Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGRRMS.pdf: 1511728 bytes, checksum: 7d61e2ac2b83bcccf28d5a1ace492dca (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Cysteine proteases are enzymes found in many organisms and are characterized by the presence of cysteine residue in their active site. These proteases play an important role in the organism metabolism. In pathogenic organisms, for example, cysteine proteases may be involved in the pathogenicity process by unbalancing of the biological functions of the host (biochemical and physiological regulation). Since they are involved in several diseases, these enzymes have been considered of great interest for many researchers. The current work aims to express in E. coli a recombinant form of an ORF XAC2853 predicted to be a cysteine protease by annotation of the genome of Xanthomonas axonopodis pv citri. This bacterium is responsible for citrus canker, an infection affecting citrus species which can be evidenced by superficial lesions and early fall of leaves and fruits, thus resulting in significant losses to world agriculture. After expression, the protein was purified by nickel column affinity chromatography and inclusion body solubilization, inasmuch as this protein is almost fully insoluble. The purified protein was used to investigate the activity against such synthetic substrates as Z-FR-MCA and Z-RR-MCA, and no proteolytic activity was found. However, studies in vivo using clones of E. coli expressing the recombinant protein evidenced proteolytic activity against casein. In an attempt to demonstrate the involvement of this probable protease in the pathogenicity of Xac, the knockout of the cromossomal gene in Xac was performed. A mutant having the disrupted gene was obtained and characterized. The assays of the mutant growth, when compared with the wild strain, indicate that the cysteine protease may be involved in the pathogenicity of Xac, since the inactivation of its gene by the transposon insertion resulted in a less virulent strain. In this sense, this protein may be a promising target for the combat of citrus canker. / As cisteíno proteases são enzimas presentes nos diferentes organismos e são caracterizadas pela presença de um resíduo de cisteína em seu sítio ativo. Essas proteases apresentam relevante papel no metabolismo desses organismos. No caso de organismos patogênicos, por exemplo, podem estar envolvidas no processo de patogenicidade por gerar o desequilíbrio das funções biológicas do hospedeiro (regulação bioquímica e fisiológica). Por esta razão, essas enzimas tem sido alvo de grande interesse por parte dos pesquisadores, uma vez que se encontram envolvidas em diversas doenças. Neste trabalho visamos à expressão em E. coli da forma recombinante de uma ORF XAC2853 predita como uma cisteíno protease na anotação do genoma de Xanthomonas axonopodis pv citri. Esta bactéria é responsável pelo cancro cítrico, uma infecção que afeta citros, caracterizando-se pelo aparecimento de lesões superficiais e queda precoce de folhas e frutos, resultando em grandes perdas para a agricultura mundial. Uma vez expressa a proteína, a mesma foi purificada por afinidade em coluna de níquel assim como pela solubilização dos corpos de inclusão, pois esta proteína encontra-se quase que exclusivamente insolúvel. A proteína purificada foi utilizada nos estudos de atividade contra os substratos sintéticos Z-FR-MCA e Z-RR-MCA não sendo verificada atividade proteolítica. No entanto, estudos de atividade realizados in vivo, com clones de E. coli expressando a proteína recombinante, demonstraram atividade proteolítica contra a caseína. Na busca de demonstrar o envolvimento desta provável protease na patogenicidade de Xac, foi realizado o nocaute do gene cromossomal que a codifica na bactéria. Um mutante com o gene inativado pela inserção de um transposon foi obtido e caracterizado, e os ensaios de crescimento desse mutante, comparado com o crescimento da linhagem selvagem, permitem concluir que a cisteíno protease estudada pode estar envolvida na patogenicidade de Xac, uma vez que a inativação do seu gene pela inserção do transposon gerou uma linhagem menos virulenta. Desta forma, esta proteína pode ser um alvo promissor para o combate ao cancro cítrico.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Lipoxinas (LXs) são metabólitos do ácido araquidônico com reconhecidas atividades antiinflamatórias e pró-resolução. Apesar do grande número de trabalhos publicados descrevendo o papel das LXs e seus análogos em leucócitos e outros tipos celulares envolvidos em doenças inflamatórias, pouco é sabido a respeito dos mecanismos de ação que desencadeiam estas respostas. Neste trabalho investigamos o papel do 15-epi-16-(para-flúor)-fenoxi-lipoxina A4 (ATL-1), um análogo sintético da 15-epi-lipoxina A4, sobre diversos processos de ativação de monócitos. Caracterizamos, pela primeira vez, o receptor da lipoxina A4 (ALX) na linhagem monocítica U937, através da avaliação de sua expressão gênica e protéica e de sua funcionalidade analisando a ativação de ERK-2, o que torna esta célula uma ferramenta apta para estudo dos mecanismos de ação das LXs e seus análogos sobre os monócitos. Além disso, demonstramos que o ATL-1 aumenta a expressão da enzima heme oxigenase (HO) -1 em células U937 via ativação da p38 MAP quinase (MAPK) e diminui a secreção da Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), uma quimiocina envolvida com o recrutamento de monócitos para o foco inflamatório, em células U937 estimuladas com LPS. A inibição da secreção de MCP-1 foi revertida pela utilização do SB203580, sugerindo que este efeito é dependente da ativação da via p38 MAPK. O presente estudo elucida alguns dos mecanismos envolvidos na ativação de monócitos pelas lipoxinas que podem levar a novas abordagens para o controle de diversas doenças nas quais o componente inflamatório é importante / Lipoxins (LXs) are arachidonic acid metabolites with well recognized anti-inflammatory and pro-resolution activities. Despite the large number of studies describing the role of LXs and their analogs in leukocytes and other cell types involved in inflammatory diseases, little is known about the mechanisms of action that trigger these responses. This work investigated the role of 15-epi-16-(para-fluoro)-phenoxy-lipoxin A4 (ATL-1), a synthetic analog of 15-epi-lipoxin A4 on various processes of monocyte activation. We characterized, for the first time, the lipoxin A4 receptor (ALX) in the monocytic lineage U937, through the assessment of its gene expression and protein and its functionality through the activation of ERK-2, which makes this cell line a suitable tool to study the mechanisms of action of LXs and their analogs on the monocytes. Furthermore, we demonstrated that ATL-1 increases the expression of the enzyme heme oxygenase (HO)-1 in the U937 cells via activation of p38 MAP kinase (MAPK) and decreases the secretion of Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), a chemokine involved in the recruitment of monocytes to the inflammatory focus in LPS-stimulated U937 cells. MCP-1 secretion inhibition by ATL-1 was reverted by SB203580 indicating that this effect is dependent on the activation of p38 MAPK pathway. This study clarifies some of the mechanisms involved in the activation of monocytes by lipoxins which may lead to new approaches for the control of different pathologies where the inflammatory component is relevant

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T21:15:19Z No. of bitstreams: 1 AmandaFernandesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 1948827 bytes, checksum: 087502936007b7e2996629625be441ef (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-08T21:43:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AmandaFernandesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 1948827 bytes, checksum: 087502936007b7e2996629625be441ef (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T21:43:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AmandaFernandesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 1948827 bytes, checksum: 087502936007b7e2996629625be441ef (MD5) Previous issue date: 2017-11-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / A obesidade ? uma das Doen?as Cr?nicas N?o Transmiss?veis de maior impacto na sa?de p?blica. A semente de tamarindo (Tamarindus indica L.) vem sendo estudada por possuir inibidor de tripsina, e, entre os atributos relacionados a esse inibidor parcialmente purificado (ITT), tem-se a sua rela??o com a saciedade, por aumentar colecistocinina (CCK) plasm?tica em animais eutr?ficos e seu efeito na redu??o da concentra??o circulante de leptina em animais com obesidade, entretanto sem aumento plasm?tico de CCK. Neste estudo, o ITT foi purificado, caracterizado e avaliado quanto ?s suas propriedades frente aos horm?nios CCK e leptina em ratos Wistar com obesidade. Para purifica??o e caracteriza??o desse inibidor, foram realizados: fracionamento do extrato bruto proteico com sulfato de am?nio; cromatografia de afinidade Tripsina-Sepharose; Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (HPLC); determina??o da massa molecular por MS-ESI; sequenciamento parcial por MALDI-TOF com ISD; ensaio de estabilidade de temperatura e pH; estimativa dos par?metros de especificidade; eletroforese bidimensional (2-DE) e dosagens de CCK e leptina plasm?tica, por ELISA, em ratos com obesidade, submetidos ? gavagem oral (730 ?g/kg) do inibidor de tripsina purificado (ITTp) comparando-os a ratos com obesidade sem tratamento. Desse modo, o ITT purificado por HPLC foi denominado ITTp. Com o refinamento do m?todo, obtiveram-se, com base no ITTp, dois picos proteicos, as fra??es: Fr 1 e Fr 2. As massas moleculares m?dias dessas fra??es proteicas foram de [M+H]+ = 19594,690 Da e de [M+H]+ = 19578,266 Da, respectivamente. Ap?s redu??o e alquila??o, estimou-se a presen?a de 4 ciste?nas para Fr 1 e Fr 2. As sequ?ncias parciais obtidas para Fr 1 e Fr 2 foram de 54 e 53 res?duos de amino?cidos identificados e exatamente com a mesma sequ?ncia para ambas, sugerindo-se tratar da mesma mol?cula. O ITTp se mostrou resistente ? varia??o de temperatura at? 80?C, reduzindo cerca de 30% de sua atividade antitr?ptica quando em 100 ?C, e resistente aos extremos de pH. Para o ITTp estimou-se a IC50 de 2,7 x 10-10 mol.L-1 e a Ki de 2,9 x 10-11 mol.L-1. Na eletroforese bidimensional com ITTp foram revelados pontos isoel?tricos entre pH 5 e 6, al?m de um spot pr?ximo ao pH 8. Dessa forma, foi constatado que se trata de um inibidor de tripsina da fam?lia Kunitz. No experimento in vivo foi confirmada a a??o de ITTp sobre a redu??o de leptina plasm?tica, mas sem efeito sobre CCK em animais com obesidade, como j? atestado em estudos pr?vios com o ITT. A caracteriza??o bioqu?mica desse inibidor e os seus efeitos sobre CCK e leptina, observados em experimentos in vivo, constituem relatos in?ditos e promissores para uma prov?vel aplica??o biotecnol?gica. / Obesity is one of the non-communicable chronic diseases with a great impact on public health. The tamarind (Tamarindus indica L.) seed has been studied for its trypsin inhibitor and one of the attributes of this partially purified inhibitor (TTI) is its relationship with satiety, increasing cholecystokinin (CCK) in eutrophic and reducing leptin in obese animals. In this study the ITT was purified, characterized and evaluated for its properties against CCK and leptin in obese Wistar rats. For the purification and characterization of this inhibitor, the crude protein extract was fractionated with ammonium sulfate followed by trypsin-Sepharose affinity chromatography, two-dimensional electrophoresis (2-DE) and High Efficiency Liquid Chromatography (HPLC). TTIp molecular mass was determined by MS-ESI. Partial sequencing of TTIp was established by MALDI-ISD. Inhibitory specificity, stability to temperature and pH was characterized for TTIp. Plasma CCK and leptin was evaluated in rats submitted to oral gavage with TTIp (730 ?g / kg) comparing them to untreated obese rats. TTI was purified by HPLC with a single protein peak (ITTp). After refinement of the methods, two protein fractions were observed: Fr 1 and Fr 2, with average mass of [M+H]+ = 19594.690 Da and [M+H]+ = 19578.266 Da, respectively. The presence of 4 cysteines was estimated after reduction and alkylation of Fr 1 e Fr 2. The protein fractions showed 54 and 53 amino acid residues with exactly the same sequence. TTIp presented resistance to temperature variations, reducing about 30% of its anti-tryptic activity at 100 ?C, and resistance to pH extremes. TTIp IC50 was 2.7 x 10-10 mol.L-1 and Ki was 2.9 x 10-11 mol.L-1. The 2-DE revealed spots with isoelectric points between pH 5 and 6, and a spot near pH 8. TTIp characteristics are compatible with trypsin inhibitors from the Kunitz family. In the in vivo experiment, ITTp action on leptin reduction was confirmed, but no effect on CCK was observed in animals with obesity, corroborating previous studies using unpurified TTI. Biochemical knowledge of this molecule and the in vivo experiments shown here are novel and provide essential information for a biomolecule of possible biotechnological application.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T21:15:20Z No. of bitstreams: 1 RonyLucasDaSilvaViana_DISSERT.pdf: 1958519 bytes, checksum: 226f3bd5e061571aedf5c25ed9beb5ac (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-08T23:09:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RonyLucasDaSilvaViana_DISSERT.pdf: 1958519 bytes, checksum: 226f3bd5e061571aedf5c25ed9beb5ac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T23:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RonyLucasDaSilvaViana_DISSERT.pdf: 1958519 bytes, checksum: 226f3bd5e061571aedf5c25ed9beb5ac (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O sabugo de milho ? um subproduto do cultivo do milho que ? pouco utilizado economicamente o que leva ao desperd?cio de milh?es de toneladas desse material anualmente. Do sabugo pode-se extrair mol?culas, inclusive um polissacar?deo bioativo, rico em xilose, denominado de xilana. Neste trabalho, foram produzidas, por um m?todo sustent?vel ao meio ambiente (s?ntese verde), nanopart?culas de prata contendo xilanas de sabugo de milho (nanoxilanas). Para tal, a xilana de sabugo de milho foi extra?da com o aux?lio de ondas de ultrassom. An?lises qu?micas mostraram que esta n?o estava contaminada por prote?nas nem por compostos fen?licos. A xilana foi hidrolisada e seus componentes monossacar?dicos foram determinados por cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE). Na an?lise monossacar?dica identificou-se os componentes sendo eles, xilose: glucose: galactose: manose: ?cido glucur?nico nas seguintes propor??es 50: 21: 14: 9: 2,5: 2,5, respectivamente. A forma??o das nanoxilanas foi acompanhada por espectroscopia UV-vis?vel com kmax = 469 nm. An?lises de espectroscopia de infravermelho confirmaram a presen?a da prata e xilana na nanopart?cula. J? as an?lises de dispers?o din?mica de luz e microscopia (DLS) e de for?a at?mica (MFA) mostraram que o tamanho das part?culas foi em m?dia de 102 nm e que essas tinham um formato arredondado. Os dados de DLS tamb?m mostraram que as nanoxilanas permaneceram est?veis por 12 meses quando armazenadas a 4 ?C e protegidas da luz. Dados de espectrometria de emiss?o ?ptica com plasma acoplado (ICP OES) mostraram que o percentual de prata na nanoxilana foi de 19%. A nanoxilana reduziu a viabilidade das formas promastigotas de Leishmania amazonensis (L. amazonensis) (IC50 25 ?g/mL), enquanto a xilana n?o foi efetiva nessa concentra??o. Al?m disso, a nanoxilana apresentou um valor de 7,5 ?g/mL correspondente a concentra??o m?nima inibit?ria para tr?s diferentes fungos Candida albicans, Candida parapsilosis, e Cryptococcus neorformans. Adicionalmente, a nanoxilana n?o alterou de forma negativa a redu??o de MTT a formazan por c?lulas normais (3T3). Os dados aqui apresentados mostram o potencial biotecnol?gico da nanoxilana e futuros ensaios, inclusive in vivo, devem ser feitos para confirmar o potencial antimicrobiano da nanoxilana. / Corn cob is an agricultural by-product that annually produces a huge amount of waste estimated at thousands of tons, and it is a source of xylan, a bioactive polysaccharide. In this article, silver nanoparticles containing xylan (nanoxylan) were synthesized using an environmentally friendly synthesis method. Therefore, for such, we extracted the xylan from corn cob using ultrasound. Proteins or phenolic compounds did not contaminate this xylan. In addition, HPLC analysis showed that it contains xylose: glucose: arabinose: galactose: mannose: glucuronic acid in a molar percentage ratio of 50: 21: 14: 9.0: 2.5: 2.5, respectively. The formation of nanoxylan was analyzed by UV?vis spectroscopy at kmax = 469 nm. Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) confirmed the presence of silver and xylan in nanoxylan. Dynamic Light Dispersion (DLS) and Atomic Force Microscopy (AFM) showed size of ? 102.0 nm and spherical shaped nanoparticles, respectively. DLS also showed nanoxylans were stable for 12 months. Coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES) showed nanoxylan contain 19% of silver. Nanoxylan reduced viability of the promastigotes of Leishmania amazonensis (L. amazonensis) (IC50 25 ?g/mL), while xylan was not effective. In addition, nanoxylan showed antifungal activity on Candida albicans (MIC = 7.5 ?g/mL) Candida parapsilosis (MIC = 7.5 ?g/mL) and Cryptococcus neorformans (MIC = 7.5 ?g/mL). The data obtained here lead us to the conclusion that it is possible to synthesize silver nanoparticles with xylan and that these nanoxylans showed an antileishimanial and antifungal activities superior to the polysaccharide used for its synthesis, and that this can be used as a promising antiparasitic agent against these microorganisms.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-16T22:23:12Z No. of bitstreams: 1 LaisCristinaGusmaoFerreiraPalhares_DISSERT.pdf: 1523874 bytes, checksum: 887759d06e609dbc7d0f9dd62eb7681f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-23T21:38:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LaisCristinaGusmaoFerreiraPalhares_DISSERT.pdf: 1523874 bytes, checksum: 887759d06e609dbc7d0f9dd62eb7681f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T21:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LaisCristinaGusmaoFerreiraPalhares_DISSERT.pdf: 1523874 bytes, checksum: 887759d06e609dbc7d0f9dd62eb7681f (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / A inflama??o ? composta de uma rea??o vascular e outra celular, conferindo diferentes rea??es de tecidos e c?lulas, tanto do ambiente intravascular, como o do ambiente extravascular. ? medida que o processo inflamat?rio ocorre, proteases da coagula??o, em especial a trombina (FIIa), s?o capazes de desencadear diversas respostas celulares na biologia vascular e por isso, frequentemente ? observada a ativa??o de outros sistemas biol?gicos, levando ? complica??es durante um evento inflamat?rio, como a trombose e a angiog?nese. Assim, mol?culas antagonistas desses eventos s?o modelos interessantes para o desenvolvimento de novos f?rmacos anti-inflamat?rios. Neste contexto, destacam-se os glicosaminoglicanos (GAGs), os quais interagem com diversas prote?nas envolvidas em processos biol?gicos importantes, incluindo inflama??o e coagula??o. Por essa raz?o, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os potenciais anti-inflamat?rios, antitromb?tico, antiangiog?nico, bem como anticoagulante de GAGs do tipo dermatam sulfato (DS) extra?dos do cefalot?rax do camar?o Litopenaeus vannamei. O composto foi obtido ap?s prote?lise e purifica??o por cromatografia de troca-i?nica. Ap?s total digest?o por liases que digerem compostos tipo DS (condroitinase ABC), sua natureza do tipo DS foi revelada, sendo ent?o denominado DSL. O composto do camar?o mostrou reduzido efeito anticoagulante pelo ensaio de TTPa, por?m apresentou alta atividade anti-IIa, diretamente e via Cofator II da heparina. Sobre a inflama??o, o composto apresentou significativo efeito inibit?rio com redu??o de citocinas pr?-inflamat?rias. Potenciais inibit?rios foram relatados no ensaio antitromb?tico e antiangiog?nico, sendo este ?ltimo dose-dependente. Quanto ? atividade anti-hemost?tica, o polissacar?deo n?o induziu efeito hemorr?gico significativo. Assim, os resultados exibidos pelo composto tipo DS isolado do camar?o, apontam este glicosaminoglicano como alvo biotecnol?gico com perspectivas para o desenvolvimento de novas drogas multipotentes. / Inflammation is combined of a vascular and a cellular reaction, resulting in different cells and tissue responses, both the intravascular and extravascular environment. As the inflammatory process occurs, coagulation proteases, in particular thrombin (FIIa), are able to initiate various cellular responses in vascular biology and therefore is often observed activation of other biological systems, leading to complications during an event inflammatory, such as thrombosis and angiogenesis. Thus, antagonists molecules of these events are interesting models for the development of novel anti-inflammatory drugs. Thereby, it is worth stressing the glycosaminoglycans (GAGs), which are able to interact with several proteins involved in important biological processes, including inflammation and coagulation. Therefore, this study aimed to evaluate the anti-inflammatory, antithrombotic and anti-angiogenic potentials, as well anticoagulant of a dermatan sulfate-like GAG (DS) extracted from the Litopenaeus vannamei cephalotorax. The compound was obtained after proteolysis and purification by ion-exchange chromatography. After total digestion by DS-like compounds digesting lyases (chondroitinase ABC), the DS-like nature was revealed, and then called DSL. The shrimp compound showed reduced anticoagulant effect by the aPTT assay, but high anti-IIa activity, directly and through heparin cofactor II. On inflammation, the compound had a significant inhibitory effect with the reduction of proinflammatory cytokines. Potential Inhibitory were reported in the antithrombotic and anti-angiogenic assay, the latter being dose dependent. As for anti-hemostatic activity, the polysaccharides did not induced significant bleeding effect. Thus, the results shown by the shrimp DS-like compound indicate this glycosaminoglycan as a biotechnology target with prospects for the development of new multipotent drugs.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-10-11T22:26:01Z No. of bitstreams: 1 ValeskaSantanaDeSenaPereira_TESE.pdf: 4424545 bytes, checksum: 27d11137997bb962be78ddc99763e2fe (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-10-17T22:34:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ValeskaSantanaDeSenaPereira_TESE.pdf: 4424545 bytes, checksum: 27d11137997bb962be78ddc99763e2fe (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-17T22:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ValeskaSantanaDeSenaPereira_TESE.pdf: 4424545 bytes, checksum: 27d11137997bb962be78ddc99763e2fe (MD5) Previous issue date: 2016-05-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A resist?ncia aos antimal?ricos dispon?veis no mercado leva ? necessidade do desenvolvimento de novos compostos com novos alvos farmacol?gicos. Os derivados de naftoquinonas s?o descritos como compostos l?deres promissores para o desenvolvimento de f?rmacos antimal?ricos. Em vista disso, n?s avaliamos a atividade antiplasmodial in vitro de tr?s derivados de hidroxinaftoquinonas contra o est?gio intraeritroc?tico assexuado de Plasmodium falciparum, assim como par?metros toxicol?gicos in vitro e in vivo e investigamos um prov?vel mecanismo de a??o relacionado ? via dos isopren?ides atrav?s de marca??es metab?licas de precursores da via com tr?tio radioativo, complementado com estudos de docking com um template da octaprenil pirofosfato sintase. Os derivados de hidroxinaftoquinonas analisados tiveram boa atividade antiplasmodial, com IC50 menor que 20 ?M para a cepa 3D7 e menor que 50 ?M para a cepa Dd2. A janela terap?utica ? segura, com ?ndice de seletividade variando entre 36,7 e 143,0. Os compostos n?o causaram hem?lise nas doses testadas (10 e 50 vezes maiores que as respectivas IC50), e n?o desencadearam sinais de toxicidade no teste de toxicidade aguda in vivo apesar de o composto 4a ter promovido esteatose hep?tica e hemorragia no tecido renal. Considerando um prov?vel mecanismo de a??o, os derivados de hidroxinaftoquinonas parecem inibir a s?ntese dos precursores isopr?nicos, principalmente a menaquinona e o tocoferol e os estudos de docking revelaram nove poss?veis intera??es com alta energia em quatro s?tios de liga??o diferentes com um template da octaprenil pirofosfato sintase. Em nossos resultados, o composto 4c foi o mais promissor, visto que possuiu o menor IC50 no teste antiplasmodial in vitro, menor citotoxicidade in vitro e toxicidade aguda in vivo, al?m de ter inibido os tr?s produtos da via dos isopren?ides testados, podendo ser considerado um candidato padr?o para o processo de ?hit-to-lead. / The resistance to antimalarial drugs available on the market leads to the need for the development of new compounds with novel pharmacological targets. The naphthoquinone derivatives are described as promising compounds leading to the development of antimalarial drugs. That said, we evaluated the antiplasmodial in vitro activity of three derivatives of hydroxy-naphthoquinones against asexual intraeritrocitic stage of Plasmodium falciparum, as well as toxicological in vitro and in vivo parameters and investigate a possible mechanism of action related to the isoprenoid pathway through metabolic markers via the precursors of radioactive tritium, complete with docking studies with a template of octaprenil pyrophosphate synthase. Hydroxy-naphthoquinones derivatives analyzed had good antiplasmodial activity with IC50 less than 20 ?M for 3D7 strain and less than 50 ?M for Dd2 strain. The therapeutic window is safe with selectivity index ranging between 36.7 and 143.0. The compounds did not cause hemolysis at the doses tested (10 and 50 times greater than their IC50), and not triggered signs of toxicity in acute toxicity test in vivo even though the compound 4a have promoted hepatic steatosis and haemorrhage in kidney tissue. Whereas a likely mechanism of action, the hydroxy-naphthoquinones derivatives appear to inhibit the synthesis of isoprenic precursors, especially menaquinone and tocopherol and docking studies revealed nine possible interactions with high energy in four different binding sites with a template of octaprenil pyrophosphate synthase. In our results, the compound 4c was the most promising, since it possessed the lowest IC50 in antiplasmodial test in vitro, lower cytotoxicity in vitro and in vivo acute toxicity, and has inhibited the three via the tested isoprenoid products, might be considered a standard candidate for the process "hit-to-lead.

Orientador: José Jurandir Fagliari / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Luis Carlos de Mattos / Banca: Aguemi Kuhayagawa / Banca: José Mauricio Barbanti Duarte / Resumo: O propósito desse estudo foi verificar a prevalência dos antígenos eritrocitários caninos em cães domésticos criados no Brasil e compará-la com aquela descrita na literatura consultada, para cães oriundos de outros países. Além disso, verificar os valores sangüíneos normais e a ocorrência dos antígenos eritrocitários caninos em lobos-guará e cachorros-do-mato, na expectativa de adicionar novos dados sobre valores sangüíneos de referência e investigar as relações filogenéticas entre os caninos silvestres e domésticos. Para tanto, obteve-se amostras de sangue de 200 cães domésticos, sendo 150 cães mestiços e 50 Pastores Alemães, oriundos do município de Jaboticabal - São Paulo, 32 lobos-guará e 16 cachorros-do-mato, pertencentes aos zoológicos de São Carlos - SP, Rio de Janeiro - RJ, São José do Rio Preto - SP, Brasília - DF, Belo Horizonte - MG, Sorocaba - SP, e também do criadouro conservacionista da Companhia Brasileira de Metalurgia e Mineração (CBMM), localizado em Araxá - MG. A prevalência dos grupos sangüíneos encontrada para os mestiços (SRD) foi: 85 (57%) positivos para o grupo DEA 1.1; 61 (41%) positivos para o grupo DEA 1.2; 19 (13%) positivos para o grupo DEA 3; 140 (93%) positivos para o grupo DEA 4; 11 (7%) positivos para o grupo DEA 5 e 17 (11%) positivos para o grupo DEA 7. As combinações de grupos sangüíneos mais observadas foram DEA 1.1,4 (35%) e DEA 1.2,4 (32,5%). A prevalência encontrada para os Pastores Alemães foi: 32 (64%) positivos para o grupo DEA 1.1; 18 (36%) positivos para o grupo DEA 1.2; 4 (8%) positivos para o grupo DEA 3; 50 (100%) positivos para o grupo DEA 4; 7 (14%) positivos para o grupo DEA 5 e 4 (8%) positivos para o grupo DEA 7 (Figura 1). As combinações de grupos sangüíneos mais observadas foram DEA 1.1,4 (50%) e DEA 1.2,4 (28%)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The goal of this study was to verify the prevalence of dog erythrocyte antigen (DEA) in domestic dogs reared in Brazil, in order to compare with the described prevalence found in the literature for dogs reared in other contries. Also, to verify normal blood values and the occurrence of dog erythrocyte antigen in maned wolf and crab eating dog, to investigate phylogenetic relationship between wild and domestic dogs. For this purpose, we collected anticoagulated blood samples from 200 domestic dogs (150 mixed breed and 50 German Sheepherd - GSH) from the city of Jaboticabal, in Sao Paulo state, and 32 maned wolves and 16 crab eating dogs, from zoos located in São Carlos-SP, Rio de Janeiro-RJ, São José do Rio Preto-SP, Brasília-DF, Belo Horizonte-MG, Sorocaba-SP and from a conservationist breeder called CBMM, located in Araxá/MG. The obtained prevalence of dog erythrocyte antigens in mongrels was the following: 57% positive for DEA 1.1, 41% positive for DEA 1.2, 13% positive for DEA 3, 93% positive for DEA 4, 7% positive for DEA 5 and 11% positive for DEA 7. The obtained blood group prevalence for GSH dogs was: 64% positive for DEA 1.1, 36% positive for DEA 1.2, 8% positive for DEA 3, 100% positive for DEA 4, 14% positive for DEA 5 and 8% positive for DEA 7. The most common combinations of blood groups encountered were DEA 1.1,4 (representing 50% in mongrels and 35% in GSH) and DEA 1.2,4 (representing 28% in mongrels and 32,5% in GSH. The high prevalence of DEA 1 blood group in mongrel and GSH dogs represents a favorable factor, once it reduces the risk for a transfusion reaction. The risk for a inicial transfusion reaction against groups DEA 3, DEA 5 or DEA 7 is 7,6% for mongrel and 6% for GSH dogs... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Doutor

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Maria Angélica Dias / Resumo: Os exames laboratoriais são reconhecidos como importantes meios de auxilio diagnóstico na prática médico-veterinária, especialmente no esclarecimento de diversas enfermidades que acometem animais de companhia, particularmente cães. Dentre tais exames, destacam-se os bioquímico-séricos, não só pela sua utilidade clínica, como também pela praticidade de realização e por estarem incorporados à rotina dos laboratórios de análises cHnicas veterinárias. Diante da importãncia e da grande demanda por provas bioquímico-séricas, na rotina da clínica de pequenos animais, além da falta de estudos em relação à viabilidade dos constituintes séricos, quando se faz imperiosa a necessidade de estoque do soro sangüíneo sob diferentes condições, planejou-se o presente projeto de pesquisa com o escopo de se verificar a estabilidade de alguns metabolitos séricos frente a diferentes temperaturas e períodos de estoque. Para tanto, foram analisadas amostras de soro sanguíneo de 10 cães sadios, as quais foram submetidas à análise de sódio, potássio, cálcio total, fósforo, colesterol, triglicérides, proteína total, albumina, creatinina, uréia e a atividade das enzimas aspartato aminotransferase, alanino aminotransferase, fosfatase alcalina, gamaglutamiltransferase e creatina quinase, estocadas em diferentes temperaturas (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) e analisadas em diferentes períodos (logo após a colheita, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 7 dias, 15 dias, 30dias, 60 dias e 90 dias após a colheita). Dentre os resultados obtidos, foi possível observar, principalmente, que a temperatura de congelamento de -20°C propiciou uma maior estabilidade dos parãmetros estudados sendo quinze destes, estáveis durante todo o protocolo experimental. / Abstract: The laboratory tests are known as important diagnostic tools in veterinary medicine, regardering the diagnosis of many diseases, specially in dogs. Among ali these tests, the biochemical ones can be brought out, not only for their clinical importance, but also for their easy performance and because they are inserted as ordinary tests in the veterinary laboratories. Due to the lack of information as for the viability of blood components in dogs, and the need of blood storage under different conditions, the aim of this study was to check out the stability of some blood components under different temperatures and storage periods. Therefore, the blood samples of 10 healthy dogs were evaluated regardering sodium, potassium, calcium, phosphorus, colesterol, tryglicerides, total protein, albumine, creatinine, urea and enzyme activities of asparatate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, gama glutamyl transferase and creatine quinasa stored under different temperature (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) and assessed in different intervals (just after collection, 12 hours, 24 hours, 36 hours, 7 days, 15 days, 30 days, 60 days and 90 days after collection). Among ali the results, it was inferred that the freezing temperature (-20°C) provided the best stability of the evaluated parameters, and 15 out of them showed to be stable during the whole protocol. / Mestre

Poucos estudos têm avaliado as emissões de óxido nitroso (N2O) e alterações na qualidade biológica de solos sob aplicação de dejetos de animais no Sul do Brasil. A presente pesquisa objetivou avaliar o impacto da aplicação de dejetos líquidos de suínos e de bovinos, e de cama de aviário sobre as emissões de N2O (Estudo I) e em indicadores microbiológicos de um Gleissolo (Estudo II), em comparação à aplicação de uréia e sem aplicação de N (tratamento controle). A aplicação dos dejetos de animais e da uréia foi realizada sobre a palhada dessecada de azevém quando da implantação da cultura do milho, e as doses foram equivalentes a aplicação de 150 kg N ha-1 em todos os tratamentos. As emissões de N2O foram avaliadas, pelo método da câmara estática, durante os sete dias que sucederam a aplicação dos dejetos. A concentração de N2O nas amostras de ar foi analisada por cromatografia gasosa. Os indicadores microbiológicos do solo (0-10 cm) foram avaliados aos 5, 10, 20, 30 e 120 dias após a aplicação dos tratamentos. As taxas de emissão de N2O do solo variaram entre 74 e 2969 μg N m-2 h-1, sendo os menores fluxos verificados nos tratamentos sem aplicação de N (147-186 μg N m-2 h-1) e com uréia (74-201 μg N m-2 h-1). A aplicação dos dejetos de animais promoveu sensível aumento nas emissões de N2O em comparação à uréia, com destaque para os dejetos de suínos que apresentou uma emissão acumulada de 1,7 kg N-N2O ha-1 a qual foi muito superior à observada com dejetos de bovinos (0,93 kg ha-1) e de cama de aviário (1,00 kg ha-1). O efeito das fontes de N nos indicadores microbiológicos do solo ocorreu principalmente logo após a sua aplicação (5 dias) e, de maneira geral, observaram-se aumento do C e N na biomassa microbiana e da atividade das enzimas β- glicosidase e urease. Entretanto, esse efeito foi bastante efêmero e, aos 10 dias após a aplicação dos dejetos de suínos e de bovinos, e da uréia, restringiu-se em média à 63% da magnitude verificada aos 5 dias para o Cmic, e já havia desaparecido totalmente nos indicadores Cmic:Corg e atividade da β-glicosidase. Baseado num índice que integra os diversos indicadores, a cama de aviário promoveu melhores condições para a microbiota do solo em comparação aos demais dejetos. Esse resultado, ao menos em parte, se deveu ao seu efeito mais prolongado sobre a maioria dos indicadores microbiológicos avaliados. Possivelmente a aplicação parcelada pode aumentar a eficiência dos dejetos de suínos no suprimento de N para as culturas, reduzir a emissão de N2O do solo, e apresentar benefícios quanto ao seu efeito na qualidade microbiológica de solos agrícolas. / Few studies have evaluated manure effects on nitrous oxide (N2O) emissions and on microbial attributes of soil in Southern Brazil. This study aimed to evaluate the impact of pig slurry, cattle manure, and poultry manure on N2O emissions and on biological quality indicators of a no-tilled Gleisol, in comparison with urea application and without N application (control treatment). Manures and urea were applied in a rate of 150 kg ha-1 of N on rye-grass straw just before the corn sowing. The static chamber method was used to evaluate soil N2O emissions. Air sampling was performed through the seven days after manure application and the N2O concentration in the samples was analyzed by gas chromatography. The microbial indicators of soil quality were evaluated at 5, 10, 20, 30 and 120 days after manure application. The fluxes of N2O varied from 74 and 2969 μg N m-2 h-1, and the lowest fluxes were verified in the treatments without N application (147 e 186 μg N m-2 h-1) and with urea (74 e 201 μg N m-2 h-1). Manure application promoted a sensible increase on soil N2O emissions in comparison with urea. Pig slurry resulted in the highest accumulated emission of 1.7 kg N-N2O ha-1 that was higher than that observed with cattle manure (0.93 kg N-N2O ha-1) and with poultry manure (1.00 kg NN2O ha-1). The effect of N sources on microbial soil attributes were more intense in the immediate period after application (5 days) and, in general, increased Cand N-microbial biomass and the activities of β-glicosidase and urease enzyme. However, their effects were of short-term and decreased rapidly in the next period. After 10 days of manure application the majority microbial attributes did not showed the beginning effect. A integrative index of the several microbial soil attributes indicated that poultry manure promoted the best soil conditions to microbial in comparison with the other manures and this result was, in part at least, due to the more extended effect on soil microorganisms. In manure-based production systems, the split applications of pig slurry probably it will be favorable to increase the efficiency in N supply to the crops and mitigate the N2O emissions, in addition to be a better option to improve biological quality of agricultural soils.

O deslocamento de abomaso (DA) é uma doença multifatorial relacionada com o manejo alimentar que afeta vacas leiteiras de alta produção principalmente durante o início da lactação. Este trabalho teve como objetivo avaliar indicadores bioquímicos de diagnóstico e tratamento no deslocamento de abomaso à esquerda (DAE) em vacas leiteiras na Região do Planalto do Rio Grande do Sul. As amostras foram coletadas de um total de quarenta animais, sendo vinte vacas com DAE e vinte vacas clinicamente sadias utilizadas como grupo controle. Foram coletadas amostras de líquido ruminal, sangue e urina para avaliação do perfil bioquímico, hematológico e ruminal. Os animais com DAE apresentaram menor produção de leite diária (6,72 kg ± 3,85 e 26,86 kg ± 8,36), peso corporal (566,5 kg ± 51,12 e 602,9 kg ± 45,68) e escore condição corporal (2,32 ± 0,4 e 602,9 ± 45,68), quando comparados ao grupo controle.A utilização de fitas reagentes para medição do pH ruminal demonstrou-se eficaz a campo quando comparada com potenciômetro digital. A dinâmica ruminal apresenta-se prejudicada nos animais com DAE como foi evidenciado pelos valores aumentados do tempo de redução de azul de metileno (4,70 min. ± 1,89 e 1,66 min. ± 1,14). Além de apresentarem indicadores de desidratação, os valores de pH da urina, e os valores séricos de lactato, aspartato transaminase e colesterol apresentaram-se como ferramentas auxiliares no prognóstico e tratamento. O tratamento deve consistir em além da correção da afecção, restabelecer a condição hídrica do animal, assim como também, repor a flora ruminal. / The displacement of abomasum (DA) is a multifactorial disorder related to feed management affecting high yielding dairy cows mainly during early lactation. This work had the objective to evaluate biochemical profile for diagnose and treatment of left displaced abomasum (LDA) in dairy cows in the Planalto Region of Rio Grande do Sul. The samples were collected from ruminal fluid, blood and urine for the evaluation of biochemical, hematological and ruminal profile. The cows with LDA presented lower values of daily milk production (6,72 kg ± 3,85 and 26,86 kg ± 8,36), body weight (566,5 kg ± 51,12 and 602,9 kg ± 45,68) and corporal condition score (2,32 ± 0,4 and 602,9 ± 45,68). The utilization of reagent strips showed to be functional in the field when compared to a digital phmeter. The ruminal dynamics is much damaged in the cows affected by the LDA, as evidenced by the high values for the blue metilen reduction time (4,70 min. ± 1,89 and 1,66 min. ± 1,14). Besides the presentation of dehydration indicators, the urine pH, and serum lactate, aspartate transaminase and cholesterol presented to be auxiliary tools in the LDA prognoses and treatment. The treatment should consider fluid therapy and reestablish the ruminal dynamics of the cow.