VALIENTE, A. E. F. Avaliação da imunoexpressão de LGR5 e LGR6 em células-tronco no câncer gástrico primário, metástases linfonodais e mucosa gástrica histologicamente normal. 2017. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-16T11:41:10Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-16T11:41:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T11:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Gastric cancer is the fourth most common neoplasm in the world and the second leading cause of cancer mortality. Despite the treatment with surgery and chemotherapy, the overall five-year survival of patients with gastric cancer remains low, a possible explanation for less effective therapy is the presence of cancer stem cells. Several markers, including LGR5 and LGR6, have been reported as markers of normal and cancerous stem cells. LGR5 and LGR6 are transmembrane proteins of the G protein group, rich in leucine residues, that participate in cell signaling pathways and activate transcription factors related to tumor formation. The objective of this work was to evaluate the immunoexpression of LGR5 and LGR6 as possible markers of stem cells in primary gastric cancer, lymph node metastases and histologically normal gastric mucosa through tissue microarray and immunohistochemistry techniques. The cross-sectional and observational study was carried out from eighty-eight (88) pieces of gastrectomies due to gastric carcinomas performed at the Walter Cantídio University Hospital, which are part of the Archives of the Service of Pathology and Legal Medicine of the Federal University Of Ceará. The relationships between LGR5 and LGR6 differential expression and clinical-pathological characteristics were assessed by the chi-square test or Fisher's exact test. A value of p <0.05 was considered statistically significant. Positive (from previous reports) were considered cases that presented one or more cells with cytoplasmic or membrane immunostaining. LGR5 was shown to be a potential biomarker, more characteristic of tumor and non-tumor stem cells, than LGR6 in this study. Both are expressed in tumoral and non-tumoral tissue, predominantly in histologically normal mucosa, in a basal third of epithelial thickness. Positive LGR5 predominated in the diffuse histotype and LGR6 in the intestinal type of gastric carcinomas. In the positive cases of the two biomarkers, marked cells are infrequent or rare, in the total cells of the tumor mass and the normal gastric mucosa. / O câncer gástrico é a quarta neoplasia mais comum em todo o mundo e a segunda causa de mortalidade por câncer. Apesar do tratamento com cirurgia e quimioterapia, a sobrevida global em cinco anos de pacientes com câncer gástrico permanece baixa, uma possível explicação para menor eficácia da terapia é a presença de células tronco cancerosas. Vários marcadores, incluindo LGR5 e LGR6, têm sido relatados como marcadores de células- tronco, normais e cancerosas. LGR5 e LGR6 são proteínas transmembranas, do grupo da proteína G, ricas em resíduos leucina, que participam nas vias de sinalização das células e ativam fatores de transcrição relacionados com a formação de tumores. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunoexpressão de LGR5 e LGR6 como possíveis marcadores de células-tronco no câncer gástrico primário, metástases linfonodais e mucosa gástrica histologicamente normal, através das técnicas de microarranjo tissular (tissue microarray) e imuno-histoquímica. O estudo, de caráter transversal e observacional realizou-se a partir de oitenta e oito (88) peças de gastrectomias devido a carcinomas gástricos, realizadas no Hospital Universitário Walter Cantídio, que fazem parte dos Arquivos do Serviço de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará. As relações entre a expressão diferencial de LGR5 e LGR6 e características clinico-patológicas foram avaliadas pelo teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Um valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Foramconsiderados positivos (a partir de relatos prévios) casos que apresentaram uma ou mais células com imunomarcação citoplasmática ou membranar. LGR5 mostrou-se, neste estudo, ser um potencial biomarcador, mais característico de células-tronco tumorais e não tumorais, do que LGR6. Ambos são expressos em tecido tumoral e não tumoral, com predomínio em mucosa histologicamente normal, em terço basal da espessura epitelial. LGR5 positivo predominou no histotipo difuso e LGR6 no tipo intestinal de carcinomas gástricos. Nos casos positivos dos dois biomarcadores, células marcadas são pouco frequentes ou raras, no total de células da massa tumoral e da mucosa gástrica normal. LGR6 esteve presente no tumor gástrico primário em número de células muito superior ao encontrado nas respectivas metástases linfonodais, diferença não observada em relação a LGR5. Com exceção da relação de cada biomarcador com um histotipo específico, já citada, não houve relação entre as demais variáveis clinico-patológicas e a expressão de LGR5 e LGR6.

BEZERRA, A. V. Efeito do ranelato de estrôncio na proliferação, viabilidade e ativação de osteoblastos murinos in vitro. 55 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Morfofuncionais) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Programa de Pós Graduação em Ciências Morfofuncionais (pcmf.ufc@gmail.com) on 2017-11-28T12:14:43Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_avbezerra.pdf: 2366656 bytes, checksum: 838cff6e33710583d5948915908acda8 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-28T13:41:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_avbezerra.pdf: 2366656 bytes, checksum: 838cff6e33710583d5948915908acda8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-28T13:41:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_avbezerra.pdf: 2366656 bytes, checksum: 838cff6e33710583d5948915908acda8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / The bone tissue is classified as a specialized connective tissue composed by organic and inorganic matrix, osteoclasts and osteoblastic lineage cells. In pathologic procedures, the bone tissue’s homeostasis can be reestablished with some pharmacological therapies, as strontium ranelate, widely used to treat osteoporosis post menopause, because of its inhibitory effects over the osteoclasts and the activation of the osteoblasts. The mechanisms involved, however, are still not completely clarified. OBJECTIVES: This paper has as objective to evaluate the direct effect of strontium ranelate in murine proliferation and activation of osteoblasts, and the possible mechanisms involved. METHODOLOGY: To evaluate the viability and cell proliferation were performed trials of MTT and immunolabeling with Ki67, respectively, after 24 and 48 hours of osteoblasts’ incubation with strontium ranelate. For the MTT, it was used different concentrations of ranelate (0,01; 0,1; 1; 10; 100 and 1000 mM), and by the obtained results, two concentrations (0,01 and 0,1 mM) were selected for the next trials: immunolabeling with Ki67, Western Blot to investigate the protein expression of BMP2, SMAD2/3OPG, RANKL, and alkaline phosphatase (FAO). It was still performed the quantification of the levels of FAO in a culture medium, using specific kits of LABTEST®, after 24, 48, 72 and 120 hours of incubation with strontium ranelate. The mineralization was evaluated by the von Kossa Staining Protocol for Calcium among 7, 14, and 21 days. RESULTS: A significant increase of the viability of osteoblasts was observed after these cells incubation with 0,01 and 0,1 mM of strontium ranelate for 24 hours. BMP2 increased significantly in these two concentrations of the drug used in the period of 24 hours by the Western Blot trial. In the trial to measure the FAO in culture medium, it was observed a significant increase of FAO after incubation with 0,1mM of ranelate for 24 hours. In the von Kossa trial, it was observed an increase and acceleration of mineralization in concentrations of 0,01 and 0,1 mM.CONCLUSION: The results suggest a positive effect of the strontium ranelate in proliferation, viability, and activation of osteoblasts, possibly because of the higher expression of BMP and FAO by osteoblasts. Therefore, promising studies can be performed with the strontium ranelate with its application in regenerating bone defects. / O tecido ósseo é classificado como um tecido conjuntivo especializado composto por matriz orgânica e inorgânica, osteoclastos e células da linhagem osteoblástica. Nos processos patológicos, a homeostasia do tecido ósseo pode ser reestabelecida com algumas terapias farmacológicas como o Ranelato de estrôncio, já largamente utilizado para tratamento da osteoporose pós-menorpausa, devido seus efeitos inibitórios sobre os osteoclastos e ativação de osteoblastos. Os mecanismos envolvidos, no entanto, ainda não foram completamente esclarecidos. OBJETIVOS: Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito direto do ranelato de estrôncio na proliferação e ativação de osteoblastos murinos, e os possíveis mecanismos envolvidos. METODOLOGIA: Para a avaliação da viabilidade e proliferação celular foram realizados os ensaios de MTT e imunomarcação com Ki67, respectivamente, após 24 e 48 horas de incubação dos osteoblastos com ranelato de estrôncio. Para o MTT foram utilizadas diferentes concentrações de ranelato (0,01; 0,1; 1; 10; 100 e 1000 mM), e a partir dos resultados obtidos, duas concentrações (0,01 e 0,1 mM) foram selecionadas para os ensaios posteriores: imunomarcação com Ki67, Western Blot para investigar a.expressão proteica de BMP2, SMAD2/3, OPG, RANKL e fosfatase alcalina (FAO) . Foi realizado, ainda, a quantificação dos níveis de FAO no meio de cultura, utilizando “kits” específicos da LABTEST®, após 24, 48, 72 e 120h de incubação com ranelato de estrôncio. A mineralização foi avaliada pelo teste de Von Kossa nos períodos de 7, 14 e 21 dias. RESULTADOS: Um aumento significativo na viabilidade de osteoblastos foi observado após a incubação dessas células com 0,01 e 0,1mM de ranelato de estrôncio por 24h, assim como um aumento importante na proliferação celular com a dose de 0,01 mM no período de 24h. A BMP2 aumentou de forma significativa nas duas concentrações da droga utilizadas no período de 24 pelo ensaio de Western Blot. No ensaio para a dosagem de FAO no meio de cultura, foi observado aumento significativo de FAO após a incubação com 0,1mM de ranelato em 24 horas. No ensaio de Von Kossa foi observada aumento e aceleração da mineralização nas concentrações de 0,01 e 0,1 mM. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem um efeito positivo do ranelato de estrôncio na proliferação, viabilidade e ativação de osteoblastos, uma vez que aumentou a expressão de BMP e FAO pelos osteoblastos. Desse modo, estudos promissores podem ser realizados com o ranelato de estrôncio com o seu emprego na regeneração de defeitos ósseos.

Doctor en Química / En esta tesis doctoral se estudió, en forma experimental y teórica, la reacción de acoplamiento oxidativo de las quinonas carbo- y heterocíclicas 2-metil-1,4-benzoquinona, 8,8-dimetilnaftalen-l,4,5(8H)-triona y el éster metílico del ácido 1,3-dimetil-5,8-dioxo-5,8-dihidro-isoquinolin-4-carboxílico (una isoquinolin quinona), con aminas alifáticas (derivados de N-fenilpiperazina) y aromáticas (derivados de anilina), comparando un medio de reacción orgánico como el diclorometano con un medio de reacción sustentable como el agua. Se aplicó la metodología sintética desarrollada en la obtención de nuevos inhibidores de la enzima fosfatasa Cdc25B, implicada en el control de la proliferación celular y asociada con cáncer. Los compuestos fueron también estudiados como inhibidores de la respiración mitocondrial, un blanco donde comúnmente actúan compuestos quinonicos, además de su efecto antiproliferativo en células tumorales de ratón y humanas. Se encontró que el medio acuoso puede incrementar tanto la reactividad como la regioselectividad, en las reacciones de acoplamiento C-N de aminas con quinonas. Para los casos estudiados en este trabajo, las reacciones en agua dan mejores, o al menos, los mismos resultados que al usar un medio de reacción convencional como diclorometano. Los cálculos teóricos, basados en índices de reactividad DFT y el potencial electrostático molecular ayudaron a racionalizar los cambios en la reactividad observada experimentalmente. A partir de la quinona 8,8-dimetilnaftalen-l,4,5(8H)-triona, se obtuvieron nuevos inhibidores de la enzima Cdc25B de tipo aminiquinonicos, los cuales presentaron inhibición de tipo mixta, con Ki y Ki´ en el rango micromolar y en un caso con Ki´ submicromolar. Los cálculos de docking permitieron visualizar la forma de unión de los compuestos en el sitio activo de la enzima, lo que explica en parte la acción inhibitoria de los compuestos. Los resultados de la inhibición de la respiración mitocondrial mostraron que la adición de un sustituyente amino, ya sea anilina, fenilpiperazina o bisfenilamina en la quinona 8,8-dimetolnaftalen-l,4,5(8H)-triona inactiva su acción. Los resultados de inhibición de la proliferación celular de las aminoquinonas obtenidas, mostraron que para el caso de las células de ratón la relación de proliferación de células cancerosas/células normales es siempre mayor a uno, indicando una selectividad por las células cancerosas, en cambio en las células humanas esta relación se invirtió, siendo siempre las células normales más susceptibles que las cancerosas. El compuesto más activo frente a las células tumorales de ratón TA3 fue la o-acetil anilinquinona (1,29 uM), mientras que frente a las células tumorales humanas MCF7 el compuesto más activo fue la o-cloro anilinquinona (18,67 uM) / The oxidative coupling reactions of carbo- and heterocyclic quinones 2-methyl-1,4-benzoquinone, 8,8- dimethylnaphthalene- l,4,5(8H)-trione and the methyl ester of 1,3-dimethyl-5,8-dioxo -5,8- dihydro-isoquinoline -4- carboxylic acid with aliphatic amines (N-phenylpiperazine derivatives) and aromatic (aniline derivatives) were studied experimentally and theoretically. A comparison between a typical organic solvent such as dichloromethane and water, a sustainable reaction medium, was performed. The developed synthetic methodology was applied in the synthesis of new inhibitors of Cdc25B phosphatase enzyme, which is involved in the control of cell proliferation and therefore proposed as a target in cancer research. The inhibition of mitochondrial respiration and the antiproliferative effects in mouse and human tumor cells provoked by the series of compounds were also studied. The results of these studies show that water enhance both reactivity and regioselectivity, in the coupling C-N reactions of quinones with amines. The experimental changes in reactivity were explained by theoretical calculations based on DFT reactivity indexes and molecular electrostatic potential. Starting from 8,8-dimethylnaphthalen-l,4,5(8H)-trione, new aminoquinone Cdc25B enzyme inhibitors were obtained. These compounds showed inhibition of mixed type, with Ki and Ki' in the micromolar range and in one case with Ki' submicromolar. Docking calculations showed the binding of compounds in the active site of the enzyme, explaining partially their inhibitory action. The results on mitochondrial respiration showed that the addition of an amino substituent, either aniline, bisphenilamine or phenylpiperazine to 8,8-dimetolnaftalen-l,4,5(8H)-trione inactivate its inhibitory activity. For the case of mouse cells the results on cell proliferation showed that, the ratio of inhibition of proliferation of cancer versus normal cells is always greater than one. This indicates selectivity for cancer cells. The opposite is observed in human cells. The most active compound against tumor cells mouse TA3 was o-acetyl anilinquinone (1.29 uM ) while facing MCF7 human tumor cells the most active compound was o-chloro anilinquinone (18.67 uM). / FONDECYT

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: O carcinoma espinocelular de lingua e considerada um dos tipos de canceres mais prevalente, entre os canceres de cabeca e pescoco. A maioria dos pacientes sao diagnosticados tardiamente, o que dificulta o prognostico e aumenta a chance de metastase. O papiloma oral e uma neoplasia benigna, com crescimento exofitico e frequentemente, encontrado em palato e lingua e normalmente, associado ao virus HPV. Galectinas sao da familia das lectinas, que se ligam a &#946;-galactosideos e podem ser encontrados em muitos animais. Ate hoje, foram identificados 15 tipos de galectinas e estas, divididas em 3 subgrupos; prototipo, tandem e quimera. Estao relacionadas a diversas funcoes, tais como: adesao celular, proliferacao, apoptose, anti apoptose, processamento de RNA, entre outras. Objetivo: Caracterizar a expressao imunoistoquimica da galectina 1, 3 e 9 no epitelio normal oral, papiloma escamoso oral e carcinoma oral de celulas escamosas. Material e Metodo: Coloracao imunoistoquimica para galectinas 1, 3 e 9 foi avaliada em 8 amostras de epitelio escamoso normal oral, 15 amostras de papiloma escamoso oral e 29 amostras de carcinoma oral de celulas escamosas. Resultados: Foram encontradas diferencas estatisticamente significativas (p <0,05) na expressao de galectina 3 em relacao a mucosa normal oral e papiloma escamoso oral. No que tange a expressao da galectina 1, nao houve diferencas estatisticamente significativas (p>0,05). Da mesma forma, nao houve diferencas estatisticamente significativas (p> 0,05) entre os grupos para galectina 9. Conclusao: Em conjunto, estes resultados indicam que a galectina 3 esta envolvida na progressao tumoral das celulas da mucosa oral e provavelmente, pode ser considerada um biomarcador para este fim / BV UNIFESP: Teses e dissertações

OSTERNE, Rafael Lima Verde. Estudo epidemiológico de lesões orais em laboratórios de anátomo patologia na cidade de Fortaleza-Ce. 2009. 68 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-11-27T15:24:05Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_rlvosterne.pdf: 383083 bytes, checksum: f6ea11eae57050decb5141827a4618f8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-11-27T15:24:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_rlvosterne.pdf: 383083 bytes, checksum: f6ea11eae57050decb5141827a4618f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-27T15:24:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_rlvosterne.pdf: 383083 bytes, checksum: f6ea11eae57050decb5141827a4618f8 (MD5) Previous issue date: 2009 / A wide range of diseases can affect the oral cavity, from developmental defects to metastasizing malignant neoplasms. The knowledge on Oral Pathologies`s prevalence helps the clinician making differential diagnosis. The aim of this study was to perform an epidemiological survey of oral lesions in five anatomopathological laboratories in Fortaleza, Ceará, Brazil. Methods: The sample was obtained from histopathology reports of oral lesions diagnosed between the years of 2001 to 2005 in five anatomopathological laboratories. Data regarding sex, race, age, anatomical site and histopathological diagnosis were registered. Lesions were categorized in non-neoplastic, neoplastic and descritive reports. Results: During the five-year period, 6231 oral lesions reports were collected, 41,41% from private laboratories and 58,59% from public laboratories. Female were more affected, with a male:female ratio of 1:1,68. Lesions occurred in a wide age range, varying from 0 to 100 years old, with an incidence peak between 31 to 60 years. Non-neoplastic lesions represented 64,89% of cases, with inflammatory/reactive lesions being the most prevalent group, followed by inflammatory lesions of salivary glands, cysts and non-atypical epithelial hyperplasia. Neoplastic lesion represented 30,80% of cases, 59,52% benign, 32,45% malignant and 8,03% pre-malignant lesions. Fibroepithelial hyperplasia was the most common lesion in this study and squamous cell carcinoma was the most prevalent malignant neoplasm, with 23,14% and 8,52%, respectively. Conclusions: Oral lesions were more common among female’s reports, in economically active age, mainly represented by inflammatory/reactive lesion. Although, the occurrence of inflammatory/reactive lesions was high, the prevalence of malignant neoplastic and pre-malignant lesion was significant. There dental surgeon must know about the occurrence of such lesions, and public health politics for prevention and early diagnose must be enfasized / A boca pode ser acometida por doenças, variando de alterações de desenvolvimento à neoplasias malignas agressivas e metastatizantes. O conhecimento destas condições auxilia no diagnóstico diferencial realizado pelo clínico. Este trabalho tem como objetivo realizar uma análise epidemiológica das lesões de cavidade oral em cinco laboratórios de anátomo patologia da cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil. Métodos: Coleta de dados a partir de laudos histopatológicos de lesões orais, no período de 2001 a 2005, oriundos de cinco laboratórios, de anatomia patológica, públicos e privados. As variáveis utilizadas foram sexo, idade, raça, localização anatômica e laudo histopatológico. As lesões analisadas foram agrupadas em não-neoplásicas, neoplásicas e laudos descritivos. Resultados: No período analisado, foram coletadas 6231 lesões orais, das quais 41,41% oriundas de laboratórios particulares e 58,59% de laboratórios públicos. O sexo feminino foi o mais acometido, com proporção homem:mulher de 1:1,68. As lesões ocorreram em uma ampla faixa etária, variando de 0 a 100 anos, com pico de incidência entre 31 e 60 anos. As lesões não-neoplásicas representaram 64,89% dos casos, com as lesões inflamatórias/reativas sendo as mais prevalentes, seguidas pelas lesões inflamatórias de glândula salivar, cistos e hiperplasias epiteliais sem atipias. As neoplasias representaram 30,80% dos casos, das quais 59,52% eram benignas, 32,45% malignas e 8,03% eram lesões pré-malignas. A hiperplasia fibroepitelial foi a lesão mais prevalente em todo o estudo e o carcinoma de células escamosas, a neoplasia maligna mais comum, com 23,14% e 8,52% respectivamente Conclusão: As lesões foram mais comuns no sexo feminino, na faixa etária economicamente ativa, representadas principalmente por lesões inflamatórias/reativas. Apesar da alta ocorrência de lesões inflamatórias/reativas neste estudo, a prevalência de lesões malignas foi significativa, demonstrando a necessidade do conhecimento destas lesões pelo cirurgião dentista e a criação de políticas públicas que enfatizem a prevenção e o diagnóstico precoce das mesmas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327526.pdf: 1626995 bytes, checksum: 20b4c92b764b1deab2cc2c2300470497 (MD5) Previous issue date: 2014 / O ameloblastoma (AM) é um tumor odontogênico benigno que, apesar de apresentar crescimento lento, é localmente agressivo devido ao seu crescimento infiltrativo, o que resulta em alta taxa de recidiva quando não removido adequadamente. O objetivo deste estudo foi contribuir para um melhor entendimento sobre os mecanismos de invasão do AM, por meio da avaliação imunoistoquímica da expressão das metaloproteinases de matriz 1, 2 e 9, da presença de miofibroblastos (MF) e do índice de proliferação celular (Ki-67). A amostra foi composta por treze casos de ameloblastoma sólido (AS), cinco casos de ameloblastoma unicístico (AU) e oito casos de folículos pericoronários (FP), como amostra de tecido odontogênico não neoplásico. O teste estatístico de Kruskal-Wallis mostrou diferença estatística para as MMP-1 e -2 no epitélio, cuja expressão foi menor em AS, quando comparado a AU e FP. A expressão de MMP-9 no estroma foi significativamente maior em FP, quando comparado a AS e AU. Com base nos resultados obtidos é possível concluir que a expressão de MMP 1, 2 e 9, presença de MF e Ki-67 foi semelhante em AM e FP, o que demonstra uma intensa atividade de remodelação tecidual em todos os grupos, não sendo, portanto, o FP um tecido quiescente como o esperado.<br> / Abstract : Ameloblastoma (AM) is a benign but locally invasive odontogenic tumour, characterized by a slow infiltrative growth pattern with a high recurrence index. To better understand the interaction between tumor cells and the stroma, the present study aimed to evaluate the immunohistochemical expression of matrix metalloproteinases (MMP-1, -2 and -9), the cellular proliferation index (Ki-67), and the presence of myofibroblasts (MF) in AM. Thirteen cases of solid ameloblastoma (SA) and five cases of unicystic ameloblastoma (UA) were selected for an immunohistochemical investigation of the proteins MMP-1, MMP-2, MMP-9, Ki-67 and a-smooth muscle actin (a-SMA) in MF. Eight samples of pericoronal follicles (PF) were included as a normal ondontogenic tissue control. Kruskal-Wallis test showed statistically significant differences in the epithelial expression of MMP-1 and 2, with lower expression in SA when compared to UA and PF. Higher stromal expression of MMP-9 was found in PF, comparing to SA and UA. These results suggest that the proliferative activity, the presence of myofibroblasts and the production of matrix metalloproteinase 1, 2 and 9 were similar in AM and PF, showing an intense activity of tissue remodeling in all groups not being the PF a quiescent tissue as expected.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332307.pdf: 4190550 bytes, checksum: 47afc464a32ec01695950d5da6b3dda6 (MD5) Previous issue date: 2014 / A placenta é um órgão essencial no desenvolvimento embrionário e fetal. Este órgão contém vários tipos de células, entre as quais diferentes populações de células-tronco ou progenitoras, tais como as células-tronco mesenquimais (CTM), células-tronco hematopoéticas (CTHs) e trofoblásticas. O objetivo deste trabalho foi estudar a organização do nicho molecular de células-tronco no tecido da placenta humana a termo. Para isto, foram utilizadas técnicas histológicas, histoquímicas, imuno-histoquímicas e de microscopia eletrônica de transmissão (MET). As técnicas de coloração histológica empregadas nas amostras do tecido tiveram como objetivo identificar, principalmente, as características estruturais das vilosidades coriônicas (VC) e da decídua basal (DB). A técnica de coloração de Hematoxilina e eosina proporcionou uma visão geral do tecido placentário, de modo a permitir a identificação dos elementos teciduais da placenta. A técnica de coloração azul brilhante de Coomassie foi utilizada para identificar a presença de proteínas totais neste tecido. Outro teste utilizado foi Azul de toluidina (ATO) para identificar a presença de polissacarídeos ácidos, através da reação de metacromasia. As amostras, contendo o tecido placentário, reagiram mais fortemente com o ATO nas regiões do sinciciotrofoblasto, nos núcleos das células que compõem o estroma e na parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Na região da decídua basal, a reação também foi positiva ao ATO nas células deciduais, porém, na matriz extracelular esta reação foi menos intensa, quando comparada com as regiões do sinciciotrofoblasto e da parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Testes realizados com o ácido periódico de Schiff mostraram que a reação foi positiva em praticamente todas as regiões das vilosidades, mas houve uma positividade maior na região do sinciciotrofoblasto. Com relação à decídua basal (DB), a presença de polissacarídeos neutros também foi confirmada em praticamente todas as regiões da decídua. A técnica de Mallory revelou que fibras de colágeno estão presentes em grande parte nas regiões tanto das vilosidades coriônicas, bem como, na decídua basal. Esta técnica é capaz de revelar a presença dos diferentes tipos colágenos que estão presentes tanto nas vilosidades coriônicas quanto na decídua basal, porém, sem a identificação de quais são os tipos presentes neste tecido. A técnica de imuno-histoquímica empregada no tecido da placenta teve como objetivo avaliar a expressão dos marcadores CD73, CD105 e CD34, bem como, o perfil de expressão do colágeno do tipo I, fibronectina e laminina na matriz extracelular (MEC). O perfil expresso10pelos marcadores CD73+, CD105+ e CD34+ na superfície da membrana das células, e pelas moléculas de MEC como o colágeno do tipo I, a fibronectina e a laminina, se mostrou positivo. Estes resultados nos mostram que as CTMs tem uma disposição na região das vilosidades coriônicas, em associação com moléculas de laminina e de colágeno. A fibronectina se expressa nas vilosidades coriônicas sempre com associação à lâmina basal e perivascularmente. No sinciciotrofoblasto as CTM se associam próximas às células CD34+ com característica de CTH. As análises ultraestruturais demonstraram plena atividade metabólica e de células que organizam a placenta, tanto bioquimicamente quanto metabolicamente, sugerindo que a placenta, mesmo a termo, é ainda capaz de produções celulares, tanto de CTs quanto na homeostase do tecido.<br> / Abstract : Placenta is an essential organ in the development of the embryo and/or fetus. It is a readily available material, easy to obtain, and there is no association between its use and risks for the mother or fetus health. The organ contains several types of cells, including different populations of stem cells or progenitor cells, such as mesenchymal stem cells (CTM), hematopoietic stem cells (CTHs) and trophoblast. The aim of this work was to study the molecular niche organization of stem cells in the tissue of human placenta at term. Therefore, it was possible to use histological, histochemical and immunohistochemical techniques, and also, transmission electron microscopy (TEM). Histological staining techniques employed on tissue samples aimed to identify, mainly, the structural characteristics of chorionic villi (VC) and decidua basalis (DB). Hematoxylin and eosin stain provided placental tissue overview in order to enable the identification of placenta tissue elements. Coomassie brilliant blue staining technique was used to determine the presence of total protein in the tissue. Results showed the placental tissue structures as a whole. Another test performed was toluidine blue (ATO) to identify the presence of acidic polysaccharides by metachromasia reaction. Samples with placental tissue reacted more strongly to the ATO in regions of syncytiotrophoblast, cells nuclei comprising the stroma and blood vessels wall of the chorionic villi. In the basal decidua region, there was also a positive reaction to ATO. However, it was less intense when compared to the regions of syncytiotrophoblast of chorionic villi of tissue. Tests performed with periodic acid of Schiff showed that the reaction was positive in virtually all regions of the villi, but there was a greater positivity in the syncytiotrophoblast region. With respect to basal decidua (DB), the presence of neutral polysaccharides was also confirmed in practically all regions of decidua. Mallory technique revealed that collagen fibers are present largely in the areas of both chorionic villi and basal decidua. That technique can reveal the presence of different collagen types that are present in both chorionic villi and basal decidua; however, without identifying which types are present in the tissue. The immunohistochemical technique employed in placental tissue aimed to evaluate the markers expression: CD73, CD105 and CD34, as well as the expression profile of collagen type I, fibronectin and laminin in the extracellular matrix (MEC). Profile expressed by markers CD73+, CD105+ and CD34+ on cells membrane surface and MEC molecules such as collagen type I, fibronectin and laminin showed in a positive12way. These results show that CTMs have a disposition in the region of chorionic villi in association with molecules of laminin and collagen. Fibronectin is expressed in chorionic villi always associated with basal lamina and perivascularly. In the Syncytiotrophoblast, CTM associate close to CD34+ cells with CTH characteristics. Ultrastructural analysis presented full metabolic activity and cells that organize the placenta both biochemically and metabolically, suggesting that the placenta even at term is still capable of cells production not only of CTs, but also for tissue homeostasis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-16T19:43:50Z No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-16T19:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Terapia celular é o conjunto de métodos e abordagens tecnológicas com a utilização de células no tratamento de doenças. A terapia com células-tronco tem despertado grande interesse na comunidade científica devido à capacidade que essas células indiferenciadas têm de preservar sua própria população e de se diferenciar em células dos diversos tecidos. Encontrar a fonte de célula-tronco apropriada para uso terapêutico depende de diversos fatores, como a sua capacidade de proliferação e estabilidade citogenética, assim como suas características fenotípicas e seu potencial de diferenciação. A epilepsia é uma desordem neurológica que acomete de 1 a 3% da população mundial. É caracterizada pela presença de crises espontâneas recorrentes (CER) e possui seu tratamento clínico baseado no emprego de drogas anti-epilépticas (DAES). O uso de células tronco apresenta-se como uma alternativa ao tratamento desta patologia. Este trabalho tem como objetivos caracterizar as células-tronco mesenquimais de polpa de dente decíduo humano e avaliar seu papel terapêutico no modelo de epilepsia do lobo temporal induzido por lítio-pilocarpina em ratos Wistar. As células da polpa de dente humano utilizadas nesse estudo foram submetidas à avaliação fenotípica, do seu potencial de diferenciação, e da estabilidade cromossômica. Para verificar os efeitos terapêuticos das células-tronco de polpa de dente em modelo experimental de epilepsia os animais foram divididos nos seguintes grupos: SE-salina (n=10), que no transplante recebeu solução salina; SE-CDLH1 (n=13) que recebeu células-tronco de polpa de dente humano (107 células/animal), SE-CMO (n=8) que recebeu células mononucleares de medula óssea (107 células/animal) e o grupo controle (n=10) que não foi submetido ao status epilepticus (SE). As células foram transplantadas por via intraperitoneal. Foram realizadas análises, em diferentes espaços de tempo para avaliar migração celular por imunofluorescência e as crises espontâneas recorrentes. Para avaliar alterações de memória foi estudado o desempenho dos animais no labirinto aquático de Morris (LAM). As CDLH1 apresentaram estabilidade cromossômica (até a 8ª passagem); características imunofenotípicas de células mesenquimais, com alta expressão de CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, e STRO-1; capacidade de diferenciação nas linhagens adipogênicas, osteogênicas e condrogênicas. As CDLH1 migraram para o cérebro e baço dos ratos. Dos resultados terapêuticos observou-se a redução das crises espontâneas recorrentes nos animais tratados após 30 dias do SE e transplante, mas as células não foram capazes de bloquear essas crises (observado 60 dias pós-SE). Obtendo-se os mesmos resultados com o transplante de CMO. Já no estudo da memória não houve diferença estatística na latência de escape nos animais dos grupos epilépticos (tratado e não-tratado). Os animais do grupo controle (não epiléptico), apresentaram retenção de memória em relação aos animais dos grupos SE-salina e SE-CDLH1. Novos estudos devem ser realizados para que se possa estabelecer a utilização ideal das células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente humano em relação às necessidades terapêuticas da epilepsia. / Cell therapy is the set of methods and technological approaches to the use of cells in treating diseases. The stem cell therapy has aroused great interest in the scientific community due to the capacity of these undifferentiated cells in preserving its own population and to differentiate into cells of various tissues. Finding the source of stem cells suitable for therapeutic use depends on various factors such as their ability to proliferate and cytogenetic stability, as well as their phenotypic characteristics and their potential of differentiation. Epilepsy is a neurological disorder that affects 1-3% of world population. It is characterized by recurrent spontaneous seizures (RSS) and has its medical treatment based on use of antiepileptic drugs (AEDs). The use of stem cells is an alternative treatment for this pathology. This work aims to characterize the mesenchymal stem cells from human deciduous dental pulp and evaluate its therapeutic role in the model of temporal lobe epilepsy induced by lithium-pilocarpine in rats. The cells of the human dental pulp used in this study were subjected to phenotypic analysis of their potential of differentiation and chromosomal stability. To verify the therapeutic effects of stem cells from dental pulp in experimental epilepsy, the animals were divided into the following groups: SE-Saline (n = 10) transplanted with saline; SE-CDLH1 (n = 13) who received stem cells from human dental pulp (107 cells / animal), SE-CMO (n = 8) who received bone marrow mononuclear cells (107 cells / animal) and the control group (n = 10) who did not undergo status epilepticus (SE). The cells were transplanted by intraperitoneal route. Analyses were performed in different time to assess cell migration by immunofluorescence and recurrent spontaneous seizures. To evaluate changes in memory we studied the performance of the animals in the Morris water maze, after cell transplantation. Stem cells analyzed showed chromosomal stability (up to 8th passage); immunophenotypic characteristics of mesenchymal cells with high expression of CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, and STRO-1; ability to differentiate into adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages. The CDLH1 migrated throughout the brain and spleen of mice. The therapeutic results observed the reduction of recurrent spontaneous seizures in treated animals after 30 days of transplantation and SE, but cells were not able to block these seizures (observed 60 days post-SE). The same results were obtained with the transplantation of BMC. In the study of memory there was no statistical difference in escape latency of the epileptic groups (treated and untreated). Animals of control group (non epileptic) showed memory retention in comparison to groups saline-SE and SE-CDLH1. Further studies should be conducted so that we can determine the optimal use of mesenchymal stem cells derived from human dental pulp in relation to the therapeutic needs of the epilepsy.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 joao_neto_ioc_mest_2013.pdf: 1253667 bytes, checksum: d031c93a4aceeafda254d56260f64a77 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Toxoplasma gondii é o agente causador da toxoplasmose, doença distribuída em grande parte do globo infectando vertebrados endotérmicos. T. gondii é um parasita intracelular obrigatório e não sintetiza colesterol, recrutando-o da célula hospedeira. Esse parasito é dividido em grupos, de acordo com a virulência, sendo a cepa RH e a cepa ME-49 representantes de parasitos de maior e de moderada virulência, respectivamente. Semelhante a outros parasitos protozoários, T. gondii expõem fosfatidilserina (PS) na membrana externa, sendo um exemplo do mimetismo apoptótico, o que tem sido sugerido como mecanismo de evasão. Corpúsculos lipídicos (CL) são organelas lipídicas comumente encontradas em uma gama de diferentes células, de plantas, parasitos e animais. CL são modulados positivamente por diferentes fatores, incluindo células apoptóticas, parasitos como Trypanosoma cruzi, Leishmania spp. e Plasmodium falciparum e citocinas, como o fator de transformação do crescimento (TGF-\03B2). Nosso trabalho visou investigar se a PS exposta na membrana plasmática de T. gondii pode induzir CL em macrófagos. Independente da virulência da cepa utilizada, T gondii foi capaz de induzir CL em macrófagos infectados. A indução foi maior com aumento da relação parasito/macrófago. Subpopulações de T. gondii, PS positivos (PS+) e PS negativo (PS-) foram obtidas e a subpopulação de PS + induziu mais CL em relação a subpopulação de PS-. A neutralização da PS dos parasitos PS+ ou da população total com anexina-V foi capaz de reduzir o número de CL nas células hospedeiras. Lipossomos contendo PS induziram mais CL em macrófagos quando comparados aos lipossomos sem PS Curiosamente, parasitos PS- também foram capazes de aumentar o número de CL em macrófagos, sugerindo a participação de outros fatores nesse processo indutor. Após a interação de macrófagos com T. gondii, observamos aumento no número de CL tanto em células que continham o parasita quanto em células vizinhas não parasitadas. Esse achado sugere uma sinalização 18 parácrina entre as células. O TGF-\03B2 é descrito como sendo secretado após infecção por T. gondii, e sua neutralização causou inibição da formação de CL induzido por T. gondii, revelando sua participação nesse processo. Concluímos que T. gondii é capaz de induzir CL em macrófagos, e essa indução tem a participação da PS exposta em sua membrana. A indução dessas organelas ocorreu independente da virulência da cepa. Esse processo é potencializado pela ação parácrina do TGF-\03B2 / Toxoplasma gondii is the causative agent of toxoplasmosis, a disease largely spread across the globe infecting almost any endothermic vertebrates. T. gondii is an obligatory intracellular par asite that can not synthesize cholesterol thus relying on recruiting it from the host cell. This parasite is divided into groups according to the virulence, and the RH strain and the ME - 49 strain representing highly and moderate virulen t parasites, respect ively. Similar to other protozoan parasites, T. gondii exposes phosphatidylserine (PS) on the outer membrane , an example of the apoptotic mimicry , which has been suggested as a mechanism of evasion ,. Lipid bodies (LB) are lipid organelles commonly found in a range of different cells of plants, animals and parasites. LB are positively modulated by different factors, including apoptotic cells, parasites such as Trypanosoma cruzi , Leishmania spp. and Plasmodium falciparum and cytokines such as transforming gro wth factor (TGF - β) . Our study aimed to investigate whether the PS exposed on the plasma membrane of T. gondii in macrophages can induce LB . T gondii was capable of inducing LB in infected macrophages, i ndependently of the virulence of the strain used . T he LB induction was greater with increase in parasite / macrophage ratio. Subpopulations of T gondii posi tive PS (PS +) and negative (PS - ) were obtained and PS+ subpopulation induced significantly greater LB formation compared to PS - subpopulation. The neutra lization of PS with annexin - V was able to reduce the number of LB o n PS+ parasites or on the total parasite population , but not on PS - parasites. Liposomes containing PS induced more LB than liposomes without PS. Interestingly, PS - parasites induced LB f ormation in macrophages, suggesting the involvement of other factors. After interaction of T. gondii with macrophages , we observed increased LB formation both in cells containing internalized parasite s as well as in bystander cells without internalized par asites , suggestive of a paracrine signaling. TGF - β is described as being secreted after infection with T. gondii and its neutralization caused inhibition of T. gondii - induced LB formation , pointing to TGF - β participation in this process. We conclude that T. gondii is able to induce LB formation in macrophages . The induction of these organelles was independent of strain virulence. T. gondii - induced LB formation occurs through signaling triggered by PS exposed on the parasite membrane. This process is also amplified by TGF - β a cting in a paracrine fashion

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ailin_oliveira_ioc_dout_2015.pdf: 4901825 bytes, checksum: 4248ae90175b5218e570617bea7ee462 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A involução do timo associada ao envelhecimento é acompanhada por redução do desenvolvimento e exportação de células T para a periferia do sistema imune, o que afeta a competência imunológica. A relação causal entre hormônios sexuais e atrofia tímica senil já está bem estabelecida. Embora a depleção de hormônios sexuais tenha sido demonstrada em regenerar o timo, restabelecendo o compartimento linfóide e promovendo a recuperação de células T, pouco é conhecido sobre os fatores desencadeadores desse processo e as alterações promovidas no microambiente tímico. O presente estudo demonstra que embora a castração afete globalmente as diferentes subpopulações de células epiteliais tímicas (TEC) e linfóides, o processo regenerativo do timo em camundongos envelhecidos é iniciado especificamente a partir da diferenciação de TEC corticais expressando baixos níveis de MHCII (cTEC lo). Observamos que a depleção de hormônios sexuais em camundongos envelhecidos (9 - 11 meses) resulta em redução de células cTEC lo seguida do aumento de cTEC hi e TEC medulares, tanto com baixa quanto alta expressão de MHCII (mTEC lo e mTEC hi, respectivamente) Ainda, observamos a recuperação do compartimento epitelial ocorre simultaneamente ao aumento da expressão dos fatores de diferenciação e ativação de TEC, FoxN1, Wnt4 e DLL4, além de aumento dos receptores de activina acvr1a, acvr2a e acvr2b em cTEC lo no dia 4 pós castração, ao mesmo tempo em que a biodisponibilidade de activina no está aumentada no timo desses animais. A adição de activina em sistema de cultura celular primária 3D gerou aumento da diferenciação de mTEC a partir de cTEC lo obtidas do timo senil, enquanto ensaios in vitro e in vivo demonstraram que, por outro lado, a inibição da sinalização de activina no timo jovem gera um perfil de TEC semelhante ao de animais envelhecidos. Através do transplante de cultura de timo fetal (FTOC) na capsula renal de camundongos atímicos demonstramos que a produção de activina pelo microambiente tímico é necessária pra o desenvolvimento de células T CD4-CD8-, CD4+ e CD8+. Por ultimo, através do tratamento de animais envelhecidos castrados com folistatina, antagonista fisiológico de activina, demonstramos que o aumento da sinalização de activina pós castração é essencial para recuperação das diferentes subpopulações de TEC e de timócitos CD4-CD8- e CD4+, além de restabelecer a expressão de DLL4 no compartimento cortical de TEC Juntos, esses dados apontam activina vii como um hormônio essencial para o restabelecimento da atrofia tímica senil tanto diretamente por induzir o restabelecimento do compartimento epitelial, como indiretamente por restabelecer a sinalização de DLL4-Notch, necessária para o desenvolvimento das diferentes populações de timócitos a partir de progenitores hematopoiéticos / The involution associated with aging is accompanied by reduction in thymus development and export of T cells towards the periphery of the immune system, which affects the immune competence. The causal relationship between sex hormones and senile thymic atrophy is already well established. Althou gh the depletion of sex hormones have been shown to regenerate the thymus restoring lymphoid compartment and promoting the recovery of T cells, little is known about the factors that trigger this process and the changes induced in th e thymic microenvironment. The present study demonstrates that although castration generally affects the different subpopulations of thymic epithelial cell s (TEC) and lymphoid cells the regenerative process of the thymus in age d mice is initiated specifically from cortical TEC expressing low levels of differentiation MHCII (cTEC lo) . We note that the depletion of sex hormones in aged mice (9 - 11 months) results in reduction in cTEC lo cells followed by the increase of cTEC hi and medullary TEC, both with low and high expression of MHCII (mTEC lo and mTEC hi, respectively) . Also, we observe the recovery of the epithelial compartment occurs simultaneously with the increase in the expression of TEC differentiation and activation factors, Foxn1, Wnt4 and Dll4, and increased activin receptors acvr1a, acvr2a and acvr2b in cTEC lo at day 4 post castration, at the same time the activin bioavailability is increased in the thymus of the animals. The addition of activin in primary 3D cell culture system generated increased differentiation mTEC from cTEC lo obtained from senile thymus, while in vitro and in vivo assays showed that, on the other hand , inhibition of activin signaling in the young thymus generates a TEC profile similar to that of aged animals. Through fetal thymus transplantation cultur e (FTOC) in renal capsule of athymic mice we demonstrate that the production of activin in thymic microenvironment is required for the development of CD4 - CD8 - T cells, CD4 + and CD8 + . Finally, by treatment of aged castrated animals with follistatin, physiological antagonist of activin, we demonstrate that the increase in activin signaling post castration is essential for the recovery of different subpopulations of TEC and thymocytes CD4 - CD8 - and CD4 + , and reestablish the expression of DLL 4 in cTEC. Together, these data indicate activin as a hormone essential for the restoration of the senile thymic atrophy either dir ectly inducing the restoration of TEC and indirectly by restoring DII4-Notch signaling necessary for the growth of different populations of thymocytes from hematopoietic progenitors