Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 543911 bytes, checksum: ca6b1ec9421af89b1154b235d7101304 (MD5) Previous issue date: 2008-10-03 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / This study was carried out to develop some protocols for cryopreservation of sugarcane germplasm in liquid nitrogen at -196°C. The exposure time of the shoot tips encapsulated in the laminar flow chamber for obtaining the moisture contents of 30, 20 and 10% was determined in an assay. The results were analyzed and interpreted, by using the free R software. The medium points of each time under evaluation were united by straight line segments, as drawing a tendency line for the moisture loss. Then, with the aid of horizontal lines referring to moisture contents of 30, 20 and 10%, the drying times were directly identified in the graph at 5.7; 7.45 and 10.1 hours, respectively. To induce the tolerance of the shoot tips to drying process, the preculture was accomplished in liquid culture medium enriched with 0.3; 0.5 and 0.75M sucrose for one and two days. The entirely randomized experimental design was used under a factorial scheme 3X2X4 (sucrose concentrations, preculture time and drying time) with three replicates. The survival index data were analyzed and interpreted, by using the free R software. The variance analysis was performed and the averages were compared by the Tukey test at 5% significance, when necessary. According to the results, the following conclusions were drawn: independently of the preculture time to be one or two days, the preculture in the culture medium enriched with 0.3M sucrose was ideal to induce the tolerance of the tissues to drying; the shoot tips were sensitive to the concentration of 0.75M sucrose in the preculture solution. The 12h culture of the shoot tips in the basic culture medium resulted into reactivation of their metabolism through accumulation of the starch grain, besides the recovery of the stress generated by its extraction. The intensity of the starch synthesis was increased, when the shoot tips were precultured in the liquid culture medium containing sucrose at concentrations 0.30; 0.50 and 0.75M. In the cryopreservation of the encapsulated shoot tips, the effect of the sucrose concentration, drying time and defrosting method were studied under a factorial 3X4X3 (three sucrose concentrations, four drying times and three defrosting methods). Independently of the combination adopted when the shoot tips were cryopreserved, a null survival index was obtained. The histological analyses revealed that both cells and cellular walls of the cryopreserved explants were severely damaged. / O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de protocolos para criopreservação, em nitrogênio líquido a -196°C, de germoplasma de cana-de-açúcar. O tempo de exposição dos ápices caulinares encapsulados a câmara de fluxo laminar para a obtenção dos teores de umidade de 30, 20 e 10% foi determinado através de um ensaio e os resultados obtidos foram analisados e interpretados utilizando o software livre R. Os pontos médios de cada tempo avaliado foram unidos por segmentos de reta traçando uma linha de tendência de perda de umidade. Posteriormente, com o auxílio de linhas horizontais referentes aos teores de umidade de 30, 20 e 10%, os tempos de secagem foram identificados diretamente no gráfico em 5,7; 7,45 e 10,1 horas, respectivamente. Para induzir a tolerância dos ápices caulinares à secagem foi realizado o pré-cultivo em meio de cultura líquido enriquecido com 0,3; 0,5 e 0,75 M de sacarose por um e dois dias. O experimento foi organizado em um esquema fatorial 3X2X4 (concentrações de sacarose, tempo de pré-cultivo e tempo de secagem) segundo o delineamento inteiramente casualizado com três repetições. Os dados do índice de sobrevivência obtidos foram analisados e interpretados utilizando o software livre R. Foi realizada a análise de variância e quando necessário as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância. Os resultados indicaram que o pré-cultivo em meio de cultura enriquecido com 0,3 M de sacarose, independentemente se por um ou dois dias, foi ideal para induzir a tolerância dos tecidos à secagem. Os ápices caulinares foram sensíveis à concentração de 0,75 M de sacarose na solução de pré- cultivo. O cultivo por 12 horas dos ápices caulinares em meio básico de cultura resultou além da recuperação do estresse gerado pela sua extração, a reativação do seu metabolismo através do acúmulo de grão de amido. A síntese de amido aumentou em intensidade quando os ápices foram pré- cultivados em meio de cultura líquido contendo sacarose nas concentrações de 0,30; 0,50 e 0,75 M. Na criopreservação dos ápices caulinares encapsulados, estudou-se o efeito de três fatores, concentração de sacarose, tempo de secagem e o método de descongelamento, em um fatorial 3X4X3. Independentemente da combinação adotada quando os ápices caulinares foram criopreservados o índice de sobrevivência obtido foi nulo. As análises histológicas revelaram que as células e a parede celular dos explantes criopreservados foram severamente danificadas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 263642 bytes, checksum: 195cdf514e6803579fcdd159348f0be0 (MD5) Previous issue date: 2008-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to verify if the propolis and ascorbic acid contain effect on plasmatic membrane integrity of goats spermatozoa as well as investigate the potential of these antioxidants on the use of goats spermatozoa cryopreservation extenders. Semen from five adults goats were used, totalizing 5 semen samples for each one. After semen collection, the evaluation consisted of physical and morphological exam, live and dead cells (supravital test) and hyposmotic swelling test. Afterwards, the fresh semen was diluted, homogenized, divided on 5 equal parts and centrifuged. The spermatozoa pellet was raised with respective treatment: T1 (BIOXCELL® - CONTROL); T2 (BIOXCELL® + 0,25% of propolis extract); T3 (BIOXCELL® + 0,5% of propolis extract); T4 (BIOXCELL® + 0,05% of ascorbic acid); e T5 (BIOXCELL® + 0,25% of ascorbic acid). After final dilutions, it was evaluated the sperm motility and vigor on each treatment, and posterior seal. The straws were cooled at 4 - 5 °C during 35 minutes in a plastic container containing methyl alcohol and 25 minutes out of container. The pre-freezing was done in liquid nitrogen vapour, during 14 minutes. Then, the straws were immersed in nitrogen. The thawing of the samples was made by immersion of the straws in a 37 °C water-bath for 30 minutes to evaluate the sperm motility and vigor, supravital test, hyposmotic swelling test and thermoresistence test. In fresh semen, the physical and morphological aspects, supravital test and hyposmotic swelling test not differ (P>0,05) between animals and between races. There was no correlation of appearance and whirlpool with other variables. There was mean and negative correlation (r = -0,46) between the volume and hyposmotic swelling test. The sperm motility showed average and positive correlation with sperm vigor (r = 0,52) and supravital test (r = 0,55). There was high and positive correlation (r = 0,73 and 0, 69) between major and minor defects sperm with defects totals. There was mean and negative correlation (r = -0,40) between major defects sperm and hyposmotic swelling test, not being seen with the minor defects. The average sperm motility of the diluted semen (pre-cooling) of all treatments, showed no difference between them (P>0,05), however, the averages of sperm vigor of diluted semen showed difference (P<0,05) among treatments, where the T1 and T3 were different from T4 and equals to T2 and T5. The general average of motility and vigor sperm on treatments immediately after thawing and after three hours of thermoresistence test differed among themselves (P<0,05), where the T4, T5 and T1 were similar and higher than T2 and T3. The general average values observed in supravital test and hyposmotic swelling test post-thawing differed (P<0,05) among treatments, in which the T4, T5 and T1 were similar and higher than T2 and T3. The values observed on supravital test showed high and positive correlation with sperm motility in all treatments. In T1, T4 and T5 had high and positive correlation (r = 0,63; r = 0,64; r = 0,71; respectively) between the values in supravital test and hyposmotic test. The values observed in the hyposmotic test and sperm motility showed high and positive correlation in T1 (r = 0,78) and T5 (r = 0,65) and correlation mean and positive in T4 (r = 0,44). Both at the time of thawing (0 hour) as the end of the thermoresistence test (3 hours), the supravital test and sperm motility showed no correlation with the motility sperm of treatments this study. But at the time of thawing, the average values observed in hyposmotic test of fresh semen showed average and positive correlation with sperm motility of T1 and T2, and high and positive correlation with the T5 motility sperm. Similarly, at 3 hours of thermoresistence test, there was average and positive correlation with sperm motility of T1, T4 and T5. It was concluded that: the ascorbic acid maintained structure integrity of the spermatozoa membrane during cryopreservation process as well as its viability after thermoresistence test, and may be an alternative in the composition of extenders for cryopreservation of semen goats; the propolis was not effective in maintaining the integrity and viability sperm after thawing, showing to be toxic to spermatozoa at concentrations of 0,25 and 0,5%; and the hyposmotic test in fresh semen was effective in predicting the semen freeze, as well as, its viability in the end of the thermoresistence test of three hours. / Os objetivos deste estudo foram verificar se a própolis e o ácido ascórbico têm efeito sobre a integridade da membrana plasmática dos espermatozóides de caprinos, bem como, investigar o potencial destes antioxidantes no uso de meios diluidores de criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco bodes adultos das raças Alpina (n = 2) e Saanen (n = 3). Para as coletas de sêmen, utilizou-se a vagina artificial, onde se obteve cinco ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se o exame físico do sêmen e morfológico dos espermatozóides, teste supravital e teste hiposmótico. Em seguida, o sêmen in natura foi diluído, homogeneizado, dividido em cinco alíquotas iguais e centrifugados. O sobrenadante foi desprezado e cada pellet de espermatozóides foi ressuspendido com diluente, de acordo com os tratamentos: T1 (BIOXCELL® - CONTROLE); T2 (BIOXCELL® + 0,25% de extrato liofilizado de própolis); T3 (BIOXCELL® + 0,5% de extrato liofilizado de própolis); T4 (BIOXCELL® + 0,05% de ácido ascórbico; e T5 (BIOXCELL® + 0,25% de ácido ascórbico). Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade e o vigor espermático de cada tratamento, e posterior envase. As palhetas foram resfriadas a 4 - 5 ºC, durante 35 minutos em refil de plástico contendo álcool metílico, e posteriormente, 25 minutos fora do mesmo. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido, durante 14 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento final do sêmen. As doses foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, e acondicionadas em tubos plásticos de 1,5 mL e homogeneizados para análise imediata de motilidade e vigor espermático, teste supravital, teste hiposmótico e teste de termo-resistência. No sêmen in natura, os aspectos físicos e morfológicos, teste supravital e teste hiposmótico não diferiram (P>0,05) entre os animais e entre raças. Não houve correlação do aspecto e do turbilhonamento com as demais variáveis. Houve correlação média e negativa (r= -0,46) entre o volume e o teste hiposmótico. A motilidade espermática apresentou correlação média e positiva com vigor (r = 0,52) e o teste supravital (r = 0,55). Houve correlação alta e positiva (r = 0,73 e 0, 69) entre defeitos espermáticos maiores e menores com os defeitos totais. Houve relação média e negativa (r = -0,40) entre os defeitos espermáticos maiores e o teste hiposmótico, não sendo observado com os defeitos menores. Não houve diferença (P>0,05) entre as médias da motilidade espermática do sêmen diluído (pré- resfriamento), em todos os tratamentos, porém, as médias do vigor espermático do sêmen diluído apresentaram diferença (P<0,05) entre os tratamentos, onde o T1 e T3 foram diferentes do T4 e iguais aos T2 e T5. As médias gerais da motilidade e do vigor espermático nos tratamentos logo após o descongelamento e após três horas de TTR diferiram entre si (P<0,05), onde T4, T5 e T1 foram similares e superiores aos T2 e T3. Os valores médios gerais observados no teste supravital e no teste hiposmótico pós- descongelamento diferiram (P<0,05) entre os tratamentos, em que T4, T5 e T1 foram similares e superiores ao T2 e ao T3. Os valores obtidos no teste supravital apresentaram correlação alta e positiva com a motilidade espermática, em todos os tratamentos. Nos T1, T4 e T5 houve correlação alta e positiva (r = 0,63; r = 0,64; r = 0,71; respectivamente) entre os valores registrados nos testes supravital e hiposmótico. Os valores observados no teste hiposmótico e a motilidade espermática apresentaram correlação alta e positiva nos T1 (r = 0,78) e T5 (r = 0,65) e correlação média e positiva no T4 (r = 0,44). Tanto no momento do descongelamento (0 hora) quanto ao final do TTR (3 horas), o teste supravital e a motilidade espermática do sêmen in natura não apresentaram correlação com as motilidades espermáticas dos tratamentos deste estudo. Porém, no momento do descongelamento, os valores médios observados no teste hiposmótico do sêmen in natura apresentaram correlação média e positiva com a motilidade espermática do T1 e T2, e correlação alta e positiva com a motilidade espermática do T5. Da mesma forma, às 3 horas de TTR, verificou-se correlação média e positiva com a motilidade espermática do T1, T4 e T5. Concluiu-se que: o ácido ascórbico manteve a integridade estrutural da membrana dos espermatozóides durante o processo de criopreservação, bem como sua viabilidade após o teste de termo-resistência, podendo ser uma alternativa na composição de diluentes para criopreservação de sêmen caprino; a própolis não se mostrou eficaz na manutenção da integridade e viabilidade espermática pós-descongelamento, mostrando ser tóxica aos espermatozóides nas concentrações de 0,25 e 0,5 %; o teste hiposmótico realizado no sêmen in natura se mostrou eficaz em predizer a congelabilidade da amostra de sêmen, bem como, sua viabiliadade ao final do teste de termo-resistência de três horas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 702747 bytes, checksum: 881b24ba4fe9f249940d1ad2d3923f73 (MD5) Previous issue date: 2008-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Although the first birth of pups with use of frozen semen has been reported almost 40 years ago, still today the conception rate with thawed canine semen is generally inferior to the observed in other species. Many factors influencing the semen quality through the cryopreservation process are known, including the centrifugation protocol, the extender composition, the association between the cryoprotectors, the cooling rate, the time of equilibrium and the freezing rate, as well as the association between thawing and freezing rates. Individual variations in the semen freezability are found in many species, including the dog. Some authors attribute these variations to the differences in the spermatic membrane lipid composition and spermatozoon sensitivity of the glycerol toxic effects. In present work 36 semen samples where collected, from 12 dog of the: Beagle, Schnauzer, Doberman and Boxer breeds, by digital manipulation. After the collection the semen was centrifuged, reextended in Tris-Citrato extender added with 1, 2, 4 and 6% of glycerol and packaged in 0,25mL straws. After that the semen were cooled for 1 hour until 4oC, then half of the straws of each treatment was immediately freezed and the remain was kept by more 1 hour in equilibrium at 4oC before the freezing. Two freezing rates had been tested in termical box contend liquid nitrogen through the positioning of the straws 5 and 10 cm above the surface of nitrogen per 10 minutes. The thawing was carried through immersion in water 38oC per 1 minute. The semen was evaluated at the moment of the collection, after the centrifugation and immediately after thawing for spermatozoa movement through motility, progressive status, and sperm index and for plasma membrane integrity and viability through hiposmotic swelling tests and live/dead stain. The sperm longevity was evaluated through the thermorresistece test. In the present work the individual averages of sperm motility and progressive status in the fresh semen had varied from 3.5 to 5.0 and 63 to 90% respectively, while the breed averages had varied of 4.4 the 4.9 and 80 to 90% respectively. The semen centrifugation resulted in significant fall of 13% in progressive status and 14% in the motility and spermatic index. The analysis of the parameters of plasma membrane viability and integrity in the semen after centrifugation shows significant reduction of 38% and 14% in the reactive cells to the hiposmotic swelling test and to the supravital coloration respectively. The results of the hiposmotic swelling test, live/dead stain and thermorresistence in the thawed semen demonstrate better performance when protocols of freezing were used with equilibrium time. Influence of the freezing rate, in isolated form, was not observed on the seminal parameters evaluated and significant variations had been only observed when equilibrium time and glycerol concentration were associated. Isolate the increase in the percentage of glycerol from 1 to 6% in the extender composition, promotes prompt improvement to plasma membrane integrity and to spermatic index in the thawed samples. However, when associates the observed results of biggest levels of glycerol to the presence of equilibrium time and to the slow rate of freezing, significant increases are observed in all the studied parameters. Individual variation was observed in spermatic index of thawed semen, but not in the fresh semen. Already the parameters of plasma membrane integrity and viability had presented individual variation in both. When the parameter breeds is evaluated, any significant alterations were observed on the evaluated parameters in fresh semen, however in the thawed semen, significant variations in the plasma membrane integrity and viability had been observed. The dogs of the Schnauzer breed had presented significantly shorter sperm longevity after the thawing. The Doberman and Boxer breeds had presented the best results of freezability in in vitro evaluation. With the exception of the test of live/dead stain, the studied parameters had presented significant correlations between the data collected in fresh semen with those observed in thawed semen. / O presente trabalho busca descrever a análise in vitro do sêmen fresco e as diferenças individuais e raciais na congelabilidade do sêmen de cães das raças Beagle, Schnauzer, Doberman e Boxer. Foi também avaliado o efeito da centrifugação, do tempo de equilíbrio, da taxa de congelamento e de diferentes concentrações de glicerol, sobre a qualidade o sêmen canino criopreservado em meio diluidor a base de Tris-Citrato. Foram ainda analisadas as correlação dos parâmetros de avaliação in vitro do sêmen antes e depois o congelamento. Para tanto, foram utilizados 12 cães das raças Beagle (n=3), Schnauzer (n=3), Doberman (n=3) e Boxer (n=3), sendo 3 ejaculados coletados por indivíduo, totalizando 36 ejaculados. Após a coleta o sêmen foi centrifugado, ressuspendido em meio Tris-Citrato contendo 1, 2, 4 e 6% de glicerol e evasado em palhetas de 0,25mL. Após o envase o sêmen foi resfriado por 1 hora a 40C e em seguida metade das palhetas de cada tratamento foi encaminhada para o congelamento e o restante foi mantido por mais 1 hora em equilíbrio a 4oC, antes do congelamento. Duas taxas de congelamento foram testadas em caixa de isopor contendo nitrogênio líquido através do posicionamento das palhetas a 5 e 10 cm da superfície do nitrogênio por 10 minutos. O descongelamento foi realizado através de imersão em água a 38oC por 1 minuto. O sêmen foi avaliado no momento da coleta, após a centrifugação e ao descongelamento quanto à movimentação dos espermatozóides através de vigor, motilidade e índice espermático e quanto à integridade e viabilidade da membrana plasmática pelos testes hiposmótico e de coloração supravital. A longevidade espermática foi estimada no sêmen descongelado através do teste de termorresistência (TTR). No presente trabalho as médias individuais de vigor e motilidade espermáticos no sêmen fresco variaram de 3,5 a 5,0 e de 63 a 90% respectivamente enquanto as médias raciais variaram de 4,4 a 4,9 e de 80 a 90% respectivamente. A centrifugação do sêmen resultou em queda de cerca de 13% no vigor espermático, 14% na motilidade e no índice espermático. A análise dos parâmetros de viabilidade e integridade de membrana plasmática no sêmen após centrifugação mostra diminuição de 38% e 14% nas células reativas ao teste hiposmótico e de coloração supravital respectivamente. Os resultados dos testes hiposmótico, de coloração supravital e de termorresistência no sêmen descongelado demonstram de maneira geral melhor desempenho dos protocolos de congelamento com a presença do tempo de equilíbrio. Não foi observada influência da taxa de congelamento de forma isolada sobre os parâmetros seminais avaliados. Variações significativas só foram observadas quando se associou à variação da taxa de congelamento, variações no tempo de equilíbrio e concentração de glicerol. Isoladamente, o aumento no percentual de glicerol de 1 para 6% na composição do meio diluidor, promove melhoria pontual na integridade da membrana citoplasmática e no índice espermático ao descongelamento. Porém, quando se associa os resultados observados dos maiores níveis de glicerol à presença do tempo de equilíbrio e à taxa lenta de congelamento, aumentos significativos são observados em todos os parâmetros estudados. Variação individual foi observada no índice espermático no sêmen descongelado, mas não no sêmen fresco. Já os parâmetros de integridade e viabilidade da membrana plasmática apresentaram variação individual em ambos. Quando se avalia a variável raça não se observa alterações significativas quanto aos parâmetros avaliados no sêmen fresco, porém no sêmen descongelado, observaram-se variações significativas na integridade e viabilidade da membrana plasmática. Os cães da raça Schnauzer apresentaram significativamente menor longevidade espermática após o descongelamento. As raças Doberman e Boxer apresentaram os melhores resultados de congelabilidade na avaliação in vitro. A exceção do teste de coloração supravital, os parâmetros estudados apresentaram correlações significativas entre os dados coletados no sêmen fresco com aqueles observados no sêmen descongelado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 997073 bytes, checksum: 2d3fccca81d549c09ca60efb028b795b (MD5) Previous issue date: 2008-09-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of testicular morphology and the spermatogenic process in wild animals is fundamentally important for the knowledge about the physiologic patterns, by which the assisted reproduction protocols are established. The objectives of this study were to describe morphometry data of testis and seminiferous tubule, quantify and describe the arrangement of the elements in intertubular tissue, and yet to quantify the relationship of population seminiferous epithelium, and index of Sertoli cells of adults oncilla (Leopardus tigrinus). So, testis fragments taken from five adult oncilla proceeding from Cetas-UFV and a conservation breeder center of this species located in Belo Horizonte city. In L. tigrinus studied the average body weight was 2.59 kg, 0.06% of which are allocated in testicular mass, and 0.04% was specifically in seminiferous tubules, that represented 81.29% of parenchyma testis. The average diameter of the seminiferous tubules was 228.29 &#956;m and the average thickness of seminiferous epithelium was 78.86 &#956;m. The oncilla show an average of 16.99 meters of seminiferous tubules per gram of testis. In the intertubular compartment of this species, the volume of Leydig cells and its nuclear average diameter respectively are 765.61&#956;m3 e 7&#956;m. The Leydig cell occupied 0.005% body weight and their average number per gram of testicular were much higher than that observed in most wild carnivorous and domestic animals have had already studied. In seminiferous epithelium of these animals in each cross section of seminiferous tubules in stage I, there was an average of 1.72 spermatogonia type A, 24.04 primary spermatocytes in pre-leptotene, 23.88 primary spermatocytes in pachytene, round spermatids 88.86, 6.73 and Sertoli cells. As the number of rounded spermatids were 3.52, computed to each primary spermatocytes in pachytene, an average loss of 12% were observed in meiotic process. The general yield of spermatogenic process in this species was 51.93 cells. The index of Sertoli cell in oncilla was 21.15 cells of germinative line, of which 13.48 are rounded spermatids. / O estudo da morfologia testicular e do processo espermatogênico em animais silvestres é de fundamental importância para o conhecimento de padrões fisiológicos, pelos quais pode-se estabelecer protocolos em reprodução assistida. Os objetivos deste estudo foram descrever dados de morfometria testicular e do túbulo seminífero, quantificar e caracterizar o arranjo dos elementos do tecido intertubular e ainda, quantificar as relações populacionais do epitélio seminífero e índice de células de Sertoli em gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) adultos. Para tal, foram utilizados cinco animais machos adultos provenientes do Centro de Triagem de Animais Silvestres da UFV e de um criatório conservacionista desta espécie situado na cidade de Belo Horizonte, os quais foram submetidos a biópsias testiculares a fim de se obter material biológico para avaliação histológica. Nos L. tigrinus estudados o peso corporal médio foi de 2,59 Kg, dos quais 0,060% estão alocados em massa testicular, e 0,04% especificamente em túbulos seminíferos, o que representa 81,29% do parênquima testicular. O diâmetro médio dos túbulos seminíferos foi de 228,29&#956;m e a espessura média do epitélio seminífero foi de 78,86&#956;m. Os gatos-do-mato-pequenos apresentam em média 16,99 metros de túbulo seminífero por grama de testículo. No compartimento intertubular desta espécie, o volume das células de Leydig e o seu diâmetro nuclear médio forma respectivamente 765,61&#956;m3 e 7&#956;m. As células de Leydig ocuparam em média 0,005% do peso corporal e seu número médio por grama de testículo apresentou-se bastante superior ao observado na maioria dos carnívoros silvestres e ainda dos animais domésticos já estudados. No epitélio seminífero destes animais, em cada secção transversal do túbulo seminífero de gato-do-mato-pequeno no estádio I, observou-se em média 1,72 espermatogônias do tipo A, 24,04 espermatócitos primários em préleptóteno, 23,88 espermatócitos primários em paquíteno, 88,86 espermátides arredondadas, e 6,73 células de Sertoli. Quanto ao número espermátides arredondadas 3,52 foram computadas em relação ao número de espermatócitos primários em paquíteno, gerando perda média de 12%, e o rendimento geral da espermatogênese desta espécie foi de 51,93 células. O índice de célula de Sertoli em gato-do-mato-pequeno foi de é de 21,15 células da linhagem germinativa, das quais 13,48 são espermátides arredondadas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 290398 bytes, checksum: fcac0b1c33f378861ed137c93a04628c (MD5) Previous issue date: 2004-03-05 / Universidade Federal do Espírito Santo / The objective of this study was evaluate the relationship between complementary tests (hypoosmotic swelling test - HOST, thermo resistance test - TRT, and acrossome reaction test AR test) with the conventional evaluation tests (physical and morphologic aspects) of bovine frozen/thawed semen, the values were correlated with the conception rate. Twenty-three frozen specimens from 13 Nelore bulls were used. The semen was collected and diluted in standard egg yolk, packing in 0,25mL straws with concentration of 25 x 106 viable spermatozoa per by pallet. The physical evaluation of the semen was constituted of post-thawed spermatic motility and vigour. The spermatic defects were classified in major, minor and total defects. For HOST, 20 mL of frozen/thawed semen, was added to 1,0 mL of a fructose solution in the concentration of 100mOsm/L previously heated to 37ºC, later on incubation for one hour. TRT consisted of submitting the post-thawed semen specimens to the incubation in water bath at 37ºC for 3 hours (T0: 0 hour; T1: 60 minute; T2: 120 minute; T3: 180 minute), being evaluated spermatic motility and vigour at each time (T). For the AR test the technique of naphthol yellow and erithrosin B was used to identify the percentage of spermatozoa with acrossome reacted after the frozen/thawed. To check the correlations between HOST, TRT and AR test with spermatic motility and pregnancy rate comparisons inside each bull and among different bulls were done by Qui-square at a significance rate of 5%. Analysis of regression logistics was made to evaluating the fixed effects as: effect of the bull, frozen semen specimens, retreat, reproductive status and inseminators. The average values for the spermatic motility of frozen/thawed semen evaluated by TRT were of 53.48% (T0), 43.69% (T1), 35.88% (T2), and 33.04% (T3). The percentage of reactive cells found in HOST was 37.89%. Positive correlation of average intensity were found for spermatic motility postthawed and the HOST (0,21). Weak and positive correlation of the T3 motility with HOST was high (0.64), demonstrating that the spermatozoa maintained the functionality of its plasmatic membrane after the cryopreservation, stayed viable for more time. The percentage of cells that presented acrossome reaction post-thawed was 9.85%. Negative correlations of average and high intensity (-0.25 and 0.46, respectively) were found for acrossome reaction test and the spermatic motility post-thawed and after 3 hours of incubation. No correlation (p>0,05) of TRT, HOST, AR test and post-thawed motility with the conception rate was found. There was any parameter which considered separately, could evaluate the fertilizer capacity of the semen, since the spermatic viability is multifatorial question associated with the characteristics of structural and functional integrity of their components. No significant correlation (p>0,05) of TRT, HOST, AR test and post-thawed motility with the pregnancy rate was found. The characteristics analysed may not be considered alone to evaluate the fertilizing capacity of the frozen/thawed semen. / O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre os testes complementares (teste hiposmótico - teste HO, teste de termo-resistência lento - TTR e teste de reação acrossômica - RA) com os testes de avaliações convencionais (aspectos físicos e morfológicos) de sêmen bovino congelado/descongelado, relacionando os valores com os índices de prenhez. Utilizou-se 23 partidas de sêmen congelado/descongelado de 13 touros adultos da raça Nelore. O sêmen foi coletado e diluído em meio tris-gema de ovo, envazado em palhetas finas (0,25 mL) com concentração de 25 x 106 espermatozóides total por dose. A avaliação física do sêmen constituiu-se de motilidade espermática progressiva retilínea e vigor espermático pósdescongelamento. Os defeitos espermáticos foram classificados em maiores, menores e totais. Para o teste HO, 20mL de sêmen congelado/descongelado, foi adicionado a 1,0 mL de uma solução de frutose na concentração de 100mOsm/L previamente aquecida à 37ºC, e posteriormente incubado por uma hora. O TTR consistiu em submeter as partidas de sêmen pós-descongelamento à incubação em banho Maria à 37ºC durante 3 horas (T0: 0 hora; T1: 60 minutos; T2: 120 minutos; T3: 180 minutos), avaliando-se a motilidade e o vigor espermático. Para realização do teste de reação acrossômica foi utilizada a técnica do Naftol amarelo/eritrosina B para identificar a porcentagem de espermatozóides com acrossoma reagido após o processo de congelamento/descongelamento. Realizou-se a correlação simples de Pearson entre os testes HO, TTR e RA com a motilidade espermática pós-descongelamento e a taxa de prenhez. A taxa de prenhez entre partidas dentro e entre touros foi avaliada pelo teste de Qui-quadrado a 5% de probabilidade de erro. Análise de regressão logística foi efetuada no intuito de avaliar os efeitos fixos tais como: efeito do touro, partida, retiro, status reprodutivo e inseminadores. Os valores médios da motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento avaliados pelo TTR foram de 53,48% (T0), 43,69% (T1), 35,88% (T2) e 33,04% (T3). A porcentagem de células reativas ao teste HO encontrada foi de 37,89%. Correlação positiva e de média intensidade foi encontrada para a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e o teste HO (0,21). Entretanto, a correlação da motilidade no T3 com o teste HO foi alta (0,64), demonstrando que os espermatozóides que mantiveram a integridade de sua membrana plasmática após a criopreservação, permaneceram viáveis por mais tempo. A porcentagem de células que apresentaram acrossoma reagido pósdescongelamento foi de 9,85%. Correlações negativas de média e alta intensidade (-0,25 e -0,46, respectivamente) foram encontradas para o teste de reação acrossômica com a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e após 3 horas de incubação. Não houve correlação (p>0,05) do TTR, teste HO, RA e motilidade pós-descongelamento com a taxa de gestação. Não houve neste estudo, um parâmetro que considerado isoladamente, avaliasse a capacidade fertilizante do sêmen, visto que a viabilidade espermática é uma questão multifatorial associada a características de integridade estrutural e funcional de seus componentes. Portanto, as características estudadas, não podem ser consideradas isoladamente para avaliar com acurácia, a capacidade fertilizante do sêmen congelado/descongelado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 410014 bytes, checksum: 670794b294aeae950000e5e2848a5f4f (MD5) Previous issue date: 2004-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the vitrification of immature bovine oocytes, using differents equilibrium times and differents concentrations of ethylene glicol (EG) during equilibrium period, with a vitrification solution containing EG associated with two disaccharides. It was evaluated the influence of each treatment on the oocytes maturation rates, after thawing. The experiment was conducted in the LRA-DVT-UFV. It was tested three equilibrium solutions (ES), containing 3, 20 or 40% of EG, three equilibrium times (ET), 0,5, 5 and 15 minutes, and two vitrification solutions (VS), containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose. The three ES, the three ET and the two VS were combined among each other, completing 18 treatments. The controlled treatment had fresh oocytes non vitrified maturated in vitro. It was used 2.103 immature oocytes, distributed in 19 treatments. The selected oocytes were kept in the ES (basemedium with 3, 20 or 40% of EG) for a determined ET (0,5, 5 or 15 minutes). After the end of the ET, the oocytes were transfered to the VS (base-medium with 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose), for one minute. During this time, the oocytes were loaded in 0,25 mL straw and dipped directly in liquid nitrogen. The oocytes were thawed by exposing the straw for five seconds to air, followed by immersion in water bath at 37 °C for 30 to 45 seconds, and were gradually rehydrated in trehalose solutions (for treatments 1 to 9) or sucrose solutions (for treatments 10 to 18). After rehydratation, the recovery rate and morfology of the oocytes were evaluated. The oocytes were cultured for 22 to 24 hours. The recovery rate was not affected by ES, ET and VS, but the morfology of the oocytes was. The ES containing 40% of EG showed the highest rate of normal oocytes (NORM) (76,94%). The ET of 15 minutes showed the highest rate of NORM (80,58%) and lowest rate of oocytes with citoplasmic retraction (CITRET) (16,02%). Vitrifications solutions containing trehalose also showed the highest rate of NORM (76,80%) and the lowest rate of CITRET (19,93%). The combinations ET for 15 minutes and ES containing 3, 20 ou 40% of EG showed the lowest rates of CITRET (17,40; 20,78 and 9,88%, respectively). The combination (treatment 14) VS with sucrose, ET for five minutes, ES with 20% of EG showed the highest rate of MII (metaphase II) (44,55%). The lowest rate of MII in the treatments that used sucrose, were found in the combinations ES with 40% of EG and ET for 15 and five minutes (0,95 and 0,00%, respectively). The highest rate of MII in the treatments that used trehalose was 5,32%. The highest rates of CC (cromatin condensation) were found in the treatments that used trehalose. It was observed that the rate of MII of treatment 14 was significally different from the controlled treatment (44,55% and 74,95%, respectively). The results point out that morfologic evaluation of immature oocytes after thawing and rehydratation, based on citoplasmic retraction, do not reflect the potencial of the oocytes fo in vitro maturation. The use of trehalose in the VS influenced negatively the oocyte maturation. The use of sucrose in the VS influenced positively the oocyte maturation. Elevated concentrations of EG (40%) associated with a long ET (five and 15 minutes) did not favor the oocyte development. The protocol using 20% of EG in the ES, with ET of five minutes and the VS containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose, showed good rates of in vitro maturation, for immature bovine oocyte. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos, utilizando diferentes tempos e concentrações de etilenoglicol (EG) no equilíbrio, com a solução de vitrificação contendo o EG associado com dois dissacarídeos. Avaliou-se a influência de cada tratamento sobre a taxa de maturação dos ovócitos, após o descongelamento. O experimento foi realizado no LRA-DVT-UFV. Foram testados três soluções de equilíbrio (SE), contendo 3, 20 ou 40% de EG, três tempos de equilíbrio (TE), 0,5, 5 e 15 minutos, e duas soluções de vitrificação (SV), contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose. As três SE, os três TE e as duas SV foram combinadas entre si, perfazendo um total de 18 tratamentos. O tratamento controle continha ovócitos frescos não congelados, maturados in vitro. Foram utilizados 2.103 ovócitos imaturos, distribuídos em 19 tratamentos. Os ovócitos selecionados foram mantidos imersos na SE (meiobase com 3, 20 ou 40% de EG) por um determinado TE (0,5, 5 ou 15 minutos). Após o término do TE os ovócitos foram tranferidos para a SV (meio-base com 40% de EG e 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG e 1,0 mol L-1 de sacarose), por um minuto. Durante este tempo, os ovócitos foram envasados em palheta de 0,25 mL e colocados diretamente no nitrogênio líquido. Os ovócitos foram descongelados por meio da exposição das palhetas por cinco segundos ao ar, seguida da imersão em Banho Maria a 37 °C por 30 a 45 segundos, e reidratados gradativamente em soluções de trealose (para os tratamentos 1 a 9) ou sacarose (para os tratamentos 10 a 18). Após a reidratação, foi avaliado a taxa de recuperação e a morfologia dos ovócitos.Os ovócitos foram cultivados durante 22 a 24 horas. Observou-se que a SE, TE e a SV não influenciaram a taxa de recuperação, mas influenciaram a morfologia dos ovócitos. A SE que continha 40% EG proporcionou maior taxa de ovócitos normais (OVNORM) (76,94%). O TE de 15 minutos proporcionou maior taxa de OVNORM (80,58%) e menor taxa de ovócitos com retração citoplasmática (OVRET) (16,02%). As soluções de vitrficação contendo a trealose também proporcionaram maior OVNORM (76,80%) e menor OVRET (19,93%). As combinações TE por 15 minutos e SE com 3, 20 ou 40% de EG proporcionaram as menores OVRET (17,40; 20,78 e 9,88%, respectivamente). A combinação (tratamento 14) SV com sacarose, TE por cinco minutos, SE com 20% de EG proporcionou a maior taxa de MII (metáfase II) (44,55%). As piores taxas de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a sacarose, foram encontradas nas combinações de SE com 40% de EG e TE por 15 e 5 minutos (0,95 e 0,00%, respectivamente). A maior taxa de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a trealose foi de 5,32%. As maiores taxas de CC (condensação da cromatina) foram observadas nos tratamentos que envolveram a trealose. Observou-se que a taxa de MII do tratamento 14 foi significativamente diferente do tratamento controle (44,55% e 74,95%, respectivamente). Conclui-se que a avaliação morfológica de ovócitos imaturos após o descongelamento e reidratação, com base na retração citoplasmática, não reflete o verdadeiro potencial de maturação in vitro dos ovócitos. O uso da trealose na SV influenciou negativamente a maturação ovocitária. O uso da sacarose na SV influenciou positivamente a maturação ovocitária. Concentrações elevadas de EG (40%) associado a um longo TE (cinco e 15 minutos) não favoreceram o desenvolvimento ovocitário. O protocolo utilizando 20% de EG na SE, com TE de cinco minutos e com a SV contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose, proporcionou índices razoáveis de maturação in vitro, para ovócitos imaturos de bovinos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 281028 bytes, checksum: 78874dbf43dd25b05a14372123254675 (MD5) Previous issue date: 2006-06-09 / The objective of this work was to evaluate the effect of permeable and unpermeable protocols in the same dilution media and to compare two unfrozen canine semen protocols. Three adults males from Labrador Retrievier breed, were submitted to weekly collection of semen for five weeks, in a total of 15 samples in each experimental design. The in vitro testes applied to the semen samples were evaluation of: the progressive motility, the spermatic vigor, the integrity of plasma and acrosome membrane and the sperm longevity. The base mean diluent utilized for the crioprotectors associations was tris-citrate: (G1) (modified tris-citrate = 3% dimetil-formamide + 3% glycerol); (G2) (modified tris-citrate = 3% dimetilformamide + threalose) and (G3) (tris-citrate = 4% glycerol). For the unfrozen semen, was used a fast unfrozen protocol (75 ºC/ 7 ) and the slow unfrozen protocol (37 ºC/ 1 ). A difference was detected (P<0.01) among the tested associations, and the G1 and G3 associations were superior to the G2 one. But, evaluating each protector association separately, there was no difference (P>0.01) when utilizing the fast and slow unfrozen protocols. These results showed that the glycerol cryopreserved sperm cell showed better results as compared to the others associations used in preserving the canine sperm cells. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da associação de crioprotetores permeáveis e impermeáveis em um mesmo meio diluidor e comparar dois protocolos de descongelamento de sêmen canino. Foram utilizados três machos adultos da raça Labrador do Retrievier, os quais foram submetidos a uma coleta de sêmen semanal durante o período de cinco semanas, totalizando quinze amostras em cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram a avaliação da motilidade progressiva, o vigor espermático, a avaliação de integridade da membrana plasmática e do acrossoma e avaliação da longevidade espermática. O meio diluente base utilizado para as associações de crioprotetores foi o Tris-citrato: (G1) (Tris-citrato modificado/ = 3% Dimetil-formamida + 3% Glicerol); (G2) (Tris-citrato modificado/ = 3% Dimetil-formamida + 3% Trealose) e (G3) (Tris-citrato/ = 4% Glicerol). Quanto ao método de descongelamento do sêmen, foi avaliado um protocolo de descongelamento rápido (75ºC/ 7 e 37ºC/ 1 minuto) e um protocolo de descongelamento lento (37ºC/ 1 minuto). Foi verificada diferença (P<0,01) entre as associações crioprotetoras testadas, de forma que foi apresentada superioridade aos grupos G1 e G3, quando comparado aos resultados inferiores demonstrados pelo G2. Porém, avaliando separadamente cada associação crioprotetora, não houve diferença (P>0,01) ao utilizar distintos protocolos de descongelamento, sendo um rápido e outro lento. Esses resultados indicam que a célula espermática criopreservada pela associação glicerol apresentou os melhores resultados, caracterizando maior eficácia na preservação dos espermatozóides da espécie canina comparado às demais associações testadas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 273286 bytes, checksum: 9542fd937bde4847604c5b52aa572841 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The maintenance of naturalized swine breeds is very important for the Brazilianpork production industry, due to the potential source of new genetic variants. The Piau breed is considered one of the best and the most important Brazilian domestic naturalized swine breeds. Thus, research towards developing protocols for freezing semen is essential in order to create germplasm banks and protect the endangered swine breeds. Protocols for boar semen cryopreservation require the centrifugation of semen in order to separate sperm cells from the seminal plasma, nevertheless it has not been main focus on many studies. The aim on this study was to evaluate the effect of centrifugation and freezing curve in cryopreservation protocol on after thawing sperm viability of Piau swine breed (Sus scrofa), through assessment in vitro tests. Six ejaculates from five Piau boars were used, with ages ranging from 1.5 to 5.0 years, approved by andrologic examination, 30 samples in total. The semen collections were performed using the method of stimulation with a gloved hand with the aid of a dummy or a sow in natural estrus. Two centrifugations (800 G for ten minutes and 2400 G for three minutes) and two freezing curves (with conventional nitrogen vapor- freezing 1 and controlled by a programmed freezing machine- freezing 2) were tested. So the treatments were divided into M3- centrifugation at 2400 G for 3 minutes and freezing 2; M10- centrifugation at 800 G for 10 minutes and freezing 2; R3-centrifugation at 2400 G for 3 minutes and freezing 1; R10- centrifugation 800 for 10 minutes and freezing 1. After thawing, the averages recorded for total sperm motility and vigor of semen were 44.0 ± 10.3 and 3.1 ± 0.4; 44.3 ± 7.7 and 3.0 ± 0.3; 39.2 ± 10.2 and 2.9 ± 0.4; 38.0 ± 9.2 and 2.9 ± 0.4 respectively for treatments M3, M10, R3 and R10, with no difference between the groups (p> 0.05). The mean values in the different treatments did not differ regarding supravital test (39.9 ± 7.9; 40.1 ± 8.1; 37.3 ± 7.0; 36.5 ± 6.8, respectively to M3, M10, R3 and R10), hypoosmotic, the number of sperm bound perivitelline membrane of chicken egg yolk and morphology (p> 0.05). No interaction between freezing curve and centrifugation force was detected, hence the further individual analysis. In the present study it was observed that both the curve and the freezing spin regime influence on after thawing sperm quality, and shorter centrifugation periods and freezing rates decrease with temperature controlled by machine are the most suitable to decrease sperm injuries. / A manutenção das chamadas raças naturalizadas de suínos é muito importante, pois constituem fontes potenciais de novas variantes genéticas de extrema importância para a suinocultura nacional. A raça Piau é considerada uma das melhores e mais importantes raças naturalizadas brasileiras. Desta forma, a pesquisa em desenvolvimento de protocolos de congelamento de sêmen é imprescindível para formação de bancos de germoplasma e proteção de raças suínas em risco de extinção. Protocolos de criopreservação de sêmen suíno necessitam de centrifugação para separar os espermatozóides do plasma seminal, mas essa não tem sido muito enfocada nos estudos. O objetivo no presente estudo foi avaliar o efeito do tempo de centrifugação e da curva de congelamento em protocolo de criopreservação sobre a viabilidade espermática pós-descongelamento de suínos da raça Piau (Sus scrofa), por meio de testes de avaliação in vitro. Foram utilizados seis ejaculados de cinco varrões da raça Piau, com idades variando de 1,5 a 5,0 anos, aprovados por meio de exame andrológico, totalizando 30 amostras. As coletas de sêmen foram realizadas utilizando o método da estimulação com a mão enluvada com auxílio de um manequim ou uma fêmea em estro natural. Foram testadas duas centrifugações (800 G por dez minutos e 2400 G por três minutos) e duas curvas de congelamento (convencional com vapor de nitrogênio - congelamento 1 e controlada por uma máquina de congelamento programada- congelamento 2). Dessa forma os tratamentos foram divididos em M3-Centrifugação à 2400 G por 3 minutos e congelamento 2; M10- Centrifugação à 800 G por 10 minutos e congelamento 2; R3-Centrifugação à 2400 G por 3 minutos e congelamento 1; R10-Centrifugação à 800 G por 10 minutos e congelamento 1. Após o descongelamento, as médias registradas para motilidade espermática total e vigor do sêmen foram 44,0±10,3 e 3,1±0,4; 44,3±7,7 e 3,0±0,3; 39,2±10,2 e 2,9±0,4; 38,0±9,2 e 2,9±0,4 respectivamente para os tratamentos M3, M10, R3 e R10, não havendo diferença entre os mesmos (p>0,05). Os valores médios nos diferentes tratamentos não apresentaram diferença em relação aos testes supravital (39,9±7,9; 40,1±8,1; 37,3±7,0; 36,5±6,8; respectivamente para M3, M10, R3e R10), hiposmótico, número de espermatozóides ligados a membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha e morfologia espermática (p>0,05). Não houve interação entre curva de congelamento e centrifugação, sendo então analisadas de forma independente. No presente estudo foi observado que tanto a curva de congelamento quanto o regime de centrifugação influenciam na qualidade espermática pós-descongelamento, sendo que centrifugações com tempos mais curtos e curvas de congelamento com queda de temperatura controlada por máquina são as mais indicadas para mininizar as injúrias espermáticas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1148814 bytes, checksum: fed3d8d370f810a216a50acab2db6ae6 (MD5) Previous issue date: 2013-04-30 / The experiment was conducted at the Animal Reproduction Section of Veterinary Department, UFV, Viçosa, MG. The aim of the study was develop a technique of cryopreservation in order to improve the viability of goat semen after thawing. Were used four treatments: T1, cooling time of 1 h; T2, cooling time of 2 h; T3, cooling time of 4 h; and T4, with cooling time of 6 h before freezing. The semen was collected from four adult goats with three years old, totaling five collections using as dummy an adult male and the artificial vagina method, with the collections being conducted during the natural breeding season (April and May 2012). Were evaluated physical characteristics of semen immediately after collection and after thawing. After thawing, were also performed four complementary tests: heat resistance (TTR), hyposmotic (HOST), membrane integrity (INT), and morphological. The average values obtained for the fresh semen as the volume (mL), motility (%), sperm vigor (0-5) and sperm concentration (x109 total) were within the standards set by the Brazilian College of Animal Reproduction (1998), 1,5; 85%, 3,78; 3,3 billion / ml, respectively. The postthaw sperm motility and sperm vigor in the T2 showed mot. (38.0 ± 3.3) and vigor (2.2 ± 0.1), T3 mot. (52.3 ± 4.7) vigor (2.4 ± 0.1) and T4 mot. (47.0 ± 5.0) and vigor (2.4 ± 0.1), also proved within the values recommended by CBRA (1998). It was observed that the semen had resistance until the time 180 minutes in all treatments throughout the TTR. However, semen samples in treatments 3 and 4 were the ones that obtained better results. Regression analysis was performed to strengthen the results of the TTR time zero, where a greater curve was observed on time 265 minutes cooling, in other words, around 4 h and 25 minutes. The complementary tests (HOST, morphological and INT) performed in this study with different cooling times showed differences (P <0.05) between treatments only in INT test (29,7±3,3; 39,8±4,6; 50,0±5,1 e 56,5±4,1). Positive correlation was observed between motility and sperm vigor, and between motility and test INT. It is concluded that the cooling time of goat semen in times of 4 and 6 h has promoted better sperm cell viability after thawing of semen, increasing longevity of the spermatozoa. / O experimento foi realizado no Setor de Reprodução Animal do Departamento de Veterinária da UFV, Viçosa-MG. O objetivo do estudo foi desenvolver uma técnica de criopreservação visando melhorar a viabilidade do sêmen de caprino após descongelamento. Foram utilizados 4 tratamentos: T1, tempo de resfriamento de 1 h; T2, tempo de resfriamento de 2 h; T3, tempo de resfriamento de 4 h; e T4, com tempo de resfriamento de 6 h antes do congelamento. O sêmen foi coletado de quatro caprinos adultos com três anos idade, realizando-se cinco coletas/animal, utilizando um macho adulto como manequim e metodo de vagina artificial, com as coletas sendo realizadas durante a estação de monta natural (abril e maio de 2012. Foram avaliadas as características físicas do sêmen imediatamente após a coleta e após o descongelamento. Após o descongelamento, foram realizados também quatro testes complementares: termorresistência (TTR), hiposmótico (HOST), de integridade de membrana (INT), e morfológico. Os valores médios obtidos para o sêmen fresco quanto a volume (mL), motilidade espermática progressiva (%), vigor espermático (0-5) e concentração espermática (x109 totais), se encontraram dentro dos padrões preconizados pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (1998), respectivamente de 1,5; 85%, 3,78; 3,3 bilhões/mL. A motilidade espermática pós-descongelamento e o vigor espermático nos tratamentos T2 mot. (38,0±3,3) e vigor (2,2±0,1) , T3 mot. (52,3±4,7) vigor (2,4±0,1) e T4 mot. (47,0±5,0) e vigor (2,4±0,1), também se mostraram nos padrões recomendados pelo CBRA (1998). Foi observado que o sêmen teve resistência até o tempo de 180 minutos em todos os tratamentos ao longo do TTR. Porém, as amostras de sêmen nos tratamentos 3 e 4 foram os que obtiveram melhores resultados. Foi realizada análise de regressão para reforçar os resultados do tempo zero do TTR, onde se observou uma curva maior no tempo de 265 minutos de resfriamento, ou seja, por volta de 4hs e 25minutos. Os valores médios dos parâmetros seminais analisados nos testes complementares (HOST, morfológico e INT) realizados no presente estudo se mostraram diferentes (P<0,05) entre os tratamentos somente no teste INT (29,7±3,3; 39,8±4,6; 50,0±5,1 e 56,5±4,1). Foi observada correlação positiva entre motilidade e vigor espermático, e entre motilidade e teste INT. Conclui-se que o tempo de resfriamento do sêmen de caprino em tempos de 4 e 6 h promoveu melhor viabilidade da célula espermática após o descongelamento do sêmen, aumentado a longevidade do espermatozoide.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3118832 bytes, checksum: 81687fa6c0330c0e46d76f4e683d9673 (MD5) Previous issue date: 2002-08-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed at the evaluation of the effects from cryopreservation on the in vitro matured and immature oocytes, using the conventional method. The experiment was carried out in the Animal Reproduction Laboratory - DVT-UFV, by using oocytes from cows ovaries from slaughterhouse, which were distributed into six treatments. Treatment 1 (T1): non-frozen oocytes (fresh ones) provided with the cumulus oophorus cells (COC) which were immediately submitted to the processes MIV, FIV and CIV. Treatment 2 (T2): non-frozen oocytes (fresh ones), deprived unprovided of the cumulus oophorus cells (naked), which were immediately submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 3 (T3): immature oocytes provided with the cumulus oophorus cells, which were submitted to cryopreservation just after selection. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 4 (T4): naked oocytes submitted to cryopreservation. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 5 (T5): oocytes provided with the cumulus oophorus cells, matured in vitro, and then they were frozen. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to recultivation for 2 hours in a maturation medium, and then submitted to FIV and CIV. Treatment 6 (T6): naked, in vitro matured oocytes which were submitted to cryopreservation. After thawing, those oocytes which were considered as normal ones were submitted to recultivation for 2 hours, and then to FIV and CIV. Those oocytes of the treatments 3, 4, 5 and 6 were frozen in a solution containing 1.8 mol L-1 ethylene glycol (EG) in Talp-Hepes (base medium) added with 0.4% BSA-V by the conventional method. The oocytes were dehydrated by immersion into three solutions (phases) at increasing concentrations of the cryoproctetor, (0.6; 1.2 and 1.8 mol L-1 of EG) during a maximum permanence time of five minutes for each phase, at environmental temperature. Thawing was accomplished by immersion into water bath at 30oC for 20 seconds. Later, the oocytes were rehydrated at three stages, that is, 0.9 mol L-1 EG + 0.3 mol L -1 sucrose, 0.3 mol L-1 sucrose, and without both EG and sucrose for six minutes each one. After thawing, the oocytes recovery rates were 92.6, 97.5, 96.6 and 93,2% for the treatments 3, 4, 5 and 6, respectively. In relation to the recovered oocytes, the following were also found: a cytoplasm withdrawal rate of 3.3, 0.8, 0.3 and 6.2%, and a cellular content loss of 2.2, 13.1, 3.8 and 16.1%, also for treatments 3, 4, 5 and 6, respectively. The frozen immature oocytes presented a maturation rate of 9.2 and 5.8% (treatments 3 and 4, respectively); these results were much inferior to those obtained by the fresh oocytes, that is, 82.5 (T1) and 75.4% (T2). The fecundation rates were 56.2, 0.0, 38.7, 8.6, 63.6 and 16.7%, while the clivage rates were 36.3, 7.9, 0.4, 0.0, 0.0, and 0.0% for treatments 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively. Only the unfrozen and no-naked oocytes (T1) exhibited development of morula and blastocyst (34.5%), after fecundation. These results point out that the adopted freezing protocols affected the viability of the oocytes. / Este estudo objetivou avaliar os efeitos da criopreservação pelo método convencional em ovócitos imaturos e maturados in vitro. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal - DVT-UFV, utilizando-se ovócitos provenientes de ovários de vacas abatidas em matadouro e distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos. Tratamento 1 (T1): ovócitos não congelados (frescos) providos de células do cumulus oophorus (COC), os quais foram imediatamente submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 2 (T2): ovócitos não congelados (frescos) e desprovidos de células do cumulus oophorus (desnudados), os quais foram imediatamente submetidos ao MIV, FIV e CIV. Tratamento 3 (T3): ovócitos imaturos, providos de células do cumulus oophorus, submetidos à criopreservação imediatamente após a seleção. Posteriormente, esses ovócitos foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 4 (T4): ovócitos desnudados e submetidos à criopreservação. Posteriormente, foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 5 (T5): ovócitos providos de células do cumulus oophorus, maturados in vitro e, em seguida, congelados. Posteriormente, foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos ao recultivo em meio de maturação por duas horas e, então, submetidos à FIV e CIV. Tratamento 6 (T6): ovócitos desnudos, maturados in vitro e, posteriormente, submetidos a criopreservação. Após a descongelação, os considerados normais foram submetidos ao recultivo por duas horas seguido de FIV e CIV. A congelação dos ovócitos dos tratamentos 3, 4, 5 e 6 foi realizada em solução contendo 1,8 mol L-1 de etileno glicol (EG) em Talp-Hepes (meio base) acrescido de 0,4% de BSA-V, utilizando-se o método convencional. Os ovócitos foram desidratados por imersão em três soluções (etapas), contendo concentrações crescentes do crioprotetor, (0,6; 1,2 e 1,8 mol L-1 de EG) sendo o tempo de permanência máxima de cinco minutos em cada etapa, em temperatura ambiente. A descongelação foi realizada por imersão em banho-Maria a 30oC por 20 segundos. Posteriormente, os ovócitos foram reidratados em três etapas (0,9 mol L-1 de EG + 0,3 mol L 1 de sacarose; 0,3 mol L-1 de sacarose, e sem EG e sem sacarose), com duração de seis minutos cada uma. Após a descongelação foram recuperados 92,6, 97,5, 96,6 e 93,2%, dos ovócitos dos tratamentos 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Em relação aos ovócitos recuperados, verificou-se uma taxa de citoplasma retraído de 3,3; 0,8; 0,3 e 6,2% e perda de conteúdo celular de 2,2; 13,1; 3,8 e 16,1%, também para os tratamentos 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Os ovócitos congelados imaturos apresentaram taxa de maturação de 9,2 e 5,8% (tratamentos 3 e 4, respectivamente), resultados estes bem inferiores aos obtidos para os ovócitos frescos, sendo 82,5 (T1) e 75,4% (T2). Foram encontradas taxas de fecundação de 56,2; 0,0; 38,7; 8,6; 63,6 e 16,7% e de clivagem de 36,3; 7,9; 0,4; 0,0; 0,0 e 0,0%, para os tratamentos 1, 2, 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Somente os ovócitos não congelados e não desnudados (T1) apresentaram desenvolvimento para mórulas e blastocistos (34,5%), após a fecundação. Estes resultados indicam que o protocolo de congelação adotado comprometeu a viabilidade do ovócito.