Dehydration process is an important histotechnical method of tissue samples undergoing histopathological analysis. Using different alcohols and intermedium, the samples are processed for diffusing the water out of the tissue. Impregnation with paraffin of the tissue in the later stagesis crucial for tissue stability in the remaining histotechnical methods. Sakura Tissue-Tek VIP 6 is atraditional dehydration instrument that realizes dehydrations during longer times with xylene asthe intermedium. However, LOGOS is another dehydration instrument operating with shorter times using Histolab Clear, a more environmental and cheaper intermedium.In the current study tissue samples were used from three different patient cases of each tissue:cutis, breast, intestine and prostate. Two different, new LOGOS- dehydration programs with Histolab Clear as intermedium were tested and validated in accordance with specific qualitycriteria. Parallel were tissue samples dehydrated from the same tissues in the traditional routineprogram, in order to evaluate by comparison, sections and staining quality of the new programs.Immunohistochemistry and routine staining were used for evaluation. The pathologist approved allroutine stains and disapproved some immunohistochemical analyses, depending on poorer staining and the quality of the sections.Because the amounts of the samples were insufficient in some cases, the number of the samples were determined to be expanded in order to investigate if the error occurs systematically or onlyto individual cases. Insufficient dehydration seemed to be fundamental as a cause of inferior results. Therefore, even the time of dehydration in Histolab Clear will increase by one hour, in the further validation. Optimization of dehydration time is required for approval of immunohistochemical analyzes. These analyzes are very important and definitive for the treatment of the patient, and therefore the new dehydration programs must give at least as good results as the conventional. / Dehydreringsprocessen är en viktig histoteknisk metod av vävnadsproverna som genomgår histopatologiska analyser. Med hjälp av olika alkoholer och intermedier, bearbetas proverna för att diffundera ut vattnet ur vävnaden. Impregnering av vävnaden i senare steg med paraffin, är avgörande för vävnadens stabilitet i resterande histotekniska metoder. Sakura Tissue-Tek VIP 6 är en traditionell dehydreringsmaskin som genomför dehydreringar under längre tid med Xylen som intermedium. En annan dehydreringsmaskin är LOGOS som är snabbare och som andvänder Histolab Clear, ett miljömässigare och billigare intermedium.I den aktuella studien användes vävnadsprover från tre olika patientfall vardera med vävnadstyperna cutis, bröst, intestinum och prostata. Två olika, nya LOGOS-dehydreringsprogram med Histolab Clear som intermedium utprövades samt validerades enligt bestämda kvalitetskriterier. Parallellt dehydrerades vävnadsprover från samtliga patientfall med det traditionella rutinprogrammet, med syfte att utvärdera genom jämförelse av snittens och infärgningarnas kvalité från det nya programmen.Immunhistokemiska- och rutininfärgningar användes för utvärdering. Patologerna godkände samtliga rutinfärgningar och underkände en del immunhistokemiska på grund av sämre infärgningar och dåligkvalité på snittet.Eftersom provmängden i några fall betraktades vara för få, bestämdes det att utöka antalet för att utreda om felet förekommer systematisk eller enbart vid enstaka fall. Otillräcklig dehydrering verkade vara fundamentalt vid sämre resultat. Därför kommer även dehydreringstiden i Histolab Clear att utökas meden timme till, vid den fortsatta valideringen. Optimering av dehydreringstiden krävs för godkännande av de immunhistokemiska analyserna. Analyserna är mycket viktiga och definitiva för patientens behandling och därför måste de nya dehydreringsprogrammen åtminstone ge lika bra resultat som det konventionella.

Sammansättningen av leukocyter i perifert blod varierar med olika sjukdomstillstånd och analys av cellerna är avgörande vid diagnostisering och uppföljning av olika leukemier.  Manuell mikroskopering och utvärdering av leukocyterna är tidskrävande och inte alltid självklar eftersom det krävs personal med hög kompetens och erfarenhet för bedömning av cellerna. En tillförlitlig förklassificering av den manuella differentialräknaren CellaVision DM1200 är därför av stort intresse för att underlätta kvantifiering och klassificering av cellerna. För att se om instrumentets förklassificering påverkades av infärgningen undersöktes färglösningens inverkan genom ändringar i fosfatbuffertens pH. Blodutstryk som härstammade från 10 patientprov färgades in med buffertar med pH 6.0, 6.8 och 7.5. Studien visade på en god positiv korrelation i samtliga pH-justerade buffertar, men med bäst resultat för pH 6.0 och 6.8. CellaVision DM1200:s förklassificering av eosinofila granulocyter påverkades mest av pH ändringar, vilket kan förklaras av deras starkt acidofila granula. / In peripheral blood the composition of leukocytes vary due to diseases and therefore analysis of the cells is critical in diagnosing and monitoring various leukemias. Manual microscopy and evaluation of the leukocytes is time consuming and not always clear, and it requires educated staff with long experience to assess the cells. A reliable automatic pre-classification of the cells with the system CellaVision DM12000 is therefor of great interest to facilitate quantification and classification of leukocytes. To evaluate if the instrument’s pre-classification were affected by staining, changes of the current staining solution used in clinical assessment where made by adjustment of the phosphate buffer pH. Examined blood smears that were descendent from 10 different samples were stained in buffers with pH 6.0, 6.8 and 7.5. This study showed a high positive correlation in all of the pH-adjusted buffers with the best results in pH 6.0 and 6.8. CellaVision DM1200’s pre-classification of eosinophilic granulocytes were most affected by changes in pH, which can be explained by their strongly acidophilic granules.

Resistensbestämningar som genererar ett kvantitativt MIC-värde är värdefullt för att kunna välja adekvat antibiotikabehandling. Referensmetoden för MIC-bestämning är mikrobuljongspädning där kommersiella antibiotikapaneler underlättar handhavandet av metoden på kliniska laboratorier. Syftet med studien var att verifiera mikrobuljongspädning med Sensititre™-panelerna SEMSE7 och SEMST7 avsedda för grampositiva kocker, genom att jämföra erhållet resultat med tidigare uppmätta referensvärden av MIC samt SIR-kategorier. Mikrobuljongspädning utfördes med SEMSE7-panel och MH-buljong för Staphylococcus spp. (n=21) och Enterococcus spp. (n=13) samt med SEMST7-panel och MH-F buljong för Streptococcus pneumoniae (n=20). Avläsning av MIC utfördes samt tolkades enligt SIR-systemet. Resultaten jämfördes mot kända referensvärden tidigare uppmätta med mikrobuljongspädning. Isolat analyserade med SEMSE7-panel och SEMST7-panel erhöll en överensstämmelse av MIC på 88,2% respektive 96,7%. Motsvarande kategorisk överensstämmelse av SIR var 92,5% respektive 92,6%. Resultatet visar att Sensititre™-panelen SEMST7 är godkänd i verifieringen av mikrobuljongspädning med god överensstämmelse med referensvärden av MIC samt SIR-kategorier. Vidare bedöms att fortsatt verifiering krävs av SEMSE7-panelen eftersom ej tillfredställande överenstämmelse med referensvärden av MIC erhölls, trots god överenstämmelse av SIR-kategorier. Studien visar att SEMST7-panelen kan implementeras för Streptococcus pneumoniae i den kliniska verksamheten på mikrobiologilaboratoriet, Jönköping. / Antimicrobial susceptibility testing methods generating a quantitative MIC are valuable for choosing adequate antibiotic treatment. Broth microdilution is the reference method for MIC determination and commercial panels with antibiotics facilitate the procedure in clinical laboratories. The aim of the study was to verify broth microdilution with the Sensititre™ panels SEMSE7 and SEMST7 designed for gram-positive cocci, by comparing results with previously measured reference values of MIC and SIR. Broth microdilution was performed using the SEMSE7 panel with MH broth for Staphylococcus spp. (n=21) and Enterococcus spp. (n=13), and using the SEMST7 panel with MH-F broth for Streptococcus pneumoniae (n=20). Reading MIC endpoints was performed and interpreted according to SIR system. Isolates analysed with the SEMSE7 and SEMST7 panel obtained essential agreement of 88,2% and 96,7%, and categorical agreement of 92,5% and 92,6% respectively. In conclusion, the Sensititre™ panel SEMST7 is approved in the verification of broth microdilution with satisfactory essential agreement and categorical agreement. Furthermore, it is considered that further verification is required for the SEMSE7 panel as unsatisfactory essential agreement was obtained, despite satisfactory categorical agreement. The study shows that the SEMST7 panel can be implemented for Streptococcus pneumoniae in the clinical practice at the microbiology laboratory, Jönköping.

Elastinfibrer ger blodkärl och andra vävnader deras flexibilitet. Elastinfärgning är relevant när man misstänker melanom, temporalis artrit, venös invasion och efter blodkärlsoperationer. Syftet var att med hjälp av olika vävnadstyper optimera och implementera den automatiserad elastinfärgningen enligt Hart, för att ersätta den nuvarande manuella elastinfärgning enligt Verhoeff vid patologilaboratoriet på länssjukhuset Ryhov, Jönköping. Colon, njure, hud samt navelsträng färgades med den automatiska metoden enligt Hart för att hitta optimala inställningar. Vävnader från samma områden färgades med den manuella metoden enligt Verhoeff samt den automatiska metoden enligt Hart för att jämföra dem. Snitten bedömdes av en läkare så allt färgades som det skulle. Optimeringen av Harts metod resulterade i en inkubationstid på tolv minuter samt en optimal färgningsbehandling utan xylen. Resultaten av jämförelsen mellan den automatiska metoden enligt Hart och den manuella metoden enligt Verhoeff visar att den automatiska metoden enligt Hart ger bättre kontrast samt bakgrundsinfärgning. Slutsatsen blev att den automatiska metoden enligt Harts var bättre än den manuella metoden enligt Verhoeff, att i framtida studier studera möjligheten att byta ut läskningen mot till exempel ytterligare ett etanoldop samt att byta ut snitten av navelsträngen mot snitt av lever. / Elastic fibres ensure blood vessels and other tissues flexibility. Elastic staining of tissue is relevant when there is suspicion of melanoma, temporalis arteritis, venous invasion and after operations on blood vessels. The aim of the study was with the help of different tissue samples optimize and implement Hart´s elastic staining method as a substitute for Verhoeff’s at pathology lab at county hospital Ryhov, Jönköping. Colon, kidney, skin, and umbilical cord cross section got stained with Hart´s automated elastic staining method to evaluate the optimal staining procedure. Same region of the tissues was stained with Verhoeff´s manual elastic staining method and Hart´s method. All cross section were assessed and compared with the help of a pathologist doctor. Optimization of Hart´s method resulted in an incubation period of twelve minutes and optimal staining procedure without xylene. Result of comparison between Hart´s staining method and Verhoeff´s staining method showed that Hart´s staining method had a better contrast and background. Conclusions of the study was that Hart´s staining method was better than Verhoeff´s staining method, further studies could include research about a substitution of the blotting step with an extra ethanol bath as an example and liver tissue instead of the umbilical cord.

I december 2019 rapporterades fall av oidentifierad lunginflammation, senare känd som Covid-19. Antalet fall ökar fortfarande snabbt i världen och därmed utgör Covid-19 ett extraordinärt hot mot folkhälsan. Studier har visat en ökad mängd proinflammatoriska cytokiner TNF-α, associerade med andningssvårigheter samt en ökad kortisolproduktion. Utsöndring av kortisol och TNF-α är associerade med fysiska- och psykiska hälsoeffekter, sjukdomsgrad samt dödsfall av Covid-19. Syftet med studien var att undersöka utsöndringen av biomarkörerna kortisol och TNF-α i saliv hos individer tidigare diagnostiserade med Covid-19 samt hos individer utan diagnostiserad Covid-19 (kontrollgrupp). Det för att undersöka huruvida kvarvarande symtom kunde associeras till biomarkörerna. Studien inkluderade 40 individer, varav 20 individer tidigare diagnostiserade med Covid-19 samt 20 individer utan diagnostiserad Covid-19. Saliv och ett frågeformulär om deras allmänna hälsotillstånd och symtom kopplade till Covid-19 infektion samlades in och analyserades. Salivprover tagna på morgon analyserades med ELISA och resultatet jämfördes mellan grupperna. Inga signifikanta skillnader visade mellan grupperna gällande biomarkörer. Resultaten visade dessutom inga korrelation mellan symtom och biomarkörer samt att inga förhöjda nivåer av analyserade biomarkörer kan associeras med kvarvarande symtom efter en Covid-19 infektion. / A cluster of unidentified pneumonia cases, later known as Covid-19, were reported in December 2019. The number of Covid-19 cases is still rapidly increasing and poses an extraordinary threat to our public health. Studies have shown an increased level of the cytokine TNF-α, associated with severe respiratory symptoms as well as an increased cortisol production. Together associated with physical and mental health effects, disease severity and increased mortality of Covid-19. This study aimed to evaluate the secretion of cortisol and TNF-α in the saliva of individuals previously diagnosed with Covid-19 and individuals not diagnosed with Covid-19 (control group). This to examine whether the residual symptoms can be associated with the analyzed biomarkers. The study included 40 participants, 20 individuals diagnosed with Covid-19 and 20 individuals not diagnosed with Covid -19. Saliva and a questionnaire concerning their overall health and possible symptoms associated with Covid-19 infection were collected and analyzed. Saliva morning samples were analyzed with ELISA and results were compared between the groups. No significant differences were shown between the groups regarding the biomarkers. Also, the results showed no correlations between symptoms and biomarkers, nor elevated levels of analyzed biomarkers could be associated with residual symptoms after a Covid-19 infection.

Urinblåsecancer är den sjunde vanligaste cancerformen i Sverige där blåssköljvätska utgör det huvudsakliga provmaterialet vid utredning. ThinPrep® är en vanligt förkommande metod som används inom vätskebaserad cytologi vid analys av blåssköljvätska. Fixering av provmaterialet kan försvåra diagnostiken på grund av förändrad morfologi samt artefakter.  Studiens syfte var att jämföra erhållet preparatinnehåll från blåssköljvätskor som fixerats med fixeringslösning innehållande ättiksyra med CytoLyt® solution. Studien ämnade även jämföra ThinPrep® filtren ”Non-GYN” och ”UroCyte”.  Studien inkluderade 90 patientprover av blåssköljvätska som fixerades med tillsats av ättiksyra samt CytoLyt®, varvid filtren ”Non-GYN” samt ”UroCyte” användes. Preparaten bedömdes av cytodiagnostiker samt cytopatolog utifrån kriterierna: bakgrundsmaterial, cellmängd samt färgbarhet. Resultatet visade att CytoLyt® i kombination med filtret ”Non-GYN” gav ett mer representativt preparat samt lämnade en god bakgrundsbild. Användandet av CytoLyt® resulterade i fler diagnostiska fördelar jämfört med fixering av ättiksyra, vilket även gynnar patienter. / Bladder cancer is the seventh most common form of cancer in Sweden where the main source of material for investigation are bladder washings. A common method within liquid-based cytology for analysis of bladder washings is ThinPrep®. Altered morphology as well as artifacts due to fixation can complicate funkar “the diagnostics of the sample. The aim of this study was to compare the slide content obtained from bladder washings fixed with fixative containing acetic acid with CytoLyt® solution. The study also intended to compare the ThinPrep® filters "Non-GYN" and "UroCyte". A total of 90 samples of bladder washings from patients where included. The samples where fixed with the addition of acetic acid and CytoLyt®, using the "Non-GYN" and "UroCyte" filters. A cytotechnologist and a cytopathologist assessed the preparations based on the criteria background material, cell quantity and the amount of colour change. The results showed that CytoLyt® in combination with the filter "Non-GYN" gave a more representative preparation and provided a good background image. The use of CytoLyt® resulted in more diagnostic benefits compared to fixation with acetic acid, which also benefits patients.

Diabetes has, in the past three decades, surged immensely. Because of this, new insulin analogues are constantly in the making.  In clinical studies, the presence of antidrug antibodies can prove a challenge when measuring insulin. In order to overcome the interference from antidrug antibody complexes on the total insulin measurement in human serum, several pre-treatment methods on insulin and polyclonal antibodies spiked samples were tried using ELISA analysis. Several different methods were tried, acid dissociation using a glycine buffer with and without ethanol in different concentrations, high ionic strength dissociation using MgCl2, Polyethylene glycol (PEG) and filtration. The best results were found when using the acid dissociation technique. Using glycine promising results were achieved, especially when 20 % ethanol was added to the acid mixture. Pre-treatment using PEG, MgCl2 and filtration was unsuccessful with the methods used. The main goal was reached through the use of glycine with the addition of 20% ethanol for acid dissociation. The proposed method still leaves significant room for optimisation and needs further verification on real patient samples. However, it is a good step in the direction of a global methodology using ELISA to overcome antidrug antibody interference for total insulin measurement in human serum.

Human pleasant touches promote feelings of security, supportiveness, and wellbeing. Conversely, human unpleasant touches promote the body for either “fight or flight” or “short term acute stress” during emergencies, feeling of stress or danger. The promoted stress response is released from the hypothalamus by the sympathetic nerve system further to the spinal cord to reach the signals to the adrenal medulla, where stress hormones adrenaline is released. Adrenaline, which is characterized by a mimic sympathetic nerve system, interacts with α and β receptors on different organs. The aim for this study was to investigate whether the stroker (partner/stranger) touch effects on adrenaline hormone releases. The null hypothesis for this study entails a significant adrenaline reduction in partners’ touches compared with strangers’ touches. Indirect competitive ELISA method was used, and concentration data of a total of sixteen participants was obtained. Whitney-U test was carried out to compare group differences within stroker (stranger/partner) touches and adrenaline releasing level. In addition, correlation in adrenaline with noradrenaline and oxytocin hormones was obtained using Spearman’s correlation test. The significant p-value 0.05 was conducted. The result of this study showed no differences between stroker (partner/stranger) associated with adrenaline hormone release. Correlation between partner maximum (max) concentration data for both oxytocin and adrenaline had significant differences. However, max variables for adrenaline and noradrenaline within stroker did not show significant differences. The conclusion of this study is that the gentle touch stimulus used in this study was not enough to detect stress hormone in adrenaline.

Neisseria meningitidis är en bakterie som kan leda till invasiv sjukdom eller endast orsaka bärarskap i nasopharynx. Bakterien delas in i olika serogrupper och klonala komplex. Vissa av dessa grupper och klonala komplex förekommer endast hos invasiva isolat och andra bland bärare, vilket tyder på att det finns genetiska skillnader mellan invasiva och bärarisolat. I denna studie undersöktes genen pilE som kodar för PilE proteinet och ingår i bakteriens pili. Proteinet finns i två klasser, klass 1 och klass 2. Metoden som användes för att studera eventuella skillnader i förekomst och uttryck av pilE genen var digital droplet PCR (ddPCR). Både DNA och RNA kvantifierades med ddPCR för att undersöka antalet kopior av pilE genen (DNA) samt dess uttryck (RNA) mellan invasiva isolat och bärarisolat, mellan klass 1 pilE isolat och klass 2 samt fördelning av klasserna i isolattyperna. Principen för ddPCR är att dela ett prov till tiotusentals nanodroppar där individuella droppar genomgår PCR för en senare avläsning av flourescens från prober. Resultatet visade skillnad mellan bärarisolat och invasiva isolat där de invasiva isolaten visade mindre uttryck av pilE än bärarisolat. Klass 2 isolat hade signifikant färre genuttryck än klass 1 isolat och invasiva isolat visade klass 2 i högre utsträckning än bärarisolat. / Neisseria meningitidis is a bacterium that can cause invasive disease or carriage in the nasopharynx. The bacteria are divided into different serogroups and clonal complexes. Specific serogroups and clonal complexes are more frequent or are only found among invasive isolates or in carriage isolates. This study has investigated pilE, a gene that encodes the PilE protein located in the bacteria´s pilin and the protein is found in either class 1 or class 2. digital droplet PCR was used to investigate differences in presence and expression of the gene pilE. Both DNA and RNA was quantified to study the difference in copy number of the pilE gene (DNA) and its expression (RNA) between invasive isolates and carriage isolates but also between class 1 isolates and class 2 isolates. The distribution of classes between the isolate types was also investigated. The ddPCR method divides a sample into thousands of nanodroplets and a PCR reaction occurs in each droplet followed by droplet reading where fluoroscens from probes is measured. The difference that could be seen was that the invasive isolates expressed pilE in lower copies. Class 2 isolates had a significantly lower gene expression than class 1 isolates and invasive isolates expressed class 2 in a higher frequency.

Sömnapné karaktäriseras av korta andningsuppehåll som inträffar under sömnen och resulterar i en störd nattsömn. Svårighetsgraden av sömnapné kan anges med hjälp av ett index som kallas för apné-hypopné index (AHI), där summan av alla andningsuppehåll divideras med den totala sömntiden. Vanligtvis sker sömnregistreringen under endast en natt men i denna studie ska registreringen ske under två nätter i stället. Syftet med studien är att undersöka skillnaden i AHI-värde och därmed skillnaden i den diagnostiserade svårighetsgraden av sömnapné mellan de två registreringstillfällen. Observationsstudien bestod av 25 patienter, varav 14 män, som blivit remitterade för sömnapnéutredning på Fysiologkliniken vid Västmanlands sjukhus Västerås. Sömnen registrerades i hemmet med hjälp av den ambulatoriska sömnregistreringsapparaten NOX T3s. All insamlad data analyserades manuellt i programmet NoxTurnal. Ett Wilcoxons signed-rank test med signifikansnivå 0,05 användes för att se om det förelåg signifikant skillnad i AHI-värde mellan de båda registreringarna. Den statistiska analysen visade ingen statistiskt signifikant skillnad i AHI mellan första respektive andra registreringen. På individnivå sågs smärre skillnader. För 3 av 25 patienter var skillnaderna mellan registreringarna sådana så att den kliniska handläggningen skulle ha kunnat förändras. / Sleep apnea is characterized by short pauses in breathing that occur during sleep and result in disrupted sleep. The severity of sleep apnea can be indicated by an index called the apnea-hypopnea index (AHI), where the sum of all breathing pauses is divided by the total sleep time. Typically, sleep monitoring occurs for only one night, but in this study, monitoring will take place over two nights. The purpose of the study is to investigate the difference in AHI value and therefore the difference in the diagnosed severity of sleep apnea between the two monitoring occasions. The study consisted of 25 patients, of whom 14 were men and 11 were women, referred for sleep apnea evaluation at the Physiology Clinic at Västmanland Hospital in Västerås. Sleep was recorded at home using the ambulatory sleep registration device NOX T3s. All data was manually analyzed using the NoxTurnal software program. A Wilcoxon signed-rank test with a significance level of 0,05 was used to determine if there was a significant difference. There was no statistically significant difference in AHI between the first and second recordings. On an individual level, minor differences were observed. For 3 out of 25 patients, the differences between the registrations were significant enough to potentially change the clinical management.