A preocupação com a qualidade do sêmen ovino congelado tem sido motivo de muitas pesquisas, principalmente pela dificuldade da transposição cervical durante a inseminação artificial. Contudo, a inseminação intra-cervical é frequentemente usada em ovinos e resulta em redução da fertilidade com o uso do sêmen congelado. Neste sentido, esse estudo foi dividido em dois experimentos. No 1o experimento foi verificado o potencial da ciclodextrina pré-carregada com colesterol como aditivo ao diluidor na proteção da cinética espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial, capacitação espermática e produção de espécies reativas ao oxigênio (ROS) em espermatozoides criopreservados ovinos. Cinco ejaculados de seis carneiros (n = 30) foram divididos em três tratamentos: apenas diluidor (CON); diluidor + colesterol incorporado a ciclodextrina (CLC + CHO); e diluidor + ciclodextrina pura (CLCP). Após a diluição (50x106 espermatozóides/mL), o sêmen foi envasado em palhetas, identificado e criopreservado utilizando um sistema automatizado. Duas palhetas da mesma partida de cada tratamento foram descongeladas (a 37°C durante 30 segundos) e analisadas quanto motilidade (CASA), morfologia dos espermatozoides (DIC), integridade do plasma (PI-H342) e acrossomal (FITC-PSA) membranas, potencial mitocondrial (JC-1), produção de radicais livres (CellRox), peroxidação lipídica (BODIPY) e fluidez da membrana celular (merocianina 540). As comparações entre os grupos foram analisadas pelo PROC MIXED do SAS e o efeito de grupo foi detectado pelo teste de Tukey (p<0,05) ou pela estatística não paramétrica de ordem (Kruskal-Wallis), quando era necessário. No 2º experimento os mesmos ejaculados foram divididos por congelabilidade baseados na motilidade total pós-descongelação (MTPD) e na porcentagem de redução na motilidade total (%RMT) quando comparados o sêmen in natura e o sêmen pós-descongelação (somente diluidor), sendo divididos nos grupos alta (MTPD>60% e %RMT<40%), intermediária (60%>MTPD>40% e 60%>RMT>40%) e baixa (MTPD<40% e %RMT>60%) congelabilidade. Foram analisados os tratamentos CON e CLC+CHO dentro de cada animal e de cada grupo quanto a motilidade (CASA), a integridade das membranas plasmática (PI-H342) e acrossomal (FITC-PSA), potencial mitocondrial (JC-1), peroxidação lipídica (BODIPY) e fluidez da membrana celular (merocianina 540). As comparações foram realizadas por análise de variância (ANOVA) em arranjo fatorial 3X3 (Tratamento CLC+CHO, CON e in natura X grupos alta, intermediária e baixa congelabilidade), as comparações entre os grupos foram analisadas pelo PROC MIXED do SAS e o efeito de grupo foi detectado pelo teste de Tukey (p <0,05) ou pela estatística não paramétrica de ordem (Kruskal-Wallis), quando era necessário. No 1o experimento o tratamento CLC+CHO se mostrou mais eficaz em preservar os parâmetros de motilidade, integridade de membranas e potencial mitocondrial quando comparado aos demais tratamentos. O grupo CLCP mostrou queda nos parâmetros de motilidade, integridade de membrana, potencial mitocondrial, mostrando, com isso, uma queda na preservação espermática. No 2o experimento observou-se que o tratamento CLC+CHO mostrou maior grau de preservação para motilidade total e progressiva, células rápidas, preservação de membranas plasmática e acrossomal e potencial mitocondrial quando comparado ao CON. Esse efeito teve maior significância nos grupos de baixa e intermediária congelabilidade, não sendo tão expressivo no grupo de alta. Pode-se concluir com esse estudo que o tratamento com ciclodextrina acrescida de colesterol contribui para uma melhor preservação dos parâmetros espermáticos do sêmen ovino, principalmente em animais apresentando baixa congelabilidade, contudo não apresenta diferença em ejaculados de alta congelabilidade. / Frozen ram semen has been the subject of many researches, mainly due to the difficulty of cervical transposition during artificial insemination. However, intra-cervical insemination in sheep is often used, resulting in reduced fertility with the use of frozen semen. To this end, this study was divided into two experiments. In the first experiment was verified the potential of cyclodextrin loaded with cholesterol as an additive to the extender in the protection of sperm kinetics, integrity of plasmatic and acrosomal membranes, mitochondrial function, sperm capacitation and production of reactive oxygen species (ROS) in cryopreserved sheep sperm. Five ejaculates from six rams (n = 30) were divided into three treatments: only extender (CON); extender + cyclodextrin loaded with cholesterol (CLC + CHO); and extender + pure cyclodextrin (CLCP). After dilution (50x106 spermatozoa/mL), semen was stored in straws, identified and cryopreserved using an automated system. Two straws from each ejaculate and treatment were thawed (at 37° C for 30 seconds) and analyzed for motility (CASA), morphology of spermatozoa (DIC), plasmatic (PI-H342) and acrosomal (FITC-PSA) membrane integrity, mitochondrial potential (JC-1), production of free radicals (CellRox), lipid peroxidation (BODIPY) and cell membrane permeability (Merocyanine 540). Comparisons between groups were analyzed using PROC MIXED of SAS and the effect of group was detected by Tukey (p <0.05) or by the order of nonparametric statistics (Kruskal-Wallis) test, when necessary. In the 2nd experiment the same ejaculates were divided by freezability based on the total post-thaw motility (TPTM) and the percentage of reduction in total motility (%RTM) when compared fresh and post-thaw semen (only extender), and divided into the groups: high (TPTM ≥ 60% and %RTM ≤ 40%), intermediate (60%> TPTM > 40% and 60%> %RTM > 40%) and low (TPTM ≤ 40% and %RTM ≥ 60%) freezability. CON and CLC + CHO treatments were analyzed within each animal and each group for motility (CASA), plasmatic (PI-H342) and acrosomal (FITC-PSA) membrane integrity, mitochondrial potential (JC-1), lipid peroxidation (BODIPY) and cell membrane permeability (Merocyanine 540). Comparisons were performed by analysis of variance (ANOVA) with a factorial arrangement 3x3 (groups CLC+CHO, CON and fresh X groups high, medium and low freezability), comparisons between groups were analyzed using PROC MIXED of SAS and the group effect was detected by the Tukey test (p < 0.05) or no statistical order parametric (Kruskal-Wallis), when necessary. In the first experimente, CLC + CHO treatment was more effective in preserving the parameters of motility, membrane integrity, and mitochondrial potential compared to other treatments. The CLCP group showed a fall in the parameters of motility, membrane integrity, mitochondrial potential, showing thereby a decrease in sperm preservation. In the 2nd experiment, it was observed that the treatment CLC + CHO showed greater preservation for total and progressive motility, rapid cell preservation, plasmatic and acrosomal membranes and mitochondrial potential when compared to CON. This effect was most significant in the groups of low and intermediate freezability, not being as significant in the group of high freezability. We can conclud from this study that treatment with cyclodextrin loaded with cholesterol contributes to better preservation of sperm parameters in ram semen, especially in animals displaying low freezability, however there where no diference in the high freezability group.

Aterosclerose é uma doença inflamatória e proliferativa que tem início quando fatores de risco alteram o endotélio vascular. Células inflamatórias e vasculares liberam citocinas e fatores de crescimento que estimulam a proliferação e migração das células de músculo liso e a síntese de componentes da matriz extracelular. A nanoemulsão lipídica LDE se concentra em regiões onde a proliferação celular e a inflamação são maiores, tornando-se um veículo para fármacos. O etoposide, fármaco antiproliferativo, ainda não foi explorado no tratamento da aterosclerose. O paclitaxel recobre stents utilizados em angioplastia para evitar a reestenose. A associação do LDE-etoposide ao LDE-paclitaxel aumentaria o efeito antiproliferativo dos fármacos isolados, por agirem em diferentes fases do ciclo celular. Este estudo tem por objetivos avaliar a eficácia do tratamento com LDE-etoposide e com a combinação LDE-etoposide/LDE-paclitaxel da aterosclerose induzida por dieta rica em colesterol em coelhos; comparar a eficácia dos tratamentos; no grupo de tratamento mais eficaz e no grupo Controle, avalia a expressão protéica de receptores de lipoproteínas, citocinas, MMP9 e marcadores de proliferação celular. Para tanto, 27 coelhos receberam dieta rica em colesterol por 8 semanas. Depois de 4 semanas, foram divididos em 3 grupos: grupo Controle, que recebeu 6 mL de solução salina intravenosa; LDE-etoposide, que recebeu dose de 6mg/kg; e grupo Combinação, que recebeu LDE-etoposide/LDE-paclitaxel nas doses de 6mg/kg e 4mg/kg, respectivamente. Os tratamentos foram administrados uma vez por semana durante 4 semanas. Foram avaliados perfil lipídico, hematológico, ponderal e o consumo de ração. Após a eutanásia, as lesões ateroscleróticas macroscópicas foram medidas. Depois, o arco aórtico foi analisado por morfometria e por imunohistoquímica. Foi observado que não houve diferença no perfil ponderal e no consumo de ração entre os grupos de estudo. No perfil lipídico, ao final do estudo, as concentrações de colesterol total e de triglicérides aumentaram em todos os grupos. O perfil hematológico mostrou redução do número de hemácias nos grupos de tratamento ao final do estudo. Em comparação com o grupo Controle, os animais tratados com LDE-etoposide apresentaram lesões ateroscleróticas 11 vezes menores e o grupo Combinação, apresentou lesões 3 vezes menores. Na análise morfométrica, a área total e a espessura da aorta foram menores no grupo LDE-etoposide quando comparado com os outros dois grupos. O grupo tratado com LDE-etoposide apresentou presença de macrófagos e de células de músculo liso menor que os grupos Controle e Combinação. Como o tratamento com LDE-etoposide apresentou uma maior eficácia, a avaliação dos outros fatores foi feita apenas neste grupo e no grupo Controle para comparação. O grupo LDE-etoposide apresentou menor expressão protéica dos receptores de lipoproteínas, das citocinas inflamatórias, da MMP9 e dos marcadores de proliferação celular topoisomerase II e tubulina. As avaliações mostraram que o tratamento com LDE-etoposide foi mais eficaz no tratamento das lesões ateroscleróticas induzidas em coelhos do que a combinação entre LDE-etoposide/LDE-paclitaxel / Atherosclerosis is an inflammatory and proliferative disease that is triggered by risk factors damaging vascular endothelium. Inflammatory and vascular cells release cytokines and growth factors, promoting the proliferation and migration of smooth muscle cells and extracellular matrix elements synthesis. LDE, an artificial nanoemulsion, concentrates in areas of greater proliferation and inflammation rates and can be used as a vehicle to direct drugs to those cells. Etoposide, an antiproliferative drug, have not been studied in atherosclerosis treatment. Paclitaxel is used in drug-eluting stents to avoid restenosis. The association of LDE-etoposide and LDE-paclitaxel would enhance the antiproliferativo effect of the isolated drugs, due to act in different cell cycle phase. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the treatment with LDE-etoposide and with LDE-etoposide/LDE-paclitaxel of atherosclerosis induced by a cholesterol-rich diet in rabbits; compare the effectiveness of these treatments; in the most effective treatment group and in Control group, evaluate the protein expression of lipoprotein receptors, cytokines, MMP9 and cell proliferation markers. To do so, 3 groups of 9 rabbits were fed a cholesterol-rich diet during 8 weeks then the animals were separated in 3 groups: Control, intravenously injected with 6mL of saline solution; LDE-etoposide, injected with a dose 6mg/kg; and Combination, injected with LDE-etoposide/LDE-paclitaxel in a dose of 6mg/kg and 4mg/kg, respectively. Treatments were administered once a week during 4 weeks. Lipids, blood cell count, weight and food intake were evaluated. The animals were sacrificed and the macroscopic atherosclerotic lesions were measured. Later, the aortic arch was analyzed by microscopic morphometry and by immunohistochemistry. It was seen that there was no difference in food intake and weight between study groups. Total cholesterol and triglycerides concentration increased in all groups. Blood cell count showed reduction of red blood cell in treatment groups at the end of the study. Animals treated with LDE-etoposide showed 11-fold less lesions and Combination group showed 3-fold less lesions than Control group. By morphometric analysis, total area and thickness of aorta were smaller in LDE-etoposide group than the other groups. LDE-etoposide group showed less macrophages and smooth muscle cells than Control and Combination groups. As treatment with LDE-etoposide showed a better efficacy, evaluation of other factor were performed only in LDE-etoposide and Control group, to perform a comparison. LDE-etoposide showed less protein expression of lipoprotein receptors, cytokines, MMP9, and of cell proliferation markers topoisomerase II and tubulina. The analysis showed that LDE-etoposide treatment was more effective in treating atherosclerotic-induced lesions in rabbits than the combination between LDE-etoposide/LDE-paclitaxel

Foram estudadas, quanto ao perfil lipídico, duas populações, compreendendo indivíduos acima dos 20 anos de idade: -trabalhadores da Termomecânica, indústria metalúrgica de São Bernardo do Campo: 1.616 do sexo masculino e 230 do sexo feminino; -pacientes atendidos no ambulatório do Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP): 664 do sexo feminino e 317 do sexo masculino. Os objetivos foram: I. Avaliar se a determinação isolada da colesterolemia total, sem considerar a dos triglicérides e a do HDL-colesterol e o cálculo do LDL-colesterol pela fórmula de Friedewald, para rastreamento populacional ou para decisão de tratamento, implica importante porcentagem de aparecimento de casos classificados inadequadamente, considerando o LDL-colesterol como \"padrão ouro\". 2. Analisar se a determinação da trigliceridemia associada à da colesterolemia total, além de mostrar os casos que apresentam hipertrigliceridemia isolada, auxilia a melhor identificação dos casos quanto ao LDL-colesterol. 3. Avaliar, com base na determinação isolada da colesterolemia total, qual a chance de os pacientes, por não lerem seu HDL-colesterol dosado, estar em maior risco lipídico para doença ateroselerótica por apresentar essa fração do colesterol abaixo do desejável. As conclusões foram: I. A dosagem isolada do colesterol total pode levar a chance importante de classificar enganosamente um paciente (em relação ao LDL-colesterol calculado). Para o rastreamento, os falsos negativos variaram de 9 por cento a 24 por cento e os falsos positivos, de 10 por cento a 24 por cento. Para a situação de decisão de tratamento, a variação dos falsos negativos foi de 14 por cento a 25 por cento, enquanto a dos falsos positivos foi de 1 por cento a 9 por cento. 2. A determinação dos triglicérides associada à do colesterol total auxilia a melhor identificação dos casos que apresentam LDL-colesterol elevado, somente quando a colesterolemia se encontra abaixo ue 240 mg/dl. Para níveis de colesterol totai iguais ou acima desse valor, a determinação também dos triglicérides não auxilia a melhor identificação do risco lipídico pelo LDL-colesterol ou a necessidade de tratamento dessa variável do perfil lipídico. A não possibilidade do diagnóstico de hipertrigliceridemia isolada (acima de 200 mg/dl) quando da determinação somente do colesterol total apresentou baixas chances nas populações avaliadas neste estudo, de 0,5 por cento a 3 por cento. 3. A não determinação do HDL-colesterol associa risco de erro pequeno de não identificação de paciente com risco de doença coronária por nível baixo dessa fração do colesterol (abaixo de 35 mg/dl), com colesterol total em níveis desejáveis (abaixo de 200 mg/dl), que variou de 3 por cento a 10 por cento. / Lipid profile of two populations composed of individuais older than 20 years, was studied: - metallurgic employees from São Bernardo do Campo (Termomecânica): 1,616 males and 230 females; - outpatients seen in the Hospital das Clínicas from Campinas State University (UNICAMP): 664 females and 317 males. The objectives were: I. To evaluate if the isolated determination of serum total cholesterol, without triglyceridcs, HDL-cholesterol and calculation of LDL-cholesterol by Friedewald\'s formula, for population screening or treatement decision implicates in high percentage of misclassification, considering LDL-cholesterol as the gold standard. 2. To analyze if triglycerides associated to total cholesterol determination helps in better identification of cases according to LDL-cholesterol, parallel to the definition of the percentage of cases presenting isolated hypertriglyceridemia. 3. To evaluate what is the chance of, according to isolated total choleslerol determination, patients being misclassified due a low HDL-cholesterol. The conclusions were: I. Isolated determination of total cholesterol can induce to an important chance of misclassifying a patient (according to calculated LDL-cholesterol). For screening, false negatives ranged from 9 per cent to 24 per cent and false positives from 10 per cent to 24 per cent. For treatment decision situation, false negatives varied from 14 per cent to 25 per cent, while false positives varied from 1 per cent to 9 per cent. 2. Triglycerides determination associated to total cholesterol helps in better identification of cases presenting elevated LDL-cholesterol, only when the cholesterolemia is below 240 mg/dL. For total cholesterol equal or above this value, triglycerides determination does not improve better identification of lipid risk depending on LDL-cholesterol during screening or treatment imposition. The impossibility of diagnosing isolated hypertriglyeeridemia (above 200 mg/dL) when only total cholesterol determination is done present low chance in both studied populations varying from 0.5 per cent to 3 per cent. 3. In a patient presenting a desirable total cholesterol level (below 200 mg/dL), not dosing HDL-cholesterol associates low risk of misclassification depending on a low level or this lipoprotein fraction (below 35 mg/dL): from 3 per cent to 10 per cent.

O cobre está associado ao metabolismo de lipídios, sendo bastante importante na redução do colesterol, e à estabilidade oxidativa da carne, por fazer parte de algumas enzimas antioxidantes. Porém, quando na forma iônica, é considerado um elemento pró-oxidante. O cobre orgânico não apresenta esse efeito e, além disso, geralmente apresenta maior biodisponibilidade que fontes inorgânicas. Desse modo, o objetivo deste estudo foi determinar o efeito da suplementação com dois níveis e duas fontes de cobre (inorgânica e orgânica) sobre o desempenho, concentração de cobre no fígado, músculo e sangue, fermentação ruminal, parâmetros oxidativos e metabolismo de lipídios e colesterol. Trinta e cinco bovinos da raça Nelore em fase de terminação foram divididos em 5 grupos, com 7 animais por tratamento, conforme descrição: 1) C: Dieta controle, sem a suplementação adicional de cobre; 2) I10: suplementação de 10mg de Cu/kg de MS na forma de sulfato de cobre; 3) I40: suplementação de 40mg de Cu/kg de MS na forma de sulfato de cobre; 4) O10: suplementação de 10mg de Cu/kg de MS na forma de proteinato de cobre; 5) O40: suplementação de 40mg de Cu/kg de MS na forma de proteinato de cobre. A suplementação com cobre proporcionou maior concentração e acúmulo de Cu no fígado (p<0,05), sendo a maior média observada para o tratamento O40, porém, o status de Cu no músculo e no soro não foram alterados pelos tratamentos. A maior atividade da ceruloplasmina (p<0,05) foi observada para o tratamento I40. Não houve efeito significativo (p>0,05) para ganho de peso diário, ingestão de matéria seca, eficiência alimentar, rendimento de carcaça quente e fria, perda pelo frio, espessura de gordura subcutânea e área de olho de lombo dos bovinos, entre os tratamentos controle e suplementação com cobre inorgânico ou orgânico. O pH ruminal, os ácidos graxos voláteis e o nitrogênio amoniacal também não foram influenciados (p>0,05) pelos tratamentos. Em geral, a suplementação com cobre alterou o perfil de ácidos graxos da carne (p<0,05), com aumento na proporção de ácidos graxos insaturados em detrimento dos ácidos graxos saturados. Não houve efeito de tratamento para TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) no fígado e na carne embalada a vácuo (p>0,05), porém houve redução nos valores de TBARS na carne dos bovinos suplementados com Cu para as amostras dispostas no Display Life (tratamentos I40 e O40, p=0,06), e na atmosfera modificada (tratamentos I10, I40, O10 ou O40, p<0,05), em relação ao tratamento controle. A suplementação com Cu (tratamentos I40 e O40) aumentou a atividade da SOD (superóxido dismutase) (p<0,05), em relação ao tratamento controle, mas não influenciou a atividade da GSH-Px (glutationa peroxidase) (p>0,05). Não houve efeito da suplementação sobre triglicérides e colesterol no sangue; entretanto, em geral, houve redução da concentração de colesterol no músculo L. dorsi (p<0,05), em relação ao tratamento controle, através da redução (p<0,05) da concentração de GSH e da relação GSH/GSSG. / Copper is associated with lipid metabolism, becoming very important in reducing cholesterol, and with oxidative stability of meat, because it is part of some antioxidant enzymes. However, when in the ionic form, is considered a pro-oxidant element. The organic copper did not exhibit this effect and, besides, presents higher bioavailability than inorganic sources. Thus, the aim of this study was to determine the supplementation effect of two levels and two sources of copper (inorganic and organic) on the performance, Cu concentration in liver, muscle and blood, ruminal fermentation, oxidative parameters and metabolism of lipids and cholesterol. Thirty-five Nellore cattle in the finishing phase were divided into 5 groups with 7 animals per treatment, as described: 1) C: control diet, without additional Cu supplementation; 2) I10: 10mg Cu/kg DM, as Cu sulfate; 3) I40: 40mg Cu/kg DM, as Cu sulfate; 4) O10: 10mg Cu/kg DM, as Cu proteinate; 5) O40: 40mg Cu/kg DM, as Cu proteinate. Supplementation with copper provided higher Cu concentration and accumulation in the liver (p<0.05), with the highest mean observed for the O40 treatment, nevertheless the Cu status in muscle and serum were not affected by treatments. The highest activity of ceruloplasmin (p<0.05) was observed for the I40 treatment. There was no significant effect (p>0.05) for daily weight gain, dry matter intake, feed efficiency, hot and cold carcass yield, cold loss, backfat and loin eye area of cattle, among control treatment and supplementation with inorganic or organic copper. Ruminal pH, volatile fatty acids and ammonia were not influenced (p>0.05) by treatments. In general, copper supplementation altered the meat fatty acid profile (p<0.05), with an increase in the proportion of unsaturated fatty acids over saturated fatty acids. There was no treatment effect for TBARS (thiobarbituric acid reactive substances) in liver and meat vacuum packed (p>0.05), but there was a reduction in TBARS values in meat from cattle supplemented with Cu for samples prepared on Display Life (treatment I40 and O40, p=0.06), and modified atmosphere (treatment I10, I40, O10 and O40, p <0.05), compared to the control treatment. Supplementation with Cu (treatment I40 and O40) increased the activity of SOD (superoxide dismutase) (p<0.05) compared to control treatment, but did not influence the activity of GSH-Px (glutathione peroxidase) (p>0.05). There was no effect of supplementation on triglycerides and cholesterol in blood, however, there was a reduction in cholesterol concentration in L. dorsi muscle (p<0.05) compared to the control treatment, by reducing (p<0.05) of GSH concentrations and the GSH/GSSG ratio.

Vinte e oito bovinos Brangus foram usados para se determinar o efeito da suplementação de cobre e selênio no desempenho, características de carcaça, composição de ácidos graxos no músculo Longissimus dorsi (LD) e na concentração de colesterol sérico e no músculo LD . Os tratamentos foram : 1) C(Controle) - sem a suplementação de cobre e selênio; 2) Se - 2 mg Se/kg de matéria seca na forma de selenito de sódio; 3) Cu- 40 mg Cu/kg de matéria seca na forma de sulfato de cobre; 4) Se/Cu- 2 mg Se/kg de matéria seca na forma de selenito de sódio e 40 mg Cu/kg de matéria seca na forma de sulfato de cobre. O ganho de peso diário aumentou com a suplementação de selênio (P<0,05). A eficiência alimentar foi melhor (P<0,05) nos tratamentos selênio, cobre e selênio/cobre, em relação ao controle. A ingestão de matéria seca não foi alterada pelos tratamentos (P>0,05). A espessura de gordura e composição de ácidos graxos do músculo LD não foram influenciados pelos tratamentos (P>0,05). A concentração sérica de colesterol não foi influenciada pelos tratamentos (P>0,05), entretanto, a concentração de colesterol no LD foi menor nos bovinos suplementados com cobre e selênio (P < 0.05). A glutationa peroxidase e GSSG aumentaram (P<0,05) com a suplementação de cobre , selênio ou selênio/cobre (P <0,05). / Twenty eight Brangus steers were used to determine the effects of copper (Cu) and selenium (Se) supplementation on performance, carcass characteristics, Longissimus dorsi muscle fatty acid composition and serum and Longissimus dorsi muscle cholesterol concentrations. Treatments were: 1) control - no supplemental Cu and Se; 2) Se - 2 mg Se/kg DM as sodium selenite; 3) Cu - 40 mg Cu/kg DM as copper sulfate; 4) Se/Cu - 2 mg Se/kg DM as sodium selenite and 40 mg Cu/kg DM as copper sulfate. Daily weight gain increased with selenium supplementation (P<0,05). Feed efficiency was better in selenium, copper and selenium/copper treatments than in the control group. Dry matter intake was not affected by treatments (P>0.05). Backfat and Longissimus dorsi fatty acid concentrations were not affected by treatments (P > 0.05). Serum cholesterol concentration was not affected by treatments (P>0.05), however, Longissimus dorsi cholesterol concentrations were lower in steers supplemented with Cu and Se (P<0.05). GSSG and GSH Px increased (P<0.05) with Cu, Se and Se/Cu supplementation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2018. / Introdução: As doenças cardiovasculares são uma das mais importantes causas de morbidade e mortalidade no mundo inteiro, sendo a dislipidemia um dos fatores de risco para o desenvolvimento da aterosclerose, que é o substrato dessas doenças. O colesterol não-HDL é a fração do colesterol que inclui todo o colesterol das partículas potencialmente aterogênicas e seu controle passou a fazer parte das medidas de prevenção primária e secundária das doenças cardiovasculares. Objetivo: Correlacionar os vários padrões de alteração do colesterol com a espessura mediointimal das carótidas, como forma de estratificação não invasiva do risco cardiovascular, analisando se os pacientes com elevação isolada de colesterol não-HDL têm comportamento semelhante aos demais pacientes com fatores de risco já consagrados. Metodologia: Foram selecionados para o estudo militares submetidos a inspeção de saúde no Hospital de Força Aérea de Brasília no período de maio de 2016 a fevereiro de 2017, separando-os em três grupos: um grupo com elevação isolada de colesterol não-HDL, outro, com níveis de colesterol normal, que foi considerado o grupo controle deste estudo e um grupo com elevação de colesterol LDL ou HDL baixo. Posteriormente, foram analisados os exames de ultrassonografia de carótidas a que esses pacientes foram submetidos e coletadas informações sobre a espessura mediointimal das carótidas, sendo realizada estratificação do risco cardiovascular, conforme tabela do estudo CAPS para determinar o risco de cada grupo desenvolver doenças cardiovasculares. Resultados: Foram selecionados para esse estudo 427 pacientes divididos nos três grupos estudados. Os valores de colesterol foram em média de 118,1 mg/dl para o LDL colesterol; de 49,4 mg/dl para o HDL colesterol e de 141,7 mg/dl para o não- HDL colesterol. A espessura mediointimal (EMI) das carótidas foi de 0,71 mm em média e uma pequena porcentagem dos pacientes apresentou placas ateroscleróticas diagnosticadas pelo ultrassom. Os pacientes do grupo normal foram em sua maioria estratificados como de risco cardiovascular intermediário (41,3%), sendo esse valor maior que o dos pacientes do grupo LDL alto/HDL baixo (35,8%); enquanto que os que foram estratificados como de alto risco no grupo não-HDL elevado (46%), aproximaram-se do grupo LDL alto/HDL baixo (37,1%). A idade foi o único fator independente na alteração da espessura mediointimal das carótidas e houve uma tendência do grupo não-HDL, quando comparado ao grupo normal, de apresentar aumento dos valores da EMI das carótidas. Conclusão: Os grupos estudados não apresentaram maior risco independente. O grupo não-HDL elevado apresentou uma tendência maior de ocorrência de eventos em relação ao grupo com níveis de colesterol normais e comportamento semelhante ao grupo LDL alto/HDL baixo. A idade foi o único fator de risco independente de eventos. / Introduction: Cardiovascular diseases are one of the most important causes of morbidity and mortality worldwide, with dyslipidemia being one of the risk factors for the development of atherosclerosis, which is the substrate of these diseases. Non- HDL cholesterol is the fraction of cholesterol that includes all cholesterol from potentially atherogenic particles and its control has become part of the primary and secondary prevention measures of cardiovascular diseases. Objective: To correlate the different patterns of cholesterol change with the medianintimal thickness of the carotid arteries as a non-invasive stratification of cardiovascular risk, analyzing whether patients with isolated elevation of non-HDL cholesterol had a similar behavior to the other patients with risk factors already established. Methods: We selected for the study military personnel undergoing health inspection at the Brasília Air Force Hospital from May 2016 to February 2017, separating them into three groups: one group with isolated elevation of non-HDL cholesterol, another group with normal cholesterol levels, which was considered the control group of this study and a group with elevated LDL or low HDL cholesterol. Afterwards, the carotid ultrasound examinations were analyzed and the information was collected on the average thickness of the carotid arteries. The cardiovascular risk stratification was performed according to the CAPS study table to determine the risk of each group developing cardiovascular diseases. Results: For this study 427 patients were divided into three groups. Cholesterol values were on average 118.1 mg / dl for LDL cholesterol; of 49.4 mg / dl for HDL cholesterol and 141.7 mg / dl for non-HDL cholesterol. The medianintimal thickness (EMI) of the carotid arteries was 0.71 mm on average and a small percentage of the patients had atherosclerotic plaques diagnosed by ultrasound. The patients in the normal group were mostly stratified as intermediate cardiovascular risk (41.3%), which was higher than that of the patients in the high LDL / low HDL group (35.8%); while those who were stratified as high-risk in the high non-HDL group (46%), were close to the low HDL / HDL group (37.1%). Age was the only independent factor in the change in the medianintimal thickness of the carotid arteries and there was a tendency of the non-HDL group, when compared to the normal group, to present an increase in carotid EMI values. Conclusion: The groups studied did not present a higher independent risk. The high non-HDL group showed a greater tendency to occur in relation to the group with normal cholesterol levels and similar behavior to the high LDL / low HDL group. Age was the only independent risk factor for events.

A rota de biossíntese de colesterol tem sido estudada pelo seu envolvimento com a secreção de hormônios. A secreção de insulina depende do colesterol e de intermediários da sua biossíntese como o geranilgeranil pirofosfato. Para compreender a contribuição destes elementos na secreção de insulina foram utilizados inibidores de diferentes pontos da rota de biossíntese do colesterol. Estudou-se a contribuição do geranilgeranil pirofosfato e do colesterol na secreção de insulina estimulada pela glicose e analisados parâmetros físicos de membrana dos quais decorrem aspectos funcionais da célula beta. Sinvastatina inibiu a secreção de insulina sem afetar o conteúdo celular de colesterol, mas inibindo a geranilgeranilação de proteínas. A diminuição do conteúdo de colesterol aumenta a fluidez de membrana desorganizando lipid rafts. A suplementação com colesterol recupera a função secretória. Por tanto, a inibição da síntese de colesterol diminui a secreção de insulina através da redução da isoprenilação de proteínas e da alteração estrutural de membranas celulares. / Cholesterol biosynthesis pathway has been studied for its involvement with the hormone secretion process. Insulin secretion depends on cholesterol and its biosynthesis intermediates such as geranylgeranyl pyrophosphate. For understand their contribution on the glucose stimulated insulin secretion, cholesterol biosynthesis pathway key steps inhibitors were used. The geranylgeranyl pyrophosphate and cholesterol contribution to the insulin secretion was studied so as physical parameters of the membrane, from where derive key functions of it. Simvastatin inhibited insulin secretion without affecting total cellular cholesterol, but inhibiting protein geranylgeranylation. The cholesterol reduction increased the membrane fluidity with consequent disorganization of membrane lipid rafts, in which secretion machinery is organized. Cholesterol supplementation recovers cellular secretory function. We conclude that cholesterol biosynthesis inhibition reduces insulin secretion through protein isoprenylation impairment and structural disarrangement of the cellular membranes.

Aterosclerose é uma doença inflamatória e proliferativa que tem início quando fatores de risco alteram o endotélio vascular. Células inflamatórias e vasculares liberam citocinas e fatores de crescimento que estimulam a proliferação e migração das células de músculo liso e a síntese de componentes da matriz extracelular. A nanoemulsão lipídica LDE se concentra em regiões onde a proliferação celular e a inflamação são maiores, tornando-se um veículo para fármacos. O etoposide, fármaco antiproliferativo, ainda não foi explorado no tratamento da aterosclerose. O paclitaxel recobre stents utilizados em angioplastia para evitar a reestenose. A associação do LDE-etoposide ao LDE-paclitaxel aumentaria o efeito antiproliferativo dos fármacos isolados, por agirem em diferentes fases do ciclo celular. Este estudo tem por objetivos avaliar a eficácia do tratamento com LDE-etoposide e com a combinação LDE-etoposide/LDE-paclitaxel da aterosclerose induzida por dieta rica em colesterol em coelhos; comparar a eficácia dos tratamentos; no grupo de tratamento mais eficaz e no grupo Controle, avalia a expressão protéica de receptores de lipoproteínas, citocinas, MMP9 e marcadores de proliferação celular. Para tanto, 27 coelhos receberam dieta rica em colesterol por 8 semanas. Depois de 4 semanas, foram divididos em 3 grupos: grupo Controle, que recebeu 6 mL de solução salina intravenosa; LDE-etoposide, que recebeu dose de 6mg/kg; e grupo Combinação, que recebeu LDE-etoposide/LDE-paclitaxel nas doses de 6mg/kg e 4mg/kg, respectivamente. Os tratamentos foram administrados uma vez por semana durante 4 semanas. Foram avaliados perfil lipídico, hematológico, ponderal e o consumo de ração. Após a eutanásia, as lesões ateroscleróticas macroscópicas foram medidas. Depois, o arco aórtico foi analisado por morfometria e por imunohistoquímica. Foi observado que não houve diferença no perfil ponderal e no consumo de ração entre os grupos de estudo. No perfil lipídico, ao final do estudo, as concentrações de colesterol total e de triglicérides aumentaram em todos os grupos. O perfil hematológico mostrou redução do número de hemácias nos grupos de tratamento ao final do estudo. Em comparação com o grupo Controle, os animais tratados com LDE-etoposide apresentaram lesões ateroscleróticas 11 vezes menores e o grupo Combinação, apresentou lesões 3 vezes menores. Na análise morfométrica, a área total e a espessura da aorta foram menores no grupo LDE-etoposide quando comparado com os outros dois grupos. O grupo tratado com LDE-etoposide apresentou presença de macrófagos e de células de músculo liso menor que os grupos Controle e Combinação. Como o tratamento com LDE-etoposide apresentou uma maior eficácia, a avaliação dos outros fatores foi feita apenas neste grupo e no grupo Controle para comparação. O grupo LDE-etoposide apresentou menor expressão protéica dos receptores de lipoproteínas, das citocinas inflamatórias, da MMP9 e dos marcadores de proliferação celular topoisomerase II e tubulina. As avaliações mostraram que o tratamento com LDE-etoposide foi mais eficaz no tratamento das lesões ateroscleróticas induzidas em coelhos do que a combinação entre LDE-etoposide/LDE-paclitaxel / Atherosclerosis is an inflammatory and proliferative disease that is triggered by risk factors damaging vascular endothelium. Inflammatory and vascular cells release cytokines and growth factors, promoting the proliferation and migration of smooth muscle cells and extracellular matrix elements synthesis. LDE, an artificial nanoemulsion, concentrates in areas of greater proliferation and inflammation rates and can be used as a vehicle to direct drugs to those cells. Etoposide, an antiproliferative drug, have not been studied in atherosclerosis treatment. Paclitaxel is used in drug-eluting stents to avoid restenosis. The association of LDE-etoposide and LDE-paclitaxel would enhance the antiproliferativo effect of the isolated drugs, due to act in different cell cycle phase. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the treatment with LDE-etoposide and with LDE-etoposide/LDE-paclitaxel of atherosclerosis induced by a cholesterol-rich diet in rabbits; compare the effectiveness of these treatments; in the most effective treatment group and in Control group, evaluate the protein expression of lipoprotein receptors, cytokines, MMP9 and cell proliferation markers. To do so, 3 groups of 9 rabbits were fed a cholesterol-rich diet during 8 weeks then the animals were separated in 3 groups: Control, intravenously injected with 6mL of saline solution; LDE-etoposide, injected with a dose 6mg/kg; and Combination, injected with LDE-etoposide/LDE-paclitaxel in a dose of 6mg/kg and 4mg/kg, respectively. Treatments were administered once a week during 4 weeks. Lipids, blood cell count, weight and food intake were evaluated. The animals were sacrificed and the macroscopic atherosclerotic lesions were measured. Later, the aortic arch was analyzed by microscopic morphometry and by immunohistochemistry. It was seen that there was no difference in food intake and weight between study groups. Total cholesterol and triglycerides concentration increased in all groups. Blood cell count showed reduction of red blood cell in treatment groups at the end of the study. Animals treated with LDE-etoposide showed 11-fold less lesions and Combination group showed 3-fold less lesions than Control group. By morphometric analysis, total area and thickness of aorta were smaller in LDE-etoposide group than the other groups. LDE-etoposide group showed less macrophages and smooth muscle cells than Control and Combination groups. As treatment with LDE-etoposide showed a better efficacy, evaluation of other factor were performed only in LDE-etoposide and Control group, to perform a comparison. LDE-etoposide showed less protein expression of lipoprotein receptors, cytokines, MMP9, and of cell proliferation markers topoisomerase II and tubulina. The analysis showed that LDE-etoposide treatment was more effective in treating atherosclerotic-induced lesions in rabbits than the combination between LDE-etoposide/LDE-paclitaxel

Tesi realitzada al Centre d' Investigació Cardiovascular (CSIC-ICCC), de l' Hospital de la Santa Creu i Sant Pau de Barcelona / Las alteraciones del metabolismo lipídico causadas por la isquemia miocárdica tienen profundos efectos en el estado fisiológico del corazón. En el corazón isquémico, la hipoxia incrementa la formación de vacuolas lipídicas en zonas periféricas al área de riesgo al aumentar la síntesis endógena de triglicéridos y reducir la beta-oxidación de ácidos grasos. A su vez, durante la hipoxia, las células musculares lisas de la pared vascular (VSMC) tienen una captación incrementada de lipoproteínas de baja densidad (LDL). Se ha descrito un efecto sinérgico entre la hipoxia y la acumulación de lipoproteínas en la inducción de genes inflamatorios y genes involucrados en el metabolismo lipídico. Los estudios realizados in vitro e in vivo demuestran que el receptor de LDL (LDLR) no es el responsable de la captación incrementada de colesterol en células vasculares sometidas a hipoxia pues está regulado positivamente por los SREBP de tal forma que la acumulación de colesterol inhibe su expresión. Sin embargo el receptor LRP1 está regulado negativamente por los SREBP por lo que, independientemente de los niveles de colesterol intracelular, es capaz de captar el colesterol de las lipoproteínas y sobreacumularlo en la célula. Además el LRP1 está sobreexpresado por la hipoxia en las VSMC de las arterias coronarias y puede explicar mecanísticamente los efectos sinérgicos entre hipoxia e hipercolesterolemia en la acumulación lipídica intracelular. Actualmente se desconoce el papel del LRP1 en el cardiomiocito y las consecuencias de las alteraciones en su expresión sobre el metabolismo lipídico. Se ha descrito que la lipoprotein lipasa presente en la superficie de los cardiomiocitos media la captación de lipoproteinas utilizando un receptor no identificado hasta el momento para la captación selectiva de colesterol. Por otro lado, se sabe que el LRP1 media la captación selectiva de colesterol por células vasculares. Todos estos resultados sugieren que el LRP1 podría participar en la captación de lípido por el cardiomiocito, y dejan entrever la importancia de los mecanismos moleculares involucrados en su modulación. En primera instancia los objetivos fueron analizar el efecto de la hipoxia en la expresión del receptor LRP1 en cardiomiocitos neonatales de rata y HL-1, así como los mecanismos involucrados en este efecto. También determinar el papel del LRP1 en la captación de VLDL en condiciones de hipoxia por los cardiomiocitos. Nuestros resultados, publicados en el artículo “Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 mediates hypoxia-induced very low density lipoprotein-cholesteryl ester uptake and accumulation in cardiomyocytes”, demostraron que la hipoxia incrementa la expresión del LRP1 a través del factor inducible por hipoxia HIF-1α, y ésta sobreexpresión induce la captación y acumulación de colesterol esterificado procedente de VLDL en cardiomiocitos. A continuación estudiamos el efecto de dosis hipercolesterolémicas de LDL e hipertrigliceridémicas de VLDL en la expresión del LRP1 en cardiomiocitos, así como la correlación entre la expresión del LRP1 y la acumulación lipídica en el ventrículo izquierdo de pacientes con cardiomiopatía isquémica. Publicados en el artículo “Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 expression correlates with cholesteryl ester accumulation in the myocardium of ischemic cardiomyopathy patients” nuestros resultados sugieren que la regulación al alza del LRP1 juega un papel primordial en la acumulación de ésteres de colesterol en el miocardio de corazones isquémicos y esto puede suponer un “target” con el fin de prevenir efectos deletéreos de esta acumulación en la cardiomiopatía isquémica. Por último, en el tercer artículo, “Low-density lipoproteins promote unstable calcium handling linked to reduced SERCA2 and connexin-40 expression in cardiomyocytes”, observamos que el colesterol procedente de LDL desestabiliza el manejo del calcio por parte de cardiomiocitos HL-1 al reducir la expresión de SERCA2 y la velocidad de conducción del calcio por la Conexina40. / "Role of the low density lipoprotein receptor-related protein-1 (LRP1) in ischemia and cardiovascular pathophysiology" Currently, it is unknown the role of LRP1 in the cardiomyocyte and the consequences of its changes in expression on lipid metabolism. It has been reported that lipoprotein lipase, present on the surface of cardiomyocytes, mediates the uptake of lipoproteins using an unidentified receptor so far for the selective uptake of cholesterol. Furthermore, it is known that the LRP1 mediates the selective uptake of cholesterol by vascular cells. All these results suggest that LRP1 may be involved in lipid uptake and accumulation by the cardiomyocyte and show the importance of understanding the molecular mechanisms involved in the modulation of LRP1 by hypoxia. In the first instance the objectives were to analyze the effect of hypoxia on LRP1 receptor expression in neonatal rat cardiomyocytes and HL-1, and the mechanisms involved in this effect. Also determine the role of LRP1 in VLDL uptake under hypoxia by cardiomyocytes. Our findings, published in the article "Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 mediates hypoxia-induced very low density lipoprotein-cholesteryl ester uptake and accumulation in cardiomyocytes", showed that hypoxia increases LRP1 expression through transcription factor HIF-1α, and this overexpression induces the uptake and accumulation of cholesteryl esters from VLDL in cardiomyocytes. Then, we estudied the effect of LDL and VLDL in the LRP1 expression, and the correlation between LRP1 expression and lipid accumulation in the left ventricle of patients with ischemic cardiomyopathy. Published in the article "Low-density lipoprotein receptor-related protein 1 Expression Correlates with cholesteryl ester accumulation in the myocardium of ischemic cardiomyopathy patients" our results suggested that the LRP1 upregulation plays a role in cholesterol accumulation in the ischemic myocardium and this could be a "target" in order to prevent deleterious effects of this accumulation. Finally we analyzed the effects of LDL on calcium handling by cardiomyocytes HL-1. In the third article, "Low-Density Lipoproteins Promote unstable linked to calcium handling Reduced SERCA2 and connexin-40 expression in cardiomyocytes", we observed that colesterol from LDL destabilizes calcium handling by cardiomyocytes HL-1 reducing SERCA2 expression and calcium conduction velocity by Connexin40.

Las proteínas de la familia de las anexinas se caracterizan su unión a los fosfolípidos de la bicapa lipídica de forma dependiente de calcio, a través de los motivos "repetición anexina" presentes en su secuencia. Esta capacidad ha sido descrita mediante ensayos in-vitro, aunque poco se conoce de la funcionalidad de este comportamiento en los sistemas biológicos. Además del calcio, otros componentes celulares, como el citoesqueleto de actina, podrían modular in-vivo la unión de anexinas a las membranas biológicas.En trabajos previos nuestro grupo determinó in-vivo como la anexina A6 era capaz de reclutarse hacia el compartimento endocítico en paralelo a la internalización de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), uno de cuyos componentes mayoritarios es el colesterol. En el presente trabajo describimos como el colesterol por si sólo es capaz de inducir este reclutamiento, de forma independiente de calcio. En primer lugar, se determinó que existía una población de anexina A6, asociada a membranas (totales o endosomales) aisladas en ausencia de calcio, y que ésta era liberada al solubilizar el colesterol presente en la bicapa (con digitonina). Además, la acumulación de colesterol en el compartimento endocítico tardío (mediante el tratamiento de las células con la droga U18666A) inducía el reclutamiento in-vivo de anexina A6 hacia éstas membranas, proceso observado mediante fraccionamiento celular (aislamiento de endosomas e immunodetección por western blot) e immunocitoquímica (co-localizando, en estos endosomas a la anexina con el lípido no esterificado -marcado con filipina-). El incremento de la asociación colesterol-dependiente se observó asimismo para la anexina A6 añadida de forma exógena (a membranas aisladas carentes de anexina endógena) descartando la afectación del tráfico intracelular como causa del efecto observado. A continuación se determinó la funcionalidad derivada de la interacción de otro tipo de lipoproteínas involucradas en el metabolismo de colesterol, las HDL (de alta densidad), con la superficie de células CHO. Describimos la activación de Ras de forma subsiguiente a la unión de la partícula a la membrana. involucrando a uno de sus receptores más importantes, el Scavenger Receptor Type B-I (SR-BI). Al estudiar el efecto de la sobreexpresión de anexina A6 sobre esta señalización a partir de las HDL y su receptor SR-BI, en células CHO, se observó una disminución de la activación de Ras y Raf (pero no del resto de MAPKs). Por otro lado, la observación in-vivo (videomicroscopía) de la distribución celular de anexina A6-GFP sobreexpresada en células CHO, muestra como incrementos del calcio intracelular ejercen un reclutamiento masivo y muy rápido de la anexina A6 hacia la membrana plasmática (o dominios subyacentes a ésta), siguiendo un patrón similar al observado para algunas GAPs (GTPase activating proteins). Esta observación, así como la interacción ya descrita in-vitro entre la anexina A6 y p120GAP, sugiere la hipótesis que la translocación calcio-dependiente de la anexina hacia la membrana modularía la concentración de p120GAP, colaborando así en la desactivación de Ras. En este sentido, observamos como la sobreexpresión de anexina A6 induce, en células CHO, un incremento de la asociación de p120 GAP a fracciones de membrana enriquecidas en Ras.La caracterización de estos dominios de concentración de anexina A6 en la membrana indica que se trata de lipid rafts (dominios enriquecidos en colesterol) con presencia de citoesqueleto de actina. Postulamos que, en la célula viva, el calcio, el colesterol y el citoesqueleto de actina colaboran determinando la localización de la anexina en la membrana, desde donde actuaría como un modulador de la señalización a través de Ras. / The annexin family of proteins is characterized by the presence of a tandemly repeated calcium dependant - phospholipid binding domain, called "annexin repeat". However, other cell constituents, like actin cytoskeleton or cholesterol, have been proposed to play a role in annexin binding to biological membranes. In this sense, here we demonstrate in-vivo that cholesterol itself is able to modulate the intracellular distribution of membrane-associated annexin A6, in a calcium - independent manner. Concretely, cholesterol accumulation in the late endocytic compartment, upon treatment of the cells with "U18666A", is accompanied by annexin VI recruitment to this structures. Also, treatment of crude membrane extracts from early or late endosomes with digitonin, a cholesterol-sequestering agent, is able to displace a significant membrane-bound population of annexin VI, associated in a calcium independent manner. Finally, we demonstrate that this redistribution correlates with an increased binding of recombinant GST-annexin VI to cholesterol-enriched endocytic membranes in-vitro.After determining the role of cholesterol in mediating annexin VI recruitment to membranes, we aimed to characterize the signalling pathway activated upon HDL (one of the key lipoproteins in cholesterol metabolism) binding to the cell surface of CHO cells. Here we describe that HDL activates MAP kinases through the small GTPase Ras. We involve in this activation one of the most physiologically important receptors for HDL, the "Scavenger Receptor Type B-I" (SR-BI). We then analyzed this activation pathway in an annexin VI-overexpressing derived cell line, finding that annexin VI partially inhibits the signalling through the small GTPase Ras and blocks the subsequent activation of Raf. This diminished Ras activation is completely dependant on the presence of the enzyme PKC, and does not ultimately lead to a deficient MAPK activation. We also observed that annexin VI overexpression promoted the association of p120 GAP (one of the Ras inactivators and also an annexin VI-interacting protein) with Ras - enriched membrane fractions, suggesting an increased Ras - p120 GAP complex formation in these cells. In summary, we suggest that annexin VI is able to modulate signalling activation from the membranes and that, in this process, both calcium- and cholesterol-mediated membrane recruitment of annexin VI are involved.