A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina. / The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89,7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mirna Miyamoto.pdf: 3227973 bytes, checksum: 7f5d27c4ca1e753ebe05cec66ce51343 (MD5) Previous issue date: 2010-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Staphylococcus aureus is a potential pathogen, accounting for 60% of infections in ICU`s and can be found in the nasopharyngeal region and also in the nasal cavity, especially in health care workers who become sources of dissemination of these microorganisms in hospital. However, the indiscriminate use of antibiotics to combat these pathogens, has caused the emergence of bacteria possessing resistance genes such as mecA. Of which are about 30 to 50% of the strains of S. aureus and more than 50% of coagulase-negative staphylococci. The CONS are increasingly becoming the target of concern in hospital environments, increasing the need for screening, prevention and control of resistant strains. Therefore, the objective of this work was the characterization of Staphylococcus sp., looking for the resistance gene and genetic mapping of S. aureus in clinical samples from the cities of Manaus and Porto Velho. The techniques used were biochemical tests, antibiogram, PCR (for 16 rRNA gene and mecA) and MLST. The four strains of CONS were found, three of Staphylococcus sciuri and S. epidermidis, characterized by phenotypic and genotypic tests. They were possessed of the methicillin resistance gene mecA. As for S. aureus studied, failed to detect the presence of the mecA gene, but gene mapping was performed from these samples with the technique of MLST, using five housekeeping genes. In this analysis we observed the formation of two large clusters between the cities of Manaus and Porto Velho, and two samples showed genetic divergence from other, thus demonstrating genetic variability between the cities of northern Brazil. The evidence related in the scientific literature, little research related to knowledge and epidemiological characterization of strains existing in the Amazon region, in this research, we discussed some questions of phenotypic analysis, characterization of new resistant strains and preparation of database for future development of biotechnological tools. / Staphylococcus aureus é um patógeno em potencial, sendo responsável por 60% das infecções nos CTIs, podendo ser encontrado na região da nasofaringe e também nas fossas nasais, principalmente em profissionais da saúde que se tornam fontes de disseminação desses micro-organismos no ambiente hospitalar. No entanto, o uso indiscriminado de antimicrobianos no combate desses patógenos, tem ocasionado o surgimento de bactérias possuidoras de genes de resistência, como o gene mecA, entre as quais, cerca de 30 a 50% das cepas de S. aureus e mais de 50% são de estafilococos coagulase-negativos são portadores deste gene. Os CONS estão cada vez mais se tornando alvo de preocupação nos ambientes hospitalares, aumentando a necessidade de rastreamento, prevenção e controle das cepas resistentes. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização de Staphylococcus sp., quanto a presença do gene de resistência e mapeamento genético de S. aureus em amostras clínicas das cidades de Manaus e Porto Velho. As técnicas aplicadas foram testes bioquímicos, antibiograma, PCR (para gene 16S rRNA e gene mecA) e MLST. Neste trabalho, encontramos quatro cepas de CONS, três de Staphylococcus sciuri e um S. epidermidis, caracterizados por testes fenotípicos e genotípicos, sendo estas possuidoras do gene de resistência a meticilina mecA. Quanto aos S. aureus estudados, não se detectou a presença do gene mecA, mas foi realizado o mapeamento gênico destas amostras com a técnica de MLST, utilizando cinco genes constitutivos. Nesta análise, foi observada a formação de dois grandes agrupamentos principais (clusters) entre as cidades de Manaus e Porto Velho, e duas amostras apresentaram divergência gênica das outras, demonstrando assim, variabilidade genética entre essas cidades da Região Norte do Brasil. Diante das evidências científicas na literatura, escassas pesquisas relacionadas ao conhecimento epidemiológico e caracterização das linhagens existentes na região Amazônica, nesta pesquisa, foram discutidas algumas questões de análise fenotípica, caracterizações de novas cepas resistentes e elaboração de banco de dados para futuro desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:19Z : No. of bitstreams: 1 Publico-154.pdf: 1362092 bytes, checksum: b56e51cd61b6e0026e1f047e7ce95328 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Staphylococcus coagulase negativo (SCoN) são importantes agentes etiológicos responsáveis por infecções relacionadas à assistência à saúde (IrAS) em infecções da corrente sanguínea. Em estudo retrospectivo foram avaliados SCoN isolados de pacientes com IrAS da corrente sanguínea em dois hospitais gerais da cidade de São Paulo no período de agosto de 2005 à agosto de 2007.Os isolados foram caracterizados a nível de espécies e testes de suscetibilidade aos antimicrobianos pelo Vitek® system e Vitek® 2. A presença do gene mecA e o tipo de SCCmec foram determinados por PCR multiplex. Staphylococcus epidermidis foi a espécie predominante seguido de S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis e S. auricularis. Observou-se 88,2% de resistência à oxacilina nos isolados com 100% de concordância entre os discos de oxacilina e cefoxitina confirmados pelo gene mecA. Todos isolados foram suscetíveis à vancomicina e quatro isolados apresentaram resistência intermediária à teicoplanina pelo Etest®. Um S. epidermidis mostrou-se resistente à linezolida. O tipo de SCCmec predominante foi o tipo III seguido pelos tipos IV, I, II e V. Em 26,9% dos isolados mecA positivo não foram caracterizados nenhum tipo de SCCmec pelo protocolo utilizado. / Coagulase negative staphylococci (CoNS) are important etiologic agents responsible for healthcare related infection (HCRI) in bloodstream infections. In a retrospective study we evaluate CoNS isolated from patients with HCRI in bloodstream infections admitted to two general hospitals at São Paulo city, from August 2005 to August 2007. The isolates were characterized at species level and antimicrobial susceptibility tested by the Vitek® system and ViteK® 2. Oxacillin resistance was evaluated by oxacillin and cefoxitin discs. The presence of mecA gene and the SCCmec type were determined by multiplex PCR. Staphylococcus epidermidis was the predominant specie followed by S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis and S. auricularis. Oxacillin resistance was observed in 88.2% of the isolates with 100% concordance between oxacilin and cefoxitin discs confirmed by mecA gene. All isolates were susceptible to vancomycin and four isolates revealed intermediate resistance to teicoplanin by Etest®. One S. epidermidis showed resistance to linezolide. The predominant SCC type was the type III followed by the types IV, I, II and V. In 26.9% positive mecA isolates we did not characterize the SCCmec type by the molecular protocol utilized. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina. / The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89,7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 517056 bytes, checksum: 29070a0d8d4421b71f8bf632a8608739 (MD5) Previous issue date: 2010-09-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The use of micro-organisms as starter cultures may help in developing new products as well as improving quality and safety of food products. The aim of this study was to characterize isolates of coagulase negative staphylococci regarding their contribution the safety of a fermented meat product. Staphylocuccus spp. and Listeria spp. were grown in Nutritive Broth and BHI broth, respectively. Survival and inactivation of Staphylococcus spp. and Listeria spp. were evaluated in a laboratory model, Salami Broth. The inhibitory activity of cultures of Staphylococcus spp. on Listeria spp. was evaluated by agar diffusion assay and agar spot test. Acid production by Staphylococcus spp. was assessed by HPLC on culture supernatants. Italian salami was produced and inoculated with commercial starter culture and 106 CFU.g-1 S. pasteuri BIS 26 and, or 104 CFU.g-1 L. monocytogenes IP1-23 or L. innocua LMA 80. Staphylococcus spp. and Listeria spp. showed highest specific growth rates under aerobic conditions at 37 ° C. Staphylococcus spp. and Listeria spp. did not developed in salami broth under test conditions. No inhibitory activity was observed in culture supernatants of Staphylococcus spp. on Listeria spp., however, when cultivation was carried out on agar surface the diameter of inhibition zones ranged from 3 mm to 8 mm. HPLC analysis showed that lactic acid was in higher concentration as compared to other organic acids, with values between 0.2 and 0.4 % v/v. The final pH of the Italian type salami after 31 days of ripening ranged from 4.8 to 5.3. In the salami, the population of L. monocytogenes IP1-23 was reduced by about 5 log cycles when inoculated with the commercial starter culture and 2 log cycles when S. pasteuri BIS 26 was added. The difference between treatments indicates that L. monocytogenes IP1-23 was more sensitive than L. innocua LMA 80. However, results of in vitro assays showed that this is not always the case, recommending caution when using L. innocua as an indicator organism. / A utilização de micro-organismos como culturas starter pode contribuir para o desenvolvimento de novos produtos, para a melhoria da qualidade e da segurança dos produtos alimentícios. O objetivo deste estudo foi caracterizar isolados de Staphylococcus coagulase negativos quanto à sua possível contribuição para segurança de produto cárneo fermentado. O crescimento de Staphylocuccus spp. e Listeria spp. foi avaliado em caldo nutritivo e caldo BHI, respectivamente. A sobrevivência e inativação de Staphylococcus spp. e Listeria spp. foram avaliadas em um modelo laboratorial, caldo salame. A atividade de inibição de culturas de Staphylococcus spp. sobre Listeria spp. foi avaliada pelos métodos difusão em ágar e ágar “spot”. A análise da produção de ácidos em amostras de sobrenadantes de Staphylococcus spp. foi feita por HPLC. Salame tipo italiano foi produzido e inoculado com cultura starter comercial acrescida de 106 UFC.g-1 da cultura de Staphylococcus pasteuri BIS 26 e, ou 104 UFC.g-1 da cultura de Listeria monocytogenes IP1-23 ou Listeria innocua LMA 80. Staphylocuccus spp. e Listeria spp. apresentaram maiores velocidades específicas de crescimento em aerobiose na temperatura de 37 °C. Os isolados de Staphylococcus spp. e Listeria spp. não se desenvolveram no caldo salame, nas condições testadas. Não foi observada inibição do sobrenadante das culturas de Staphylococcus spp. sobre L. innocua e L. monocytogenes, entretanto, no cultivo em superfície, as médias dos diâmetro dos halos de inibição variaram de 3 mm a 8 mm. Na análise por HPLC, o ácido láctico foi o detectado em maior concentração, com valores entre 0,2 e 0,4 % v/v. O pH final dos salames tipo italiano após 31 dias de maturação variou entre 4,8 e 5,3. Nos salames, a população de L. monocytogenes IP1-23 foi reduzida em cerca de 5 ciclos logarítmicos quando inoculada juntamente com a cultura starter comercial enquanto no tratamento em que a cultura de S. pasteuri BIS 26 foi adicionada a redução foi de cerca de 2 ciclos log. A diferença observada entre os tratamentos indica que L. monocytogenes IP1-23 foi mais sensível que L. innocua LMA 80. No entanto, os resultados de ensaios in vitro mostraram que nem sempre isto ocorre, e deve-se ter cautela ao utilizar L. innocua como um organismo indicador.

A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina. / The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89,7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.

Les staphylocoques à coagulase négative (SCN) sont des bactéries fréquemment isolées de viandes et de produits carnés. Parmi les SCN, seules les deux espèces S. xylosus et S. carnosus sont utilisées comme ferments dans les produits carnés. Dans ces produits, il est d’usage d’ajouter du nitrate/nitrite pour le développement de la couleur typique des salaisons. Les staphylocoques participent au développement et à la stabilité de la couleur en réduisant le nitrate en nitrite via leur activité nitrate réductase. Le nitrite est chimiquement réduit en monoxyde d’azote (NO), qui se lie au fer de l’hème de la myoglobine pour former la nitrosomyoglobine, un pigment rouge et stable. Le contexte actuel vise à réduire l’utilisation du nitrate/nitrite afin de limiter le risque de formation de composés N-nitrosés tels que les nitrosamines. Il a été montré que les bactéries pouvaient synthétiser du NO à partir d’une oxyde nitrique synthase (NOS). Le gène nos a été identifié dans une collection de souches de SCN isolées de viande. La séquence protéique de la NOS est fortement conservée entre les espèces. Pour mettre en évidence la production de NO, un test basé sur la conversion de metmyoglobine en pigments rouges, l’oxymyoglobine et la nitrosomyoglobine, a été utilisé. Le nitrosohème contenu dans la nitrosomyoglobine a été extrait. La formation du nitrosohème, chez un mutant de délétion du gène nos de la souche S. xylosus C2a, est fortement réduite en condition limitée en oxygène et abolie en condition aérobie. De plus, la NOS de S. xylosus C2a est impliquée dans la réponse à un stress oxydant. Afin de déterminer le potentiel de production de NO de souches de S. xylosus et d’autres espèces de SCN, leur capacité à former de la nitrosomyoglobine a été évaluée. Cette formation est espèce- et souche-dépendante. Les souches de S. xylosus ont un potentiel de production de NO plus élevé que les souches des autres espèces. Ce test a également révélé que certaines souches de SCN sont capables de former de l’oxymyoglobine à partir de la metmyoglobine.Cette étude a permis de mettre en évidence l’implication de la NOS dans la production de NO chez S. xylosus et la capacité de formation de nitrosomyoglobine chez d’autres souches de SCN isolées de viande. / Coagulase Negative Staphylococci (CNS) are usually isolated from meat and meat products. In meat products, S. xylosus and S. carnosus are the only CNS species used as meat starter cultures. In these products, nitrate and nitrite are used as additives where they contribute to the development of the typical red coloration. Staphylococci contribute to the development and stability of colour through their nitrate reductase activity that reduces nitrate to nitrite. Nitrite is chemically reduced to nitric oxide (NO) which is able to bind the ferrous-heme iron to form the stable bright red nitrosomyoglobin pigment. However, the safety regarding the use of these additives on meat products has been questioned as nitrite is able to form N-nitroso compounds such as nitrosamines. Some bacteria are able to synthesize NO by nitric oxide synthase (NOS). The nos gene was identified in a collection of CNS isolated from meat. The NOS sequence is well conserved between species. NO production has been investigated based on the formation of red myoglobin derivatives from metmyoglobin such as oxymyoglobin and nitrosomyoglobin. Subsequently, the nitrosoheme was extracted from nitrosomyoglobin. Nitrosoheme formation was reduced under limited oxygenated condition while it was abolished under aerobic condition in a S. xylosus C2a nos deleted mutant. Moreover, NOS is involved in oxidative stress resistance in S. xylosus C2a. In order to determine the potential of NO production among other strains of S. xylosus and other CNS species, their potential to form nitrosomyoglobin was evaluated. Nitrosomyoglobin formation is strain- and species-dependent. This assay has also revealed that several CNS strains are able to form oxymyoglobin from metmyoglobin.This study has demonstrated NOS-dependent NO production in S. xylosus and the ability of CNS isolated from meat to form nitrosomyoglobin.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO JULIANA ROSA.pdf: 303226 bytes, checksum: 9585889e11363ca2d5297656fdeae6e5 (MD5) Previous issue date: 2008-04-17 / Coagulase negative staphylococci (CNS) is in human and animal microbiota, but may cause with infections with significant morbidity and mortality rates. Healthy care workers may be carriers of many microorganisms and spread resistant ECN in the hospital. This study aimed to identify the CNS species isolated from healthy care workers saliva, establishe the oxacillin resistance pattern and detect the mecA gene in resistant isolates. We evaluated 100 ECN, isolated from the saliva of an institution of professional health of large Riberão Preto in Sao Paulo state. The ECN identification was based on biochemical tests, and 41 were identified as S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis, and 1 S. simulans. Thirty-two percent were nonsusseptible to oxacillin, 84.4% to mupirocin, 43.7% to cefoxitin, but all were vancomycin susceptible. The oxacillin nonsusseptible ECN, detected by disk diffusion test were grown in agar screening oxacillin (6 μ g) supplemented with sodium chloride (4.0%) and submited to mecA detection by the PCR. Of the 32 nonsusseptible oxacillin CNS,, 93.7% developed in the oxacillin agar and the mecA gene was detected in 75.0%. This is the first report of mecA gene presence in CNS isolated from the saliva of healthy care workers. Attention must be given to CNS species identification, as well as the characterization of the nonsusceptible microorganisms, since healthy care workers may represent a reservoir of CNS / Estafilococos coagulase negativa (ECN) fazem parte da microbiota autóctone humana e animal, embora possam causar infecções. Profissionais da saúde podem ser portadores de inúmeros microrganismos virulentos entre eles os ECN resistentes a oxacilina que podem ser disseminados por esses profissionais. O estudo teve como objetivo identificar espécies de ECN isolados da saliva de profissionais da saúde, de uma instituição de saúde de grande porte em Riberão Preto no estado de São Paulo, determinar o perfil de resistência à oxacilina e detectar o gene mecA. Foram avaliados 100 ECN, e através de testes bioquímicos 41 estafilococos foram identificados como S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis e um S. simulans. Trinta e dois por cento apresentaram resistência in vitro a oxacilina, 84,4% a mupirocina, 43,7% a cefoxitina, e todos suscetíveis a vancomicina. Os ECN resistentes a oxacilina, detectados pelo teste de disco difusão, foram cultivados no agar triagem oxacilina (6µg) suplementado com cloreto de sódio e a detecção do gene mecA foi realizada pela técnica de PCR. Dos 32 ECN resistentes a oxacilina, 93,7% desenvolveram no agar oxacilina e o gene mecA foi detectado em 75,0% das amostras analisadas. Vale ressaltar que este estudo é pioneiro em mostrar a presença do gene mecA em ECN isolados da saliva de profissionais da saúde saudáveis. Uma maior atenção deve ser dada na identificação das espécies de ECN, e na caracterização da resistência desse grupo de microrganismos, uma vez que os profissionais da saúde podem representar um reservatório de ECN resistentes

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-07-04T10:49:24Z No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-08T13:57:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T13:57:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) Previous issue date: 2009-08-31 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Acredita-se que os resíduos de serviços de saúde (RSS) possam atuar como veículos de disseminação de microrganismos potencialmente patogênicos e de marcadores de resistência a drogas antimicrobianas. Assim, considerando-se os riscos para saúde humana e ambiental associados ao fenômeno da resistência microbiana a drogas, nossos objetivos foram identificar linhagens de Staphylococcus coagulase negativo (SCN) isoladas do chorume percolado dos RSS no aterro sanitário de Juiz de Fora, MG, determinar o seu perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de interesse clínico-microbiológico e detectar o marcado molecular mecA. Linhagens bacterianas presuntivamente caracterizadas como SCN (n=109) foram identificadas utilizando-se sistema comercial semiautomatizado e o seu perfil de susceptibilidade a antimicrobianos, determinado pela técnica de diluição em ágar, de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Apenas 26,6% das amostras de SCN foram identificadas pelo sistema comercial, distribuídas em S. sciuri (31%), S. epidermidis (27,6%), S. lentus (20,7%), S. vitulinus (10,3%) S. saprophyticus (6,9%), S. haemolyticus (3,5%). As outras linhagens foram identificadas como Staphylococcus spp. (73,4%). Entre os antimicrobianos avaliados, a penicilina e a oxacilina foram as drogas menos efetivas (61,4% de resistência), seguidas pela eritromicina e azitromicina (27,3% e 22,7% de resistência respectivamente). Os antimicrobianos mais eficazes foram a gentamicina e levofloxacina, para os quais apenas resistência intermediária foi observada (21,6% e 1,1% respectivamente). Todas as amostras foram susceptíveis à vancomicina. Considerando as linhagens resistentes 14 (25,9%) amplificaram o gene específico, enquanto que 40 (74,1%) mostraram-se resistentes à oxacilina por outros mecanismos. Nossos resultados suscitam reflexões relacionadas à sobrevivência de microrganismos potencialmente patogênicos e linhagens resistentes aos antimicrobianos, carreando importantes marcadores de resistência e sua possível disseminação via RSS, contribuindo para seu trânsito intra-hospitalar. / It is accepted that health-care waste may act as vehicle for spreading potentially pathogenic microorganisms and their genetic resistance markers. Thus, considering the risks for human and environmental health associated with the phenomenon of microbial drug resistance, our objectives were to identify Coagulase-negative Staphylococcus (CoNS) strains isolated from the sanitary landfill disposal of healthcare waste of Juiz de Fora, MG; to determine the antimicrobial susceptibility patterns against antimicrobials of clinical and microbiological relevance; and to evaluate the occurrence of mecA gene. Bacterial strains presumptively characterized as CoNS (n= 109) were identified using a commercial system and the antimicrobial susceptibility patterns determined by the agar dilution technique, according to the recommendations of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Only 26.6% of the bacterial samples were identified as follows: S. sciuri (31%), S. epidermidis (27.6%), S. lentus (20.7%), S. vitulinus (10.3%) S. saprophyticus (6.9%), S. haemolyticus (3.5%). The other strains were identified as Staphylococcus spp. (73.4%). Considering the minimal inhibitory concentrations of the antimicrobials, penicillin and oxacillin drugs were the less effective drugs (61.4% resistance) followed by erythromycin and azithromycin (27.3 and 22.7% resistance, respectively). The most effective antimicrobials were gentamicin and levofloxacin, for which only intermediate resistance was observed (21.6 and 1.1% respectively). All samples were susceptible to vancomycin. Considering the resistant strains, 14 (25,9%) showed to harbour mecA gene and in 40 (74,1%) were resistant to oxacillin by other mechanisms. Our results raise considerations related to the survival of potentially pathogenic microorganisms and strains resistant to antibiotics harboring genetic markers. It is possible that these bacteria might spread via health-care waste, contributing dissemination into hospitals.

Orientador: Pasqual Barretti / Resumo: A peritoniteé complicação grave e responsável pela maioria dos casos de falência da técnica de diálise peritoneal (DP). Os cocos Gram-positivos são o grupo etiológico principal, sendo os estafilococos coagulase-negativa (ECN) os germes mais comuns e o Staphylococcus aureus(S.aureus), associado a episódios mais graves e commenor frequência de resolução. O conhecimento dos fatores de risco e dospreditoresda sua evolução podem contribuir para a melhoria das estratégias de prevenção e de tratamento. Objetivo:Os objetivos do presente estudo foram avaliar os fatores de risco para o primeiro episódio de peritonite por estafilococos e os fatores associados à resolução e falência da técnica após resolução do episódio de peritonite, em uma grande coorte brasileira de pacientes em DP (BRAZPD). Métodos:De uma coorte de 5707 pacientes incidentes adultos, com mais de 90 dias de tratamento por DP, foram incluídos, entre dezembro de 2004 e novembro de 2011, aqueles que apresentaram um primeiro episódio de peritonite por S. aureus ou ECN. As covariáveis, potencialmente associadas aos desfechos, foram testadas em análise univariada e aquelas com p ≤ 0,10 incluídas no modelo multivariado. Resultados:Durante o seguimento,389pacientes apresentaram um primeiro episódio de peritonite estafilocócica. Destes, 234 foram causados por S. aureus e 155 por ECN. Os grupos que apresentaram peritonite por S. aureus ou por ECN foram semelhantes para a maior parte das características basais. Entre os pacientes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Peritonitis is a serious complication of peritoneal dialysis (PD) and the main cause of technique failure. Gram-positive cocci are the most frequent etiological group, coagulase-negative staphylococci (CNS) are the most common germs, and Staphylococcus aureus (S. aureus) is associated with more severe episodes and lower resolution rate. Objective: The objectives of this study were to evaluate the risk factors for the first episode of staphylococcal peritonitis, and the factors associated with resolution and technique failure after peritonitis episode resolution, in a large Brazilian cohort of PD patients (BRAZPD). Methods: From a cohort of 5707 adult incident patients with more than 90 days of PD treatment, between December 2004 and November 2011, those who had a first episode of S. aureus or CNS peritonitis were included. The covariates potentially associated with the outcomes were tested in univariate analysis and those with p ≤ 0.10 included in the multivariate model. Results: During follow-up, 389 patients had a first episode of staphylococcal peritonitis. Of these, 234 were caused by S. aureus and 155 by CNS. The groups of patients with S. aureus or CNS peritonitis were similar for most baseline characteristics. Among S. aureus peritonitis, there was resolution in 190 (81.2%); technique failure in 41 (21.6%), and episode-related death in 18 (7.7%). In the episodes by CNS, there were 127 resolutions (82.6%); 33 technique failures (25.8%), and 12 episode-related deaths (7.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor