao processamento microbiológico, em meio de cultura CaSa B, para contagem das colônias/biofilmes de estreptococos do grupo mutans. O teste estatístico não-paramétrico de Mann-Whitney foi aplicado para verificação de possíveis diferenças entre os grupos, com relação à formação de colônias/biofilmes sobre a superfície das diferentes áreas (parafuso, resina acrílica, bandas, fio vestibular e fio palatino), como também para verificar se havia diferença entre a formação de colônias/biofilmes sobre as superfícies livres (voltadas para a cavidade bucal) e as superfícies não-livres (em contato direto com a mucosa palatina e sulco gengival). O nível de significância adotado foi de 5%. Após cultura microbiana, partes dos aparelhos representativas de cada grupo foram submetidas ao processamento e análise em MEV. Os resultados obtidos evidenciaram que, com relação às colônias/biofilmes das superfícies nãolivres dos Grupos I e II, não houve diferença entre os grupos (p=0,009). No entanto, quando as superfícies livres dos Grupos I e II foram comparadas, evidenciou-se diferença significante entre os 2 grupos, em todas as áreas analisadas (parafuso, resina acrílica e bandas) (p<0,001). Os resultados da cultura microbiana foram confirmados em MEV. A análise em estereomicroscopia ótica evidenciou a presença de áreas de alteração de coloração sugestivas de corrosão na região de solda em contato com a banda e com o fio, em ambos os grupos (p=1). Os picos dos elementos químicos observados em EDS também foram semelhantes em ambos os grupos. Pôde-se concluir que o uso do gluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard®), sob a forma de bochecho, apresentou eficácia na redução da formação de colônias/biofilmes nas superfícies livres dos aparelhos disjuntores de Haas, in situ, sem elevação nos níveis de corrosão. / The purpose of this study was to evaluate, in situ, in Haas expanders, the contamination of different surfaces (acrylic resin, wires, bands and screws) by mutans group streptococci colonies/biofilms with and without prescription of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes, by means of microbial culture and scanning electron microscopy (SEM). Additionally, the corrosion in the area of union between the appliances wire, silver soldering and band was assessed by optical stereomicroscopy, SEM and energy dispersive spectroscopy (EDS). Thirty-four children aged 7 to 12 years were selected among the patients attending the Preventive Orthodontic Clinic at FORP/USP with need of corrective orthodontics with Haas expander due to transversal problems of the maxilla (posterior crossbite). Thereafter, using a table of random numbers, the patients were randomly assigned to two groups of 17 individuals each (Groups I and II). Throughout the time that the appliances remained in the oral cavity, the patients in Group I (control; n=17) were instructed to use a fluoridated dentifrice for daily toothbrushing and not to use antimicrobial mouthwash solutions. On the other hand, in Group II (experimental; n=17), in addition to daily toothbrushing with a fluoridated dentifrice, mouthwashes with an antimicrobial agent (0.12% chlorhexidine gluconate - Periogard®) were prescribed to the patients. After approximately 4 months of maintenance in the patients mouth, the appliances were retrieved. Thereafter, components of the appliances (consisting of a band with soldered wire) were sectioned at random for analysis under optical stereomicroscopy, SEM and EDS. The results of the optical stereomicroscopy were submitted to statistical analysis using Fisher\'s test at 5% significance level. The appliances were sent to microbiology processing, in CaSa B culture medium, for counting of the number of mutans streptococci colonies/biofilms. Mann-Whitney non-parametric statistical test was applied to verify possible differences between the groups with respect to the formation of colonies/biofilms on the surface of different areas (screw, acrylic resin, bands, buccal wire and palatal wire), as well as to determine whether there were differences between the formation of colonies/biofilms on free surfaces (facing the oral cavity) and non-free surfaces (in direct contact with the palatal mucosa and gingival sulcus). The level of significance was set at 5%. After microbial culture, components of the appliances that were representative of each group were submitted technical processing and SEM analysis. The obtained results showed that there was no statistically significant difference between Groups I and II (p=0.009) regarding the formation of colonies/biofilms on the non-free surfaces. However, when the free surfaces of Groups I and II were compared, statistically significant difference was observed between these groups in all analyzed areas (screw, acrylic resin and bands) (p<0.001). The results of the microbial culture were confirmed by the SEM analysis. The optical stereomicroscopic analysis showed the existence of color alteration suggestive of corrosion in the solder region in contact with the band and with the wire in both groups (p=1). The peaks of chemical elements observed in EDS were also similar in both groups. It may concluded that the use of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes (Periogard®) showed efficacy in reducing the formation of colonies/biofilms on the free surfaces of Haas expanders, in situ, without increasing the corrosion levels.

Escherichia coli patogênica extra intestinal (ExPEC) constitui um importante patotipo de Escherichia coli (E. coli), sendo responsável por causar infecções em seres humanos e animais. Estudos sobre as relações filogenéticas entre isolados NMEC, UPEC e APEC enfatizam as semelhanças genéticas entre estes grupos de E. coli, sugerindo que as estirpes aviárias possam representar um potencial risco zoonótico. Um dos grandes problemas da infecção por UPEC é o fato de que a colonização da bexiga favorece a formação de biofilmes. Diante da grande incidência de infecções do trato urinário causadas por UPEC, este trabalho buscou avaliar a relação dos grupos filogenéticos de patogenicidade com a formação de biofilmes em amostras de Escherichia coli uropatogênicas em duas diferentes temperaturas. Em estudo prévio, as cepas de Escherichia coli, isoladas de pacientes hospitalizados com infecção urinária, foram classificadas em grupos filogenéticos. Os grupos designados B2 e D são conhecidos por possuírem patogenicidade. B2 está associado a amostras com alta patogenicidade e D, com amostras de patogenicidade intermediária. As amostras pertencentes aos grupos A e B1 são consideradas não patogênicas ou comensais. Com base neste trabalho, todas as 215 cepas de E. coli uropatogênica do presente estudo são oriundas do Hospital de Clinicas de Porto Alegre coletadas entre os anos de 2012 a 2014. Dentre estas 52 cepas de UPEC foram classificadas como pertencentes ao grupo filogenético A (24,2%), 21 amostras ao grupo B1 (9,8%), 69 amostras ao grupo B2 (32%) e 73 amostras ao grupo D (34%). A formação de biofilme foi testada nas temperaturas de 25ºC e 37ºC. Quanto a formação de biofilme em placas de poliestireno na temperatura de 25±1ºC observamos que 51 (23,6%) cepas foram não produtoras de biofilme e 165 (76,4%) foram produtoras de biofilme; na temperatura de 37ºC±1 encontramos apenas 18 (8,3%) isolados não formadores de biofilme e 198 (91,7%) que formaram biofilme. A análise de correlação entre a produção de biofilme in vitro e a classificação dos grupos filogenéticos não apresenta uma diferença significativa (p<0,05), ou seja, a produção de biofilme em poliestireno não pode ser relacionada com a patogenicidade da bactéria em questão, conforme as condições do estudo. / Extra intestinal Pathogenic Escherichia coli (Expectations) is an important pathotype of Escherichia coli (E. coli), being responsible for causing infections in humans and animals. Studies on the phylogenetic relationships among isolates NMEC, UPEC and APEC emphasize the genetic similarities between these groups of E. coli, suggesting that avian strains may represent a potential zoonotic risk. One of the major problems of the UPEC infection is the fact that the colonization of the bladder encourages the formation of biofilms. Given the high incidence of urinary tract infections caused by UPEC, this study sought to assess the relationship of pathogenicity phylogenetic groups with the biofilm formation of Escherichia coli samples uropatogênicas at two different temperatures. In preliminary study, E. coli strains, isolated from hospitalized patients with urinary tract infection, were classified in phylogenetic groups. The groups designated B2 and D are known to possess pathogenicity. B2 is associated with the samples with high pathogenicity and D, with samples of intermediate pathogenicity. The samples belonging to the groups A and B1 are considered non-pathogenic or Diners. Based on this work, all 215 E. coli uropatogênica strains in this study are from the Clinical Hospital Porto Alegre collected from 2012 to 2014. Among these 52 UPEC strains were classified as belonging to the phylogenetic Group (24.2%), 21 samples to group B1 (9.8%), 69 samples the Group B2 (32%) and 73 samples to Group D (34%). Biofilm formation was tested at temperatures of 25° C and 37° c. As the formation of biofilms on polystyrene plates in the temperature of 25 ± 1° C we observe that 51 (23.6%) strains were not producing biofilm and 165 (76.4%) were biofilm producers; at the temperature of 37° C ± 1 we found only 18 (8.3%) isolates not trainers of biofilm and 198 (91.7%) who formed biofilms. The analysis of correlation between in vitro biofilm production and classification of phylogenetic groups does not present a significant difference (p < 0.05), i.e. the production of polystyrene biofilm can not be linked to the pathogenicity of the bacteria in question, as the conditions of the study.

Apesar das evidências sobre o efeito de bactérias probióticas sobre Candida albicans, os mecanismos envolvidos nesta interação não estão totalmente esclarecidos. Visando contribuir com o entendimento sobre os mecanismos pelos quais bactérias probióticas interferem na colonização por C. albicans, o presente estudo testou a hipótese de que Lactobacillus probióticos interferem na resposta de macrófagos humanos induzida por C. albicans e inibem o desenvolvimento do biofilme de C. albicans. Macrófagos humanos THP-1 foram pré-tratados com Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m e Lactobacillus acidophilus NCFM, e desafiados com C. albicans e/ou lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli, em ensaio de co-cultura. Após incubação, foram determinados o perfil de citocinas por ELISA, a transcrição relativa do gene clec7a por RT-qPCR. Biofilmes de C. albicans ATCC SC5314 e 75 (isolado clínico) em fase de adesão inicial, colonização inicial e maturação foram tratados com suspensão de Lactobacillus probióticos. Além disso, os biofilmes de C. albicans foram tratados com meio condicionado com L. rhamnosus após diferentes períodos experimentais. O efeito dos probióticos foi avaliado por contagem de células de C. albicans viáveis e avaliação da morfologia celular por microscopia confocal e eletrônica de varredura. O pré-tratamento com bactérias probióticas promoveu alteração no perfil de citocinas produzidas por macrófagos desafiados com LPS e C. albicans, induzindo um aumento nos níveis de IL-10 e redução de IL-12 (p<0,05). Além disso, o pré-tratamento com probióticos provocou redução do nível de transcritos de clec7a, que codifica o receptor Dectina-1 (p<0,05), indicando a redução da expressão de Dectina-1 nestas células. A interação entre cepas de Lactobacillus e C. albicans promoveu significativa redução (p<0,05) no número de células de C. albicans no biofilme (25,5-61,8%), na dependência da cepa probiótica e da fase do biofilme de C. albicans. Todos os Lactobacillus testados impactaram negativamente na diferenciação levedura-hifa de C. albicans e na formação do biofilme. Análises microscópicas revelaram que as suspensões de L. rhamnosus reduziram a diferenciação de Candida em hifas, levando a uma predominância de crescimento em levedura. O meio condicionado com L. rhamnosus não exerceu efeito significante sobre biofilme maduro (p>0,05), mas promoveu redução significativa do número de UFC de C. albicans quando utilizado nos estágios iniciais da formação do biofilme (p<0,01). Os resultados sugerem que Lactobacillus probióticos são capazes de interferir na expressão de receptores de macrófagos para o reconhecimento de C. albicans e reduzir a resposta de citocinas pró-inflamatórias. Além disso, os resultados indicam que Lactobacillus probióticos são capazes de inibir a diferenciação de C. albicans de leveduras para hifas, e o desenvolvimento de biofilme de C. albicans, particularmente na fase de colonização inicial da levedura, por interações célula-célula e secreção de exometabólitos. O conjunto de dados deste estudo contribui para elucidar os mecanismos pelos quais Lactobacillus atuam como probióticos, dando suporte para o seu uso como terapia suplementar contra infecções de mucosas por C. albicans. / The infection rates of Candida albicans in human may be reduced by probiotics. However, the mechanisms involved in the interaction between C. albicans and probiotic bacteria are largely unknown. The present study comprised two parts. The first aimed to test the hypothesis that probiotics may impair the signaling induced by C. albicans in human macrophages, thus lowering the inflammatory challenge. The second aimed to evaluate the inhibitory effects of Lactobacillus on different phases of C. albicans biofilm development. In the first part, macrophages were pretreated with a probiotic strain (Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m and Lactobacillus acidophilus NCFM) and challenged with C. albicans and/or lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli in a co-culture assay. After incubation, cytokine profile of macrophage\'s supernatant was assessed by ELISA and the expression of clec7a gene was determined by RT-qPCR. Probiotic strains altered the cytokine profile of macrophages stimulated with LPS and C. albicans, leading to increased levels of IL-10 and reduced levels of IL-12 (p<0.05), and reducing the relative expression of clec7a gene encoding Dectin-1 receptor (p < 0.05). In the second part, quantification of biofilm growth and microscopic analyses were performed on C. albicans biofilms treated with Lactobacillus cell suspensions and their supernatants. Lactobacilli induced a significant reduction (p<0,05) in the number of biofilm cells (25.5-61.8%) dependent on the probiotic strain and the biofilm phase. L. rhamnosus supernatants had no significant effect on the mature biofilm (p>0.05), but significantly reduced the early stages of Candida biofilm formation (p<0.01). Microscopic analyses revealed that L. rhamnosus suspensions reduced Candida hyphal differentiation, leading to a predominance of budding growth. All lactobacilli negatively impacted C. albicans yeast-to-hyphae differentiation and biofilm formation. The inhibitory effects of Lactobacillus on C. albicans involved both cell-cell interactions and secretion of exometabolites. To conclude, the probiotic lactobacilli reduce inflammation by impairing the recognition of C. albicans by macrophages and altering the production of proinflammatory cytokines. It was also clarified, for the first time, the mechanics of how the Lactobacillus species antagonize C. albicans colonization, particularly in the critical, early colonization phase of the yeast. Taken all together, our data elucidated the inhibitory mechanisms of lactobacilli that define their probiotic candicidal activity, supporting the use of these probiotics as a supplemental therapy against mucosal infections by C. albicans.

Os manguezais são ambientes ricos em biodiversidade, cuja funcionalidade reside na ciclagem dos nutrientes e seu principal representante vegetal é Rhizophora mangle. Este estudo objetivou conhecer a diversidade bacteriana endoglicolítica e a tolerância à salinidade de rizobactérias associadas à R. mangle. Das amostras de plantas do manguezal de Bertioga (contaminado com petróleo) e Cananéia (não impactado) isolou-se 129 bactérias, das quais 30 apresentaram atividade endoglicolítica, com Bacillus subtilis isolado 39a como melhor produtor. A presença do gene EglA foi confirmada por amplificação com primers específicos. As linhagens testadas para salinidade mostraram-se halotolerantes, com destaque para o 39a, que cresceu em NaCl 20%. A microscopia eletrônica pós-cultivo em diferentes salinidades mostrou produção de biofilme em concentrações altas. Os resultados indicam que a preservação do ecossistema cria um ambiente bacteriano mais diverso e mostra Bacillus spp. como principal produtor de endoglicanase, além de responder ao stress salino formando biofilme. / Mangroves are environments so rich in biodiversity which functionality made by nutrient cycling. The main vegetable specie is Rhizophora mangle. This study objected to know bacterial endoglucolytic diversity and tolerance saline of rhizobacteria associated to R. mangle. Plants from Bertioga (oil contaminated) and Cananéia (not polluted) were sampled. From both sites, 129 bacteria were isolated, which most diversity observed from Cananéia. These isolates, 30 presented endoglucolytic activity and Bacillus subtilis (strain 39a) was characterized as top producer. The presence of EglA gene was confirmed using specific primers. The salinity test showed halotolerance, mainly strain 39a that growth untill about 20% NaCl. The scan electron microscopy of strains allowed biofilm production at elevated salinity that suggest the biofilm as tolerance mechanism to saline environment. The results indicated that ecosystem preservation makes a most diversity bacterial environment and that Bacillus spp. are main endoglucanase producer and response to saline stress producing biofilm.

Foi conduzido no “Centro Espírita Nosso Lar Casas André Luiz" (Guarulhos, São Paulo) um ensaio clínico aleatório, de desenho paralelo, duplo-cego, para investigar o efeito de um dentifrício contendo Triclosan e Flúor na redução de placa bacteriana e gengivite. Cinqüenta e cinco internos da instituição foram aleatoriamente divididos em dois grupos: teste (n=28, Colgate Total) e controle (n=27, dentifrício convencional contendo Flúor). A alocação dos sujeitos aos grupos foi conduzida pela farmácia “Fórmula e Ação", que distribuiu os dentifrícios em tubos de acordo com o grupo experimental. A identidade de cada grupo foi mantida sob sigilo pela farmácia até o final da fase experimental da pesquisa. Os critérios de inclusão foram: presença de pelo menos 20 dentes na cavidade bucal e idade entre 15 e 45 anos. Os critérios de exclusão foram: presença de doença periodontal avançada e histórico de hipersensibilidade ao triclosan. Não se permitiu que os sujeitos da pesquisa utilizassem qualquer outro produto para controle de placa durante o estudo. Os sujeitos da pesquisa foram examinados por Um investigador calibrado, no início da pesquisa, três meses e seis meses após o início. Avaliou-se a quantidade de placa bacteriana pelo Índice de Placa (IP) de Quigley-Hein (1962) modificado por Turesky et al (1970). Após evidenciação da placa, cada dente foi aferido em quatro sítios: MV, V, DV e P ou L, com exceção dos terceiros molares. Aferiu-se a gengivite pelo Índice Sangramento Interdental (ISI). O grupo teste apresentou redução significativa (p<0,001) no IP aos três meses, seguida de uma nova redução deste índice de três para seis meses (p<0,001). Houve uma redução significativa no IP do grupo controle (p<0,001) aos três meses, seguida por redução significativa aos seis meses. Não houve diferença entre os grupos em qualquer momento. Houve redução significativa do ISI no grupo teste após três meses (p<0,001) e embora tenha ocorrido uma diminuição de ISI entre três e seis meses , esta não foi significativa (p=0.07). No grupo controle houve redução no ISI após três meses (p=0,001) e após seis meses (p=0,001). No entanto, não houve diferença estatisticamente signifacante entre os grupos, em qualquer momento do estudo. Não foram observadas reações adversas durante o estudo. Os autores concluíram que o dentifrício contendo triclosan e flúor não promoveu benefícios adicionais ao dentifrício convencional na redução de placa bacteriana e gengivite interproximal. / A randomized, double-blind, parallel design clinical trial, was conducted at "Centro Espírita Nosso Lar Casas André Luiz" to evaluate the effect of a dentifrice containing Triclosan and Fluoride in the reduction of plaque and gingivitis. Fifty five volunteers were randomly allocated in the following groups: test (n=28, Colgate Total) and control (n=27, conventional dentifrice containing fluor). The independent Pharmacy "Fómula e Ação" distributed the dentifrices according to the allocated group and was responsible for the allocation concealment. The sealer code breakers for the dentifrices were kept until the end of the study. Participants were enrolled in the study if they met the following inclusion criteria: minimum of 20 natural teeth and age between 15 and 45 years. Exclusion criteria were advanced periodontal disease and history of hipersensitivity following triclosan usage. Volunteers were not allowed to use any other product for plaque control during the study. Subjects were examined bu a calibrated invetigator, at baseline, three and six months. The clinical scoring procedure used to assess plaque formation was the Turesky (1970) modification of the Quigley-Hein (1962) index plaque scoring index. The clinical scoring procedure used to assess gingivitis was the interdental bleeding index of Caton and Polson (1985). There was a significant reduction in plaque index (p<0,001) at three and six months in both groups, but there were no differences between them. In the test group there was a significant reduction in interdental bleeding at three months (p<0,001), but there was no difference between the third and sixth month (p=0,07). The control group showed significant reduction in the bleeding index at three and six months (p<0,001), but no differences were found between the groups. No adverse effects were observed during the entire study. The autor concluded that the dentifrice containing triclosan and fluoride did not promote any additional effect on plaque and gingivitis reduction.

Muitas espécies de pimentas vermelhas do gênero Capsicum são utilizadas em práticas medicinais tradicionais. Essas plantas são empregadas em algumas preparações para tratar uma variedade de doenças, incluindo infecções. Algumas bactérias produzem biofilme como um importante fator de virulência, pois a estrutura do biofilme intermedia a adesão bacteriana a superfícies, como em dispositivos implantados, sondas e cateteres além de promover proteção física contra os antibióticos ou as respostas do sistema imunológico. Dessa maneira, este estudo investigou a capacidade do extrato e de produtos isolados das sementes de Capsicum baccatum como agentes antibiofilme. Este estudo demonstra, pela primeira vez, que um extrato de C. baccatum apresentou importante atividade antibiofilme contra Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa. A fração ativa foi obtida através de ensaios bioguiados e analisada por HPLC-DAD-MS, MALDI-TOF MS e MALDI-MS/MS, identificando-a como peptídeos da proteína 2S sulfur-rich seed storage protein 2-like. Estes peptídeos (2mg/ml) foram potentes no controle da formação de biofilme de S. epidermidis (>96%) em solução e adsorvidos em lâminas de Permanox® recobertas. De modo interessante, não inibiram o crescimento bacteriano, indicando que a inibição do biofilme é independente da morte celular bacteriana. Ainda, esses peptídeos foram capazes de preservar eritrócitos, bem como a integridade de linfócitos humanos após 24 e 48 horas de exposição, demonstrando que o fracionamento do extrato de C. baccatum potencializou a sua atividade antibiofilme e reduziu significativamente a sua citotoxicidade. Nossos resultados corroboram com a pesquisa de novas estratégias não antibióticas para combater microrganismos com reduzida possibilidade para o desenvolvimento de resistência. / Many species of Capsicum red peppers are used in traditional medicinal practices. These plants are utilized in a number of preparations to treat a variety of illnesses including infections. Some bacteria produce biofilm as an important virulence factor, due to this its structure mediates the adhesion to surfaces as implanted devices, probes, catheters and also promotes physical protection against the antibiotics or the immune system response. Accordingly, this study investigated the ability of the extract and isolated products from seeds of Capsicum baccatum as anti-biofilm agent. This study demonstrates by the first time that an extract from C. baccatum presented relevant anti-biofilm activity against Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa. The active fraction was obtained by bio-guided assays and analyzed by HPLC-DAD-MS, MALDI-TOF MS and MALDI-MS/MS, identifying it as peptides from 2S sulfur-rich seed storage protein 2-like. It strongly controlled (2mg/ml) the S. epidermidis biofilm formation (>96%) when the compound was in solution and adsorbed on Permanox™ slides. Interestingly, it did not inhibit the growth of this bacterium, indicating the inhibition of biofilm is independent of bacterial cell death. Moreover, this peptides preserved human erythrocytes and lymphocytes integrity after 24-48 h of exposure, suggesting the fractionation potentiated the anti-biofilm activity of the C. baccatum crude extract while absolutely reduced its cytotoxicity. Our results corroborate to the search of new non-antibiotic strategies to combat microorganisms with a reduced pressure for resistance development.