Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434485.pdf: 1998434 bytes, checksum: 1014acc111807827078acdfb43af808b (MD5) Previous issue date: 2011-09-23 / A tuberculose humana (TB), causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, representa uma amea?a global liderando a causa de morte em adultos em decorr?ncia de um ?nico agente infeccioso; sendo respons?vel por cerca de dois milh?es de ?bitos por ano no mundo. Estima-se que aproximadamente um ter?o da popula??o est? infectada com o bacilo na sua forma latente. Agentes quimioter?picos mais eficazes e menos t?xicos s?o necess?rios para reduzir a dura??o do tratamento atual, assim como melhorar as possibilidades de tratamento para as cepas MDR-TB, XDR-TB e TDR-TB. Al?m disso, h? necessidade de um tratamento eficaz para a TB latente, impedindo ainda que a doen?a se desenvolva para a forma ativa. Em 1998 com o sequenciamento completo do genoma da cepa de M. tuberculosis H37Rv houve a possibilidade do estudo e valida??o de alvos moleculares para o desenho racional de drogas anti-TB. As enzimas que participam de vias metab?licas essenciais s?o alvos promissores para o desenvolvimento de novos quimioter?picos para o tratamento da TB. A prote?na fosforribosilpirofosfato sintase de M. tuberculosis (PRS, EC 2.7.6.1) ? uma enzima de central import?ncia em muitas vias metab?licas em todas as c?lulas. A PRS catalisa a forma??o do PRPP e AMP a partir da R5P e ATP, onde o ATP ir? doar um grupamento difosforil para a R5P. A amplifica??o, clonagem, express?o e purifica??o de MtPRS permitiu a identifica??o de seu substrato doador difosforil GTP, CTP e UTP, al?m de ATP j? descrito anteriormente, al?m da aus?ncia da depend?ncia de fosfato inorg?nico (Pi) para a atividade enzim?tica. Ambas caracter?sticas nos indicam que MtPRS pode ser classificada como uma PRS classe II, at? agora somente identificada em plantas.Atrav?s do ensaio de liga??o atrav?s de espectrometria de fluoresc?ncia, vimos que os substratos R5P, ATP e GTP e o produto AMP s?o capazes de se ligarem ? enzima na sua forma livre, indicando um prov?vel mecanismo sequencial aleat?rio para nucleot?deos de purina, com libera??o sequencial ordenada dos produtos; e mecanismo sequencial ordenado para a liga??o dos substratos e libera??o dos produtos para nucleot?deos de pirimidina. As caracter?sticas que distinguem as enzimas PRS Classe II da Classe I, sendo que a classe I inclui todas as tr?s isoformas H. sapiens, podem ser exploradas para desenvolver inibidores espec?ficos para MtPRS, tanto para a tuberculose ativa quanto para a latente.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447381.pdf: 1128253 bytes, checksum: d5ebf0da0d18404190c4e67763e48457 (MD5) Previous issue date: 2013-03-06 / Sepsis, a medical condition that affects 18 million people per year worldwide, is characterized by a generalized inflammatory state caused by infection. The widespread activation of coagulation pathways and inflammation progresses to multiple organ failure, the collapse of the circulatory system (septic shock) and death. Despite decades of research and numerous clinical trials, little progress has been made in developing new treatments and mortality rates are virtually the same in the last 20 to 30 years. As such, sepsis remains a difficult opponent for surgeons and their patients, so the search for new therapeutic alternatives becomes strictly essential. Recently stem cells have emerged as a promising therapy for a variety of diseases, including cardiovascular diseases, neurodegenerative disorders, peripheral vascular disease, renal disease, and several others. Its beneficial effects are due mainly to their ability to connect to injury and inflammation, to attenuate the inflammatory response, and accelerate tissue healing and neoangiogenesis due to noxious stimuli. Considering this therapeutic potential, this study aimed to evaluate whether these cells could lead to immune response back into balance, reducing the pathophysiology of sepsis and thereby increase the survival time in mice using an experimental model of sepsis. Our results demonstrated that treatment with mesenchymal stem cells was able to increase survival time of the animals that were tested. This effect is due to the ability of these cells to modulate the immune response providing a smaller reduction in tissue injury and apoptotic cells. These findings demonstrate that mesenchymal stem cells have therapeutic potential and can function as a possible future treatment for sepsis. / Sepse, uma condi??o m?dica que afeta 18 milh?es de pessoas por ano no mundo, ? caracterizada por um estado inflamat?rio generalizado causado por uma infec??o. A ativa??o generalizada de vias de coagula??o e inflama??o evolui para disfun??o de m?ltiplos ?rg?os, o colapso do sistema circulat?rio (choque s?ptico) e morte. Apesar de d?cadas de pesquisas e numerosas experimenta??es cl?nicas, pouco progresso tem sido observado no desenvolvimento de novos tratamentos e as taxas de mortalidade s?o praticamente as mesmas nos ?ltimos 20 a 30 anos. Como tal, a sepse continua sendo um dif?cil advers?rio para cirurgi?es e seus pacientes, logo, a busca por novas alternativas terap?uticas torna-se estritamente essencial. Recentemente as c?lulas-tronco t?m emergido como uma terapia promissora para uma variedade de patologias, incluindo doen?as cardiovasculares, neurodegenerativas, doen?a vascular perif?rica, doen?a renal, e v?rias outras. Seus efeitos ben?ficos est?o relacionados principalmente ?s suas capacidades de se conectarem a les?es e inflama??es, para atenuar a resposta inflamat?ria e acelerar a cicatriza??o de tecidos e de neoangiog?nese devido a est?mulos nocivos. Considerando esse potencial terap?utico, o presente estudo teve por objetivo avaliar se essas c?lulas poderiam conduzir a resposta imune de volta ao equil?brio, atenuando a fisiopatologia da sepse e dessa forma aumentando o tempo de sobrevida em camundongos, utilizando um modelo de sepse experimental. Os resultados demonstraram que o tratamento com as c?lulas-tronco mesenquimais foi capaz de aumentar o tempo de sobrevida dos animais em estudo. Esse efeito observado deve-se ? capacidade destas c?lulas de modularem a resposta imune, proporcionando uma menor les?o tecidual e a diminui??o de c?lulas apopt?ticas. Essas descobertas demonstram que as c?lulas-tronco mesenquimais t?m potencial terap?utico e podem funcionar futuramente como um poss?vel tratamento para a sepse.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447382.pdf: 4486344 bytes, checksum: 86fdbbba27db00743c8e29d0d264ba0e (MD5) Previous issue date: 2013-03-06 / A wide variety of studies have demonstrated that physical activity has beneficial effects on brain function, including the improvement of cognition, the enhancement of learning and memory processes, and also displays neuroprotective effects. One of the mechanisms responsible for these beneficial effects is the influence that exercise has on brain plasticity. In this sense, the hippocampus is a brain region particularly important in the formation of new memories and featured as one of the main structures of the brain where we observe neurogenesis in adulthood. The astrocytes are important glial cells, critical for neuronal energy metabolism by regulating the concentration of various molecules and as neurons, are believed to participate actively in the synaptic function. Furthermore, astrocytes are susceptible to plasticity induced by environmental stimuli such as physical exercise. The aim of this study was to investigate whether physical exercise can alter the immunoreactivity for Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP), density and morphology of GFAP positive astrocytes, in the stratum radiatum of the CA1 region of the rat hippocampus. Thirteen male rats were divided in two groups: Sedentary (n=6) and Exercise (n=7). The animals in the exercise group were submitted to a protocol of 30 minutes of daily physical exercise on a treadmill for 4 consecutive weeks. GFAP immunoreactivity was evaluated using optical densitometry and the analysis of the astrocyte ramification was done using an adaptation of Sholl's concentric circles method. The results show that physical exercise is capable of increasing the density of GFAP positive astrocytes as well as the regional and cellular GFAP expression. In addition, physical exercise altered astrocytic morphology as shown by the increased degree of ramification observed in the lateral quadrants and in the length of the longest astrocytic processes in the central quadrants. This data demonstrate important changes in astrocytes promoted by physical exercise, supporting the idea that these cells are involved in regulating neural activity and plasticity. / Diversos estudos demonstram que a pr?tica de atividade f?sica di?ria tem efeitos ben?ficos sobre a fun??o cerebral, incluindo melhora da cogni??o e dos processos de aprendizagem e mem?ria, al?m de apresentar efeitos neuroprotetores. Um dos mecanismos respons?veis por esses efeitos ben?ficos ? a influ?ncia que o exerc?cio f?sico exerce sobre a plasticidade neural. Neste sentido, o hipocampo ? uma regi?o encef?lica especialmente importante nos processos de forma??o de novas mem?rias e caracterizado como um dos principais locais do enc?falo onde observamos neurog?nese em fase adulta. Os astr?citos s?o importantes c?lulas da glia, fundamentais para o metabolismo energ?tico neuronal, regulando a concentra??o de v?rias mol?culas e assim como os neur?nios, acredita-se que participem ativamente da fun??o sin?ptica. Al?m disso, os astr?citos s?o c?lulas suscet?veis ? plasticidade induzida por est?mulos ambientais, como o exerc?cio f?sico. O objetivo deste estudo foi investigar se o exerc?cio f?sico ? capaz de alterar a imunorreatividade para a Prote?na Glial Fibrilar ?cida (GFAP), a densidade e a morfologia dos astr?citos GFAP positivos, do stratum radiatum da regi?o CA1 do hipocampo de ratos Wistar. Treze ratos machos foram divididos em 2 grupos: Sedent?rio (n=6) e Exerc?cio (n=7). Os animais do grupo exerc?cio foram submetidos a 4 semanas de exerc?cio f?sico di?rio em esteira durante 30 minutos por dia. A imunorreatividade para GFAP foi avaliada por densitometria ?ptica e a an?lise da ramifica??o astrocit?ria foi realizada por uma adapta??o do m?todo dos c?rculos conc?ntricos de Sholl. Os resultados obtidos demonstram que o exerc?cio f?sico foi capaz de aumentar a densidade de astr?citos GFAP positivos, bem como a express?o regional e celular de GFAP. Al?m disso, os astr?citos alteraram sua morfologia em resposta ao exerc?cio f?sico, o que foi demonstrado pelo aumento no grau de ramifica??o dos astr?citos nos quadrantes laterais e no comprimento dos processos astroc?ticos nos quadrantes centrais. Estes achados demonstram importantes altera??es astrocit?rias ap?s o exerc?cio f?sico, corroborando a ideia de que estas c?lulas est?o envolvidas na regula??o da atividade neural e da plasticidade.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 388583.pdf: 324287 bytes, checksum: 8c8af61f744037429dc4919b2fe15f71 (MD5) Previous issue date: 2007-01-29 / Evid?ncias indicam que a adrenalina modula a consolida??o da mem?ria em testes de car?ter aversivo/emocional tanto em animais quanto em humanos. Entretanto, pouco se sabe a respeito dos efeitos da adrenalina sobre a consolida??o da mem?ria de reconhecimento. Neste trabalho, constatamos que a administra??o sist?mica de adrenalina melhora a consolida??o da mem?ria na tarefa de reconhecimento do objeto novo sob diferentes condi??es de treino. Ratos machos controles que receberam inje??o sist?mica de salina (NaCl 0,9%) imediatamente ap?s treino mostraram reten??o significativa de mem?ria quando testados 1,5 ou 24 horas, mas n?o 96 horas ap?s o treino. Em contraste, ratos tratados com inje??o p?s-treino de adrenalina mostraram reten??o significativa de mem?ria de reconhecimento do objeto novo em todos os intervalos de tempo testados. Em um segundo experimento utilizando uma condi??o de treino com maior grau de dificuldade, os ratos tratados com adrenalina, mas n?o os animais tratados com salina, mostraram reten??o significativa na mem?ria de reconhecimento do objeto novo quando testados 1,5 e 24 horas depois do treino. Depois, mostramos que a melhora de reten??o na mem?ria testada 96 horas depois do treino induzida por adrenalina foi prevenida pela administra??o sist?mica pr?-treino do antagonista de β-adrenoreceptores, propranolol. Estes resultados sugerem que, como observado anteriormente em experimentos usando tarefas com car?ter aversivo/emocional, a adrenalina modula a consolida??o da mem?ria de reconhecimento e que seus efeitos necessitam da ativa??o de receptores β-adren?rgicos

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-04-16T14:40:02Z No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-04-16T14:40:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T14:40:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / Klebsiella pneumoniae is one of the main bacterial agents that may cause infections related to health care assistance. K. pneumoniae frequently carries the resistance gene K. pneumoniae carbapenemase (KPC). Currently, tigecycline can be considered one of the last therapeutic options for KPC, but reports of tigecycline-resistant KPC isolates are on the rise, being indicated as most common mechanism the increased AcrAB-TolC efflux pump system expression. However, molecular tigecycline resistance mechanisms associated to AcrAB-TolC still remains obscure. Thus, the main goal of this study was to verify if tigecycline resistance can be related to the presence of mutations in the regulatory genes of AcrAB-TolC, AcrR and RamR. Therefore, 32 K. pneumoniae isolates were used, identification and antibiogram performed using Vitek 2 systems. The minimum inhibitory concentrations were confirmed using E-test. Primers were designed in order to verify mutations within AcrR and RamR genes. PCR analysis showed that the mutations found within these genes were transversions (94% for AcrR and 90% for RamR) and transitions (6% for AcrR and 10% for RamR). Nevertheless among the mutations, no distinction between tigecycline susceptible and resistant isolates was found. Some of the transversions caused change in the amino acid encoding 6 in AcrR and 15 in RamR. Presence of these types of mutations evaluation can be seen as the first bacterial resistance study step, as it may be caused by oxidative damage for bacterial DNA, frequently caused by antibiotic selective pressure. Tigecycline resistance found in this study`s clinical isolates may be associated to alterations in another genes that can trigger mechanisms associated to this antibiotic. / Klebsiella pneumoniae consiste em um dos principais agentes bacterianos causadores de infec????es relacionadas ?? assist??ncia ?? sa??de (IRAS). K. pneumoniae carrega frequentemente o gene de resist??ncia K. pneumoniae carbapenemase (KPC). Atualmente, a tigeciclina pode ser considerada uma das ??ltimas op????es terap??uticas para KPC, mas os relatos de isolados de KPC resistentes a tigecilina est??o em ascens??o, sendo a hiperexpress??o da bomba de efluxo AcrAB-TolC indicado como mecanismo mais comum. No entanto, os mecanismos moleculares de resist??ncia ?? tigeciclina associada ao AcrAB-TolC permanecem obscuros. Desta forma o objetivo deste trabalho foi verificar se a resist??ncia a tigeciclina pode estar relacionada ?? presen??a de muta????es nos genes ArcR e RamR, reguladores de AcrAB-TolC. Para tanto, 32 isolados de K. pneumoniae foram utilizados, sendo a identifica????o e o antibiograma feitos utilizando o sistema Vitek 2. A confirma????o das concentra????es inibit??rias m??nimas (CIMs) foram realizadas por E-test. Iniciadores foram desenhados para verifica????o de muta????es nos genes (AcrR e RamR). As an??lises por PCR mostraram que as muta????es encontradas nos genes AcrR e RamR foram substitui????es por transvers??o (94% e 90% para AcrR e RamR respectivamente) e transi????o (6% e 10% para AcrR e RamR respectivamente), por??m n??o foi identificada distin????o da presen??a de muta????es entre isolados sens??veis e resistentes a tigeciclina. Algumas tranvers??es ocasionaram mudan??a na codifica????o do amino??cido, sendo 6 em AcrR e 15 em RamR. A avalia????o da presen??a desses tipos de muta????es consiste em um primeiro passo para o estudo da resist??ncia bacteriana, j?? que pode ser causada por dano oxidativo ao DNA bacteriano, frequentemente ocasionado por press??o seletiva dos antibi??ticos. A resist??ncia a tigeciclina encontrada nos isolados cl??nicos do presente estudo, provavelmente pode estar associada a altera????es em outros genes desencadeadores de mecanismos de resist??ncia a tigeciclina.

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-23T13:34:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CinéticaEnzimaAlfa-Galactosidase.pdf: 2284274 bytes, checksum: 84e0046c6ef967080654f5dc29d5c13b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-23T13:52:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CinéticaEnzimaAlfa-Galactosidase.pdf: 2284274 bytes, checksum: 84e0046c6ef967080654f5dc29d5c13b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-23T13:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CinéticaEnzimaAlfa-Galactosidase.pdf: 2284274 bytes, checksum: 84e0046c6ef967080654f5dc29d5c13b (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Alfa-galactosidase A (α-Gal A) humana é uma enzima lisossômica que quando deficiente causa a doença de Fabry. A doença de Fabry é uma esfingolipidose cuja principal causa de morbi-mortalidade é a insuficiência renal crônica (IRC). O objetivo deste estudo foi a implantação de um protocolo laboratorial que permita o diagnóstico da doença de Fabry em plasma e leucócitos, além da análise das características cinéticas da enzima α-Gal A em plasma e busca ativa da doença em 25 indivíduos com IRC de causa desconhecida. Também foram avaliadas a reprodutibilidade e a estabilidade do método enzimático. A padronização dos ensaios foi realizada com o substrato fluorescente 4-metilumbeliferil-α-Dgalactopiranosídeo. A reprodutibilidade foi avaliada utilizando amostras de plasma aliquotadas a 4ºC, -20ºC e -70ºC, analisadas uma vez ao mês por 6 meses e a estabilidade da fluorescência por até 24 horas após o término do ensaio enzimático. A padronização permitiu a implantação de valores de referência da α-Gal A para o estado do Pará, de 4 a 28 nmoles/h/mL (plasma) e de 20 a 96 nmoles/h/mg proteína (leucócitos). A enzima α-Gal A se mostrou termolábil, visto que com apenas 1 minuto de pré-incubação das amostras a 60ºC, sua atividade decaiu 71,09%. Com relação ao tempo de incubação, a atividade enzimática apresentou uma disposição linear crescente entre 15 a 180 minutos de incubação. A α-Gal A apresentou maior atividade no pH 4,8, o Km encontrado para a α-Gal A foi de 1,007 mM e a Vmáx foi 30,9 nmoles/h/mL. A melhor temperatura de armazenamento de plasma até o ensaio enzimático é -20ºC, onde foi observada menor variação em um período máximo de 6 meses. O método enzimático utilizado é estável, mesmo após 24 horas do término do ensaio, em temperatura ambiente. Com relação aos pacientes com IRC de causa desconhecida, todos apresentaram valor de atividade da α-Gal A dentro dos parâmetros de referência e, portanto, nenhum foi diagnosticado com doença de Fabry. O entendimento da cinética da α-Gal A e do seu comportamento in vitro possibilita um melhor diagnóstico laboratorial da doença de Fabry gerando dados para futuras comparações com indivíduos afetados por mutações nesta enzima / Human alpha-galactosidase A (α-Gal A) is a lysosomal enzyme which is deficient in Fabry disease. Fabry disease is a sphingolipidosis which chronic kidney failure (CKF) is the most important cause of morbidity and mortality. The aim of this study was the establishment of a laboratorial protocol that allows the diagnosis of Fabry’s disease in plasma and leukocytes, the analysis of α-Gal A kinetic features in plasma and searching for potential Fabry patients in 25 individual with unknown CKF. Reproducibility and fluorescence stability of the enzymatic method were also evaluated. The assay standardization was realized with the fluorescent substrate 4- methylumbeliferil-α-D-galactopyranoside. Reproducibility was evaluated using plasma samples stored at a 4ºC, -20ºC and -70ºC, the assay was performed once a month until 6 months and fluorescence stability was evaluated until 24 hours after the end of the assay. The standardization allowed the establishment of value references to α-Gal A in Pará State, from 4 to 28 nmoles/h/mL (plasma) and 20 to 96 nmoles/h/mg protein (leukocytes). α-Gal A enzyme was thermolabile and 1 minute of preincubation at 60ºC was sufficient to decrease 71.09% of its entire activity. The activity of the α-Gal A enzyme increased progressively according to incubation time, between 15 and 180 minutes. Its activity was better at pH 4,8, the Km value for the α-Gal A enzyme was 1.007 mM, and maximum reaction velocity was 30.9 nmoles/h/mL. The best storage temperature for plasma samples was -20ºC that showed less variation until 6 months. The enzyme method is stable and even after 24 hours, at room temperature, the fluorescence remained the same. All CKF patients with unknown cause presented α-Gal A activity between normal values, therefore neither was diagnosed with Fabry disease. Understanding the kinetics of the α-Gal A enzyme and its in vitro behavior will contribute to improvements in the laboratory diagnosis of Fabry disease, and provide a diagnostic baseline for the analysis of individuals affected by mutations in this enzyme.

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-23T15:40:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoCineticaCaptacao.pdf: 1215404 bytes, checksum: 148a3dc60f186dfc13a547ed24bfbf3e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-23T15:41:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoCineticaCaptacao.pdf: 1215404 bytes, checksum: 148a3dc60f186dfc13a547ed24bfbf3e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-23T15:41:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoCineticaCaptacao.pdf: 1215404 bytes, checksum: 148a3dc60f186dfc13a547ed24bfbf3e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011-08 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo descreve um método eficiente e simples utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) acoplada a detector de fluorescência para determinação dos parâmetros cinéticos da captação de glutamato (glu) no sistema nervoso central (SNC). O tecido retiniano embrionário de ave com sete dias de desenvolvimento foi incubado com concentrações conhecidas de glu (50-500 μM) por dez minutos. Os níveis do aminoácido derivado a partir de ortoftaldeído (OPA) no meio de incubação foram mensurados. Após avaliar a diferença entre a concentração de glu inicial e a final no meio, foi determinada a saturação do mecanismo de captação (Km = 8,2 e Vmax = 9,8 nmol/mg proteína/minuto). Estas determinações foram dependentes e independentes de sódio e temperatura, indicando que o mecanismo que regula a diminuição dos níveis de glu no SNC, é a captação via transportadores de alta afinidade. Além disso, o cloreto de zinco (ZnCl) (um inibidor do transportador glu/aspartato) foi utilizado em diversas concentrações e evocou diminuição da captação de glu. Com isto, destaca-se a elevada aplicabilidade desta metodologia. Além deste trabalho caracterizar metodologia alternativa para avaliar captação de glu no SNC usando CLAE, também pode ser importante ferramenta para estudos relacionados à caracterização do transporte do neurotransmissor durante injúrias no SNC. / The present study describes a simple and efficient method utilizing high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to fluorescence detection for the determination of kinetic parameters of glutamate uptake in nervous tissue. Retinal tissue obtained from 7-day-old chicks was incubated to known concentrations of glutamate (50-2000 μM) for 10 minutes, and the levels of the o-phtaldehyde (OPA)-derivatized neurotransmitter in the incubation medium were measured. By assessing the difference between initial and final concentrations of glutamate in the medium, a saturable uptake mechanism was characterized (Km = 8,2 e Vmax = 9,8 nmol/mg protein/minute). This measure was largely sodium- and temperature-dependent, strongly supporting that the mechanism for concentration decrements is indeed uptake by high-affinity transporters. Added to this, our results also demonstrated that zinc chloride (an inhibitor of glutamate/aspartate transporters) evoked a concentration dependent decrease in the glutamate uptake, demonstrating an elevate specificity of our methodology. Overall, the present work characterizes an alternative methodology to evaluate glutamate uptake in nervous tissue using HPLC. This approach could be an important tool for studies associated to the characterization of glutamate transport related with central nervous system injury

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T13:08:46Z No. of bitstreams: 2 Tese_AlteracoesHematologicasHistopatologicas.pdf: 2492282 bytes, checksum: 0dfe6d90eb350199cad05e1fd21fa858 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T13:09:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_AlteracoesHematologicasHistopatologicas.pdf: 2492282 bytes, checksum: 0dfe6d90eb350199cad05e1fd21fa858 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-31T13:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_AlteracoesHematologicasHistopatologicas.pdf: 2492282 bytes, checksum: 0dfe6d90eb350199cad05e1fd21fa858 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / FAPERJ - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Malária é uma das doenças infecciosas de maior causa de morte no mundo. Modelos experimentais são necessários para melhor compreensão de mecanismos envolvidos na patogênese de doenças e desenvolvimento de novos tratamentos. Galinhas infectadas com Plasmodium gallinaceum fornecem bom modelo de malária devido a proximidade filogenética com o Plasmodium de humano assim como aspectos clínicos comuns, como a malária cerebral. O presente estudo objetivou investigar a participação do óxido nítrico no desenvolvimento da malária aviária, através do tratamento ou não com aminoguanidina (AG - inibidor da enzima Óxido Nítrico Sintase) in vivo de galinhas infectadas experimentalmente com P. gallinaceum. Foi verificado sobrevida, hematologia clássica, bioquímica sérica e patologia nos animais no percurso da infecção. Observou-se maior sobrevida nos animais tratados com AG, apesar de parasitemias mais elevadas. Houve ainda diminuição nos parâmetros hematológicos e aumento no Volume Corpuscular Médio de hemácias, indicando resposta medular para anemia. Linfopenia e trombocitopenia foram detectadas em animais infectados, com menor proporção nos animais tratados. Monócitos, linfócitos e heterófilos apresentaram aumento de tamanho e alterações que indicam ativação. Trombócitos também aumentaram de tamanho durante a infecção e apresentaram morfologia atípica. Os animais tratados mostraram lesões mais brandas nas secções histopatológicas de cérebro, fígado e baço, além de produção diminuída de NO, mesmo em alta parasitemia, em relação aos animais não tratados. Esses resultados confirmam a participação do mediador químico óxido nítrico na patogênese da malária no modelo experimental aviário. / Malaria causes major losses to human populations in the world. Experimental models are needed for a better understanding of the pathological mechanisms of the diseases and the development of new treatments. Chickens infected with Plasmodium gallinaceum constitute an adequate malaria model due to the phylogenetic proximity of this parasite to human Plasmodium as well as similarities in disease manifestation, as cerebral malaria. The aim of the present study was to investigate the role of nitric oxide in avian malaria development in chickens experimentally infected with P. gallinaceum, treated or not with aminoguanidine (AG - nitric oxide synthase inhibitor). Survival, classical hematology, serum biochemistry and pathology was assayed during the development of the disease. The greatest survival was observed in animals treated with AG that also presented higher parasitemia. Decrease in hematological parameters and Mean Corspucular Volume of erythrocytes increase was showed, indicating bone marrow response to anemia. Lymphopenia and thrombocytopenia were detected in infected animals, but not at the same proportion in treated animals. Monocytes, lymphocytes and heterophils showed an increase in size and changes that indicated activation. Thrombocytes were also higher with the infection and with atypical morphology. Treated animals showed fewer lesions in histological sections of brain, liver and spleen, and NO production decreased, principally during high parasitemia, compared to untreated animals. These results characterize the participation of the chemistry mediator nitric oxide in the pathogenesis of malaria in the avian model.

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T13:20:19Z No. of bitstreams: 2 Tese_ AlteracoesNeuroquimicasTecido.pdf: 1670494 bytes, checksum: fb924142659122e339b77aae96a47bb7 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T13:20:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_ AlteracoesNeuroquimicasTecido.pdf: 1670494 bytes, checksum: fb924142659122e339b77aae96a47bb7 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-31T13:20:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_ AlteracoesNeuroquimicasTecido.pdf: 1670494 bytes, checksum: fb924142659122e339b77aae96a47bb7 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Malária Cerebral (MC) apresenta-se como uma severa complicação resultante da infecção por Plasmodium falciparum. Esta condição encontra-se comumente associada a disfunções cognitivas, comportamentais e motoras, sendo a retinopatia uma das mais graves conseqüências da doença. Diversos modelos experimentais já foram descritos no intuito de elucidar os mecanismos fisiopatológicos relacionados a esta síndrome, no entanto, estes ainda permanecem pouco compreendidos. Dentro deste contexto, o presente trabalho procurou investigar as alterações neuroquímicas envolvidas na patologia da MC. Os camundongos C57Bl/6 (fêmeas e machos) inoculados com ≈106 eritrócitos parasitados (PbA) apresentaram baixa parasitemia (15-20%) com sinais clínicos evidentes como: deficiência respiratória, ataxia, hemiplegia e coma seguido de morte, condizentes com o quadro de MC. A análise no tecido retiniano demonstrou uma diminuição nos níveis de GSH com 2 dias após a inoculação. Entretanto, essa diminuição não foi tão evidente com o decorrer da infecção (4º e 6º dias após infecção). Concomitante a este aumento durante o processo infeccioso, observamos um progressivo aumento na captação de 3H-glutamato (4º e 6º dia após infecção) por um sistema independente de Na+, sugerindo que o quadro de MC é responsável por um aumento na atividade de uma proteína transportadora. Dados obtidos com a imunofluorescência demonstram que além de aumentar a atividade do sistema de transporte, o quadro de MC também estimula o aumento na expressão do sistema xCG - no tecido retiniano. O presente trabalho demonstra ainda que estes eventos neuroquímicos no tecido retiniano são independentes de ativação inflamatória, visto que os níveis de TNF-α e expressão de NOS-2, apresentam-se alterados somente no tecido retiniano. / Cerebral Malaria (CM) is a severe complication resulting from Plasmodium falciparum infection. This condition has usually been associated with cognitive, behavioral and motor dysfunctions, being the retinopathy the most serious consequence resulting from the disease. The pathophysiologymechanisms underlying the complications of CM remain incompletely understood. Several experimental models of CM have already been developed in order to clarify those mechanisms related to this syndrome. In this context, the present work has been performed to investigate which possible neurochemistry alteration could be involved in the CM pathology. Male and female susceptible C57Bl/6 mice (6-8 week old) infected with ≈106 parasitized red blood cells (PbA), showed a low parasitaemia (15-20%), with evident clinical signs as: respiratory failure, ataxia, hemiplegia, and coma followed by animal death. In parallel to the clinical characterization of CM, retinal analysis demonstrated that the disease led to a decrease in the glutathione levels with 2 days post inoculation. However, this decrease was not so evident with the course of the infection (4º and 6º days post- infection). We further demonstrated that the increase in the glutathione levels during the infection is followed by the increase in the 3H-glutamate uptake rate (4º and 6º days post-infection), suggesting that CM condition causes an up-regulation of the transporters systems. Immunofluorescence data demonstrated that besides the activity increases, CM condition also stimulated the increase of the xCG- system expression in the retinal tissue. Furthermore, our findings also highlighted that in the retina the neurochemistries alterations occurs in a manner independent on the establishment of an inflammatory response, once TNF-α levels and NOS-2 expression were altered only in the cerebral tissue.

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T15:05:10Z No. of bitstreams: 2 Tese_CaracterizacaoMecanismoAcao.pdf: 1147374 bytes, checksum: 61235411f406363e4a12727de039617c (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-31T15:05:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_CaracterizacaoMecanismoAcao.pdf: 1147374 bytes, checksum: 61235411f406363e4a12727de039617c (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-31T15:05:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_CaracterizacaoMecanismoAcao.pdf: 1147374 bytes, checksum: 61235411f406363e4a12727de039617c (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / EGPA - Escola de Governo do Estado do Pará / Inflamação é a resposta do organismo a injúria e perigo. Apesar de a inflamação ser um mecanismo de defesa do organismo, a intensidade e/ou a persistência desta resposta pode ser maléfica para o indivíduo. Neste contexto, os produtos naturais, são importantes fontes de moléculas biologicamente ativas, e é considerado, um recurso promissor para a descoberta de novos fármacos. Baseado em estudos etnofarmacológicos, foi isolado da planta Brosimum acutifolium, popularmente conhecida como “Mururé da Terra-Firme” o flavonóide BAS1 (4’-hidroxi,7,8-(2’’,2”-dimetil-pirano)-flavana), ainda não descrito na literatura anteriormente. Diante disso, o presente trabalho caracterizou o mecanismo de ação antiinflamatória do flavonóide BAS1, em macrófagos murinos estimulados. Macrófagos foram ativados com LPS e IFN-γ. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio do MTT, os níveis dos mediadores inflamatórios foram determinados por ELISA (TNF-α, PGE2, IL-10), através da reação de Griess (NO) e a expressão de proteínas por Western blot. Nossos resultados demonstraram que BAS1 apresentou efeito citotóxico apenas para altas concentrações (100 μM), inibiu a produção de NO (95%), inibiu a expressão de NOS-2, reduziu a produção de TNF-α (39%) e PGE2(57%), mas não alterou a produção de IL-10 em macrófagos ativados. Dessa forma, uma importante contribuição deste estudo, foi evidenciar o efeito farmacológico do flavonóide BAS1, bem como, fundamentar o uso da planta Brosimum acutifolium, como antiinflamatória em nossa região. Somado a isso, a produção de extrato desta planta poderia fornecer um antiinflamatório eficaz e com menor custo para a população local. O presente trabalho, também pode contribuir para a determinação de nova classe de agente antiinflamatório, baseado em flavonóides naturais, como BAS1. / Inflammation is the body's response to injury and danger. Even though it’s a body defensive mechanism, this response’s intensity and/ or persistency might be harmful for an individual. In such context, natural products are important sources of biologically active molecules, and they’re considered promising resources for the discovering of new drugs. Based on ethno pharmacological studies, BAS1 flavonoid (4'-hydroxy, 7, 8 - (2'', 2''-dimethyl-pyran)-flavan), which hasn’t been described by literature yet, was isolated from the Brosimum acutifolium plant, popularly known as "mururé da terra-firme." Facing this, the present study aimed at characterizing the anti-inflammatory mechanism of action of BAS1 flavonoid in stimulated murine macrophages. Macrophages were activated with LPS and IFN-γ, cell viability was evaluated by the MTT, levels of inflammatory mediators were determined by ELISA (TNF-α, PGE2, IL-10) through Griess reaction (NO) and protein expression by Western blotting. The results demonstrate that BAS1 only has cyclotoxic effects at high concentrations (100 μM) inhibited NO production (95%), negatively regulated the expression of NOS-2, reduced the TNF-α production (39%) and PGE2 (57%), but didn’t with IL-10 in activated macrophages. Thus, demonstrating the pharmacological effect of BAS1 flavonoid, as well as supporting the usage of the Brosimum acutifolium plant as an anti-inflammatory in our region was an important contribution from this study. Furthermore, the production of this plant’s extract could provide the local population with an effective and affordable anti-inflammatory. The present work may also contribute to the establishment of a new classification of anti-inflammatory agents, based on natural flavonoids, such as BAS1.