Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-09-16T17:05:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Larissa C. de Rezende.pdf: 3108743 bytes, checksum: cc38f90b9b20dfdb5a4e05e8f6020493 (MD5) / Approved for entry into archive by NUBIA OLIVEIRA (nubia.marilia@ufba.br) on 2016-09-16T17:32:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Larissa C. de Rezende.pdf: 3108743 bytes, checksum: cc38f90b9b20dfdb5a4e05e8f6020493 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T17:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Larissa C. de Rezende.pdf: 3108743 bytes, checksum: cc38f90b9b20dfdb5a4e05e8f6020493 (MD5) / FAPESB / Este trabalho descreve o reestudo fitoquímico dos extratos em clorofórmio e em acetato de etila do caule de Cratylia mollis Mart. ex. Benth. C. mollis é um arbusto pertencente à família Leguminosae, subfamília Faboideae (Papilionoideae) de ocorrência na América do Sul. Esta é uma espécie forrageira e de incidência predominante na caatinga nordestina, onde é conhecida popularmente como “camaratu” ou “camaratuba”. A espécie é utilizada na dieta de bovinos, caprinos e ovinos especialmente em épocas de seca no Nordeste do Brasil. O objetivo deste trabalho é o estudo da composição química de C. mollis uma vez que, só existe descrito na literatura apenas um trabalho realizado com a espécie. Assim, o extrato metanólico foi particionado entre MeOH/H2O:Hex, MeOH/H2O:CHCl3 e AcOEt:H2O. Os extratos em clorofórmio e em acetato de etila foram submetidos a fracionamento cromatográfico em gel de sílica e em Sephadex LH20 e análise em camada delgada preparativa sob gel de sílica. As substâncias puras obtidas tiveram suas estruturas elucidadas através da análise dos dados de Ressonância Magnética Nuclear 1H e 13C (BB, DEPT) e de experimentos bidimensionais (HMBC, HMQC), além de dados de EM das substâncias e de seus derivados acetilados. Deste modo, do extrato em clorofórmio foram isoladas a 2’-hidroxi-6,7-metilenodioxiflavana e 7,2’-dihidroxi-6-metoxiflavana, anteriormente isolada da espécie, além da nova flavana 7,3’-dihidroxi-6,2’-dimetoxiflavana, pinoresinol, vanilina e o novo flavanol 2R*,3S*-7,3’-dihidroxi-6,2’-dimetoxi-flavan-3-ol. Do extrato em acetato de etila foram isolados dois novos flavanóis, o 2R*,3S*-7,3’-dihidroxi-6,2’-dimetoxi-flavan-3-ol e o 2R*,3S*-7,2’-dihidroxi-6-metoxi-flavan-3-ol. / This work describes the chemical investigation of chloroformic and ethyl acetate extracts from the stem of Cratylia mollis Mart ex. Benth, a specie belonging to Leguminosae family. This species is a small tree of the Faboidae subfamily (Papilionoideae) and occurs throught South America. This is one of the most abundant plant of the brazilian northeastern, especially the Semi-arid region and, it is popularly known as “camaratu” and “camaratuba”. In this region it is employed as substitute of cattle´s alimentation. Thus, the methanol extract of stem C. mollis was submitted to liquid:liquid partition between MeOH/H2O:Hex, MeOH/H2O:CHCl3 e AcOEt:H2O. The chloroformic and ethyl acetate extracts were submitted to CC and TLC over silica gel and gel permeation on Sephadex LH20. The identification and structural elucidation of pure compounds were based on analysis of the data obtained from the spectroscopic methods including NMR bidimensional experiments. From the chloroformic extract were isolated 2’-hydroxy-6,7-methylenodioxyflavan and 7,2’-dihydroxy-6- methoxyflavan, besides of the new flavan 7,3’dihydroxy-6,2’-dimethoxyflavan, pinoresinol, vanilin and the new flavanol 2R*,3S*-7,3’-dihydroxy-6,2’-dimethoxy- flavan-3-ol. The ethyl acetate extract furnished the new flavanols named 2R*,3S*-7,3’- dihydroxy-6,2’-dimethoxy-flavan-3-ol and 2R*,3S*-7,2’-dihydroxy-6-methoxy-flavan- 3-ol.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1278_1.pdf: 792753 bytes, checksum: 20996201f4344cc4ef37471cf37f5e52 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Uma proteina sem atividade hemaglutinante ou inibitória de tripsina foi isolada de sementes de Cratylia mollis por fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia em Sephadex G-75 e denominada cratilina. SDS-PAGE na ausência de agente redutor revelou a presença de polipeptídeos de Mr 205, 150 e 50 kDa e em condições redutoras como peptídeos de Mr 50, 26, 24 e 22 kDa. Cratilina aquecida (100ºC) foi resolvida como peptídeos de 26, 24 e 22 kDa. Cratilina (10 1000 ppm) foi tóxica para Artemia salina com LC50 de 558.7 μg/ml. Atividade antitumoral de cratilina 11,5 mg/kg, 23 mg/kg ou cratilina aquecida 23 mg/kg foi avaliada sobre carcinoma de Ehrlich implantado em camundongo (Mus muscullus) e foi determinada atividade de inibição do tumor de 63%, 73% e 34%, respectivamente. Atividade anti-hiperlipidêmica de cratilina (10 ou 20 mg/kg/day) foi testada usando camundongo hiperlipidêmico e mudanças no colesterol e triglicerídeos do soro não foram detectadas. Atividade artemicida de cratilina é uma indicação da propriedade de inibição tumoral

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1381_1.pdf: 2762869 bytes, checksum: 983e0be064cd2706b647170e01abc2f1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Câncer de próstata é o tumor maligno de maior incidência em homens idosos nos países desenvolvidos e a segunda maior causa de morte por câncer. Lectinas, proteínas ou glicoproteínas, que reconhecem carboidratos livres ou conjugados têm sido estudadas em inúmeras aplicações e que através da sua capacidade de reconhecimento, têm sido utilizadas em histoquímica na análise de mudanças na composição e expressão de carboidratos de glicoconjugados, de superfície celular e citoplasma, em processos de desenvolvimento e diferenciação celular como na carcinogênese. O objetivo deste trabalho foi avaliar duas lectinas de sementes de Cratylia mollis (Cramoll 1,4 glicose/manose específica e Cramoll 3 galactose específica) como potenciais marcadores histoquímicos de tecidos prostáticos humanos e compará-las a lectinas comerciais de especificidades similares, respectivamente (Con-A e PNA). Cramoll 1,4 e Cramoll 3 foram conjugadas a peroxidase (Cramoll 1,4-HRP e Cramoll 3-HRP) e cortes (4 μm) de biópsias de próstata (normal - PN, hiperplásicas HBP e carcimona CaP) foram submetidos ao ensaio histoquímico com as lectinas em estudo. Ensaios de inibição da ligação lectina-carboidrato foram realizados com os respectivos açúcares na concentração de 0,3M para controle das marcações. O padrão de reconhecimento de Con-A e Cramoll 1,4 (15μg/mL) em HBP foi mais intenso que na próstata normal. Essas lectinas também mostraram diferenças entre HBP e CaP, no qual elas marcaram com diminuição de intensidade à medida que o grau de malignidade aumentava. PNA e Cramoll 3 (25μg/mL) reconheceram similarmente as células epiteliais em todos os grupos, porém uma marcação mais intensa foi observada no lúmen das glândulas do CaP. Nenhuma das lectinas em estudo pode ser empregada como um marcador para corpos amiláceos já que não houve diferença de marcação entre elas na maioria dos casos. Nossos resultados sugerem que a glicosilação das proteínas é modificada tanto na HBP quanto no CaP. Assim, lectinas de sementes de C. mollis (Cramoll 1,4 e 3) apresentam-se como fortes candidatas à ferramentas em histoquímica para patologias da próstata quando comparadas as lectinas comerciais como Con-A e PNA

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-29T16:18:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Evellyne - com ficha catalográfica.pdf: 3540470 bytes, checksum: 42d4abc2752fe4f60bc667d7c9829075 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T16:18:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Evellyne - com ficha catalográfica.pdf: 3540470 bytes, checksum: 42d4abc2752fe4f60bc667d7c9829075 (MD5) Previous issue date: 2015-09-18 / CAPES / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não-imunológica que possuem a capacidade de aglutinar eritrócitos ou outras células e precipitar polissacarídeos ou outras glicoproteínas. Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4 são lectinas extraídas das sementes de Cratylia mollis. Cramoll 1,4 é uma mistura de Cramoll 1 e sua isoforma Cramoll 4 e rCramoll foi sintetizada pela técnica de expressão heteróloga, a partir da sequência de aminoácidos de Cramoll 1. Este trabalho objetivou avaliar a atividade indutora de morte celular das lectinas Cramoll 1,4 e rCramoll em células de adenocarcinoma de próstata humano (PC-3), além de verificar as propriedades das lectinas Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4 em aglutinar plaquetas lavadas de diferentes tipos sanguíneos humanos e de sangue de coelho. Cramoll 1,4 e rCramoll diminuíram a viabilidade das células PC-3 com o aumento das concentrações das lectinas ou do tempo de exposição. Os valores de concentrações capazes de matar 50% das células PC-3 expostas às lectinas foram 39.69 μg/mL e 29.91 μg/mL para Cramoll 1,4 e rCramoll, respectivamente. Elas apresentaram maior citotoxicidade para células PC-3 quando comparadas à lectina ConA. Tratamento com Cramoll 1,4 e com rCramoll induziu a morte celular por necrose, com um aumento de cerca de 3 vezes nos níveis de superóxido mitocondrial, bem como aumento dos níveis de cálcio citosólico. Quando utilizados inibidores da abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial não foi observada proteção das células PC-3 no processo de morte celular. Provavelmente, a morte de células PC-3 ocorreu devido aos aumentos nas concentrações de cálcio citosólico e de espécies reativas de oxigênio (EROs) mitocondrial, culminando com uma diminuição na fosforilação oxidativa, deficiência de ATP e privação de energia. Com relação à propriedade em aglutinar plaquetas, a aglutinação ocorreu em maior percentual nas plaquetas provenientes de sangue tipo A e em menor intensidade em plaquetas provenientes de sangue tipo AB e apesar da especificidade a carboidratos diferente entre Cramoll 3 e Cramoll 4, estas isoformas apresentaram semelhança quanto à promoção de aglutinação de plaquetas humanas. Quanto aos ensaios de inibição da aglutinação de plaquetas, foi observado que, na maior parte das vezes, os carboidratos específicos não inibiram completamente a aglutinação de plaquetas. / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immune origin that have the ability to agglutinate erythrocytes or other cells and precipitating polysaccharides and glycoproteins other. Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 and Cramoll 4 are lectin extracted from seeds Cratylia mollis. Cramoll 1,4 is a mixture of Cramoll 1 and isoform Cramoll 4. rCramoll was synthesized by heterologous expression technique, from the Cramoll amino acid sequence 1. This study evaluated the activity of inducing cell death of lectins Cramoll 1,4 and rCramoll in human prostate adenocarcinoma cells (PC-3), and evaluate the properties of lectins Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 and Cramoll 4 washed platelets agglutinate in different human blood types and rabbit blood. Cramoll 1,4 and rCramoll decreased viability of PC-3 cells with increasing concentrations of lectins or exposure time. The values of effective concentrations to kill 50% of PC-3 cells treated were 39.69 μg/ml and 29.91 μg/mL for the lectins Cramoll 1,4 and rCramoll, respectively. They showed greater toxicity for PC-3 cells compared to the lectin ConA. Treatment with Cramoll 1,4 and rCramoll induced cell death by necrosis, with an increase about 3 times higher the levels mitochondrial superoxide as well as in cytosolic calcium levels. When used inhibitors opening of the mitochondrial permeability transition pore protection was not observed in PC-3 cells in cell death process. Probably, PC-3 cell death occurred due to these previous increases in cytosolic calcium concentrations and reactive oxygen species (ROS) mitochondrial, culminating in a decrease in oxidative phosphorylation, ATP deficiency and deprivation of energy. Platelet agglutination occurred in a higher percentage in platelets from blood type A and to a lesser intensity in platelets from blood type AB. Despite the specificity of different carbohydrates between Cramoll 3 and Cramoll 4, these isoforms were similar as to promoting platelet agglutination human. As for inhibition assays of platelet agglutination it was observed that, in most of times, the specific carbohydrate didn’t completely inhibit platelet agglutination

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1566_1.pdf: 2102071 bytes, checksum: a32f2d69fae4ed0544f893c472824bed (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A lectina de folhas de Bauhinia monandra (BmoLL) foi avaliada através de sistemas potenciométricos e amperométricos visando elucidar o comportamento dessa proteína na presença de células procarióticas e eritrócitos de coelho em meios eletrolíticos apropriados, a lectina foi avaliada livre e imobilizada em nanoporos de Nafion e as respostas eletroquímicas foram obtidas por consequência da ligação desta proteína aos seus carboidratos específicos. Foram realizados testes na presença e na ausência de bactérias, endofíticos extraídos de folha da B. monandra, para analisar sua interação com os carboidratos de membrana destas células. BmoLL foi avaliada também interagindo com eritrócitos de coelho, na presença e ausência de galactose; a lectina de sementes de Cratylia mollis (Cramoll) foi avaliada livre na presença ou ausência de seu carboidrato específico. Os métodos eletroquímicos utilizados para verificar as mudanças de cargas nas superfícies de BmoLL demonstraram interações significativas dessa lectina aos carboidratos de membrana das células procarióticas empregadas neste sistema, bem como a forte ligação de BmoLL aos carboidratos de membrana de eritrócitos. Sistemas amperométricos e potenciométricos, utilizados para elucidar o comportamento da BmoLL na presença de células procarióticas e interagindo com carboidratos presentes na membrana de eritrócito de coelho, bem como Cramoll interagindo com diferentes concentrações de glicose apresentaram sensibilidade satisfatória para detectar trocas conformacionais na superfície dessas lectinas devido a sua bioadsorção com ligantes

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5001_1.pdf: 34036 bytes, checksum: 3fc4da888e5a35c2dd64d8f0c0367a6a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / A lectina de sementes de Cratylia mollis (Cra) reconhece glicose/manose e apresenta propriedades similares a concanavalina A, Con A, uma lectina já bastante caracterizada de sementes de Canavalia ensiformes. A lectina de folha de Bauhinia monandra (BmoLL), específica para galactose, tem sido purificada através de fracionamento com sulfato de amônia e cromatografia de afinidade em gel de guar. O potencial eletroquímico para Cra, Con A e BmoLL foi obtido através de técnicas potenciostáticas usando uma solução salina como suporte para controle da distribuição de cargas entre o eletrodo de calomelano saturado e o eletrodo de platina como eletrodo de trabalho, em um meio aerado. O potencial eletroquímico positivo determinado para Cra (+94 mV) e Con A (+88 mV) indicou uma alta sensibilidade dos eletrodos utilizados. O potencial eletroquímico de interação foi investigado com a Cra imobilizada sobre contas de vidro ativadas com 3-aminopropiltrietoxisilano (APTES). Este potencial descreveu um comportamento linear em relação ao aumento da concentração com um alto coeficiente de correlação (r = 0,9969). BmoLL imobilizada apresentou um potencial eletroquímico positivo deinteração com diferentes concentrações de galactose (0, 50, 100, 150 e 200 mM). Um sistema amperométrico foi desenvolvido para caracterizar a especificidade de ligação a carboidratos da Cra. Medidas foram realizadas na faixa de concentração de 0 550 mM de glicose, frutose ou sacarose. Os resultados observados sugeriram que uma maior área de superfície do eletrodo aumenta a estabilização na interface da dupla camada elétrica interface. O sistema eletroquímico foi desenvolvido para avaliar as trocas de cargas nas superfícies de Cra e BmoLL livres ou imobilizadas quando estas lectinas interagem com carboidratos

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5227_1.pdf: 720738 bytes, checksum: b1a7bc76ef08ec0d6ef3f956f46c298a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A BmoLL, que é a lectina extraída de folha de Bauhinia monandra, é específica para galactose e tem sido purificada através de fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia de afinidade. A Cramoll, lectina de Craltylia mollis, reconhece glicose/manose e apresenta propriedades similares a concanavalina A, Con A, lectina que é extraída de sementes de Canavalia ensiformis, e já é bastante caracterizada. Os potenciais eletroquímicos para BmoLL e Cramoll 1,4 foram obtidos através de técnicas potenciostáticas, utilizando diferentes soluções salinas como suporte para o controle da distribuição de cargas entre o eletrodo de Ag/AgCl, como eletrodo de referência, e o eletrodo de platina como eletrodo de trabalho, em um meio aerado. Os potenciais eletroquímicos positivos e específicos determinados para a BmoLL e Cramoll 1,4 indicaram uma alta sensibilidade dos eletrodos utilizados. Os resultados observados sugeriram que uma maior área de superfície do eletrodo aumenta a estabilização na interface da dupla camada elétrica. O sistema eletroquímico foi desenvolvido para avaliar as trocas de cargas nas superfícies de BmoLL e Cramoll 1,4 livres interagindo ou não com seus carboidratos específicos

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-14T12:26:00Z No. of bitstreams: 1 Jacqueline Ellen Camelo Batista Albuquerque.pdf: 1563098 bytes, checksum: 993e6d21852ba5b6790a3c951b311ae4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-14T12:26:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jacqueline Ellen Camelo Batista Albuquerque.pdf: 1563098 bytes, checksum: 993e6d21852ba5b6790a3c951b311ae4 (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Plant lectins represent a class of proteins that perform various biological activities, including an immunomodulatory actions. In particular, lectins ConBr (Canavalia brasiliensis) and CFL (Cratylia argentea) have demonstrated an ability to modulate cytokines of the proinflammatory cascade as well as the production of nitric oxide in the murine model of Salmonella infection. Immunomodulatory molecules represent a promising alternative in the prevention and treatment of infections and can enhance immunological and adaptive mechanisms of the host improving the efficacy of antibiotics and vaccines against pathogens. This study evaluated the biotechnological potential of the ConBr and CFL as therapeutic and vaccine adjuvants against the antigen Vi from S. typhi, which has been used with limited success for immunization against typhoid fever. Initially, cytotoxicity assays with lectins were performed with cultured murine peritoneal macrophages to define non-toxic proteins concentrations for assays. Then, macrophages were treated with lectins and infected with a virulent strain of Salmonella Typhimurium. For this purpose, macrophages were incubated with ConBr and CFL lectins (1 and 10 μg / mL) before (preventive treatment) or after (curative treatment) the onset of infection. The following analyses were conducted: macrophage cell viability, intracellular bacterial quantification, iNOS plus pro-and anti-inflammatory cytokines and Toll-like receptor´s (TLR2, TLR4 and TLR9) gene expression. Both preventive and curative treatments significantly reduced the intracellular bacterial load and increased cell viability of infected macrophages. In the preventive treatment with CFL there was an increase in the level of transcripts for IL-6 and TNF-α, whereas ConBr induced an increase of IL-12 (p40). In the curative treatment, CFL induced significant expression of IL-12 (p40), whereas ConBr increased gene expression of IL-1β and TNF-α. In addition, the curative treatment with CFL increased approximately 130 fold the expression of TLR-4 and 24 fold expression of TLR2. In view of the importance of the TLR2 and TLR4 for the control of Salmonella infection, we evaluated the participation of these receptors in the immunomodulatory action of the CFL. Thus, bone marrow-derived macrophages (BMDM) knockout for TLR2/TLR4 were treated with the lectin and gene expression for IL-1β, TNF-α and IL-6 cytokines was evaluated. Naïve BMDM demonstrated high levels of gene expression, increasing 258-fold the number of transcripts for IL-1β, 233-fold for IL-6, and 25-fold for TNF-α. Conversely, double knockout BMDM for TLR2/TLR4 produced low levels of transcripts. Finally, ConBr and CFL were tested as vaccine adjuvants in Swiss mice immunized with the purified Vi antigen through evaluation of anti-Vi IgG antibodies. The results showed that as CFL and ConBr lectins were not able to induce an increase of specific IgG anti-Vi antibodies. Although the lectins did not demonstrate a potential as vaccine adjuvant against the Vi antigen, they showed therapeutic properties beneficial to the control of Salmonella-infected macrophages and were capable to interact with Toll-like receptors, which play a key role on activation of innate immune response and development of adaptive immune response. Such results represent a promising prospect for the development of new drugs against Salmonella. / Lectinas vegetais representam uma classe de proteínas que desempenham diversas atividades biológicas, incluindo a ação imunomoduladora. Recentemente, as lectinas ConBr (Canavalia brasiliensis) e CFL (Cratylia argentea) demonstraram a capacidade de modular a cascata pró-inflamatória de citocinas, bem como a produção de óxido nítrico em modelo murino de infecção por Salmonella. Moléculas imunomoduladoras representam uma alternativa promissora na prevenção e no tratamento de infecções, podendo atuar nos mecanismos imunológicos naturais e adaptativos do hospedeiro, aprimorando a eficácia de antibióticos e vacinas contra patógenos. Diante disso, este estudo avaliou o potencial biotecnológico das lectinas, ConBr e CFL, como adjuvantes terapêuticos, frente ao antígeno vacinal Vi de S. Typhi, que tem sido usado com sucesso limitado para imunização contra a febre tifoide. Inicialmente, foram realizados ensaios de citotoxicidade das lectinas em cultura de macrófagos peritoneais murinos para definir as concentrações proteicas não tóxicas de uso nos ensaios. A seguir, os macrófagos foram tratados com as lectinas e infectados por uma cepa virulenta de Salmonella Typhimurium. Para tanto, os macrófagos foram incubados com as lectinas ConBr e CFL (1 e 10 μg/mL) antes (tratamento preventivo) ou após (tratamento curativo) infecção experimental com Salmonella. Foram realizadas análises de viabilidade celular dos macrófagos, quantificação intracelular bacteriana e expressão gênica de iNOS, citocinas pró- e anti-inflamatórias e receptores Toll-like (TLR2, TLR4 e TLR9). Ambos os tratamentos preventivo e curativo reduziram significativamente a quantificação bacteriana intracelular de Salmonella e aumentaram a viabilidade celular dos macrófagos. Os tratamentos preventivos com CFL aumentaram os níveis de transcritos para IL-6 e TNF-α, já ConBr induziu o aumento de IL-12 (p40). No tratamento curativo, CFL induziu expressão significativa de IL-12 (p40), enquanto ConBr aumentou a expressão gênica de IL-1β e TNF-α. Além disso, o tratamento curativo com CFL foi capaz de aumentar cerca de 130 vezes a expressão de TLR-4 e 24 vezes a expressão de TLR2. Considerando a importância dos receptores TLR2 e TLR4 para o controle da infecção por Salmonella, este trabalho avaliou a participação desses receptores na ação imunomoduladora da lectina CFL. Para tanto, macrófagos derivados da medula óssea (BMDM) e duplo nocautes para TLR2/TLR4 foram tratados com a lectina e a expressão gênica das citocinas IL-1β, TNF-α e IL-6 foi avaliada. Os BMDM demonstraram elevados níveis de expressão gênica, induzindo o aumento de cerca de 258 vezes para IL-1β, 233 vezes para IL-6 e 25 vezes para TNF-α. No entanto, BMDM duplo nocautes para TLR2/TLR4, produziram níveis significativamente mais baixos de transcritos. Por fim, ConBr e CFL foram testados como adjuvante vacinais em camundongos Swiss imunizados com antígeno Vi purificado, através da avaliação de anticorpos IgG anti-Vi. Os resultados mostraram que as lectinas CFL e ConBr não foram capazes de induzir o aumento no título de anticorpos específicos IgG anti-Vi. Apesar das lectinas não terem demonstrado potencial adjuvante vacinal frente ao antígeno Vi, tais proteínas apresentaram propriedades terapêuticas benéficas no controle de células infectadas por Salmonella, além de serem capazes de interagir com receptores do tipo Toll, essenciais na ativação da resposta imune inata e desenvolvimento da resposta adaptativa. Assim, tais resultados representam uma perspectiva promissora para o desenvolvimento de novos fármacos contra Salmonella.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T15:12:58Z No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T15:12:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) Previous issue date: 2011-12-12 / Lectins Cratylia mollis (Cramoll-1,4) have been structurally characterized and their biological and pharmacological effects remain under investigation, since its use as a biopharmaceutical requires further elaboration. The objective of this study was to propose and characterize a gel formulation radiated Cramoll-1,4, and the preservation of properties of lectins in vitro, under the influence of gamma radiation and its activity in tissue repair processes in vivo (skin and bone). Initially, we made the extraction and purification of Cramoll-1,4, was developed a gel formulation using Carbopol as a vehicle, which was irradiated with 60Co gamma rays at a dose of 7,549 kGy h-1. To evaluate the biodistribution, Cramoll-1,4 was incubated with Tc-99 and to characterize the marking was made thin-layer chromatography. Then the gel was used in protocols for tissue repair in vivo, specifically bone tissue and epithelial. The proposed formulation at a concentration of 300 μg retained the hemagglutinating activity in vitro, suggesting a role of "protection", making the inactivation of Cramoll-1,4 radiation. The biodistribution of this gel was evaluated from the labeling with technetium showed that this lectin was captured by the intestine, metabolized by the liver and excreted by the kidneys and does not cross the blood brain barrier. The application of the topical gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 300 μg in bone defects was observed that the formulation, promoted an immediate boost in soft tissue, making it difficult, however, direct contact between the formulation and bone tissue. Thus, we observed the formation of fibrous tissue and not the expected new bone formation. In parallel, regular topical application of gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 100 μg for the treatment of second-degree skin burns, experimentally induced, sped up the process of granulation, reepithelialization and wound contraction. / Camaratu ou feijão Camaratuba é uma leguminosa da região semi-árida do Nordeste do Brasil. Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4), foram estruturalmente caracterizadas e seus efeitos biológicos e farmacológicos continuam sob investigação, pois seu uso como um produto biofarmacêutico requer maior aprofundamento. O objetivo deste estudo foi propor e caracterizar uma formulação em gel irradiada de Cramoll-1,4, quanto à preservação das propriedades in vitro das lectinas, sob o efeito de radiação gama e sua atividade em processos de reparo tecidual in vivo. Inicialmente foi feita a extração e purificação da Cramoll-1,4, foi desenvolvida uma formulação em gel utilizando-se Carbopol como veículo, que foi irradiada com raios gama de Co60 em uma dose de 7,549 kGy h-1. Para avaliação da biodistribuição, a Cramoll-1,4 foi incubada com Tc-99 e para caracterizar a marcação foi feita cromatografia em camada fina. Em seguida o gel foi empregado em protocolos de reparação tecidual in vivo, mais especificamente tecido ósseo e epitelial. A formulação proposta na concentração de 300 μg manteve a atividade hemaglutinante in vitro, sugerindo um papel de ―proteção‖, dificultando a inativação da Cramoll-1,4 pela radiação. A biodistribuição do referido gel foi avaliada a partir da marcação com tecnécio, mostrou que esta lectina foi captada pelo intestino, metabolizada pelo fígado e excretada pelos rins e não ultrapassa a barreira hematoencefálica. Quanto à aplicação tópica do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 300 μg em defeitos ósseos foi observado que a formulação, promoveu um estímulo imediato no tecido conjuntivo mole, dificultando, entretanto, o contato direto entre a formulação e o tecido ósseo. Assim, observou-se a formação de tecido fibroso e não a esperada neoformação óssea. Em paralelo, a aplicação tópica regular do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 100 μg para o tratamento de queimaduras cutâneas de segundo grau experimentalmente induzidas, acelerou os processos de granulação, reepitelização e retração da ferida.