Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T09:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:07:00Z : No. of bitstreams: 1 104440.pdf: 7226273 bytes, checksum: b9a8f0f2ffb77396426f011b551ba536 (MD5) / O presente trabalho teve como finalidade obter compostos farmacologicamente ou biologicamente ativos a partir de substâncias isoladas de plantas medicinais. Assim, três compostos naturias (xantoxilina, astilbina e filantimida) foram usados como protótipos para a síntese de derivados ou análogos que foram posteriormente analisados em diversos modelos farmacológicos "in vitro" e "in vivo". Entre as várias modificações estruturais realizadas na xantoxilina, observou-se alguns resultados interessantes. A série de compostos benzilados, por exemplo, apresentou importantes ações antiespasmódicas no íleo isolado de cobaia contraído pela acetilcolina. O uso do Método de Topliss para correlacionar a estrutura com a atividade possibilitou a síntese de compostos antiespasmódicos mais potentes, sendo que alguns destes derivados foram cerca de 5 vezes mais efetivos do que a papaverina. Além disso, foi possível determinar que os efeitos eletrônicos assim como os efeitos hidrofóbicos dos grupos substituintes são fatores estruturais importantes relacionados com o efeito antiespasmódico. Por outro lado, outros derivados da xantoxilina, como o derivado monobromado, algumas chalconas e o derivado benzofurânico foram efetivos não só como analgésicos, mas também como antiinflamatórios em vários modelos de dor e de inflamação. O derivado benzofurânico, obtido a partir da reação entre a xantoxilina e brometo de p-bromo fenacila, foi o que apresentou resultados bastante promissores. No modelo de dor induzido pelo ácido acético, este composto foi cerca de 130 vezes mais potente do que a aspirina e acetaminofeno, drogas tradicionalmente usadas na clínica. No modelo de dor causado pela formalina, o referido composto foi cerca de 18 vezes mais potente em inibir a dor de origem inflamatória do que estas drogas. Inibiu também a primeira fase da dor causada pela formalina, fato que apenas alguns analgésicos disponíveis no mercado são capazes. Além disso, apresentou efeito prolongado e parece atuar por mecanismos diferentes da aspirina e da morfina, o qual é de extrema importância na procura de novos analgésicos. Quando testado no edema de pata causado pela carragenina, este e outros compostos derivados da xantoxilina foram equipotentes aos conhecidos ibuprofene e indometacina. Os derivados do flavonóide astilbina, como o taxifolin e taxifolin tetrametilado apresentaram não só pronunciado efeito analgésico e antiinflamatório, mas também potente efeito antialérgico. Interessante, estes compostos mostraram atividade analgésica quando administrados oralmente, ao contrário dos derivados da xantoxilina que foram ativos somente quando administrados intraperitonealmente. Os análogos do alcalóide filantimida, que foi usado como modelo, apresentaram importantes ações antiespasmódicas e antimicrobianas. Foi observado que em todos os modelos testados, as maleimidas foram mais efetivas do que as succinimidas, sugerindo que a dupla ligação imídica constitui-se num importante grupo farmacofórico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T11:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:39:33Z : No. of bitstreams: 1 105638.pdf: 2462681 bytes, checksum: a697c1f2ea461461986f329f34032081 (MD5) / Estudos anteriores realizados em nossos laboratórios com várias imidas cíclicas, análogas ao alcalóide natural Filantimida, o qual foi isolado de Phyllantus sellowianus apresentando atividade antiespasmódica e antibacteriana, permitiram a importante avaliação das atividades farmacológicas e biológicas deste tipo de substâncias. Neste trabalho descreve-se a síntese de compostos N-aril e N-alquilarilimídicos cíclicos, como: 3,4-dicloro-N-aril e N-alquilarilmaleimidas, 3-cloro-4-substituídas-N-aril e N-alquilarilmaleimidas, N-arilnaftalimidas, bis-N-aril e N-alquilarilnaftalimidas. As sínteses descritas levaram a compostos com bons rendimentos. Estes compostos foram identificados através de ressonância magnética nuclear de 1H, espectroscopia no infravermelho e espectrometria de massa. Os compostos obtidos demonstraram pronunciada atividade analgésica, sendo que todos os compostos testados no modelo de contorções abdominais causadas pelo ácido acético 0,6 % foram mais eficazes que a aspirina e o paracetamol. Algumas dicloromaleimidas e seus derivados apresentararn importante atividade antibacteriana. As várias modificações estruturais das dicloromaleimidas possibilitaram a aplicação do Método de Topliss, assim como, a determinação de fatores estruturais importantes relacionados com a atividade biológica dos mesmos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T23:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:14:53Z : No. of bitstreams: 1 103890.pdf: 2837071 bytes, checksum: f978949d1d41207e551ad3ceb948d28f (MD5) / Uma série de 11 b-alcoxifeniletilaminas, das quais 7 são compostos novos, foram sintetizadas e caracterizadas na forma de seus cloridratos. Ensaios farmacológicos in vitro destas substâncias permitirarn obter as afinidades aparentes desses compostos por receptores serotonérgicos 5-HT2A e adrenérgicos a1, a partir de medidas de sua capacidade de induzir a contração de aorta torácica de rato. Cálculos teóricos semi-empíricos baseados no método AM1 foram realizados para estes compostos. As conformações mais estáveis foram deduzidas a partir destes cálculos e de estimativas baseadas em espectros de ressonância magnética nuclear de hidrogênio. As conformações resultantes foram então usadas na determinação de propriedades eletrônicas dependentes da estrutura de todos os compostos preparados. Estimativas de suas lipofilicidades globais (log P) foram obtidas a partir de valores de lipofilicidades locais por métodos descritos na literatura para compostos análogos. No estudo da relação estrutura-atividade, a análise estatística dos dados revelou que o valor obtido de afinidade (pD2) mostrou uma significante correlação com a lipofilicidade total das moléculas e a carga calculada para o átomo de carbono em para à cadeia etilamina. As afinidades in vitro correlacionaram pobremente com as energias HOMO dos compostos estudados, questionando um eventual processo de transferência de carga entre o receptor e o anel aromático. Ainda, os valores de afinidade correlacionaram razoavelmente bem com as potências descritas para algumas dessas drogas em humanos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T03:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289110.pdf: 1050925 bytes, checksum: e297bbf3d275514b4ad96dad01cd52a3 (MD5) / O câncer está entre as causas mais freqüentes de morte no mundo. É considerado um importante problema de saúde pública em países desenvolvidos e em desenvolvimento, sendo a segunda causa de morte no Brasil e no mundo, superado somente pelas doenças do sistema cardiovascular. Apesar disto até o momento não existe uma terapia efetiva para o tratamento de todos os tipos de câncer além de que a maioria dos quimioterápicos em uso apresentam elevada toxicidade. Esforços vêm sendo dirigidos no sentido de desenvolver fármacos antitumorais tão ou mais eficazes do que os quimioterápicos já disponíveis, porém com menor toxicidade e potencial para desenvolver resistência terapêutica. Muitos dos medicamentos utilizados atualmente resultaram da purificação de produtos naturais, principalmente vegetais. Neste contexto, o presente projeto objetivou avaliar o potencial antitumoral de Cordia verbenacea planta medicinal brasileira, vulgarmente conhecida como erva baleeira que é popularmente utilizada em Santa Catarina para tratamento de tumores e inflamações. Para se atingir tal objetivo foram realizados experimentos para avaliar a atividade citotóxica e antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo. Para tanto, realizou-se os ensaios de viabilidade celular (MTT) em células de tumor ascítico de Ehrlich (TAE) e MCF-7, proliferação celular (incorporação de [3H] timidina) e capacidade pró-poptótica (Brometo de etídio/Laranja de acridina (BE/LA)) em células TAE. Além disso, verificou-se o possível efeito dos extratos sobre o DNA plasmidial (atividade nucleásica) assim como a capacidade protetora do extrato sobre o DNA (com a geração de espécies reativas de oxigênio com Fe-EDTA). Foi avaliada a expressão da COX-2 através de Wertern blot em células MCF-7. A determinação da atividade antitumoral in vivo foi realizada em camundongos Balb/c inoculados com o TAE e tratados com extrato bruto (EB) e supercrítico (ESC) nas concentrações de 37,5; 75 e 150 mg/Kg. Nos ensaios do MTT e incorporação de timidina triciada os resultados demonstraram que o EB e ESC reduziram de maneira significativa a viabilidade e proliferação celular. A coloração com BE/LA revelou que o provável tipo de morte celular induzida pelos tratamentos trata-se de apoptose, uma vez que a grande maioria das células adquiriram uma coloração laranja-avermelhada, característica de células apoptóticas. Os extratos mostraram-se ineficazes no teste de ativação nucleásica. O ESC foi capaz de reduzir significativamente a expressão da COX-2 em células MCF-7. Os ensaios in vivo demonstram que tanto EB quanto ESC apresentaram efeitos antitumorais, sendo os melhores resultados observados para a dose de 150 mg/Kg. O tratamento com os extratos também causou importante inibição do crescimento tumoral nos camundongos, principalmente o ESC. EB e ESC elevaram a proporção de células inviáveis/viáveis em mais de duas vezes quando comparado ao controle negativo. EB e ESC aumentaram o tempo médio de sobrevida e a concentração de GSH. De acordo com os resultados podemos concluir que ESC apresentou atividade antitumoral mais potente que o extrato bruto. Os resultados obtidos foram favoráveis à validação da utilidade de C. verbenacea como potencial agente antitumoral. Além disso, foi considerado que o método de extração supercrítica pode aprimorar a atividade antitumoral de C. verbenacea, como demonstrado com os resultados apresentados acima, uma vez que estes efeitos provavelmente se devam à presença de ?-humuleno e ?-cariofileno presente nos extratos, especialmente no extrato supercrítico. Também a partir dos resultados obtidos podemos supor que um possível mecanismo de ação antitumoral dos extratos possa ser a redução da expressão da COX-2, o que poderia levar a um bloqueio da sobrevivência celular e indução da apoptose.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T06:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 280965.pdf: 2701870 bytes, checksum: a5029b89d148f5b308ec22279f8fb877 (MD5) / O desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas, como as terapias que utilizam as plantas medicinais, tem despertado grande interesse no tratamento do câncer, pois as terapias disponíveis não são capazes de regredir totalmente a evolução da patologia e/ou apresentam elevada toxicidade. A C. sylvestris, planta medicinal que possui vários usos populares no Brasil e outros paises americanos, tem sido indicada para o tratamento de tumores. Nesse contexto, o presente trabalho propôs avaliar as atividades citotóxica, antiproliferativa, pró-apoptótica, antiangiogênica e antitumoral do extrato bruto (EB-ETOH), e das frações metanólica (f-MeOH), acetato de etila (f-AcOEt) e clorofórmica (f-CHCl3) de Casearia sylvestris utilizando modelos experimentais in vitro e in vivo. Nos ensaios do MTT e incorporação de timidina triciada realizados respectivamente, para investigar a citotoxicidade e influência dos extratos sobre a proliferação celular, os resultados demonstraram que EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt reduziram de maneira significativa a viabilidade e proliferação de células do carcinoma de Ehrlich, sendo a citotoxicidade promovida pelo tratamento com esses extratos, tempo e concentração dependente. Diante do efeito citotóxico promovido por EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt sobre células do carcinoma de Ehrlich, avaliou-se o tipo de morte celular promovida pelos tratamentos. A coloração com brometo de etídeo/laranja de acridina (BE/LA) revelou que o provável tipo de morte celular induzida pelos tratamentos trata-se de apoptose, uma vez que a grande maioria das células, após terem entrado em contato com a referida solução corante, adquiriram uma coloração laranja-avermelhada, característica da ocorrência do fenômeno apoptótico. Entretanto, em relação à avaliação da atividade nucleásica, verificada através da realização do teste de dano ao DNA plasmidial, observou-se que os efeitos antiproliferativo e citotóxico induzidos por EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt, não são mediados por uma interação e dano direto ao DNA. Além disso, a realização desse ensaio permitiu observar que os extratos têm a capacidade de proteger o DNA do ataque induzido por EROs, excluindo-se portanto, a possibilidade de estarem exercendo seus efeitos citotóxico e antiproliferativo através da indução de estresse oxidativo no núcleo. As avaliações morfológicas e bioquímicas realizadas nas amostras obtidas de camundongos portadores do tumor ascítico de Ehrlich mostraram que os animais tratados com EB-ETOH e f-CHCl3 apresentaram menor ganho de peso corporal (26 e 31%, respectivamente) e de circunferência abdominal (52 e 58%, respectivamente), menor volume de líquido ascítico (46 e 43%, respectivamente), aumento do percentual de longevidade (48 e 40%, respectivamente) e da proporção de células inviáveis/viáveis (70 e 78%, respectivamente), quando comparados ao grupo controle negativo. Com a realização do modelo in vivo do TAE, observou-se ainda que o efeito antitumoral promovido por esses extratos é dose-dependente, uma vez que se apresentou-maior, quanto mais elevada a concentração de extrato administrada ao animal. A realização do ensaio do CAM, permitiu verificar que tanto o EB-ETOH, como f-CHCl3 de C. sylvetris, exercem um significativo efeito antiangiogênico, de maneira dose-dependente, onde a administração de 3,25; 7,5 e 15 µg/disco de EB-ETOH e f-CHCl3 foram capazes de diminuir o percentual de vasos, em torno de 54,5; 61,4 e 71% e 42,1; 59,1 e 70,9%, respectivamente. Por fim, cabe ressaltar que a realização da biometria dos embriões possibilitou observar que o tratamento dos mesmos com extrato bruto e fração clorofórmica não se apresentou tóxico, uma vez que não alterou o desenvolvimento embrionário nem a morfogênese externa, avaliados pelo comprimento total do embrião, razão comprimento cefálico/comprimento truncal e razão comprimento cefálico/comprimento total. Dessa forma, conclui-se que EB-ETOH e f-CHCl3 de C. sylvestris apresentaram efeito citotóxico, antiproliferativo, pró apoptótico e antitumoral in vitro e in vivo, sobre as células do carcinoma de Ehrlich. Tal efeito antitumoral mediado por esses extratos, não envolvem sua intercalação ao DNA, e sugere-se que se deva, pelo menos em parte, à inibição da formação de vasos e a conseqüente supressão nutricional das células tumorais.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T07:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 284569.pdf: 1495105 bytes, checksum: b4504c0a28e414d6b42d9ecd0498ac9b (MD5) / As espécies reativas de oxigênio (ERO), metabólitos secundários do metabolismo do oxigênio, são moléculas geradas e reguladas constantemente pela célula. O aumento na sua produção pode levar a inúmeros processos patológicos, e para evitar esses efeitos tóxicos das ERO a célula conta com um complexo sistema de defesas celulares, incluindo defesas antioxidantes. Esse sistema é bem estudado e caracterizado em eucariotos mais complexos, como os mamíferos, e em eucariotos mais simples, como as leveduras, mas ainda pouco se sabe sobre esse sistema e sua regulação em invertebrados marinhos. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo estudar o sistema antioxidante de bivalves marinhos em situação de estresse oxidativo, e propor possíveis mecanismos de modulação e regulação redox nesses modelos animais. O trabalho foi dividido em dois experimentos: no primeiro, mexilhões azuis Mytilus edulis foram pré-expostos ao selênio (4µg/L) por 3 dias, e subseqüentemente expostos por mais 3 dias a cobre (56 µg/L). Neste experimento, objetivamos detectar se os efeitos oxidativos do cobre podem ser atenuados pela pré-exposição ao selênio. Vários parâmetros antioxidantes e de dano celular foram avaliados. Nesta primeira etapa, observou-se que o cobre causa oxidação de tióis protéicos (PSH) e inibição da enzima tioredoxina redutase (TrxR) na brânquia e induz danos no DNA em hemócitos. O selênio aumenta a atividade da enzima glutationa peroxidase dependente de selênio (GPx-Se) e os níveis de glutationa (GSH). Quando os animais são pré-expostos a selênio e expostos em seguida ao cobre, a pré-exposição ao selênio é capaz de neutralizar os efeitos deletérios desse metal, revertendo a oxidação dos PSH, evitando a indução de danos no DNA e revertendo parcialmente a inibição da TrxR. No segundo experimento, mexilhões Perna perna foram expostos por até 21 dias ao zinco (10 µM), um metal conhecido por afetar o metabolismo da glutationa. A exposição aguda (2 dias) ao zinco causou consumo de GSH e inibição da GR, porém estes valores retornam aos níveis basais após 7 e 21 dias de exposição. Os animais expostos por 7 e 21 dias ao zinco demonstram uma amplificação do sistema antioxidante, com aumento na atividade de diversas enzimas auxiliares (TrxR, GR) ou de detoxificação de ERO (catalase, glutationa peroxidase total, superóxido dismutase). Apesar disso, essa amplificação não impediu um aumento nos níveis de peróxidos citosólicos e nos índices de peroxidação lipídica evidenciados após a exposição por 7 ou 21 dias. O conjunto de dados desses dois experimentos demonstram a importância do sistema antioxidante para esses animais em situações de estresse oxidativo. O aumento dos níveis de GSH e da atividade da GPx-Se parecem ser uma importante via de proteção contra os danos oxidativos em mexilhões M. edulis, mediados pelo cobre. Já com relação ao zinco, o restabelecimento do metabolismo da glutationa, o qual é afetado pelo zinco, é fundamental para as células branquiais de mexilhões P. perna, o qual responde ao insulto oxidativo com uma forte resposta adaptativa de amplificação das defesas antioxidantes celulares.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 277501.pdf: 951849 bytes, checksum: 8864dc9021f31277e5fe68c699447939 (MD5) / O óleo diesel é um potencial contaminante de estuários e mangues, especialmente porque ele é o principal combustível utilizado em embarcações. Além disso, a exploração de petróleo e transporte causam sérios riscos ao ambiente marinho. No capítulo 1, foram estudados aspectos químicos e bioquímicos no peixe Poecilia vivipara expostos a fração do óleo diesel acomodada em água (FAD). Os peixes expostos à concentração de 20% de FAD apresentaram um aumento na atividade GST, GR e EROD no fígado. As brânquias apresentaram um aumento na atividade GST nas concentrações de 10% e 20% da FAD, enquanto a atividade EROD aumentou nas concentrações de 2,5%, 10% e 20%. Esse aumento indica uma adaptação do sistema de biotransformação desses organismos para detoxificação dos hidrocarbonetos alifáticos e aromáticos tipicamente encontrados no óleo diesel. No capítulo 2, foram estudados os aspectos moleculares e químicos no peixe Poecilia vivipara exposto a 10% FAD. Os resultados mostraram 27 genes diferencialmente expressos, sendo 12 induzidos e 15 reprimidos. Os resultados de qPCR confirmaram a indução dos genes Citocromo P4501A (CYP1A), Citocromo P4502P2 (CYP2P2), Metiltransferase (MET), Glutationa S-transferase (GST), Uridina Difosfato Glicoronosil Transferase (UDPGT1B) e a repressão do gene Vitelogenina A (VgA) em machos. A maioria dos genes induzidos validados por qPCR está envolvida nas duas primeiras etapas de biotransformação, enquanto o gene validado como reprimido, VgA, está envolvido com a vitelogênese. Juntos, os resultados mostram significativas mudanças bioquímicas e moleculares que são potenciais biomarcadores para compostos presentes na FAD. / Diesel oil is a potential contaminant of estuarine and mangrove areas, especially, because it is the main fuel used in vessels. In addition, offshore oil exploration, production and transport pose serious risks to the marine environment. In the chapter 1, biochemical and chemical aspects were studied in the fish Poecilia vivipara exposed to Diesel Oil Water Accommodated Fraction (FAD). Fish exposed to 20% of FAD showed an increase in the GST, GR and EROD enzymatic activity in liver. The gills showed an increase in GST activity in the 10% and 20% FAD concentrations, while EROD activity increased in the 2.5%, 10% e 20% FAD concentrations. These increases indicate a biotransformation system adaptation of these organisms to detoxify the aliphatic and aromatic hydrocarbons typically found in the diesel oil. In the chapter 2, molecular and chemical aspects were studied in the fish Poecilia vivipara exposed to 10% FAD. The SSH results showed 27 differentially expressed genes, 12 upregulated and 15 downregulated. The qPCR results confirmed the Cytochrome P4501A (CYP1A), Cytochrome P4502P2 (CYP2P2), Methyltransferase (MET), Glutathione S-transferase (GST), Uridine Diphosphate Glucuronosil Transferase (UDPGT1B) gene induction and Vitelogenin A (VgA) gene repression in male fish. The majority of the upregulated genes validated by qPCR is involved with the two biotransformation phases, while the gene validated as downregulated, VgA, is involved with vitellogenesis. Together, the results show significant biochemical and molecular changes that are potential biomarkers for FAD compounds.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T15:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289034.pdf: 1049548 bytes, checksum: 5e8bb08ab5eb868e74d88ac9eb828c34 (MD5) / Apesar de todos os recursos existentes na atualidade para o tratamento do câncer uma diversidade de problemas é observada tanto em relação à eficácia dos medicamentos e/ou sua resistência quanto à gama de efeitos colaterais que podem ser induzidos pelos mesmos. Na tentativa de aprimorar a terapia antitumoral novos agentes antineoplásicos de origem natural têm sido buscados visto que a maior parte dos medicamentos existentes é proveniente de plantas medicinais. Croton celtidifolius pertencente à família Euphorbiaceae, composta por diversas plantas que possuem atividade antitumoral, é uma planta promissora uma vez que é utilizada popularmente com esta finalidade. O presente estudo propôs avaliar a atividade citotóxica, nucleásica e pró-apoptótica, in vitro, e a atividade antitumoral e antiangiogênica, in vivo, do látex de C. celtidifolius. As análises espectrofotométricas do látex bruto permitiram a identificação de um alto conteúdo de fenóis totais (18,54 g/L), enquanto que as análises cromatográficas (CLAE) permitiram a detecção de compostos fenólicos como flavonóis (miricetina, quercetina e campferol) e flavan-3-óis (catequina, epicatequina, galocatequina e epigalocatequina). No ensaio do MTT, para a avaliação da citotoxicidade, a CI50 encontrada para as células de Ehrlich e MCF-7 foram 169 ± 1,8 e 187 ± 2,2 µg/mL, respectivamente. Além disso, foi possível observar uma redução dose-dependente significativa na viabilidade celular. A coloração diferencial com brometo de etídio (BE) / laranja de acridina (LA) demonstrou o predomínio da indução de morte celular por apoptose que pode possivelmente ser explicada através dos resultados obtidos no ensaio de atividade nucleásica onde o látex foi capaz de causar quebras simples e dupla no DNA plasmidial submetido ao tratamento. Adicionalmente os experimentos realizados com os animais portadores do tumor ascítico de Ehrlich (TAE) demonstraram que o látex de C. celtidifolius foi capaz de inibir o crescimento tumoral ao reduzir o peso dos animais, o volume de tumor, a quantidade de células compactadas e a proporção de células/volume de tumor. A inibição tumoral observada para o látex (La1: 0,78; La2: 1,56 e La3: 3,25 mg/kg) foi 26; 32 e 54%. O dado mais relevante neste ensaio foi o aumento dose-dependente no tempo médio de sobrevida (TMS) (CN: 13; La1: 15,5; La2: 16 e La3: 17,5 dias) e no percentual de aumento de longevidade (PAL) (CN: 0,00; La1: 19,23; La2: 23,08 e La3: 34,61%). Além disso, também foi relatado o efeito antiangiogênico do látex (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg/disco) uma vez que este foi capaz de provocar redução na porcentagem de vasos sanguíneos (41; 56; 66 e 75%) observados no ensaio da membrana corioalantóica (CAM). O látex não provocou toxicidade ao embrião uma vez que não foi capaz de alterar a sua morfogênese. Assim, conclui-se que C. celtidifolius apresenta efeitos citotóxico, nucleásico e pró-apoptótico inter-relacionados; e ainda, potencial efeito antitumoral e antiangiogênico. / Despite all the resources at this time for cancer treatment is a diversity of problems observed regarding the efficacy of drugs and/or its resistance as well as the side effects that can be induced by them. In an attempt to improve antitumor therapy new antineoplastic agents from natural sources has been sought since the majority of existing drugs is derived from medicinal plants. Croton celtidifolius belonging to the family Euphorbiaceae, comprising several plants that have antitumor activity, is a primising plant since it is popularly use for this pourpose. The present study was to evaluate the citotoxic, nucleasic and pro-apoptotic activities in vitro, and antitumor and antiangiogenic activities in vivo from the latex of C. celtidifolius. The spectrofotometric analysis of crude latex allowed the identification of a hight content of total phenols (18.54 g/L), while chromatography (HPLC) allowed the detection of phenolic compounds such as flavonols (myricitin, quercetin and kaempferol) and flavan-3-ols (catechin, epicatechin, gallocatechin and epigallocatechin). In the MTT assay, for the evaluation of citotoxicity, the IC50 observed for the Ehrlich and MCF-7 cells were 169 ± 1.8 e 187 ± 2.2 µg/mL, respectively. Furthermore we observed a significant dose-dependent reduction in cell viability. The differential staining with ethidium bromide (BE) / acridin orange (LA) showed the predominance of the induction of apoptotic cell death that can possibly be explained from the tests results of nucleasic activity where latex was able to induced simple and double breaks on treated plasmidal DNA. In addition the experiments with animals carrying the Ehrlich ascitic tumor (TAE) showed that the latex of C. celtidifolius was able to inhibit tumor growth by reducing the weigth of the animals, tumor volum, the amount of packed cells and the proportion of cells / tumor volum. The tumor inhibition observed for the latex (La1: 0.78; La2: 1.56 and La3: 3.25 mg/kg) was 26; 32 and 54%. The most relevant data from this trial was a dose-dependent increase in mean survival time (TMS) (CN: 13; La1: 15.5; La2: 16 e La3: 17.5 dias) and the increase in the percentage of longevity (PAL) (CN: 0.00; La1: 19.23; La2: 23.08 and La3: 34.61%). Furthermore, was showed the antiangiogenic effect of the latex (0.5; 1.0; 1.5 e 2.0 mg/disc) since it was capable of causing reduction in the percentage of blood vessels (41; 56; 66 and 75%) observed in the chorioallantoic membrane assay (CAM). The latex caused no toxicity to the embryo as it was unable to alter its morphogenesis. Thus, it appears that C. celtidifolius latex presents citotoxic, nucleasic and pro-apoptotic effects interrelated and also potential antiangiogenic and antitumor effects.

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Fernanda Gomes Velasque Gama / Resumo: A avaliação laboratorial de uma efusão é relevante para que, em conjunto com os sinais clínicos apresentados pelo paciente, possa ser firmado um possível diagnóstico e instituída ação terapêutica adequada. Assim sendo, a classificação de uma efusão em transudato ou exsudato torna-se um dos pontos críticos para a elucidação do diagnóstico e condução do caso clínico. Em medicina veterinária o método tradicional de classificação de uma efusão é baseado na contagem celular e na concentração de proteínas do fluido, contudo, diversos estudos evidenciam que tais parâmetros não são suficientes para a correta classificação de todas as efusões. Desta forma, o presente estudo foi conduzido com o objetivo de verificar a correlação de outros parâmetros bioquímicos com a diferenciação das efusões transudativas e exsudativas e para tal foram avaliadas as atividades de lactato desidrogenase (LDH) e fosfatase alcalina (FA), bem como a relação de suas atividades fluido/soro, a concentração de lactato, colesterol, proteínas e os gradientes de concentração soro/fluido destas mesmas substâncias e de albumina. Os resultados obtidos permitiram observar e concluir que, dentre os parâmetros avaliados não houve nenhum que apresentasse 100% de sensibilidade e especificidade, contudo, a atividade de LDH, a relação LDH fluido/soro, a concentração de lactato e o gradiente de concentração de lactato soro/fluido apresentam diferença estatisticamente significativa (p<0,05), alta correlação com a classificação de uma efusão exsudativa e transudativa. Assim sendo, estes parâmetros se mostraram mais eficazes na classificação de uma efusão quando comparado com a concentração total de proteínas do fluido / Abstract: The laboratorial evaluation of this fluid becomes relevant, jointly with clinical signs presented by patient; to become possible the diagnosis definition and institution of appropriate therapeutic. Thus, classification of effusion in exudate and transudate is one of major points to elucidation of diagnosis and conduction of clinical case. In veterinary medicine the traditional method of an effusion classification is based on cellular counting and protein concentration of the fluid, however, several studies evidence that such parameters are not enough for the correct classification of all kinds of effusions. Considering this, the present study aimed to verify the correlation of some biochemical parameters with the differentiation of transudatives and exudatives effusions. To perform this, the activities of lactate dehydrogenase (LDH) and alkaline phosphatase (FA) were appraised, as well as the relationship of their activities with fluid/serum; lactate, cholesterol and proteins concentration and fluid/serum gradients of concentration of these same substances and albumin. The results allowed to observe that, among the appraised parameters, the activity of LDH, relationship LDH and fluid/serum, lactate concentration and lactate serum/fluid gradient of concentration present statistically significant difference (p<0,05), as well as a high correlation with the classification of an exudative and transudative effusion. Therefore, these parameters were shown to be more effective in the classification of an effusion when compared with total proteins concentration in the fluid / Doutor

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Contudo, poucas algas já foram analisadas com essa ótica. A alga verde C. cupressoides var. flabellata Børgesen é uma alga abundante na costa do Rio Grande do Norte e já foi demostrado que esta alga coletada na mesma época, mas em praias com grau de salinidade diferentes, sintetizava polissacarídeos sulfatados (PS) com propriedades diferentes, inclusive atividade anticoagulante. Dessa forma, o objetivo do presente foi avaliar a influência do período de coleta e de parâmetros ambientais na composição química e atividade anticoagulante de PS obtidos de algas verdes do litoral potiguar, bem como obter e avaliar o potencial anticoagulante de PS purificados da alga C. cupressoides. Inicialmente, foram obtidos extratos ricos em polissacarídeos sulfatados (ERPS), por proteólise seguido por precipitação com metanol, da alga C. cupressoides coletada mensalmente, durante um ano na praia de Búzios, Nísia Floresta/RN. Observou-se que havia variações no rendimento da extração, composição química e atividade anticoagulante dos ERPS da C. cupressoides de acordo com o mês de coleta, sendo o mês de março aquele em que se obteve ERPS com maior potencial anticoagulante, vale salientar que esta atividade foi maior que a do Clexane®, uma heparina de baixo peso molecular comercial. Ao se analisar a influência de fatores ambientais do local de coleta no rendimento, composição química e atividade anticoagulante observou-se que existe uma correlação positiva significativa (p < 0,05) entre o rendimento da extração dos ERPS e a salinidade da água do mar e a insolação; para a quantidade de sulfato observou-se uma correlação negativa significativa (p < 0,05) com a salinidade da água do mar. Já a quantidade de açúcares totais teve uma correlação negativa significativa (p < 0,05) com: sólidos totais, sódio, cloreto e insolação. Como o mês de março foi o mês com ERPS com maior potencial anticoagulante, resolveu-se purificar, caracterizar e avaliar o potencial anticoagulante de PS extraídos neste mês. Após proteólise e fracionamento com volumes crescentes de acetona obteve-se quatro frações polissacarídicas da C. cupressoides (CCB-0.3, CCB-0.5, CCB-1.0 e CCB-2.0), como a CCB-0.5 apresentou maior atividade anticoagulante, esta foi submetida a cromatografia de troca-iônica e eluída em duas novas frações (FI e FII), após eletroforese em gel de agarose, coloração da lâmina com azul de toluidina e descoloração, observou-se o aparecimento de uma única banda em ambas as subfrações, o que indica a presença de uma única população de PS, o que permite inferir que estes PS foram purificados. Análises por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) indicam que os PS FI e FII tratam-se de glucogalactanas. Estas glucogalactnas sulfatadas exibiram atividade anticoagulante pela via intrínseca (teste de aPTT), pela via extrínseca (teste PT) e pela via comum (teste TT) da cascata de coagulação. Um resultado interessante foi que a atividade no teste de aPTT das glucogalactanas sulfatadas foi similiar a atividade do Clexane®. Além disso, estes PS foram capazes de inibir parcialmente a trombina. Isto é indicativo que os PS da C. cupressoides podem estar agindo em diversas proteases da cascata de coagulação. Entretanto, mais estudos são necessários para explicar detalhadamente quais os alvos de ação destes polímeros. Por fim, analisou-se a influência do período de coleta e de fatores ambientais em ERPS de outras algas verdes do litoral do RN (Caulerpa prolifera, Caulerpa racemosa var. occidentalis, Caulerpa sertularioides e Codium isthmocladum) coletadas também mensalmente, durante um ano na praia de Búzios, Nísia Floresta/RN; e observou-se que, da mesma forma da C. cupressoides, houve variações no rendimento, composição química e atividade anticoagulante para os ERPS algas verdes C. prolifera, C. racemosa, C. sertularioides e C. isthmocladum. No entanto, um fato interessante é que cada alga responde de forma diferente as condições ambientais do local de coleta. Estes dados indicam que dependendo do período do ano que a alga é coletada, os PS extraídos destas espécies de algas podem ter suas estruturas químicas afetadas e, consequentemente, suas atividades biológicas poderão ser distintas. Estes tipos de estudos levam ao esclarecimento de quais seriam as melhores condições para se obter o PS com as características estruturais e biológicas de interesse, o que é fundamental para o uso destes polímeros na indústria. / Polysaccharides of seaweeds can have their synthesis, structure and pharmacological properties modified due to changes in environmental factors. But few algae have been analyzed in this light. The green seaweed C. cupressoides var. flabellata Børgesen is an abundant alga in the coast of Rio Grande do Norte and it was already shown that this seaweed collected at the same time in beaches with different degree of salinity synthesized sulfated polysaccharides (PS) with different properties, including anticoagulant activity. Therefore the objective of this study was to obtain and characterize PS of green seaweed of the coast of Rio Grande do Norte evaluating the influence of the collection period and environmental parameters in the chemical composition and anticoagulant activity of PS as well as purify, characterize and evaluate the anticoagulant potential of at least one PS of the seaweed C. cupressoides. Initially, extracts rich in sulfated polysaccharides (ERPS) were obtained by proteolysis followed by precipitation with methanol of the seaweed C. cupressoides collected monthly for one year on the beach in Búzios, Nísia Floresta/RN. It was noted that there were variations in performance of extraction, chemical composition and anticoagulant activity of ERPS C. cupressoides according to the month of collection, with the month of March being the one in which they obtained more anticoagulant potential of ERPS. It is worth noting that this activity was greater than that of Clexane®, a low molecular weight commercial heparin. When analyzing the influence of environmental factors in the collection site in regards to performance, chemical composition and anticoagulant activity it has been observed that there is a significant positive correlation (p < 0.05) between the performance of the extraction of ERPS and salinity of sea water and insolation; for the amount of sulfate it was observed a significant negative correlation (p < 0.05) with the salinity of the seawater. The amount of total sugars had a significant negative correlation (p < 0.05) with: total solids, sodium, chloride and insolation. Since the month of March was the month with ERPS with more anticoagulant potential, it was decided to purify, characterize and evaluate the PS anticoagulant potential extracted on that month. After proteolysis and fractionation with increasing volumes of acetone four fractions of polysaccharide C. cupressoides (CCB-0.3, CCB-0.5, CCB-1.0 e CCB2.0) were obtained. Since the CCB-0.5 had higher anticoagulant activity, it was submitted to a chromatography ion-exchange column and eluted in two new fractions (FI and FII) after agarose gel electrophoresis, slide staining with toluidine blue and discoloration it was observed the appearance of a single band on both SP which indicates the presence of a single population of PS, which allows inferring that these PS were purified. Analysis by high-performance liquid chromatography (HPLC) indicate that SP FI and FII are glucogalactanas. These sulfated glucogalactans exhibited by the intrinsic pathway anticoagulant activity (APTT assay) the extrinsic pathway (PT test) and common pathway (TT test) of the coagulation cascade. An interesting result was that activity in the aPTT test of sulfated glucogalactans was similiar activity of Clexane®. In addition, these PS were able to partially inhibit thrombin. This is an indicative that the PS C. cupressoides may be acting on various proteases of the coagulation cascade. But more studies are needed to explain in detail which are the targets of action of these polymers. Finally, we analyzed the influence of the period of collection and environmental factors in ERPS of other green seaweeds RN coast (Caulerpa prolifera, Caulerpa racemosa var. occidentalis, Caulerpa sertularioides and Codium isthmocladum) also collected monthly for one year on the beach of Búzios, Nísia Floresta/RN; and it was observed that, like the C. cupressoides, there were variations in the performance, chemical composition and anticoagulant activity for ERPs green seaweeds C. prolifera, C. racemosa, C. sertularioides and C. isthmocladum. However, an interesting fact is that each alga responds differently to environmental conditions of the collection site. These data indicate that depending on the time of the year that the algae are collected, the PS extracted from these species of algae may have their chemical structures affected hence its biological activity may be different. These types of studies lead to the clarification of which would be the best conditions to obtain the PS with the structural and biological characteristics of interest, which is essential for the use of these polymers in the industry.