A pirólise da palha da cana-de-açúcar gera uma fração aquosa oriunda da umidade inicial da matéria-prima e das reações de desidratação que ocorrem durante o processo, que é rica em compostos oxigenados de alto valor agregado. O estudo desta fração, necessita de técnicas adequadas para a extração e análise destes constituintes. Neste trabalho, três diferentes técnicas de extração foram empregadas para a separação dos compostos orgânicos da fração aquosa proveniente da pirólise da palha da cana-de-açúcar: extração líquido-líquido (LLE) e extração em fase sólida (SPE) para a análise dos extratos semi-voláteis, e microextração em fase sólida (SPME) para a avaliação dos compostos voláteis. A caracterização dos extratos orgânicos obtidos e da fração volátil foi realizada por GC/qMS e GC×GC/TOFMS. Para a caracterização completa da amostra, mostrou-se necessário o uso da SPME associada a LLE ou a SPE, sendo que estas duas técnicas de extração forneceram resultados equivalentes. Os extratos e a fração volátil apresentaram em sua composição compostos oxigenados, tais como fenóis, aldeídos, cetonas e éteres. A técnica cromatográfica de GC×GC/TOFMS permitiu a identificação de um número maior de compostos em todas as frações estudadas, se comparada com a GC/qMS. / Pyrolysis of sugar cane straw generates an aqueous fraction produced from the initial moisture of the raw material or from dehydration reactions occurring during the process. This aqueous phase is composed of a variety of oxygenated compounds of high added value. The study of this fraction requires proper techniques for the extraction and analysis of these constituents. In this work, three different extraction technique were employed for the separation of organic compounds from aqueous fraction. The liquid-liquid extraction (LLE) and solid phase extraction (SPE) for the analysis of semi-volatile compounds and solid phase microextraction (SPME) for the volatile compounds. The characterization of the organic extracts obtained and the volatile fraction of the sample was performed by GC / qMS and GC × GC / TOFMS. The results showed that, for the complete characterization of the sample, it was necessary the use of SPME associated with SPE or LLE, and these two technique showed equivalent performance for organic extracts. The extracts and the volatile fraction presented in their composition oxygenated compounds such as phenols, aldehydes, ketones and ethers. The chromatography technique of GC × GC / TOFMS allowed the identification of a higher number of compounds in all fractions studied, if compared with GC/qMS.

pirólise da palha de cana-de-açúcar, produz o bio-óleo que é um produto líquido, de coloração escura, viscoso com inúmeros constituintes, ede elevada complexidade. Para este tipo de amostra, a cromatografia gasosa bidimensional abrangente, com o uso de detectores de espectrometria de massas rápidos como o quadrupolo de escaneamento rápido, se torna uma ferramenta eficiente para sua caracterização. Nesse trabalho, estudou-se o bio-óleo produzido pela pirólise rápida da palha de cana-de-açúcar: o extrato orgânico produzido pela extração aquosa alcalina deste bio-óleo (FAAL) e a fase oleosa (FO)oriunda dessa extração, objetivando isolar a fração fenólica do bio-óleo original. Usou-se a cromatografia monodimensional e a cromatografia gasosa bidimensional abrangente (GC×GC) para a caracterização dessas duas frações. Na GC×GC/qMS foram encontrados 161 compostos (majoritariamente, fenóis, cetonas e hidrocarbonetos) para a FO do bio-óleo e 130 compostos (majoritariamente cetonas e fenóis) para a FAAL. A grande diferença entre as duas análises, foi um aumento substancial na concentração de fenóis para a FAAL em relação à FO acompanhada pela ausência de compostos da classe de hidrocarbonetos aromáticos do extrato ácido (FAAL). É possível, também concluir que o bio-óleo estudado é rico em importantes substâncias como fenóis e cetonas, que apresentam elevado valor agregado para a indústria química. / The pyrolysis of sugar cane straw can transform this material in an important product –bio-oil – a dark brow liquid, with high viscosity and containing a large amount of many different classes of compounds. For this kind of high complex sample, the comprehensive two dimensional gas chromatography (GC×GC), using mass spectrometry detector, as the quadrupole with fast scanning, can be an efficient tool in its characterization. In this study, it was studied the bio-oil from the pyrolysis of sugar cane straw: the organic extract of the aqueous alkaline extraction of this bio-oil (FAAL) and oil phase (FO) derived from this extraction, with the objective of to isolate the phenols. One dimensional gas chromatography and GC×GC with quadrupole mass spectrometry detection (qMS) was used for FO and its phenols extract. In the FO, 161 compounds (phenols, ketones and hydrocarbons) were tentatively identified and in the FAAL, 130 compounds (phenols and ketones). The main differences between techniques and samples were the substantial increasing of phenols in FAAL, the absence of hydrocarbons in this sample and the higher peak capacity of GC×GC. It is possible to conclude that this bio-oil is rich in important raw material for the chemical industry (as phenols and ketones).

Bio-óleos obtidos através de pirólise de biomassas lignocelulósicas são uma alternativa complementar às fontes fósseis no processo de fabricação de combustíveis e outros produtos químicos. Foi feita uma comparação entre os bio-óleos obtidos em reatores de leito fixo (FB) e leito fluidizado borbulhante (BFB), empregando-se serragem de Eucalyptus sp (hardwood) e de Picea abies (softwood), resíduos produzidos em larga escala em diversos países. Observou-se maior rendimento do produto líquido (bio-óleo bruto) da pirólise em reator BFB (~70 %) do que no reator FB (~50 %). As cetonas e os fenóis foram os compostos majoritários obtidos nos bio-óleos, respectivamente. A predominância destes compostos químicos sugere que estes bio-óleos apresentam potencial para a indústria de polímeros, alimentícia entre outras. A análise realizada por GC×GC/TOFMS se mostrou importante para o estudo de três bio-óleos obtidos a partir de BFB, visto que foram verificadas imprecisões na análise dos mesmos bio-óleos quando a 1D-GCqMS foi utilizada, devido a co-eluições. O emprego de zeólita ZSM-5 em reator BFB aumentou o percentual de hidrocarbonetos aromáticos no bio-óleo, mostrando o potencial deste tipo de processo e resíduo para produção de combustível e a presença de hidrocarbonetos poliaromáticos trouxe um alerta para o correto gerenciamento da pirólise a fim de evitar a produção de compostos tóxicos. / Bio-oils obtained by pyrolysis of lignocellulosic biomass are a complementary alternative to fossil fuels in the manufacturing process of fuels and other chemicals. A comparison was made between the bio-oils obtained in fixed bed (FB) and bubbling fluidized bed (BFB) reactors, using sawdust of Eucalyptus sp. (hardwood) and Picea abies (softwood), waste produced on a large scale in different countries. It was observed a higher yield of liquid product in BFB reactor (~ 70%) than in the FB reactor (~ 50%). The ketones and phenols were the major compounds obtained in these bio-oils, respectively. The prevalence of these chemical compounds suggests that these bio-oils have potential for the polymer industry, food and others. The analysis by GC×GC/TOFMS was important for the study of the three bio-oils obtained from BFB, as inaccuracies in the 1D-GCqMS analysis were verified due to co-elutions. The use of zeolite ZSM-5 as a catalyst on the BFB reactor increased the percentage of aromatic hydrocarbons in the bio-oil, showing the potential of this type of process and residue for fuel production and the presence of polyaromatic hydrocarbons brought an alert to the proper management of pyrolysis in order to avoid the production of toxic compounds.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T18:00:13Z No. of bitstreams: 2 Amanda_Teixeira_de_Melo_MESTRADO_2012.pdf: 2218966 bytes, checksum: 2d94267b5075c80e9bb685751d76be31 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T18:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Amanda_Teixeira_de_Melo_MESTRADO_2012.pdf: 2218966 bytes, checksum: 2d94267b5075c80e9bb685751d76be31 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Este trabalho teve como objetivo imobilizar heparina ao suporte de exopolissacarídeo celulósica (SEC), proveniente da fermentação do melaço da cana-de-açúcar pela bactéria Zoogloea sp., e por técnicas separação purificar a antitrombina do plasma. O suporte foi funcionalizado através da oxidação parcial com periodato de sódio (NaIO4) seguindo pela adição de polietilenoimina (PEI), que permitiu a ligação covalente com a heparina, posteriormente, a membrana foi reduzida com borohidreto de sódio (BH4). Para obter as melhores condições experimentais de imobilização utilizou-se o desenho experimental fracionário (½ 2K-3) e um delineamento experimental do tipo DCCR (delineamento composto central rotacional) onde se analisou 8 variáveis independentes e suas interações: concentração e tempo de reação dos seguintes reagentes; NaIO4, PEI e BH4, como também tempo de imobilização e agitação que o sistema se manteve. O percentual de heparina fixada ao suporte e a atividade anticoagulante da heparina imobilizada foi estabelecida pelo ensaio de corante de Azul de Metileno e tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TTPa), respectivamente. O planejamento experimental aplicado foi satisfatório para determinar as condições ótimas de imobilização e a atividade antitrombótica do material. Enquanto a separação da antitrombina do plasma humano utilizou membranas heparinizadas com uma densidade de heparina variando entre 41,08 – 254,7 μg cm-2 como suporte de separação por afinidade e obteve-se uma quantidade de antitrombina purificada 473,249 ug ml-1 quando incubado o plasma concentrado e 47,80 μg ml-1 para plasma diluídos em salina, nos eluatos de 0,5 a 2,0 NaCl, foi quantificada pelo método de Lowry. Finalmente a presença da antitrombina foi confirmada pela SDS-PAGE e corando com prata.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:38:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Renata Cristina da Penha França.pdf: 3945808 bytes, checksum: 4675019a8f00e532930096e155b2dc6f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Renata Cristina da Penha França.pdf: 3945808 bytes, checksum: 4675019a8f00e532930096e155b2dc6f (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE / Com a diminuição dos estoques pesqueiros e a estagnação das capturas observada desde o final da década de 1980, a aquicultura converteu-se atualmente em uma atividade consolidada capaz de abastecer e suprir à incessante demanda por produtos pesqueiros e proteicos de alto valor nutricional por seu crescente aporte na produção mundial de pescados. O bijupirá (Rachycentron canadum), conhecido internacionalmente como cobia é uma espécie nativa da costa brasileira e tem sido apontada como excelente candidato para desenvolver a piscicultura marinha nacional. Visando um melhor conhecimento sobre as exigências nutricionais e a fisiologia digestiva desta espécie. O objetivo do presente trabalho foi realizar a caracterização bioquímica e molecular da tripsina presente nos cecos pilóricos do bijupirá (Rachycentron canadum), testar a compatibilidade da tripsina purificada com sabões em pó e a sua estabilidade através de ensaios in vitro na presença de agentes surfactantes e oxidantes e comparar as peptidases digestivas presentes entre espécimes selvagens e cultivados no início do processo de domesticação em Pernambuco. Peptidases presentes nos cecos pilóricos de bijupirás selvagens e cultivados (R. canadum) foram caracterizadas quanto as suas propriedades físico-químicas através de ensaios de pH, temperatura ótima, estabilidade térmica, SDS-PAGE, efeito de inibidores e zimogramas utilizando substratos específicos para tripsina e quimotripsina (BApNA e SApNA), respectivamente. A temperatura e o pH ótimos obtidos para a tripsina-símile dos animais selvagens e cultivados foram de 55 e 60°C e 8,0 e 10,0, respectivamente, enquanto que para quimotripsina-símile foram de 50 e 45°C e 9,5 e 8,0 respectivamente. A tripsina-símile dos bijupirás selvagens e cultivados foi fortemente inibida com a utilização de inibidores clássicos como o PMSF (inibidor de serino proteases), TLCK (inibidor clássico de tripsina) e benzamidina (inibidor clássico de tripsina). O mesmo padrão foi observado para a quimotripsina-símile utilizando o TPCK (inibidor clássico de quimotripsina). O perfil eletroforético dos animais selvagens e cultivados revelaram bandas que variaram entre 6 kDa e 195 kDa. As bandas caseinolíticas observadas no zimograma revelaram pequenas variações que podem ser indicativos do processo inicial de adaptação enzimática do bijupirá frente às novas condições de cultivos quando comparados aos animais selvagens. O processo de purificação da tripsina do bijupirá utilizando-se a cromatografia de afinidade por BPTI-sepharose demonstrou ser um método eficiente, com alta reprodutibilidade, rápido e viável que permitiu o isolamento da tripsina presente no ceco pilórico e apresentou pH ótimo de 8,5, temperatura ótima de 50ºC, estabilidade térmica até 55ºC, Km de 0,38mM, Kcat 3,14 s-1 e Kcat/Km 8.26 s-1 mM-1 utilizando BApNA (8mM) como substrato. Estas caracterísiticas físico-químicas e cinéticas foram semelhantes a outras tripsinas de peixes reportadas na literatura. A mesma apresentou-se estável na presença de agesntes oxidantes e surfactantes e compatível com sabões em pó comerciais e que pode ser empregada na indústria de detergentes como nova fonte alternativa de enzimas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1081_1.pdf: 3167695 bytes, checksum: 84ef89e27190ff69ca4e0c0743e5e14b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Obteve-se concentrado de imunoglobulina G intravenosa IgGIV, altamente purificado, utilizando-se polietilenoglicol associado a uma única etapa de precipitação por etanol, em substituição ao tradicional método descrito por Cohn-Oncley, que emprega, em três etapas, o mesmo álcool resfriado, como agente precipitante. A purificação da fração bruta contendo mais de 95% de imunoglobulina G foi realizada utilizando-se cromatografia líquida com um trocador de cátion, a CMSepharose, como fase estacionária. Durante o processamento o produto foi submetido a dupla inativação viral sendo a primeira pela ação do caprilato de sódio, 30 mM a pH 5,1+/- 0,1 e a segunda por ação de mistura de solvente/detergente. O produto acabado foi formulado a 5% utilizando-se sucralose 10% como estabilizante. O rendimento da metodologia foi de 3,3g de IgG/L de plasma. A análise do produto acabado demonstrou atividade anti-complementar inferior a 1CH50. O valor percentual de polímeros e agregados em cinco lotes realizados foi inferior a 3%. O estudo da capacidade de neutralização demonstrou a presença de anticorpos anti-bacterianos e anti-virais em concentração pelo menos três vezes maior que o plasma de origem. O produto acabado apresentou conformidade com todos os requisitos de pureza dispostos na farmacopéia européia IV edição

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2088_1.pdf: 518424 bytes, checksum: ad434d0173e0f680a4332d1b48b5d660 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / O Brasil encontra-se em uma importante fase no uso de medicamentos fitoterápicos, que passam a ter que satisfazer os mesmos critérios de eficácia e segurança exigidos para os medicamentos convencionais, obtidos por síntese. O registro de medicamentos fitoterápicos (BRASIL, 2004) estabelece o controle de qualidade da matéria-prima vegetal como pré-requisito essencial para a obtenção de fitoterápicos com reprodutibilidade de ação. Uma das dificuldades de se desenvolver fitoterápicos que apresentem estas características de reprodutibilidade lote a lote da ação terapêutica é a variabilidade na concentração de marcadores, decorrente dos efeitos de sazonalidade no cultivo das plantas. O presente trabalho estuda a relação existente entre algumas variáveis que podem estar relacionadas com a variação da quantidade de óleo essencial da espécie Plectranthus amboinicus (Lour) Spreng cultivada, através do monitoramento do óleo essencial por cromatografia à gás. Foram conduzidos experimentos que tiveram o objetivo de avaliar a maior concentração de óleo essencial sob diferentes condições de adubação (adubo orgânico, adubo mineral 1 e adubo mineral 2), irrigação (irrigação diária e irrigação alternada), incidência solar (direta e indireta), horário de coleta (7h, 12h e 16h) e idade da planta (60, 90, 120 e 150 DAP), em diferentes ciclos vegetativos (1 e 2). Nas diferentes condições de adubação, foi verificado que no ciclo1 o adubo orgânico obteve melhor desempenho e no ciclo 2 a adubação mineral 1 foi superior. A irrigação alternada e a incidência solar direta demonstraram ser a melhor condição nos dois ciclos. No ciclo 1 o melhor horário de coleta foi o das 7h, já no ciclo 2 o melhor horário foi o das 16h. A concentração de óleo essencial variou nos diferentes estágios de desenvolvimento da planta, tendo sido obtido os melhores índices aos 60 DAP no ciclo 1 e 2

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-28T18:21:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T23:19:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T23:19:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) Previous issue date: 2015-08-10 / CAPES / Introdução: Avicennia schaueriana é uma espécie endêmica da vegetação de manguezal pertencente à família Verbenaceae. As espécies do gênero Avicennia são muito utilizadas pelas comunidades tradicionais para cura de várias doenças. Objetivo: Investigar a presença de compostos químicos e avaliar a citotoxicidade in vitro do extrato aquoso de folhas de Avicennia schaueriana e a ação cicatrizante do creme desse extrato nas feridas cutâneas em ratos. Materiais e Métodos: O extrato aquoso de folhas de A. schaueriana foi analisado por cromatografia em camada delgada para realização do perfil fitoquímico de cumarinas, flavonoides, triterpenos e taninos. Para a análise de saponinas foi utilizado o teste de formação de espuma e para os alcaloides o de precipitação. A avaliação citotóxica foi realizada através do método colorimétrico de brometo em células Vero. A ação cicatrizante foi avaliada utilizando 45 ratos divididos em três grupos iguais tratados durante 5, 10 e 15 dias com creme de extrato aquoso de folhas de A. schaueriana, solução de cloreto de sódio a 0,9% e creme de dexpantenol, aplicados sobre a região dorsal previamente tricotomizada e lesionada. Foram realizadas mensurações iniciais e finais de cada ferida para calcular o índice de cicatrização das úlceras, a análise histomorfométrica e a contagem dos fibroblastos nas secções histológicas das feridas cirúrgicas nos diferentes grupos e intervalos de tempo. Resultados: O estudo fitoquímico mostrou a presença de flavonoides, taninos, triterpenos e saponinas, porém não foi evidenciada a presença de cumarinas e alcaloides. Em relação àcitotoxicidade in vitro, observou que o extrato aquoso de folhas de A. schaueriana não foi considerado citotóxico, pois apresentou capacidade de proliferação de células Vero na maior concentração testada (100μg/mL). Na análise morfométrica verificou-se que o percentual médio de contração das feridas, após 10 dias de tratamento, foi mais elevado no grupo medicado com dexpantenol (93,41%). No tempo de 15 dias, o menor percentual médio de contração ocorreu no grupo do dexpantenol (94,41%) e o maior no de A. schaueriana (98,50%). Na histomorfometria, após 10 dias da cirurgia, o grupo do dexpantenol apresentou o menor comprimento médio não reepitelizado, não demonstrando diferença significativa com o de A.schaueriana, mas apresentando com o soro fisiológico. No período de 15 dias, a média foi nula no grupo da planta estudada, indicando 100% de reepitelização das feridas. Evidenciou-se também que, após 10 dias, o número médio de fibroblastos encontrado no grupo A. schaueriana foi mais elevado do que o soro fisiológico. No período de 15 dias, ogrupo A. schaueriana manteve uma maior quantidade de fibroblastos quando comparado aos demais grupos. Conclusão: O extrato aquoso de folhas de A. schaueriana contém importantes metabólitos secundários, associados a relevantes propriedades farmacológicas. Além disso, a espécie A. schaueriana não apresenta atividade citotóxica e a aplicação tópica do creme desse extrato diminui a área da ferida, estimula a reepitelização e aumenta o número de fibroblastos, exibindo ação cicatrizante mais eficiente nas feridas cutâneas em ratos do que o creme de dexpantenol. Portanto, esta planta poderá tornar-se um tratamento de uso tópico no proce sso de reparação tecidual. / Introduction: Avicennia schaueriana is an endemic species of mangrove vegetation belonging to the Verbenaceae family. The species of the Avicennia gender are extensively used by traditional communities for curing various diseases. Aim: To investigate the presence of chemical compounds and to evaluate the cytotoxicity in vitro of aqueous extract of Avicennia schaueriana leaves and the healing action of the cream of this extract in skin wounds in mice. Materials and Methods: The aqueous extract of A. schaueriana leaves was analyzed by thin-layer chromatography for performing the phytochemical profile of coumarins, flavonoids, triterpenes and tannins. For the analyses of saponnins the formation of foaming test was used and alkaloids the precipitation. The cytotoxic evaluation was performed using the colorimetric method of bromide in Vero cells. The cicatrizing activity was evaluated using 45 mice, divided into three equal groups treated for 5, 10 and 15 days with the cream of the aqueous extract of A. schaueriana leaves, solution of sodium chloride at 0.9% and cream of dexpanthenol, applied to the dorsal region previously shaved and injured. Thus, the initial and final measurements of each wound were taken to calculate the rate of healing of the ulcers, the histomorphometric analysis and the count of fibroblasts of histological sections of surgical wounds in the different groups and timeslots. Results: The phytochemical study showed the presence of flavonoids, tannins, triterpenes and saponins, but the presence of coumarins and alkaloids was not detected. Regarding the cytotoxicity in vitro, it was observed the aqueous extract of A. schaueriana leaves was not considered cytotoxic, as it presented Vero cell proliferation capacity at the highest concentration tested (100μg/ml). In the morphometric analysis, it was found that the average percentage of contraction of the wounds, after 10 days of treatment, was higher in the group medicated with dexpanthenol (93.41%). In the 15 days analysis, the lowest average percentage of contraction was observed in the dexpanthenol group (94.41%) and the highest in the A. schaueriana (98.50%). In the histomorphometry, after 10 days of the surgery, the dexpanthenol group had the lowest average length not re-epithelialized, showing no significant statistical difference from the A.schaueriana, but showing with saline solution. In the 15-days period, the average was void in the group of the studied plant, indicating 100% of re-epithelialization of the wounds. It was also noticed that after 10 days, the average number of fibroblasts found in the A. schaueriana group was higher than the saline solution. In the 15-days period, the A. schaueriana group maintained a higher amount of fibroblasts when compared to the others groups. Conclusion: The aqueous extract of A. schaueriana leaves contains important secondary metabolites, which have relevant pharmacological properties. Furthermore, the species A. schaueriana present no cytotoxic activity and the topical application of the cream of this extract decreases the wound area, stimulates the re-epithelialization, and increases the number of fibroblasts, presenting healing action more efficient, on mice skin wounds, than dexpanthenol cream. Therefore, this plant could become a topical treatment in the tissue repair process.

Orientador: Susanne Rath / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_JoelFernandoMagri_M.pdf: 2000946 bytes, checksum: 776f3525265b262b985b62608957a362 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A ivermectina (IVM) e um antiparasitário da classe das avermectinas mundialmente utilizado na produção animal. Quando os fármacos apresentam teores fora das especificações, estes podem comprometer a saúde animal e/ou deixar resíduos no produto animal destinado ao consumo humano. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar um método analítico usando a cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de fotodiodos (HPLC-DAD) e avaliar um método alternativo, espectroscopia no infravermelho próximo (NIR) associada a quimiometria, para a quantificação de IVM em medicamentos veterinários. Os parâmetros cromatográficos foram estabelecidos seguindo as especificações da Farmacopéia Britânica e a validação foi baseada na Resolução n° 899 de 29/05/03 da ANVISA. A separação da IVM de seu homólogo foi realizada em uma coluna cromatográfica C18 Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), fase móvel metanol:água (83:17, v/v), vazão de 1,0 mL min, temperatura de 30 °C e comprimento de onda de detecção de 245 nm. O método foi seletivo com os seguintes parâmetros de validação: linearidade (r = 0,9995), intervalo de linearidade: 40 a 60 mg mL, exatidão: 96 - 104 %, precisão intra-dia: 0,5 a 4,8% e precisão inter-dia: 2,7%. Trinta e uma amostras (formulações injetáveis) foram analisadas e 45,2% estavam fora das especificações (valor declarado). Os estudos empregando a NIR foram executados na faixa espectral de 4000 a 14000 cm. Os espectros obtidos (média de 100 espectros) foram tratados com a ferramenta quimiométrica PCA (Principal Component Analysis) para a análise exploratória dos dados e um modelo de calibração foi construído por PLS (Partial Least Squares). O modelo de calibração baseou-se em validação cruzada usando 66 variáveis (4104,2 a 4354,9 cm), 5 componentes principais e 25 amostras. Embora o método NIR tenha mostrado algumas vantagens sobre o metodo cromatográfico, o emprego da HPLC ainda é necessário para confirmação de identidade / Abstract: Ivermectin (IVM) is an antiparasitic compound of the class of avermectins worldwide used in livestock production. When veterinary drugs present levels outside their specifications, they may compromise animal health and/or leave residues in animal products destined for human consumption. The aims of this work were the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography with photodiode array detection (HPLC-DAD) and evaluation of an alternative method, near infrared spectroscopy (NIR) associated to chemometry, to the quantification of IVM in veterinary drugs. The chromatographic parameters were established according to the specifications of the British Pharmacopoeia and the validation was based on the Resolution n° 899 of 29/05/03 of ANVISA. The separation of IVM from his homologue was achieved using a C18 column Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), mobile phase of methanol:water (83:17, v/v), flow rate of 1.0 mL min, temperature of 30 °C and detection wavelength of 245 nm. The method was selective with the following validation parameters: linearity (r= 0.9995), linear range: 40 a 60 mg mL, accuracy: 96 - 104%, intra-day precision: 0.5 to 4.8 % and inter-day precision: 2.7%. Thirty one samples (injectable formulations) were analyzed and 45.2% were outside their specifications (declared value). Near infrared studies were carried out in the spectral range of 4000 to 14000 cm. The NIR spectra obtained (average of 100 spectra) were treated with a chemometric tool Principal Component Analysis (PCA) for exploratory data analysis and a calibration model by Partial Least Square (PLS) was built. For this purpose, cross validation with 66 variables (4104.2 a 4354.9 cm), 5 principal components and 25 samples were employed. Even though, the NIR method had shown some advantages regarding to the chromatographic method, HPLC is still required for identity confirmation / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientador: Neura Bragagnolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T17:02:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saldanha_Tatiana_D.pdf: 484889 bytes, checksum: baa56f10ee6a13e425356d0ce02b0f4f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Devido aos efeitos adversos dos óxidos de colesterol, a ocorrência e quantificação destes compostos em alimentos in natura ou processados são consideradas de grande importância para a saúde pública. A intensidade da oxidação do colesterol em pescados depende de diversos fatores como concentração do colesterol, tipos de ácidos graxos presentes na fração lipídica, presença de luz, oxigênio, tipo de processamento aplicado e condições de estocagem. No presente estudo foram analisadas amostras frescas de pescadas e sardinhas, além de duas amostras comerciais de pescadas congeladas, sendo uma marca comercial embalada a vácuo e outra somente embalada em filme de poliestireno, acondicionadas em caixas de papelão. As amostras foram posteriormente armazenadas sob congelamento em condições domésticas a -18oC. Para a verificação dos efeitos da incidência de luz sobre a composição lipídica no bacalhau, uma parte das amostras foi armazenada exposta à luz fluorescente e outra armazenada na ausência de luz a 24ºC. Todas as amostras avaliadas durante o estudo foram separadas em 5 lotes, um deles analisado logo após a aquisição das mesmas, correspondendo ao tempo zero, e os demais lotes armazenados e retirados para as análises após 30, 60, 90 e 120 dias, respectivamente. Cada lote de amostras foi separado em duas porções, uma para ser analisada crua e outra grelhada a 165ºC até a temperatura interna do músculo atingir 75ºC. Foram determinados os teores de umidade, lipídios totais e, a partir do extrato lipídico, os ácidos graxos metilados e analisados por cromatografia gasosa. A metodologia para determinação simultânea de colesterol e óxidos de colesterol foi desenvolvida no presente estudo. O método consistiu de saponificação direta a 20ºC, durante 22 h no escuro (4 mL de solução aquosa de KOH a 50% e 6 mL de etanol) e 4 extrações da matéria insaponificável com hexano. Utilizou-se um cromatógrafo líquido com detectores Uvvisível e índice de refração (IR) ligados em série, coluna Nova Pack CN HP (300 x 3,9 mm x 4 mm) e fase móvel de n-hexano:isopropanol (97:03), na vazão de 1 mL/min, sendo o tempo de análise 30 minutos. Nas condições cromatográficas utilizadas foi possível separar, quantificar e identificar 12 produtos de oxidação do colesterol: 19-hidroxicolesterol (19-OH), 20a-hidroxicolesterol (20a-OH), 22®-hidroxicolesterol (22®-OH), 24(S)-hidroxicolesterol (24(S)-OH), 22(S)-hidroxicolesterol (22(S)-OH), 25-hidroxicolesterol(25-OH), 25®-hidroxicolesterol (25®-OH), 7-cetocolesterol (7-ceto), 7b hidroxicolesterol (7b-OH), 7a-hidroxicolesterol (7a-OH) e 5,6a-epóxicolesterol (5,6a-Ep, a-epóxido) e 5,6b-epóxicolesterol (5,6b-Ep, b-epóxido). O desempenho do método foi avaliado através dos parâmetros de linearidade, precisão, sensibilidade e recuperação utilizando-se amostras de bacalhau do Pacífico. Além disso, os sistemas de detecção UVvisível, IR e ionização química por pressão atmosférica acoplado a espectrometria de massas (APCI-MS) foram comparados para a quantificação dos óxidos de colesterol e colesterol em amostras de bacalhau. Como não foram observadas diferenças significativas nos resultados obtidos entre os 3 detectores, a quantificação foi realizada usando os detectores UV-IR e a confirmação por APCI-MS. O colesterol e os epóxidos foram quantificados usando o IR, pois estes óxidos não absorvem na região do UV e o colesterol apresentou melhor separação. Os outros óxidos foram quantificados usando o detector Uvvisível fixado a 210 nm. A recuperação variou de 95 a 104%. Os limites de detecção (S/N=3) obtidos foram 0,037 mg/g para o 19-OH e 20a-OH; 0,06 mg/g para 22®-OH, 24(S)-OH, 25®-OH e 25-OH; 0,07 mg/g para o 22(S)-OH, 7b-OH e 7a-OH; 0,01 mg/g para o 7-ceto e colesterol; e 0,18 mg/g para os epóxidos. O método validado mostrou-se eficiente, exato e preciso, sendo determinados óxidos de colesterol nunca obtidos em amostras de peixes como o 19-OH, 22®-OH, 22(S)-OH, 24(S)-OH e 25®-OH e, com exceção do 19-OH, não existem relatos na literatura destes compostos em amostras de alimentos. Nas amostras de sardinha e pescadas os teores de lipídios totais aumentaram durante a armazenagem a -18oC e diminuíram após o tratamento térmico empregado. Os óxidos de colesterol determinados nas amostras de sardinhas foram, 19-OH, 22(S)-OH, 24(S)-OH, 22(S)-OH, 7-ceto e 25®-OH e nas amostras de pescada, 24(S)-OH, 22(S)-OH, 25®-OH, 25-OH, 19-OH e 7-ceto. Nas amostras de sardinha e pescada, os óxidos mais abundantes foram o 19-OH e o 25-OH, tanto nas amostras cruas como nas grelhadas, durante 120 dias de estocagem. Os teores de óxidos de colesterol nas amostras de pescada congeladas a vácuo foram menores que nas pescadas congeladas sem vácuo, demonstrando que a embalagem a vácuo foi mais eficiente, reduzindo as alterações oxidativas. Durante a armazenagem sob congelamento das amostras de sardinha e pescada observou-se elevação dos teores dos ácidos graxos saturados e redução dos teores dos monoinsaturados e poliinsaturados, principalmente dos ácidos graxos da família n-3, eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA). Durante o preparo térmico e o congelamento observou-se decréscimo acentuado nas concentrações de colesterol, provavelmente relacionado ao processo oxidativo, e simultânea elevação dos teores dos óxidos de colesterol em todas as amostras estudadas. Observou-se correlação positiva entre preparo térmico, congelamento e formação de óxidos de colesterol nestes produtos. No experimento utilizando amostras de bacalhau seco e salgado os parâmetros tempo de armazenagem, irradiação fluorescente e preparo térmico contribuíram para o decréscimo dos teores de colesterol e dos ácidos graxos monoinsaturados e poliinsaturados. Foram determinados 10 produtos de oxidação do colesterol nas amostras de bacalhau, sendo: 19-OH, 22®-OH, 24(S)-OH, 22(S)-OH, 25-OH, 7-ceto, 7b-OH, 7a-OH, a-epóxido e b- epóxido. Os níveis dos óxidos de colesterol aumentaram significativamente durante o tempo de estocagem e após o processamento térmico e exposição à luz, sendo a fotooxidação o fator mais relevante / Abstract: Due to the adverse effects of cholesterol oxides, the occurrence and quantification of these compounds in processed and in natura foods are considered of great importance to public health. In fish, the intensity of cholesterol oxidation depends on various factors such as cholesterol concentration, types of fatty acid present in the lipid fraction, presence of light and oxygen, type of processing applied and storage conditions. Fresh samples of hake and sardines were analysed in this study, as well as two commercial samples of frozen hake, one being vacuum packed and the other wrapped in polystyrene film and placed in a cardboard box. The samples were subsequently stored frozen under domestic conditions at ¿18ºC. To verify the effect of the incidence of light on the lipid composition of cod, one part of the samples was stored under fluorescent light and the other in the absence of light at 24ºC. All the samples evaluated during the study were separated into 5 batches, one being analysed soon after acquired, corresponding to zero time, and the other batches stored and samples removed after 30, 60, 90 and 120 days, respectively. Each batch of samples was divided into two portions, one being analysed raw and the other after grilling at 165ºC to an internal temperature of 75ºC. The moisture and total lipid content s were determined and the fatty acids from the lipid extract methylated and analysed by gas chromatography. Methodology for the simultaneous determination of cholesterol and cholesterol oxides was developed in the present study. The method consisted of direct saponification at 20ºC for 22 h in the dark (4 ml aqueous 50% KOH and 6 ml ethanol) and 4 extractions of the non-saponifyable matter with hexane. A liquid chromatograph was used equipped with UV-visible and refractive index (RI) detectors connected in series, a Nova Pak CN HP column (300 x 3.9 mm x 4 mm) and a mobile phase of n- hexane:isopropanol (97:03) with a flow rate of 1 ml/min, the analysis time being 30 minutes. Under the chromatographic conditions used, it was possible to separate, quantify and identify 12 cholesterol oxidation products: 19-hydroxycholesterol (19-OH), 20a-hydroxycholesterol (20a-OH), 22®-hydroxycholesterol (22®-OH), 24(S)-hydroxycholesterol (24(S)-OH), 22(S)-hydroxycholesterol (22(S)-OH), 25-hydroxycholesterol (25-OH), 25®-hydroxycholesterol (25®-OH), 7-ketocholesterol (7-keto), 7b-hydroxycholesterol (7b-OH), 7a-hydroxycholesterol (7a-OH), 5,6a-epoxycholesterol (5,6a-Ep, a-epoxide) and 5,6b-epoxycholesterol (5,6b-Ep, b-epoxide). Method performance was evaluated according to the parameters of linearity, precision, sensitivity and recovery using Pacific cod samples. In addition, the detection systems UVvisible, RI and atmospheric pressure chemical ionisation coupled to mass spectrometry (APCI-MS), were compared for the quantification of cholesterol oxides and cholesterol in cod samples. Since significant differences were not observed between the results of the 3 detectors, the UV-RI detectors were used for quantification and the APCI-MS for confirmation. Cholesterol and the epoxides were quantified using RI since these oxides do not absorb in the UV region and cholesterol separates better using this detector. The other oxides were quantified using the UV-visible detector at 210 nm. Recovery varied from 95 to 104%. The detection limits (S/N=3) obtained were 0.037 mg/g for 19-OH and 20a-OH; 0.06 mg/g for 22®-OH, 24(S)-OH, 25®-OH and 25-OH; 0.07 mg/g for 22(S)-OH, 7b-OH and 7a-OH; 0.01 mg/g for 7-keto and cholesterol; and 0.18 mg/g for the epoxides. The validated method was shown to be efficient, exact and precise, determining cholesterol oxides previously not obtained from fish samples, such as 19-OH, 22®-OH, 22(S)-OH, 24(S)-OH and 25®-OH, and with the exception of 19-OH, no reports of these compounds being found in food samples exist in the literature. In the sardine and hake samples, the total lipid contents increased during storage at ¿18ºC and decreased during the heat treatment employed. The cholesterol oxides determined in the sardines were: 19-OH, 22(S)-OH, 24(S)-OH, 22(S)-OH, 7-keto and 25®-OH and in the hake samples: 24(S)-OH, 22(S)-OH, 25®-OH, 25-OH, 19-OH and 7-keto. In the sardine and hake samples, the most abundant oxides were 19-OH and 25-OH for both the raw and grilled samples, during the 120 days of storage. The cholesterol oxide contents of the vacuum packed frozen hake samples were lower than those frozen without vacuum, demonstrating that the vacuum package was more efficient, reducing the oxidative alterations. Increases in the saturated fatty acid contents and reductions in the contents of mono- and polyunsaturated fatty acids were observed during frozen storage, principally of the n-3 family, eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA). During heat processing and freezing, an accentuated decrease in cholesterol content and simultaneous rise in cholesterol oxide contents was observed in all the samples studied, probably related to the oxidative process. A positive correlation between heat processing, freezing and cholesterol oxide formation was observed in these products. In the experiment using dried salted cod samples, the parameters of storage time, fluorescent irradiation and heat processing contributed to a decrease in the cholesterol and mono- and polyunsaturated fatty acid contents. The following 10 oxidation products were determined in the cod samples: 19-OH, 22®-OH, 24(S)-OH, 22(S)-OH, 25-OH, 7-keto, 7b-OH, 7a-OH, a-epoxide and b-epoxide. The levels of cholesterol oxides increased significantly with storage time and after heat processing and light exposition, photooxidation being the most relevant factor / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos