Os objetivos da tese foram comparar a dinâmica folicular e luteínica (Experimento 1), bem como a eficiência reprodutiva (Experimento 2) de búfalas leiteiras submetidas a protocolos de IATF à base de progesterona/estrógeno (P4/E2) e eCG durante as estações reprodutivas favorável (ERF; maio, junho e julho) e desfavorável (ERD; novembro, dezembro e janeiro) do ano. No Experimento 1 foram utilizadas 51 búfalas leiteiras de uma propriedade e no Experimento 2, 351 búfalas leiteiras de 5 propriedades. Para comparar o efeito das ER, cada propriedade teve semelhante número de animais submetidos à IATF nas respectivas ERF e ERD, tanto no Experimento 1 (n=25 vs. n=26) quanto no Experimento 2 (n=168 vs. n=183). Todas as propriedades se localizavam na região do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo. Em dias aleatórios do ciclo estral (D-12; 16:00 h), todas as búfalas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1 g de P4 (iP4; Sincrogest&reg;, Ourofino Agronegócio) mais 2,0 mg de benzoato de estradiol i.m. (Sincrodiol&reg;, Ourofino Agronegócio). No D-3 (16:00 h), as fêmeas receberam 0,53 mg de PGF2&#945; i.m. (Cloprostenol, Sincrocio&reg;, Ourofino Agronegócio) e 400 UI de eCG i.m. (Novormon&reg; MSD Saúde Animal), seguido de remoção do dispositivo de progesterona. No D-1 (16:00 h), 10 &micro;g de acetado de buserelina (GnRH, Sincroforte&reg; Ourofino Agronegócio) foram administrados i.m. A IATF foi realizada 16 horas após a administração de GnRH (D0; 8:00 h). No D0 foram determinados o intervalo de dias em lactação (DEL) e o escore de condição corporal das fêmeas (ECC; 1-5). Avaliações ultra-sonográficas (Chison D600Vet, China) foram realizadas no Experimento 1 para determinar: diâmetro do folículo dominante entre a retirada do iP4 e a IATF (&#216;FD), o diâmetro do folículo ovulatório (&Oslash;FO), o momento da ovulação, a dispersão das ovulações, a presença e o diâmetro do corpo lúteo (&#216;CL) após a ovulação. No Experimento 2, determinaram-se a taxa de ciclicidade (presença de corpo lúteo no D-12 e/ou no D-3); o diâmetro do folículo dominante nos D-3 e D0 (&#216;FD); a taxa de ovulação e diâmetro do corpo lúteo 10 dias após a IATF (&#216;CL D+10); os diagnósticos de gestação aos 30 (P/IA 30 d) e 45 dias (P/IA 45 d) após a IATF, além da taxa de mortalidade embrionária (ME) entre 30 e 45 dias, a mortalidade fetal (MF) entre 45 dias e o nascimento e a perda gestacional (PG) entre 30 dias e o nascimento. As variáveis contínuas foram apresentadas como média e erro padrão da média (média±EPM) e as frequências como porcentagem [% (n/n)]. A comparação entre as variáveis foi realizada por análise de variância (ANOVA), por meio do programa SAS&reg;. Foi considerada diferença quando P < 0,05. No Experimento 1, observou-se que a dinâmica ovariana não foi influenciada pelas respectivas ERF e ERD para as seguintes variáveis: &#216;FD (0 h 10,3±0,4 vs. 9,9±0,5 mm; 24 h 11,8±0,5 vs. 12,0±0,4; 48 h 12,8±0,5 vs. 13,2±0,4; e 60 h 13,8±0,6 vs. 13,1±0,5; P=0,80); &#216;FO (14,3±0,4 vs. 14,2±0,3 mm; P=0,94); momento da ovulação (76,5±1,9 vs. 72,0±2,5 h; P=0,85); dispersão das ovulações (24 |- 48 h 0,0 vs. 0,0%; 48 |- 60 h 12,5 vs. 37,5%; 60 |- 72 h 41,7 vs. 33,3%; 72 |- 84 h 41,7 vs. 25,0%; 84 |- 96 h 4,2 vs. 0,0%; e 96 |- 108 h 0,0 vs. 4,2%; P=0,18) e &#216;CL (D+6 17,3±0,5 vs. 16,9±0,4; D+10 21,5±0,6 vs. 18,4±0,5; e D+14 20,6±0,6 vs.19,9±0,6; P=0,06). No Experimento 2, pôde-se observar que apesar das búfalas apresentarem semelhança em DEL (111,1±8,8 vs. 144,3±8.6 dias; P=0,27) e ECC (3,3±0,0 vs. 3,3±0,0; P=0,41) nas respectivas ERF e ERD, houve diferença nas taxas de ciclicidade [76,2 (128/168) vs. 42,6% (78/183); P=0,02]. Nenhuma das outras respostas diferiu entre as ERF e ERD, respectivamente: &#216;FD D-3 (9,6±0,2 vs. 9,8±0,2 mm; P=0,35); &#216;FD D0 (13,1±0,2 vs. 13,2±0,2 mm; P=0,47); taxa de ovulação [86,9 (146/168) vs. 82,9% (152/182); P=0,19]; &#216;CL D+10 (19,0±0,3 vs. 18,4±0,3 mm; P=0,20); P/IA 30 d [66,7 (112/168) vs. 62,7% (111/177); P=0,31]; P/IA 45 d [64,8 (107/165) vs. 60,2% (106/176); P=0,37]; ME [1,8 (2/111) vs. 3,6% (4/110); P=0,95]; MF [21,9 (18/82) vs. 8,0% (7/87); P=0,13]; e PG [23,8 (20/84) vs. 12,1% (11/91); P=0,13]. Foi possível concluir que búfalas leiteiras apresentam semelhantes respostas ovarianas ao protocolo de sincronização e equivalente eficiência reprodutiva nas ERF e ERD do ano, quando submetidas a programas de IATF à base de P4/E2 e eCG. / This thesis aimed to compare the follicular and luteal dynamics (Experiment 1) and reproductive efficiency (Experiment 2) of dairy buffaloes submitted to TAI protocols based on progesterone/estrogen (P4/E2) and eCG during the breeding (On-BS; May, June and July) and nonbreeding seasons (Off-BS; November, December and January). In Experiment 1, 51 dairy buffalo of one farm were used, and in Experiment 2, 351 dairy buffaloes of 5 farms were used. To compare the effect of BS, each property had similar number of animals submitted to TAI in each, both in Experiment 1 (n = 25 vs. n = 26) as in Experiment 2 (n = 168 vs. n = 183). All properties were located in the Vale do Ribeira, State of São Paulo, Brazil. On random days of the estrous cycle (D-12; 4:00 PM), all buffaloes received an intravaginal device containing 1 g of P4 (Sincrogest&reg;, Ourofino Agronegócio) plus 2.0 mg of estradiol benzoate im (Sincrodiol&reg;, Ourofino Agronegócio). On D-3 (4:00 PM), females received 0.53 mg of PGF2&#945; im (Cloprostenol, Sincrocio&reg;, Ourofino Agronegócio) and 400 IU of eCG im (Novormon&reg;, MSD Animal Health), followed by removal of progesterone device. On D-1 (4:00 PM), 10 mg of buserelin acetate (GnRH Sincroforte&reg;, Ourofino Agronegócio) were administered im. The TAI was performed 16 hours after application of GnRH (D0; 8:00 AM). At the beginning of each protocol (D-12), it was recorded the number of days in milk (DIM) and body condition score of females (BCS, 1-5). Ultrasonography (Chison D600Vet, China) were performed in Experiment 1 to determine: the diameter of the dominant follicle between withdraw of iP4 and TAI (&#216;DF), the diameter of the ovulatory follicle (&#216;OF), the time of ovulation, the dispersion of ovulation, and the presence and diameter of the corpus luteum (&#216;CL) after ovulation. In Experiment 2, was determined cyclicity rate (the presence of corpus luteum in the D-12 and/or D-3), diameter of the dominant follicle in the D-3 and D0 (&#216;DF), ovulation rate, diameter of the corpus luteum 10 days after artificial insemination (&#216;CL D+10); pregnancy rates to 30 (P/AI 30 d) and 45 days (P/AI 45 d) after TAI, embryonic mortality (EM) between 30 and 45 days, fetal mortality (FM) between 45 days and birth, and pregnancy loss (PL) between 30 days and birth. Continuous variables were presented as mean and standard error of the mean (mean±SEM) and frequencies as a percentage [% (n/n)]. The comparison between variables was performed through analysis of variance (ANOVA) using the SAS&reg; program. Difference was considered when P < 0.05. In Experiment 1, it was found that the ovarian dynamics was not influenced by the respective On-BS and Off-BS for the following variables: &#216;DF (0 h 10.3±0.4 vs. 9.9±0.5 mm; 24 h 11.8±0.5 vs. 12.0±0.4; 48 h 12.8±0.5 vs. 13.2±0.4; and 60 h 13.8±0.6 vs. 13.1±0.5; P = 0.80); &#216;OF (14.3 ± 0.4 vs. 14.2 ± 0.3 mm; P = 0.94); timing of ovulation (76.5 ± 1.9 vs. 72.0 ± 2.5 h; P = 0.85); dispersion of ovulations (24 |- 48 h 0.0 vs. 0.0%; 48 |- 60 h 12.5 vs. 37.5%; 60 |- 72 h 41.7 vs. 33.3%; 72 |- 84 h 41.7 vs. 25.0%; 84 |- 96 h 4.2 vs. 0.0%; and 96 |- 108 h 0.0 vs. 4.2%; P = 0.18) and &#216;CL (D+6 17.3±0.5 vs. 16.9±0.4; D+10 21.5±0.6 vs. 18.4±0.5; and D+14 20.6±0.6 vs.19.9±0.6; P = 0.06). In Experiment 2, it was observed that despite the similarity of DIM (111.1 ± 8.8 vs. 144.3 ± 8.6 d, P = 0.27) and BCS (3.3 ± 0.0 vs. 3.3 ± 0.0; P = 0.41) on respective On-BS Off-BS, buffalo females showed different cyclicity rates [76.2 (128/168) vs. 42.6% (78/183); P = 0.02]. None of the other answers differ between On-BS and Off-BS respectively: &#216;DF D-3 (9.6 ± 0.2 vs. 9.8 ± 0.2 mm; P = 0.35); &#216;DF D0 (13.1 ± 0.2 vs. 13.2 ± 0.2 mm; P = 0.47); ovulation rate [86.9 (146/168) vs. 82.9% (152/182); P = 0.19]; &#216;CL + D 10 (19.0 ± 0.3 vs. 18.4 ± 0.3 mm, P = 0.20); P/AI d 30 [66.7 (112/168) vs. 62.7% (111/177); P = 0.31]; P/AI d 45 [64.8 (107/165) vs. 60.2% (106/176); P = 0.37]; EM [1,8 (2/111) vs. 3.6% (4/110); P = 0.95]; FM [21.9 (18/82) vs. 8.0% (7/87); P = 0.13]; and PL [23.8 (20/84) vs. 12.1% (11/91); P = 0.13]. It was concluded that dairy buffaloes have similar responses to ovarian synchronization protocol and equivalent reproductive efficiency during OnBS and OffBS, when subjected to TAI programs based on P4 / E2 and eCG.

No presente trabalho estudou-se o metabolismo ruminal e a fermentação com produção de gases e de metano avaliadas pela técnica de ex-situ (micro-rúmen) em duas espécies de ruminantes domésticos, o bovino e o bubalino, visando contribuir com a importante área da nutrição de ruminantes na geração de dados para realização de uma alimentação mais eficiente e econômica desses animais. Para tanto, o trabalho está apresentado em forma de capítulos com uma Introdução sobre o tema, uma revisão da literatura e o Capítulo 3 redigido na forma de um artigo científico para futura publicação. Na revisão da literatura (Capítulo 2) são apresentadas discussões sobre os principais trabalhos publicados em literatura especializada em importantes aspectos, subdivididos nos seguintes tópicos: Diferenças fisiológicas no processo digestivo entre bovinos e bubalinos; a proteína na nutrição de ruminantes; a uréia como fonte proteica; fermentação ruminal e seus produtos e fatores que influenciam a fermentação ruminal. Ressalta-se, porém, que há escassez de trabalhos publicados comparando as duas espécies de ruminantes nessa área, especialmente com o uso de uréia em dietas. Como os ruminantes possuem a capacidade de transformar fonte de nitrogênio não proteico em proteína de alto valor biológico há necessidade de explorar essa vantagem da espécie para diminuir os custos de produção sem afetar a produção desses animais. Há vantagens e desvantagens do uso da uréia na alimentação animal, mas é necessário elucidar as diferenças que existem nas duas espécies quando utilizamos essa fonte de nitrogênio. Neste estudo foi possível caracterizar o perfil da fermentação ruminal das duas espécies estudadas. A produção de metano pelos ruminantes é apontada como fator contribuidor para o efeito estufa, e neste trabalho avaliamos esses parâmetros tanto de metabolismo como de fermentação existentes nessas espécies e a influência da uréia nesses sistemas. A utilização de uréia em uma dieta com 50% de volumoso promoveu maior consumo de matéria seca e extrato etéreo e maior produção de ácido propiônico com menos relação acético:propiônico, não influenciando nos coeficientes de digestibilidade dos nutrientes, na dinâmica ruminal e no pH em relação às dietas com 50% de volumoso sem uréia e com 80% de volumoso com uréia. Além disso, essa última dieta promoveu redução da produção de metano em relação à dieta contendo 50% de volumoso e 50% de concentrado com nitrogênio proteico com farelo de soja, modulando de forma a evidenciar sua importância na nutrição de ruminantes, com redução de custos de produção e dos efeitos deletérios causados pelo gás metano ao meio ambiente. / We have studied the ruminal metabolism fermentation with gas production and methane measured by ex-situ technique (micro-rumen) in two species of domestic ruminants, cattle and buffaloes to contribute to the important area of ruminant nutrition in order to become more efficient and economical feeding of these animals. To this end, the work is presented in the form of chapters with an introduction on the topic, a literature review and Chapter 3 written as a scientific paper for future publication. In the literature review (Chapter 2) discussions of important papers published in specialized literature is divided into the following topics: cattle vs buffaloes - physiological differences; protein in ruminant nutrition; urea as the protein source; ruminal fermentation and its products; factors that influence the rumen fermentation,. It is noteworthy, however, that there is scarcity of studies comparing the two ruminant species in this area, especially with the use of urea in diets. As ruminants have the ability to transform source of non-protein nitrogen in protein of high biological value there is need to explore this kind of advantage to reduce production costs without affecting the total production. There are advantages and disadvantages of the use of urea in animal feed, but it is necessary to elucidate the differences between the two animal species when using this source of nitrogen. In this study it was possible to characterize the profile of ruminal fermentation of both species. Methane production by ruminants is implicated as contributing factor to the greenhouse effect, and in this paper we have evaluated these parameters as fermentation metabolism in buffalo and cattle and the influence of urea on feeding systems. The use of urea in a diet with 50% forage promoted greater dry matter and fat intake and increased propionic acid production with less acetic:propionic ratio, but no influence was observed in the digestibility of nutrients, ruminal pH and rumen dynamics when compared to diets with 50% forage without urea and 80% of forage with urea. Moreover, this latest diet promoted reduction of methane production in relation to the diet containing 50% forage and 50% concentrate without urea, modulating in order to highlight its importance in ruminant nutrition, reducing costs production and the damaging effects to the environment by emission of methane gas.

Este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do uso de dietas com diferentes balanço cátion-aniônico dietético (BCAD) na produção e na qualidade do leite de búfala, nas características fermentativas através da técnica de produção de gás in vitro, além de traçar perfil nutricional de búfalas em lactação em propriedades de bubalinocultura da região central do Estado de São Paulo. Dessa forma, a tese está apresentada na forma de 11 capítulos, sendo que os capítulos 1, 2 e 11 descrevem a introdução, revisão de literatura e considerações finais, respectivamente. Os demais descrevem diferentes experimentos realizados sob a temática geral de 2012 a 2014. O capítulo 3 contém a avaliação de quatro dietas catiônicas com alto BCAD (+362, +370, +379 e +390 mEq/kg/MS) formuladas conforme rendimento do queijo muçarela para 350 búfalas, divididas em dois grupos (búfalas com menos e acima de 100 dias de lactação no início do experimento) durante período experimental de 120 dias. Dez tratamentos foram designados adotando-se diferentes formas de sistema de alimentação durante todo o experimento. A covarivavel idade não influenciou na produção e qualidade do leite das búfalas, exceto na contagem de células somáticas (CCS) e condutividade elétrica nas búfalas &le;100 dias de lactação. Houve diferenças significativas entre os tratamentos para a produção de leite diária em ambos os grupos de búfalas. Somente a lactose apresentou diferenças entre os tratamentos em búfalas no início da lactação. A forma do sistema de alimentação com alteração das dietas contendo diferentes BCAD a cada 30 dias não produz efeitos na produção e qualidade do leite em búfalas no estágio inicial da lactação, porém aumenta a produção de leite em búfalas acima de 100 dias de lactação. No capítulo 4 a produção diária e a qualidade do leite foram avaliadas em 297 búfalas, divididas em dois grupos, um com menos de 100 e outro de 100 a 220 dias de lactação recebendo duas dietas catiônicas com baixo BCAD: D121 (+121 mEq/kg/MS) e D164 (+164 mEq/kg/MS) em dois sistema de alimentação, definindo quatro tratamentos. O BCAD influenciou na produção de leite das búfalas, entretanto, o menor BCAD produziu melhoria na produção de leite. O BCAD mais elevado promoveu aumentos nos teores de proteína, sólidos totais (ST), extrato seco desengordurado (ESD) e CCS nas búfalas de 100 a 200 dias de lactação. No capítulo 5 quatro dietas aniônicas com BCAD de -61, -67, -73 e -100 mEq/kg/MS foram avaliadas em 259 búfalas, divididas em dois grupos, com 100 a 200 dias e acima de 200 dias de lactação. O BCAD negativo não interferiu na produção de leite diária e na qualidade do leite das búfalas, porém, influenciou no teor de gordura e lactose do leite em ambos os grupos de lactação e ainda nos teores de proteína, sólidos totais e CSS nas búfalas acima de 200 dias de lactação. No capítulo 6, foram avaliados três níveis crescentes de BCAD de +40, +120 e +190 mEq/kg/MS na produção, qualidade e minerais no leite de búfalas, não observando alterações significantes na produção, qualidade e minerais no leite de búfala, exceto na condutividade elétrica, acidez titulável e nos teores de Na e Cl. No capítulo 7 realizou-se a caracterização da produção, qualidade e minerais do leite na curva de lactação de búfalas em dietas catiônicas com baixo BCAD. Os dados mostraram que a curva da lactação iniciou-se ascendente, com pico no 2°. e 3°. mês e posterior declínio com maior produção de leite nos primeiros 90 dias da lactação (40%). As búfalas paridas no segundo semestre apresentaram média diária de produção de leite ao longo da lactação superior que as paridas no primeiro semestre com a qualidade do leite semelhante em ambas os grupos. Os teores de gordura, proteína, ST e ESD ao longo da lactação aumentaram no leite e depois se mantiveram constantes, enquanto que a lactose diminuiu e a CCS não se alterou ao longo do experimento. Os níveis de macrominerais no leite de búfala foram constantes durante a lactação, exceto o cloro que sofreu queda. O Ca e o K apresentaram-se em maior concentração. No capítulo 8 é descrita a caracterização da produção acumulada e diária do leite de búfala na curva de lactação em função da duração da lactação, número da lactação e faixa etária dos animais, recebendo dieta com BCAD médio de +83 mEq/kg/MS. A curva da lactação em búfalas caracterizou-se pelo crescimento da produção de leite até os primeiros 90 dias, seguida de um declínio gradativo até o final da lactação, não existindo influência da duração da lactação, número da lactação e da faixa etária dos animais. Foram identificadas quatro fases com diferentes níveis de queda mensal de produção em relação ao mês anterior (aumento; leve, médio e forte declínios). Búfalas mais velhas acima de 11 anos de idade apresentam declínio mais acentuado que búfalas mais jovens. No início da lactação até 90 dias, búfalas com maior número de lactações e faixa etária produziram mais leite que as mais jovens. No capítulo 9 compararam-se dietas com BCAD de +110, +220 e +440 mEq/kg/MS na cinética de fermentação ruminal, por meio de parâmetros da produção de gases totais e metano, degradabilidade da matéria seca e orgânica e produção de ácidos graxos de cadeia curta e nitrogênio amoniacal em 24 e 96 horas de inoculação, com a técnica de produção de gases in vitro, usando inóculo de conteúdo ruminal de bubalinos. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos em qualquer variável avaliada. As ausências de efeitos sugerem ações outras do BCAD sobre o metabolismo animal do que sobre o metabolismo ruminal na produção de efeitos sobre o desempenho produtivo dos animais. Concluindo esses estudos, o capítulo 10 descreve a avaliação do sistema de exploração de leite de búfalas de quatro propriedades rurais, compreendendo um total de 794 búfalas, com caracterização da composição de 11 tipos de dietas e composição químico-bromatológica de ingredientes das dietas utilizadas. As búfalas apresentaram ingestão de matéria seca média diária de 17,8 kg por animal (2,6% do peso vivo e 91 g MS/kg0,75) e produção de leite média de 8,1 kg/animal/dia com conversão alimentar de 2,2 kg de MS por kg de leite produzido/animal/dia. / This study aimed to evaluate the effects of feeding diets with different dietary cation-anion difference (DCAD) in the production and quality of buffalo milk, in the fermentation characteristics by in vitro gas production technique, and in addition to showing nutritional profile lactating buffalo on farms located in the central region of São Paulo state, Brazil. Thus, this thesis is presented in the form of eleven sections, where the Chapters 1, 2 and 11 describe the introduction, literature review, and final considerations, respectively. The others describe different experiments performed under the general theme from 2012 to 2014. The Chapter 3 contains the evaluation of four cationic diets with high DCAD (+362, +370, +379 and +390 mEq / kg / MS) formulated as mozzarella cheese yield basis in 350 buffaloes, divided into two groups (buffaloes less and above 100 days of lactation at beginning of the experiment) during the experimental period of 120 days. Ten treatments were assigned adopting different ways feeding system throughout the experiment. The covariate age did not influence the production and quality of milk, except in somatic cell counting (SCC) and electrical conductivity in buffaloes &le;100 days of lactation. Significant differences were observed between treatments for daily milk production in both groups buffaloes. Only lactose has differed between treatments in buffaloes in early lactation. The feeding system with changing diets containing different DCAD every 30 days has no effect on production and quality of milk in buffalo in the early stage of lactation, but it increases milk production in buffalo over 100 days of lactation. In chapter 4, the daily production and milk quality were evaluated in 297 buffaloes, divided into two groups, one with less than 100 and another 100-220 days of lactation receiving two cationic diets with low DCAD: D121 (+121 mEq / kg / DM) and D164 (+164 meq / Kg / MS) to two feeding systems, defining four treatments. DCAD has influenced the milk production of buffaloes. Lower DCAD has produced higher milk production. The highest DCAD has promoted increases in protein, total solids (TS), solid no fat (SNF) and SCC in buffaloes with 100-200 days of lactation. In Chapter 5, four anionic diets with DCAD of -61, -67, -73 and -100 mEq / kg / DM were evaluated in 259 buffaloes, divided into two groups: between 100 - 200 days and over 200 days of lactation. The negative DCAD has not interfered in daily milk production and milk quality in buffaloes, however, has influenced the fat and lactose contents of milk in buffalo in both groups of lactation and also in protein levels, and total solid and SCC of buffalo over 200 days of lactation. In Chapter 6, were evaluated three increasing levels of DCAD: +40, +120 and +190 mEq / kg / DM in production, quality and minerals in buffalo milk. No significant differences were observed in production, quality and minerals in buffalo milk except in electrical conductivity, acidity and levels of Na and Cl. In Chapter 7, the characterization of production, quality and minerals of milk along the lactation curve were evaluated in buffaloes on cationic diets with low DCAD. The data showed that the lactation curve started rising, peaking on the 2nd. and 3rd. month and subsequent decline with higher milk production in the first 90 days of lactation (40%). The calved buffaloes in the second half of the year had higher average daily milk production along the lactation than that calved in the first half with the quality of milk similar in both groups. The fat, protein, TS and SNF increased in milk throughout the lactation and, then remained constant, while lactose decreased and the SCC did not change. The buffalo milk macrominerals have maintained the same levels along lactation, except chlorine that dropped. Ca and K showed up in higher concentration. In Chapter 8 describes the characterization of accumulated and daily production of buffalo milk during lactation curve as a function of lactation period, number of lactation and age of the animals fed diet with medium DCAD of +83 mEq/kg/DM. The lactation curve in buffaloes characterized by the growth of milk production until the first 90 days, followed by a gradual decline until the end of lactation, with no influence of lactation period, lactation number and age of the animals. Four phases have been identified with different monthly decline levels of production compared to the previous month (increase; slight, medium and, strong declines). Older buffaloes above 11 years of age had steeper decline than younger buffaloes. In early lactation up to 90 days, buffaloes with more lactations and age have produced more milk than younger. In Chapter 9, three diets of DCAD +110, +220 and +440 mEq/kg DM were evaluated by ruminal fermentation kinetics, involving total production and methane gases, degradability of dry matter and organic matter and fatty acids of short chain and ammonia nitrogen productions in 24 and 96 hours of inoculation, by using in vitro gas production technique with inoculum of rumen contents of buffalo. No differences were observed between treatments. No observed effects suggest other actions of DCAD on animal metabolism than on ruminal metabolism in producing productive performance of the animals. Completing these studies, Chapter 10 describes the evaluation of buffalo milk operating system of four rural properties, comprising a total of 794 buffaloes, with characterization of the composition of 11 types of diets and chemical composition of the diet ingredients used. The buffaloes had dry matter intake daily average of 17.8 kg per animal (2.6% of body weight and 91 g DM / kg0.75) and average milk production of 8.1 kg / animal / day with feed conversion 2.2 kg of dry matter per kg of produced milk / animal / day.

Foram comparadas diferentes doses de eCG e hCG associadas a dispositivos intravaginais de progesterona (DIV), para avaliar o crescimento folicular e a ovulação, bem como a taxa de prenhez após a IATF e a funcionalidade do CL 12 dias após a sincronização em búfalas, durante a estação reprodutiva desfavorável. Para tanto, foram realizados cinco experimentos. Nos experimentos 1, 2 e 4, os grupos foram estabelecidos em função da ciclicidade dos animais, avaliada pelas concentrações plasmáticas de progesterona mediante colheita de sangue por punção da veia jugular no D-10 e no D0. Nos experimentos 3 e 5, os grupos foram estabelecidos em função da condição corporal e da ordem de parto. Em todos os experimentos as búfalas receberam um DIV associado a 2mg de Benzoato de Estradiol (BE) no D0. No D9 o DIV foi retirado, e procedeu-se à administração de 0,150mg de prostaglandina (PGF). No experimento 1, as búfalas do G1 (Controle, n=9) e do G2 (eCG, n=10) receberam 1500UI de hCG no D11; o G2 recebeu também 500UI de eCG no D-9; a IATF foi realizada no D12. Nesse experimento, o diâmetro máximo do folículo dominante (DMFD) foi de 12,6 ± 3,0 e 13,4 ± 1,7mm para o G1 e o G2, respectivamente (P>0,05); o diâmetro do folículo ovulatório (DFO) foi de 14,9 ± 2,9 (G1) e de 14,0 ± 1,6mm (G2; P>0,05); o intervalo entre a retirada do DIV e a ovulação (IROV) foi de 78,0 ± 12 (G1) e 68,0 ± 9,0h (G2; P>0,05); a taxa de ovulação (TO) foi de 44,4 (G1) e 70,0% (G2; P> 0,05). A área do CL (ACL) foi de 31,6 ± 19,9 (G1) e de 29,9 ± 9,7mm2 (G2; P>0,05); a concentração plasmática de P4 (P4) foi de 1,3 ± 1,4 (G1) e 2,0 ± 1,6ng/ml (G2; P>0,05); a taxa de prenhez (TP) foi de 22,2 (G1) e 60% (G2; P=0,11). No experimento 2, as búfalas do G1 (1500 UI de hCG; n=21) e do G2 (1000UI de hCG; n=21) receberam 500UI de eCG no D9; no D11, o G1 recebeu 1500UI de hCG e o G2 1000UI de hCG. Os resultados desse experimento são relatados a seguir: DMFD de 12,4 ± 2,3 (G1) e 12,2 ± 2,5mm (G2; P>0,05); DFO de 12,6 ± 2,3 (G1) e 12,5 ± 2,7mm (G2; P>0,05); IROV de 67,7 ± 18,1 (G1) e 72,8 ± 16,7h (G2; P>0,05); TO de 67,7 (G1) e 67,7% (G2; P>0,05); ACL de 24,8 ± 9,2 (G1) e 28,3 ± 17,2mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,3 ± 1,4 (G1) e 2,4 ± 1,3ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 3, os animais foram tratados de forma idêntica àqueles do experimento 2, porém as búfalas do G1 (n=83) e do G2 (n=91) receberam a IATF no D12. Nesse experimento, foi obtida TP de 53 (G1) e de 53,8% (G2; P>0,05). No Experimento 4, as búfalas do G1 (n=10) receberam 500UI e as do G2 (n=11) 400UI de eCG; os dois grupos receberam 1000UI de hCG no D11. Esse experimento teve como resultados: DMFD de 13,2 ± 1,4 (G1) e 13,8 ± 1,8mm (G2; P>0,05); DFO de 13,7 ± 1,1 (G1) e 14,2 ± 1,5mm (G2; P>0,05); IROV de 71,1 ± 11,7 (G1) e 75,0 ± 5,5h (G2; P>0,05); TO de 70,0 (G1) e 72,7% (G2; P>0,05); ACL de 28,4 ± 8,6 (G1) e 31,6 ± 10,3mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,7 ± 1,2 (G1) e 3,3 ± 2,9ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 5 (G1/n=54; G2/n=51) foi adotado o mesmo protocolo do experimento 4, porém as búfalas receberam a IATF no D12. Esse experimento resultou em TP de 42,6 (G1) e 43,1% (G2; P>0,05). Assim, foi possível concluir que as concentrações de 400UI de eCG e de 1000UI de hCG, associadas ao DIV, foram suficientes para induzir o crescimento folicular, a ovulação e a prenhez em búfalas durante o período reprodutivo desfavorável. / Different dosage of eCG and hCG were compared in association to progesterone intravaginal device (IVD) in female buffalo during the off breeding season with the purpose of evaluating the follicular growing and ovulation as well as the pregnancy rate after FTAI and functionality of the CL, twelve days after the synchronization. For this, 5 experiments were done. For the establishments of the groups in the experiments 1,2 and 4 blood samples were collected for the analysis of plasmatic concentrations of P4 on D -10 and D0 to verify the cyclicity. In the experiments 3 and 5 the groups were established due body condition score and number of calving. In all the experiments the buffaloes received a IVD associated with 2mg of estradiol benzoate (EB) on D0. On D9 the IVD was extracted and it was followed by the administration of 0,150mg of prostaglandin (PGF). In the exp. 1 the buffaloes of G1 (control, n=9) and G2 (eCG, n=10) received 1500IU of hCG on D11. On G2 was administrated 500IU of eCG on D9. The FTAI was done on D12. The maximun diameter of dominant follicle (MDDF) was 12.6 ± 3.0 and 13.4 ± 1.7mm to the G1 and G2, respectively (P>0,05). The diameter of the ovulatory follicle (DOF) was 14.9 ± 2.9 (G1) and 14.0 ± 1.6mm (G2; P>0,05). The interval between the device withdrawn and ovulation (DWO) was 78.0 ± 12.0 (G1) and 68.0 ± 9.0h (G2; P>0,05). The ovulation rate (OR) was 44.4 (G1) and 70.0% (G2; P>0,05). The CL area (CLA) was 31.6 ± 19.9 (G1) and 29.9 ± 9.7mm2 (G2; P>0,05). The plasmatic concentration of P4 (P4) was 1.3 ± 1.4 (G1) and 2.0 ± 1.6ng/ml (G2; P>0,05). The pregnancy rate (PR) was 22.2 (G1) and 60% (G2; P=0,11). In the exp. 2 the buffalo females of G1 (1500IU of hCG; n=21) and G2 (1000IU of hCG; n=21) received 500IU of eCG on D9. On D11, G1 received 1500IU of hCG and G2 1000IU of hCG. The MDDF was 12.4 ± 2.3 (G1) and 12.2 ± 2.5mm (G2; P>0,05), the DOF was 12.6 ± 2.3 (G1) and 12.5 ± 2.7mm (G2; P>0,05), DWO was 67.7 ± 18.1 (G1) and 72.8 ± 16.7h (G2; P>0,05), the OR was 67.7 (G1) and 67.7% (G2; P>0,05), the CLA was 24.8 ± 9.2 (G1) and 28.3 ± 17.2mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.3 ± 1.4 (G1) and 2.4 ± 1.3ng/ml (G2; P>0,05). The exp. 3 was identical to exp.2, although the animals of G1 (n=83) and G2 (n=91) received the FTAI on D12. The PR was 53.0 (G1) and 53,8% (G2; P>0,05). In exp. 4, the animals of G1 (n=10) received 500IU and G2 (n=11) 400IU of eCG. Both groups received 1000IU of hCG on D11. The MDDF was 13.2 ± 1.4 (G1) and 13.8 ± 1.8mm (G2; P>0,05), the DOF was 13.7 ± 1.1 (G1) and 14.2 ± 1.5mm (G2; P>0,05), the DWO was 71.1 ± 11.7 (G1) and 75.0 ± 5.5h (G2; P>0,05), the OR was 70.0 (G1) and 72.7% (G2; P>0,05), the CLA was 28.4 ± 8.6 (G1) and 31.6 ± 10.3mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.7 ± 1.2 (G1) and 3.3 ± 2.9ng/ml (G2; P>0,05). In exp. 5 (G1/n=54; G2/n=51) was done the same protocol in the exp. 4, although the animals received the FTAI on D12. The PR was 42.6 (G1) and 43.1% (G2; P>0,05). Dosage of 400IU of eCG and 1000IU of hCG, associated to IVD for FTAI were enough to induce follicular growing, ovulation and pregnancy in buffalo females during the off breeding season.

A ferramenta mais importante para o controle da brucelose em bubalinos e bovinos é a vacinação compulsória, utilizando-se a vacina viva atenuada contendo a estirpe B19 de Brucella abortus. A vacina B19 confere imunidade duradoura à infecção nos animais vacinados, e sua aplicação é restrita às fêmeas com idade entre 3 e 8 meses. A vacina B19 induz a produção de anticorpos que interferem no sorodiagnóstico da infecção, de forma que o diagnóstico sorológico de animais vacinados deve ser realizado apenas após os 24 meses de idade, idade na qual os anticorpos de origem vacinal já declinaram para níveis não detectáveis. O desempenho, a cinética humoral e o período de clearance da estirpe vacinal são bem conhecidos nos bovinos, contudo há poucas informações referentes a estes aspectos na espécie bubalina. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eliminação da estirpe B19 pelas fêmeas bubalinas vacinadas com a dose padrão contendo de 60 a 120 bilhões de UFC, assim como o perfil da resposta imune humoral induzido pela vacinação e a eficiência dos principais testes laboratoriais em diferenciar anticorpos vacinais dos anticorpos induzidos pela infecção natural. Foram utilizadas 44 fêmeas bubalinas provenientes de duas propriedades, negativas para brucelose, localizadas no interior do Estado de São Paulo, sendo 33 animais da propriedade A e 11 da propriedade B. Os animais foram vacinados e amostras de sangue, swab vaginal e urina foram coletas semanalmente, desde o dia em que a vacinação foi realizada (D0) até que os animais completassem 24 meses de idade. Os soros obtidos a partir das amostras de sangue foram utilizados na avaliação sorológica, empregando-se os seguintes testes: antígeno acidificado tamponado (AAT), 2-mercaptoetanol (2ME), fixação de complemento (FC) e polarização fluorescente (PF). As amostras de urina e swab vaginal foram submetidas ao cultivo microbiológico para isolamento de Brucella spp. e à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para avaliar a eliminação da estirpe vacinal. Na PCR, as amostras foram amplificadas primeiramente utilizando-se primers direcionados à região interespaçadora do RNA ribossomal de Brucella spp. (PCR-ITS) para a detecção de qualquer componente do gênero. Amostras com resultados positivos pela PCR-ITS foram submetidas à PCR utilizando-se primers direcionados ao gene eri de Brucella spp, num ensaio específico para a detecção da estirpe B19 (PCR-B19). Foi calculada a especificidade de cada teste sorológico em detectar como negativos os animais vacinados. Todos os animais apresentaram-se reagentes aos sete dias pós-vacinação no teste de AAT, aos 14 dias no teste de 2ME, aos 126 no teste de FC. No teste de PF, o D28 foi o período em que o maior número de animais apresentaram resultados positivos. Dezesseis animais não soroconverteram em nenhum momento do experimento pelo teste de PF. A PF foi o teste mais eficiente na diferenciação de anticorpos vacinais, sendo que todos os animais apresentaram resultados negativos aos 151 e 232 dias pós-vacinais nas propriedades A e B, respectivamente. No teste de FC, 100% animais apresentaram resultados negativos no D552 (propriedade A) e no D331 (propriedade B). No D552 na propriedade A as especificidades foram de 92,31% para o teste de 2ME e 69,23% para o teste de AAT. A propriedade B apresentou nos dias D366 especificidades de 72,73% e 36,36% para os testes 2ME e AAT, respectivamente. Todos os animais foram negativos pelo cultivo microbiológico em todo o período de monitoramento. Na PCR foram verificadas 19 das 1144 amostras positivas (1,66%). Das 44 bezerras avaliadas, 15 (34,1%) apresentou resultado positivo em pelo menos uma colheita, em amostras de urina e/ou swab vaginal. De acordo com os resultados apresentados, pode-se concluir que a prova sorológica mais eficiente para a diferenciação dos anticorpos de origem vacinal dos da infecção natural é o teste de PF e que, a eliminação da estirpe vacinal pode ocorrer de forma intermitente, durante períodos prolongados nas fêmeas bubalinas vacinadas. / The most important tool for the control of brucellosis in buffalo and cattle is compulsory vaccination, using a live and attenuated vaccine containing the S19 strain of Brucella abortus. The S19 vaccine confers long-lasting immunity to infection in vaccinated animals and the application is restricted to females aged between 3 and 8 months. The S19 vaccine induces production of antibodies that interfere with serodiagnosis of infection, so that the serological diagnosis of vaccinated animals must be only realized after 24 months of age, when the vacinal antibodies declined to undetectable levels. The performance, kinetics and humoral clearance period of the strain 19 vaccine are well known in cattle, however there is little information concerning these aspects in buffalo. This study aimed to evaluate the elimination of strain S19 by buffalo females vaccinated with the standard dose containing 60-120 billion CFU, as well as the profile of the humoral immune response induced by vaccination and efficiency of principals laboratory tests to differentiate vaccinal antibodies of the antibodies induced by natural infection. We used 44 female buffalo from two farms negative for brucellosis, located in the State of São Paulo, being 33 animals of the property A and 11 of the property B. The animals were immunized and blood samples, urine and vaginal swabs were collected weekly from the time that vaccination is performed (D0) until complete 24 months of age. The sera obtained from the blood samples were used for serological testing, using the following tests: rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol (2ME), complement fixation test (CFT) and fluorescence polarization assay (FPA). The urine samples and vaginal swabs were tested by microbiological culture for isolation of Brucella spp. and polymerase chain reaction (PCR) to evaluate the clearance of the vaccine strain. In PCR, the samples were first amplified using primers directed to the interspace region of the ribosomal RNA Brucella spp. (ITS-PCR) for the detection of any component of the genus. Samples with positive results by ITS-PCR were subjected to PCR using primers directed to the gene of ery of Brucella spp, in a specific assay for the detection of strain B19 (B19-PCR). Were calculated the specificity of each serological test to detect as negative the vaccinated animals. All animals showed reagents at seven days post-vaccination in the RBT test, at 14 days in the test 2ME, 126 on the CFT test. In the test of FPA, D28 is the period in which the highest number of animals tested positive. Sixteen animals do not seroconverted at any time of the experiment by FPA. The FPA test was more effective in differentiating antibodies of vaccination, and all animals were negative at 151 and 232 days post vaccination in the properties A and B, respectively. In test CFT, 100% animals showed negative results in D552 (property A) and D331 (property B). In the property A, at D552, the specificities were 92.31% for the test 2ME and 69.23% for the test RBT. Property B had in the days D366 specificities of 72.73% and 36.36% for the tests 2ME and RBT, respectively. All animals were negative by microbiological culture throughout the monitoring period. In the PCR were verified 19 samples positives in 1144 (1.66%). Of the 44 heifers evaluated, 15 (34.1%) showed positive results in at least one sample, in samples of urine and/or vaginal swabs. According to the presented results, we can conclude that the most effective serological test for differentiation of antibodies of natural infection of vaccine testing is FPA and the elimination of the vaccine strain may occur intermittently during periods prolonged in buffalo females vaccinated.

O bFGF (fator de crescimento fibroblástico básico) é um dos fatores envolvidos na organogênese placentária. O fator participa da regulação dos processos de angiogênese, de crescimento e desenvolvimento placentário e de proliferação e diferenciação das células placentárias. A homeostase tecidual requer balanço entre proliferação e morte celular. A identificação de células em atividade proliferativa pode ser feita pela detecção do antígeno Ki-67 presente no núcleo das células em proliferação. Objetivou-se estudar a distribuição espaço-temporal do bFGF e dois de seus receptores, FGFR1 e FGFR2, na placenta bubalina correlacionando-a à proliferação celular. Foram utilizadas treze placentas de fêmeas da espécie bubalina em diferentes fases da gestação, divididas em quatro grupos. Grupo 1 (n=4), placentas de 3 meses; grupo 2 (n=4), 5 meses; grupo 3 (n=1), 8 meses e grupo 4 (n=4), 9,5 meses. Para a detecção da proteína do bFGF, FGFR1 e FGFR2 bem como do antígeno Ki-67 foram realizados testes de imuno-histoquímica. Para tal, bloqueou-se a peroxidase endógena com peróxido de hidrogênio PA a 1% em metanol e as reações inespecíficas com soro eqüino. A incubação com os anticorpos primários anti-Ki-67, anti-bFGF, anti-FGFR1 e anti-FGFR2 foi feita a 4°C por vinte e quatro horas e a incubação com o anticorpo secundário universal por vinte minutos em temperatura ambiente. Foi utilizado um complexo avidina-biotina para amplificar a reação e para revelação utilizou-se Nova Red&reg;. A análise dos resultados foi feita em microscópio óptico em aumento de 400 vezes através do sistema de imagens KS-400. Utilizou-se o programa Graph Prism 4 para análise estatística dos resultados. Foi detectada a expressão da proteína do bFGF e seus receptores no núcleo e citoplasma de células do estroma e epitélio maternos e fetais da placenta bubalina de maneira tempo-dependente ao longo da gestação. A atividade proliferativa apresentou perfil decrescente do início até o final da gestação. A correlação observada entre a expressão do bFGF e do Ki-67 nas células do epitélio materno e fetal e estroma materno foi positiva (r = 0,282, r = 0,313 e r = 0,469, respectivamente; p < 0.05); entre FGFR1 e Ki-67 a correlação foi mais elevada para as células do estroma e epitélio maternos e estroma fetal (r = 0,739, r = 0,511 e r = 0,358; p<0,0001) e negativa para o epitélio fetal (r = -0.211); FGFR2 e Ki-67 a correlação foi negativa para as células epitélio materno (r = -0,027) e positiva para o epitélio e estroma fetal (r = 0,384 e r = 0,268; respectivamente; p < 0.05). Pode-se concluir a partir dos resultados obtidos que existe uma correlação positiva entre a expressão da proteína do bFGF de seus receptores 1 e 2 e o antígeno Ki-67. No entanto, essa correlação é dependente do tipo celular e da fase de gestação analisadas, e aponta para um possível envolvimento do bFGF e seu receptor 2 na proliferação do trofoblasto enquanto o receptor 1 modularia a ação de outro agente proliferativo no epitélio materno e estromas materno e fetal. / The bFGF (basic Fibroblast Growth Factor) is involved in the placental organogesis as a potent angiogenic molecule and is related to the growing and development of the placenta and proliferation of placental cells. Tissue homeostasis requires a balance between cell proliferation and cell death. The identification of proliferating cells can be made through the detection of Ki-67 nuclear antigen, present in these cells. The aim of this study was to evaluate the space-temporal expression of bFGF and two of its receptors, FGFR1 and FGFR2, in buffalo placenta in correlation to proliferative activity. In this study 13 buffalo placentas in different gestational phases were collected and divided into four groups. Group 1 (n=4), three moth-old placentas; group 2 (n=4), five month-old; group 3 (n=1), eight month-old and group 4 (n=4), 9.5 month-old. For the localization of bFGF, FGFR1, FGFR2 proteins and Ki-67 antigen, immunohistochemical assays were carried out. For that purpose, endogenous peroxidase activity was blocked with 1% Hydrogen Peroxide PA in methanol and non-specific binding with equine serum (1:10). Incubations with primary antibodies anti-Ki-67, anti-bFGF, anti-FGFR1 and anti-FGFR2 were made for 24 hours at 4°C. Incubation with universal secondary antibody (1:200) was made for 20 minutes in moist chamber at room temperature. Avidin/biotinylated horseradish ABC Elite Kit was used to amplify and Nova Red&reg; to develop the immunostaining. Slides were observed under a light microscope at 400 times magnification and photographed with KS-400 image program. Graph Prism 4.0 program was used for statistical analysis. Expression of the bFGF and its receptors proteins was detected in the nucleus and cytoplasm of buffalo placental cells during gestation. Placental proliferative activity was evaluated through the expression of Ki-67 antigen. The correlation observed between bFGF and Ki-67 expression in the maternal and fetal epithelium and maternal stroma cells was positive (r = 0,282, r = 0,313 e r = 0,469, respectively; p < 0.05). Between FGFR1 and Ki-67 the correlation was higher for maternal epithelial and stroma and fetal stroma cells (r = 0,739, r = 0,511 e r = 0,358, respectively; p<0,0001) and negative for fetal epithelium (r = -0.211). FGFR2 and Ki-67 correlation observed was negative for maternal epithelium cells (r = -0,027) and positive for fetal epithelium and stroma cells (r = 0,384 e r = 0,268; respectively; p < 0.05). We conclude that bFGF and its receptors 1 and 2 are positively correlated to the expression of the Ki-67 antigen, depending on cell type and gestational period. The results suggest that bFGF and its receptor 2 may be involved in the modulation of trophoblast proliferation, whereas FGFR1 may modulate proliferation in the maternal epithelium and fetal and maternal stroma, probably through the binding to another growth factor (s).

A apoptose é um processo fisiológico que desempenha papel crucial no desenvolvimento, remodelagem e senescência teciduais, inclusive placentários. A placenta, enquanto órgão temporário, atravessa todas estas fases em aproximadamente 10 meses, na espécie bubalina. O crescimento da placenta e a nutrição fetal requerem altas taxas de renovação e diferenciação celulares, e a maturação placentária está relacionada à redução das células epiteliais das criptas carunculares maternas. As modificações morfológicas celulares decorrentes do processo de apoptose são fruto de eventos bioquímicos complexos promovidos por uma família de cisteína-proteases, as caspases, especialmente as caspases executoras, dentre as quais se destaca a caspase-3, capaz de degradar várias proteínas citoplasmáticas e nucleares. Durante a apoptose, ocorre a clivagem caspase-mediada da citoqueratina 18, proteína dos filamentos intermediários do citoesqueleto, e com isso a formação de um neoepítopo específico. Por meio de métodos imunoistoquímicos pode-se detectar a presença tanto deste neoepítopo, quanto da forma ativa da caspase-3, o que demonstra que a célula entrou em estágio irreversível de morte celular. Morfologicamente, algumas das principais alterações celulares observadas são condensação da cromatina, a degradação e fragmentação do DNA, a formação de ?blebs? (pregas/bolhas) na membrana plasmática, além da fragmentação celular em corpúsculos apoptóticos, os quais podem ser identificados em cortes corados pelo método de rotina hematoxilina e eosina, utilizando-se microscópio de imunofluorescência, devido à eosinofluorescência das células em apoptose. Assim como a apoptose, a proliferação celular participa no equilíbrio homeostático tissular. Neste estudo, pretende-se avaliar a ocorrência de apoptose e proliferação celular em 42 placentônios de diferentes animais em diversas fases gestacionais (2-10 meses de gestação), em tecidos fixados em 4% paraformoldeído, incluídos em paraplast e submetidos à imunoistoquímica (anticorpo monoclonal M30 CytoDeath; Caspase-3 Clivada; PCNA - antígeno de marcação nuclear), sendo também avaliada a presença de corpúsculos apoptóticos eosinofluorescentes nas amostras. Utilizando-se M30 e caspase-3 clivada pudemos constatar a ocorrência de apoptose nos epitélios uterino e trofoblástico, em células gigantes placentárias e, ocasionalmente, em células mesenquimais fetais, do estroma uterino e endoteliais. Não houve diferenças significativas (p<0.05) entre os métodos adotados, mas sim entre os estágios gestacionais. Para o M30, houve um aumento significante da apoptose do primeiro grupo (2-4.5 meses) em relação ao quarto grupo (9-10 meses); no caso da Caspase-3 Clivada houve um aumento estatísticamente significante (p<0.05) entre os três primeiros grupos (2-4.5; 5-6.5; e 7-8.5 meses de gestação, respectivamente) de animais em relação ao quarto grupo. Para o PCNA, ocorreu uma diminuição no número de células em proliferação dos dois primeiros grupos de animais em relação ao quarto grupo (p<0.05). A presença de corpúsculos apoptóticos eosinofluorescentes pôde ser observada em todas as amostras. Nossos resultados sugerem haver uma relação entre a ocorrência de apoptose e a maturação, senescência e liberação placentárias em ruminantes. / Apoptosis is a physiological process that plays a crucial role in the development, remodeling and aging of the placenta. The placenta is a temporary organ that undergoes growth and development, followed by senescence and death in 10 months in the buffalo species. Placental growth and fetal nutrition require high rates of cellular turnover and differentiation, and placental maturation is correlated to the reduction of the number of epithelial cells of the maternal crypts. The morphological changes of the apoptotic cells are product of complex variety of biochemical events promoted by a family of cystein-proteases, the caspases, mainly the effectors caspases, and among them the caspase-3, which is able to degrade cytoplasmic and nuclear proteins. During apoptosis, the caspase-mediated cleavage of cytokeratin 18, which is one of the first intermediate filament proteins of the cytoskeleton, leads to the formation of a specific neo-epitope. It is possible to detect the presence of this neo-epitope by immunohistochemistry, as well as the active form of caspase-3, showing that the cell has entered an irreversible stage of cell death. Morphologically, some of the main observed cellular alterations are condensation of the chromatin, degradation and spalling of the DNA, blebbing of the cell membrane and the formation of apoptotic bodies. These bodies can be identified in slides stained by hematoxilin and eosin with a fluorescent microscope, due to the eosinofluorescent property of the apoptotic cells. Like apoptosis, cellular proliferation also contributes to the tissue homeostasis. In the present study, we intend to evaluate the occurrence of apoptosis and cellular proliferation in 42 placentomes, collected from different animals in several gestacional phases (2-10 months of gestation), fixed in 4% paraformaldehyde, processed for embedding in paraplast and cut in sections, through immunohistochemistry (monoclonal antibody M30 CytoDeath; Cleaved Caspase-3; PCNA - antigen of nuclear proliferation). The presence of eosinofluorescent apoptotic bodies were also studied in the samples. M30 and Cleaved Caspase-3 allowed to show the occurrence of apoptosis in the uterine and trophoblastic ephitelium, in placental giant cells and, occasionally, in the fetal mesenquimal cells, in the uterine stroma and endothelium cells. There were no significant differences (p<0.05) between the adopted methods, although there were differences between the gestational phases studied. For M30, there was an increase of the number of apoptotic cells (p<0.05) from the first group (2-4.5 months) in relation to the fourth group of animals (9-10 months); for the Cleaved Caspase-3 there was a statistical significant increase (p<0.05) between the first three groups of animals (2-4.5; 5-6.5; and 7-8.5 months of gestation, respectively) and the last one. In relation to the PCNA, a decrease in the number of proliferative cells occurred from the first two groups of animals to the fourth group (p<0.05). The occurrence of eosinofluorescent apoptotic bodies was observed in all the samples studied . Our data suggest a relationship between apoptosis and the maturation, senescence and release of the ruminant placenta.

Com o objetivo de estudar os efeitos do uso da Somatotropina Recombinante Bovina (rBST) no lipidograma e constituição do leite de bubalinos foram utilizadas 28 búfalas divididas em dois grupos: Grupo 1 constituído de 14 búfalas nas quais foi realizada uma aplicação de 500 mg de rBST e Grupo 2 - constituído de 14 búfalas que não receberam qualquer tratamento hormonal (grupo controle). Durante o experimento, os animais tiveram amostras de plasma e soro sanguíneo, bem como de leite colhidas periodicamente nos seguintes momentos: dia da aplicação da rBST, 1º, 3º, 5º, 7º, 10º e 14º dia após a aplicação da rBST. A fim de minimizar possíveis influências da fase da lactação, todas as búfalas utilizadas no experimento estarvam entre 100 e 200 dias de lactação e com produção de leite variando entre 5 e 10 litros por dia. O lipidograma foi avaliado por meio da determinação dos teores séricos de colesterol, triglicérides, ácidos graxos não esterificados e &beta;-HBO e teores plasmáticos de glicose, enquanto a constituição do leite de búfalas foi avaliada por meio de determinação dos teores lácteos de gordura, proteína, lactose, sólidos totais e do número de células somáticas. Durante a avaliação dos resultados obtidos podemos notar que a aplicação da somatotropina recombinante bovina não influenciou os teores séricos de NEFA, colesterol e triglicérides bem como os plasmáticos de glicose. No entanto os teores séricos de &beta;-HBO foram afetados pelo tratamento instituído, pois verificou-se que, a partir do 1º dia após o início do tratamento hormonal, os teores séricos de -HBO no grupo tratado com rBST eram entre 0,21 e 0,55 mg/dL maiores do que os encontrados no grupo controle. Quando avaliamos a composição do leite temos que os resultados nos permitem afirmar que o tratamento instituído não interfere nas concentrações de gordura, lactose, sólidos totais e no número de células somáticas. Nos primeiros dias após a aplicação da rBST ocorria uma diminuição dos teores lácteos de proteína, sendo verificado que no 3º dia após o início do tratamento hormonal os valores lácteos de proteína encontrados no grupo tratado com rBST (3,59 &plusmn; 0,22 g/dL) eram significativamente menores do que os observados no grupo controle (3,89 &plusmn; 0,22 g/dL). A partir do 5º dia após o início do tratamento hormonal, os valores de proteína passam a oscilar sem que qualquer diferença estatística entre o grupo tratado e controle possam ser observados. / With the aim to evaluate the influence of recombinant bovine somatotropin (rBST) in the lipid profile and milk composition of lactating Murrah water buffaloes, we collected and analyzed samples of blood serum and plasma and milk of clinically healthy animals. We determined the concentrations of cholesterol, triglycerides, nonesterified fatty acids (NEFA), -hydroxibutyrate (-HBO) and glucose from the blood samples. Milk samples were collected after milking and the following parameters were evaluated: fat, protein, lactose, total solids and somatic cell count. The influence of rBST was studied through 28 animals divided in 2 experimental groups: Experimental Group 14 animals that received a single application of 500mg rBST; Control Group - 14 animals that didn´t receive any hormonal treatment. Blood and milk samples were collected in the following moments: day of rBST application, 1st, 3rd, 5th, 7th, 10th and 14th day after the rBST application. To minimize the influence of lactation, the samples were collected between 100-200 days of lactation and the milk yields per cow range from 5 10 Liters. According to the results of this research, we concluded that one single application of rBST didn´t affect the NEFA, cholesterol, triglycerides and glucose blood levels. The serum &beta;-HBO concentration was influenced by the hormonal treatment. In the experimental group, after 24 hours from the treatment, the &beta;-HBO level ranged 0.21 - 0.55 mg/dL and it was greater than that of control group. The fat, lactose, total solids and somatic cell count were not influenced by the rBST treatment. In the first days after the application of rBST, the milk protein decreased gradually reaching its low level in the 3rd day after the application (3.59 ± 0.22 g/dL) and was significant lower than that of control group (3.89 ± 0.22 g/dL). After the 5th day, the milk protein values oscillated without any statistical difference between both groups.

O presente estudo objetivou estabelecer o padrão de referência dos constituintes físico-químicos e celulares do leite e identificar relações entre os valores desses elementos constituintes da secreção láctea de búfalas, criadas em São Paulo/BR. Para tanto foram utilizadas 98 búfalas adultas e lactantes, da raça Murrah, distribuídas em vários grupos experimentais, segundo os seguintes fatores de variabilidade: idade; fase da lactação; momento da ordenha e tipo de ordenha utilizada. Dessas búfalas foram colhidas 1.176 amostras de leite (de glândulas mamárias que não apresentavam sinais de processo inflamatório ou tivessem sido submetidas a tratamento intramamário). As amostras de leite foram submetidas aos seguintes exames: testes da caneca de fundo escuro e do CMT; determinação da concentração hidrogeniônica e da eletrocondutividade; bem como, determinaram-se os teores de cloreto; lactose; proteína; gordura e sólidos totais. Também, foram realizadas contagens de células somáticas, bem como, o isolamento e identificação de cepas bacterianas e, nos casos positivos realizaram-se o antibiograma. Os valores considerados como padrão de referência para o leite de búfalas, segundo as fases de lactação (inicial, intermediária e final) foram respectivamente: para o pH - 6,89; 6,85 e 6,9; para a eletrocondutividade - 3,82; 4,02 e 4,49 mS/cm; para os teores de cloreto - 18,21; 20,13 e 26,49 mg/dl; para os teores de gordura - 4,25; 3,70 e 3,56 g/dl; para os teores de proteína - 3,97; 4,03 e 4,5 g/dl; para os teores de lactose - 5,11; 5,08 e 4,81 g/dl; para os teores de sólidos totais - 14,55; 13,88 e 13,93 g/dl e para o número de células somáticas - 29.000; 29.000 e 16.000 cel/ml. Os resultados comprovaram que a fase de lactação influía sobre os valores do pH, eletrocondutividade, teores de cloreto, gordura, proteína, lactose, sólidos totais e número de células somáticas e que, os teores de gordura, proteína, lactose, sólidos totais e número de células somáticas sofreram influência do momento da ordenha (amostra colhidas antes e depois da ordenha), respectivamente, com os seguintes valores: 3,90 e 8,9 g/dl; 4,12 e 3,67 g/dl; 5,02 e 4,64 g/dl; 14,18 e 18,31 g/dl e; 29.000 e 56.000 cel/ml. A análise dos resultados permitiu constatar, que o tipo de ordenha influiu na eletrocondutividade, no número de células somáticas e nos teores de gordura e proteína do leite, sendo os resultados nas amostras das búfalas submetidas à ordenha manual ou mecânica, respectivamente, para: eletrocondutividade - 3,89 e 4,14 mS/cm; número de células somáticas - 22.000 e 32.000 CS/ml; teores de gordura - 4,47 e 3,62 g/dl e; para proteína - 3,77 e 4,29 g/dl. Ao se considerar a idade das búfalas verificou-se que, com o progredir da idade a eletrocondutividade e os teores de cloreto aumentavam, mas, em contra posição os teores de lactose diminuíram; não se observou alteração significativa nos valores de gordura, sólidos totais, proteína e pH lácteos. Os escores do CMT (negativo, traços, 1+ e 2+), aumentavam, gradativamente, com o evoluir da fase da lactação e, a eletrocondutividade, o teor de cloreto e o número de células somáticas aumentaram de forma, diretamente, proporcional ao aumento do escore do CMT; porém, ao contrário, o teor de lactose diminuía. A variação do escore do CMT não foi acompanhada de modificações significativas dos teores lácteos de gordura, proteína e de sólidos totais. As bactérias isoladas com maior freqüência foram as dos gêneros: Corynebacterium sp (28,5%); Staphylococcus sp (24,7%); Streptococcus sp (15,8%) e; Actinomyces sp (11,4%). O número de isolamentos bacterianos aumentou, significativamente, com o evoluir da lactação. Entretanto, o momento da ordenha não influiu no número de isolamentos e evidenciou-se maior freqüência de isolamentos nas glândulas posteriores do úbere. No antibiograma das cepas de bactérias isoladas foram utilizados os seguintes antibióticos e quimioterápicos: cefalotina; cefoperazone; cloranfenicol; cotrimoxazol; enrofloxacina; estreptomicina; gentamicina; neomicina; nitrofurantoína; oxacilina; penicilina e tetraciclina. Entre os Corynebacterium sp, 47 cepas (61,03%) foram resistentes à nitrofurantoína; 10 (12,9%) à oxacilina; 8 (10,38%) à estreptomicina e; 7 (9,09%) à tetraciclina; sendo sensíveis aos demais antimicrobianos testados. Os Staphylococcus sp demonstraram, em 12 (26,66%) dos casos, resistência a nitrofurantoína; em 2 (4,44%) à tetraciclina e; foram sensíveis aos demais antimicrobianos; os Streptococcus sp, com exceção de 7 (25%), resistentes à ação da nitrofurantoína, foram sensíveis aos demais antimicrobianos utilizados. / The objective of the present study was to establish reference values for physical-chemical and cellular contents of the milk of buffaloes bred in the state of São Paulo, Brazil, and to draw relationships between these values and elements present in this kind of milk. Ninety-eight adult Murrah buffalo females were distributed into different experimental groups, according to the following variability factors: age, phase of lactation, time of milking and milking procedure. From these animals, 1,176 samples of milk were collected (from udders that did not present any signs of inflammatory process or that have been subject to intramammary treatment). Milk samples were submitted to the following tests: strip cup test and CMT; determination of pH and electroconductivity, chloride, lactose, protein, fat and total solid contents. Milk samples were also submitted to somatic cell counts, as well as isolation and identification of bacterial strains, which were also submitted to antibiograms. Reference values for buffalo milk, according to the phase of lactation (beginning, middle and end of lactation) were, respectively: pH, 6.89; 6.85 and 6.9; electroconductivity, 3.82; 4.02 and 4.49 mS/cm; chloride content, 18.21; 20.13 and 26.49 mg/dl; fat content 4.25; 3.70 and 3.56 g/dl; protein content, 3.97; 4.03 and 4.5 g/dl; lactose content, 5.11; 5.08 and 4.81 g/dl; total solid content, 14.55; 13.88 and 13.93 g/dl, and somatic cell counts, 29,000; 29,000 and 16,000 cells/ml. Results support that the phase of lactation influence pH, electroconductivity, chloride, fat, protein, lactose and total solid contents, as well as somatic cell counts. Somatic cell counts and fat, protein, lactose and total solid contents were influenced by the moment of sample collection (before or after milking), respectively, with the following values: 3.90 and 8.9 g/dl; 4.12 and 3.67 g/dl; 5.02 and 4.64 g/dl; 14.18 and 18.31 g/dl, and 29,000 and 56,000 cells/ml. Results showed that the kind of milking procedure used influenced electroconductivity, somatic cell counts, fat and protein contents. Results for buffaloes submitted to manual or mechanical milking were, respectively: electroconductivity, 3.89 and 4.14 mS/cm; somatic cell counts, 22,000 and 32,000 cells/ml; fat content 4.47 and 3.62 g/dl, and protein content 3.77 and 4.29 g/dl. When the age of the animals was considered, it was observed that the older the animal, the greater the electroconductivity and chloride contents, and the lower the lactose contents. No significant changes were observed in pH, fat, total solid and protein contents. CMT scores (negative, trace, 1+ and 2+) gradually increased with the phase of lactation. Increases in electroconductivity, chloride content and somatic cell counts were directly proportional to the increase in CMT scores, whereas lactose content decreased. Variation of CMT scores was not followed by significant changes in fat, protein and total solid contents. Bacterial genera more frequently isolated were Corynebacterium sp (28.5%); Staphylococcus sp (24.7%); Streptococcus sp (15.8%) and Actinomyces sp (11.4%). The frequency of bacterial isolation increased significantly with lactation. However, the moment of milking did not influence isolation. Posterior quarters presented the greatest frequency of isolation in the udders analyzed. The following antibiotic and chemotherapic agents were used in the antibiogram: cefalotin; cefoperazone; chloranfenicol; cotrimoxazol; enrofloxacine; streptomycin; gentamycin; neomycin; nitrofurantoin; oxacylin; penicillin and tetracycline. Among Corynebacterium sp, 47 strains (61.03%) were resistant to nitrofurantoin and 10 (12.9%) to oxacylin, 8 (10.38%) streptomycin and 7 (9.09%) to tetracycline. These strains were sensitive to the other antibiotic agents tested. From Staphylococcus sp strains, 12 (26.66%) were resistant to nitrofurantoin and 2 (4.44%) were resistant to tetracycline. They were sensitive to the other antibiotics tested. Among Streptococcus sp strains they were all sensitive to the the antibiotic agents, except for 7 (25%) of them that were resistant to nitrofurantoin.

Muçarela de búfala é um queijo fresco, de massa filada, que apresenta características como coloração branca, sabor adocicado e alto valor nutricional e que tem grande aceitação pelos consumidores, dispostos a pagar preços diferenciados pela peculiaridade do produto. No entanto, o queijo está sujeito à violação de autenticidade, tanto pela sazonalidade da produção do leite da búfala quanto pelo alto preço do leite e do queijo, quando comparado aos similares oriundos da vaca, bem como à contaminação microbiana. Assim, este trabalho teve por objetivos avaliar a ocorrência de fraude na muçarela de búfala por adição de leite de vaca, e a influência da sazonalidade da produção do leite de búfala na frequência desta adulteração, bem como avaliar a presença de alguns patógenos no queijo comercializado no município de São Paulo. Amostras de muçarela de bolinha cujo rótulo identificava o uso exclusivo de leite de búfala foram submetidas à pesquisa de DNA bubalino e bovino, usando primers para detecção do gene citocromo b (cytb), e à análise microbiológica. A fraude foi detectada em 73% das amostras (77/106), não havendo influencia da sazonalidade; em duas amostras (2/106) apenas o DNA bovino foi detectado. Do ponto de vista microbiológico, todas as amostras apresentaram ausência de Listeria monocytogenes e de Salmonella spp. em 25 gramas, mas 7% (10/138) foram consideradas impróprias para o consumo humano por apresentar Coliformes termotolerantes e/ou Staphylococcus coagulase positiva acima dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Conclui- se que a fraude por adição de leite de vaca é muito frequente e não é motivada apenas pela redução sazonal da oferta do leite bubalino. Além disso os problemas microbiológicos detectados estão associados às inadequadas condições de higiene da matéria prima e/ou do processo de fabricação e/ou abuso de temperatura de armazenamento do queijo. / Buffalo mozzarella is a fresh cheese, filada mass, with characteristics such as white color, sweet taste and high nutritional value and has great acceptance by consumers willing to pay different prices for the uniqueness of the product. However, the cheese is subject to violation of authenticity, both the seasonality of production of milk the buffalo as by the high price of milk and cheese when compared to similar coming from the cow as well as to microbial contamination. This work aimed to evaluate the occurrence of fraud in buffalo mozzarella by adding cow\'s milk, and the influence of the seasonality of production of buffalo milk in the frequency of this tampering and evaluate the presence of some pathogens in cheese marketed in São Paulo. Mozzarella samples of marble whose label identified the exclusive use of buffalo milk were subjected to DNA research buffalo and cattle, using primer for detection of cytochrome b gene (cytb), and microbiological analysis. The fraud was detected in 73% of samples (77/106), with no influence of seasonality; in two samples (2/106) only the bovine DNA was detected. From a microbiological point of view, all samples showed no Listeria monocytogenes and Salmonella spp. 25 grams but 7% (10/138) were considered unfit for human consumption by presenting thermotolerant coliforms and / or coagulase positive Staphylococcus above the limits established by law. It is concluded that fraud by adding cow\'s milk is very common and is not motivated only by the seasonal reduction in supply of buffalo milk; microbiological problems encountered are related to inadequate hygiene conditions of raw materials and / or fabrication process and / or storage temperature abuse cheese.