Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raphael Teixeira Verbinnen.pdf: 4011751 bytes, checksum: 6a77c544380be3240e2586a2ad753bff (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Given the humanity perception of necessity to preserve the environment and the incessant search for sustainable development, today the preservation of natural water sources is by far one of the most worrying factors for the preservation of life. Besides the most common aquatics pollutants, also there is one called emerging pollutants, which in recent decades have been detected due the technological advances. These involve mainly the organic micropollutants, which present the endocrine disrupters (ED's) main group. Among the ED's, the natural and synthetic sex steroids hormones have significant importance because their daily use in medicine, in the replacement therapy and contraceptive methods, which has contributed to the continuous release in domestic sewage. There are several consequences of this effect, including fertility declining, occurrence of various cancers and disorders in the development and homeostasis of organisms. The domestic and industrial sewage and leaching from agricultural fields fertilized with sludge from sewage treatment plants (STP's) are the main sources of contamination. This study allowed the chromatographic separation of the hormones estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrone (E1) and 17 α-ethynylestradiol (EE2) in relatively short duration (16,5 minutes), using the acetonitrile:water (ACN: H2O) mixture as mobile phase in gradient mode, constant flow of 1 mL min-1, injection volume of 20 μL, λ = 280 nm and temperature of 27 ºC. The method was developed in two laboratories, involving different instruments. Four procedures and two adsorbents (C18 e OPT) of SPE were tested. The sample preparation method, including dechlorination and the SPE procedure with C18 cartridge, resulted in the recovery values within the acceptable limit. The developed method was validated according to guidelines of the ANVISA`s Guide for Validation, and bioanalytical methods was adapted for this study. The method was then applied in the analysis of the natural (17β-estradiol, estrone and estriol) and the synthetic (17α-ethinylestradiol) hormone in drinking water from the city of São Luís Peaks were not identified for the substances studied, probably substances concentrations below the limits of detection and quantification of the method were found. / Diante da percepção do homem sobre a necessidade de se preservar o ambiente e da busca incessante pelo desenvolvimento sustentável, hoje a proteção das fontes de água natural é de longe um dos fatores mais preocupantes para a conservação da vida. Além dos poluentes aquáticos mais comuns, existem também os chamados poluentes emergentes, que nas últimas décadas vêm sendo detectados em função do aprimoramento de métodos e técnicas de detecção. Estes envolvem principalmente os micropoluentes orgânicos, que por sua vez apresentam os desreguladores endócrinos (DEs) como principal grupo. Dentre os DEs, os hormônios sexuais esteróides, naturais e sintéticos, têm significativa importância, devido ao seu uso diário na medicina, em terapias de reposição e métodos contraceptivos, o que tem provocado o contínuo lançamento em esgotos sanitários. Várias são as conseqüências do efeito destas substâncias, dentre elas: diminuição da fertilidade, ocorrência de cânceres diversos e perturbações no desenvolvimento e na homeostase de organismos. Os esgotos sanitários e industriais, além da lixiviação de campos de agricultura adubados com lodo proveniente de estações de tratamento de esgotos (ETEs) são as principais fontes de contaminação. Este trabalho possibilitou a separação cromatográfica dos hormônios estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrona (E1) e 17 α-etinilestradiol (EE2) em tempo relativamente curto (16,5 min), utilizando como fase móvel a mistura acetonitrila:água (ACN:H2O), em modo gradiente, fluxo de 1 mL min-1, λ = 280 nm e temperatura de 27 ºC. O método foi desenvolvido em dois laboratórios, envolvendo dois instrumentos diferentes. Foram testados 4 procedimentos e 2 adsorventes de extração em fase sólida (C18 e OPT). O método de preparo da amostra, incluindo a descloração e o procedimento de EFS, com cartucho C18 resultou em valores de recuperação dentro dos limites considerados adequados. O método desenvolvido foi validado segundo as orientações do Guia para Validação de Métodos Analíticos e Bioanalíticos publicado pela ANVISA, tomando-se por base os procedimentos para os métodos bioanalíticos, os quais foram adaptados para este estudo. O método foi, então, aplicado na análise dos hormônios naturais (17β-estradiol, estrona e estriol) e o sintético (17α- etinilestradiol) em água potável distribuída na cidade de São Luís. Para as amostras analisadas, não foram identificados picos referentes às substâncias de interesse, portanto pode-se afirmar que estas foram encontradas em concentrações inferiores aos limites de detecção e de quantificação do método.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERONICA ALVES GONCALVES DA SILVA.pdf: 6289705 bytes, checksum: 1c73081d0d3faa6d1cdc03eef3a8bc0c (MD5) Previous issue date: 2008-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Honey is a natural substance produced by bees and by your nature it is considered a healthy product. Presence of additives and/or preserve agents is not permitted. On apiculture, sulfonamydes are largely used on prevention and control of beehive disease, such as American foulbrood caused by Paenibacillus larvae. A consequence of this practice is the presence of these residues in honey, that should cause allergy reactions on consumers. In the last years, some publicated works is discussing the presence of antibiotic and sulfonamides residues in honey. In Brazil, the presence of antibiotics residues in food is controled by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) an by the Ministério da Agricultura, Pecuária e do Abastecimento (MAPA). The realization of monitoring contaminants residues in food programs, as well as the Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) from MAPA are essentials to the sanitary vigilance actions development, preventing and controlling possible hazard to the consumer health. This work has the objective the development and validation of multiresidue analytical method to the sulfadiazine, sulfathiazole, sulfadimedine and sulfadimethoxine determination in bee honey using high performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detector (DAD). The established methodology consisted on such conditions: solid phase extraction with Nexus sorbent, elution with acetonitrile 5 mL, and reconstitution with sodium acetate buffer (0,05 mol L-1) pH 4,5, with 1% methanol addition, separation on analytical column C18, acetonitrile and water mobile phase, on gradient elution mode and detection on 278 nm. The sample preparation consisted on the acid hydrolysis with hydrochloric acid 2 mol L-1 of a honey rate and adjust to pH 4,5 with sodium acetate buffer solution 0,05 mol L-1 pH 4,5. The method was validated and the results demonstrated accuracy and precision between the limits established by the current legislation. Good linearity range was encountered, obtaining recovery values varying from 41 to 89% and relative standard deviation estimative varying between 2,36 and 14% to the four studied compounds. The four sulfonamides detection limits in honey sample varying from 20 to 30 ^g kg-1 and the quantification limits varied from 60 to 90 ^g kg-1. Considering 100 ^g kg-1 the residue maximum limit established by the Brazilian legislation to the SDZ, STZ, SMZ and SDM total concentration, the described method permit suitable determination of the four sulfonamides in bee honey. / O mel é uma substância natural, produzida pelas abelhas e por sua natureza é considerado um produto saudável, não sendo permitido a presença de aditivos e/ou agentes conservadores. Na apicultura as sulfonamidas são muito utilizadas na prevenção e controle de doenças em colméias, como a cria pútrida americana causada pelo Paenibacillus larvae. Uma conseqüência desta prática é a presença destes resíduos no mel, o que pode causar reações alérgicas nos consumidores. Nos últimos anos, alguns trabalhos na literatura vêm discutindo a presença de resíduos de antibióticos e sulfonamidas no mel. No Brasil, a presença de resíduos de antibióticos nos alimentos é controlada pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) e pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e do Abastecimento (MAPA). A realização de programas de monitoramentos de resíduos de contaminantes em alimentos, assim como o Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) do MAPA são essenciais para que ações de vigilância sanitária possam ser desenvolvidas, prevenindo e controlando possíveis danos à saúde do consumidor. Este trabalho tem por objetivo desenvolver e validar um método analítico multiresidual para a determinação de sulfadiazina, sulfatiazol, sulfadimidina e sulfadimetoxina em mel de abelhas usando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de arranjo de fotodiodos (DAD). A metodologia estabelecida consistiu nas seguintes condições: extração em fase sólida com sorvente Nexus, eluição com 5 mL de acetonitrila e reconstituição com solução-tampão acetato de sódio (0,05 mol L-1) pH 4,5, com adição de 1% de metanol, separação em coluna analítica C18, fase móvel acetonitrila e água, no modo de eluição em gradiente e detecção a 278 nm. O preparo de amostra consistiu na hidrólise ácida com ácido clorídrico 2 mol L-1 de uma alíquota de mel e ajuste para pH 4,5 com solução tampão acetato de sódio 0,05 mol L-1 pH 4,5. O método foi validado e os resultados demonstraram exatidão e precisão dentro dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Foi encontrada boa faixa de linearidade, obtendo-se valores de recuperação que variaram de 41 a 89% e estimativa do desvio padrão relativo variando entre 2,36 e 14% para os quatro compostos estudados. Os limites de detecção das quatro sulfas em amostra de mel variaram de 20 a 30 ^g kg-1 e os limites de quantificação variaram de 60 a 90 ^g kg-1. Considerando o limite máximo de resíduo estabelecido pela legislação brasileira de 100 ^g kg-1 para as concentrações totais de SDZ, STZ, SMZ e SDM, o método descrito permite adequada determinação das quatro sulfas em amostras de mel de abelhas.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marconiel.pdf: 1507450 bytes, checksum: 7ab99051017cb605155d971d0a8bc70b (MD5) Previous issue date: 2009-01-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Honey is a product of proven therapeutic and nutritional properties, and which may act as an excellent bioindicator, given the way the bees gather and process the raw material used in its preparation. The monitoring of pesticide residues in honey is important both to control product quality in domestic and international markets, and in assessing the potential for contamination in areas near agricultural crops. Considering these facts, we developed a method for analyzing carbamate insecticides (carbaryl and carbofuran), organochlorine (aldrin and dieldrin), organophosphates (dimethoate and parathion methyl) and pyrethroid (permethrin), and the group of anilides herbicide (propanil) and fenoxiácidos (2,4-D) in honey. Hence, in this work the analytical conditions were established for the proper determination of residues of pesticides cited using the technique of solid phase extraction and liquid chromatography with UV detection with a diode array. The study aimed to compare different analytical conditions for the determination of pesticides, looking for better separation, sensitivity, precision and accuracy in the determination of pesticide residues in samples of honey bees. Standard solutions at concentrations ranging from 1.0 to 20.0 μ g mL-1 were evaluated in different mobile phases, using a C18 column (250 x 4.6 mm id, 5 μ m). The mobile phase composition more suitable was acetonitrile: water at pH 3.0 (acidified with acetic acid) in gradient mode, for monitoring the compounds at a wavelength of 220 nm. In the established conditions, except for aldrin and dieldrin and dimeotate, it was observed recoveries between 75.26% and 113.58%, with variation Coefficients Between 2.16% and 11.31% for concentration levels raging from 0:10 to 1.00 μ gg-1 (correlation coefficients between 0.9978 and 0.9998). Recoveries lower than 50% to the cited insecticides were observed when using ethyl acetate solvent extractor and the solvent elution by ethyl acetate, in such a way new studies can be done to obtain better recoveries for these compounds. / O mel é um produto de reconhecidas propriedades nutritivas e terapêuticas e, o qual pode atuar como um excelente bioindicador, dada à forma como as abelhas recolhem e processam a matéria-prima utilizada na sua elaboração. O monitoramento de resíduos de pesticidas no mel é importante, tanto para o controle de qualidade do produto nos mercados nacional e internacional, quanto na avaliação do potencial de contaminação em áreas próximas a cultivos agrícolas. Considerando tais fatos, foi desenvolvido um método para análise dos inseticidas carbamatos (carbaril e carbofurano), organoclorados (aldrin e dieldrin), organofosforados (dimetoato e parationa metílica) e piretróide (permetrina), além do herbicida do grupo das anilidas (propanil) e fenoxiácidos (2,4-D) em mel. Para tanto, neste trabalho foram estabelecidas condições analíticas para a adequada determinação dos resíduos dos citados pesticidas utilizando a técnica de extração em fase solida e cromatografia líquida com detecção espectrofotométrica com arranjo de diodos. O trabalho teve como objetivo comparar diferentes condições analíticas para a determinação dos pesticidas, buscando-se melhor separação, sensibilidade, precisão e exatidão na determinação de resíduos dos pesticidas em amostras de mel de abelhas. Soluções-padrão em concentrações variando de 1,0 a 20,0 μg mL-1 foram avaliadas em diferentes fases móveis, utilizando-se coluna C18 (250 x 4.6 mm d.i., 5 μm). A composição da fase móvel mais adequada foi acetonitrila:água em pH 3,0 (acidificada com ácido acético), em modo gradiente, monitorando-se os compostos em comprimento de onda de 220 nm. Nas condições estabelecidas, excetuando-se aldrin, dieldrin e dimetoato, foram observadas recuperações entre 75,26% a 113,58%, com coeficientes de variação entre 2,16% a 11,31%, para níveis de concentração entre 0,10 a 1,00 μg.g-1 (coeficientes de correlação entre 0,9978 e 0,9998). Recuperações inferiores a 50 % foram, entretanto, observadas para os citados inseticidas, utilizando-se solvente extrator acetato de etila e eluição com acetato de etila, sendo necessários novos estudos para obtenção de melhores recuperações para tais compostos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The culture of irrigated rice generates a great impact to the environment, both in the amount and the quality of waters. In this study, a methodology was developed and validated for the determination, in waters, of residues of the herbicides imazethapyr, bispiribac-sodium and pyrazosulfurom ethyl and of the fipronil insecticide, including its main metabolites: desulfynil, sulfide and sulfone. The herbicides were determined by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detection (HPLC-DAD), using a mobile phase of acetonitrile:water (55:45, v/v) and a stationary phase of Phenomenex C18. Fipronil and its metabolites were determined by Gas Chromatography with Electron Capture Detection (GC-ECD) using a DB-5 apolar column. For the pre-concentration of the samples, a solid phase extraction (SPE) with C18 cartridges of 500 mg was used. The herbicides were eluted with dichloromethane:methanol (65: 35, v/v) and fipronil and its metabolites were eluted with hexan:isopropanol (3:1, v/v). The parameters of validation of the method include analytical curve, linearity, limits of detection (LOD) and of quantification (LOQ), precision in terms of repetitivity and intermediate precision and accuracy (recovery). All the analytical curves presented r2 values > that 0.9949. The LOQs for the method, considering the 200-fold pre-concentration step, were 0.5, 0.0125 and 0.005 μg L-1 for herbicides, fipronil and its metabolites, respectively. The recoveries were between 90.8 and 114.2%, with RSDs lower than 13.4% for the herbicides, and between 81.3 and 112.3 %, with RSDs lower than 14.2% for fipronil and metabolites. The methodology was applied in a degradation study in irrigated rice farming, in which the individual pesticides had been applied in the harvests of 2004/05 and 2005/06. Residues of imazethapyr were found up to 28 days after its application, and those of bispyribac-sodium and pyrazosulfurom ethyl were found after up to 35 days. Also it was possible to observe the fast degradation of the fipronil insecticide and the consequent formation and degradation of its metabolites. Of the metabolites, fipronil desulfynil presented the greatest concentrations during the study. The method proved to be adequate for the analysis of pesticides in waters and all the validation parameters were within the limits suggested for validation of chromatographic methods. / O cultivo de arroz irrigado gera um grande impacto ao meio ambiente, tanto em quantidade como na qualidade das águas. Neste trabalho foi desenvolvida e validada metodologia para determinação, em águas, de resíduos dos herbicidas imazetapir, bispiribaque-sódico e pirazossulfurom etílico e do inseticida fipronil, incluindo seus principais metabólitos: desulfinil fipronil, fipronil sulfeto e fipronil sulfona. Os herbicidas foram determinados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detecção por Arranjo de Diodos (HPLC-DAD), utilizando-se fase móvel de acetonitrila:água (55:45, v/v) e fase estacionária Phenomenex C18. Fipronil e seus metabólitos foram determinados por Cromatografia Gasosa com Detecção por Captura de Elétrons (GC-ECD) utilizando-se coluna apolar DB-5. Para préconcentração das amostras utilizou-se Extração em Fase Sólida (SPE) com cartuchos C18 de 500 mg. Os herbicidas foram eluídos com uma mistura de diclorometano:metanol (65:35, v/v) e fipronil e seus metabólitos com uma mistura de hexano:isopropanol (3:1, v/v). Os parâmetros de validação do método incluem curva analítica e linearidade, limite de detecção (LOD) e de quantificação (LOQ), precisão (em termos de repetitividade e precisão intermediária) e exatidão (recuperação). Todas as curvas analíticas apresentaram valores de r2 maiores que 0,9949. Os LOQs para o método, considerando a etapa de pré-concentração de 200 vezes, foram de 0,5 μg L-1 para os herbicidas, de 0,0125 μg L-1 para fipronil e de 0,005 μg L-1 para seus metabólitos. As recuperações ficaram entre 90,8 e 114,2%, com RSDs menores que 13,4% para os herbicidas e recuperações entre 81,3 e 112,3% com RSDs menores que 14,2% para fipronil e metabólitos. A metodologia foi aplicada em estudo de degradação em lavouras de arroz irrigado, onde foram aplicados os pesticidas individuais, nas safras de 2004/05 e 2005/06. Foram encontrados resíduos de imazetapir até no máximo 28 dias e do bispiribaque-sódico e pirazossulfurom etílico até 35 dias após aplicação dos produtos. Também foi possível observar a rápida degradação do inseticida fipronil e conseqüente formação e também degradação dos seus metabólitos. Dos metabólitos, o desulfinil fipronil foi o que apresentou as maiores concentrações durante o estudo. O método mostrou-se adequado à análise dos pesticidas em águas e todos os parâmetros de validação encontram-se dentro dos limites sugeridos para validação de métodos cromatográficos.

Neste trabalho utilizou-se a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e a eletroforese capilar (EC) como ferramentas analíticas para avaliação de flavonoides em extratos hidrolisados de folhas de Rubus e de Morus. Os extratos foram preparados por hidrólise ácida em ultrassom e analisados por CLAE-DAD e EC-DAD. Os métodos elaborados foram validados e aplicados. Quercetina e canferol foram identificados nestes extratos por CLAE-DAD, EC-DAD e CLUE-DAD/EM. Em Rubus erythrocladus quantificou-se 848,43 ± 66,68 μg.g-1 e 304,35 ± 17,29 μg.g-1 de quercetina e canferol, respectivamente, por CLAE-DAD e 836,37 ± 149,43 μg.g-1 de quercetina por EC-DAD. Em Rubus idaeus quantificou-se 698,32 ± 1,29 μg.g-1 e 184,20 ± 4,34 μg.g-1 de quercetina e canferol, respectivamente, por CLAE-DAD. Em Morus nigra quantificou-se 2323,90 ± 145,35 μg.g-1 e 1446,36 ± 59,00 μg.g-1, de quercetina e canferol, respectivamente, por CLAE-DAD e 2552,82 ± 275,30 μg.g-1 e 1188,67 ± 99,21 μg.g-1 de quercetina e canferol, respectivamente, por EC-DAD. Não foi observada diferença significativa entre a quantificação por CLAE-DAD e por EC-DAD, porém o método por CLAE-DAD se mostrou muito mais sensível do que o método por EC-DAD. Os mesmos compostos também foram identificados nestes extratos por CLUE-DAD/EM. Por esta ferramenta analítica se pode observar uma diferença entre o perfil químico das amostras de Rubus e de Morus. Quatro amostras comerciais de folhas de amora foram analisadas, observando grandes variações nas concentrações de quercetina e de canferol presentes nestes extratos. Além disso, através de um screening de atividade antifúngico verificou-se que os extratos não hidrolisados de Rubus erythrocladus e Rubus idaeus apresentaram ação contra três espécies de fungos filamentosos patógenos humanos: Thichophyton rubrum 51, Microsporum gypseum 01 e Microsporum canis 40. / In this work we used the high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) as analytical tools to evaluate the hydrolyzed flavonoids in extracts of Rubus and Morus leaves. The extracts were prepared by acid hydrolysis in ultrasound and analyzed by HPLC- DAD and CE -DAD. The developed methods were validated and applied. Quercetin and kaempferol were identified in these extracts by HPLC-DAD, EC-DAD and UPLC-DAD/MS. In Rubus erythrocladus were quantified 848.43 ± 66.68 μg.g-1 and 304.35 ± 17.29 μg.g-1 of quercetin and kaempferol, respectively, by HPLC-DAD and 836.37 ± 149.43 μg.g-1 of quercetina by CE –DAD. In Rubus idaeus were quantified 698.32 ± 1.29 μg.g-1 and 184.20 ± 4.34 μg.g-1 of quercetin and kaempferol, respectively, by HPLC-DAD. In Morus nigra were quantified 2323.90 ± 145.35 μg.g-1 and 1446.36 ± 59.00 μg.g-1 of quercetin and kaempferol, respectively, by HPLC-DAD and 2552.82 ± 275.30 μg.g-1 and 1188.67 ± 99.21 μg.g-1 of quercetin and kaempferol, respectively, by CE -DAD. No significant difference in quantification by HPLC-DAD and CE-DAD was observed, but the HPLC-DAD method proved to be more sensitive than EC-DAD method. The same compounds were also identified in these extracts by UPLC-DAD/EM. Using this analytical tool, it was possible to observe a difference in the chemical profile of Rubus and Morus extracts. Commercial samples of blackberry leaves tea were analyzed by HPLC-DAD and it was observed big variation in the concentrations of quercetin and kaempferol in these extracts. Moreover, through a screening antifungal activity, it was found that no hydrolyzed extracts of Rubus idaeus and Rubus erythrocladus showed action against three species of filamentous fungal human pathogens: Thichophyton rubrum 51, Microsporum gypseum 01 and Microsporum canis 40.

(EN) This work has been focused on the development and optimization of analytical methodology, using high performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC-DAD) and high performance liquid chromatography with diode array and tandem mass spectrometric detection (HPLC-DAD-MS/MS) for the determination of amatoxins (α- and β-amanitin) and phalotoxins (phallacidin and phalloidin) in the crude extract from cap of Amanita phalloides with the option to later use for clinical purposes. In order to guarantee the reliability of the analytical results the influence of various parameters on the quality of the separation and the determination of toxins was studied. The developed HPLC-DAD method achieves good linearity in the concentrations range 1 - 100 µg/ml, with correlation coefficients higher than 0,997. Limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) were calculated for all the studied toxins with following values: for α-amanitin 0,90 µg/ml (LOD); 2,99 µg/ml (LOQ), β-amanitin 1,07 µg/ml (LOD); 3,56 µg/ml (LOQ), phallacidin 2,17 µg/ml (LOD); 7,26 µg/ml (LOQ) and phalloidin 0,79 µg/ml (LOD); 2,64 µg/ml (LOQ). Key words: Amanita phalloides,-amanitin,-amanitin, phallacidin, phalloidin, solid-liquid extraction, HPLC-DAD, HPLC-DAD-MS/MS .

O fungo entomopatogênico Beauveria felina produz as destruxinas, hexadepsipeptídeos cíclicos que apresentam diversas atividades biológicas, como por exemplo: atividade inseticida, fitotóxica, citotóxica contra células tumorais, atividade antiviral contra o vírus da hepatite B, dentre outras. Devido à atividade inseticida das destruxinas, os fungos que as produzem têm grande importância econômica. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar a otimização das condições de crescimento e produção das destruxinas pelo fungo Beauveria felina utilizando diferentes meios de cultivo, a fim de se isolar destruxinas em maiores quantidades para a avaliação de seu potencial tóxico. Foram utilizados métodos de planejamento experimental e análise multivariada para a otimização das condições de crescimento, resultando em três condições ótimas de cultivo para cada um dos meios de cultura MF, PDB e SBD. Em todas as condições ótimas de cultivo foram observadas destruxinas conhecidas, desconhecidas e destruxinas que não foram isoladas anteriormente de Beauveria felina. O cultivo de Beauveria felina no meio PDB foi o que mais apresentou destruxinas desconhecidas (5). Em seguida foi realizada uma otimização das condições de análise cromatográfica de destruxinas por CLAD-DAD-DELE-EM e a validação deste método. Uma das frações obtidas do meio de cultura de Beauveria felina apresentou atividade vermífuga contra Haemonchus contortus. Duas de suas frações purificadas, P1 (destruxina Ed1 - m/z 625 e pseudodestruxina B ou pseudodestruxina C - isobáricas, m/z 669) e P7 (destruxina D ou hidroxihomodestruxina B ou roseotoxina C - isobáricas, m/z 623), foram ativas contra o carrapato bovino Rhipicephalus microplus. / The entomopathogenic fungus Beauveria felina produces destruxins, cyclic hexadepsipeptides which have several biological activities, such as insecticidal, phytotoxic, cytotoxic against tumor cells, antiviral activity against hepatitis B virus, among others. Because of the insecticidal activity of destruxins, fungi that produce them have a considerable economic importance. Therefore the aim of this study was to optimize the conditions for the growth of Beauveria felina and its production of destruxins by using different culture media, in order to isolate larger quantities for the evaluation of their toxic potential. Experimental design and multivariate analysis were used for the optimization of growth conditions, resulting in three conditions for optimum growth for each of the culture media MF, PDB and SBD. Both known and unknown destruxins were observed in each of the optimal conditions, along with destruxins that were not previously isolated from Beauveria felina. The cultivation of Beauveria felina in PDB was the one that showed the largest amount of unknown destruxins (5). We then carried out an optimization of the chromatographic analysis of destruxins by HPLC-PDA-ELSD-MS and the validation of this method. One of the fractions obtained from the culture medium of Beauveria felina showed anthelmintic activity against Haemonchus contortus, while two of its purified fractions, P1 (destruxin Ed1 - m/z 625 and pseudodestruxin B or pseudodestruxin C - isobaric m/z 669) and P7 (destruxin D or hydroxyhomodestruxin B or roseotoxin C - isobaric m/z 623), were active against the cattle tick Rhipicephalus microplus.

Dietary food supplements are among the most rapidly growing sectors in the food product industry. The majority of consumers trust in the safety and efficacy of these products. For these reasons is a quality control required and analytical methodologies for this must be used. For identification and quantitative analysis four flavonoids diosmin, hesperidin, rutin and troxerutin in food supplements was used HPLC/MS method. For identification and quantitative analysis three carotenoids betacarotene, lutein and zeaxanthin in food supplements was used HPLC/UV/ViS/DAD method. Separation of flavonoids was achieved on the column ZORBAX POROSHELL 120 EC-C18 (50 x 4,6 mm, 2,7 um) and separation of carotenoids on the column ZORBAX SB CN (75 x 4,6 mm, 3,5 um). The amount of flavonoids and carotenoids in tablets and capsules was determined altogether in 12 different commercial preparations.

SILVA, Maria Nataniela da. Determinação de desreguladores endocrinos na água e no sedimentos do açude Santo Anastácio na cidade de Fortaleza/Ce. 2016. 96 f. Dissertação (Mestrado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T18:06:46Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:30:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) Previous issue date: 2016 / Natural and synthetic estrogens are naturally excreted by humans and some vertebrates. These emerging contaminants classified as endocrine disruptors (EDs) present, even in small quantities, in water and sediment are able to affect the endocrine system and the stages of growth and reproduction of aquatic organisms and humans. In this context, this study aimed to perform a physical-chemical and microbiological characterization of reservoir water from Santo Anastácio, located in Ceará, Brazil, and the develop and validate an analytical method using High-performance liquid chromatography with detector diode array (HPLC-DAD) for the determination of caffeine (CAF) and estrone hormones, 17β-estradiol, estriol (natural) and 17α-ethinylestradiol (synthetic) for water and sediment phase of reservoir water studied. The physicochemical parameters evaluated were phosphorus, chlorophyll A, pheophytin, nitrogen, chloride, sulfide, hardness, calcium, magnesium, pH, alkalinity, turbidity and total and dissolved solids. Microbiological characterization evaluated the presence of total and fecal coliforms. For the determination of EDs by HPLC-DAD was used to extract solid phase techniques (SPE) for water sample and QuEChERS for the sediment sample. The results of physicochemical analyzes indicated above the allowed values by CONAMA 357/05 for class 2, only to phosphorus and sulfide. Microbiological characterization indicated the presence of coliforms far above the values stipulated by CONAMA. In determining the DEs concentrations from 0.54 to 0.93 μg L-1 were detected caffeine in water, and 0.76 to 4.94 mg kg-1 17β estradiol and estriol in the sediment. Therefore, the water reservoir is unsuitable for direct consumption and recreation within the law. The validated analytical method was efficient for the determination of analytes can be used for routine analysis since there is no legislation to caffeine and EDs. / Estrógenos naturais e sintéticos são naturalmente excretados por seres humanos e alguns vertebrados. Estes contaminantes emergentes classificados como desreguladores endócrinos (DEs) presentes, mesmo em pequenas quantidades, na água e no sedimento são capazes de afetar o sistema endócrino e as fases de crescimento e reprodução de organismos aquáticos e humanos. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivos efetuar uma caracterização físico-química e microbiológica da água do açude Santo Anastácio, localizado no Ceará, Brazil, além de desenvolver e validar um método analítico empregando a cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjos de diodos (HPLC-DAD) para determinação da cafeína e dos hormônios estrona, 17β-estradiol, estriol (naturais) e 17α-etinilestradiol (sintético) na água e no sedimento do açude mencionado. Os parâmetros físico-químicos avaliados foram fósforo, clorofila A, feofitina, nitrogênio, cloreto, sulfeto, dureza, cálcio, magnésio, pH, alcalinidade, turbidez e sólidos totais e dissolvidos. A caracterização microbiológica avaliou a presença de coliformes totais e termotolerantes. Para a determinação dos DEs por HPLC-DAD utilizou-se as técnicas de extração em fase sólida (SPE) para a amostra de água e QuEChERS para a amostra de sedimento. Os resultados das análises físico-químicas indicaram valores acima do permitido pelo CONAMA 357/05, para classe 2, apenas para fósforo e sulfeto. A caracterização microbiológica indicou a presença de coliformes muito acima dos valores estipulados pelo CONAMA. Na determinação dos DEs foram detectados as concentrações de 0,54 a 0,93 μg L-1 de cafeína na água, e, 0,76 a 4,94 mg kg-1 do 17β estradiol e estriol no sedimento. Diante disso, a água do açude encontra-se inadequada para consumo direto e recreação dentro da legislação vigente. O método analítico validado mostrou-se eficiente para determinação dos analitos podendo ser utilizado para análises de rotina uma vez que não existe legislação para a cafeína e os DEs.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-04-07T13:49:01Z No. of bitstreams: 1 Luciane Bastos tese final.pdf: 3085064 bytes, checksum: 1832de4bdbd8e125b7f4a883a01cb07d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-05-10T17:26:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Luciane Bastos tese final.pdf: 3085064 bytes, checksum: 1832de4bdbd8e125b7f4a883a01cb07d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T17:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciane Bastos tese final.pdf: 3085064 bytes, checksum: 1832de4bdbd8e125b7f4a883a01cb07d (MD5) / A fritura é um processo rápido de preparação do alimento, resultando em produtos com aroma, sabor e textura agradável. As alterações que se processam em um óleo comestível durante o preparo de alimentos, são derivadas de reações hidrolíticas, térmicas e oxidativas. Entre os compostos formados durante a degradação dos óleos pode-se destacar os hidroxialquenais α, β- insaturados, devido a seus efeitos citotóxicos e mutagênicos, uma vez que eles podem interferir em uma ampla gama de atividades biológicas, incluindo a inibição de proteínas e a síntese de DNA. Esse trabalho teve como objetivo estudar a formação de compostos carbonílicos (CC), com ênfase nos hidroxialdeídos α, β- insaturados, na fração líquida do óleo quando submetido a aquecimento contínuo a temperatura típica de processo de fritura (180°C), na presença dos íons metálicos Fe(III), Cu(II) e Mn(II), em diferentes concentrações (10, 30 e 50 g.kg-1 de óleo) ao longo de oito horas de aquecimento.Para determinação dos CC, foi desenvolvida, validada e aplicada metodologia analítica por extração líquido-líquido e análise por UFLC-DAD-ESI-MS. No desenvolvimento do método foram avaliados: solvente extrator, volume do extrator, modo e velocidade de agitação e tempo de sonicação. Na validação do método foram avaliados o efeito da matriz, sensibilidade, seletividade, linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação, precisão e exatidão. Dentre os CC estudados foram identificados e quantificados dez: 4-hidroxi-2-trans- hexenal, 4-hidroxi-2-trans-nonenal, 4,5-epoxi-2-decenal, acroleína, 2-heptenal, 2,4- heptadienal, 2-octenal, 2,4-decadienal, 2-decenal e 2-undecenal. Além destes, o hidroxi-decadienal e o dihidroxi-decenal foram propostos como também sendo formados, baseando-se na análise dos espectros de massas dos picos cromatográficos. Durante o aquecimento, 4-hidroxi-2-trans-nonenal, 2,4-decadienal e 2,4-heptadienal foram os compostos que apresentaram as maiores concentrações médias nas oito horas de aquecimento. No estudo da influência dos metais, de um modo geral, a adição dos íons metálicos às amostras provocou um aumento nas concentrações dos CC, sendo que o 2-undecenal, 4-hidroxi-2-trans-hexenal e o 2- decenal foram os que tiveram os maiores aumentos relativos nas concentrações. Em termos de efeito catalítico, o cobre foi o metal que mostrou-se mais eficiente em promover um aumento nas concentrações, seguido do manganês, sendo que, em geral, esses efeitos eram superiores na concentração de 50 g.kg-1. Por outro lado, os íons metálicos estudados não afetaram significativamente a ordem de concentração com que os CC foram formados; entretanto, atuaram como catalisadores de reações oxidativas, acelerando o processo de degradação dos óleos vegetais e com isso aumentaram a formação de compostos secundários, como os compostos carbonílicos. Finalmente, cabe destacar as concentrações relativamente altas do 4-hidroxi-2-trans-nonenal, 2,4-decadienal e 4,5-epoxi-2- decenal, encontradas neste estudo na fração líquida do óleo de soja, tendo em vista sua alta toxicidade relatada e uma possível transferência para os alimentos em contato com o óleo. / The frying is a rapid process of preparing the food, resulting in products with nice aroma, flavor and texture. The changes that occur in the edible oil during food preparation are derived from hydrolytic, thermal and oxidative reactions. Among the compounds formed during the degradation of oils can highlight the α, β- unsaturated hydroxyalkenals, due to their cytotoxic and mutagenic effects, since they may interfere with a wide range of biological activities, including inhibition of protein and DNA synthesis. This work aimed to study the formation of carbonyl compounds, with emphasis on α, β- unsaturated hydroxyaldehydes present in soybean oil when subjected to the process continuous heating at typical frying temperature (180°C), in the presence of metal ions such as Fe (II), Cu (II) and Mn (II), in different concentrations (10, 30 and 50 g kg-1 oil) over eight hours of heating. For determination of carbonyl compounds in oil samples was developed, validated and applied the analytical method by liquid-liquid extraction and analysis by UFLC- DAD/ESI-MS. In developing the method were evaluated: solvent extractor, extractor volume, mode and rate of stirring and sonication time; in the validation of the method were evaluated the matrix effect, sensitivity, selectivity, linearity of the calibration curves, limits of detection and quantification, precision and accuracy. We identified and quantified ten CC: 4-hydroxy-2-trans-hexenal, 4-hydroxy-2-trans-nonenal, 4,5- epoxy-2-decadal, acrolein, 2-heptenal, 2,4-heptadienal, 2-octenal, 2,4-decadienal, 2- decadal and 2-undecenal. In addition, the hydroxy-dihydroxy-decadienal and decadal also been proposed as being formed, based on the analysis of the mass spectra of the chromatographic peaks. During heating, 4-hydroxy-2-trans-nonenal, 2,4- heptadienal and 2,4-decadienal were compounds which had the highest average concentration within eight hours of heating. In the study of the influence of metals, in general, the addition of metal ions to the samples caused an increase in the concentration of CC, wherein the 2-undecenal, 4-hydroxy-2-hexenal and trans-2- decadal were that had the greatest relative increases in concentrations. In terms of catalytic effect, copper is the metal which was more efficient at promoting an increase in concentration followed by manganese, and, in general, these effects were higher in concentration of 50 g kg-1. On the other hand, the metal ions studied did not significantly affect the order that the CC concentration were formed; however, acted as catalysts for oxidative reactions, accelerating the process of degradation of vegetable oils and thereby increased the formation of secondary compounds, such as carbonyl compounds. Finally, we highlight the 4,5-epoxy-2-decadal relatively high concentrations of HNE, 2,4-decadienal, and in this study the liquid fraction of soybean oil, given its high toxicity and reported a possible transfer to food in contact with the oil.