Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Carcinoma oral de células escamosas (COCE) representa más del 90% de las neoplasias que afectan a la cavidad oral. En la respuesta inmune, a las células Natural Killers (NK), se les atribuye el rol de primera línea defensiva contra células tumorales. La relación entre la respuesta inmune local y el comportamiento biológico neoplásico es un proceso dinámico y controversial. Profundizar conocimientos entre la respuesta antitumoral y la etiopatogenia del COCE, en el ámbito celular y molecular, resulta fundamental para abordar de mejor manera el cáncer oral. El objetivo de este estudio es comparar la presencia de células NK en los distintos grados de diferenciación histopatológica del COCE, carcinoma verrucoso (CV) y mucosa oral sana (MS) con el fin de establecer una relación entre ellos. Materiales y Métodos: Se analizaron 31 muestras de COCE, 11 muestras de CV y 6 muestras de MS desde el Servicio de Anatomía Patológica de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, a las cuales se les realizó técnica inmunohistoquímica (IHQ) con el anticuerpo CD56 para detección de células NK. El análisis de inmunotinción se evaluó mediante microscopio óptico al 40X. Se tomaron 4 fotos continuas por muestra para realizar la cuantificación de células NK total. Se utilizó el test de Mann-Whitney para análisis comparativo de células NK entre los grupos y T-student para caracterizar la muestra. El análisis estadístico se realizó utilizando el software Stata 11.0. Resultados: Los subtipos de neoplasias malignas analizadas presentaron mayor cantidad de células NK total al compararlos con MS, estas diferencias fueron estadísticamente significativas, excepto para CV. El COCE pobremente diferenciado presentó la mayor cantidad de células NK total al compararlo con los otros grupos de estudio, siendo estas diferencias estadísticamente significativas con MS y CV. Conclusiones: Resultados muestran una asociación que a medida que el cáncer es más indiferenciado la cantidad de células NK total aumenta. Se necesitan más estudios con mayor número de muestras que respalden esta tendencia. / Adscrito a Proyecto FIOUCH 13-008

A modulação fenotípica da célula estrelada hepática (CEH) é um dos eventos primários do processo de fibrose hepática. Durante este evento, a CEH modifica seu fenótipo lipocítico (quiescente) para miofibroblástico (ativado), fenômeno chamado de ativação. Estudos recentes sugerem que fatores de transcrição adipogênicos atuam no processo de ativação das CEH, e conseqüentemente teriam um papel chave na evolução do processo fibrótico. Neste estudo analisamos a expressão gênica de vários fatores de transcrição adipogênicos, como os receptores ativados por proliferadores de peroxissomos (RAPP), receptor X do fígadoα (RXFα), proteína ligante de CCAAT/enhancerα (PLCEα) e proteína ligante do elemento regulatório de esteróis-1 (PLERE-1), em uma linhagem representativa de CEH, a GRX. A linhagem GRX, é capaz de ser induzida in vitro a expressar o fenótipo quiescente através do tratamento com indometacina ou retinol. Após 24 horas ou 7 dias de tratamento, a expressão gênica foi analisada através de PCR em tempo real. Tratamento com indometacina aumentou a expressão de todos os genes avaliados, exceto PLCEα e RAPPβ. O mesmo resultado obtido com desmetil indometacina (LM 4511) sobre RAPPα e γ sugere que a ação da indometacina sobre a diferenciação fenotípica da GRX é independente de sua ação inibitória sobre ciclooxigenase, já que a LM 4511 não possui esta atividade. Tratamento com retinol levou à modulação de um número menor de genes, diminuindo a expressão de PLCEα e aumentando a de RAPPγ, e RAPPβ. Adipsina, gene característico de adipócitos, teve sua expressão induzida apenas nas células tratadas com indometacina. Pex16 e catalase, genes modulados pelos RAPPs, foram diferencialmente expressos, dependendo do tratamento. Os resultados apresentados sugerem que a linhagem representativa de CEH, GRX, tem sua indução fenotípica modulada por fatores de transcrição adipogênicos, que são diferencialmente expressos dependendo do tratamento de conversão.

A radioproteção dos pacientes submetidos a exames radiográficos está diretamente ligada à qualidade e à repetição das radiografias realizadas. Esta dissertação é apresentada sob a forma de três artigos. O artigo I avaliou a qualidade de 300 radiografias panorâmicas enviadas a clínicas de ortodontia. As radiografias foram classificadas como excelentes (não se observam erros), aceitáveis para diagnóstico (observam-se erros, contudo os mesmos não impedem o diagnóstico) e inaceitáveis (imagem sem valor diagnóstico). Um total de 16,33% das radiografias foi considerado excelente, 78,66% aceitáveis para o diagnóstico e 5% inaceitáveis. Encontrou-se uma média de 1.54 erros por radiografia, sendo os mais freqüentemente encontrados a falta de contato da língua com o palato (21%), aparecimento de imagens fantasma (19,66%), mento inclinado para cima (15,66%), paciente à frente do plano de foco (13,33%), cabeça girada (13,33%), imagens com alta densidade (10,33%) e com baixa densidade (8,66%). Concluiu-se que os padrões de qualidade da amostra estão de acordo com o preconizado em Guidelines on Radiology Standards for Primary Dental Care, segundo os quais se admite até 10% de imagens inaceitáveis. Contudo, cabe salientar que não se conhece o índice de repetições nas clínicas onde as radiografias da amostra foram obtidas e, tendo passado por um controle de qualidade prévio, todas as imagens deveriam ser classificadas como excelentes ou aceitáveis. O artigo II avaliou a freqüência dos erros que levaram à repetição de radiografias panorâmicas realizadas no Serviço de Radiologia da FO-UFRS. O livro de registros do Serviço mostrou um total de 3815 radiografias panorâmicas realizadas no período de junho de 2002 a junho de 2005. No mesmo período o Serviço apresentou 330 radiografias panorâmicas repetidas, resultando em índice de repetição de 8,65% dos exames. Os erros mais freqüentemente encontrados foram: paciente posicionado à frente do plano de foco (25,15%); cabeça girada para direita ou esquerda (24,84%); cabeça inclinada para frente (21,21%); paciente posicionado atrás do plano de foco (20,30%); imagem com a alta densidade (19,69%); imagem com baixa densidade (17,27%); imagem com baixo contraste (16,96%); imagem com alto contraste (12,72%); cabeça inclinada para direita ou esquerda (12,42%); corte do côndilo na radiografia (11,21); corte do mento na radiografia (8,48%); ausência de contato da língua com o palato (7,27%); paciente se moveu durante a exposição (4,94%); cabeça inclinada para trás (2,72%) e aparecimento de imagem fantasma (2,12%). Encontrou-se uma média de 2,07 erros por radiografia. Conclui-se que os erros mais freqüentemente cometidos foram classificados como erros de posicionamento do paciente e que o Serviço de Radiologia da FO-UFRGS apresenta um índice de repetição de radiografias panorâmicas satisfatório, estando de acordo com os padrões de qualidade estabelecidos pelo Guidelines on Radiology Standards for Primary Dental Care. O artigo III teve por objetivo verificar o efeito da radiação emitida em radiografias panorâmicas sobre as células da borda lateral direita da língua, através da avaliação das alterações nucleares, antes e depois da exposição aos raios X. A amostra foi constituída de 42 indivíduos adultos jovens do gênero masculino, sendo 22 deles pertencentes ao grupo que realizou uma radiografia panorâmica (grupo I) e os outros 20 pacientes pertencentes ao grupo II, que realizou duas radiografias panorâmicas. O exame citopatológico das células esfoliadas da mucosa da língua foi realizado antes da incidência radiográfica e 10 dias após. As células foram obtidas através da raspagem e as lâminas foram coradas pela técnica de Feulgen. Para observação das alterações citopatológicas foram analisadas 2.000 células em cada lâmina e quantificados os micronúcleos, buds, broken eggs, cariorrexes e células binucleadas. As lâminas foram analisadas por um único observador. Constatou-se que existe diferença significativa (p=0,01) para as variáveis broken egg, bud, cariorrexe e célula binucleada antes e depois da exposição à radiação ionizante. Na comparação entre os grupos, verificou-se que as variáveis cariorrexe e célula binucleada apresentaram diferença significativa (p=0,01), ambas com valores superiores para o grupo II.

Existe um interesse crescente pelo controle das condições de cultivo necessárias para a expansão de células-tronco de indivíduos adultos devido ao grande potencial para o desenvolvimento de pesquisa básica e de aplicações terapêuticas apresentado pelas mesmas. Atualmente, a literatura apresenta poucos trabalhos que detalhem a biologia da célula-tronco mesenquimal (MSC) de camundongo, revelando a necessidade de estudos voltados para este tema. Quatro culturas de longa duração foram produzidas com células da medula óssea de camundongos normais e IDUA knock-out através de técnicas de cultivo relativamente simples. Estas culturas puderam ser mantidas por até 40 passagens, e demonstraram ser morfologicamente homogêneas. Células dessas culturas puderam ser induzidas a diferenciarem-se ao longo de vias de diferenciação adipogênica e osteogênica, e revelaram ser capazes de suportar o crescimento e a proliferação de células-tronco hematopoiéticas. Por apresentarem tais características funcionais, essas populações celulares foram operacionalmente definidas como MSCs. Quando o repertório de marcadores de superfície dessas células foi observado por meio de citometria de fluxo, verificou-se que elas eram positivas para Sca-1, CD29, CD44 e CD49e, e eram negativas para CD11b, CD13, CD18, CD19, CD31, CD45, CD49d e Gr-1 Este perfil de moléculas de superfície assemelha-se àquele descrito para a MSC humana, e indica ausência de contaminantes hematopoiéticos. Uma verificação preliminar da freqüência da MSC na medula óssea de camundongo foi realizada, trazendo a estimativa de que uma MSC está presente numa faixa de 11.000 – 27.000 células. Finalmente, os dados revelaram que não há diferenças imediatamente perceptíveis entre camundongos normais e do modelo murino de MPS I no tocante à MSC, o que indica que os trabalhos futuros visando à correção da deficiência de α-L-iduronidase neste modelo utilizando a MSC são viáveis. O estabelecimento da metodologia para o cultivo e expansão da MSC murina através de técnicas simples vem preencher uma lacuna existente no campo dos modelos experimentais animais, trazendo novas perspectivas para o desenvolvimento de estratégias de terapia celular/genética em modelos experimentais murinos.

Introdução: A epitestosterona é um epímero α da testosterona. Esse esteroide possui uma atividade antiandrogênica, assim como um efeito neuroprotetor. No entanto, o mecanismo de ação da epitestosterona ainda não foi elucidado. Objetivos: O objetivo desse trabalho é investigar o efeito não clássico da epitestosterona sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de testículos de ratos de 15, 21 e 35 dias de idade e sobre a captação de 45Ca2+ no tecido testicular de ratos de 12 dias de idade. Materiais e métodos: O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. Foi realizada a aplicação de epitestosterona (0,5, 1 e 2μM) ou de testosterona (1μM), com ou sem a perfusão com flutamida (1μM), verapamil (100μM) ou U73122 (2μM). Os testículos de ratos de 12 dias de idade foram pré-incubados com 45Ca2+, com ou sem flutamida (1μM), e incubados com epitestosterona (1μM) ou testosterona (1μM). Análise estatística: Teste t de Student ou ANOVA para medidas repetidas seguido do pós-teste de Bonferroni. Resultados: A epitestosterona produziu uma resposta de despolarização do potencial de membrana, assim como um aumento na resistência de membrana em células de Sertoli de ratos de 15, 21 e 35 dias de idade. Esse esteroide apresentou uma resposta semelhante à apresentada pela testosterona. Os efeitos da epitestosterona não foram modificados após a perfusão com flutamida, um inibidor do receptor androgênico intracelular. A epitestosterona promoveu um aumento na captação de 45Ca2+ após 5 minutos de incubação, e esse efeito não foi bloqueado pela flutamida. O efeito despolarizante desse esteroide foi parcialmente inibido pelo fármaco verapamil, um bloqueador dos canais de cálcio tipo L, e pelo U73122, um inibidor da enzima fosfolipase C. Conclusão: Esses resultados indicam uma atuação da epitestosterona em células de Sertoli através de uma ação não clássica; esses efeitos são semelhantes aos encontrados para a testosterona em células de Sertoli de testículos de ratos. / Introduction: Epitestosterone is the 17α-epimer of testosterone. It seems to possess an antiandrogenic activity, as well as a neuroprotective effect. The mechanism of action of epitestosterone has not been elucidated. Objective: The aim of this work is to investigate the non-classical effect of epitestosterone on the membrane of Sertoli cells from testis of 12-, 15-, 21- and 35-day-old rats. Materials and Methods: The membrane potential and the membrane input resistance of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. Application of epitestosterone (0.5, 1 and 2μM) or testosterone (1μM) alone and after infusion with flutamide (1μM), verapamil (100μM) or U73122 (2μM) was made. The testes from 12-day-old rats were pre-incubated with 45Ca2+ with or without flutamide (1μM) and incubated with epitestosterone (1μM) or testosterone (1μM). Student's t-test or ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test was used. Results: Epitestosterone produced a depolarization in the membrane potential and increased the input membrane resistance on Sertoli cells from 15-, 21- and 35-day-old rats. This steroid showed a similar response to testosterone. The effect of epitestosterone was not changed after perfusion with flutamide, an intracellular androgen receptor inhibitor. Epitestosterone increased 45Ca2+ uptake within 5 minutes and this effect was also not inhibited by flutamide. The depolarizing effect was slightly inhibited by verapamil, a voltage-dependent calcium channel blocker, and by U73122, a PLC inhibitor. Conclusion: These results indicate that epitestosterone acts on the Sertoli cells via a non-classical signaling pathway; the effects are similar to that of testosterone in Sertoli cells in whole seminiferous tubules from rat testes.

Células a combustível de etanol direto (DEFCs) apresentam um grande potencial como tecnologia para produzir energia limpa, especialmente por fornecer uma eficiente conversão do combustível com baixa emissão de poluentes. Esses tipos de células a combustível operam em baixas temperaturas e convertem diretamente energia química em eletricidade. O etanol apresenta uma grande vantagem com relação ao seu uso, visto que o Brasil pode produzir etanol a partir da cana de açúcar a preços extremamente competitivos. Uma desvantagem é que as DEFC operam à baixa temperatura o que torna as reações de oxidação e redução mais lentas, necessitando de eletrocatalisadores capazes de acelerar essas reações. Eletrocatalisadores a base de Pt são os mais indicados. O presente trabalho tem como objetivo investigar a síntese de ligas binárias e ternárias à base de Pt, Sn e Ni suportadas em carbono Vulcan XC72R. As ligas foram sintetizadas pelo método de impregnação/redução empregando etilenoglicol como agente redutor. As técnicas de caracterização empregadas foram Espectrometria de Retroespalhamento de Rutherford (RBS), Difração de Raios X (DRX), Microscopia Eletrônica de Transmissão de Alta Resolução (HRTEM), Voltametria Cíclica e Espectroscopia de Impedância Eletroquímica (EIE). Os ensaios eletroquímicos mostraram, que a adição de estanho e níquel à platina melhora sua atividade catalítica. Além disso, observou-se que a adição de estanho provocou a dilatação do retículo cristalino, enquanto que a adição de níquel provocou a contração do mesmo. A contração do retículo cristalino pode contribuir para uma redução no envenenamento de platina por espécies intermediárias provenientes da eletro-oxidação do etanol, e um conseqüente aumento da atividade catalítica frente à oxidação do etanol. / Direct ethanol fuel cells (DEFCs) show a wide potential as technology to produce clean energy, especially for provide an efficient fuel conversion with low pollutants emission. These are systems that operate at low temperatures and convert chemical energy directly into electricity. Ethanol presents a great advantage in respect to its use, since Brazil can produce ethanol from sugar cane at extremely competitive prices. A disadvantage is that the DEFC operate at low temperature, which makes the oxidation and reduction reactions slower, requiring electrocatalysts able to accelerate these reactions. Pt-based electrocatalysts are the most suitable. The present work aims to investigate the synthesis of binary and ternary alloys based on Pt-Sn-Ni supported on carbon Vulcan XC72R. The alloys were synthesized by the impregnation/reduction method using ethylene glycol as reducing agent. The characterization techniques employed were Rutherford Backscattering Spectroscopy (RBS), X-ray Diffraction (XRD), High-resolution transmission electron microscopy (HRTEM), Cyclic Voltammetry (CV) and Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS). The electrochemical tests showed, as expected, that the addition of tin and nickel to platinum improves its catalytic activity. In addition, it was observed that the addition of tin led to the expansion of the crystalline lattice, while the addition of nickel resulted in it contraction. The contraction of crystalline lattice contribute to a reduction in platinum poisoning by intermediate species coming from ethanol electrooxidation, and a consequent increase in catalytic activity toward ethanol.

Células-tronco mesenquimais (MSCs) são um tipo de célula-tronco pós-natal que se mostram muito promissoras como ferramentas terapêuticas porque elas exibem grande plasticidade, e podem ser isoladas e manipuladas de modo reprodutível e com poucos ou nenhum problema ético. Elas foram inicialmente descritas há mais de 30 anos, sob a designação de unidades formadoras de colônia de fibroblasto, e a maior parte do nosso conhecimento sobre elas advém de estudos in vitro. Compreender o comportamento das MSCs in vivo. é um fator chave para o desenvolvimento de terapias celulares eficientes e para engenharia tecidual. Atualmente, as localização e função reais de MSCs in vivo ainda são pouco compreendidas. Em uma tentativa de melhor compreender a biologia da MSC, células apresentando características de tronco mesenquimal foram isoladas de vários tecidos diferentes de camundongos adultos, e foram caracterizadas in vitro. Os resultados obtidos, conjuntamente com dados da literatura, indicaram que as populações celulares obtidas eram derivadas da vasculatura, mais especificamente da região perivascular. Conseqüentemente, um modelo em que células perivascular ao longo dos vasos sangüíneos constituem uma reserva de células tronco/progenitoras para os tecidos a que pertencem foi concebido. Constatou-se que o conteúdo de DNA das células cultivadas era, em geral, tetraplóide, e esse resultado foi tomado como mais uma evidência a favor da visão de MSCs como células perivasculares, uma vez que tetraploidização em células perivasculares in vivo foi relatada como sendo usual em roedores. Uma análise das evidências indicando ligações entre MSCs e pericitos também foi realizada. Finalmente, constatou-se que MSCs humanas inseridas em cubos de cerâmica e implantadas em camundongos imunocomprometidos assumem uma localização perivascular, além de gerar tecido ósseo, dando mais embasamento para a visão de que MSCs cultivadas in vitro descendem de células perivasculares. Tomados em conjunto, as informações obtidas indicam que o compartimento perivascular abriga células tronco/progenitoras ao longo de toda sua extensão, e que MSCs isoladas classicamente da medula óssea são provavelmente um subtipo de célula-tronco perivascular. / Mesenchymal stem cells (MSCs) are a type of post-natal stem cell that holds great promise as therapeutic tools because they exhibit great plasticity, and can be isolated and manipulated in a reproducible fashion with little or no ethical issues. They were initially described more than 30 years ago, under the designation of colony-forming unitfibroblasts, and most of our current knowledge on them comes from in vitro studies. Understanding the behavior of MSCs in vivo is a key factor for the development of efficient cell-based therapies and for tissue engineering. To date, the actual location and function of MSCs in vivo are still poorly understood. In an attempt to better understand MSC biology, cells bearing mesenchymal stem characteristics were isolated from several different tissues of adult mice and were characterized in vitro. The results obtained, along with data from the literature, indicated the cell populations obtained were derived from the vasculature, more specifically from the perivascular region. As a consequence, a theoretical model in which perivascular cells along the blood vessels constitute a reservoir of stem/progenitor cells for the tissues where they belong was drawn. The DNA content of the cultured cells was found to be generally tetraploid, and this finding was taken as one more evidence towards the view of MSCs as perivascular cells, since tetraploidization in perivascular cells in vivo has been reported as usual in rodents. An analysis of the evidences indicating links between MSCs and pericytes was also performed. Finally, human MSCs loaded in ceramic cubes and implanted into immunocompromised mice were found to take up perivascular locations in addition to generate osseous tissue, providing further support for the view that in vitro cultured MSCs descend from perivascular cells. Taken together, the informations obtained indicate that the perivascular compartment harbors stem/progenitor cells throughout its extent, and that MSCs classically isolated from bone marrow are probably one subtype of perivascular stem cell.

Ti e suas ligas são materiais metálicos que apresentam um completo sucesso quando usados em meio biológico. Estes materiais são amplamente usados em implantes ósseos devido às suas aplicações clínicas apropriadas. Estabilidade biomecânica e bioquímica, biocompatibilidade e uma eficiente osseointegração são os principais requisitos para selecionar um biomaterial para implantes cirúrgicos dentários ou ortopédicos. Para melhorar a integração tecido+osso, várias técnicas tem sido usadas para aumentar a rugosidade e a bioatividade da superfície de titânio. Características topográficas num intervalo de micrômetros a nanômetros e recobrimentos de fosfatos de cálcio são relevantes nas respostas biológicas. Neste trabalho, novas modificações superficiais em Ti para implantes são desenvolvidas e testadas. As modificações em Ti foram produzidas por corrosão por pites, anodização, deposição química de fosfatos de cálcio e a combinação desses processos. Células-Tronco Mesenquimais foram cultivadas sobre os substratos para avaliar a qualidade das modificações superficiais propostas para os implantes protéticos. Análises biológicas e análise de MEV foram feitas para caracterizar os nano e microporos nas superfícies, bem como a cultura de células-tronco sobre os substratos modificados superficialmente. Adicionalmente, superfícies de titânio pré-polarizadas sob condições potenciostáticas foram investigadas por MEV. O propósito deste trabalho de pesquisa foi estudar os efeitos da composição do eletrólito na característica microestrutural e no alinhamento de TiO2. / Ti and its alloys are metals that show a complete success when used in biological environment. These metals are widely used in bone implants due to their appropriated clinical applications. Biomechanical and biochemical stability, biocompatibility and an efficient osseointegration are the principal requisites to select a biomaterial for using in orthopedics and dentals surgicals implants. To improve bone-tissue integration, various techniques have been used as to increase the roughness and bioactivity of titanium surfaces. Topographic features on implants ranging from micrometers to nanometers and calcium-phosphate coatings are relevant to the biological response. In this work, new surface modifications on Ti for prosthetic implants were developed and tested. Surface treatments of pure Ti were produced by pitting, anodization, chemical deposition of Ca-phosphates and the combination of these processes. Mesenchymal Stem Cells were cultured on the Ti substrates to evaluate the quality of the proposed surfaces modifications for prosthetic implants. Biological analysis and MEV analysis were carried out to characterize the nano and micropores on the surfaces as well as the growth and modification of stem cells. Additionally, titanium surfaces previously polarized under potenciostatic conditions were investigated by SEM. The aim of this research work was to study the effects of electrolyte composition on microstructural feature and vertical alignment of TiO2.

166 f. / Submitted by Simone Silva (simogui@ufba.br) on 2013-03-21T16:44:35Z No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Simone Silva(simogui@ufba.br) on 2013-03-21T16:44:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-21T16:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) Previous issue date: 2007 / Esta dissertação tem por objetivo confrontar a manipulação biotecnológica das células-tronco embrionárias com a concepção contemporânea de sujeito de direito. O trabalho se divide, basicamente, em duas partes. A primeira se dedica a explicar em que consiste a manipulação das células-tronco, quais os resultados que com ela, espera-se, sejam alcançados, e o porquê de ser valorizada a utilização de células-tronco embrionárias, em detrimento das adultas. A segunda se destina a estabelecer um estatuto ético-jurídico do embrião humano, o qual deve resvalar para o reconhecimento de sua respectiva personalidade, instituto capaz de rechaçar qualquer experimentação que lhe seja lesiva. O presente trabalho objetiva, de maneira geral, evidenciar que o regramento legal acerca das pesquisas com células-tronco embrionárias não pode prescindir da condição ético-jurídica do embrião humano, que deve ser compreendido como pessoa, no domínio da Ética e do Direito. Para legitimar o novo delineamento do instituto da personalidade jurídica, que deve superar o tradicional requisito da nascimento com vida, invoca-se a mudança de perspectiva do direito civil contemporâneo, o qual, inspirado nos valores constitucionais, tem primado pelo respeito integral e incondicional ao ser humano, desatrelado, portanto, do tradicional requisito do nascimento. Assim arrimada, esta obra critica o advento da Lei Federal nº 11.105/2005, que logrou regulamentar as pesquisas com células-tronco embrionárias, sem, contudo, atinar para a reformulação, que ora se defende, do instituto da personalidade jurídica. No desenvolvimento da dissertação, recorreu-se, essencialmente, à pesquisa da literatura nacional e estrangeira concernente ao tema, não apenas na área do Direito, mas também em Filosofia e Ciências Biológicas. Lançou-se mão, ainda, de elementos empíricos, tais como o estudo da ADI nº 3510, a tramitar no Supremo Tribunal Federal, e da audiência pública realizada no processo respectivo. Eis, pois, o escopo precípuo do presente trabalho. Tomando como situação emblemática o atual debate sobre a pesquisa com células-tronco embrionárias, pugnar pelo reconhecimento da personalidade ético-jurídica do embrião, a fim de ser inteiramente reprovada não só a experimentação referida, assim como toda e qualquer investida biotecnológica que instrumentalize a vida embrionária, ainda que em homenagem a um interesse coletivo, pretensamente superior. / Salvador

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-02-27T18:21:59Z No. of bitstreams: 1 Claire SS CD8+ granzyme b...pdf: 4914876 bytes, checksum: e54c8737a502be3105cd578fa7d10ef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T18:21:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claire SS CD8+ granzyme b...pdf: 4914876 bytes, checksum: e54c8737a502be3105cd578fa7d10ef4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Células T CD8+ são essenCIaIS na defesa contra vírus, mas pouco se sabe sobre a sua participação na defesa do hospedeiro contra parasitas, como a Leishmania. Nesse trabalho, investigou-se a participação das células T CD8+ no processo inflamatório e na indução da morte do parasita, bem como os perfis proteômicos das lesões dos pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) infectados por L. braziliensis. Observa-se uma alta porcentagem de células T CD8+ nas lesões dos pacientes com LCL, como sugerido pela maior frequência de células T CD8+CD45RO+ e células T CD8+CLA + em comparação com CMSP do próprio indivíduo. Após re-estimulação com L. braziliensis, a maioria das células T CD8+ presentes na lesão expressam marcadores citolíticos, CD 107a e Granzima B. Além disso, a co-cultura de macrófagos infectados com linfócitos T CD8+ resultou na libertação de granzima B. A utilização do inibidor da granzima B, assim como Z-V AO, Fas:Fc ou anti­ IFN-y não teve nenhum efeito sobre a morte do parasita. Por outro lado, a co-cultura de macrófagos infectados com células T CD4+ diminuiu a taxa de infecção, efeito que foi completamente revertido ao se utilizar o anti-IFN-y, enfatizando o papel determinante de células T CD4+IFN-/ na morte da Leishmania. Além disso, observou-se um total de 150 proteínas diferencialmente expressas entre as lesões de pacientes com LCL e as amostras de pele normal. Destas, cinquenta e nove proteínas foram identificadas. Entre elas, 13 apresentaram uma maior ou menor expressão nas amostras dos pacientes em relação a pele normal. Vinte e sete proteínas foram encontradas somente nas lesões dos pacientes e 18 somente nas amostras de pele normal. Essas proteínas foram associadas com processos de regulação biológica; incluindo apoptose, ciclo celular e resposta imune. Para explorar as interações entre as proteínas identificadas e as proteínas e os genes que poderiam ser afetados por elas, redes e sub-redes de interações foram geradas. Após análises de imuno-histoquímica, a presença de caspas e 9, caspase-3 e granzima B foi validada no sítio da lesão. A expressão da granzima B nas lesões dos pacientes correlacionou-se positivamente com a expressão da caspase 9 e a porcentagem de células positivas para TUNEL. Observou-se também uma maior porcentagem de células postivas para TUNEL expressando granzima B nas biópsias dos pacientes que apresentam um processo mais intenso de necrose. Além disso, a presença de granzime B, caspase 9 e caspase-3 foram correlacionados positivamente com o tamanho da, lesão. Neste estudo, podemos concluir que as células T CD8+Granzima B+ estão envolvidas na patogênese da L. braziliensis, através da ativação da apoptose no sítio inflamatório, favorecendo a progressão do dano tecidual observado nos pacientes com LCL. / CD8+ T cells are essential in the defense against virus, but little is known of their participation in the host defense against parasites, such as Leishmania. In the present study, we investigated the participation of CD8+ T cells in the inflammatory process and parasite killing, as well as proteome profiles in the biopsies from localized cutaneous leishmaniasis patients (LCL) infected by L. brazliensis. We found a higher percentage of CD8+ T cells in lesions of LCL patients, as suggested by the higher frequency of CD8+CD45RO+T cells and CD8+CLA +T cells compared to PBMC. Upon L. braziliensis-restimulation, most of CD8+T cells from the lesion expressed cytolytic markers, CDI07a and Granzyme B. Furthermore, co-culture of infected macrophages and CD8+T lymphocytes resuIted in release of granzyme B and the use of granzyme B inhibitor, as well as z-V AD, Fas:Fc or anti-IFN-y had no effect upon parasite killing. On the other hand, co-culture of infected macrophages with CD4+T cells strongly increased parasite killing, which was completely reversed by anti-IFN-y, pointing out the decisive role of CD4+IFN-y +T cells in parasite killing. Besides that, a total of 150 differentially expressed proteins were observed in the lesions of LCL patients and normal skin. Fifty-nine proteins were identified. Among them, 13 were up or down regulated in LCL lesions compared to normal skin, 27 proteins were unique in the lesions of LCL patients and 18 were unique in the normal skin samples. These proteins were associated with biological regulation, including apoptosis, cell cycle and immune response. To explore interactions between the identified proteins and proteins and genes that may be affected by them, networks and subnetworks were generated. After immunohistochemistry analyses, the presence of casp~~e 9, caspase 3 and granzyme B were validated in the lesions site. Granzyme B expression in the lesions of LCL patients positively correlated with caspase 9 expression and the percentage of TUNEL-positive cells. We also observed a significant higher percentage of TUNEL-positive cells and granzyme B expression in the biopsies of patients showing a more intense necrotic processo Besides that, the presence of granzime B, caspase 9 and caspas e 3 were positively correlated with the lesion size. In this study we can conclude that CD8+ Granzyme B+T cells are involved in the pathogenesis of L. braziliensis due to their cytotoxic potential to induce apoptotic mechanism in the inflammatory site that favors the progression oftissue damage observed in LCL patients.