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Wheat resistance to blast using a non-host selective toxin and host metabolic reprogramming through a successful infection by Pyricularia oryzae / Resistencia do trigo à brusone usando uma toxina não selectiva e o sucesso da infecção por Pyricularia oryzae através da reprogramação metabólica do hospedeiro

Aucique Pérez, Carlos Eduardo 25 August 2016 (has links)
Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-15T18:29:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1510730 bytes, checksum: 754986579a43c0d4c754880228c9a25d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T18:29:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1510730 bytes, checksum: 754986579a43c0d4c754880228c9a25d (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / A brusone, causada por Pyricularia oryzae, é considerada uma doença economicamente importante para trigo na América do Sul. Uma das estratégias de manejo para minimizar as perdas causadas por essa doença é o uso de cultivares resistentes. Alternativamente, pode-se utilizar indutores de resistência para aumentar o nível basal de resistência do trigo à brusone. O presente estudo teve como objetivos: i) determinar as alterações fisiológicas e bioquímicas em plantas de trigo pulverizadas com uma concentração não fitotóxica do ácido α-picolinico (AP), o qual é uma toxina não seletiva produzida por P. oryzae e ii) verificar a manipulação metabólica exercido por P. oryzae quando infectando cultivares de trigo com diferentes níveis de resistência basal à brusone. Nas folhas de trigo pulverizadas com uma concentração não fitotóxica de AP (0.1 mg mL -1 ), os sintomas da brusone desenvolveram menos em associação com um melhor desempenho fotossintético, melhoria do metabolismo antioxidante e redução nas concentrações de H 2 O 2 , O 2 ●- e MDA. As cultivares BR-18 e EMBRAPA- 16 foram mais resistentes à brusone do que a cultivar BRS-Guamirim. O desempenho fotossintético das plantas infectadas foi alterado devido a limitações de natureza difusiva e bioquímica para uma eficiente fixação do CO 2 . Durante a fase assintomática da infecção por P. oryzae, mudanças drásticas no metabolismo de carboidratos e nos níveis de aminoácidos, compostos intermediários do ciclo de Krebs e poliaminas ocorreram nas plantas das três cultivares sugerindo, assim, uma manipulação metabólica exercida por P. oryzae. No entanto, um metabolismo antioxidativo mais eficiente foi importante para neutralizar os efeitos deletérios da infecção por P. oryzae em associação com maiores atividades da fenilalanina amônia liase e polifenoloxidase e maiores concentrações de compostos fenólicos e lignina. Com base nesses resultados e possível concluir que a concentração não fitotóxica de AP foi capaz de potencializar a defesa das plantas de trigo e reduzir a severidade da brusone. A infecção do trigo por P. oryzae ocasionou distúrbios no metabolismo primário das plantas e alguns deles foram semelhantes entre as cultivares independentemente do nível basal de resistência delas. / Blast, caused by Pyricularia oryzae, has become an economically important disease in wheat in South America. One of the management strategies for minimizing the losses caused by blast includes the use of resistant cultivars. Alternatively, the use of inducers of resistance showed the potentiation to increase wheat resistance to blast. This study aimed: i) to determine the physiological and biochemical alterations in wheat plants sprayed with a non-phytotoxic concentration of α-picolinic acid (PA), which is a non-host selective toxin produced by P. oryzae and ii) to establish the degree of metabolic manipulation exerted during the infection by P. oryzae on plants from cultivars with different levels of basal resistance to blast. The spray of leaves of plants with a non-phytotoxic concentration of PA (0.1 mg mL -1 ) resulted in less blast symptoms in association with a better photosynthetic performance, an improvement on the antioxidant metabolism and reduced concentrations of H 2 O 2 , O 2 ●- and malondialdehyde. The cultivars BR-18 and EMBRAPA-16 were more resistant to blast in comparison to cultivar BRS-Guamirim. The photosynthetic performance of the infected plants was altered due to diffusional and biochemical limitations for CO 2 fixation. During the asymptomatic phase of P. oryzae infection, drastic changes in the carbohydrates metabolism and on the levels of amino acids, intermediates compounds of Krebs cycle and polyamines occurred on plants from the three cultivars suggesting a metabolic manipulation exerted by the pathogen. However, amore efficient antioxidant metabolism was able to help the wheat plants to counteract against the deleterious effects of P. oryzae infection in association with great phenylalanine ammonia lyases and polyphenoloxidases activities and high concentrations of phenolics and lignin. Based on this information, it is possible to conclude that a non- phytotoxic concentration of PA elicited the activation of host defense mechanisms that reduced blast severity. Likewise, the infection of leaves by P. oryzae induced remarkable disturbances in the primary metabolism and some of them were conserved among the cultivars regardless of their basal level of resistance to blast.
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Caracterização de isolados de Colletotrichum musae no Estado de Pernambuco

SANTOS, Paulo Cézar das Nações 17 February 2011 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-23T11:38:02Z No. of bitstreams: 1 Paulo Cezar das Merces Santos.pdf: 945938 bytes, checksum: 4dcffae9a84258c9e4e04fc53d685685 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T11:38:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Cezar das Merces Santos.pdf: 945938 bytes, checksum: 4dcffae9a84258c9e4e04fc53d685685 (MD5) Previous issue date: 2011-02-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / From a socioeconomic perspective, the banana, one of the most consumed fruit, has great importance worldwide. The Brazilian production of this fruit presents particular geographic distribution, since it is present in all States of the federation. In the State of Pernambuco, the banana is grown in all the regions, occupying about 80000 permanent jobs in the field, with two distinct poles of banana production: the Zona da Mata and Vale do São Francisco. Among the limiting factors for this crop, there are the post-harvest diseases such as anthracnose, caused by Colletotrichum musae. This disease causes significant losses in production, manifesting itself mainly in the fruit at maturity stage. In order to verify the diversity of this pathogen isolated from C. musae from banana production fields of three municipalities (Vicência, São Vicente Férrer and Machados) of the Pernambuco State were characterized for daily mycelial growth rate (DMGR), colony color, reverse plate, topography, presence of sectors and microsclerotia, conidial morphology, biochemical tests, pathogens and molecular. The 60 isolates, based on morphological characters of shape and size of conidia, were identified as C. musae, followed with morphological measurements from 9.3 to 30.2 x 2.6 to 12.6 μm ( x = 15.0 x 4.9 μm, n = 6000). Most isolates showed conidia straight, oblong, with rounded apices. As for the DMGR, all isolates showed growth averaged more than 1.0 cm.day–1, ranging from 1.21 to 1.63 cm.day–1. It was found three groups of striking color to the colonies: white, cream and salmon, while the presence of sectors ranging from zero to eight per isolate. Most isolates (53) metabolized the ammonium tartrate as the sole source of carbon, while for citric acid, all isolates except the isolate CMM 3219, were not able to metabolize this carbon source. The pathogenic characterization showed significant differences in the epidemiological parameter AUDPC in fruits inoculated with injury, indicating the existence of variation in aggressiveness among isolates. For fruit inoculated and no injuries, the AUDPC was not estimated for 20 isolates because there was no injury. The dendrogram generated by UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) cluster analysis of DNA bands obtained with the combination of three primers (GTG5, GACA and 820) by ISSR-PCR allowed the separation of three groups of isolates to 62% by Jaccard’s similarity coefficient. The group I was composed of isolates from Vicência Group II isolates São Vicente Férrer and group III, Machados. The results suggest that isolates of C. musae can be discriminated as to their origin because they had genetic similarity between them. The ISSR markers in this study appear to be useful tools in the study of C. musae. / Do ponto de vista socioeconômico, a banana, uma das frutas mais consumidas, possui grande importância mundial. A produção brasileira dessa frutífera apresenta particular distribuição geográfica, já que está presente em todos os Estados da federação. No Estado de Pernambuco, a banana é cultivada em todas as microrregiões, ocupando cerca de 80 mil postos de trabalho permanente no campo, havendo dois pólos distintos de produção de banana: a Zona da Mata e o Vale do São Francisco. Dentre os fatores limitantes para esta cultura, destacam-se as doenças pós-colheita, como a antracnose, causada pelo fungo Colletotrichum musae. Essa doença causa perdas significativas na produção, manifestando-se, principalmente, na fruta em estádio de maturação. Com a finalidade de verificar a diversidade desse fitopatógeno, isolados de C. musae provenientes de campos de produção de banana de três municípios (Vicência, São Vicente Férrer e Machados) do Estado de Pernambuco foram caracterizados quanto à taxa de crescimento micelial diária (TCMD), coloração da colônia, reverso da placa, topografia, presença de setores e de microescleródios, além da morfologia de conídios, testes bioquímicos, patogênicos e moleculares. Os 60 isolados, com base nos caracteres morfológicos de formato e tamanho de conídios, foram identificados como C. musae, com as seguidas medidas morfológicas 9,3-30,2 x 2,6-12,6 μm ( x = 15,0 x 4,9 μm, n = 6000). A maioria dos isolados avaliados apresentaram conídios retos, oblongo, com ápices arredondados. Quanto à TCMD, todos os isolados apresentaram crescimento médio superior a 1,0 cm.dia–1, variando de 1,21 a 1,63 cm.dia–1. Foram encontrados três grupos marcantes de coloração de colônia: branca, creme e salmão, enquanto que a presença de setores variou de zero a oito por isolado. A maioria dos isolados (53) metabolizou o tartarato de amônio como fonte exclusiva de carbono, enquanto que para o ácido cítrico, todos os isolados, com exceção do isolado CMM 3219, não foram capazes de metabolizar essa fonte de carbono. A caracterização patogênica mostrou diferenças significativas para o parâmetro epidemiológico AACPD em frutas inoculadas com ferimento, indicando a existência de variação da agressividade entre os isolados. Para as frutas sem ferimentos e inoculadas, a AACPD não foi estimada para 20 isolados, pois não houve lesões. O dendrograma gerado pela análise de agrupamento UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) das bandas de DNA obtidas com a combinação dos três primers (GTG5, GACA e 820) por ISSR-PCR possibilitou a separação de três grupos de isolados a 62% pelo coeficiente de similaridade de Jaccard. O grupo I foi formado pelos isolados provenientes de Vicência; grupo II, isolados de São Vicente Férrer e grupo III, de Machados. Os resultados sugerem que isolados de C. musae podem ser discriminados quanto à sua origem por apresentarem similaridade genética entre si. Os marcadores ISSR, nesse estudo, parecem ser ferramentas bastante úteis no estudo populacional de C. musae.
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Hematologia, bioquímica e eletroforese de proteínas séricas de tamanduás-bandeiras (Myrmecophaga tridactyla, Linnaeus, 1758) em Cativeiro / Hematology, biochemistry and serum protein electrophoresis of captive giant anteaters (Myrmecophaga tridactyla, Linnaeus, 1758)

Oliveira, Evelyn de 30 August 2016 (has links)
Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-14T16:15:48Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evelyn de Oliveira - 2016.pdf: 6056199 bytes, checksum: af631b615e5b34b3435e2b9dbad44431 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-14T16:33:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evelyn de Oliveira - 2016.pdf: 6056199 bytes, checksum: af631b615e5b34b3435e2b9dbad44431 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-14T16:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Evelyn de Oliveira - 2016.pdf: 6056199 bytes, checksum: af631b615e5b34b3435e2b9dbad44431 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / The giant anteater (Myrmecophaga tridactyla), wild mammal belonging to the superorder of Xenarthras, who originally inhabited Central and South America. It is currently classified as a vulnerable species, primarily due to deforestation, fires and running over accidents. The absence of reference values for laboratory tests increases the difficulty to assess these animals, especially due to the raising number of attendances in veterinary care institutions. Given the importance of such data, the aim of this study was to establish hematological, biochemical and electrophoretic parameters for captive giant anteaters as well to know which are the effects of storage conditions in hematologic samples with two different concentrations of anticoagulants. Therefore, we used 12 clinically healthy captive animals. The samples were collected from the jugular vein into appropriate blood tubes. The blood analysis was carried out immediately after colletion and in others two different times to check the storage effects (M0 - immediate analysis, M2 - 24 hours after collection, M3 - 48 hours post-collection). Biochemical analysis was performed a week after the harvest. Electrophoresis was carried out in agarose gel support. The mean and standard deviation of haematological variables of samples processed soon after harvest were: RBC (2.07 x 106/uL ± 0.40); packed cell volume (38.08 % ± 5.93); hemoglobin (11.33 g/dL ± 2.15); VCM (186.52 fL ± 21.72); MCHC (29.68 g/dL ± 2.56); MCH (55.08 pcg ± 5.94); total leukocytes (8142/uL ± 2,441); neutrophils (5913/uL ± 2168); lymphocytes (1460/uL ± 740); eosinophils (522/uL ± 385); monocytes (247/uL ± 176); platelets (123.458/uL ± 31.362) and total plasma proteins (6.23 g/dL ± 0.49). The mean and standard deviation corresponding to biochemical analysis was: albumin (3.29 g/dL ± 0.33); ALT (15.49 IU/L ± 7.98); amylase (1037.92 IU/L ± 149.04); AST (21.12 IU/L ± 7.50); total cholesterol (62.79 mg/dL ± 20.08); HDL cholesterol (14.73 mg/dL ± 4.98); LDL cholesterol (26.60 mg/dL ± 11.05); VLDL cholesterol (2.14 mg/dL ± 1.06); CK (111.61 IU/L ± 70.16); creatinine (1.05 mg/dL ± 0.37); iron (194.64 µg/dL ± 81.17); GGT (65.18 IU/L ± 54.57); glucose (103.71 mg/dL ± 29.63); globulins (2.76 g/dl ± 0.36); lipase (28.80 IU/L ± 5.11); PST (6.05 g/dL ± 0.56); triglycerides (10.71 mg/dL ± 5.29); urea (53.46 mg/dL ± 18.28). The results of the electrophoresis led to six protein bands which are classified as albumin (2.60 g/dL ± 0.33), alpha-1 (0.33 g/dL ± 0.07), alpha-2 (0, 50 g/dL ± 0.17), beta 1 (0.62 g/dL ± 0.17), beta 2 (1.50 g/dL ± 0.25) and gamma (1.88 g/dL ± 0.30). Therefore, we conclude that there are physiological changes in hematological and biochemical parameters of giant anteaters from different biomes. In these animals the electrophoretic pattern of the technique in agarose gel are six protein bands and the percentage of albumin is greater than the other fractions. This suggests that extrinsic factors such as climate, nutrition and management can affect these variables. Therefore, the results presented in this work can be used as laboratory parameters of healthiness in cerrado captive giant anteaters. / O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla), mamífero silvestre pertencente à superordem dos Xenarthras, é originário das Américas Central e do Sul. Atualmente, está classificado como espécie vulnerável, devido principalmente ao desmatamento, queimadas e atropelamento. A ausência de valores de referência para exames laboratoriais dificulta a avaliação desses animais, especialmente devido ao aumento na casuística de atendimento dessa espécie em instituições veterinárias. Dada à importância de tais dados, objetivou-se com este estudo estabelecer parâmetros hematológicos, bioquímicos e eletroforéticos para tamanduás-bandeiras de cativeiro do cerrado, bem como, saber quais os efeitos de estocagem nas amostras hematológicas nessa espécie em duas concentrações distintas de anticoagulante. Para isso, foram utilizados 12 animais de cativeiro clinicamente saudáveis. O sangue foi colhido da jugular e armazenado em tubos apropriados para cada tipo de exame. Os hemogramas foram realizados logo após as colheitas e em outros dois diferentes momentos para verificação dos efeitos de estocagem (M0 – análise imediata, M2 – 24 horas pós-colheita, M3 – 48 horas pós-colheita). As análises bioquímicas foram executadas uma semana após as colheitas. A eletroforese foi feita no suporte de gel de agarose. A média e o desvio padrão das variáveis hematológicas das amostras processadas logo após a colheita foram: hemácias (2,07 x106/µL ± 0,40); volume globular (38,08 % ± 5,93); hemoglobina (11,33 g/dL ± 2,15); VCM (186,52 fL ± 21,72); CHCM (29,68 g/dL ± 2,56); HCM (55,08 pcg ± 5,94); leucócitos totais (8.142/µL ± 2.441); neutrófilos (5.913/µL ± 2.168); linfócitos (1.460/µL ± 740); eosinófilos (522/µL ± 385); monócitos (247/µL ± 176); plaquetas (123.458/µL ± 31.362) e proteínas plasmáticas totais (6,23 g/dL ± 0,49). As médias e o desvio padrão correspondentes às análises bioquímicas foram: albumina (3,29 g/dL ± 0,33); ALT (15,49 UI/L ± 7,98); amilase (1037,92 UI/L ± 149,04); AST (21,12 UI/L ± 7,50); colesterol total (62,79 mg/dL ± 20,08); colesterol HDL (14,73 mg/dL ± 4,98); colesterol LDL (26,60 mg/dL ± 11,05); colesterol VLDL (2,14 mg/dL ± 1,06); CK (111,61 UI/L ± 70,16); creatinina (1,05 mg/dL ± 0,37); ferro (194,64 µg/dL ± 81,17); GGT (65,18 UI/L ± 54,57); glicose (103,71 mg/dL ± 29,63); globulinas (2,76 g/dL ± 0,36); lipase (28,80 UI/L ± 5,11); PST (6,05 g/dL ± 0,56); triglicerídeos (10,71 mg/dL ± 5,29); ureia (53,46 mg/dL ± 18,28). Os resultados da eletroforese permitiram o fracionamento de seis bandas proteicas, classificadas como albumina (2,60 g/dL ± 0,33), alfa-1 (0,33 g/dL ± 0,07), alfa-2 (0,50 g/dL ± 0,17), beta-1 (0,62 g/dL ± 0,17), beta-2 (1,50 g/dL ± 0,25) e gama (1,88 g/dL ± 0,30). Portanto, é possível concluir que existem variações fisiológicas dos parâmetros hematológicos e bioquímicos tamanduás-bandeiras de biomas diferentes. Nestes animais, o padrão eletroforético em gel de agarose são seis bandas proteicas e a porcentagem de albumina é a maior delas. Este fato sugere que fatores extrínsecos como o clima, a nutrição e o manejo possam interferir nessas variáveis. Por isso, propor valores de referências obtidos de espécies análogas é necessário. Os resultados apresentados pelo presente trabalho podem ser utilizados como parâmetros laboratoriais de higidez em tamanduás-bandeiras de cativeiro do cerrado
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Estudo da toxicidade de garrafada de uso popular / Toxicity study of bottle popular use

Indras, Denise Michelle 07 February 2017 (has links)
Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-03-06T13:43:20Z No. of bitstreams: 2 Denise_Indras2017.pdf: 1849754 bytes, checksum: 50210fe1707e46e56182c87ddece4b5c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-06T13:43:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Denise_Indras2017.pdf: 1849754 bytes, checksum: 50210fe1707e46e56182c87ddece4b5c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The popular use of medicinal plants are common practices and among them is a bottle, a multiple plant base product, which promises to cure various diseases. Many animal studies show in hepatic, renal enzymes and our hematological parameters after administration of plant extracts. The objective of this study was to verify a correlation between the use of multiple medicinal plants with hepatic, renal and hematological found in a patient that made use of bottle, composed of echinacea, graviola, ipé purple, sucupira and cat's claw. The bottle has 4.32 mg.mL-1 of alcohol. Pharmacological and UV/Scan tests were performed, showing some classes of secondary metabolites in plant and bottle species. A bioassay was performed with Artemia salina, and a bottle had mortality up to a concentration of 0.1 mg.mL-1. Cytotoxic effects on erythrocytes revealed hemolytic activity for echinacea, graviola, purple ipe and sucupira. The Escherichia coli test showed sensitivity to graviola, purple ipe, sucupira and cat's claw. In vivo experiment using mice. Two treatments were performed, single dose and 30 days, administering water, alcohol and bottle by gavage. Biochemical, coagulation, hematological and histopathological parameters were evaluated. In the single dose treatment were alterations of uric acid, cholesterol, creatinine, alkaline phosphatase, iron and glucose (p<0.05). Already in the treatment of 30 days were alterations of uric acid, total and indirect bilirubins, creatinine, alkaline phosphatase, glucose, triglycerides, red blood cells and leukocytes (p<0.05), beyond hepatic sinusoidal dilatation. The data showed that the alcohol present in the bottle can alter biochemical, hematological parameters and cause liver damage in rats. The bottle, although not showing alterations in important biochemical and hematological parameters, but had more pronounced hepatic histopathological alterations. / O uso popular de plantas medicinais são práticas comuns e entre elas está a garrafada, produto a base de múltiplas plantas, que promete curar várias doenças. Muitos estudos com animais mostram alterações em enzimas hepáticas, renais e nos parâmetros hematológicos após administração de extratos vegetais. O objetivo deste estudo foi verificar a correlação entre o uso de múltiplas plantas medicinais com as alterações hepáticas, renais e hematológicas encontradas em um paciente que fez uso de garrafada, composta por equinácea, graviola, ipê roxo, sucupira e unha de gato. A garrafada possui 4,32 mg.mL-1 de álcool. Foram realizados testes farmacognósticos e UV/Varredura, mostrando algumas classes de metabólitos secundários nas espécies vegetais e na garrafada. Foi realizado bioensaio com Artemia salina, e a garrafada teve mortalidade até a concentração de 0,1 mg.mL-1. Efeitos citotóxicos em eritrócitos revelaram atividade hemolítica para equinácea, graviola, ipê roxo e sucupira. O teste com Escherichia coli mostrou sensibilidade para graviola, ipê roxo, sucupira e unha de gato. No experimento in vivo utilizando ratos Wistar foram realizados dois tratamentos, dose única e 30 dias, administrando água, álcool e garrafada por gavagem. Foram avaliados parâmetros bioquímicos, de coagulação, hematológicos e histopatológicos. No tratamento com dose única foram encontradas alterações de ácido úrico, colesterol, creatinina, fosfatase alcalina, ferro e glicose (p<0,05). Já no tratamento de 30 dias foram encontradas alterações de ácido úrico, bilirubinas total e indireta, creatinina, fosfatase alcalina, glicose, triglicerídeos, hemácias e leucócitos (p<0,05), além de dilatação sinusoidal hepática. Os dados mostraram que o álcool presente na garrafada pode alterar parâmetros bioquímicos, hematológicos e causar danos ao fígado de ratos. A garrafada, apesar de não mostrar alterações em parâmetros bioquímicos e hematológicos importantes, teve alterações histopatológicas hepáticas mais pronunciadas.
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AVALIAÇÃO DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM JUNDIÁS EXPOSTOS A TRÊS FORMULAÇÕES COMERCIAIS DE GLIFOSATO / EVALUATION OF BIOCHEMICAL PARAMETERS IN SILVER CATFISH EXPOSED TO THREE COMMERCIAL FORMULATIONS OF GLYPHOSATE

Murussi, Camila Rebellatto 16 August 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Due to the increase in food production in the last years, the use of pesticides has also increased significantly. These pesticides pollute aquatic ecosystems and harm non-target organisms, such as fish. Therefore, the aim of this study was to evaluate possible differences of three commercial formulations of glyphosate (Orium®, Roundup Original® and Biocarb®) on changes in biochemical parameters of silver catfish (Rhamdia quelen) exposed to sub-lethal concentrations of 2.5 and 5.0 mg/L for 96 hours. The parameters analyzed were the TBARS levels (thiobarbituric acid reactive species), catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione-S-transferase (GST), glucose, glycogen, lactate, protein, alanine aminotransferase (ALT) and the aspartate aminotransferase (AST). The TBARS levels were increased in the tested concentration of the herbicides. In the muscle, the TBARS levels were decreased in both concentrations of Orium® and higher in 2.5 mg/L of Biocarb®. In the brain, the TBARS levels were higher in all concentrations of the tested herbicides with the exception of 5.0 mg/L of Roundup Original®. The gills TBARS levels were increased in the 2.5 mg/L concentration of Orium® and 5.0 mg/L of Roundup Original®. However in 5.0 mg/L of Orium®, they were decreased. The SOD activity in the liver increased in both concentrations of Orium®, 2.5 mg/L of Roundup Original® and 5.0 mg/L of Biocarb®. CAT activity decreased in all concentrations of the herbicides tested. The GST activity in the liver and gills decreased in 2.5 mg/L of Biocarb®. Yet, in the brain, the GST activity increased in both concentrations of Orium®. In the plasma, the glucose levels increased in both concentrations of Orium® and Biocarb®. The plasma lactate levels increased in 2.5 mg/L of all tested herbicides. Plasma ALT was decreased in 2.5 mg/L of Biocarb®. However, the AST increased in all concentrations of the herbicides tested with the exception of 2.5 mg/L of Biocarb®, which showed decreased levels. In the liver, the glycogen increased and the glucose and hepatic lactate decreased in all concentrations of the tested herbicides. The protein levels in the liver increased in both concentrations of Orium® and decreased in 2.5 mg/L of Biocarb®. In the muscle, the glycogen levels increased in 2.5 mg/L of Orium®, Biocarb® and 5.0 mg/L of Original®. The glucose in the muscle decreased in 5.0 mg/L of Orium® and Roundup Original®. The lactate levels in the muscle increased in 2.5 mg/L of Orium® and decreased in both concentrations of Biocarb®. The protein in the muscle increased in both concentrations of Orium® and decreased in both concentrations of Roundup Original® and Biocarb®. The glucose levels in the brain and gills increased in all concentrations of the products tested with the exception of 5.0 mg/L of Biocarb® in the gills. With these results, we can conclude that although commercial formulations have the same active principle, they act differently in the organism of the fish, causing oxidative damage by various mechanisms, affecting the tissues differently. / Devido ao aumento na produção de alimentos nos últimos anos, o uso de pesticidas tem aumentado significativamente. Estes pesticidas contaminam os ecossistemas aquáticos e prejudicam organismos não-alvos, como os peixes. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar possíveis diferenças em três formulações comerciais de glifosato (Orium®, Roundup Original® e Biocarb®) sobre alterações em parâmetros bioquímicos de jundiás (Rhamdia quelen) expostos a concentrações sub letais (96 h). Os parâmetros analisados foram TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico), catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa-S-transferase (GST), glicose, glicogênio, lactato, proteína, alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST). Os níveis de TBARS no fígado aumentaram em todas as concentrações e herbicidas testados. No músculo os níveis de TBARS diminuíram em ambas as concentrações de Orium® e aumentaram em 2,5 mg/L de Biocarb®. No cérebro os níveis de TBARS aumentaram em todas as concentrações dos herbicidas testados com exceção de 5,0 mg/L de Roundup Original®. Nas brânquias os níveis de TBARS aumentaram em 2,5 de Orium® e 5,0 mg/L de Roundup Original®, enquanto que em 5,0 mg/L de Orium® foram reduzidos. A atividade da SOD em fígado aumentou em ambas as concentrações de Orium®, 2,5 mg/L de Original® e 5,0 mg/L de Biocarb®. A atividade da CAT em fígado diminuiu em todas as concentrações e herbicidas testados. A atividade da GST em fígado e brânquias diminuiu em 2,5 mg/L de Biocarb®, enquanto que em cérebro a atividade da GST aumentou em ambas as concentrações de Orium®. Em plasma, os níveis de glicose aumentaram em ambas as concentrações de Orium® e Biocarb®. Os níveis de lactato plasmático aumentaram na concentração de 2,5 mg/L em todos os herbicidas testados. ALT plasmática diminuiu em 2,5 mg/L de Biocarb®, enquanto que AST aumentou em todas as concentrações dos herbicidas testados com exceção de 2,5 mg/L de Biocarb® que diminuiu. Em fígado, o glicogênio aumentou em todas as concentrações dos herbicidas testados. A glicose e o lactato hepático diminuíram em todas as concentrações dos três herbicidas testados. Os níveis de proteína do fígado aumentaram em ambas as concentrações de Orium® e diminuíram em 2,5 mg/L de Biocarb®. No músculo os níveis de glicogênio aumentaram em 2,5 mg/L de Orium® e Biocarb® e 5,0 mg/L de Roundup Original®. A glicose no músculo diminuiu em 5,0 mg/L de Orium® e Roundup Original®. Os níveis de lactato no músculo aumentaram em 2,5 mg/L de Orium® e diminuíram em ambas as concentrações de Biocarb®. A proteína no músculo aumentou em ambas às concentrações de Orium® e diminuiu em ambas as concentrações de Roundup Original® e Biocarb®. Os níveis de glicose no cérebro e nas brânquias aumentaram em todas as concentrações dos produtos testados com exceção de 5,0 mg/L de Biocarb® em brânquias. Com estes resultados podemos concluir que apesar de as formulações comerciais possuírem o mesmo princípio ativo estas atuam de forma diferente no organismo do peixe e causam danos oxidativos por diversos mecanismos, afetando de forma diferente os tecidos analisados.
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Degradação de parabenos empregando biorreator com membranas e processo oxidativo baseado em persulfato. / Degradation of parabens using membrane bioreactor and persulfate-based oxidative processes.

Palharim, Priscila Hasse 04 April 2019 (has links)
Os produtos de cuidado pessoal (PCP) são substâncias utilizadas para fins de saúde, beleza e higiene, enquadrando-se como contaminantes de caráter emergente. Dentre os PCP estão os parabenos (alquil-p-hidroxibenzoatos), considerados desreguladores endócrinos, encontrados em águas fluviais e efluentes de estações de tratamento em concentrações na faixa de ng L-1 a ?g L-1. A presença destes compostos nessas matrizes reforça a importância de processos alternativos de tratamento de efluentes, como o processo de biorreator com membranas (MBR) e o processo oxidativo avançado (POA) baseado em persulfato (PS) ativado. Aliando um reator biológico e membranas de separação, o MBR destaca-se como alternativa para obtenção de efluentes de boa qualidade, com remoção de contaminantes por sorção, biodegradação e/ou retenção física. Em contrapartida, o POA com persulfato ativado utiliza radicais sulfato como espécie oxidante para degradação de poluentes. Este trabalho objetivou avaliar a remoção de metilparabeno (MeP) e propilparabeno (PrP) pelo processo MBR, bem como estudar a degradação de tais compostos por persulfato ativado com radiação UVA (UVA/PS) ou ferro de valência zero (Fe0/PS). Objetivou-se, outrossim, avaliar a remoção dos parabenos do permeado do MBR por esses POA. Os resultados mostraram que o processo MBR apresentou eficiência média de 95,9% na remoção de MeP e PrP ([parabenos]0 = 0,5 mg L-1) e eficiência média de 85% na remoção de PrP ([PrP]0 = 10 mg L-1). A degradação de MeP e PrP em mistura (50-500 ?g L-1, cada) por UVA/PS exibiu interferência de um parabeno sobre o outro. Assim, optou-se por investigar a degradação apenas de PrP (1 mg L-1) via UVA/PS e Fe0/PS. Para UVA/PS (120 min), quanto maior a irradiância e a concentração inicial de PS, menor o tempo de meia-vida, sendo possível atingir t1/2 mínimo de 37,9 min, com remoção máxima de 77,3%. Para Fe0/PS (15 min), obteve-se um mínimo de t1/2 igual a 0,65 min, para [PS]0 = 5,38 mmol L-1 e [Fe0]0 = 51,6 mg L-1, com porcentagens de degradação superiores a 97% para todos os ensaios realizados. Nesses casos, a identificação de intermediários de degradação do PrP para os processos UVA/PS e Fe0/PS permitiu comprovar a formação de benzoato de propila, benzoato de metila, ácido 4-hidroxibenzoico e MeP. Finalmente, no tratamento do permeado do MBR, obtiveram-se remoções de PrP de 24,5% para UVA/PS (120 min) e de 61,2% para Fe0/PS (90 min), o que se deve ao efeito da matriz complexa. / Personal care products (PCP) are substances used for health, beauty and hygiene purposes, and are classified as emerging contaminants. Parabens (alkyl-p-hydroxybenzoates), included among the PCPs, are considered endocrine disrupters and found in river waters and effluents from wastewater treatment plants, at concentrations ranging from ng L-1 to ?g L-1. The presence of these compounds in environmental matrices reinforces the importance of alternative effluent treatments, such as membrane bioreactors (MBR) and advanced oxidation processes (AOP) based on activated persulfate (PS). The MBR combines a biological reactor and membrane separation membranes, standing out as an alternative to obtain good quality effluents, with contaminants removed by sorption, biodegradation and/or physical retention. In contrast, the AOP based on activated persulfate uses sulfate radicals as oxidizing species for the degradation of pollutants. This work aimed to evaluate the removal of methylparaben (MeP) and propylparaben (PrP) by the MBR process, as well as to investigate the degradation of these compounds by using persulfate activated with UVA radiation (UVA/PS) or zero valence iron (Fe0/PS). The results showed that the MBR process achieved 95.9% MeP and PrP removals ([parabens]0 = 0.5 mg L-1), and 85% PrP removal ([PrP]0 = 10 mg L-1). However, the degradation of MeP and PrP in the mixture (50-500 ?g L-1, each) by the UVA/PS process exhibited the interference of one paraben over the other. It was therefore decided to investigate the degradation of only PrP (1 mg L-1) via UVA/PS and Fe0/PS. For the UVA/PS process (120 min), the higher the irradiance and the initial PS concentration, the shorter the PrP half-life time, with a minimum t1/2 of 37.9 min and maximum removal of 77.3%. For Fe0/PS (15 min), a minimum t1/2 equal to 0.65 min was achieved for [PS]0 = 5.38 mmol L-1 and [Fe0]0 = 51.6 mg L-1, with percent removals higher than 97% for all the experiments performed. In these cases, the identification of PrP degradation intermediates for the UVA/PS and Fe0/PS processes allowed to prove the formation of propyl benzoate, methyl benzoate, 4-hydroxybenzoic acid, and MeP. Finally, regarding the post-treatment of the MBR permeate, lower PrP removals of 24.5% for the UVA/PS process (120 min), and 61.2% for Fe0/PS (90 min) were obtained, which are due to the effect of the complex aqueous matrix.
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Consumo dietético, variantes genéticas e relação com níveis sanguíneos de folato, ácido fólico não metabolizado e homocisteína após a fortificação mandatória de ácido fólico: estudo de base populacional - ISA - Capital / Dietary intake and genetic variants of folate and its relation to folate, unmetabolized folic acid and homocysteine blood concentrations after mandoty folic acid fortification: population based study ISA-Capital

Steluti, Josiane 26 February 2015 (has links)
Introdução: Em diversos países, inclusive no Brasil, a fortificação de alimentos com ácido fólico (AF) foi adotada como política pública de prevenção e combate à deficiência nutricional da vitamina, motivados principalmente pela redução da incidência dos defeitos do tubo neural. No período pós-fortificação observa-se tanto a evolução positiva do consumo e nível sérico da vitamina quanto a diminuição da concentração plasmática de homocisteína, e ainda, o aumento do ácido fólico não metabolizado na maioria desses países. Não se conhece ainda os efeitos biológicos do AFNM, no entanto, considera-se que o AFNM pode ser um fator relevante nas questões de segurança associadas com alto consumo de AF. Objetivo: Avaliar o consumo dietético e nível de folato, homocisteína e ácido fólico não metabolizado após a fortificação mandatória de alimentos com ácido fólico, e a interação com os polimorfismos envolvidos no metabolismo do folato e homocisteína. Metodologia: Os dados foram oriundos do estudo transversal de base populacional ISA Capital 2008 conduzido em uma amostra representativa de residentes do município de São Paulo, de ambos os sexos, e com idade acima de 14 anos. Coletou-se recordatórios alimentares de 24 horas e amostra de sangue em jejum de 12 horas para análises bioquímicas e moleculares. As análises estatísticas foram realizadas no programa STATA®, versão 13.0, com nível de significância de 5 por cento . Resultados: O estudo foi conduzido em 750 indivíduos, sendo 53,1 por cento mulheres e média de idade 40,7 (IC95 por cento 38,8-42,5) anos. A média de consumo e nível de folato foi de 375,8 (IC95 por cento 363,0-388,6) mcg/dia e 13 (IC95 por cento 12,0-13,9) ng/ml, respectivamente. Apenas 1,76 por cento da população apresentou deficiência de folato (<3ng/ml). Foi 5 detectado AFNM em 79,8 por cento da população com média plasmática de 2,4 (IC95 por cento 2,1-2,7) ng/ml. No modelo linear generalizado para previsão de AFNM, nível de folato (p<0,001), idade (p<0,001), tabagismo (p=0,002), raça (p<0,001) e concentrações de B6 (p<0,001), além disso, a interação de homozigotos e heterozigotos para a deleção de pares de base da DHFR e nível de folato (p=0,003) foram efeitos significantes. Tem-se um aumento relativo esperado de 3 por cento no AFNM se aumentarmos em 1 ng/ml o nível de folato médio, considerando fixas as demais variáveis do modelo. Conclusão: Nota-se baixa prevalência da deficiência da vitamina e alta prevalência dos níveis detectáveis de AFNM na população decorrente do aumento do nível de folato. Todavia, apesar do aparente sucesso da fortificação de alimentos com ácido fólico, a comunidade científica não é unânime na aprovação de políticas de fortificação mandatória e do uso indiscriminado de suplementos. Recomenda-se um monitoramento constante para evitar que a população seja exposta a altas doses da vitamina, e consequentemente, efeitos adversos à saúde. / Introduction: Food fortification is an important strategy in public health policy for controlling micronutrient malnutrition, and a major contributory factor in the eradication of micronutrients deficiencies. Motivated by the reduction in the occurrence of neural tube defects, countries worldwide, including Brazil, adopted food fortification with folic acid (FA). Folic acid fortification has increased dietary intakes of folic acid and folate status, but it is also associated with the presence of circulating FA. Although the metabolism and biological effects of circulating of folic acid are not well known, it may be a contributing factor in safety concerns associated with high oral doses of folic acid. Objective: To assess the folate intake and status, homocysteine and circulating FA after mandatory fortification with folic acid, and interaction with polymorphisms involved in 1-carbon metabolism. Material and Methods: Data were from 750 individuals aged > 14 years old who participated of a cross-sectional population-based survey in Sao Paulo City-Brazil. Fasting blood samples and information about food intake based on two measures of 24 hour food recall were collected. All analyses were carried out using STATA (version 13.0) and p-value <.05 was considered to be statistically significant in all tests. Results: Results were from 750 individuals. Women accounted for 53.1 per cent of the population and average age was 40.7 (IC95 per cent 38.8-42.5) years. The overall mean folate intake and folate concentration were 375.8 (95 per cent CI: 363.0-388.6) mcg/day of DFE and 13 (95 per cent CI: 12-14) ng/mL, respectively. Only 1.76 per cent of 7 population had folate deficiency (<3 ng/mL). Circulating FA was detected in 79.8 per cent of the population with a mean concentration of 2.4 (95 per cent CI: 2.1-2.7) pmol/ml. Effects of total folate concentration (p<0.001), age (p<0.001), current smoker (p=0.002), race (p<0.000) and vitamin B6 (p<0.001) as well as interaction between folate concentration and 19-base pair deletion polymorphism in DHFR (p=0.003) were found in the model to predict the circulating FA. An increase of one ng/mL in folate concentrate was associated with increased of 3 per cent in circulating FA. Conclusions: There is low prevalence of folate deficiency and high prevalence of detectable levels of circulating FA the population. The fortification effectively increased folate status and folic acid intake, and had a notable influence on rankings of food contributors of folate intake. Although the success of folic acid fortification was observed in many countries, the scientific community is not unanimous in approval of mandatory fortification policies and the indiscriminate use of supplements. The monitoring is recommended to guarantee the safety of exposure to folic acid, and avoiding adverse health effects.
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"Avaliação metabólica nutricional de obesas no basal e após tratamento com dieta hipocalórica e treinamento em circuito ou caminhada" / "Nutritional metabolic evaluation of obese women in basal state and post treatment with hipocaloric diet and circuit weigth training or jogging"

Fett, Carlos Alexandre 14 February 2005 (has links)
Propósito: Observar obesas pré e pós-dieta hipocalórica moderada, mais treinamento em circuito ou caminhada. quanto a variáveis nutricionais. Métodos: Grupos: treinamento em circuito, CIRC, n = 26, índice de massa corporal (IMC, kg/m2) = 33,2 ± 7,9 (Média±desvio padrão); idade = 32,6 ± 9,7 anos; e treinamento em caminhada, CAM, n = 24, IMC = 29,2±3,4; idade = 38,8 ± 10,5 anos. Avaliações: a composição corporal, coleta de urina e sangue, calorimetria indireta e testes físicos eram obtidos no inicio (M1) e final (M2) do estudo. Treinamento: mês 1 = 1 h x 3 d/semana; e mês 2 = 1 h x 4 d/semana. Dieta: foi adaptada do registro alimentar de uma semana, ajustado ao gasto energético de repouso (GER) e balanceada, com a seguinte proporção: 20% de proteínas; 20% de gorduras; e 60% de carbohidratos. Resultados: Pré-intervenção: 76% tinham algum familiar obeso; havia sintomatologia indicativa de: 60% ansiosas, 12% depressivas, 34% compulsivas e 32% distúrbio do sono, avaliadas por questionário no exame clínico. Foram encontrados níveis alterados de colesterol total (CT, mg/dL), e ou frações em 22% das sujeitas. O peso, IMC, o índice abdômem/quadril (IAQ), a soma de oito pregas cutâneas (SP8) se correlacionaram significativamente a quatro variáveis bioquímicas, e a circunferência do abdômen (CAb), e o percentual de gordura por antropometria (%GAntro) a cinco. Intervenção: O peso, IMC, %GAntro, endomorfia, massa gorda por bioimpedância (MGBia) e percentual de gordura por bioimpedância (%GBia), foram reduzidos significativamente nos dois grupos. O CIRC melhorou significativamente em todos (seis) e o CAM em três testes físicos. O CIRC teve significância para: ¯glicose (Gli), ¯AU, ¯CT, ¯Tg (todos em mg/dL), ­glóbulos vermelhos (GV) (mm3) e ­hematócrito (Ht) (%); e o CAM para: ¯Gli, ¯AU, ¯HDL, ­CT/HDL, ­GV, ­Ht. O GER não teve diferença em ambos os grupos. Conclusões: Pré-intervenção: Os dados antropometricos indicam boa correlação com os fatores bioquímicos de risco, mas não tem uma tendência constante. A taxa CT/HDL apresentou correlação com todas as medidas antropométircas e a Gli com nenhuma. A obesidade destas mulheres parece ter múltiplos fatores e o estilo de vida papel determinante. Intervenção: A atividade física per se foi importante para causar modificações nutricionais e da composição corporal nestas obesas. O CIRC teve melhor associação com o incremento da performance física e dados bioquímicos sanguineos e ambos os grupos preservaram o GER. / Purpose: To observe obese women before and after a low-calorie diet plus circuit training or jogging regarding nutritional parameters. Methods: Groups: circuit training, CIRC, n = 26, body mass index (BMI, kg/m2) = 33.2 ± 7.9 (Mean±SD), age = 32.6 ± 9.7 years; and jogging training, JOGG, n = 24, BMI = 29.2 ± 3.4; age = 38.8 ± 10.5 years. Evaluations: body composition, collection of urine and blood samples, indirect calorimetry and physical tests were performed at the beginning (M1) and at the end (M2) of the study. Training: month one: 1 h x 3 d/week; month two: 1 h x 4 d/week. Diet: was adapted on the basis of a one week feeding record feed and adjusted to the resting metabolic rate (RMR) measured by indirect calorimetry, with the following proportion: 20% protein, 20% fat; and 60% carbohydrate. Results: Pre-intervention: 76% had one or more obese family members; there were symptoms indicating that 60% were anxious, 12% depressive, 34% compulsive, and 32% had sleep disorders, evaluated by a questionnaire during clinical examination. Altered levels of total cholesterol (TC) and/or fractions were found in 22% of the subjects. Weight (W), BMI, waist/hip ratio (WHR), and the sum of eight skin folds (8SF), were significantly correlated with four biochemistry variables, and abdominal circumference (AbC), and anthropometric fat percentage (%FAnthro) were correlated with five. Intervention: Weight, BMI, %FAnthro, endomorphy, body fat mass by bioimpedance (BFMBia) and percent body fat by bioimpedance (%FBia) were reduced in both groups. CIRC significantly increased performance in all (six) tests and the JOGG in three physical tests. CIRC showed significant differences for: ¯glucose (Glu), ¯UA, ¯TC (TC), ¯Tg (all in mg/dL), ­red blood cells (RBC) (mm3) and ­hematocrit (Ht) (%); and JOGG for: ¯Glu, ¯UA, ¯HDL, ­CT/HDL, ­RBC, ­Ht. The RMR was not significantly reduced in both groups. Conclusions: Pre-intervention: Anthropometric data indicated a good correlation with biochemical factors, but did not show a constant tendency. CT/HDL showed correlation with all anthropometric measurements and Glu with none. The obesity of these women appears to have multiple factors, with life style playing a determinant role. Intervention: Physical activities were determined to favor body composition, reduced weight and blood markers. CIRC were better in terms of physical performance and blood markers. Both types of training were sufficient to prevent a fall of RMR.
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Efeito do Bacillus thuringiensis na dieta (degradabilidade ruminal e digestibilidade aparente) e no desempenho de ovinos / Effect of Bacillus thuringiensis in the diet (ruminal degradability and apparent digestibility) and performance of sheep

Campos, Fernanda Cristina de 28 March 2014 (has links)
Com este estudo, objetivou-se avaliar o efeito de estirpes de Bacillus thuringiensis (Bt) na degradabilidade e digestibilidade da dieta, emissão de gases, microbiota ruminal, parâmetros sanguíneos e desempenho de ovinos. O estudo foi dividido em 2 experimentos: ensaio in vitro de produção de gases para a avaliação de 6 diferentes estirpes de Bt (907, 1192, 2036, 2493, 2496 e S1185) e ensaio in vivo com a estirpe selecionada 2036 para investigação de possíveis interferências na digestão e saúde dos animais. A simulação do ambiente ruminal foi realizada em garrafas de vidro incubadas a 39 oC por 24 h. O delineamento foi o inteiramente casualizado com 7 tratamentos (Sem Bt (controle), Bt 907, Bt 1192, Bt 2036, Bt 2493, Bt 2496 e Bt S1185) com 4 repetições em duplicata. O processo fermentativo foi avaliado pelos resultados de matéria seca degradada (MSD), matéria orgânica degradada (MOD), produção líquida de gases totais, produção líquida de metano e eficiência da conversão de metano. Produtos da fermentação (pH, nitrogênio amoniacal (N-NH3) e ácidos graxos de cadeia curta (AGCC)) e micro-organismos ruminais (Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, fungos anaeróbicos, arqueas metanogênicas e protozoários) também foram estudados. Apenas a estirpe Bt 907 reduziu a MSD e MOD em relação ao controle, com manutenção da população de F. succinogenes, pois as demais estirpes reduziram a população desta bactéria. No ensaio in vivo 20 cordeiros Santa Inês com 3 meses de idade e 18 ± 3,5 kg PV foram utilizados e divididos em 2 grupos: 10 animais tratados com 2,5x106 esporos de Bt 2036 por kg PV/d e 10 animais não tratados (controle). Estes foram alojados em baias individuais em delineamento inteiramente casualizado e receberam dieta composta de feno de capim Tifton-85 (Cynodon spp.) ad libitum e 300 g/animal/d de concentrado, que foi ajustado de acordo com as exigências de crescimento. O período experimental in vivo teve duração de 63 dias, dos quais 53 compreendeu o teste de desempenho dos animais, com aferição do consumo 3 vezes na semana e pesagem quinzenal, e os 10 dias subsequentes destinou-se aos ensaios de digestibilidade aparente, balanço de nitrogênio, síntese de proteína microbiana e emissão de metano entérico. Durante todo o experimento, coletas se sangue foram realizadas quinzenalmente a fim de avaliar os parâmetros hematológicos (hemácias, hemoglobina, hematócrito e leucócitos) e bioquímicos (glicose, proteínas totais, albumina, aspartato aminotransferase, ureia e creatinina) dos animais para o diagnóstico de possível intoxicação. Características da fermentação ruminal também foram investigadas em 3 momentos (início, meio e fim do experimento) sobre as variáveis pH, N-NH3, AGCC, abundância relativa das espécies F. succinogenes, R. flavefaciens, populações de arqueas metanogênicas, fungos anaeróbicos e contagem de protozoários, por meio de coletas de líquido ruminal. Não houve influência da estirpe sobre as variáveis estudadas. Conclui-se que na avaliação in vitro apenas a estirpe Bt 907 reduziu a MSD e MOD com manutenção da população F. succinogenes e no experimento in vivo a inclusão de esporos de Bt 2036 na dieta não afetou de forma negativa o desempenho e nem a saúde dos ovinos / The objective of present study was to evaluate the effect of Bacillus thuringiensis (Bt) strains on degradability and digestibility of the diet, gas production, ruminal fermentation, blood parameters and performance in sheep. The study was divided into 2 experiments: in vitro gas production to evaluate six different Bt strains (907, 1192, 2036, 2493, 2496 and S1185) and in vivo assay with the selected strain (Bt 2036) to investigate possible interference in digestion and health of animals. The rumen simulation was performed in glass bottles incubated at 39 °C for 24 h. A completely randomized design with 7 treatments (No Bt (control), Bt 907, Bt 1192, Bt 2036, Bt 2493, Bt 2496 and Bt S1185) was used, with 4 replications in duplicate. The fermentation process was evaluated using dry matter degradability (DMD), organic matter degradability (OMD), net gas production, methane output and conversion efficiency. Fermentation products (pH, ammonia nitrogen (N-NH3), short chain fatty acids (SCFA)) and ruminal microorganisms (Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, anaerobic fungi, methanogenic archaea and protozoa) were also studied. Only strain Bt 907 reduced DMD and OMD in relation to the control and F. succinogenes populations were maintained, whereas other strains of this bacterium population were reduced. An in vivo assay using 20 Santa Ines lambs at 3 months of age and 18 ± 3.5 kg BW was carried out. These animals were divided into 2 groups: 10 animals treated with 2.5x106 spores of Bt 2036 per kg BW/d and 10 untreated animals (control). These were housed in individual pens in a completely randomized design and were fed a diet of Tifton-85 (Cynodon spp.) hay ad libitum and 300 g/animal/d of concentrate, which was adjusted according to animal growth. The in vivo experimental period lasted 63 days, of which 53 included the performance test of the animals, with measurement of feed consumption three times a week and fortnightly weighing. The final 10 days was devoted to tests of digestibility, nitrogen balance, microbial protein synthesis and enteric methane emission. Throughout the experiment, blood was collected fortnightly to assess hematological parameters (erythrocytes, hemoglobin, packed cell volume and leukocytes) and biochemical profiles such as (Glucose, total protein, albumin, aspartate aminotransferase, urea and creatinine) for the diagnosis of possible intoxication. Ruminal fermentation characteristics were investigated at three times (Initial, middle and end of the experiment) using pH, N-NH3, SCFA, microorganism population size (such as F. succinogenes, R. flavefaciens, methanogenic archaea, anaerobic fungi and protozoa) through ruminal fluid collections. There was no influence of Bt 2036 on ruminal fermentation characteristics. It is concluded that, for the in vitro evaluation, only strain Bt 907 reduced DMD and OMD, with F. succinogenes population being maintained and for the in vivo studies, the inclusion of Bt 2036 spores in the diet did not negatively affect health and performance of lambs
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Estudo da cinética de crescimento de células de inseto Sf21 e infecção por baculovírus Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) para a produção de bioinseticida. / Kinect study of Sf21 insect cells growth and infection by Anticarsia gemmatalis (agMNPV) baculovirus for bioinsecticicle production.

Del Padre, Guilherme Augusto 04 December 2015 (has links)
O interesse em estudar o cultivo das células de inseto está relacionado entre outros usos a sua utilização na produção de biopesticidas. Há muitos anos os pesticidas químicos vêm contribuindo no controle de pragas na agricultura. Entretanto, o uso desses compostos prolongadamente tem resultado na seleção de insetos resistentes e em poluição ambiental. Diante disso, torna-se necessário o desenvolvimento e aprimoramento dos bioinseticidas. No Brasil, o baculovírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) foi o principal agente de controle biológico da praga da soja Anticarsia gemmatalis. Assim, estudos que viabilizem a produção desses vírus in vitro possibilitariam uma produção mais controlada e de melhor qualidade desses biopesticidas. Neste trabalho, investigou-se a suscetibilidade à infecção por AgMNPV de diferentes linhagens celulares de Sf21 e o crescimento dessas células em diferentes sistemas: cultivos em schotts, em spinner e em biorreator, variando-se a idade do inóculo (IA) e a concentração celular inicial (X0). Constatou-se variação no perfil de infecção das linhagens, sendo as linhagens mais adequadas para a produção de bioinseticida as linhagens de Sf21 denominadas EMBRAPA, UFRN e GibcoG, uma vez que estas apresentaram mais do que 40 % das células com poliedros em cultivos em suspensão, enquanto a linhagem denominada GibcoSF teve menos de 2 % das células infectadas com poliedros. Ao se estudar o efeito do número de subcultivos na morfologia e crescimento celular, foi averiguado um aumento no diâmetro de 10 % e no volume de 26 % das células UFRN em relação às células GibcoSF. Além disso, o crescimento das células UFRN foi 49% menor do que das células GibcoSF. Quando realizado o Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) para se analisar o efeito da IA e a X0 na taxa de crescimento específica máxima (?max) e na concentração celular máxima (Xvmax) em cultivos em schott com células UFRN, obteve-se um modelo empírico. Quando analisadas as variáveis IA e X0 separadamente, não foram encontradas diferenças significativas para as respostas Xvmax e ?max em relação a X0. Para a IA, entretanto, obteve-se os resultados mais satisfatórios para os inóculos com IA de 72 e 96 horas: Xvmax de 5,97.106 cel/mL e 5,99.106 cel/mL, e ?max de 0,70 dia-1 e 0,63 dia-1, respectivamente. Nos cultivos em spinner com células UFRN, foi observada a formação de grumos, o que levou a Xvmax de 2,00.106 cel/mL. No cultivo em biorreator com células UFRN, foi obtido um Xvmax de 6,21.106 cel/mL, ?max de 0,70 dia-1, Qo2 na fase exponencial de 67,3 ± 3,6 .10-18 molO2/cel/s, rendimento de glicose em célula igual a 1,0.109 cel/g de glicose e um rendimento de glutamina em células de 3,0.109 cel/mL. Comprovou-se, portanto, a existência de alterações na infecção entre diferentes linhagens de Sf21; a importância do estado fisiológico da célula nos subcultivos, a ocorrência de mudanças no crescimento celular de acordo com os sistemas de cultivo e o efeito do número de subcultivos na morfologia e crescimento de células Sf21. / Investigate the cultivation of insect cells is related to its use in the production of biopesticides among others. For many years, chemical pesticides have contributed in pest control in agriculture. However, the use of these compounds for prolonged periods has resulted in the selection of resistant insects and environmental pollution. Therefore, it is necessary the development and improvement of biopesticides. In Brazil, the baculovirus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) is the main biological control agent of the plague of soy Anticarsia gemmatalis. Thus, studies that enhance the production of these viruses in vitro would allow a more controlled production and better quality of biopesticides. In the present research, it was investigated the susceptibility of different Sf21 cell lines to infection by AgMNPV and the growth of these cells in different systems: cultivations in schotts, in spinner flasks and in bioreactor, varying the inoculum age (IA) and initial cell concentration (X0). Variation was observed in the lineage\'s infection profile. The most appropriate lineage for the production of biopesticida where the ones denominated EMBRAPA, UFRN and GibcoG, since these showed more than 40% of the infected cells with polyhedra, while the one denominated GibcoSF had less than 2% of the infected cells with polyhedra. When studying the effect of the number of subcultures in morphology and in cell growth, an increase of 10% of the diameter and 26% in the volume of the UFRN cells was observed compared to the GibcoSF cells. Moreover, the cell growth of UFRN was 49% lower than the GibcoSF\'s. When performed the Rotational Central Composite Design (RCCD) to analyze the effect of IA and X0, the maximum specific growth rate (?max) and the maximum cell concentration (Xvmax) in cultures in schott with UFRN cells, it was obtained an empirical model. When the IA and X0 were separately analysed, it was not found significant differences for Xvmax and ?max in relation to X0. For IA, however, it was achieved the most satisfactory results for inocula with IA of 72 and 96 hours: Xvmax equals to 5.97x106 cells/mL and to 5.99x106 cells/ml, and ?max of 0.70 day-1 and 0.63 day-1, respectively. Cultures in spinner with UFRN cells clumped what led to Xvmax of 2.00x106 cells/mL. In cultivation in bioreactor with UFRN cells, was reached Xvmax of 6.21x106 cells/mL, ?max of 0.70 day-1, Qo2 in the exponential phase of 67.3 ± 3.6x10-18 molO2/cell/s, glucose to the cell yield equal to 1.0x109 cell/g of glucose and glutamine to cell yield of 3.0x109 cell/g of glutamine. It was shown, therefore, the existence of the infection alterations among different lineages of Sf21, the importance of the physiological state of the cell for the subcultivation, the occurrence of changes in cell growth according to the cultivation systems and the effect of the number of subcultivation in morphology and in growth of Sf21 cells.

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