A Xylella fastidiosa é uma bactéria gram-negativa, colonizadora do xilema e é o agente responsável por doenças em plantas cultivadas. No Brasil, a principal doença causada por esta bactéria é a CVC (Clorose Variegada dos Citros), a qual traz grandes prejuízos à produção de laranja dos estados de São Paulo e Minas Gerais. Apesar do atual controle da doença, ainda não se desenvolveu um método específico para o controle da bactéria. Durante a interação planta-patógeno ocorre uma geração exacerbada de oxidantes por parte do hospedeiro, na tentativa de eliminar o patógeno de seu organismo. Dessa forma, os patógenos são expostos a hidroperóxidos derivados de ácidos graxos, formados a partir da ação de lipoxigenases ou ainda pela reação direta de lipídeos com espécies oxidantes. Durante o processo evolutivo, foram selecionados mecanismos de defesa contra estas espécies oxidantes por parte dos patógenos. Dentre estes mecanismos, encontra-se a enzima Ohr (Organic Hydroperoxide Resistance protein), uma peroxidase baseada em resíduos de cisteínas, dependente de grupos lipoil e que possui alta atividade frente à hidroperóxidos orgânicos. Esta proteína provavelmente atua na proteção da célula bacteriana e possui algumas particularidades que fazem dela um alvo em potencial para o desenvolvimento de drogas. Os objetivos deste projeto foram caracterizar possíveis substratos fisiológicos de Ohr de X. fastidiosa, e ainda, buscar moléculas capazes de inibir a atividade peroxidásica desta enzima. Inicialmente demonstramos que Ohr é capaz de reduzir hidroperóxidos de ácido graxo com alta eficiência (kcat/KM ~ 106 M-1.s-1)e, além disso, estes hidroperóxidos são capazes de inativar Ohr em um processo dose dependente, provavelmente devido à alta afinidade entre estes e a enzima. Porém, a enzima não apresentou atividade frente à hidroperóxido de fosfolipídeo (fosfatidilcolina) e hidroperóxido de colesterol. Ademais, elucidamos a estrutura de Ohr na conformação oxidada (ponte dissulfeto), auxiliando no entendimento da dinâmica do ciclo catalítico da enzima. Por fim, selecionamos um composto capaz de inibir a atividade peroxidásica de Ohr in vitro, e temos indícios de que este é capaz de afetar o crescimento bacteriano em situação de estresse oxidativo. / Xylella fastidiosa is a gram-negative bacterium that colonizes the xylem and is the causative agent for several plant diseases. In Brazil, the main disease caused by this bacterium is the CVC (Citrus Variegated Chlorosis), which provokes large losses to the orange production in São Paulo and Minas Gerais states. Despite the current disease control, it has not been yet developed a specific method to eliminate the bacterium. During the plant-pathogen interactions, hosts produce an exacerbated amount of oxidants, in an attempt to eliminate the pathogen. Among them, fatty acids hydroperoxides are formed by the lipoxygenase action or even by the direct reaction between lipids and oxidant species. During the evolutionary process, pathogen defense mechanisms against oxidative species have evolved. Among them, Ohr (Organic Hydroperoxide Resistance protein) that is a Cys-based, lipoyl dependent peroxidase, displaying high activity towards organic hydroperoxides. This protein probably plays a central role in oxidative stress response and presnts some particularities, which make it a potential target for drug design. The objectives of this project were to characterize possible physiological substrates of Ohr from X. fastidiosa and search for molecules capable of inhibiting its peroxidase activity. Initially, we demonstrated that Ohr reduced fatty acid hydroperoxides with high efficiency (kcat/KM ~ 106 M-1.s-1). Moreover, these hydroperoxides inactivated Ohr in a dose-dependent manner, probably due to the high affinity between them and the enzyme. However, the enzyme did not display any activity towards phospholipids (posphatidilcholine) hydroperoxides and cholesterol hydroperoxide. Besides, we elucidated the structure of Ohr in the oxidized form (disulfide bond), which gave us insights on the dynamics of structural elements in the catalytic site. Ultimately, we identified a compound that was able to inhibit the peroxidase activity of Ohr in vitro, and we gained evidences that this compound can affect the bacterial growth under oxidative stress.

Trata-se de um estudo exploratório, quanti-qualitativo, acerca do senescente cuidador de idoso dependente em domicílio, que teve como objetivos: identificar e avaliar as percepções sobre o cuidado e suas representações sociais no cotidiano do cuidador; identificar as alterações físicas e psicossociais vivenciadas por este, decorrentes do ato de cuidar; avaliar o grau de dependência dos idosos dependentes considerando o estado físico e mental. A Representação Social foi o referencial teórico escolhido e o método hermenêutico-dialético empregado para análise dos discursos. Os sujeitos do estudo foram 32 idosos, sendo 16 cuidadores e 16 dependentes, residentes na área urbana do município de Cascavel- PR inscritos no PSF e PAID, entre 60 a 96 anos de idade. A coleta de dados foi desenvolvida entre novembro de 2006 a janeiro de 2007, por meio da entrevista semi-estruturada. Os cuidadores possuíam entre 60 e 76 anos (média = 64,1 ± 17,3 anos), 81,2% eram mulheres, 41,2% cônjuges, 50,0% não freqüentaram escola e o período de cuidador variou entre três meses a 23 anos (média = 5,4 anos DP ±1,2 anos). A Escala de Depressão Geriátrica mostrou que 93,7% apresentavam grau de depressão leve e segundo o índice de Zarit, a maioria não apresentou sobrecarga provocada pelo ato de cuidar. Dentre os idosos dependentes, 12,5% estavam inscritos no PSF e 87,5% no PAID; com idade entre 60 e 96 anos (média = 71,4 21,2 anos), sendo 56,2% do sexo masculino. Seqüelas do acidente vascular cerebral foram encontradas em 31,2% dos idosos dependentes e quanto ao índice de Katz, 62,5% apresentaram o grau G. Os discursos deram origem as seguintes unidades temáticas: determinação do valor sócio-cultural; repercussão do cuidar no cotidiano do cuidador; a rede de apoio. Sentimentos como conformismo/resignação, medo da perda, espiritualidade, compromisso e compaixão, vínculos sociais relacionados a imposição familiar e pelo idoso dependente e as relações de gênero, foram identificados como determinantes na escolha do cuidador. Dentre as repercussões do cuidar no cotidiano, foram destacadas as alterações à saúde orgânica funcional; alterações emocionais e alterações na situação econômica. Quanto à rede de apoio, as unidades temáticas identificadas se relacionaram ao sistema de referência e contra referência e a capacitação do cuidador informal. Os resultados evidenciaram o estado de vulnerabilidade a qual o cuidador senescente encontrava-se exposto, revelando a inexistência de uma política social de apoio efetivo ao cuidador de idosos, bem como programas específicos voltados para esta necessidade. O modelo de assistência domiciliar no qual um membro da família é o cuidador principal e, em particular, o senescente, exige dos profissionais de saúde, em especial os enfermeiros, atuação mais efetiva e dinâmica, principalmente no que se refere a prevenção de desgastes, considerando que este se torna tão, ou mais vulnerável que o próprio doente / One is about a exploratory, quanti-qualitative study, concerning senescent caretaker of aged dependent in domicile, that had as objective: to identify and to evaluate the perceptions on the social care and its representations in the daily one of the caretaker; to identify the physical and psicossociais alterations lived deeply by this, decurrent of the act to take care of; to evaluate the degree of dependence of the aged dependents being considered the physical and mental state. The Social Representation was the theoretical referencial chosen and the used hermeneutic-dialétical method for analysis of the speeches. The citizens of the study had been 32 aged ones, being 16 caretakers and 16 dependents, residents in the urban area of the city of Cascavel- PR enrolled in PSF and PAID, enter the 60 96 years of age. The collection of data was developed between November of 2006 the January of 2007, by means of the half-structuralized interview. The caretakers heve been between 60 and 76 years (average = 64.1 ± 17,3 years), 81.2% were women, 41.2% spouses, 50.0% had not frequented school and the period of caretaker varied enters three months the 23 years (average = 5,4 years DP ±1,2 years). Tehe Geriatrical Depression Scale showed that 93.7% presented degree of light depression according to and index of Zarit, the majority did not present overload provoked for the act to take care of. Amongst the aged dependents, 12.5% were enrolled in PSF and 87.5% in the PAID; with age between 60 and 96 years (average = 71,4 (21,2 years), being 56.2% of the masculine sex. Sequels of the cerebral vascular accident had been found in 31,2% of the aged dependents and how much to the index of Katz, 62.5% had presented degree G. The speeches had given to origin the following thematic units: determination of the partene-culturall value; repercussion of taking care of in the daily one of the caretaker; the support net. Feelings as conformism/resignation, fear of the loss, spirituality, commitment and compassion, social bonds related the familiar imposition and for the aged dependent and the relations of sort, had been identified as determinative in the choice of the caretaker. Amongst the repercussions of taking care of in the daily one, the alterations to the functional organic health had been detached; emotional alterations and alterations in the economic situation. How much to the support net, the identified thematic units if had related to the system of reference and against reference and the qualification of the informal caretaker. The results had evidenced the vulnerability state which the caretaker senescent met displayed, disclosing the inexistence of one social politics of effective support to the caretaker of aged, as well as specific programs come back toward this necessity. The model of domiciliary assistance in which a member of the family is main cuidador e, in particular, senescent, demands of the professionals of health, in special the nurses, performance more effective and dynamics, mainly with respect to prevention of consumings, considering that this if becomes so, or more vulnerable than the proper sick person

This doctoral research has the purpose of articulating a consistent presentation of the Buddhist concept of selflessness as explained by the great Tibetan Buddhist scholar Tsongkhapa (Tibet, 13571419 CE), who composed some major philosophical masterpieces about this key Buddhist concept based on Ngrjuna´s (India, ca 150250 CE) famous Mla-madhyamaka-krik (MMK). Tsongkhapa presents himself as a follower of Ngrjuna, that is, as a proponent of the \'Middle Way\' (madhyamaka, dbu ma pa) Buddhist philosophical school. As our study of the first treatise in which he presents his view on selflessness advanced, we realized that it was necessary to dedicate part of our research to the analysis of the epistemological theory that substantiates his explanation of selflessness, since his approach to the subject is based on the use of what he calls \'rational analysis\' and \'inferential knowledge\'. Therefore, a preliminary part of our thesis is dedicated to the clarification of Tsongkhapa´s conceptions of rational analysis and inferential knowledge, which are based primarily on the theory of \'valid cognition\' (pramna, tshad ma) elaborated centuries earlier by the great Indian scholar Dharmakrti (6th and 7th centuries CE). The next stage of our research was guided by the following question: since, for Tsongkhapa, not possessing a self means the same as not possessing a nature (svabhva, rang zhin), a concept upon which Dharmakrti´s explanation of inferential knowledge is based, how does Tsongkhapa combine his presentation of selflessness with Dharmakrti´s epistemology without generating internal contradictions in his system? We have concluded that, in Tsongkhapa´s presentation of selflessness as united with causation, that is, as one implying the other due to the introduction of the key distinction between \'inherent nature\' and \'mere nature\', there is no contradiction between his epistemological use of inferences based on the notion of mere natures (recognized as conventional) and his final ontological assertion that phenomena lack inherent natures. / A presente pesquisa de doutoramento tem por finalidade articular uma apresentação consistente do conceito budista de anatma (ausência de identidade) segundo a explicação do grande pensador tibetano Tsongkhapa (Tibete, 13571419 D.C.), que compôs relevantes obras filosóficas sobre esse conceito budista fundamental, baseadas no famoso tratado Mla-madhyamaka-krik (MMK) de Ngrjuna (Índia, ca 150250 D.C.). Tsongkhapa se apresenta como um seguidor de Ngrjuna, ou seja, como um proponente da escola de filosofia budista \'Caminho do Meio\' (madhyamaka, dbu ma pa). À medida que nosso estudo do primeiro tratado em que ele articula sua visão da noção de anatma (ausência de identidade) se desenvolvia, percebemos que seria necessário dedicar parte de nossa pesquisa à análise da teoria epistemológica que fundamenta sua explicação da \'ausência de identidade\' (dos fenômenos), visto que sua abordagem baseia-se na utilização do que ele chama de \'análise racional\' e \'conhecimento por inferência\'. Dessa forma, a primeira parte de nossa tese é dedicada à compreensão das noções de \'análise racional\' e \'conhecimento por inferência\' usadas por Tsongkhapa, que se baseiam principalmente na teoria sobre as \'cognições válidas\' (pramna, tshad ma), elaborada séculos antes pelo grande pensador indiano Dharmakrti (séculos VI e VII). A etapa seguinte de nosso trabalho teve como fio-condutor a seguinte questão: visto que, para Tsongkhapa, a ausência de identidade (anatma, dak me) significa o mesmo que não ser dotado de uma \'natureza\' (svabhva, rang zhin), conceito sobre o qual a explicação de Dharmakrti do conhecimento por inferência se baseia, como Tsongkhapa elabora conceitualmente a articulação da epistemologia de Dharmakrti com sua explicação da ausência de identidade dos fenômenos sem gerar contradições internas em seu sistema? Concluímos que, na apresentação de Tsongkhapa, em que a noção de causalidade passa a implicar a de \'ausência de identidade\' devido à introdução da distinção essencial entre \'natureza inerente\' e \'mera natureza\', não há contradição entre seu uso epistemológico de inferências baseadas na noção de \'meras naturezas\' (reconhecidas como convencionais) e sua afirmação ontológica final da ausência de natureza inerente nos fenômenos.

Peroxirredoxinas (Prxs) são enzimas que desempenham papéis centrais no metabolismo redox celular, são proteínas abundantes reduzindo peróxidos com uma velocidade extraordinária. As Prxs estão presentes em todos os grupos taxonômicos, possuem várias isoformas com diferentes funções, tais como antioxidantes, chaperonas moleculares e reguladores da transdução de sinal. São peroxidases tióis dependentes baseadas em um resíduo de cisteína catalítico podendo ser divididas em 1-Cys ou 2-Cys, dependendo do número de resíduos de cisteínas envolvidos na catálise. Inicialmente a redução das Prxs foi descrita por ser estritamente dependente de tióis, no entanto nosso grupo demonstrou que o ascorbato também poderia reduzir o sulfênico intermediário das 1-Cys Prx (1-Cys Prx-SOH) em diferentes organismos. Esses dados representam um quebra no paradigma antioxidante tiól específico, mostrando que o ascorbato pode reduzir os ácidos sulfênicos nas 1-Cys Prx. Para obter evidências que o ascorbato possa ser considerado um redutor biológico das 1-Cys Prx, foi necessário determinar a constante de segunda ordem, uma vez que em células, outros compostos podem competir com este antioxidante. Devido a problemas técnicos, este foi um desafio por muitos anos. Neste trabalho, descrevemos a caracterização cinética da redução de ácidos sulfênicos por ascorbato em diferentes proteínas. Primeiramente, a redução das 1-Cys Prx-SOH foi analisado usando a enzima de A. fumigatus (AfPrxA) que apresenta similaridade de 37% com a Prdx6 (1-Cys Prx humana) e foi considerada uma enzima bastante estável. Inicialmente, realizamos a análise bi-substrato utilizando eletrodos específicos para H2O2 (Free Radical Analyzer 4100 da World Precision Instruments Inc.), através de uma abordagem de estado estacionário. AfPrxA decompõem H2O2 em uma reação ascorbato dependente com boa eficiência (kcat/KM asc = 7.4 x 103 M-1s-1), através de um mecanismo Bi-Bi Ping-Pong. Para apoiar ainda mais esses resultados, desenvolvemos uma abordagem cinética independente, baseada na competição entre diclorofenolindofenol (DCPIP) e ácidos sulfênicos por ascorbato. DCPIP é um sensor redox, cuja a coloração azul é perdida quando reduzido. Primeiramente, confirmamos que o DCPIP foi reduzido por ascorbato com uma constante de segunda ordem de 718 M-1s-1, similar a valores descritos na literatura anteriormente. Este método validou nossas condições de ensaio, permitindo determinar a constante de segunda ordem de reação entre AfPrxA-SOH e ascorbato (1,5 x 103 M-1s-1) a pH 7,44, 25ºC através da abordagem de pseudo-primeira ordem. Portanto, por dois métodos diferentes, demonstramos que o ascorbato reduz a AfPrxA-SOH com constantes de velocidade na ordem de 103 M-1s-1. Este ensaio também nos permitiu determinar as constantes de segunda ordem para as 1-Cys Prx de diferentes organismos como bactéria, levedura, planta e mamíferos. Em todos os casos, as constantes de velocidade foram na ordem de 103 M-1s-1. Posteriormente, analisamos se a 2-Cys Prx de levedura (Tsa1), que possui uma mutação na cisteína de resolução por um resíduo de serina (Tsa1-C170S) poderia adquiri atividade ascorbato dependente. Novamente, a forma ácido sulfênico da Tsa1-C170S foi reduzida por ascorbato na mesma ordem de grandeza de 103 M-1s-1. Em adição, decidimos investigar a redução dos Cys-SOH por ascorbato em outras proteínas como Gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e Papaína que também possuem um ácido sulfênico como produto da oxidação. A constante de segunda ordem obtida da reação com ascorbato foi novamente à mesma ordem de grandeza (103 M-1s-1). Em conclusão, a redução de ácidos sulfênicos presentes nas Prxs por ascorbato pode ser considerada relevante em compartimentos subcelulares em que este redutor esteja presente em grandes quantidades. Além disso, o ascorbato pode reduzir ácidos sulfênicos de outras proteínas, e esta interação pode representar uma nova via na biologia redox que ainda precisa ser explorada in vivo / Peroxiredoxins (Prxs) are enzymes that play central roles in cellular redox metabolism, since they reduce peroxides with extraordinary rates and are abundant proteins. Prxs are found in all kingdoms with multiple isoforms, performing multiple functions such as antioxidants, molecular chaperones, and regulators of signal transduction. Prxs are Cys-based, thiol-dependent peroxidases with remarkable catalytic efficiency that can be divided into 1-Cys or 2-Cys, depending on the number of Cys residues involved in catalysis. Initially, reduction of Prxs was described to be strictly dependent on thiols, but later we showed that ascorbate can also reduce the sulfenic intermediate of 1-Cys Prx (1-Cys Prx-SOH) from various organisms. These data represented a breakthrough in the thiol-specific antioxidant paradigm, as ascorbate can also reduce sulfenic acids in 1-Cys Prx. To gain evidences that ascorbate could be a biological reductant for 1-Cys Prx it was necessary to determinate the respective second order rate constant, since in cells other compounds might compete with this antioxidant. Due to technical issues, this was a challenge for many years. In this work, we describe the kinetic characterization of sulfenic acid reduction by ascorbate in several proteins. Firstly, the reduction of 1-Cys Prx-SOH by ascorbate was analyzed using an enzyme from A. fumigatus (AfPrxA) that is 37% similar to PRDX6 (human 1-Cys Prx) and was quite stable. Initially, a steady-state, bi-substrate approach was followed by means of a specific H2O2 electrode (Free Radical Analyzer 4100, World Precision Instruments Inc.). AfPrxA decomposed H2O2 in an ascorbate dependent manner with good efficiency (kcat/KM asc = 7.4 x103 M-1s-1), through a Bi-Bi Ping-Pong mechanism. To further support these findings, we developed an independent, competitive kinetic approach based on the competition between dichlorophenolindophenol (DCPIP) and sulfenic acid to ascorbate. DCPIP is a redox sensor, whose blue color is lost when reduced. Firstly, we confirmed that in our conditions DCPIP was reduced by ascorbate with a second-order rate constant of 718 M-1s-1, similar to values previously described. This procedure validated our assay conditions and allowed us to proceed in the competitive method for the determination of the second order rate constant of the reaction of AfPrxA-SOH with ascorbate (1,5 x 103M-1s-1) at pH 7.44, 25ºC by pseudo first order approach. Therefore, by two independent approaches, we showed that ascorbate reduced AfPrxA-SOH with rate constants in the 103 M-1s-1 range. It also allowed us to determine the second order rate constants for the reduction 1-Cys Prxs from other organisms such as bacteria, yeast, plant and mammal. In all cases, the rate constants were in the 103 M-1s-1 range. Subsequently, we analyzed whether a recombinant yeast 2-Cys Prx (Tsa1), whose resolving Cys (Cysr) was mutated to a serine residue (Tsa1-C170S) acquired the ascorbate dependent activity. Again, the sulfenic acid form of Tsa1-C170S was reduced by ascorbate in the same 103 M-1s-1 range. In addition, we decided to investigate the reduction of Cys-SOH by ascorbate in other proteins like glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and Papain that also have a sulfenic acid as product of their oxidation. The second order rate constants obtained for the reaction with ascorbate were again in the same range (103 M-1s-1). In conclusion, the reduction of sulfenic acids present in Prx by ascorbate might be relevant in the subcellular compartments in which this reductant is present at high levels, capable to compete with other reductants. Furthermore, ascorbate can reduce sulfenic acid in other proteins, and this interaction may represent a new route in redox biology that has yet be explored in vivo

Este estudo, com delineamento tipo caso-controle, teve como proposta testar as hipóteses de que a amamentação ao seio é um fator de proteção para o DMID e o leite de vaca, introduzido precocemente na alimentação infantil, é um fator de risco para a doença. Os casos foram identificados na Associação de Diabetes Juvenil de São Paulo e no ambulatório de Endocrinologia da Escola Paulista de Medicina. Trezentos e quarenta e seis casos, com idade inferior a 18 anos no momento da entrevista, foram comparados com 346 controles pareados aos casos segundo sexo, idade e local de residência. Foram consideradas como variáveis de principal interesse a duração do aleitamento exclusivamente ao seio, a idade da introdução de alimentos lácteos na dieta e ter recebido leite em pó na maternidade. Foram consideradas como variáveis de controle as idades da mãe e do pai no momento do nascimento da criança, o histórico da mãe de rubéola congênita, a duração da gestação, o peso e o comprimento ao nascer, a situação de vacinação, os antecedentes relativos a doenças viróticas da criança, o histórico da criança de episódios graves de diarréia, a data da insulinoterapia, os antecedentes familiares de DMID e DMNID, a renda familiar per capita e a ordem de nascimento da criança. Utilizaram-se o teste t de Student pareado para a comparação das médias das variáveis cujos valores têm distribuição normal e o teste pareado dos sinais dos postos de Wilcoxon para as demais, a técnica de tábua de vida atuarial para se conhecer, aos 7 e aos 60 dias, a proporção de crianças ainda em aleitamento exclusivamente ao seio e sem introdução de alimentos lác- teos. O modelo de regressão logística condicional foi utilizado tanto para as análises da gradação dos odds ratios como para ajustar os efeitos sobre o DMID das três variáveis de interesse a possíveis variáveis de confusão. Os resultados encontrados neste estudo indicam que são fatores de risco para o DMID a ausência de aleitamento exclusivamente, especialmente durante a primeira semana de vida (OR = 2,13, IC: 1,28 - 3,55) e a idade da introdução de alimentos lácteos, especialmente quando esses alimentos são introduzidos durante os primeiros sete dias de vida (OR = 2,29; IC: 1,37 - 3,83). / This case-control study aimed to test the assumption that breast feeding protects against insulin-dependent diabetes mellitus, and that the early introduction of cow milk into the infant diet is a risk factor for the disease. The cases were identified in the Juvenile Diabetes Association of São Paulo, and in the Out-patients Endocrinology Department of the Escola Paulista de Medicina. Three hundred and forty-six cases among patients younger than eighteen years old at the time of the interview were compared with 346 paired control cases for sex, age and place of residence. The main variables were the duration of exclusive breast feeding , the age at which milk products were introduced into the diet, and whether powdered milk was given in the maternity unit. The ages of the parents when the child was born, history of congenital rubella in the mother, duration of gestation, weight and height at birth, vaccination status, the child\'s viral disease history, the child\'s history of severa attacks of diarrhea, the date of insulin therapy, previous familial history of insulin-dependent diabetes mellitus and non-insulin-dependent diabetes mellitus, the per-capita income of the family, and the order of birth of the child. Student\'s paired test was used to compare the mean values of variables with normal distribution, and Wilcoxon\'s signed ranks test was used for all other variables. The actuarial life table technique was used at 7 and 60 days in order to determine the proportion of children still being exclusively breast fed without the introduction of milk products. The conditional logistical regression method was used in dose-response analyses of the odds ratio and to adjust for the effect of the three variables of interest and possible confounding variables on insulin-dependent diabetes mellitus. The findings of this study indicate that the lack of exclusive breast feeding is a risk factor to insulin-dependent diabetes mellitus, particularly during the first week of life (OR=2.13; IC: 1.28-3.55) and that the age at introduction of milk products is a risk factor for the disease, particularly when these products are introduced during the first seven days of life (OR=2.29; IC: 1.37 -33.83).

Modelos multi-estados têm sido utilizados para descrever o comportamento de unidades amostrais cuja principal resposta é o tempo necessário para a ocorrência de seqüências de eventos. Consideramos um modelo multi-estados markoviano, não homogêneo, que incorpora covariáveis cujos efeitos podem variar ao longo do tempo (efeitos dinâmicos), o que permite a generalização dos modelos usualmente empregados. Resultados assintóticos mostram que procedimentos de estimação baseados no método histograma crivo convergem para um processo gaussiano. A metodologia proposta mostra-se adequada na modelagem de dados reais para comparação de desenvolvimento de recém-nascidos pré-termo com os a termo. Estudos com dados gerados artificialmente confirmam os resultados teóricos obtidos. / Multi-state models have been used to describe the behavior of sample units where the principal response is the time needed for the occurrence of a sequence of events. We consider a non-homogeneous Markovian multi-state model that incorporates covariates with time-dependent coefficient (dynamic effects), generalizing models usually employed. The asymptotic results show that the estimators based on the method of histogram sieves converge to a Gaussian process. The proposed methodology revels adequated for modeling data related to the comparison of developement of preterm infants with term infants. The studies with artificially generated data confirm the asymptotic results.

Neste trabalho será investigado o comportamento de escoamentos de fluidos newtonianos e não-newtonianos em microcanais. O problema não-newtoniano, consiste em resolver as equações que regem o movimento para o caso de um escoamento de fluidos cujas propriedades reológicas possam ser estudadas pelo modelo constitutivo de Phan-Thien-Tanner, como por exemplo os materiais poliméricos. Uma das características interessantes de alguns destes materiais é que eles podem ser misturados com solventes apropriados, como uma solução eletrolítica, e o resultado é que este fluido como um todo passa a ter propriedades elétricas. Assim, além das propriedades viscoelásticas, será investigada a eletrocinética do escoamento, que é diretamente influenciado pela aplicação de um campo elétrico externo. Em particular o fenômeno de eletrosmose será estudado neste trabalho por meio de simulações numéricas em canais planos e bocais. Escoamentos através de bocais podem ser úteis na realização da mistura de fluidos. Neste trabalho, apresentamos uma aproximação numérica para a simulação dos vórtices que ocorrem logo após a passagem do fluido pela contração no bocal. Além disso, foram feitas simulações com potenciais dependentes do tempo e as variações nas propriedades do fluido viscoelástico para este tipo de escoamento. O movimento das cargas na solução é descrito pelas equações de Poisson-Nernst-Planck e para resolver numericamente este problema será aplicado o método das diferenças finitas generalizadas. O código para as simulações de escoamentos eletrosmóticas foi implementado como uma parte do sistema chamado HiG-Fow, que é capaz de realizar simulações de outros tipos de escoamentos além dos investigados nesta tese. A modularidade desse sistema possibilita ao usuário a implementação de pacotes de acordo com o tipo de escoamento a ser estudado. Os resultados obtidos indicam que a tensão viscoelástica é resistente a mudanças bruscas no escoamento, isto é, as oscilações da tensão normal dependem da frequência aplicada. Quanto maior a frequência menor é a amplitude do tensor. Esperamos que este trabalho contribua para um melhor entendimento de escoamentos dependente do tempo, possibilitando melhorias na tecnologia de dispositivos microfluidicos. / In this work the behavior of newtonian and non-Newtonian fluids in microchannels will be investigated. The non-Newtonian problem consists in solving the governing equations of the movement take into account a fluid flow whose rheological properties can be studied by the Phan- Thien-Tanner constitutive model, for example the polymeric materials. One of the interesting features of some of these materials is that they can be mixed with appropriate solvents, such as an electrolyte solution, and the resulting fluid has electrical properties. Thus, besides the viscoelastic properties, the electrokinetics of the flow will be investigated, which is directly influenced by the application of an external electric field. In particular the phenomenon of electro-osmosis will be studied in this work through numerical simulations in flat channels and nozzles. Flows through nozzles may be useful in performing the fluid mixture. In this work, we propose a numerical approximation for the simulation of the vortices that occur soon after the passage of the fluid by the contraction in the nozzle. In addition, simulations were made with time dependent potentials and the variations in viscoelastic fluid properties for this type of flow. The motion of the charges in the solution is described by the Poisson-Nernst-Planck equations and to solve numerically this problem will be applied the generalized finite difference method. The code for the simulations of electroosmotic flows was implemented as a part of the HiG-Fow system, which is able to perform simulations of other types of flows beyond those investigated in this thesis. The modularity of this system enables the user to implement packages according to the type of flow to be studied. The results indicate that the viscoelastic stress is resistant to abrupt changes on the flow, that is, the oscillations of the normal stress depend on the applied frequency. The higher the frequency the smaller the tensor amplitude. We hope that this work contributes to a better understanding of time-dependent flows, enabling improvements in the technology of microfluidic devices.

INTRODUÇÃO: Com o envelhecimento da população, a prevalência de doenças crônico-degenerativas sofreu aumento progressivo. A repercussão dessas doenças sobre a capacidade funcional foi reconhecida. Outro parâmetro de saúde é a \"qualidade de vida\" ou, preferivelmente, \"qualidade de vida relacionada à saúde. A avaliação destes parâmetros emergiu como parte importante do exame clínico do idoso. Na população idosa, as doenças cardiovasculares destacam-se pelo enorme impacto epidemiológico e clínico. Elas, geralmente, vêm associadas a outras afecções, inclusive neuropsiquiátricas. Esse conjunto de problemas pode comprometer a independência e a qualidade de vida do idoso que busca tratamento cardiológico. Esses parâmetros de saúde têm sido relativamente pouco contemplados pelos cardiologistas. OBJETIVO: Avaliar, em uma população de idosos atendidos em um ambulatório de cardiologia de um hospital de referência, se os determinantes clínicos mais relevantes de dependência e de qualidade de vida são doenças e fatores de risco cardiovascular ou ainda comorbidades, particularmente as neuropsiquiátricas. MÉTODOS: Os idosos deste estudo foram selecionados aleatória e consecutivamente. Aqueles com déficit cognitivo não foram considerados para o cálculo da qualidade de vida. A avaliação clínica dos pacientes foi feita por uma única médica de acordo com os dados obtidos em seus prontuários clínicos. Os pacientes foram ainda atendidos por uma única psicóloga que aplicou um conjunto de quatro questionários: HAQ, SF-36, PRIME-MD e Mini Exame do Estado Mental. RESULTADOS: O estudo incluiu 1020 idosos, 646 (63,3%) mulheres e 374 (36,6%) homens, entre 60 e 97 anos (média: 75,56 ± 6,62 anos). Nesta população, 61,4% mostrou-se independente ou com dependência leve. O escore total de qualidade de vida foi elevado (HAQ: 88,66 ± 2,68). 87,7% dos pacientes apresentou escore total do SF-36 > 66. No domínio emocional, 44,7% apresentou índices elevados de qualidade de vida (SF-36 > 66). Idosos entre 90 e 97 anos apresentaram escores do SF-36 acima da média: 66,66 ± 4,59, no domínio emocional. A regressão logística mostrou que a associação entre os diagnósticos e graus elevados de dependência foi significante (p<0,05) para: ausência de atividade física (OR: 0,08), obesidade (OR: 2,24), acidente vascular cerebral prévio (OR: 1,97), déficit cognitivo (OR: 3,17), osteoartrite (OR: 1,64) e depressão maior (OR: 2,76). A associação entre os diagnósticos e graus mais baixos de qualidade de vida permaneceu significante para: fibrilação atrial (OR: 0,61), osteoartrite (OR: 1,79), depressão maior (OR: 6,09) e depressão menor (OR: 1,91). CONCLUSÃO: Em uma população de idosos atendidos em um ambulatório de cardiologia de um hospital de referência, os determinantes clínicos mais relevantes de prejuízos para dependência e qualidade de vida são as comorbidades não cardiovasculares, particularmente as neuropsiquiátricas / INTRODUCTION: The population aging promotes a progressive increase of chronic-degenerative diseases. The repercussion of these diseases on the functional capacity was well recognized. Another health parameter concerns quality of life or, rather, quality of life related to health. Such parameters evaluation emerged as an important part of the elderly clinical examination. Among the elderly population, cardiovascular diseases stand out due to a huge epidemiological and clinical impact. Usually, these diseases have been associated with others, including neuro-psychiatric ones. This set of problems may compromise both independence and quality of life in elderly patients who look for a cardiologic treatment. These health parameters havent been well contemplated by cardiologists. OBJECTIVE: Evaluating, among the elderly population attended in an outpatient cardiologic service, if the clinical determinants more relevant concerning dependence and quality of life are cardiologic diseases or cardiologic risk factors or even comorbidities, especially the neuro-psychiatric ones. METHODS: The elderly in this study have been selected randomly and consecutively. People with cognitive impairment have not been considered for accountability matters of quality of life. The clinical evaluation has been made by a physician according to the hospital clinical notes. The patients have also been evaluated by a psychologist who applied a set of four questionnaires: HAQ, SF-36, PRIME-MD e Mini Mental State. RESULTS: The population consisted of 1020 elderly, 63.3% women and 36.6% men, between 60 and 97 years of age (75.56 ± 6.62 years of age). Among these elderly, 61.4% were independent or slightly dependent. The quality of life total score was high (HAQ: 88.66 ± 2.68). 87.7% of the patients had SF-36 total score > 66. Regarding emotional domain, 44.7% had high quality of life scores (SF-36 > 66). Elderly between 90 and 97 years had SF-36 scores above the average: 66.66 ± 4.59, regarding emotional domain. The logistic regression model showed a significant association (p<0.05) between high dependence scores and: absence of physical activities (OR: 0.08), obesity (OR: 2.24), stroke (OR: 1.97), cognitive impairment (OR: 3.17), osteoarthritis (OR: 1.64) and major depression (OR: 2.76). The same logistic regression model showed a significant association (p<0.05) between quality of life low scores and: atrial fibrillation (OR: 0.61), osteoarthritis (OR: 1.79), major depression (OR: 6.09) and minor depression (OR: 1.91). CONCLUSION: Among an elderly population attended in an outpatient cardiologic service, dependence and quality of life clinical determinants are not cardiovascular comorbidities, especially the neuro-psychiatric ones

Modelos multi-estados têm sido utilizados para descrever o comportamento de unidades amostrais cuja principal resposta é o tempo necessário para a ocorrência de seqüências de eventos. Consideramos um modelo multi-estados markoviano, não homogêneo, que incorpora covariáveis cujos efeitos podem variar ao longo do tempo (efeitos dinâmicos), o que permite a generalização dos modelos usualmente empregados. Resultados assintóticos mostram que procedimentos de estimação baseados no método histograma crivo convergem para um processo gaussiano. A metodologia proposta mostra-se adequada na modelagem de dados reais para comparação de desenvolvimento de recém-nascidos pré-termo com os a termo. Estudos com dados gerados artificialmente confirmam os resultados teóricos obtidos. / Multi-state models have been used to describe the behavior of sample units where the principal response is the time needed for the occurrence of a sequence of events. We consider a non-homogeneous Markovian multi-state model that incorporates covariates with time-dependent coefficient (dynamic effects), generalizing models usually employed. The asymptotic results show that the estimators based on the method of histogram sieves converge to a Gaussian process. The proposed methodology revels adequated for modeling data related to the comparison of developement of preterm infants with term infants. The studies with artificially generated data confirm the asymptotic results.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / INTRODUÃÃO: O papel do LPS na defesa da mucosa gÃstrica ainda nÃo està estabelecido. OBJETIVOS: 1-Verificar o efeito protetor do LPS na lesÃo gÃstrica (LG), na infiltraÃÃo de neutrÃfilos (IN), no aumento da adesÃo leucocitÃria, na diminuiÃÃo dos nÃveis de GSH induzidos por indometacina (INDO) em ratos; 2-Investigar o papel da COX-2, NOSi e dos canais de K sensÃveis ao ATP (KATP) na gastroproteÃÃo do LPS na gastropatia por INDO. MÃTODOS: Os ratos foram tratados com LPS da E. coli (30, 100 ou 300 &#61549;g/Kg, e.v.). ApÃs 6 hs, foi administrado INDO (20mg/Kg, p.o.). Decorridas 3 hs, o sangue foi colhido para determinaÃÃo do leucograma. Posteriormente, os ratos foram sacrificados e a LG foi aferida. Fragmentos do estÃmago foram retirados para avaliaÃÃo da atividade de mieloperoxidase (MPO) e determinaÃÃo dos nÃveis de glutationa (GSH). A adesÃo e o rolling dos leucÃcitos foram avaliados por microscopia intravital. Diferentes grupos foram tratados com rofecoxib, L-NAME, aminoguanidina, dexametasona, glibenclamida, diazÃxido ou glibenclamida + diazÃxido. ApÃs 3 horas da administraÃÃo de INDO (20mg/Kg, p.o.), foram avaliadas a LG, a MPO e GSH. RESULTADOS: LPS reduziu a LG e o aumentou a MPO induzidas por INDO de forma dose-dependente, com o efeito mÃximo na dose de 300 &#61549;g/Kg e no tempo de 6 hs. O prÃ-tratamento com LPS induziu uma neutrofilia na gastropatia induzida pela INDO. LPS reverteu à queda dos nÃveis de GSH no estÃmago com INDO. O tratamento com LPS diminui a adesÃo e aumentou o rolling dos leucÃcitos quando comparado com o tratado com INDO. Rofecoxib, L-NAME, aminoguanidina ou dexametasona nÃo reverteram o efeito protetor do LPS. Glibenclamida, mas nÃo diazÃxido, reverteu o efeito protetor do LPS na gastropatia induzida por INDO, aumentando de forma significativa a LG, MPO e diminuindo a GSH. A associaÃÃo de glibenclamida com diazÃxido nÃo reverteu o efeito protetor do LPS. CONCLUSÃES: LPS protege contra a LG por INDO, atravÃs da inibiÃÃo da IN por uma diminuiÃÃo da adesÃo de leucÃcitos ao endotÃlio e por um aumento dos nÃveis de GSH no estÃmago. Este evento dependente da abertura de KATP. Nossos dados tambÃm sugerem que a atividade de COX-2 e NOSi nÃo estÃo envolvidos no efeito protetor do LPS. / INTRODUCTION: The role of the LPS in the defense of the gastric mucosa is still not established. AIMS: To verify the protective effect of the LPS in the gastric damage (GD), in the neutrophil infiltration (NI), in the increase of the leukocyte of adhesion, in the reduction of the induced glutathione levels for indomethacin (INDO) in rats and to investigate the role of the COX-2, NOSi and of ATP-sensitive k channels (KATP) in the protective effect of LPS administration on INDO- induced gastropathy. METHODS: The rats were treated with LPS of E. coli (30, 100 or 300 mg/Kg, e.v.). After 6 hs, INDO was administrated (20mg/Kg, p.o.). 3 hs later, the blood was harvested for determination the total and differential number of white blood cell counts. Later, the rats had been sacrificed and the GD was surveyed. Piece of the stomach had been removed for evaluation of the MPOactivity and determination of the GSH levels. The adhesion and rolling of the leukocytes had been evaluated by intravital microscopy. Different groups were treated with rofecoxib, L-NAME, aminoguanidine, dexamethasone, glibenclamide, diazoxide or glibenclamide + diazoxide. After 3 hs of the administration of INDO (20mg/Kg, p.o.), had been evaluated the GD, MPO and GSH. RESULTS: LPS reduced dose- dependently INDO- induced GD and increase in MPO, with the maximal effect at the dose of 300 &#61549;g/kg and in the time of 6 hs. The LPS treatment neutrophilia induced in INDO induced gastropathy. LPS reverted to the fall of the GSH levels in the stomach with INDO. The LPS treatment decreased the adhesion and increased rolling of the leukocytes when compared with the INDO treated. Rofecoxib, L-NAME, aminoguanidine or dexamethasona had not reverted the protective effect of the LPS. Glibenclamide, but not diazoxide, reverted the protective effect of the LPS in the induced gastropathy for INDO, increasing of significant form the GD, MPO and decreasing the GSH. The diazoxide + glibenclamide association of with did not revert the protective effect of the LPS. CONCLUSIONS: LPS protects against INDO induced GD, through the inhibition of the NI for a reduction of the adhesion of leukocytes to the endothelin and for an increase of the GSH levels in the stomach. This dependent event of the KATP opening. Our data also suggest that the activity of COX-2 and NOSi are not involved in the protective effect of the LPS.