Made available in DSpace on 2014-05-29T12:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69451.pdf: 4079686 bytes, checksum: 9b991595fb0df78a519d167be0107efd (MD5) 69451.pdf.txt: 169969 bytes, checksum: 0558fd707963da6904db0fdbaf1ae42c (MD5) 69451.pdf.jpg: 1207 bytes, checksum: bcc7c08652d64972e962953f82606a29 (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / As leishmanioses são um complexo de doenças causadas por diferentes espécies de Leishmania cujas apresentações clínicas variam de acordo com a espécie do parasito envolvido na infecção e com o número de parasitos inoculados além das características imunológicas e genéticas do hospedeiro. Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal espécie envolvida na leishmaniose tegumentar Americana (LTA) e, apesar de sua grande importância, o conhecimento de sua imunopatogênese é baseado em estudos com pacientes. Poucos estudos foram conduzidos utilizando modelos experimentais de infecção por L. braziliensis, provavelmente devido à falta de uma linhagem murina que reproduza a infecção por esta espécie. O golden hamster representa o modelo experimental mais suscetível a espécies do subgênero Viannia, porém a ausência de reagentes imunológicos específicos para este modelo limita sua utilização. Além disso, os estudos disponíveis com o modelo apresentam diferentes protocolos de infecção utilizando diversas cepas em inóculos geralmente altos, levando a diferentes cursos clínicos da doença e culminando com a visceralização do parasito. Este estudo teve como objetivo investigar o inóculo ideal de L. braziliensis, em condições padronizadas, que garanta a infecção sem levar a uma doença exacerbada e analisar os aspectos clínicos e imunopatológicos associados a cada inóculo Para isto, grupos de cinco animais, em quatro experimentos independentes, foram infectados por via intradérmica com 104, 105 e 106 promastigotas de L. braziliensis. O desenvolvimento das lesões foi acompanhado por 105 dias e então fragmentos da pele inoculada, do linfonodo drenante, do baço além de soro foram coletados para avaliação da carga parasitária, expressão de citocinas, investigação da visceralização para o baço, análise histopatológica, e dosagem de IgG anti-Leishmania. Os resultados mostraram que o tempo de surgimento das lesões foi inversamente proporcional ao tamanho do inóculo e que o tamanho final das lesões variou entre os inóculos de 104 e 105 e entre 104 e 106, sem variação entre 105 e 106. O aspecto clínico das lesões também variou com o inóculo, onde os animais inoculados com 104 apresentaram lesões mais nodulares em contrapartida aos animais inoculados com 106, com lesões mais ulceradas. Apesar da diferença no número de parasitos inoculados, a carga parasitária foi a mesma entre os três inóculos. A expressão de citocinas e a dosagem de IgG anti-Leishmania apresentaram níveis elevados em todos os grupos analisados, porém sem diferenças estatísticas entre os diferentes inóculos. A análise histopatológica revelou envolvimento inflamatório leve na pele dos animais infectados com 104 enquanto os infectados com 105 e 106 apresentaram elevado grau de dano tecidual A visceralização foi diretamente proporcional ao tamanho do inóculo, pouco frequente no inóculo de 104, acometendo a maioria dos animais infectados com 106. Portanto, verificou-se que diferentes números de parasitos no inóculo exercem influência na evolução e na apresentação clínica da doença, no tamanho final da lesão e no grau de dano tecidual, porém não exerce influência na carga parasitária e na expressão de citocinas na lesão e no linfonodo e nos níveis de IgG anti-Leishmania. Estes resultados indicam que o inóculo de 104 gera lesão mais benigna e menor comprometimento sistêmico e que a modulação da resposta imune frente a diferentes números de parasitos inoculados ocorre na fase inicial da infecção e determina o estabelecimento e a magnitude da fase crônica da doença / Leishmaniasis are complex of diseases caused by different species of Leishmania which clinical presentation varies according to involved parasite species as well as the number of parasites inoculated, immunological and genetic characteristics of the host. Leishmania (Viannia) braziliensis is the main species involved in American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) and despite its great importance the majority of current knowledge about its immunopathogenesis comes from studies in patients. Few studies were conducted using experimental models of L. braziliensis, probably due to the lack of a susceptible murine model for this Leishmania species. The golden hamster appears as the most susceptible model for species from Viannia subgenus but the absence of specific commercial immunological reagents to this animal model limits its utilization. Besides that, the available studies have different infection protocols with variances in clinical features and the number of innoculated parasites is usually high, leading to the visceralization of Leishmania. This study aimed to investigate the innoculum that ensures infection without leading to an exacerbated disease in a well standardized innocula conditions and analyse the clinical and immunopathological features associated with each one. For that, groups of five animals in four independent experiments were intradermally infected with 104, 105 and 106 promastigotes from L. braziliensis. Lesion development was accompanied for 105 days and after that skin of infected site, draining lymph node, spleen and sera were collected for evaluation of final parasite load, spleen visceralization, cytokine expression, histopathological features and levels of IgG anti-Leishmania. Our results showed that outcome of skin lesions was inversely proportional to innoculum burden and that final lesion size varied among 104 and 105 or 106 infected animals, but not between 105 and 106 ones. Clinical aspects of lesions also varied with innoculum, which 104 animals presented more nodular lesions and 106 more ulcerated lesions. Despite difference in the number of parasites inoculated, final parasite load was the same among the three innocula. Cytokine expression and levels of anti-Leishmania IgG presented high levels in all infected animals, but with no statistical differences among different innocula. Histopathological analysis revealed a mild inflammatory involvement in skin of 104 infected animals, while 105 and 106 presented elevated degree of tissue damage. Finally, visceralization was directly proportional to the innoculum burden, less frequently observed in 104 infected animals, with high spleen commitment between 106 animals. In summary, different numbers of inoculated parasites influences disease outcome, clinical presentation, final lesion size and degree of tissue damage among innocula but not final parasite load, cytokine expression and IgG anti-Leishmania levels. These results indicates that 104 inoculum generates more benign lesions and a less systemic commitment and that modulation of immune response to different parasites innoculated occurs in the early phase of infection and dictates the establishment and magnitude of the chronic phase of disease.

Made available in DSpace on 2014-07-22T13:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf: 2136659 bytes, checksum: 65e880db1ab1d3e228d81f13c3c71081 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf.txt: 205495 bytes, checksum: f34784c76df3529d6b7191e82d533e3c (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/talita_braga_ipec_dout_2011.pdf.jpg: 1358 bytes, checksum: 91aa2a1eacf705026ff4acca258f2bdc (MD5) Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / Pacientes com leishmaniose cutânea (LC) apresentam variada resposta à terapêutica com antimoniais pentavalentes, desde a cura clínica até a falha terapêutica e reativação da doença. Aspectos relacionados ao hospedeiro, aos parasitos, aos diferentes fármacos e aos diferentes esquemas terapêuticos podem influenciar nesse desfecho. No estado do Rio de Janeiro, tem sido relatada resposta terapêutica favorável a baixas doses de antimoniais (5mg Sbv/kg/dia). É possível que esse resultado esteja relacionado a características genéticas das subpopulações de Leishmania braziliensis que circulam nesse Estado. Neste estudo investigou-se a variabilidade genética e a sensibilidade in vitro ao antimoniato de meglumina de amostras de L. braziliensis, comparando isolados obtidos de pacientes com LC respondedores ou não respondedores ao tratamento com 5mg Sbv/Kg/dia. Foram estudadas amostras de pacientes diagnosticados no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses (Vigileish) do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas - Fundação Oswaldo Cruz entre 1999 e 2011. Utilizamos uma amostra de conveniência compreendendo 54 isolados recuperados do banco de cepas do Vigileish, as quais foram distribuídas em quatro subgrupos obedecendo a critérios de inclusão: RRJ) Respondedores ao primeiro curso de tratamento, com infecção adquirida no estado do Rio de Janeiro; NRRJ) Não respondedores ao primeiro curso de tratamento, com infecção no estado do Rio de Janeiro; ROE) Respondedores ao tratamento, com infecção adquirida em outros estados brasileiros e NROE) Não respondedores, com infecção em outros estados brasileiros A metodologia utilizada compreendeu inicialmente a caracterização das amostras pela técnica de isoenzimas e após, avaliação da sensibilidade ao antimoniato de meglumina por diluição limitante (DL50) utilizando formas promastigotas e análise da variabilidade genética por Low-Stringency Single-Specific-Primer (LSSP-PCR). Dados clínicos e laboratoriais relacionados ao diagnóstico dos pacientes e aos resultados obtidos neste estudo foram analisados estatisticamente por cálculos em Excel e usando o programa GraphPadPrism 5.0. Os níveis da dose letal de 50% (DL50) das amostras variaram, respectivamente, de 1.9 a 6.0 mg/mL e de 2.3 a 6.4 mg/mL para pacientes respondedores ao tratamento e para pacientes não respondedores, e os valores médios para cada grupo apresentaram diferença significativa (p=0,0007). A diferença se manteve quando os grupos foram analisados separadamente por local de origem Entretanto, não foi possível associar tal resultado a padrões genéticos dos parasitos estudados após análise dos dendrogramas gerados pela técnica de LSSP-PCR. Os valores médios da Intradermorreação de Montenegro (IDRM) foram significativamente maiores em pacientes respondedores (p= 0,0301). É possível que, no grupo estudado, fatores relacionados ao hospedeiro sejam mais importantes para variação da resposta terapêutica que os fatores genéticos do parasito e que o resultado da IDRM possa ser um indicativo de resposta terapêutica na LC / Patients with cutaneous leishmaniasis (CL) have varied response to the therapy with pentavalent antimonials, from clinical cure to therapeutic failure and reactivation of the disease. Aspects related to the host, to parasites, to different drugs and different therapeutic schemes can influence this outcome. In Rio de Janeiro State, good therapeutic response with low doses of antimonials (5 mg Sbv/kg/day) has been reported. It is possible that this result is related to genetic characteristics of Leishmania braziliensis subpopulations circulating in that State. This study investigated the in vitro sensitivity of samples of L. braziliensis to meglumine antimoniate, as well as their genetic variability, comparing isolates obtained from CL responder patients or unresponders to treatment with 5 mg Sbv/kg/day. These patients were diagnosed at the Leishmaniasis Surveillance Laboratory (Vigileish) at the Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas – Fundação Oswaldo Cruz, between 1999 and 2011, and parasite strains obtained from samples of their skin lesions were studied. We used a convenience sample comprising 54 isolated retrieved from the Vigileish archived strains, which were distributed in four subgroups according to the following inclusion criteria: RRJ) Responders to the first course of treatment, with infection acquired in the State of Rio de Janeiro; NRRJ) Unresponders to the first course of treatment, with infection in the State of Rio de Janeiro; ROE) Responders to the treatment, with infection acquired in other Brazilian States and NROE) Unresponders, with infection in other Brazilian States. The methodology comprised initially the characterization of the samples by isozymes technique and after, assessment of sensitivity to meglumine antimoniate by limiting dilution using promastigote forms and analysis of genetic variability by Low- Stringency- Single-Specific Primer (LSSP-PCR). Clinical and laboratory data related to diagnosis of patients and the results obtained in this study were statistically analyzed through Excel calculations and using the program Graph Pad Prism 5.0. The levels of the 50% lethal dose (LD50) of the samples varied from 1.9 to 6.0 mg/mL and from 2.3 to 6.4 mg/mL for Responder patients and for Unresponder patients, respectively, and the results for each group presented significant difference (p = 0.0007). The difference persisted when the groups were analyzed separately according to the origin location. However, it was not possible to associate this result to the parasites genetic patterns after analysis of dendrograms generated by the LSSP-PCR technique. The average values of Montenegro Skin Test (MST) were significantly higher in Responder patients (P = 0.0301). It is possible that, in the studied groups, host-related factors are more important for variation of therapeutic response than the parasite genetic factors, and the result of MST can be an indication of the therapeutic response in CL.

Made available in DSpace on 2014-07-22T13:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/cibele_batista_ipec_dout_2011.pdf.: 1054055 bytes, checksum: 3e8ffa033cdb2ac5433c1bd7c000c340 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/cibele_batista_ipec_dout_2011.pdf.txt: 208405 bytes, checksum: df5f985b0550f7846d4f3ebe36113cfa (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/cibele_batista_ipec_dout_2011.pdf.jpg: 1383 bytes, checksum: e38396041280b258cc0393d9b1a51e7e (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / O fármaco de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses é o antimônio pentavalente e apesar de seus efeitos tóxicos, ainda se mostra a mais efetiva entre as drogas disponíveis. A leishmaniose tegumentar americana (LTA) apresenta-se como uma doença infecciosa com diferentes formas clínicas. A resposta ao tratamento com antimoniais pentavalentes é variável e pode resultar em cura clínica, falha terapêutica ou reativação da doença após resposta favorável inicial. O objetivo deste estudo foi verificar a variabilidade genotípica e a sensibilidade ao antimonial pentavalente in vitro de amostras de Leishmania sp. obtidas de pacientes com LTA. Na primeira etapa um \201Cscreening\201D inicial foi realizado em amostras de pacientes com evoluções clínicas típicas e atípicas da LTA no estado do Rio de Janeiro. Foram detectados nove genótipos sem associação com a evolução clínica da LTA Um novo estudo comparando pares de isolados antes do tratamento (A) e após o insucesso terapêutico ou reativação das lesões cutâneas (B) de um mesmo paciente, através da técnica de LSSP-PCR, detectou polimorfismo genético na maioria das amostras pareadas (A e B). Sete destes pares foram expostos a diferentes concentrações de antimônio pentavalente in vitro. Sob as condições do nosso estudo, formas promastigota e amastigota (A e B) foram sensíveis ao glucantime in vitro, no entanto os valores de IC50 obtidos com formas promastigotas foram muito variáveis. Nas formas amastigotas, as amostras B apresentaram valores de IC50 mais elevados que as amostras A, em quatro dos sete pacientes avaliados Estes resultados sugerem que as amostras isoladas destes quatro pacientes após falha terapêutica ou reativação são mais resistentes in vitro ao antimônio pentavalente. No entanto, todos os pacientes curaram após retratamento final. Dentro da complexa relação parasitohospedeiro, os resultados apresentados neste estudo sugerem que fatores tanto do parasito como do hospedeiro exerçam papel semelhante na evolução favorável ou não da LTA / The drug of first choice for the treatment of leishmaniasis is the pentavalent antimony and despite its toxic effects, it still shows to be the most effective among the available drugs. American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infectious disease with different clinical forms. The response to treatment with pentavalent antimonials is variable and can result in clinical cure, therapeutic failure or reactivation of the disease after initial favorable response. The aim of this study was to verify the genotypic variability and sensitivity to pentavalent antimony in vitro in samples of Leishmania sp. obtained from patients with ATL. In a first step, an initial screening was performed on samples of patients with typical and atypical clinical development of ATL in the state of Rio de Janeiro. Nine genotypes were detected without association with clinical development of ATL. A new study comparing pairs of isolates before treatment (A) and after therapeutic failure or reactivation of cutaneous lesions (B) of the same patient by LSSP-PCR technique detected genetic polymorphism in most paired samples (A and B). Seven of these pairs were exposed to different concentrations of pentavalent antimony in vitro. In the conditions of our study, promastigote and amastigote forms (A and B) were sensitive to meglumine antimoniate in vitro, however the IC50 values obtained with promastigotes were highly variable. In amastigotes forms, the B samples demonstrated IC50 values greater than the A samples in four of seven patients. These results suggest that the strains isolated from these four patients after treatment failure or reactivation in vitro can be more resistant to pentavalent antimony. All patients were cured after final retreatment, five of them with second choice drugs. Regarding the complex host-parasite relationship, the results verified here suggest that factors of the parasite and also of the host play similar role in the response, favorable or not, in the ATL.

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.txt: 135213 bytes, checksum: 5eb01e27d296b3812060dc1731d17b03 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.jpg: 1359 bytes, checksum: cdb43a52a4259c711a5d91bfbc82d127 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load

Made available in DSpace on 2014-12-22T16:37:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 livia_carvalho_ipec_mest_2012.pdf: 2880203 bytes, checksum: 7bd6bd57b25b05667dce1ddd625d140a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-08-11 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) apresenta formas clínicas variadas, podendo simular outras doenças. A forma esporotricóide da leishmaniose é relativamente incomum, e apresenta-se como úlcera de inoculação com nódulos e/ou gomas ao longo de trajeto linfático. Tal apresentação torna-se particularmente relevante no contexto da epidemia de esporotricose vivenciada no Rio de Janeiro há pouco mais de uma década, pois ambas as enfermidades compartilham espaços físicos semelhantes neste estado. No intuito de compreender melhor a forma esporotricóide da LTA (LE), em especial o papel da resposta imune celular na determinação desta apresentação clínica peculiar, estudamos o comportamento clínico, epidemiológico e imunológico in situ destes pacientes, comparando os resultados obtidos com os de pacientes que apresentam formas clínicas típicas de leishmaniose cutânea (LC). O estudo compreendeu 494 pacientes consecutivamente atendidos no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC), Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), Rio de Janeiro, Brasil, entre janeiro de 2004 e dezembro de 2010, tendo sido excluídos os pacientes com leishmaniose mucosa e com leishmaniose difusa anérgica atendidos no período, e foi dividido em duas etapas Na primeira, foi feita uma análise clínica, comparando-se as características clínicas e epidemiológicas de 23 pacientes com diagnóstico de LE e 471 pacientes com LC. Demonstrou-se que 14 (60,9%) pacientes de LE eram do sexo feminino; a média de idade era de 44,74 anos; doze pacientes (52,2%) tiveram lesões localizadas em membros superiores (p = 0,037). Já no grupo com LC predominava o sexo masculino, com 304 (64,5%) pacientes (p = 0,024); a média de idade era de 35,94 anos (p = 0,032); e as lesões localizavam-se nos membros inferiores em 38% dos casos (p = 0,048). A distribuição entre os sexos, a idade e a localização das lesões foram consideradas significativamente diferentes entre os dois grupos. Na segunda etapa, realizou-se a análise imunohistoquímica de fragmentos obtidos através de biópsia de lesões cutâneas de 15 pacientes com LE comparados com os de 30 pacientes de LC. Observou-se que o infiltrado inflamatório, de distribuição heterogênea nas lesões de pacientes com LC, era mais intenso nas lesões dos pacientes com LE, que apresentavam ainda grande quantidade de tecido fibrótico Observamos elevação significativa do percentual de neutrófilos (média LE = 21,21; LC = 13,53; p=0,019), maior intensidade da Óxido Nítrico Sintase 2, e diminuição da concentração de células Bcl2 (média LE = 22,58; LC = ix 32,98; p=0,036), conferindo à forma esporotricóide de LTA um caráter mais inflamatório e destrutivo quando comparada com a forma típica da doença. Os resultados demonstram que a LTA esporotricóide pode se assemelhar clínica e imunologicamente com a esporotricose cutaneolinfática, sugerindo-se um estudo comparativo entre ambas / American Tegumentary Leishmania sis (ATL) has varied clinical presentations and can mimic other diseases. The sporotrichoid form of leishmaniasis is relatively uncommon and clinically may presents as an ulcer with nodules and / or gums along lymphatic pathways . This presentation is parti cularly relevant in the context of the epidemic of sporotrichosis in Rio de Janeiro State experienced for a little more than a decade, because both diseases share endemic areas there. In order to better understand sporotrichoid leishmaniasis (SL), in parti cular the role of cellular immune response in determining this peculiar clinical presentation , we studied the clinical , epidemiological and immunological in situ behavior of these patients , comparing the results with those of patients presenting typical cl inical forms of cutaneous leishmaniasis ( CL). T he study comprised 494 consecutive patients treated at the Leishmaniasis Surveillance Laboratory at Evandro Chagas Clinical Research Institute ( IPEC), Oswaldo Cruz Foundation ( FIOCRUZ), Rio de Janeiro, Brazil, between January 2004 and December 2010 ; patients with mucosal leishmaniasis and cutaneous diffuse anergic leishmaniasis attended at this period of time were excluded. It was divided into two steps. At first a clinical analysis was made, comparing the clinical and epidemiological characteristics of 23 patients with S L and 471 patients with C L . I t was demonstrated that 14 (60.9 %) of the SL p atients were female; their average age was 44.74 years; twelve patien ts (52.2 %) had lesions in the upper limbs ( p = 0.037) . In the CL group males predominated , with 304 ( 64.5% ) of the patients ( p = 0.024); the average age was 35.94 years ( p = 0.032); and lesions were located in the lower limbs in 38% of cases ( p = 0.048) . G ender distribution , age and location of the lesions were considered significantly different between the two groups. In the second step , immunohistochemical analysis of lesion samples from skin lesions in 15 patients with S L was performed and compared with those of 30 C L patients . I t was observed that the inflammatory infiltrate , which was heterogeneously distributed in the lesions of patients with C L, wa s more intense in lesions of patients with SL , which additionally had large amounts of fibrotic tissue. We observed an increase in the percentage of neutrophils (mean SL = 21.21; C L = 13.53; p = 0.019) , greater intensity of nitric oxide synthase 2 , and decreased concentration of Bcl2 cells (mean SL = 22.58; LC = 32.98; p = 0.036) , giving the SL form more in flammatory and destructive characteristics when compared with the typical form of the disease. The results showed important differences in the characterization of clinical presentation of ATL that can be useful during the diagnostic procedures

Made available in DSpace on 2014-12-22T16:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mirian_melgares_ipec_mest_2012.pdf: 999218 bytes, checksum: 95c75bcb7288ee30a20fc9109f4e84c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Na atualidade o tratamento de escolha para a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) continua sendo os antimoniais pentavalentes com doses de 10 a 20mg Sb5+/kg/dia, apesar dos relatos de baixa efetividade e de elevado número de efeitos adversos, inclusive óbito. Este estudo teve como objetivo descrever e comparar a efetividade e a segurança dos esquemas contínuo e intermitente com antimoniato de meglumina na dose de 5mg Sb5+/Kg/dia para o tratamento de pacientes com a forma mucosa ou cutâneomucosa (LM/LCM) da LTA. Trata-se de um estudo descritivo e retrospectivo, tipo série de casos acompanhados longitudinalmente. Os dados foram coletados dos prontuários dos pacientes com LM/LCM atendidos no Serviço de Otorrinolaringologia do Laboratório de Vigilância em Leishmanioses-Instituto de Pesquisa Evandro Chagas,Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil, entre 1º de outubro de 1998 e 31 de setembro de 2008 e tratados com baixa dose de antimoniato de meglumina, de forma contínua ou intermitente (em séries com intervalos de 10 dias de descanso) Nesse período, 102 pacientes apresentaram LM/LCM. Destes, 63 (61,8%) foram incluídos neste estudo. A maioria dos pacientes eram homens com provável local de infecção na região Sudeste do Brasil. Tanto o acometimento nasal quanto a forma cutâneo-mucosa concomitante foram os mais frequentes. Os pacientes submetidos ao tratamento em séries eram na maioria mais idosos e com mais comorbidades. Ambos os esquemas terapêuticos apresentaram boa efetividade com reduzido número de efeitos adversos. Mesmo nos pacientes com necessidade de retratamento, estes esquemas se mantiveram bem tolerados e eficazes, com 95,2% de sucesso terapêutico. Em ambos os grupos de tratamento a dose de 5mg Sb5+/kg/dia se mostrou eficaz e segura, sem indício de resistência ao antimoniato de meglumina nem de indução a falha terapêutica no retratamento dos pacientes com Anfotericina B / At the present time, the treatment of choice for American Tegumentary Leishmaniasis (LTA) continues being the pentavalent antimony with doses of 10 20mg Sb5+/kg/day, althoug h the stories of low effectiveness and the raised number of adverse effects, including death. This study had as objective to describe and to compare the effectiveness and the security of continuous and intermittent treatment with Meglumine Antimoniate in the dose of 5mg Sb5+/Kg/day in patients with the mucous form or cutaneous - mucosal (LM/LCM) of the LTA. It is a descriptive and retrospective study, type series of longitudinally followed cases. The data had been collected of handbooks of patients with LM/LCM taken care in Otolaringology Service of the Laboratory of Monitoring in Leishmaniosis - Pesquisa Evandro Chagas Institude, Oswaldo Foundation Cross, Rio De Janeiro, Brazil, between 1º of October, 1998 and 31 of September, 2008 and treated with lo w dose of meglumine antimoniate, of continuous or intermittent form (in series with intervals of 10 days of rest). In this period, 102 patients had presented LM/LCM. Of these, 63 (61.8%) had been enclosed in this study. The majority of the patients were me n with probable place of infection in the Southeastern region of Brazil. Both the nasal involvement and mucocutaneous form were the most frequent concomitant . The patients submitted to the treatment in series were older in the majority and with much more c omorbidity. Both treatment presented good effectiveness with reduced number of adverse effects. Although, in the patients when retreat was necessity, these treatments were well tolerated and efficient, with 95,2% of the terapeutical success. In both groups the dose of 5mg Sb5+/kg/ day showed efficient and insurance; without indication of resistance to the meglumine antimoniate nor induction to the therapeutical imperfection in the retreat of the patients with Anphotericin B

Made available in DSpace on 2014-10-07T16:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 66913.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-05T15:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leonardo_quintella_ipec_dout_2010.pdf: 1999651 bytes, checksum: d5134bebbcaaadc74b1e395bf121db85 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose cutânea (LC) se caracteriza por lesões granulomatosas, comumente ulceradas, e a esporotricose é importante diagnóstico diferencial. O presente trabalho objetivou determinar alterações histopatológicas úteis para essa diferenciação e relatar um caso de LC em que houve hiperplasia pseudoepiteliomatosa exuberante que foi confundida com carcinoma de células escamosas. Foi realizado um estudo das alterações histopatológicas de 119 lesões cutâneas ativas de esporotricose em lâminas coradas pela hematoxilina e eosina e, posteriormente, uma comparação entre as alterações em 171 lesões ativas de LC e 97 de esporotricose em que não se encontrou o microorganismo ao exame histopatológico. Todos os casos foram diagnosticados pelo isolamento do agente em cultura A esporotricose se caracterizou histopatologicamente por uma dermatite difusa granulomatosa supurativa com necrose. A LC apresentou granulomas dos tipos \201Cclareira de Montenegro\201D e \201Ctuberculóide\201D e degeneração da matriz extracelular de forma significativamente mais freqüente do que a esporotricose. A esporotricose apresentou granulomas dos tipos \201Csupurativo\201D e \201Cestrelado\201D, células gigantes de diferentes tipos, granulomas associados a tecido de granulação e abscessos não associado aos granulomas de forma significativamente mais freqüente do que a LC. Uma análise múltipla dessas alterações por regressão logística demonstrou que elas podem distinguir as duas doenças corretamente em cerca de 90% dos casos. Assim, o exame histopatológico pode fornecer informações importantes na condução do diagnóstico diferencial entre a LC e a esporotricose. A hiperplasia pseudoepiteliomatosa na LC pode simular um carcinoma de células escamosas / Cutaneous leishmaniasis (CL) is characte rized by granulomatous lesions, often ulcerated, and sporotrichosis is an important differential diagnosis. This study aimed to determine histopathological changes that coul d assist in this differentiation and to report a case of CL which presented ex uberant pseudoepitheliomatous hyperplasia thas was mistaken for squamous cell carc inoma. A study of histopathological changes of 119 active cutaneous lesions of sporotrichosis in hematoxylin-eosin stained slides was conduct ed, and then a comparison between the changes in 171 CL and 97 sporotrichosis active lesions in which the microorgani sm was not found on histopathological examination. All cases were diagnosed by is olation of the agent in culture. Sporotrichosis was histopathologically characteri zed by a diffuse suppurative granulomatous dermatitis with necrosis. CL showed granuloma of "Montenegro clearing" and "tuberculoid" types and degeneration of extracellular matrix significantly more frequent than sporotrichosis. Sporotrichosis presented granulomas of "suppurative" and "stellate" types, giant cells of different types, granulomas associated with granulati on tissue, and abscesses not associated with granulomas significantly more frequent than CL. A multip le analysis of these changes by logistic regression demonstrated that they can correctly distinguish the two diseases in about 90% of cases. Thus, the histopathologic al examination can provide important information in guiding the differential diagnosis between CL and sporotrichosis. Pseudoepitheliomatous hyperplasia in CL can mimic squamous cell carcinoma

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-04-10T16:47:02Z No. of bitstreams: 1 Pablo Rafael Silveira Oliveira Genética....pdf: 12348951 bytes, checksum: 971e7af3b39a1bb56feeb26578855f45 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-04-10T16:47:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Pablo Rafael Silveira Oliveira Genética....pdf: 12348951 bytes, checksum: 971e7af3b39a1bb56feeb26578855f45 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T16:47:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pablo Rafael Silveira Oliveira Genética....pdf: 12348951 bytes, checksum: 971e7af3b39a1bb56feeb26578855f45 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose cutânea (LC) é a forma clínica mais comum do complexo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania. Interessantemente, alguns indivíduos infectados com espécies dermotrópicas do parasito não desenvolvem a LC, enquanto outros desenvolvem lesões crônicas. Os mecanismos envolvidos nesta variação permanecem amplamente desconhecidos, embora fatores genéticos do hospedeiro podem influenciar o risco de desenvolver a doença. No primeiro estudo apresentado nesta tese, foi mostrado que a sinalização IL-2/IL-2R desempenha um papel crucial na resposta imune contra espécies dermotrópicas de Leishmania. Os transcritos de vários genes da via de sinalização IL-2 são mais abundantes em úlceras cutâneas causadas por Leishmania braziliensis do que em amostras de pele normal de dadores não infectados. Um estudo de associação em famílias brasileiras (209 famílias nucleares) identificou dois polimorfismos no gene IL2RA associados à LC causada por L. braziliensis [rs10905669 (p = 3x10-4) e rs706778 (p = 3x10-4)]. Estes resultados foram replicados em uma segunda amostra brasileira (80 famílias nucleares) [rs10905669 (p = 0.08) e rs706778 (p = 0.04)] e em iranianos infectados com Leishmania tropica (coorte do tipo caso-controle composta por 236 indivíduos) [rs10905669 (p = 0.03) e rs706778 (p = 0.04)]. Uma metanálise dos três estudos confirmou que os alelos rs10905669 T (pcombinado = 6x10-7) e rs706778 T (pcombinado = 2x10-9) são fortemente associados a uma maior predisposição à LC. O alelo T do SNP rs706778 também foi associado a uma menor produção de IFN- por células mononucleares após a estimulação com extrato de Leishmania e com uma redução na ativação de células T regulatórias (Treg) FoxP3+ in vitro. Em conjunto, os dados apresentados no estudo 1 suportam a hipótese de que a via de sinalização IL-2 é implicada no desenvolvimento da LC, com possíveis consequências no controle da replicação do parasito e na imunopatologia associada à infecção. No segundo estudo desta tese, foi realizada uma análise de ligação genômica em famílias brasilieras expostas à L. braziliensis. Esta análise revelou um novo locus de suscetibilidade para a LC na região 10q21-q23 (LOD sugestivo = 2.39). Em toda esta região, os genes mais fortemente induzidos em lesões cutâneas (em relação aos controles) foram PRF1 (fold-change = 49.3) e SRGN (fold-change = 21.8). Interessantemente, ambos os genes codificam moléculas envolvidas nos mecanismos de citotoxicidade de células T CD8+ e de células natural killer. Por fim, dois polimorfismos na região do gene SRGN foram associados ao risco de LC em famílias brasileiras expostas à L. braziliensis [estudo primário (209 famílias): rs10998538 (p = 0.001) e rs12437 (p = 0.003); estudo de replicação (80 famílias): rs10998538 (p = 0.01) e rs12437 (p = 0.007)]. Por fim, os dados apresentados nesta tese apontam a serglicina (codificada pelo gene SRGN) e a via de sinalização IL-2 como alvos potenciais de novas estratégias de tratamento ou prevenção contra a LC em humanos. / Cutaneous leishmaniasis (CL) is the most common clinical form of leishmaniasis and can be caused by several dermotropic Leishmania species. Interestingly, some infected individuals do not develop cutaneous lesions, while others are severely affected. The basis of this variation remains largely unknown, although host genetic factors seem to influence disease risk. In the first study presented in this thesis, it was shown that IL-2 plays a crucial role in human immunity against dermotropic Leishmania species. It was observed that the transcripts of several genes of the IL-2 pathway were more abundant in skin ulcers caused by Leishmania braziliensis than in normal skin samples. A primary association study on Brazilians (754 individuals from 209 families) identified two polymorphisms in the IL2RA gene associated with CL caused by L. braziliensis [rs10905669 (p = 3x10-4) and rs706778 (p = 3x10-4)]. This result was confirmed in a second Brazilian sample (325 subjects from 80 nuclear families) [rs10905669 (p = 0.08) and rs706778 (p = 0.04)] and in Iranians infected with Leishmania tropica (236 individuals) [rs10905669 (p = 0.03) and rs706778 (p = 0.04)]. A meta-analysis confirmed that rs10905669 T allele (pcombined = 6x10-7) and rs706778 T allele (pcombined = 2x10-9) were strongly associated with increased susceptibility to CL. The T allele of rs706778 was also associated with lower IFN- production by peripheral blood mononuclear cells after Leishmania antigen stimulation and with reduced FoxP3+ Treg activation in vitro. Altogether, these data support the notion that the IL-2 signaling pathway is implicated in the development of cutaneous leishmaniasis and could be involved in the control of both parasite replication and infection-induced immunopathology. In the second study, a genome wide linkage (GWL) scan conducted in Brazilian multiplex families revealed a new susceptibility locus for CL on chromosome 10q21-q23 (suggestive LOD = 2.39). Interestingly, in this entire region, the most strongly induced transcripts were from PRF1 (fold change = 49.3) and SRGN (fold change = 21.8) genes, both encoding molecules involved in the cytotoxic mechanisms by a variety of cell types, including CD8+ T cells and natural killer cells. Finally, two polymorphisms in the SRGN region were associated with susceptibility to CL in Brazilian families exposed to L. braziliensis [Discovery study (209 families): rs10998538 (p = 0.001) and rs12437 (p = 0.003); Replication study (80 families): rs10998538 (p = 0.01) and rs12437 (p = 0.007)]. These data highlight the serglycin (encoded by the SRGN gene) and the IL-2 pathway as suitable targets for new strategies aimed to treat or prevent cutaneous leishmaniasis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-11-20T12:57:21Z No. of bitstreams: 1 Maira Garcia Saldanha. Avaliação da resposta...pdf: 27666774 bytes, checksum: 6259788e94ba7cdd8989c58b6e2433cf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-11-20T12:57:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Maira Garcia Saldanha. Avaliação da resposta...pdf: 27666774 bytes, checksum: 6259788e94ba7cdd8989c58b6e2433cf (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T12:57:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maira Garcia Saldanha. Avaliação da resposta...pdf: 27666774 bytes, checksum: 6259788e94ba7cdd8989c58b6e2433cf (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Introdução: A leishmaniose cutânea (LC) é a forma clínica mais frequente da leishmaniose humana, considerada um importante problema de saúde no Brasil. A infecção por Leishmania braziliensis induz um amplo espectro de lesões que pode se manifestar como uma única lesão cutânea localizada, geralmente em partes descobertas do corpo. Tem início com uma pápula, caracterizando a leishmaniose cutânea recente (LCR) e, na maioria dos casos, tende a desenvolver uma úlcera, representando a leishmaniose cutânea clássica (LCC). Pacientes com LCR apresentam um elevado número de parasitas na lesão e, frequentemente, não respondem positivamente à terapia padrão, desenvolvendo a lesão mesmo após o tratamento. Objetivo: Descrever de modo comparativo os aspectos histopatológicos na Leishmaniose Cutânea Recente e Leishmaniose Cutânea Clássica. Métodos: Secções histológicas obtidas de biópsias de pele de 15 pacientes com LCR e 28 com LCC, foram coradas em HE e mensuradas as áreas de inflamação e necrose nas diferentes fases da doença. Realizamos imunohistoquímica para marcação de células CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD68+ e CD138+. Além disso, utilizamos a microscopia eletrônica de transmissão para identificar morfologicamente as células, localizar amastigotas nos meios intra e extracelulares e reconhecer possíveis interações celulares. Resultados: Alterações na epiderme foram aparentes em ambas as fases e na derme, foram mais frequentes as células gigantes e os neutrófilos na LCC. O número de amastigotas foi maior na LCR, apresentando o parasita uma morfologia ultraestrutural íntegra, sugerindo viabilidade. A inflamação conduzida por um variado espectro celular apresentou uma predominância dos linfócitos T CD3+, com os subtipos CD4+ e CD8+, que aumentaram de acordo com o progresso da doença. O número de macrófagos CD68+ foi correlacionado positivamente ao número de amastigotas, nas fases tardias da doença. Além disso, houve uma correlação positiva entre as células CD68+ e o tamanho da lesão nas fases iniciais e, entre os macrófagos e a área de necrose, durante todo o curso da doença. Conclusão: A presença do parasita e a extensiva infiltração celular, com participação efetiva dos macrófagos, provocam alterações na epiderme e derme, contribuindo para o desenvolvimento da lesão cutânea e interferindo na resposta terapêutica. / Introduction: Cutaneous leishmaniasis (CL) is the most common clinical form of human leishmaniasis induced by L. braziliensis. It is considered a major health problem in Brazil. Leishmania braziliensis infection induces a large spectrum of lesions that can manifest as one localized skin lesion, usually undressed body parts. It starts with a papule in early cutaneous leishmaniasis (ECL) clinical manifestation and, in most cases, tends to develop an ulcer, in the late cutaneous leishmaniasis (LCL). ECL patients have a high number of parasites in the lesion, and often do not respond to standard therapy, developing the lesion even after treatment. Aim: To describe comparative the histopathological aspects of early cutaneous leishmaniasis compared to late ulcerated cutaneous leishmaniasis. Methods: Histological sections of skin biopsies from 15 ECL patients and 28 LCL, were stained with HE and measured areas of inflammation and necrosis in the different stages of the disease. We performed immunohistochemical for CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD68+ and CD138+. In addition, we used transmission electron microscopy to identify the cells morphologically, to locate amastigotes in intra and extracellular and to recognize possible cellular interactions. Results: Changes in the epidermis are apparent in both phases. In the dermis chronic inflammation with giant cells and neutrophils in the LCL. The number of amastigotes is higher in the ECL. Amastigotes are morphologically intact at ultrastructural analysis, suggesting their viability. Inflammation with a varied spectrum of cells, commonly with CD3+, CD4+ and CD8+ cells, increasing as the lesion progress. The number of CD68+ macrophages are predominat cells in the infiltrate and was positively correlated with number of amastigotes in the late stages of the disease. Furthermore, there was positive correlation between CD68+ cells and the lesion size in the early stages and between macrophages and necrotic areas during the disease progress. Conclusion: The presence of the parasite and the extensive cellular infiltration with the effective participation of macrophages, cause changes in the epidermis and dermis, contributing to the development of skin lesion and affecting the therapeutic response.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-01-07T16:38:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JeronimoMarteletoNunesRugani (1).pdf: 1205673 bytes, checksum: 9782a5cd43a0368938ad2c3c5d706db3 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-01-07T16:38:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JeronimoMarteletoNunesRugani (1).pdf: 1205673 bytes, checksum: 9782a5cd43a0368938ad2c3c5d706db3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T16:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_JeronimoMarteletoNunesRugani (1).pdf: 1205673 bytes, checksum: 9782a5cd43a0368938ad2c3c5d706db3 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou / No Brasil, de todas as espécies do gênero Leishmania, a mais frequentemente encontrada parasitando o homem é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Esta espécie pode causar um amplo espectro de manifestações, desde lesões únicas ao envolvimento mucoso, sendo esta última a complicação mais séria. Análises que visam acessar a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis são essenciais para o estudo de possíveis correlações entre manifestações clínicas de leishmaniose tegumentar americana (LTA) com parasitos geneticamente variantes e sua origem geográfica. O objetivo do estudo é analisar a variabilidade genética de isolados de L. braziliensis provenientes de diversas regiões de Minas Gerais. Foi realizado o diagnóstico clínico e molecular de indivíduos portadores de manifestações típicas e atípicas de várias regiões endêmicas do estado e os isolados separados em dois grupos amostrais: o grupo 1 contendo amostras de variadas macrorregiões do estado; e grupo 2 composto por amostras isoladas na terra indígena Xakriabá, em São João das Missões. A identificação específica de todas as amostras como L. braziliensis foi confirmada utilizando a técnica de PCR-g6pd. A análise da variabilidade genética foi realizada para os marcadores genéticos hsp70, Cpb, ITS1, g6pd e 6pgd. Na PCR-RFLP do hsp70 foram observados dois perfis de restrição: todas as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 do grupo 2 tiveram perfil de restrição indistinguível ao da cepa L. braziliensis referência, enquanto a maioria as amostras do grupo 2 exibiram perfil de restrição variante. O fragmento obtido pela PCR do hsp70 foi sequenciado e foram observados polimorfismos inclusive no sítio de restrição da enzima HaeIII. Na PCR-RFLP do Cpb, as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 do grupo 2 tiveram perfil de restrição indistinguível ao da cepa referência, enquanto a maioria das amostras do grupo 2 apresentaram perfil de restrição correspondente às demais espécies do subgênero Viannia. O sequenciamento do fragmento revelou polimorfismos inclusive no sítio de restrição da enzima TaqI. Na PCR-RFLP do ITS1 foi observado que as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 exibiram perfil de restrição semelhante a L. guyanensis, enquanto as amostras do grupo 2 perfil de L. braziliensis. As cepas MG19 e MG27 (grupo 2) exibiram perfis de restrição diferentes das cepas referência utilizadas. O sequenciamento do fragmento da PCR-6pgd exibiu polimorfismos que diferenciam entre as espécies L. braziliensis e L. guyanensis nas amostras estudadas. Os perfis de restrição e as sequências foram utilizadas em análises estatísticas de classificação por similaridade por partição e hierárquico. A análise de partição corroborou a divisão das amostras em dois grupos, sugerindo uma maior variabilidade genética entre as amostras do grupo 2. As análises aglomerativas suportaram a de partição onde foi observada associação do grupo 2 com a origem geográfica e presença de manifestações atípicas de LTA não sendo observada associação com número de lesões. As sequências foram utilizadas em análises filogenéticas onde foi observado que tanto utilizando somente L. guyanensis quanto outras espécies filogeneticamente mais distantes de L. braziliensis como outgroup, a divisão em grupos proposta foi suportada. A partir do painel de amostras de L. braziliensis estudado conclui-se que em Minas Gerais observamos a presença de um grupo de amostras geneticamente variantes, associadas ao perfil atípico de lesões e provenientes da região norte do estado. / Leishmania (Viannia) braziliensis is the most common species of Leishmania genus which parasites humans in Brazil. This species may present a huge spectrum of clinical symptoms, from single wounds to serious mucosal involvement, which is the most severe complication. Analyzes that assess the genetic variability of L. braziliensis are essential to clarify a possible correlation between atypical clinical manifestations of LTA with parasites genetically variants and their geographical distribution, and contribute to population structure studies of this species in Minas Gerais state. The aim of this study was to analyze the genetic variability of Leishmania (V.) braziliensis isolates from different regions of Minas Gerais State. Clinical and molecular diagnosis of patients with typical and atypical lesions from various endemic areas of Minas Gerais were carried out and the isolates were separeted into two sample groups: group 1 containing samples from various geographical regions of the state; and group 2 composed b isolates from Xakriabá Indigenous Reserve localized in São João das Missões district. The specific identification of samples was performed with PCR-G6PD method and L. braziliensis was confirmed in all of them. The analysis of genetic variability was carried out using genetic markers hsp70, Cpb, ITS1, G6PD and 6PGD. In PCR-RFLP of hsp70 two restriction patterns were observed: all samples from group 1 and MG15 and MG16 isolates of group 2 showed indistinguishable restriction profile to L. braziliensis reference strain, while most of the Group 2 samples exhibited a variant restriction profile. The hsp70 amplicon was sequenced and polymorphisms were observed even at the HaeIII restriction enzyme’s site. In PCR-RFLP of Cpb, samples of group 1 and MG15 and MG16 strains of group 2 restriction profile were indistinguishable to the reference strain L. braziliensis, while most of the group 2 samples showed restriction profiles identical to other species of the subgenus L . (Viannia). The sequenced fragment showed polymorphisms including one at restriction site of TaqI enzyme. Results of ITS1 PCR-RFLP from group 1 and MG15 and MG16 strains were a restriction profile similar to L. guyanensis specie, while Group 2 samples presented L. braziliensis profile. The MG19 and MG27 strains (group 2) exhibited different patterns of those reference strains. The sequencing of the PCR-6pgd showed inter-species polymorphisms. Restriction profiles and sequences were used in hierarchical, partition and similarity statistical analyzes. The partition analysis confirmed the division of samples into two groups, suggesting greater genetic variability between samples of group 2. The clustering analysis supported the partition where was observed an association of group to the geographical origin and presence of atypical manifestations of LTA, but no association was observed with number of wounds. The sequences were used in phylogenetic analyzes and was observed that both using only L. guyanensis as other more phylogenetically distant species L. braziliensis as outgroup, the division into two groups proposal was supported. Considering the L. braziliensis samples panel studied in this project it is possible to conclud that there is a group of samples genetically variants associated with atypical profile of wounds from the northern region of Minas Gerais state.