Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Andrielle Gomes (andriellemacedo@bce.unb.br) on 2015-07-01T13:57:13Z No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-03T14:04:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-03T14:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / O câncer é uma doença que acomete diferentes órgãos do organismo, com comportamento biológico variável. O adenocarcinoma de próstata corresponde a 10% do total de cânceres. O feocromocitoma é um tumor neuroendócrino derivado de células cromafins que se encontram na medula da glândula supra-renal. Tem sido descrito efeito inibidor da metformina sobre sobrevivência e crescimento celular, in vitro, em algumas linhagens celulares de câncer. O presente estudo tem como objetivo investigar o efeito citotóxico da metformina em linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata humano e de feocromocitoma de ratos. Foram utilizadas duas linhagens de adenocarcinoma de próstata humano, LNCaP (andrógeno-sensível) e PC3 (andrógeno-resistente) e células de feocromocitoma, PC12-Adh. Foi utilizado o ensaio de MTT para a determinar a viabilidade celular antes, após tratamentos e na associação de fármacos. Para avaliar se metformina altera o ciclo celular da linhagem PC12-Adh foi realizado ensaio com citometria de fluxo, usando concentrações de 20,85mM de metformina e 8,23μM de sunitinib. Por meio de Western Blot, foi avaliado se a metformina altera a expressão de proteínas pró-apoptóticas. Os resultados mostraram que a metformina inibiu a viabilidade de ambas as linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata, LNCaP e PC3. A metformina também inibiu a viabilidade das células PC12-Adh, com efeito de magnitude semelhante ao sunitinib. Não foi observado efeito sinérgico ou potencialização do efeito do sunitinib sobre a inibição da viabilidade celular em células de feocromocitoma, quando foi adicionada metformina. Esse resultado sugeriu possível interação entre os dois fármacos, onde o efeito do sunitinib foi aparentemente impedido quando as células foram tratadas com metformina concomitantemente. O tratamento com metformina na concentração de 20,85mM por 48h não alterou o ciclo celular. Contudo, nessas mesmas condições, houve um aumento da expressão de proteína caspase 3, sugerindo indução de apoptose. Os resultados sugerem que a metformina inibe a viabilidade das células LNCaP de forma mais intensa que das células PC3, sugerindo que esse efeito possa ser mediado pelo receptor de andrógeno. A metformina inibe a viabilidade das células PC12-Ahc, nas concentrações utilizadas, em magnitude semelhante à induzida pelo sunitinib. Observou-se possível interação entre metformina e sunitinib, in vitro, caracterizada pela interferência com o efeito do sunitinib induzida pela adição de metformina nas menores concentrações. A metformina não interfere no ciclo celular das células PC12-Adh após 48 horas de tratamento, porém induz aumento da expressão caspase 3, sugerindo efeito pró-apoptótico. / Cancer is a disease that affects different organs and displays with variable biological behavior. Prostate adenocarcinoma accounts for 10% of all cancers. Pheochromocytoma is a neuroendocrine tumor derived from chromaffin cells situated in adrenal medulla. It has been reported inhibitory effect, in vitro, of metformin on survival and growth of some cancer cell lines. The present study aims to investigate the cytotoxic effect of metformin on human prostate adenocarcinoma and rats pheochromocytoma cell lines. Were used two human prostate adenocarcinoma cells lines, LNCaP (androgen-sensitive) and PC3 (androgen-resistant), and pheochromocytoma cell line PC12-Adh. The MTT assay is used to determined cell viability before and after treatment and metformin with sunitinib combination. To assess whether metformin changes cell cycle of PC12-Adh, the flow cytometry was performed, using metformin 20,85mM and sunitinib 8,23μM in PC12-Adh cells. Western blot was used to determinate if metformin alter the expression of pro-apoptotic proteins. The results show that metformin inhibited the cell viability in both prostate adenocarcinoma cell lines, LNCaP and PC3. Metformin also inhibited PC12-Adh cells viability similarly to sunitinib. There was no change in the inhibition of viability in pheochromocytoma cells induced by sunitinib when metformin was added, suggesting an inhibitory effect of metformin upon suntinib. This result suggested a possible interaction between these two drugs, where the effect of sunitinib was apparently prevented when the cells were concurrently treated with metformin. Treatment with metformin in the concentration of 20,85mM for 48 hours did not alter the cell cycle. However, under these same conditions, there was an increase in caspase-3 protein expression, suggesting apoptosis. The results that metformin inhibits the viability of LNCaP cells more intensely compared to PC3 cells, suggesting that this effect may be mediated by the androgen receptor. Metformin inhibits viability of PC12-Adh cells, in similar concentrations those induced by sunitinib. We propose a possible interaction between metformin and sunitinib in vitro, characterized by interference with the effect of sunitinib induced by the addition of metformin in lower concentrations and although metformin does not interfere with PC12-Adh cell cycle after 48 hours of treatment, it leads to increased expression of caspase 3, suggesting a pro-apoptotic effect.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-11-09T18:07:32Z No. of bitstreams: 1 2015_MateusCandeiaGianizeli.pdf: 4160485 bytes, checksum: edce5c031491ffb4e1b7be0994769306 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-01-23T10:14:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_MateusCandeiaGianizeli.pdf: 4160485 bytes, checksum: edce5c031491ffb4e1b7be0994769306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-23T10:14:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_MateusCandeiaGianizeli.pdf: 4160485 bytes, checksum: edce5c031491ffb4e1b7be0994769306 (MD5) / A prevenção e o diagnóstico precoce, associado ao tratamento eficaz de qualquer tipo de câncer, são fundamentais para que os índices de incidência e mortalidade por câncer possam ser reduzidos. A busca pelo tratamento eficaz tem inspirado o desenvolvimento de novas plataformas terapêuticas, como a utilização de fármacos associados à nanossistemas. Nesse contexto, realizou-se o presente estudo que teve como objetivo avaliar, in vitro, a eficácia deum material nanoestruturado, Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt, na terapia fotodinâmica, TFD. Para tal, utilizou-se células daslinhagensNIH-3T3, MCF-7, A431 e HeLa. Os resultados mostram que o fotossensibilizante AlClFt, livre ou adsorvido a Fe2O3/AO/P-F127, quando irradiado, induz a produção de oxigênio singleto e ao ser incorporado pelas células se aloja no seu citoplasma. A análise dos resultados mostra também que a TFD mediada por esse nanomaterial, em diferentes concentrações de AlClFt, é citotóxica, induzindo as células das quatro linhagens à necrose, embora induza despolarização somente das membranas mitocondriais das células da linhagem NIH-3T3. Além disso, a TFD mediada por Fe2O3/AO/P-F127, com AlClFt na concentração de 0,04 μg/mL induziu fragmentação no DNA de células das linhagens NIH-3T3 e MCF-7, e com AlClFt na concentração de 0,09 μg/mL induziu também fragmentação no DNA de células das linhagens A431.Após duas sessões de TFD mediada pela Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt, com AlClFt na concentração de 0,09 μg/mL, as células das quatro linhagens foram praticamente eliminadas em menos de cinco dias, o que evidencia o potencial da Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt a ser utilizado na TFD. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer prevention, early diagnosis, and treatment are essential to reduce the cancer incidence and mortality rates. The ideal cancer treatment involves effective therapies with minimal side effects. Aiming to better cancer treatment, therapeutic solutions, such as the use of drugs delivery, is being developing. Here we evaluate the efficacy of Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt, a nanostructure, in the photodynamic therapy, PDT, using NIH-3T3, MCF-7, A431 and HeLa cells lines. According to our results, photosensitizing AlClFt adsorbed to the Fe2O3/AO/ P-F127 induces the production of singlet oxygen when irradiated. When the nanostructures enter the cells, they remain in their cytoplasm. In addition, PDT mediated by Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt at different drug concentrations is cytotoxic, and, although induces depolarization only of mitochondrial membranes of NIH-3T3 cells, it induces necrosis in the cells of the four cell lines. The PDT mediated by Fe2O3/AO/P-F127 with 0.04 µg/ml of AlClFt induced DNA fragmentation of NIH-3T3 and MCF-7cells and with0.09 µg/ml of AlClFt also induced DNA fragmentation in A431 cells. After two sessions of PDT mediated by Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt with 0.09 µg/mL AlClFt, cells of all the four lines were eliminated in less than five days, which shows the potential of Fe2O3/AO/P-F127-AlClFt to be used in the photodynamic therapy.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2015-11-17T20:29:05Z No. of bitstreams: 1 2015_KellianeAlmeidadeMedeiros_Parcial.pdf: 193575 bytes, checksum: 222ab66ed210c48e91c5eb4e6ebdfc80 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-11-19T10:52:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_KellianeAlmeidadeMedeiros_Parcial.pdf: 193575 bytes, checksum: 222ab66ed210c48e91c5eb4e6ebdfc80 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T10:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_KellianeAlmeidadeMedeiros_Parcial.pdf: 193575 bytes, checksum: 222ab66ed210c48e91c5eb4e6ebdfc80 (MD5) / O câncer de mama é considerado o tipo de câncer que tem maior incidência em mulheres nos países em desenvolvimento. O tratamento mais comum para os cânceres é com quimioterápicos isoladamente ou em associação a outros procedimentos, que têm revelado diversos efeitos colaterais adversos ao organismo. Por isso, novas formas de tratamento são necessárias. Biomoléculas encontradas em animais tem se revelado alternativas aos quimioterápicos. Dentre as biomoléculas, o peptídeo melitina é citotóxico e não seletivo devendo, assim, ser aprisionado em nanossistemas utilizando polímeros e, ainda, ser direcionada a célula-alvo, por meio de moléculas como peptídeos. Dentre os polímeros, a quitosana (QS) é utilizada por ser biocompatível e biodegradável. A QS, quando na presença de ânions como o tripolifosfato de sódio (TPP), forma nanopartículas espontaneamente pelo método de geleificação iônica. As nanopartículas de QS têm tendência à aglomeração, assim é necessária a adição de copolímeros como o polietilenoglicol (PEG). O presente estudo teve como objetivo desenvolver nanopartículas de QS e PEG com peptídeo direcionador visando à liberação sustentada in vitro e in vivo de melitina a células tumorais de mama. Assim, foi extraída a melitina da peçonha de Apis mellifera e sintetizados peptídeos direcionadores. Esses peptídeos foram associados em nanopartículas, que foram testadas in vitro e in vivo. Todas as nanopartículas foram polidispersas e aumentavam de tamanho de acordo com o aumento nas concentrações de TPP e PEG. Nos testes in vitro, notou-se que a melitina livre foi citotóxica, enquanto os dois peptídeos direcionadores não foram citotóxicos. Apenas as nanopartículas formuladas com 2 mg/mL de TPP foram tóxicas apenas quando continham melitina associada. Em outra abordagem experimental, a melitina foi substituída nas nanopartículas pela peçonha da abelha parcialmente hidrolisada e um novo peptídeo presente nesta. Foi observado que a peçonha perde a citotoxicidade com a hidrólise parcial. Assim, foram escolhidas as formulações com 2 mg/mL de TPP e 13,3 mg/mL de PEG 2000 homogeneizados em ultraturrax para os testes in vivo. As análises in vivo tiveram início com a comparação do implante de células ectópico (flanco) em relação ao ortotópico (4ª mama). Não foram observadas células neoplásicas nos órgãos analisados em nenhum tipo de implante e o ortotópico foi escolhido por formar único e uniforme tumor, o que facilita o tratamento intratumoral. As análises in vivo seguiram com o implante ortotópico na 3ª mama, o qual apresentou desenvolvimento diferente, mais agressivo, o que levou muitos animais a óbito. Houve metástase na forma de pólipos, ao longo do peritônio dos animais, mas não foram observadas células neoplásicas nos órgãos analisados. Os animais tratados com melitina livre e nanopartícula contendo melitina (completa) não apresentaram pólipos. Todos os animais apresentaram alterações hematológicas e os animais que receberam os tratamentos com melitina e completa apresentaram alterações bioquímicas. Ainda houve alterações histopatológicas evidenciando dano no fígado em todos os grupos, hemólise em alguns órgãos no tratamento com melitina livre e maior regressão de células neoplásicas no tratamento com melitina em relação ao tratamento com nanopartícula. A atuação imediata da melitina livre na inibição tumoral, em relação às nanopartículas completa, também foi confirmada com a maior expressão de proteínas antitumorais. Contudo o tratamento com nanopartículas de quitosana contendo melitina foi menos agressivo para o organismo, por não causar hemólise, e foi ativo sobre células neoplásicas de mama. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is considered the cancer that has a higher incidence in women in developing countries. The most common treatment for cancers is with chemotherapy alone or associated with other treatments, which has revealed many adverse side-effects in the body. Therefore, new treatments are needed. Biomolecules found in animals has proven alternatives to chemotherapy. Among biomolecules, the melittin peptide is cytotoxic and not selective, should be entrapped in nanosystems using polymers and, also, be directed to targets using molecules, such as peptides. Among the polymers, the chitosan (QS) is used to be biocompatible and biodegradable. QS, in the presence of anions such as sodium tripolyphosphate (TPP), form spontaneously nanoparticles by ionic gelation method. The QS nanoparticles tend to agglomerate, so it is necessary to add copolymers such as polyethylene glycol (PEG). This study aimed to develop nanoparticles with PEG and QS and driver peptide at sustained release in vitro and in vivo of melittin to breast tumor cells. So, it was extracted melittin from the venom of Apis mellifera and synthesized driving peptides. These peptides were associated in nanoparticles, which were tested in vitro and in vivo. All nanoparticles were polydisperse increased in size and in accordance with the increase in TPP and PEG concentrations. In in vitro tests, it was noted that the free melittin was cytotoxic, whereas both driving peptides were not cytotoxic. The nanoparticles formulated with 2 mg/mL of TPP were toxic only when were associated melittin. In another experimental approach, melittin was replaced in nanoparticles by the partially hydrolyzed bee venom and a new peptide present in this venom. It was observed that the venom loses cytotoxicity when partially hydrolyzed. Thus, the formulations were selected with 2 mg/mL of TPP and 13.3 mg/mL PEG 2000 homogenized in the ultraturrax for in vivo tests. The in vivo tests were started by the comparison of the ectopic cells implant (flank) over the orthotopic (4th breast). Neoplastic cells were not observed in organs examined on either type of implant and orthotopic was chosen to form unique and uniform tumor, which facilitates the intratumoral treatment. In vivo analyses followed with orthotopic implantation in the 3rd breast, which presented different development, more aggressive, leading many animals to dye. There were metastasis in the form of polyps along the peritoneum of the animals, but not observed cancer cells in analyzed organs. The animals treated with free nanoparticles containing melittin and melittin (complete) showed no polyps. All animals showed hematological changes and the animals that received the treatments with melittin and complete had biochemical changes. All the animal groups still showed histopathological changes associated with damages in the liver, hemolysis in some organs in the treatment with free melittin and enhanced regression of neoplastic cells on the treatment with melittin when compared treatment with the nanoparticle. Immediate action of free melittin in tumor inhibition, compared to the full nanoparticles was confirmed with the highest expression of anti-tumor proteins. However, the treatment with chitosan nanoparticles containing melittin was less aggressive to the body, does not cause hemolysis, and was active on neoplastic breast cells.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva (Mestrado Profissional) da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito para a obtenção do título de Mestre em Saúde Coletiva. / Introdução: O câncer de boca é o sexto tipo de câncer mais comum no mundo e tem uma preocupante taxa de letalidade estimada em 50%, representando, assim, um problema de Saúde Pública, que pode acarretar também em incapacitações. Assim, contribuindo à área de Avaliação de Tecnologias em Saúde, são necessários estudos associados à investigação de novos métodos de prevenção e diagnóstico do câncer de boca, possibilitando detecção precoce e maior taxa de sucesso no tratamento. Ao longo das últimas décadas, o padrão ouro para diagnóstico do câncer bucal tem sido a biópsia, porém novos métodos diagnósticos não invasivos têm sido propostos, dentre eles a Ressonância Nuclear Magnética. Objetivo: Determinar a acurácia diagnóstica da Ressonância Nuclear Magnética no apoio ao diagnóstico de câncer bucal por meio de uma Revisão Sistemática e Metanálise. Métodos: Revisão Sistemática e Metanálise. A estratégia de busca foi realizada fazendo-se uma pesquisa exaustiva nas bases de dados Medline, Embase, Cochrane (e bases correlatas), incluindo a Literatura Cinza, por publicações realizadas de 1986 a 2016. Foram incluídos estudos primários de acurácia diagnóstica, que avaliaram o câncer de boca (condições alvo) por meio de Ressonância Nuclear Magnética (teste em avaliação). Mediante heterogeneidade apresentada foi utilizado o modelo de efeitos aleatórios de DerSimonian e Laird. Foi realizada a análise de limiar diagnóstico. Análises de sensibilidade também foram realizadas para identificar os cofatores associados a heterogeneidade, e potenciais cofatores contínuos também foram investigados pela metaregressão. A metanálise foi desenvolvida no software Meta-DiSc® v.1.4. Resultados: Foram avaliados 24 estudos primários que totalizaram 1.404 lesões de câncer bucal. Desses, 9 estudos utilizaram a Ressonância Nuclear Magnética Diffusion Weighted resultando em DOR de 30,7 (IC 95%: 12,7-74,3), AUC de 0,917 (IC 95%: 0,915- 0,918), sensibilidade de 76,4% (IC 95%: 67,3%-83,9%), e especificidade de 91,3% (IC 95%: 87,3%-94,4%); 7 utilizaram a Ressonância Nuclear Magnética Dynamic Contrast Enhanced, resultando em DOR de 48,1 (IC 95%: 22,4-103,2), AUC de 0,936 (IC 95%: 0,934-0,937), sensibilidade de 84,0% (IC 95%: 76,2%-90,1%), e especificidade de 89,5% (IC 95%: 84,7%-93,2%); e 13 consideraram a Ressonância Nuclear Magnética Tradicional, resultando em DOR de 23,9 (IC 95%: 13,2-43,3), AUC de 0,894 (IC 95%: 0,894-0,895), sensibilidade de 72,5% (IC 95%: 66,4%-78,0%), e especificidade de 86,6% (IC 95%: 84,0%-88,9%). Não foi observado efeito de limiar diagnóstico. Nas análises realizadas por meio da meta-regressão, observou-se que a intensidade do campo magnético Tesla possa ter influenciado a heterogeneidade (p=0,0233) na Ressonância Tradicional. As análises de sensibilidade revelaram discreta diminuição da Inconsistência em alguns subgrupos. Conclusão: A Ressonância Nuclear Magnética Dynamic Contrast Enhanced apresentou maior acurácia para o diagnóstico de câncer bucal em relação as demais, apresentando-se como método não invasivo e acurado de apoio ao diagnóstico de câncer de boca. Assim, considerando a importância do tratamento precoce e do rastreamento, e que a melhor qualidade da assistência de saúde resulta em melhores taxas de sobrevida e melhor qualidade de vida para o paciente com câncer bucal, sugerimos sua utilização como parte do protocolo de pré-tratamento e acompanhamento no SUS.

Dissertação de Mestrado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC para a obtenção do titulo de Mestre em Ciências da Saúde. / Objective: We performed a systematic review and a meta-analysis to estimate the prevalence of human papillomavirus (HPV) in ovarian cancer. Methods: A comprehensive search of the Cochrane Library, MEDLINE, CANCERLIT, LILACS, Grey literature and EMBASE was performed for papers published from January 1990 to March 2012. The following Medical Subject Headings (MeSH) terms were searched: “ovarian tumor”or “ovarian cancers” and “HPV” or “human papillomavirus”. Was included case-control and cross-sectional studies, prospective or retrospective, that evaluated clinical ovarian cancer and provided a clear description of the use of in situ hybridization (ISH), Southern blot hybridization (SBH) and Polymerase chain reaction (PCR). The statistical analysis was performed using REVMAN 5.0. Results: In total, twenty four primary studies were included in this meta-analysis. Studies from eleven countries on three continents contained data on HPV and ovarian cancer, including 889 subjects. Overall, the HPV prevalence in patients with ovarian cancer was 17.5 (95% CI, 15.0-20.0%). HPV prevalence ranged from 4.0% (95% CI, 1.7-6.3%) in Europe to 31.4% (95% CI, 26.9-35.9%) in Asia. An aggregate of four case-control studies from Asia showed an OR of 2.48 (95% CI, 0.64 - 9.57). Conclusion: We found a high prevalence of HPV-positive DNA in ovarian cancer cases, but remains inconclusive, the role of HPV in ovarian cancer. Further studies are needed to control case to answer this question. / Objetivo: Foi realizada uma revisão sistemática e uma metanálise para estimar a prevalência do Papilomavírus humano (HPV) em câncer de ovário. Métodos: Foi feita uma pesquisa abrangente da Biblioteca Cochrane, MEDLINE, CANCERLIT, LILACS, Grey literatura e EMBASE para artigos publicados a partir de janeiro de 1990 a março de 2012. Os seguintes termos (Medical Subject Headings (MeSH)) foram pesquisados: "tumor de ovário" ou "câncer de ovário" e "HPV" ou "papilomavirus humano". Foram incluídos estudos caso-controle e transversais, prospectivos ou retrospectivos, que avaliassem a presença de HPV no câncer de ovário e fornecessem uma descrição clara dos métodos laboratoriais utilizados: hibridização In situ (ISH), Southern blot (SBH) ou reação em cadeia da polimerase (PCR). A análise estatística foi realizada usando RevMan 5.0. Resultados: No total, vinte e quatro estudos primários foram incluídos nesta metaanálise. Estudos de onze países em três continentes continham dados sobre o HPV e câncer de ovário, incluindo 889 mulheres. A prevalência de HPV em pacientes com câncer de ovário foi de 17.5 (IC 95%, 15.0-20.0%).A prevalência de HPV variou de 4.0% (95% IC, 1.7-6.3%) na Europa para 31.4% (IC 95%, 26.9-35.9%), na Ásia. Um total de quatro estudos casocontrole da Ásia mostrou um OR de 2.48 (95% IC, 0.64-9.57). Conclusão: Foram encontramos uma alta prevalência de HPV-DNA positivo em casos de câncer de ovário, mas permanece inconclusivo, o papel do HPV no câncer de ovário. Mais estudos de caso-controles são necessários para determinar a associação do HPV com câncer de ovário.

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraço / Resumo: O câncer é o principal problema mundial de saúde e nos últimos anos o Brasil obteve um avanço considerável no índice de mortalidade por câncer. O câncer de cólon afeta igualmente homens e mulheres, sendo uma doença tratável e freqüentemente curável. O sistema imune é responsável pela defesa do organismo contra patógenos e alguns tumores, que desencadeiam uma resposta imune especifica na tentativa de suprimir seu crescimento. Associado à atuação dos macrófagos, o consumo de produtos derivados da soja está sendo muito difundido atualmente, podendo diminuir o risco de determinadas doenças, inclusive dos tumores, melhorando as condições de saúde. As bactérias ácido láticas são utilizadas em alimentos probióticos e são capazes de promover uma estimulação do sistema imune, influenciando através do aumento da fagocitose de patógenos e também quanto à produção de citocinas. Neste trabalho, avaliou-se a resposta imune no desenvolvimento de câncer de cólon induzido quimicamente com 1,2 dimetilhidrazina em ratos que receberam produto de soja fermentado com Enterococcus faecium CRL 183 e Lactobacillus helveticus ssp. jugurti 416, os quais foram suplementados ou não com cálcio. Os animais com e sem tumores receberam o produto fermentado de soja ou o produto fermentado de soja suplementado com cálcio. Aos controles não foi administrado o produto fermentado de soja ou suplementado. Estes grupos tiveram a atividade imunológica avaliada através da produção de mediadores como peróxido de hidrogênio (H2O2), óxido nítrico (NO), interleucina (IL)-1 , fator de necrose tumoral-a (TNF-a) e IL-6, produzidos pelos macrófagos, e interferon- (IFN-g) e IL-4 produzidos pelas células esplênicas. Os resultados demonstram que com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cancer is the main problem of health and in the last years Brazil had a considerable progress in the mortality rate for cancer. Colon cancer affects men and women equally, and it is a treatable and frequently curable disease. Immune system is responsible for the organism defense against pathogenic substances and some tumors that unchain a specific immune response in the attempt of suppressing its growth. Combined the macrophages performance, the consumption of products derived from soy is being very spread now, could reduce the risk certain diseases, including tumors, improving health condition. Lactic acid bacteria is utilized in probiotic food and can promote a stimulation of immune system influencing through the increase of the pathogen phagocytosis and also the cytokines production. In this work, the immune response was evaluated in the development of colon cancer induced chemically with 1,2 dimethylhydrazine in rats that received soy product fermented with Enterococcus faecium CRL 183 and Lactobacillus helveticus ssp. jugurti 416; which were supplemented or not with calcium. Animals with or without tumors that received the fermented soy product or the fermented soy product supplemented with calcium and to controls groups that didn’t receive the fermented soy product or supplement with calcium. In these groups the immunological activity was evaluated through production of mediators such as hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), interleukin (IL)-1 , tumoral necrosis factor- (TNF- ) and IL-6, produced by macrophages, and interferon- (IFN- ) and IL-4, produced by spleen cells. Results demonstrate that in tumor presence and fermented product there is a higher immune system stimulation observed in H2O2 production, as well as the animals without tumor and that received soy treatment. In the animals with tumors that... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de neoplasia maligna mais frequente no mundo, o qual apresenta elevadas taxas de mortalidade. Os compostos organotelurados (OT) possuem interessantes efeitos biológicos, como potenciais antioxidantes e ações antiproliferativas. O ditelureto de difenila (DTDF), um composto OT, simples e estável, atualmente é investigado quanto aos seus efeitos biológicos. Em estudos anteriores, o DTDF apresentou ação antigenotóxica e antimutagênica em baixas concentrações. No entanto, em concentrações mais elevadas, o DTDF mostrou-se citotóxico em células de mamífero (V79) pela indução de genotoxicidade, parada do ciclo celular e inibição de topoisomerase I (TopoI). Por conseguinte, a citotoxicidade dos compostos OTs tem sido explorada em diversos estudos, assim como sua ação como agentes antiproliferativos em terapias anticâncer é também investigada. O objetivo deste estudo é avaliar o potencial antiproliferativo, genotóxico e análise de ciclo celular do DPDT em linhagens de células humanas HCT116 (carcinoma) e HT-29 (adenocarcinoma). Os resultados mostraram diminuição da viabilidade celular após exposição ao DTDF por 72 horas em ambas as linhagens celulares, avaliadas por MTT e ensaio clonogênico. Os valores de IC50 obtidos foram de 10,74 e 2 μM para MRC5 e HCT116, respectivamente, no ensaio MTT. No ensaio cometa, o DTDF mostrou capacidade de induzir aumento de índice de dano (ID) no DNA com 10 μM após 3 e 24 horas de exposição, em MRC5 e HCT116. Para 24 horas de exposição, o aumento no ID ocorre apenas em células HCT116, em concentrações ≤ 5 μM de DTDF. Para uma melhor compreensão, foi avaliado se DTDF foi capaz de causar quebras ou interações diretas com DNA pelas análises de quebra de DNA plasmidial e de dicroísmo circular (DC). Não foram detectadas quebras duplas ou simples em concentrações que vão de 0 a 400 μM de DTDF pela análise de quebra de DNA plasmidial. No experimento de DC, na mesma faixa de concentrações, não foi possível detectar interações diretas de DTDF com o DNA plasmidial. Por citometria de fluxo, foi realizada a análise de ciclo celular, onde foi observado a parada em G2/M após 24, 48 e 72 horas de exposição em 5 e 10 μM de DTDF. Foi avaliado pelo método TARDIS se o DTDF foi capaz causar a inibição da enzima topoisomerase II (TopoII) em HCT116 e MRC5. Em 3 horas de exposição, em 5 e 10 μM, o DTDF não foi capaz de induzir formação de complexos DNA-TopoII. Os resultados mostraram que a linhagem HCT116 foi mais sensíveis aos efeitos citotóxicos do DTDF do que as células MRC5. Como foi demonstrado que o DTDF não é capaz de interagir diretamente com DNA, essa diferença pode estar relacionada com os efeitos genotóxicos indiretos, como estresse oxidativo ou inibição de TopoI, que levaram a parada em G2/M. Esses resultados fortalecem a hipótese de inibição de TopoI, visto que os mecanismos celulares do DTDF estão relacionados com seu efeito genotóxico e parada no ciclo celular. Assim, os resultados desse trabalho abrem possibilidades de estudos futuros para investigações mais aprofundadas de possíveis mecanismos de ação moleculares do DTDF em células de câncer colorretal. / Colorectal cancer is the third more frequent type of cancer worldwide and has high mortality rates. Diphenyl ditelluride (DPDT) is an organotellurium (OT) compound with biological effects, such as potential antioxidant, antigenotoxic and antimutagenic at low concentrations. However, higher concentrations of DPDT showed cytotoxic effects in mammalian V79 cells by inducing oxidative damage, DNA strand breaks, cell cycle arrest and topoisomerase I (TopoI) inhibition. In this sense, the cytotoxicity of OT compounds has been reported, and the observed effects attributed for anticancer therapy application. Thus, the objective of this study is to investigate the antiproliferative, genotoxic and cell cycle arrest potential of DPDT in human colon cancer cells (HCT116) and human fibroblast cells (MRC5). The results showed a decrease in cell viability after DPDT exposition for 72 h in both cell lines, as evaluated by MTT and clonogenic assays. The IC50 values obtained were 10.74 and 2 μM for MRC5 and HCT116, respectively in MTT assay. In the comet assay, DPDT at concentrations ≤ 5 μM was able to increase DNA strand breaks induction only in HCT116 cells after 24 h of exposure. For a better understanding, we evaluated if DPDT was able to cause strand breaks in direct interaction with plasmidial DNA breakage analysis. No single or double strand breaks were detected in a range of concentrations from 0 to 400 μM. By circular dichroism analysis, no direct interactions with DNA were found at the same concentrations. Furthermore, cell cycle arrest in G2/M phase detected by flow cytometry was more pronounced in the HCT116 than MRC5 cell lines after 24, 48 and 72 h of exposure. By the TARDIS method, we evaluate if DPDT was able to inhibit topoisomerase II. For 3 h exposure, in 5 and 10 μM, DPDT does not shows topoisomerase II inhibition. Taken together, HCT116 colon cancer cells were more sensitive to DPDT biological effects than MRC5 cells. This difference may be related to the stronger indirect genotoxic effects induced by DPDT in HCT116 cells, which probably triggered the cell cycle arrest. The action of DPDT apparently occurs in the S phase, taking place to cell cycle arrest in G2/M, reinforcing the hypothesis of TopoI inhibition. Thus, the results of this work open up possibilities for future studies on further investigation of possible mechanisms of molecular action of DTDF in colorectal cancer cells.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o número de AgNORs por núcleo e a expressão de Ki-67 no fronte de invasão tumoral e sua correlação com os parâmetros clínicos (TNM), morfológicos (fronte de invasão tumoral, graduação histopatológica), do carcinoma de células escamosas da mucosa bucal. Foram incluídos 48 pacientes de um total de 109 pacientes analisados no período de 2000 a 2010. A idade média foi de 63 anos, a língua a localização mais comum representando 41,7% dos casos, e 79,2% dos casos eram os homens. Todos diagnosticados e tratados no Instituto Nacional do Câncer de Montevideo, Uruguai. Todos os espécimes incluídos neste estudo deviam ter presente o fronte de invasão (FIT) claramente demonstrado com uma faixa de ilhas de tecido conjuntivo adjacente. Todas as amostras foram obtidas da peça de ressecção do tumor e foram submetidas ás técnicas de hematoxilina/eosina, imunoistoquímica para anticorpo Ki-67 e técnica de AgNOR. Observou-se uma correlação significativa nos Carcinomas Espinocelulares localizados em áreas de alto risco (língua, assoalho da boca e trígono retromolar) em comparação com as áreas de baixo risco (mucosa labial, gengiva, palato), por meio da marcação de AgNOR (p=0,0085). Neste estudo foi encontrada uma associação do tamanho do tumor para T2 e T3 com a sobrevida dos pacientes (p=0,036). Na área de invasão tumoral foi observado que os pacientes com padrão IV do FIT apresentam 60% de grau III de diferenciação celular de acordo com a OMS, 80% eram T3 e 80% evoluíram para óbito. A média de células positivas para Ki-67 foi de 22,3% ±11.89. O padrão I-IV de FIT expressam positividade para Ki-67 com uma relação inversa (p<0,032). Não foi observada associação entre os parâmetros de proliferação celular estudados com o tipo de fronte de invasão tumoral, nem com o grau de diferenciação celular.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-05-23T15:39:42Z No. of bitstreams: 1 2014_JoseAntonioFagundesAssumpcao.pdf: 3622544 bytes, checksum: 69187fd02b717af559572e04f4554526 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-26T13:43:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_JoseAntonioFagundesAssumpcao.pdf: 3622544 bytes, checksum: 69187fd02b717af559572e04f4554526 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-26T13:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_JoseAntonioFagundesAssumpcao.pdf: 3622544 bytes, checksum: 69187fd02b717af559572e04f4554526 (MD5) / O processo autofágico possui um papel dinâmico e dualístico na progressão do câncer, dependendo do seu estágio de desenvolvimento. Nos estágios iniciais, a autofagia tem um papel supressor de tumores pela remoção de organelas e proteínas defeituosas que tenham capacidade de alterar o metabolismo celular. Já em tumores bem estabelecidos, a autofagia se relaciona fortemente com a sobrevivência das células tumorais no microambiente adverso no qual se encontram, bem como com a manutenção de um estado metabólico acelerado. No câncer de mama o processo autofágico pode ser modulado através de receptores nucleares chamados PPAR, fator de transcrição que regula a expressão de diversos genes essenciais para diferenciação, proliferação e sobrevivência celular, além de influenciar o metabolismo lipídico e não lipídico. O papel conjunto e a relação entre autofagia e PPARɣ no estabelecimento e progressão do câncer colorretal, todavia, ainda precisa ser determinado. Células de linhagem de câncer colorretal (Caco-2) foram tratadas com o indutores e inibidores de autofagia e do PPARɣ durante 24 horas. Após tratamento, diversas propriedades tumorais, como morte celular, proliferação, ciclo celular, produção de espécies reativas de oxigênio e o perfil de células tronco tumorais foram aferidos através de citometria de fluxo. A expressão de PPARɣ e LC3 (principal marcador autofágico) foram analisadas por Immunoblotting. Nossos resultados mostraram que na linhagem de câncer colorretal Caco-2, a ativação PPARɣ leva a indução de autofagia e que a inibição autofágica resulta em aumento da expressão de PPARɣ, como visto na expressão de PPARɣ e LC3 e na regulação de corpúsculos lipídicos e vesículas acídicas. Além disso, as propriedades tumorais analisadas (morte, proliferação, ciclo celular, produção de espécies reativas de oxigênio e perfil de células-tronco) foram alteradas tanto pela indução ou inibição da via autofágica, quanto pela modulação de PPARɣ. A inibição da autofagia teve como consequência um aumento da proliferação celular, da produção de espécies reativas de oxigênio e dos fenótipos CD44+, bem como do índice de morte celular. Portanto, nossos dados sugerem que autofagia e metabolismo lipídico são processos inter-relacionados, mas que afetam as propriedades tumorais do câncer colorretal de maneira diferencial e de forma independente. Neste modelo, a via autofágica parece desempenhar papel crucial na sobrevivência, estabelecimento e progressão tumoral do câncer colorretal. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The autophagic pathway shows a dynamic and dualistic role in cancer progression, depending on its developmental stage. In early stages, autophagy acts as a tumor suppressor, removing defective organelles and proteins with potential to alter the cellular metabolism. In the other hand, well-established tumors show the autophagy process to be related with cancer cell survival in the harsh microenviroment in which they are found, and this cellular process also contributes to maintain an accelerated metabolic state. In breast cancer, the autophagic process is modulated by nuclear receptors called PPAR, transcription factors that regulate the expression of many genes essential for differentiation, proliferation and cell survival, as well as influencing lipid and non-lipid metabolism. The cooperative action and the relationship between autophagy and PPARɣ role in the establishment and progression of colorectal cancer, however, remains to be determined. To clarify this relationship, lineage cells from colorectal cancer (Caco-2) were treated with inducers and inhibitors of autophagy and PPARɣ for 24 hours. After treatment, several tumor properties, such as cell death, proliferation, cell cycle, production of reactive oxygen species and the profile of cancer stem cells were measured by flow cytometry. The expression of PPARɣ and LC3 (main autophagic marker) also was analyzed by Immunoblotting. Our results showed that the in Caco-2 colorectal cancer cell line, activation of PPARɣ leads to induction of autophagy and that autophagic inhibition leads to a higher PPARɣ expression, as seen by the expression of LC3 and PPARɣ, lipid bodies regulation and also by formation of acidic vesicles. Moreover, the analyzed tumor properties were modified either by induction or inhibition of autophagy route, as well as by PPARɣ modulation. The autophagic inhibition resulted in increased cell proliferation process, production of reactive oxygen species and CD44 + phenotypes, as well as cell death. Therefore, our data suggest that autophagy and lipid metabolism are interrelated processes that affect the tumoral properties of colorectal cancer differential and independently. In this model, the autophagic pathway seems to play a crucial role in colorectal cancer’s survival, establishment and progression.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-27T11:52:38Z No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / O câncer é definido como um conjunto de mais de cem doenças caracterizado por desordens celulares ocasionadas por múltiplas alterações genéticas que conduzem a um desequilíbrio na proliferação e morte celular. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012 e 2013 apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 casos novos de câncer, dentre os quais, o mais incidente será o câncer de pele não melanoma. Devido a tantos efeitos colaterais das terapias convencionais no tratamento das neoplasias, a terapia fotodinâmica (TFD) desponta como uma alternativa segura e altamente eficaz no tratamento de diversos tipos de câncer. A sua alta eficácia decorre da indução direta de morte das células neoplásicas, da destruição da microvasculatura tumoral e do reforço da imunidade antitumoral. A TFD é realizada combinando-se o oxigênio molecular, luz de comprimento de onda específico e um fotossensibilizante. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma nanoemulsão (nanoA) à base de óleo de açaí como fotossensibilizante para uso na TFD e investigar os efeitos biológicos in vitro e in vivo no tratamento de câncer de pele não-melanoma. Para formulação da nanoA, foi utilizado água, óleo e surfactante Tween 80 e utilizou-se o método de temperatura de inversão de fase (PIT). Para a avaliação dos aspectos morfológicos e coloidais da nanoA utilizou-se recursos de microscopia eletrônica de transmissão e aparelho de dispersão dinâmica de luz Zetasizer, respectivamente. As propriedades fotofísicas foram avaliadas com leituras dos espectros de absorbância e fluorescência em espectrofotômetro. A nano A apresentou pico de absorção e emissão na região do vermelho,o que é bom para fotossensibilizantes a serem aplicados na TFD já que corresponde à janela óptica tecidual. O diâmetro hidrodinâmico obtido foi de 117,5 nm, o diâmetro médio de 74 nm, o índice de polidispersividade de 0,144 e potencial zeta de -0.536mV; características essas que viabilizam o uso da nanoA em sistemas biológicos devido a monodispersividade e pequeno diâmetro, favorecendo a retenção e permeação no tumor (EPR). A capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio foi medida através do método de decaimento por benzofurano, comprovando a atividade fotoquímica do óleo, viabilizando seu uso como fotossensibilizante na TFD. A avaliação in vitro consistiu em análises de incorporação e distribuição da nanoA em células de carcinoma epidermóide humano A431 e em fibroblasto humano Detroit, assim como na avaliação da citotoxicidade das linhagens submetidas a diferentes concentrações da nanoA na ausência e na presença de luz. A linhagem normal mostrou-se inerte à incubação com a nanoA enquanto que a tumoral foi mais sensível nos menores tempos de exposição à nano tanto no escuro quanto pós-irradiação. O tempo necessário à incubação foi de quinze minutos e de irradiação equivalente à 10 minutos. A avaliação in vivo consistiu em análises clínica e histopatológica de tumores induzidos por injeção ortotópica de células A431 em camundongos nude, tratados com três sessões de TFD além de análises sanguíneas. Tanto a terapia quanto o fármaco sozinho apresentaram atividade antitumoral. A TFD foi responsável por 33% de regressão total enquanto que a nanoemulsão sozinha por 16% de regressão total e 33% de regressão parcial. Estes resultados indicam que esta inédita nanoemulsão é em potencial um novo fármaco para aplicação antitumoral, considerando a alta resistência do carcinoma estudado e a grande eficácia do tratamento alcançado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is defined as a set of more than hundred diseases characterized by cellular disorders caused by multiple genetic alterations that leads to imbalance between cell proliferation and death. In Brazil, approximately 518,510 new cases of cancer have been estimated from 2012 to 2013, majority being of non melanoma form of skin cancer. Due to so many side effects of the conventional therapies in the treatment of the neoplasias, the photodynamic therapy (PDT) emerges as a safe and highly efficient alternative in the treatment of several types of cancer. This high efficiency results from the straight induction of death of cancer cells , from the destruction of the tumor vasculature and to the reinforcement of the antitumor immunity. PDT is employed with combination molecular oxygen, specific wavelength and photosensitizers. So, the objective of this work was to develop a nanoemulsion (nanoA) with açai oil as a photosensitizer for the application in PDT and investigates the biological effects in vitro and in vivo to evaluate the efficacy in the treatment of non melanoma skin cancer. For This formulation used water, oil and Tween 80 surfactant by the method of phase inversion temperature (PIT). For morphological and colloidal evaluation of nanoA transmission electronic microscopy, scanning electronic microscopy and dynamic dispersal of light Zetasizer were used. The photo-physical properties were evaluated with readings of the spectrum of absorbance and fluorescence in a spectrophotometer. The peak of absorption and emission was in the red region, which is good for application in PDT. The hydrodynamic diameter obtained was 117.5 nm, the middle diameter was 74 nm, the polydispersity index was 0.144 and the zeta potential was -0.536 mV. These features enabled the use of nanoA in biological systems, due to the monodispersity and small diameter favoring the permeation and retention in the tumor (EPR). The capacity of generation of reactive oxygen species was measured through the decline method for benzofuran proving the photochemical activity of the oil, enabling it´s use as a photosensitizer in PDT. The in vitro evaluation consisted of analyses of internalization and distribution of the nanoA in human epidermoid carcinoma cells A431 and in human fibroblast Detroit, as well as of evaluation the cytotoxicity of the cell line subjected to different concentrations of nanoA in the absence and in the presence of light. The normal cell line appeared inert to the incubation with the nanoA whereas the tumoral was more sensitive. The time necessary for nanoemulsion association on cells was fifteen minutes. The in vivo evaluation of the effects of nano A consisted of clinic and histopathological analyses of ortotopic induced tumor by injection of A431 cells in nude mice, treated with three sessions of PDT. As much as drug therapy alone showed antitumor activity. PDT was responsible for 33 % of total regression while the nanoemulsion alone for 16 % of total regression and 33 % of partial regression. These results indicate that this nanoemulsion is good as photosensitizer and a potential new antitumor drug for application in squamous cell carcinoma (SCC), considering the high resistance of this carcinoma and the great efficiency of the treatment.