Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense-UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências Ambientais. / According to the informal knowledge, Calea uniflora Less. is widely used in southern Santa Catarina (Brazil), however there is no ethnobotanical study of this plant, as there is no literature on the characterization of soil development of this plant. Its chemical composition is not well defined and there are no studies to prove the safety of using it orally. For these reasons, this study aims to determine the knowledge that the population holds over C. uniflora, popularly known as arnica-da-praia, in the city of Balneário Rincão (SC). In addition, we intend to evaluate nutritional characteristics of the soil of plant development, check content of phenolic compounds in the inflorescence the hydroalcoholic C. uniflora extracts, as well as the presence of acute toxicity in rats. For this, interviews were conducted by applying a semi-structured form, being interviewed residents in the city of Balneário Rincão (SC), totaling 372 people. Soil testing was conducted by the Agricultural Research and Rural Extension of Santa Catarina, characterizing the content of macro and micronutrients the soil. The assay of phenolic compounds was carried out using the Folin Ciocalteu methodologies and aluminum chloride. Acute toxicological potential was realized as Resolution No. 90, of March 16, 2004 the National Health Surveillance Agency. The results showed that 94.1% of respondents know C. uniflora and that 74.3% of these make its use as a medicinal plant, thus concluding that the species C. uniflora is widely known and used in the city of Balneário Rincão. The most popular indications cited were: healing, muscle pain and bruises. The predominant mode of preparation was a macerating and the modes of administration were cited as being more topical and oral. It was found that people have great confidence in the use of this plant, as 98% reported that it is non-toxic. The transmission of knowledge among relatives was of 84.6%, demonstrating the traditional use of the plant. The soil which develops C. uniflora quarry in the neighborhood, some characteristics of a soil poor in macronutrient, with high concentrations of micronutrients. The assay demonstrated phenolic compounds C. uniflora hydroalcoholic extract is rich in polyphenols, and approximately 4.6 g to 15.8 g flavonoid and polyphenol for 100g of extract. Acute toxicological study showed no toxic effect of the extract treated rats at doses of 100, 250, 500 and 1000 mg / kg orally. As there were no deaths during the study, the LD 50 for the hydroalcoholic extract of the inflorescence of C. uniflora is greater than 1000 mg / kg. As conclusions, we can suggest that the plant is widely used in Balneário Rincão city, grows in poor soil on macronutrients, has a high concentration of phenolic compounds and appears to have low toxicity in acute treatment. / De acordo com o conhecimento informal, Calea uniflora Less. é amplamente utilizada na região sul de Santa Catarina (Brasil); no entanto, não há estudo etnobotânico específicos desta planta, como também não há em literatura a caracterização do solo onde se desenvolve. Sua composição química ainda não é bem definida e não há estudos que comprovem a segurança de utilização da planta por via oral. Por estes motivos, este trabalho teve por objetivo, determinar o conhecimento que a população detém sobre C. uniflora, popularmente conhecida como arnica-da-praia, no Município de Balneário Rincão (SC). Pretendeu-se ainda avaliar as características nutricionais do solo de desenvolvimento da planta, verificar teor de compostos fenólicos no extrato hidroalcoólico das partes aérea de C. uniflora, bem como a toxicidade aguda em ratos Wistar. Foram realizadas entrevistas semiestruturada com 372 pessoas com aplicação de formulário, sendo entrevistados residentes do Município de Balneário Rincão (SC), totalizando 372 pessoas, sendo este o N representativo da amostra total. A análise do solo foi realizada pela Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina (EPAGRI), caracterizando o teor de macro e micronutrientes do solo. O doseamento de compostos fenólicos foi realizado utilizando-se as metodologias do Folin Ciocalteu e cloreto de alumínio. O potencial toxicológico agudo foi realizado conforme a resolução nº 90, de 16 de março de 2004 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Os resultados mostraram que 94,1% dos entrevistados conhecem C. uniflora e que destes 74,3% fazem uso como planta medicinal, evidenciando assim que C. uniflora é amplamente conhecida e utilizada no Município de Balneário Rincão. As indicações populares mais citadas foram: cicatrização, dor muscular, e hematomas. O modo de preparo predominante foi a maceração e as vias de administração mais citadas foram a tópica e oral. Verificou-se que a população tem grande credibilidade no uso desta planta, pois 98% relataram que ela não é tóxica. A transmissão de conhecimento entre familiares foi de 84,6%. O solo onde se desenvolve C. uniflora, no bairro Pedreira, apresentou características de um solo pobre em macronutrientes e concentrações altas dos micronutrientes zinco, cobre, manganês e ferro. O doseamento de compostos fenólicos demonstrou que o extrato hidrooalcoólico de C. unifloraé rico em polifenois, tendo aproximadamente 4,6 g de flavonoide e 15,8 g de polifenois totais a cada 100g de extrato. O estudo toxicológico agudo não mostrou efeito tóxico do extrato em ratos tratados nas doses de 100, 250, 500 e 1000 mg/Kg por via oral. Como não houve óbito durante o estudo, a DL50 para o extrato hidroalcoólico das partes aérea de C. uniflora é superior a 1000 mg/Kg. Portanto, pode-se sugerir que a planta é vastamente utilizada no município do Balneário Rincão, cresce em solos pobres em macronutrientes, apresenta teor elevado de compostos fenólicos e possui baixa toxicidade em tratamento agudo.

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Tese ( doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marchetti_GabrielaMenezes_D.pdf: 5720320 bytes, checksum: c6c2d23bcc3202544d0784d655107680 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A pesquisa fitoquímica de espécies vegetais tem originado um grande número de novas substâncias e trabalha em conjunto com a pesquisa farmacológica que é responsável porá apontar o potencial terapêutico dessas moléculas e ou de seus derivados. Trabalhos anteriores revelaram que o extrato bruto diclorometânico das folhas de Calea pinnatifida(Asteraceae) apresenta atividade antiproliferativa, em cultura de células tumorais humanas e antitumoral em modelos in vivo de Tumor Ascítico e Sólido de Ehrlich. Os estudos fitoquímicos revelaram a presença de germacranolídeos (lactonas sesquiterpênicas) entre os princípios ativos responsáveis pela atividade antitumoral. Este trabalho teve como objetivo isolar e determinar o mecanismo de ação do arucanolídeo. Primeiramente o arucanolídeo foi obtido através do fracionamento do extrato bruto diclorometânico e precipitação de graxas e clorofila com o uso de uma solução de acetato básico de chumbo. Em cultura de células tumorais humanas de diferentes origens o arucanolídeo apresentou atividade citocida para todas, com seletividade para melanoma e rim. Os estudos sobre o tipo demorte celular revelaram que o arucanolídeo é capaz de induzir apoptose, pela via intrínseca,através da ativação de caspases, com geração de radicais livres em células de glioblastoma U-118 MG e de melanoma SK-MEL-2. Já nas células HeLa (adenocarcinoma de cervix) o mecanismo pelo qual o arucanolídeo atua pode ser diferente, pois a via intrínseca não é tão importante, nem a geração de radicais livres, sugerindo o envolvimento da via extrínseca de apoptose. O uso de células HeLa transfectadas com o gene de Bcl-xl, não interferiu na indução de apoptose pelo arucanolídeo, comprovando a pouca importância da mitocôndriano processo apoptótico nessa linhagem, enquanto nas células SK-MEL-2 Bcl-xL a indução de apoptose foi significativamente reduzida. Nas células melanoma murino B16-F10, o arucanolídeo induziu apoptose através da ativação das caspases. No entanto, em modelo animal utilizando essa linhagem, a redução do desenvolvimento tumoral não foi dependente do processo apoptótico, sugerindo que outro mecanismo de ação está envolvido na atividade in vivo. No modelo de metástase onde as células de melanoma B16-F10 foram inoculadas diretamente na corrente sanguínea, foi observada uma tendência na redução das metástases pulmonares no grupo tratado com arucanolídeo, com poucos sinais de toxicidade hepática. Com tudo isso, pode-se concluir que o arucanolídeo é capaz de induzir apoptose em células tumorais humanas e murinas, podendo atuar pela via intrínseca e ou extrínseca de apoptose, dependendo do tipo celular avaliado. A atividade antitumoral in vitro foi confirmada com a redução do crescimento tumoral in vivo, comprovando o potencial farmacológico desse composto / Abstract: Plants have provided a large number of new substances and many drugs have based for the synthesis of them. The dichloromethane crude extract presented antiproliferative activity inhuman tumor cell culture and in vivo antitumor activity against ascitic and solid Ehrlich tumor models. The results obtained with Calea pinnatifida, species from Asteraceae family,may result in the development of new chemotherapeutic agents by the presence of germacranolides (sesquiterpene lactones) in their chemical composition. The arucanolide was obtained by the fractionation of crude dichloromethane extract after the precipitation of chlorophyll and graxes using a lead acetate basic solution. Arucanolide shows antiproliferative activity in vitro against human tumor cells lines with selectivity for melanoma and kidney. It was proved that the arucanolide is capable of inducing apoptosis,by the intrinsic pathway, through caspase avtivation, generating free radicals in U-118 MG glioblastoma and SK-MEL-2 melanoma cells. At the adenocarcinoma of cervix cells HeLa the mechanism by which arucanolide acts may be different, because the intrinsic pathway seems to be not as important as in the others cells, suggesting the involvement of the extrinsic pathway of apoptosis. The use of HeLa cells transfected with the gene of Bcl-xl, has not hindered the induction of apoptosis in these cells, showing the lack of importance of mitochondria in this apoptotic process, while in SK-MEL-2 Bcl-xL cells, the arucanolide treatment significantly reduced the apoptosis induction. In the B16-F10 cells, the arucanolide induces caspase-dependent apoptosis in vitro and has antitumor activity in vivo against the same cell line, in a subcutaneous melanoma model. The apoptosis induction was not detected in vivo, suggesting that arucanolide could act by preventing the tumor cell proliferation in vivo. At the model of experimental metastasis with the melanoma cell lineB16-F10 there is a tendency to reduce lung metastasis in mice treated with arucanolide, showing few signs of liver toxicity. With all this results, we conclude that the arucanolídeois able to induce apoptosis in human and murine tumor cells lines, and its death pathway, depends on the cell type evaluated. This compound may act by intrinsic or extrinsic apoptosis pathways. The arucanolide also reduces tumor growth in vivo and it is a promising new chemotherapic for clinical research / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense-UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências Ambientais. / The medicinal plants always were utilized by population, in the past they were the main therapeutic resource for treatment diseases. Among these therapeutic resources find the medicinal plant Calea uniflora Less., native by region south find also south central of Brazil, Argentina, Uruguay and Paraguay. This plant is utilized populary to process inflammatory and hematomas. From these informations and due the few studies with C. uniflora, emerged the interest of investigate possible compounds chemical, cytotoxic effects, antinociceptive effects, and anti-inflammatory. To the phytochemistry evaluation were analyzed the crude extract of plant by HPLC. To the evaluation about activity cytotoxic, were utilized the MTT test, in vitro, in order to verify as extract and fractions de C. uniflora cause possible effects cytotoxic. To evaluation of antinociceptive activity and anti-inflammatory were utilized models in vivo. This animals models were based in chemical stimuli (writhing induced by acetic acid and formalin test) and thermal stimuli (hot plate), while the motor incoordination was analized by rota rod. To evaluate activity anti-inflammatory was used the model paw edema induced by carrageenan. After the performing the tests, verified in the analyses phytochemistry the presence the flavonoid and alkaloid. In the test cytotoxic in vitro, the crude extract and fractions of ethyl acetate and butanol produce IC50 greater that 58 μg/ml to lineage HaCaT and 48 μg/ml to lineage B-16, thus this values not present a cytotoxic effects. However fraction dichloromethane produced IC50 18 μg/ml, showed significant inhibition when compared to controls vincristine and doxorubicin. In relation of antinociceptive activity, the models presented results significant that correspond to chemical and thermal stimuli in the doses of 100 and 300 mg/kg of the crude extract, when compared with the control groups. The rota rod model showed satisfactory results, since the extract did not cause motor incoordination and sedation. According this results, can be related the flavonoids and alkaloids with pharmacological activities reported by agents of “pastoral da saúde” with the antinociceptive and cytotoxic activities. However further studies are needed to determine the action of the activities described and relate to the chemical compounds present in the plant. / As plantas medicinais sempre foram utilizadas, sendo no passado o principal recurso terapêutico conhecido para o tratamento de enfermidades pela população. Dentre elas encontra-se Calea uniflora Less., planta medicinal nativa da região sul do Brasil encontrada também no centro-sul do Brasil, Argentina, Uruguai e Paraguai. Esta planta é utilizada popularmente para processos inflamatórios e hematomas. A partir destas informações e devido aos poucos estudos com a C. uniflora, surgiu o interesse em investigar os possíveis constituintes químicos, efeitos citotóxicos, efeitos antinociceptivo e anti-inflamatório desta espécie, para a avaliação fitoquímica foram analisados os extratos brutos da planta, através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Para a atividade citotóxica, foi utilizado o teste de MTT, in vitro, a fim de verificar se o extrato e as frações de C. uniflora apresentaram efeitos citotóxicos. Para a avaliação das atividades antinociceptiva e anti-inflamatória foram utilizados modelos in vivo. Os modelos animais antinociceptivos empregados foram baseados em estímulos químicos (modelo de contorções abdominais induzidas por ácido acético, teste da formalina) e estímulos térmicos (placa quente), enquanto a possível incoordenação motora foi analisada pelo teste rota rod, e para a avaliação anti-inflamatória utilizou-se o modelo de edema de pata induzido por carragenina. Após a realização dos testes, verificamos, na análise fitoquímica, à presença de flavonoides e alcaloides. Na atividade citotóxica in vitro, os extratos brutos e as frações de acetato de etila e butanol apresentaram uma IC50 maior que 58 μg/ml para linhagem HaCaT e 48 μg/ml para a linhagem B-16, sendo assim esses valores não apresentaram um efeito citotóxico. Entretanto a fração do diclorometano apresentou uma IC50 de 18 μg/ml, mostrando inibição significativa quando comparada aos controles vincristina e doxorrubicina. Em relação à atividade antinociceptiva observou-se resultados significativos nos modelos que correspondem a estímulos químicos e térmicos nas doses de 100 e 300 mg/kg do extrato bruto, quando comparados aos grupos controles. No modelo rota rod os resultados foram satisfatórios, pois o extrato não causou incoordenação motora e sedação nas doses avaliadas. Entretanto, pode-se relacionar com os flavonoides e alcaloides com as atividades farmacológicas relatadas popularmente e com as atividades citotóxicas e antinociceptiva. Entretanto são necessários novos estudos para determinação do mecanismo de ação das atividades descritas bem como relacionar com os compostos químicos presentes na planta.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The essential oil of the leaves of Calea clematidea, a plant of Asteraceae family used in the folk medicine in treatment of flu, stomachic disease and gastric ulcer, was extracted and of it was isolated the monoterpene caleol. This metabolite was submitted to structural modification reactions by the opening of its epoxide functional group. In the reactions catalyzed by anhydrous iron (III) chloride, the epoxide opening was selective when primary alcohols was used like nucleophile, giving like product the less substituted alcohol. In addition, the absolute stereochemistry of caleol was analyzed by NMR, where was verified that the carbon C4 configuration is R. The essential oil, the caleol and the obtained derivatives were submitted to a microbiological activity. The caleol showed best activity against bacteria and derivatives against yes. / O óleo essencial das folhas de Calea clematidea, um arbusto da família Asteraceae utilizado popularmente como antigripal, estomáquico e contra úlceras gástricas, foi extraído e dele foi isolado o monoterpeno caleol. Este metabólito foi submetido a reações de modificação em sua estrutura por meio da abertura de seu grupo funcional epóxido. A reação catalisada por cloreto férrico anidro proporcionou a abertura seletiva do epóxido quando utilizado como nucleófilos alcoóis primários, no sentido da formação do álcool menos substituído. A estereoquímica do caleol foi também avaliada dor RMN, da onde se verificou que a configuração do carbono C4 é R. O óleo essencial, o caleol e os derivados obtidos foram submetidos a análise microbiológica. O caleol apresentou melhor atividade contra bactérias e os derivados melhor contra fungos.

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:03:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marchetti_GabrielaMenezes_M.pdf: 1256255 bytes, checksum: 67243f8ebf02e8430f9c2bef8d87bd9a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Durante muitos séculos, as plantas originaram um grande número de agentes terapêuticos, na qual seus compostos deram origem a medicamentos ou serviram de base para a síntese dos mesmos. Atualmente a biologia do câncer tem sido muito estudada e uma das principais linhas de pesquisas nesta área é o desenvolvimento de novos quimioterápicos. Partindo do princípio que plantas e drogas derivadas de plantas têm uma impressionante variedade de estruturas e funções, está claro que podem ser a fonte de novas drogas para a quimioterapia do câncer, pois, atualmente, mais de 60% delas são derivados de fontes naturais. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anticâncer de uma espécie do cerrado brasileira, Calea pinnatifida Banks. Os extratos brutos diclorometânico (EBD) e etanólico (EBE) das folhas frescas e secas dessa espécie foram avaliados em ensaio de citotoxicidade in vitro em cultura de células tumorais humanas. Como o EBD de folhas secas apresentou o melhor perfil de atividade in vitro, foi submetido a diversos procedimentos cromatográficos, sendo as frações obtidas biomonitoradas pelo teste de citotoxicidade. Esses procedimentos deram origem a diversas frações com atividade antiproliferativa com destaque para a fração acetato, fração A, C. D e neutra apolar. Com a finalidade de avaliar a biodisponibilidade do extrato este foi selecionado para avaliação em modelo de câncer murino, o tumor ascítico e sólido de Ehrlich. No modelo de tumor ascítico de Ehrlich, esse extrato apresentou atividade antitumoral através do aumento da sobrevida dos animais. Já no modelo de tumor sólido de Ehrlich, esse extrato apresentou atividade antitumoral sistêmica, através da inibição do crescimento tumoral. Com isso, a identificação dos princípios responsáveis por essa atividade tornou-se fundamental. Esses resultados estimulam a continuidade dos estudos com a C. pinnatifida, com o objetivo de identificar os princípios ativos, determinar o mecanismo de ação anticâncer e comprovar sua atividade em modelos experimentais de câncer in vivo / Abstract: Plants have provided a rich source of therapeutic agents for many centuries useful as themselves or the basis for synthetic drugs. Nowadays, the biology of cancer has been studied manly for the chemoprevention drug discovery. As plants and drugs based on plants have a lot of different structures and function they could be source of new drugs for cancer chemotherapy because more than 60% of the chemotherapics used today is from natural products. This work aimed the evaluation of the anticancer activity of a Brazilian specie, Calea pinnatifida Banks. Dichlorometanic (DCE) and ethanolic (ECE) crude extracts obtained from fresh and dried leaves were tested in an in vitro cytotoxicity assay against human cancer cell lines. As long as DCE from dried leaves showed the best anticancer activity profile, it was also evaluated in a murine cancer model, the Ehrlich Ascite Tumor (EAT) and Ehrlich Solid Tumor (EST). In the EAT experiment, DCE also demonstrated an anticancer activity resulted from the increase of the survival time of the animals. Whereas in the EST experiment, this extract have systemic anticancer activity by the inhibition of the tumor growth. Therefore the isolation and identification of the active principle responsible for that activity became the major focus of this work. As a result, DCE was submitted to many cromatographic procedures which were biomonitored by the anticancer assay in vitro. These chromatographic purifications originated a lot of fraction with antiproliferative activity in which the most significant are the acetate, A, C, D and non-polar fractions. These results encouraged following up on studies with C. pinnatifida, priorizing the identification of active principles, the determination of anticancer mechanism of action and to prove the anticancer activity in experimental cancer models in vivo / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências Ambientais. / Calea L. é um gênero pertencente à família Asteraceae, tribo Heliantheae Cass., subtribo Melampodiinae Less., que contém aproximadamente 125 espécies, muitas delas encontradas no Brasil. Vários compostos químicos já foram isolados de espécies deste gênero e alguns destes compostos apresentam atividades biológicas. Destaca-se a ocorrência de lactonas sesquiterpênicas em várias espécies. As atividades biológicas relatadas para este gênero são: leishmanicida, tripanocida, antitumoral, anti-hipertensiva, antifúngica, anti-inflamatória, entre outras. Calea pinnatifida (R. Br.) Less., conhecida popularmente como “quebra-tudo”, “cipó-cruz” e “aruca”, é uma planta utilizada na medicina popular para problemas digestivos, amebíase e giardíase. Alguns compostos já foram isolados de C. pinnatifida como cromenos, poliacetilenos e lactonas sesquiterpênicas. Tendo em vista a importância da espécie e seu uso na medicina popular, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência dos fatores ambientais na produção de metabólitos secundários desta espécie. Para tanto, as folhas de C. pinnatifida foram coletadas em duas altitudes diferentes, a 25 m e 800 m e em duas estações do ano, verão e inverno. Para avaliação do perfil cromatográfico, foram realizadas cromatografias em camada delgada e em camada delgada de alta eficiência. Foi realizada a análise do solo para ambas altitudes na coleta de fevereiro/2016. O perfil cromatográfico da coleta do verão apresentou variações qualitativas como presença e ausência de compostos químicos e variações em suas concentrações, comparando as duas altitudes. O perfil cromatográfico da coleta do inverno apresentou variações qualitativas como ausência e presença de compostos químicos em ambas altitudes e quantitativas determinadas estatisticamente. A análise do solo apresentou variações significativas nos macronutrientes fósforo, potássio e magnésio e nos micronutrientes cobre, zinco, ferro e manganês. Portanto, pode-se concluir que fatores como altitude, nutrientes do solo, temperatura e radiação solar influenciam o perfil de metabólitos secundários de C. pinnatifida.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorna Hosoya.pdf: 1605005 bytes, checksum: 33dbf88d17832648889b1afef098f57a (MD5) Previous issue date: 2014-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research work aimed to study, chemically, the leaves of Calea hispida Baker, Asteraceae, that grows in natura in the Second Plateau of Paraná State by assessing the potential bioactivity of its secondary metabolites. This research was carried out because this is a poorly studied plant species and due to the occurrence of several classes of bioactive compounds in plants of this genus, although this plant is not recognized as medicinal. The leaves were hydrodistilled, in triplicate, to obtain the essential oils and analyze their chemical composition by GC/MS/FID standard techniques. This was the first chemical study of the essential oil from C. hispida, allowing the identification of several oxygenated monoterpenes in low proportions, such as terpineol, cis-sabinol, verbenone, and bornylacetate, not oxygenated sesquiterpenes in individual percentages below 5.2%, such as cubebene, germacrene D, and -selinene, and oxygenated sesquiterpenes that totaled between 7.86 to 11.46% in the replicates, such as (E)-nerolidol, spathulenol, and viridiflorol. Additionally, three compounds containing an aromatic ring in their chemical structures totaled between 31.43 and 56.20% of essential oils: 2,6-dibutyl-4-methylphenol (0.39 to 1.44%), (Z)-3-hexenyl benzoate (0.40 to 0.43%), and a major compound found in proportions between 30.21 and 54.76% which could not be identified by GC/MS. The major volatile unidentified substance was isolated by fractionation of the essential oil by means of a chromatography column. Its chemical structure was assessed by UV-Vis, FT-IR, 1H and 13C NMR spectra, which allowed the identification of 6-acetyl-7-hydroxy-2,2-dimethylchromene. In parallel, the isolated chromene was provided for studies of its crystal structure by X-ray diffraction methods. Extractions with chloroform from aqueous solutions that remained after hydrodistillation of leaves aimed to remove less polar substances, so extracts containing phenolic compounds could be obtained. Thus, ethyl acetate and ethyl acetate/methanol 30% extracts were obtained at pH 8 to achieve extracts containing solid neutral phenolic substances, as well as at pH 4 (for acidic phenolic compounds). An ethyl acetate/methanol extract at pH 8 presented only one main phenolic substance which was identified as quercetin-3-O-rhamnopyranoside by analysis of its UV, FT-IR, and 1H and 13C NMR spectra. Preliminary analyzes of extracts obtained at pH 4 showed that the acidic phenolic compounds are an important class of substances in C. hispida, consisting mainly of caffeic acid derivatives, such as 3,5-dicaffeoylquinic and 4,5-dicaffeoylquinic. This work also allowed the determination of the bioactivity profile of the secondary metabolites from leaves of C. hispida by providing extracts and isolated compounds for biological tests, such as antioxidant capacity against DPPH radical, protection of leukocytes in a medium that causes lysis, and evaluation of fungitoxic, allelopathic, antimicrobial, and inhibitory acetylcholinesterase activities. / O presente trabalho de pesquisa teve como objetivo estudar quimicamente as folhas de Calea hispida Baker, Asteraceae que cresce in natura no Segundo Planalto do Paraná, avaliando a bioatividade potencial dos seus metabólitos secundários. Esta pesquisa foi realizada por tratar-se de uma espécie vegetal pouco estudada e devido à ocorrência de compostos bioativos de diversas classes neste gênero botânico, embora esta não seja conhecida como planta medicinal. As folhas foram hidrodestiladas em triplicata para a obtenção e análise de óleos essenciais por técnicas de CG/EM/DIC. Este foi o primeiro estudo químico do óleo essencial de C. hispida, permitindo identificar diversos monoterpenos oxigenados em baixas proporções (como terpineol, cis-sabinol, verbenona e bornilacetato), sesquiterpenos não-oxigenados em porcentagens individuais abaixo de 5,2% (como cubebeno, germacreno D e -selineno), e sesquiterpenos oxigenados que totalizaram entre 7,86 a 11,46% nas replicatas (como (E)-nerolidol, espatulenol e viridiflorol). Além destes, três compostos contendo anel aromático em suas estruturas químicas totalizaram entre 31,43 e 56,20% dos óleos essenciais: 2,6-dibutil-4-metilfenol (0,39 a 1,44%), (Z)-3-hexenilbenzoato (0,40 a 0,43%) e um componente majoritário encontrado em proporções entre 30,21 e 54,76%, mas que não pode ser identificado por CG/EM. A substância volátil majoritária não identificada foi isolada por fracionamento do óleo essencial numa coluna cromatográfica, obtendo-se quantidade suficiente para a realização de testes biológicos e para estudo detalhado sobre sua estrutura química através da análise de seus espectros de UV-Vis, IV e RMN de 1H e 13C, que permitiram identificá-la como 6-acetil-7-hidroxi-2,2-dimetilcromeno. Paralelamente, o cromeno isolado foi fornecido para estudos da sua estrutura cristalina por métodos de difração de Raios-X. Extrações com clorofórmio das soluções aquosas restantes após as hidrodestilações, destinadas a eliminar substâncias menos polares, precederam a obtenção de extratos contendo substâncias fenólicas. Assim, foram realizadas extrações com acetato de etila e com acetato de etila/metanol 30% em pH 8 (para obter concentrados de substâncias fenólicas neutras) e em pH 4 (para obter substâncias fenólicas ácidas). Um extrato obtido com acetato de etila/metanol em pH 8 apresentou uma substância principal, a qual foi identificada como quercetina-3-O-ramnopiranosídeo por meio da análise de seus espectros de UV-Vis, IV e RMN de 1H e 13C. Análises preliminares de extratos obtidos em pH 4 permitiram concluir que as substâncias fenólicas ácidas são uma importante classe de compostos em C. hispida, constituídas principalmente por derivados do ácido cafeico, como os ácidos 3,5-dicafeoilquínico e 4,5-dicafeoilquínico. Este trabalho permitiu também traçar um perfil da bioatividade dos metabólitos secundários das folhas de C. hispida através do fornecimento de extratos e compostos isolados para a realização de testes biológicos por outros grupos de pesquisa, tais como medidas do poder antioxidante contra o radical DPPH e da proteção de leucócitos num meio que provoca lise, e avaliação das atividades fungitóxica, alelopática, antimicrobiana e inibitória da acetilcolinesterase.

The purpose of this study is: to explore and analyze the Communication Assistance for Law Enforcement Act of 1994 (CALEA), to identify problems related to CALEA, to identify solutions devised by other countries to overcome problems similar to CALEA's, and to propose feasible solutions to CALEA problems.

Imagine a world where someone’s personal information is constantly compromised, where federal government entities AKA Big Brother always knows what anyone is Googling, who an individual is texting, and their emoticons on Twitter. Government entities have been doing this for years; they never cared if they were breaking the law or their moral compass of human dignity. Every day the Federal government blatantly siphons data with programs from the original ECHELON to the new series like PRISM and Xkeyscore so they can keep their tabs on issues that are none of their business; namely, the personal lives of millions. Our allies are taking note; some are learning our bad habits, from Government Communications Headquarters’ (GCHQ) mass shadowing sharing plan to America’s Russian inspiration, SORM. Some countries are following the United States’ poster child pose of a Brave New World like order of global events. Others like Germany are showing their resolve in their disdain for the rise of tyranny. Soon, these new found surveillance troubles will test the resolve of the American Constitution and its nation’s strong love and tradition of liberty. Courts are currently at work to resolve how current concepts of liberty and privacy apply to the current conditions facing the privacy of society. It remains to be determined how liberty will be affected as well; liberty for the United States of America, for the European Union, the Russian Federation and for the people of the World in regards to the extent of privacy in today’s blurred privacy expectations.