Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451400.pdf: 16861193 bytes, checksum: 8e59e1dc262f6d66b6ff62e7eca281b9 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / Human tuberculosis (TB) is a major global health threat. The disease s increasing prevalence, coupled with the emergence of drug-resistant strains and the devastating effects of co-infection with human immunodeficiency virus (HIV) indicate an urgent need for the development of new and more efficient drugs to combat the disease's causative agent, Mycobacterium tuberculosis. Global health authorities have also begun to recognize the need for drugs that can kill the mycobacteria in its different physiological states including but not limited to latent TB infection. A more comprehensive understanding of the bacilli's nucleotide metabolic pathways, in particular purine and pyrimidine salvage pathways, could aid in the development of new therapeutic strategies to reduce the incidence of TB worldwide. Nucleoside hydrolase catalyzes the irreversible hydrolysis of N-glycosidic bond of ribonucleosides, forming α-D-ribose and the corresponding base. This work describes the amplification, cloning, expression and purification of the iunH-encoding purine nucleoside hydrolase from M. tuberculosis (MtIAGU-NH). Results from steadystate kinetic experiments indicate that MtIAGU-NH has broad substrate specificity, accepting inosine, adenosine, guanosine, and uridine as substrates. Kinetics analysis utilizing fluorescence spectroscopy of ribose binding to MtIAGU-NH suggests that prior to ligand association there are two pre-existing forms of the enzyme. We determined the intracellular concentrations of inosine, uridine, hypoxanthine, and uracil as well as the reaction s thermodynamic parameters. Thermodynamic activation parameters (Ea, ΔG#, ΔS#, ΔH#) for the MtIAGU-NH-catalyzed chemical reaction, along with results from mass spectrometry, isothermal titration calorimetry (ITC), pH-rate profile experiments, multiple sequence alignment, and molecular docking experiments are also presented. Knockout experiments of the iunH gene indicate that this gene is not essential for the growth of M. tuberculosis H37Rv underutilized experimental conditions. The data presented here contribute to our understanding of MtIAGU-NH, providing a solid basis for the development of efficient prophylactic and therapeutic strategies to reduce the global incidence of TB. / A tuberculose humana (TB) ? considerada uma amea?a ? sa?de global. O aumento na preval?ncia da doen?a, a emerg?ncia de cepas resistentes e a coinfec??o com o v?rus da imunodefici?ncia humana levaram ? urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas mais eficientes para o combate do agente causativo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Al?m disso, h? a necessidade de novas drogas contra a micobact?ria nos seus diferentes estados fisiol?gicos, incluindo a TB latente. Um maior entendimento sobre as vias metab?licas de nucleot?deos do bacilo da TB, em particular as vias de salvamento de purinas e pirimidinas, levariam ao desenvolvimento de novas estrat?gias terap?uticas para controlar a incid?ncia global de TB. A hidrolase de nucleos?deos catalisa a hidr?lise irrevers?vel da liga??o N-glicos?dica de ribonucleos?deos, dando origem ? α-D-ribose e sua base livre correspondente. Este trabalho descreve a amplifica??o e clonagem do gene iunH, e a express?o e purifica??o da enzima recombinante hidrolase de nucleos?deos pur?nicos de M. tuberculosis (MtIAGU-NH). Os resultados de cin?tica no estado estacion?rio mostram que a MtIAGU-NH possui uma ampla especificidade pelos substratos, utilizando inosina, adenosina, guanosina e uridina como substratos. As medidas cin?ticas da liga??o da ribose ? MtIAGU-NH por espectroscopia fluorim?trica sugerem a exist?ncia de duas formas da enzima em equil?brio, relacionadas ? associa??o ao ligante. As concentra??es intracelulares de inosina, uridina, hipoxantina e uracil foram determinadas e os par?metros termodin?micos, estimados. Os par?metros termodin?micos de ativa??o (Ea, ΔG#, ΔS#, ΔH#) para a rea??o qu?mica catalisada pela MtIAGU-NH, al?m dos resultados de espectrometria de massa, calorimetria de titula??o isot?rmica, experimento de perfil de pH, alinhamento de m?ltiplas sequ?ncias e experimentos de docagem molecular tamb?m s?o apresentados neste trabalho. O nocaute do gene iunH mostrou que este n?o ? essencial para o crescimento do bacilo M. tuberculosis H37Rv nas condi??es experimentais empregadas. Os resultados aqui descritos dever?o ser ?teis para um melhor entendimento sobre a enzima MtIAGU-NH, fornecendo bases s?lidas para o desenvolvimento de estrat?gias terap?uticas e preventivas para diminuir a incid?ncia global da TB.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451624.pdf: 961299 bytes, checksum: 1cc816e2a5732637ef64d561c9f1cccc (MD5) Previous issue date: 2013-09-24 / Introduction : Oxaliplatin is an antineoplastic agent widely used in the treatment of some tumors. It is a third-generation platinum compound developed with the purpose of overcoming the limitations of toxicity, tumor resistance and poor oral bioavailability associated to cisplatin administration. Oxaliplatin-associated neurotoxicity represents the main dose limiting and there is not suitable treatment. Increasing doses of oxaliplatin can leed to the development of mechanical allodynia, cold sensitivity and peripheral sensory neuropathy, with increase of symptoms. Furthermore, despite its usefulness, chemotherapy with oxaliplatin increases the rate of developing hepatic damages together with inflammatory activity. This might be termed chemotherapy-associated steatohepatitis (CASH), a most severe form of non-alcoholic fatty liver disease. Therefore, in the presentstudy, we aimed to compare the effect of antioxidant compounds on simultaneous development of oxaliplatin-induced hepato and neurotoxicity in mice. Methods : The Balb/c mice were treated with doses of oxaliplatin (OXA) for 6 weeks, 10 mg/kg, intraperitoneally (i.p), resulting in mechanical allodynia, and hepatic steatosis. We administered antioxidants compounds such as rutin (RUT) (20 mg/Kg/d), resveratrol (RVS) (100 mg/Kg/d), quercetin (QT) (20 mg/Kg/d) and nanoquerecetin (NQT) (20 mg/Kg/d) daily by gavageto Balb/c. N-acetyl-cysteine was used as control. Euthanasiaoccurred onday 43after treatment. We evaluated mechanical nociceptive threshold, ALT/AST, histopathological analysisand MPOactivity. Statistical analyses were made one way ANOVA, followed by Bonferroni post hoc test. Results : The treatments with RSV, RUT or NQT were able to prevent mechanical allodynia when compared to OXA group. Regarding the effect on steatohepatitis, resveratrol, quercetin and quercetin nanoemulsion almost completely reversed the mean liver weight increase by OXA. In accordance with these previous data, histological evaluation depicted attenuation all features of hepatic steatosis evaluated in resveratrol, rutin, quercetin and quercetin nanoemulsion groups. On the other hand, only quercetin and quercetin nanoemulsion treatments were able to reduce neutrophils migration measured by MPO activity. Conclusion : These results suggest that the use of compounds such as resveratrol, rutin, quercetin and quercetin nanoemulsion can beeffective to avoid oxaliplatin-inducing hepato and neurotoxicity in a rodent model. / Introdu??o : A oxaliplatina ? um agente antineopl?sico e tem sido amplamenteutilizado no tratamento de v?rios tumores. ? um composto derivado da platina de terceira gera??o desenvolvido com o prop?sito de ultrapassar as limita??es da toxicidade, a resist?ncia do tumor e a fraca biodisponibilidade oral associada ? administra??o decisplatina. Sintomas de neurotoxicidade est?o associados ao uso da oxaliplatina e n?o existe tratamento adequado. Doses crescentes de oxaliplatina podem levar ao desenvolvimento de sensibilidade a frio e neuropatia sensorial perif?rica, e a um aumento da intensidade dos sintomas. Al?m disso, apesar da sua utilidade, a quimioterapia aumenta a taxa de desenvolvimento de danos hep?ticos com atividade inflamat?ria. Esta manifesta??o pode ser chamada de esteato-hepatite associada ? quimioterapia (CASH), uma forma mais grave da doen?a hep?tica gordurosa n?o alco?lica. Deste modo, o presente estudo, objetivou comparar o efeito de alguns compostos antioxidantes no desenvolvimento simult?neo da hepato e neurotoxicidade induzida pela oxaliplatina em camundungos. M?todos : Os camundongos Balb/c foram tratados intraperitonealmente (i.p.), com doses de 10 mg/kg de oxaliplatina durante 6 semanas, resultando em anodinia mec?nica, e indu??o de esteatose hep?tica. Os compostos rutina (RUT) (20 mg/Kg/d), resveratrol (RSV) (100 mg/Kg/dia), quercetina (QT) (20 mg/Kg/dia) e nanoquerecetina (NQT) (20 mg/Kg/dia), foram administrados diariamente por gavagem aos camundongos. N-acetilciste?na foi utilizada como controle. A eutan?sia ocorreu no 43? dia ap?s o tratamento. Foram analisadas a nocicep??o mec?nica, as aminotransferases ALT/AST, foi realizada avalia??o histopatol?gica e da atividade da mieloperoxidase. A an?lise estat?stica foi realizada por ANOVA de uma via seguida do teste de Bonferroni. Resultados : Os tratamentos comresveratrol, rutinaouquercetina em nanoemuls?oforam capazes de impedira alodiniamec?nica, quandocomparados com o grupotratado com oxaliplatina. Em rela??o aoefeito sobre aesteato-hepatite, os tratamentos com resveratrol, quercetina e quercetina em nanoemuls?oreverteramsignificativamenteoaumento depeso m?dio do f?gadoinduzido pela oxaliplatina. Corroborando com estes dados, a avalia??ohistol?gicamostrou uma atenua??o em todas as caracter?sticas deesteatose hep?tica avaliados nos grupostratados com resveratrol, rutina, quercetina e quercetina em nanoemuls?o, apresentando caracter?sticas semelhantes ao controle positivo com N-acetilciste?na. Por outrolado,apenasos tratamentoscom quercetina e quercetina em nanoemuls?o foram capazes dereduzir a migra??ode neutr?filosmedidapela atividadede mieloperoxidase. Conclus?o : Os resultados sugerem que o uso dos compostos resveratrol, rutina, quercetina e quercetina em nanoemuls?opodem se alternativas efetivas para o tratamento

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451784.pdf: 974193 bytes, checksum: b53f42e8acb1653e7c655d1d1345a38b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Annexin V is an endogenous human protein Ca+2 dependent, with a molecular weight of 35.8 kDa, widely distributed intracellularly, with very high concentrations in the placenta and lower concentrations in endothelial cells, kidneys, myocardium, skeletal muscle, skin, red cells, platelets and monocytes. Annexin V binds preferably to phosphatidylserine, a phospholipid commonly present on inner leaflet of lipid bilayer, which during cell apoptosis is translocated to outer leaflet of cell membrane. Despite of Annexin V is a relatively large protein, it was shown early on that the protein can be internalized at sites of ischemic injury both in the heart and in the brain and cross the intact blood-brain barrier, being increasingly used as a tool to detect apoptosis in several diseases such as Alzheimer and Ischemia and in drug. Therefore, production of recombinant human Annexin V using recombinant DNA technique along with High Cell Density Culture and protein purification becomes applicable to commercialize it in Brazil, increasing and facilitating the access of pharmaceutical industries and research laboratories in purchase product. We developed a protocol to produce recombinant human annexin V in large scale, in which approximately 20 mg of recombinant protein was yielded from 3 g of E. coliBL21(DE3) wet cells. N-terminal amino acid sequencing and massspectrometry analysis provided evidence for the identity and purity of therecombinant protein, as well as an apoptosis/necrosis in vitro detectionkit produced performed similarities with an imported commercialized kit in Brazil. / A Anexina V ? uma prote?na humana end?gena dependente de Ca+2, com peso molecular de 35,8 kDa, amplamente distribu?da intracelularmente em altas concentra??es na placenta e em concentra??es mais baixas nas c?lulas endoteliais, renais, mioc?rdicas, epiteliais, esquel?ticas musculares, eritr?citos, plaquetas e mon?citos. Apresenta como principal caracter?stica a capacidade de se ligar ? fosfatidilserina, um fosfolip?deo presente na camada interna da bicamada lip?dica, que durante a apoptose celular ? translocada para a camada externa da membrana celular. Apesar de ser uma prote?na de tamanho relativamente grande, a Anexina V apresentou a capacidade de penetrar em s?tios de inj?ria isqu?mica tanto mioc?rdica quanto cerebral, atravessando a Barreira Hemato-Encef?lica, sendo cada vez mais utilizada para dete??o de apoptose em diversas doen?as como Alzheimer e Isquemia e em monitoramento de drogas antic?ncer. Por esses motivos, se torna relevante a produ??o da prote?na Anexina V humana atrav?s da t?cnica do DNA recombinante em larga escala para que possa ser comercializada no Brasil, aumentando e facilitando o acesso de laborat?rios de pesquisa e ind?strias farmac?uticas na aquisi??o deste produto. Desenvolvemos um protocolo para cultivoem biorreator de grandes quantidades de Anexina V recombinante, no qual aproximadamente 20 mg de prote?na recombinante podem ser obtidos a partir de 3 g de c?lula ?mida de E. coli BL21(DE3). As an?lises porsequenciamento N-terminal de amino?cidos e espectrometria de massas proveram evid?ncias para a identidade e pureza da prote?na recombinante, assim como um desenvolvimento de um kit para marca??o de apoptose in vitro apresentou muita semelhan?a com outro kit importado j? comercializado no Brasil.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451788.pdf: 1287455 bytes, checksum: d1990d71c198ca3db981a675db0e192b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is a major hematopoietic cytokine involved in the immune defense against infectious agents, stimulating and regulating the proliferation, survival and differentiation of neutrophils precursor cells in the bone marrow. The G-CSF molecule has a 174 amino acids sequence, with a molecular weight of approximately 18.8 kDa. As a strategy for neutropenia prevention, G-CSF (or filgrastim) has been successfully used in cancer patients whose treatment requires high doses of chemotherapy, in both adults and children. Moreover, this biopharmaceutical may be used to strengthen the immune system in patients with HIV, pneumonia, infections resulting from diabetes, leukemia and febrile neutropenia. Currently, filgrastim is not produced in Brazil, which obligates the government to import this medicine. Due to its wide clinical application, the large scale production of G-CSF is required to supply the demand of national market. In this work, a protocol to obtain this protein was developed using overexpression and cultivation in a bioreactor, solubilization and purification of recombinant G-CSF. The protein was expressed in Escherichia coli host cells C41(DE3) cultures grown in bioreactor using a fed-batch strategy. The expression of the recombinant protein was induced by IPTG. A linear ascending feeding strategy permitted high plasmid stability, low accumulation of acetate in the culture medium, a biomass of approximately 31 g/ L and high expression levels of the protein in the form of inclusion bodies which were solubilized using 2 M urea and alkaline pH. The recombinant protein was purified and yielded approximately 1.22 mg of homogeneous recombinant protein per gram of wet cells, corresponding to a volumetric yield of 151.5 mg of rhG-CSF per liter of culture medium. A mass spectrometry analysis was performed, confirming the identity of the recombinant protein. Our work shows a simple and effective strategy to obtain recombinant hG-CSF, stimulating and encouraging a future production of a national biosimilar. / O fator estimulador de col?nias de granul?citos (G-CSF) ? uma das principais citocinas hematopoi?ticas envolvidas na defesa do sistema imune contra agentes infecciosos, estimulando e regulando a prolifera??o, sobreviv?ncia e diferencia??o das c?lulas precursoras de neutr?filos na medula ?ssea. ? uma mol?cula que possui uma sequ?ncia de 174 amino?cidos, com peso molecular de aproximadamente 18,8 kDa. Como estrat?gia de preven??o da neutropenia, o G-CSF (ou filgrastima) ? utilizado clinicamente com sucesso em pacientes com c?ncer, cujo tratamento requer altas doses de quimioterapia, tanto em adultos como em crian?as. Al?m disso, o G-CSF pode ser utilizado para refor?ar o sistema imunol?gico em pacientes com HIV, pneumonia, infec??es decorrentes da diabetes, leucemia e neutropenia febril. Atualmente, a filgrastima n?o ? produzida no Brasil, consequentemente, todo medicamento adquirido pelo governo ? importado. Tendo em vista sua ampla aplica??o cl?nica, a produ??o em larga escala do G-CSF se faz necess?ria para suprir a demanda do mercado nacional e diminuir os custos com importa??o desse biof?rmaco. Neste trabalho um protocolo para a produ??o desta prote?na foi desenvolvido, utilizando t?cnicas de DNA recombinante por meio de experimentos de superexpress?o e cultivo em biorreator, solubiliza??o e purifica??o da G-CSF recombinante. A prote?na foi expressa em c?lulas Escherichia coli C41(DE3) em cultivos de batelada alimentada em biorreactor, utilizando indu??o com IPTG e uma estrat?gia de alimenta??o linear ascendente, que nos permitiu obter um alto percentual de estabilidade plasmidial, baixo ac?mulo de acetato no meio de cultivo, uma biomassa de aproximadamente 31 g/ L e elevados n?veis de express?o da prote?na em forma de corpos de inclus?o, que foram solubilizados utilizando ureia 2 M e pH alcalino. A prote?na recombinante foi purificada obtendo-se aproximadamente 1,22 mg de prote?na recombinante homog?nea por grama de c?lulas ?mida, correspondendo a um rendimento volum?trico de 151,5 mg de rhG-CSF por litro de meio de cultura. Uma an?lise por espectrometria de massa tamb?m foi realizada, confirmando a identidade da prote?na recombinante. Nosso trabalho mostra uma estrat?gia simples e eficaz para obter hG-CSF recombinante, contribuindo e estimulando a futura produ??o de um biossimilar nacional.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451789.pdf: 1080623 bytes, checksum: 53f3af2f0b9cc2bca520b792d55bcc75 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Somatotrophin or growth hormone (GH) is a hormone synthesized and secreted by the anterior pituitary gland in all animals and their secretion is controlled by two neuropeptides: the growth hormone releasing factor (GRF), which increases GH synthesis and secretion and somatostatin (SRIF), which inhibits GH secretion. bGH has galactopoietic effect, which is known since the thirties. The mechanism of action of bGH involves a series of orchestrated changes in the metabolism of body tissues so that more nutrients can be used for milk synthesis and these changes allow the animal to achieve an increased milk yield while remaining healthy. Long term studies (10 12 weeks) demonstrated increase in milk yield up to 40% with no adverse effects in the treated cows. E. coli is currently the largest platform for expression of heterologous proteins and high cell-density culture techniques for culturing E. coli are designed to increase productivity of proteins. This system is widely used for production of various recombinant proteins available in the market. In this work were performed bioreactor cultivations using fed batch techniques, testing different feeding strategies and different IPTG induction times. At the end of the experiments the biomass obtained was 32.4 g/L using a linear feeding strategy. Approximately 2.5 mg of bGH were obtained from 1 g of wet cell using a purification protocol with only one chromatographic column. / Somatotropina ou horm?nio de crescimento trata-se de um horm?nio natural secretado pela gl?ndula pituit?ria. Sua secre??o ? controlada por dois neuropept?deos secretados pelo hipot?lamo, o fator liberador de somatotropina, que aumenta a secre??o de horm?nio de crescimento e a somatostatina que inibe a sua secre??o. O horm?nio de crescimento bovino possui efeito galactopoi?tico, o que ? conhecido desde a d?cada de 30. Seu mecanismo de a??o envolve uma s?rie de mudan?as no metabolismo, direcionando mais nutrientes para a s?ntese de leite, sendo que o aumento na produ??o de leite ? alcan?ado sem prejudicar a sa?de do animal. Resultados de pesquisa demonstram que o horm?nio de crescimento bovino pode aumentar a produ??o de leite de 6% a 40% e a efici?ncia de utiliza??o de alimentos em bovinos. A produ??o de leite no Brasil aumentou cerca de 5 vezes desde 1975 at? 2011, e estima-se que existam 23 mil vacas leiteiras no pa?s, demonstrando o potencial mercado para o uso da somatrotopina bovina. E. coli ? atualmente a maior plataforma para express?o simples de prote?nas heter?logas, principalmente por ser um sistema bem caracterizado. Cultivos de alta densidade s?o desenvolvidos para aumentar a produtividade de prote?nas, sendo amplamente utilizados para produ??o de diversas prote?nas recombinantes dispon?veis no mercado. Neste trabalho foram realizados cultivos de E. coli em biorreator por meio de t?cnicas de batelada alimentada, testando diferentes estrat?gias de alimenta??o e tempos de indu??o com IPTG. Ao final dos experimentos a biomassa obtida foi de 32,4 g/L usando uma estrat?gia de alimenta??o linear. Aproximadamente 2,5 mg de bGH foram obtidas a partir de 1 g de c?lula ?mida usando um protocolo de purifica??o com apenas uma coluna cromatogr?fica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389154.pdf: 376076 bytes, checksum: 42625af3d28cd5491852ff5969f589f9 (MD5) Previous issue date: 2007-03-02 / A esquizofrenia ? uma doen?a neuropsiqui?trica grave que atinge aproximadamente 1% da popula??o mundial. Gera um enorme custo social direto (hospitaliza??es, atendimentos, medica??es) e indireto (improdutividade, repercuss?es familiares). A esquizofrenia ? uma doen?a complexa e multifatorial, com alta herdabilidade (cerca de 80%). Nas d?cadas passadas, v?rias pesquisas realizadas com familiares demonstraram uma correla??o linear e direta entre o grau de parentesco e os riscos de surgimento da esquizofrenia. A mitoc?ndria ? o maior s?tio de produ??o de energia na c?lula e, por esta raz?o, muta??es no DNAmt (dele??es e/ou polimorfismos) podem causar altera??es no metabolismo mitocondrial, ocasionando danos aos tecidos. Altera??es na produ??o de energia podem implicar em muitas doen?as neurodegenerativas, como, por exemplo, o Mal de Parkinson, Alzheimer e a Esclerose Amiotr?fica Lateral. Algumas muta??es no DNAmt diminuem a atividade da citocromo c oxidase e podem estar relacionadas com o aumento do risco para esquizofrenia na popula??o. No presente trabalho, foi investigada a preval?ncia de alelos em dois polimorfismos no DNAmt de pacientes esquizofr?nicos e de controles. Foram analisados os polimorfismos C6489A e C7028T presentes no gene CO1 que codifica para a citocromo c oxidase. Foram utilizados oligonucleot?deos espec?ficos com o objetivo de amplificar as regi?es polim?rficas. Os produtos de PCR foram purificados e seq?enciados (MegaBACE 1000 / GE Helthcare TM), e as seq??ncias geradas analisadas, utilizando o programa Chromas vers?o 2.31. Foram analisados 80 pacientes esquizofr?nicos e 80 controles. Na an?lise estat?stica, foramutilizados o teste Q quadrado e Teste T de Student de uma via. Foram considerados significantes somente os resultados com p<0,05. N?o foi encontrado o alelo mutante A, na regi?o mutada C6489A. Em rela??o ao polimorfismo C7028T, dos 80 pacientes, 64% apresentam o alelo mutante T e, entre os controles, este alelo est? presente em 55% indiv?duos. Foi encontrada significativa associa??o entre o alelo T e o risco para desenvolver esquizofrenia. Veri ficou-se que o alelo T pode ser considerado um fator de risco para esquizofrenia, j? que, na compara??o com o alelo C, ele ? mais de tr?s vezes prevalente no grupo de pacientes esquizofr?nicos. Dessa forma, demonstrou-se uma forte associa??o entre a esquizofrenia e o alelo mutante T

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459166.pdf: 2547388 bytes, checksum: 27814fb2b5f7b670424cdc2d80523d6f (MD5) Previous issue date: 2014-03-06 / Disturbances in glutamatergic signaling have been proposed as the cause of many diseases of the nervous system. The zebrafish has been considered as an efficient model in the investigation of the neurochemical basis of various disorders, such as schizophrenia and epilepsy. Several neurotransmitter systems have been characterized in zebrafish, including the glutamatergic system. Moreover, a vast repertoire of behavioral responses to drugs has been characterized in particular in adults. However, little information is available about the ability to generate response to classic drugs of glutamatergic action in the early stages of development in zebrafish. Throughout development, ionotropic glutamate receptors have an orderly variability between the subunits that compose them, giving them different pharmacokinetic properties and degree of affinity for their ligands. In this way, we analyzed the locomotor/behavioral profile of zebrafish in response to the glutamate receptor antagonist, MK-801, in different doses in 30, 60, 120 days post-fertilization (dpf) and 2 years post-fertilization animals, as well the effect of caffeine pre-exposure on MK-801 action. Additionally, we analyzed the expression profile of subunits that comprise the NMDA receptor in whole brain of zebrafish during development. Locomotor/behavioral response to kainic acid (KA) was evaluated in different doses at ages 7, 15 and 30 dpf. Also, the pre-exposure to kainic acid in 24 hours post-fertilization (hpf) and 7 and 15 dpf animals was challenged by a second exposure to kainic acid at 2 months post-fertilization The results demonstrated that zebrafish has an age-dependent response to MK-801 and kainic acid, at least on the locomotor/behavior aspects. The peak of locomotor response to MK-801 occurred at 60-120 days post-fertilization, which was partially prevented by caffeine and able to alter the time on upper zone of aquarium as a measure of anxiety. Analysis of gene expression of NMDA receptor subunits in zebrafish brain demonstrated that NR2C and NR2D subunits have later expression in comparison to subunits NR1, NR2A and NR2B. The animals that were exposed to KA showed alterations in locomotor activity without displaying classic convulsive characteristics. However, pre- exposure to 7dpf KA was able to partially prevent the seizure events in response to KA injection (6 mg / K) at 2 months post- fertilization. / Dist?rbios na sinaliza??o glutamat?rgica s?o propostos como a causa de in?meras patologias do sistema nervoso. O peixe-zebra tem sido considerado um eficiente modelo na investiga??o das bases neuroqu?micas de diversos transtornos, tais como a esquizofrenia e a epilepsia. Diversos sistemas de neurotransmiss?o j? foram caracterizados em peixe-zebra, incluindo o sistema glutamat?rgico. Al?m disto, um vasto repert?rio de respostas comportamentais a f?rmacos j? foram caracterizados em especial em indiv?duos adultos. Entretanto, pouca informa??o ? dispon?vel a cerca da capacidade de gerar resposta a cl?ssicas drogas de a??o glutamat?rgica em fases iniciais do desenvolvimento em peixe-zebra. Ao longo do desenvolvimento, os receptores glutamat?rgicos apresentam uma ordenada variabilidade entre as subunidades que os comp?em, o que lhes confere diferentes propriedades farmacocin?ticas e grau de afinidade por seus ligantes. Desta forma, neste trabalho foi analisado o perfil de resposta locomotora/comportamental do peixe-zebra ao antagonista glutamat?rgico MK-801 em diferentes doses nas idades de 30, 60, 120 dias p?s-fertiliza??o (dpf) e 2 anos p?s-fertiliza??o(apf), bem como o efeito da pr?-exposi??o ? cafe?na sobre os efeitos do MK-801. Adicionalmente, foi analisado o perfil de express?o das subunidades que comp?em o receptor NMDA em c?rebro total de peixe-zebra ao longo do desenvolvimento. A resposta locomotora ao ?cido ca?nico (KA) tamb?m foi avaliada em diferentes doses nas idades de 7, 15 e 30 dpf. A pr?-exposi??o ao ?cido ca?nico em animais de 24 horas p?s-fertiliza??o (hpf) e 7 e 15 dpf foi confrontada pela exposi??o ao ?cido ca?nico aos 2 meses de vida do peixe-zebra. Os resultados encontrados neste trabalho demonstram haver uma resposta idade-dependente na atividade locomotora do peixe-zebra, tanto para MK-801 quanto para ?cido ca?nico. O pico de resposta locomotora ao MK-801 foi entre 60 e 120 dpf, o qual foi parcialmente prevenido pela pr?-exposi??o ? cafe?na e foi capaz de alterar de forma idade-dependente o tempo no topo do aqu?rio, utilizado como uma medida de ansiedade. A an?lise de express?o das subunidades dos receptores NMDA em c?rebro de peixe-zebra demonstrou que as subunidades NR2C e NR2D possuem express?o tardia em rela??o ?s subunidades NR1, NR2A e NR2B. Os animais que foram expostos ao KA apresentaram altera??o na atividade locomotora sem exibir caracter?sticas convulsivas cl?ssicas. Entretanto, a pr?-exposi??o ao KA aos 7dpf foi capaz de prevenir parcialmente os eventos convulsivos em resposta ? inje??o de KA (6 mg/Kg, i.p) aos 2 meses p?s-fertiliza??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 392212.pdf: 1435232 bytes, checksum: c5e320809f8271743be3719e2d01aeda (MD5) Previous issue date: 2007-06-12 / Introdu??o e Objetivos: As infec??es por HTLV-I/II se caracterizam pelo tropismo viral por infectar c?lulas T humanas e promover um estado de prolifera??o espont?nea deste tipo celular. Leucemia e doen?as inflamat?rias graves, com destaque para as doen?as neurol?gicas, est?o fortemente associadas ?s infec??es por HTLV-I/II e o tratamento usual destas patologias envolve a administra??o de antiinflamat?rios da classe dos glicocortic?ides. Embora haja relatos de resist?ncia farmacol?gica ? terapia com glicocortic?ides, n?o se sabe ao certo se essa condi??o se deve ? infec??o viral ou ao hospedeiro. Neste estudo, avaliou-se a rela??o entre prolifera??o celular espont?nea e sensibilidade de linf?citos T aos efeitos dos glicocortic?ides (dexametasona - DEX). Materiais e M?todos: C?lulas mononucleares de sangue perif?rico foram isoladas de pacientes assintom?ticos e livres de tratamento, com infec??o por HTLV-I (n=18) e HTLV-II (n=10), e foram cultivadas na presen?a e na aus?ncia do mit?geno fitohemaglutinina (PHA 1%). C?lulas foram tamb?m cultivadas com PHA 1% e concentra??es variadas de DEX (10-9 a 10-4 M). Para fins comparativos, as mesmas avalia??es foram realizadas em sujeitos saud?veis (Controle, n=11). Resultados e Discuss?o: Os pacientes com HTLV-I/II apresentaram taxas similares de prolifera??o estimulada (PHA 1%) e n?o-estimulada (PHA 0%), bem como sensibilidade compar?vel ? DEX. N?o houve diferen?a na freq??ncia de indiv?duos resistentes versus sens?veis ? DEX entre os grupos HTLV-I e HTLV-II. Entretanto, linf?citos T de pacientes com prolifera??o espont?nea n?o responderam ao est?mulo mitog?nico por PHA e foram mais resistentes ? modula??o por DEX do que as c?lulas de pacientes com prolifera??o normal. Os resultados aqui apresentados sugerem que a baixa resposta cl?nica ? terapia com glicocortic?ides pode estar associada a um estado de prolifera??o celular espont?nea decorrente da infec??o por HTLV.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-24T12:33:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ModulacaoSistemasGabaergico.pdf: 1393761 bytes, checksum: 4e691e98b70bc477f2f4dc02f7254d9d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-30T12:14:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ModulacaoSistemasGabaergico.pdf: 1393761 bytes, checksum: 4e691e98b70bc477f2f4dc02f7254d9d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-30T12:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ModulacaoSistemasGabaergico.pdf: 1393761 bytes, checksum: 4e691e98b70bc477f2f4dc02f7254d9d (MD5) Previous issue date: 2014 / Em mamíferos, a osmolalidade do fluído extracelular é o parâmetro mais importante na manutenção do balanco hidroeletrolitica. Deste modo, variações de osmolalidade são detectadas por células hipotalâmicas especializadas, iniciando assim uma sinalização neuroquímica, com envolvimento dos sistemas glutamátergicos e GABAérgico, a qual pode desencadear a secreção da ocitocina. Entretanto, o modo como a relação dos aminoácidos GABA e glutamato pode modular a liberação de ocitocina durante a hiperosmolalidade ainda é pouco compreendida. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi caracterizar o efeito do meio hipertônico sobre os níveis extracelulares de GABA e glutamato e sua relação com a liberação de ocitocina em preparações de hipotálamo in vitro. Para tal, Ratos Wistar Machos (270-300g) foram mantidos em condições padrões de laboratório. E após decapitação o cérebro foi retirado rapidamente, os fragmentos hipotalâmicos foram imediatamente dissecados em Krebs Ringer Bicarbonato Glicose gelado (KRBG) e colocados no sistema de perinfusão com solução de KRBG isotônica (280 mOsm/Kg H₂O) fluxo de 0.5-1.0 ml/min, foram feitas as coletas a cada minuto durante 15 min. O estímulo hipertônico (340 mOsm/Kg H₂O) ocorreu por 3 minutos. As dosagens de glutamato, GABA e ocitocina foram efetuadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). As dosagens de glutamato mostraram um aumento da liberação somente após a diminuição da concentração de GABA. Este padrão de liberação temporal motivou-nos a adicionar GABA (3 μM) durante o estímulo osmótico, resultando no bloqueio da liberação de glutamato anteriormente observada. Além disso, os resultados mostraram que a liberação de ocitocina estimulada por solução de NaCl hipertônica pode depender também de uma diminuição da liberação de GABA. O presente estudo sugere que a liberação de ocitocina estimulada por hipertonicidade depende de alteração da relação GABA/glutamato. / In mammals, the osmolality of extracellular fluid is a main factor for maintenance hydro electrolyte balance. Thus, changes in osmolality are detected by specialized hypothalamic cell, thereby starting a neurochemical signaling with glutamatergic and GABAergic system involvement, which may trigger the oxytocin release. However, the way of GABA glutamate aminoacids relationship could modulate the oxytocin release under hyperosmolality is till poorly understood. In this context, the aim in present study was characterize the hypertonic medium effect in GABA glutamate extracellular levels and its relationship with oxytocin release in the hypothalamus in vitro. For this, male wistar rats (270-300g) were kept under standard laboratory conditions. After decapitation, the brain was quickly removed and the hypothalamic fragments were immediately dissected in cold Krebs Ringer Bicarbonate Glucose Buffer (KRBG), and were transferred to perifusion chambers containing KRBG isotonic (280 mOsm/Kg H₂O), at flow rate of 0.5-1.0 ml/min, medium effluent was collected every during 15 min. The hypertonic stimulation (340 mOsm/kg H2O) was performed during 3 minutes. Glutamate, GABA and oxytocin levels were determined by reverse phase high-performance liquid chromatograph (HPLC) system. The measurements of glutamate showed an increased release only after decrease in GABA concentration. This release temporal profile motivated us to add GABA (3 mM) during osmotic stimulation, resulting in blockage of glutamate release previously observed. Moreover the results showed oxtocin release by hypertonic solution may also depend on a GABA decrease. The present study suggests that oxytocin release stimulated by hypertonicity depends on altering the relationship GABA / glutamate.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-04-15T16:28:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoQualidadeVida.pdf: 947352 bytes, checksum: 5ee5e6cbf12e59a1ac5d4c59855706d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-30T16:56:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoQualidadeVida.pdf: 947352 bytes, checksum: 5ee5e6cbf12e59a1ac5d4c59855706d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-30T16:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoQualidadeVida.pdf: 947352 bytes, checksum: 5ee5e6cbf12e59a1ac5d4c59855706d5 (MD5) Previous issue date: 2013 / O Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1) é a endocrinopatia mais comum da infância e adolescência e impacta negativamente na qualidade de vida (QV). O EuroQol é um instrumento que afere o estado de saúde e vem sendo utilizado na grande maioria dos estudos multicêntricos mundiais em diabetes e tem se mostrado uma ferramenta extremamente útil e confiável. O objetivo desse estudo é avaliar a QV de pacientes com DM1 do Brasil, país de proporções continentais, por meio da análise do EuroQol. Para isso, realizou-se estudo retrospectivo e transversal, no qual foram analisados questionários de pacientes com DM1, respondidos no período de dezembro de 2008 a dezembro de 2010, em 28 centros de pesquisa de 20 cidades das quatro regiões do país (sudeste, norte/nordeste, sul e centro-oeste). Foram também coletados dados sobre complicações crônicas micro e macrovasculares e perfil lipídico. A avaliação da qualidade de vida pelo EuroQol mostra que a nota média atribuída ao estado geral de saúde é nitidamente menor que a encontrada em dois outros estudos populacionais com DM1 realizados na Europa (EQ-VAS da Alemanha, Holanda e Brasil foram de 82,1 ± 14; 81 ± 15 e 72 ± 22, respectivamente). O EuroQol demonstra que a região Norte-Nordeste apresenta melhor índice na avaliação do estado geral de saúde quando comparada a região Sudeste e menor frequência de ansiedade-depressão autorreferidas, quando comparada às demais regiões do país (Norte-Nordeste = 1,53 ± 0,6, Sudeste = 1,65 ± 0,7, Sul = 1,72 ± 0,7 e Centro-Oeste = 1,67 ± 0,7; p <0,05). Adicionalmente, diversas variáveis conhecidas (idade, duração do DM, prática de atividade física, HbA1c, glicemia de jejum e presença de complicações crônicas se correlacionaram com a QV (r = -0,1, p <0,05; r = -0,1, p <0,05; r = -0,1, p <0,05; r = -0,2, p <0,05; r = -0,1, p <0,05 e r= -0,1, p <0,05, respectivamente). Esse é o primeiro estudo a avaliar a qualidade de vida de pacientes com DM1 a nível populacional no hemisfério sul. Nossos dados indicam uma pior qualidade de vida dos pacientes com DM 1 no Brasil quando comparado a dados de países europeus. Apesar de ter sido encontrado uma inferior duração do DM e menor presença de complicações microvasculares na região Norte/ Nordeste, quando comparada à outras regiões, nossos dados sugerem a existência de elementos adicionais responsáveis pela melhor QV e menor presença de ansiedade/depressão encontradas nesta região. Novos estudos são necessários para identificar esses possíveis fatores. / The type 1 diabetes mellitus type 1 (T1DM) is the most common endocrine disease of childhood and adolescence and it negatively impacts the quality of life (QOL). The EuroQol is an instrument that assess the health state. It has been used in most global multicenter studies in diabetes and it has been shown to be an extremely useful and reliable tool. The aim of this study is to evaluate the QOL of patients with T1DM in Brazil, a country of continental proportions, by analyzing the EuroQol. For this purpose, we performed a retrospective and cross-sectional study, which analyzed questionnaires from patients with T1DM, answered in the period of December 2008 to December 2010 in 28 research centers in 20 cities of the four regions (Southeast, North-Northeast, South and Midwest). We also collected data about chronic micro and macrovascular complications and lipid profile. The assessment of quality of life by EuroQol shows that the average score assigned to general health is markedly lower than those found in two other T1DM population studies conducted in Europe (EQ – VAS from Germany, Netherlands and Brazil were 82.1 ± 14, 81 ± 15 and 72 ± 22, respectively). The EuroQol shows that the North-Northeast region has the best index in the assessment of the overall health status compared to the Southeast and lower frequency of self-reported anxiety -depression, compared to other regions of the country (North-Northeast = 1.53 ± 0.6, Southeast = 1.65 ± 0.7, South = 1.72 ± 0.7 and Midwest = 1.67 ± 0.7, p <0.05). Additionally, several known variables (age, duration of diabetes, physical activity, HbA1c, fasting glucose, and presence of chronic complications correlated with QOL (r = -0.1, p <0.05, r = -0.1, p <0.05, r = -0.1, p <0.05, r = -0.2, p <0.05, r = -0.1, p <0.05 and r = -0.1, p <0.05, respectively). This is the first population study to evaluate the quality of life of patients with type 1 diabetes in the south hemisphere. Our data indicates poorer quality of life of patients with T1DM in Brazil when compared to data from European countries. Although we found an inferior diabetes duration and lower presence of microvascular complications in the North -Northeast region compared to other regions, our data suggests the existence of additional factors responsible for better QOL and lower presence of anxiety-depression found in this region. More studies are necessary to identify these possible factors.