Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-20T18:26:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Capes / Este trabalho teve o objetivo de avaliar a influência entre macronutrientes energéticos, com o desempenho, metabolismo e fisiologia digestiva de diferentes surubim híbridos (Pseudoplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum e Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). Esses surubim híbridos são amplamente cultivados no Brasil, para abate sendo a carne destinada ao mercado interno e externo. No entanto, são poucos os dados na literatura em relação às exigências nutricionais para esses peixes, bem como o efeito da relação entre os macronutrientes com a fisiologia digestiva e metabolismo. Deste modo, o capítulo um avaliou o efeito da manga de uma fonte de carboidrato não amiláceo. Para tal foram fornecidas dietas contendo farinha de manga em substituição ao milho em quatro níveis diferentes (0; 33%; 66% e 100%) para alevinos de Pseudoplatystoma sp. Após o período de 60 dias para a análise de desempenho, foram realizadas as atividades das enzimas digestivas: protease total alcalina, tripsina e amilase. Como indicativos de mudança no metabolismo foram avaliados no plasma: triglicérides, glicose, proteínas totais, colesterol, amino ácidos livres; no fígado: glicogênio e alanina aminotransferase. Foi observado que não houve diferença significativa nos parâmetros de desempenho analisados. Entretanto foram observadas alterações nas atividades das enzimas digestivas e intermediários metabólicos, provavelmente devido à quantidade de fatores antinutricionais encontrados na casca da manga. Estes resultados demonstram que em longo prazo a inclusão de farinha de manga acarretará decréscimo no desempenho dos animais. No capítulo dois foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):lipídio(L). Quatro dietas (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, enzimas digestivas, intermediários metabólicos e parâmetros hematimétricos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de lipídio na dieta diminuiu o desempenho o que consequentemente afetou os demais parâmetros avaliados. Valores de proteínas totais e aminoácidos livres no plasma demostraram danos causados pela deficiência de proteína na dieta. Os valores de colesterol, triglicérides e glicose mostraram resposta consequente da baixa ingestão de nutrientes. A lipase foi a enzima digestiva mais influenciada pelos nutrientes dietéticos. Os parâmetros hematimétricos foram afetados pelas dietas e demonstraram que animais que ingeriram maior quantidade de lipídio tiveram adaptação metabólica e fisiológica para suprir a deficiência nutricional. No capítulo três foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):carboidrato(C). Quatro dietas (28P 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, composição corporal, enzimas digestivas e intermediários metabólicos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de carboidrato na dieta diminuiu o desempenho, sem afetar demasiadamente os parâmetros fisiológicos e metabólicos avaliados, mostrando grande adaptação do híbrido avaliado. A eficiência energética das dietas avaliadas foi maior no tratamento com menor inclusão de carboidrato e maior inclusão proteica. Valores de atividades enzimáticas específicas foram maiores no tratamento com maior inclusão de proteína. A maior reserva de glicogênio hepático também foi observado no mesmo tratamento citado acima. Como conclusão geral pode-se afirmar que diferentes relações proteína:energia, independente de ser fonte lipídica ou de carboidrato, afeta o desempenho, fisiologia digestiva e metabolismo do surubim híbrido. / This study aimed to evaluate the influence of macronutrients energetic, growth, metabolism and digestive physiology of different surubim hybrids (Pseuduplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum and Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). These hybrids are highly raised in Brazil with its main products being sold to domestic and international market. However there is few information on literature published about data on nutrient requirements to this fish, as well as the effects among macronutrients and digestive physiology and metabolism. Thus, chapter one evaluated the effect of mango meal as a non-starch carbohydrate source. In order to accomplish it, diets containing mango meal replacing corn meal in four different levels (0; 33%; 66%; 100%) were given to Pseudoplatystoma sp. juvenile. After 60 days growth analysis were done as well as the digestive enzymes activities: total alkaline protease, trypsin and amylase. As indicative of metabolism changes were evaluated in the blood plasma: triglycerides, glucose, total proteins, cholesterol, free amino acids; in the liver: glycogen and alanine aminotransferase. It was observed no significant difference among growth parameters evaluated. However digestive enzymes activities and intermediary metabolic changes were observed, probably due to anti-nutritional factors found in mango skin. These results shows that, in long term feeding mango meal inclusion can lead to animal growth decrease. In chapter two it was evaluated the effect of different protein(P):lipid(L) ratios. Four diets (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L) were offered for 60 days to observe the effect on growth performance, digestive enzymes activities, intermediary metabolism and hematimetric parameters of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary lipid excess decreased growth which consequently affected the others parameters evaluated. Plasma total protein and free amino acids values demonstrated injuries caused by protein deficiency in the diet. Cholesterol, triglycerides and glucose values showed consequent response to low nutrient ingestion. Lipase was the enzyme more influenced by dietary nutrients. Hematimetric parameters were affected by diets and showed that animals that ingested higher lipid amount had metabolic and physiologic adaptation to make up nutritional deficiency. In chapter three it was evaluated the effect of different protein(P):carbohydrate (C)values. Four diets (28C 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C) were offered for 60 days in order to observe the effect on growth, whole body composition, digestive enzymes and intermediary metabolism of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary carbohydrate in excess decreased growth without affecting all of others physiological and metabolic parameters evaluated, which shows high adaptation. Feed energetic efficiency evaluated was higher in the treatment with lower carbohydrate inclusion and higher protein inclusion. Specific digestive enzymes activities were higher in the treatment with higher protein inclusion. Higher hepatic glycogen reserve was also observed in the same treatment cited above. As a general conclusion it can be affirmed that different protein:energy ratio, no matter if it is lipidic or carbohydrate source, affects growth, digestive physiology and metabolism of hybrid surubim.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-21T14:23:49Z No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1646366 bytes, checksum: ba9730e8f2141c18f7827732749571dc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-21T14:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1646366 bytes, checksum: ba9730e8f2141c18f7827732749571dc (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / The aim of this study was to evaluate the systemic and local response by means of the hemogram, biochemical and proteinogram analyzes simultaneously evaluated in the blood and peritoneal fluid (PF) of cattle affected with digestive disorders. Twenty-seven adult cattle, half-dairy breeds and semi-intensive breeding were used at the Garanhuns Cattle Clinic, a UFRPE school hospital. The animals were divided into two groups according to the disease that affected them: (GI: intestinal disorders) (n = 14) and (GII: reticulites) (n = 13). Firstly, the clinical examination was performed and blood samples were taken to perform the hemogram, plasma protein and fibrinogen determination and the serum to perform the biochemical and polyacrylamide gel proteinogram (SDS-PAGE) analyzes. At the same time, PF samples were collected for physical, cytological, measurement of biochemical analytes and electrophoretic profile (SDS-PAGE). The biochemical determinations in blood and PF were: total protein (TP), albumin, globulin, albumin/globulin (A/G) ratio, glucose, L-lactate, urea, creatinine, triglycerides, cholesterol, enzymatic activities of aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyltransferase (GGT), creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH), sodium, calcium and potassium ions and chlorides. The analysis of variance with a 5% probability level was used to compare the groups regarding the hematological, cytological, [TP] LP/ [TP] and blood serum levels and biochemical analyzes, which were also compared between the two body fluids analyzed (blood and PF). Both groups presented clinical impairment, however, apathy, inappetence, dehydration and gastrointestinal hypomotility were more frequent in GI animals. In the cytological analysis of PF, PMN was predominant in both groups (P>0.05). Hematologic response revealed neutrophilic leukocytosis with regenerative left shift and hyperfibrinogenemia in both groups (P>0.05). Albumin (ALB), transferrin, ceruloplasmin, haptoglobin, α1-acid glycoprotein (α1-GPA), PM 23.000 Da, α1-antitrypsin, IgA and IgG were identified in blood and PF. It was observed that the values of the ratio of the proteins identified in both body fluids were high and showed a statistical difference between the groups (P <0.05), with higher TP, ALB, transferrin, α1-GPA and IgG, demonstrating that the acute phase response was more evident in animals with intestinal disorders. The biochemical evaluation of the blood showed that TP, globulin, cholesterol and GGT were significantly higher in GII (P<0.05), while the A/G ratio was higher in GI (P<0.05). In PF, albumin and CK were significantly higher in GI (P<0.05). When comparing blood and PF concentrations, a significant increase of L-lactate in PF in both groups (P <0.05) was observed, which was related to the severity of the alterations present in the abdominal cavity. In view of the results, it can be observed that intestinal disorders and reticulitis induced a systemic and local response characterized by clinical, hematological, cytological, biochemical and proteinogram changes in both blood and PF. The α1-GPA, haptoglobin and transferrin proteins measured on the PF were good biomarkers. In addition, simultaneous evaluation in blood and PF of protein concentration and L-lactate can be recommended as a tool for diagnostic assistance and prognosis of bovine digestive disorders. / O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta sistêmica e local por meio do hemograma, análises bioquímicas e do proteinograma avaliados simultaneamente no sangue e no líquido peritoneal (LP) de bovinos acometidos com desordens digestivas. Utilizou-se 27 bovinos adultos, mestiços de aptidão leiteira e de criação semi-intensiva atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns, hospital escola da UFRPE. Os animais foram distribuídos em dois grupos de acordo com a enfermidade que os acometiam: (GI: desordens intestinais) (n=14) e (GII: reticulites) (n=13). Primeiramente realizou-se o exame clínico e posteriormente foram colhidas amostras de sangue para realização do hemograma, determinação plasmática da proteína e do fibrinogênio e obtenção do soro para realização das análises bioquímicas e do proteinograma em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Ao mesmo tempo, amostras de LP foram colhidas para avaliação física, citológica, mensuração de analitos bioquímicos e realização do perfil eletroforático (SDS-PAGE). As determinações bioquímicas no sangue e no LP foram: proteína total (PT), albumina, globulina, relação albumina/globulina (A/G), glicose, L-lactato, ureia, creatinina, triglicérides, colesterol, as atividades enzimáticas da aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), creatino quinase (CK) e lactato desidrogenase (LDH), os íons sódio, cálcio e potássio e cloretos. Foi utilizada análise de variância com nível de 5% de probabilidade para comparar os grupos quanto a resposta hematológica, citológica, valores de relação [PT] LP / [PT] soro sanguíneo e análises bioquímicas, as quais também foram comparadas entre os dois fluídos corpóreos analisados (sangue e LP). Ambos os grupos apresentaram comprometimento clínico, no entanto, a apatia, a inapetência, a desidratação e a hipomotilidade gastrointestinal foram mais frequentes nos animais do GI. À análise citológica do LP, observou-se predomínio de PMN em ambos os grupos (P>0,05). A resposta hematológica revelou leucocitose por neutrofilia com desvio a esquerda regenerativo e hiperfibrinogenemia em ambos os grupos (P>0,05). Identificou-se no sangue e no LP as proteínas albumina (ALB), transferrina, ceruloplasmina, haptoglobina, α1-glicoproteína ácida (α1-GPA), PM 23.000 Da, α1-anti-tripsina, IgA e IgG. Observou-se que os valores da relação das proteínas identificadas em ambos fluídos corpóreos estavam elevados e demonstraram diferença estatística entre os grupos (P<0,05), sendo a PT, ALB, transferrina, α1-GPA e a IgG mais elevadas no GI, demonstrando que a resposta de fase aguda foi mais evidente nos animais com desordens intestinais. A avaliação bioquímica do sangue demonstrou que a PT, globulina, colesterol e GGT foram maiores significativamente no GII (P<0,05), enquanto que a relação A/G foi maior no GI (P<0,05). Já no LP, a albumina e a CK foram maiores significativamente no GI (P<0,05). Quando comparou-se as concentrações sanguíneas e no LP, ressalta-se o aumento significativo do L-lactato no LP em ambos os grupos (P<0,05), o que demonstrou estar relacionado à gravidade das alterações presentes na cavidade abdominal. Diante dos resultados, pode-se observar que as desordens intestinais e as reticulites induziram resposta sistêmica e local caracterizada pelas alterações clínicas, hematológicas, citológicas, bioquímicas e do proteinograma tanto no sangue quanto no LP. As proteínas α1-GPA, haptoglobina e a transferrina, mensuradas no LP se mostraram bons biomarcadores. Além disso, a avaliação simultânea no sangue e no LP da concentração proteica e do L-lactato pode ser recomendada como ferramenta de auxílio diagnóstico e prognóstico das desordens digestivas dos bovinos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-20T11:30:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Oliveira Ximenes - 2015.pdf: 2805464 bytes, checksum: 3db0830c6be45f0a18bce9e51c4f9a7c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-20T11:35:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Oliveira Ximenes - 2015.pdf: 2805464 bytes, checksum: 3db0830c6be45f0a18bce9e51c4f9a7c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T11:35:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Oliveira Ximenes - 2015.pdf: 2805464 bytes, checksum: 3db0830c6be45f0a18bce9e51c4f9a7c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Systemic sclerosis is an autoimmune connective tissue disease of unknown etiology characterized by fibrosis and inflammation. The gastrointestinal tract is affected in 90% of patients and the esophagus is the most affected organ. Objectives: Analyze the esophagus-gastroduodenal changes, through endoscopy in patients with systemic sclerosis. Describe the esophagus-gastroduodenal endoscopic alterations found. To verify the association between esophagus-gastroduodenal endoscopic changes, clinical forms of systemic sclerosis and autoantibodies. Methods: A descriptive cross-sectional study that studied 20 patients older than 18 years with systemic sclerosis diagnosis. Patients underwent endoscopy and epidemiological data were collected from medical records. Endoscopic findings were described and associated with data. Statistical analysis was performed using the SPSS program for Windows, version 16.0. The Fisher Exact test was used to compare variables. A significance level value of 5% (p<0.05) was used. Results: The mean age of the patients was 45.65 years (29-67 years). Eighteen patients were female and the mean disease duration was 6.94 years. Sixteen patients (80%) had one or more esophageal abnormalities, one being stricken with esophageal stenosis. Of the nineteen patients who had gastric and duodenal evaluation performed, all had one or more gastric involvement and five patients had duodenal abnormality. The salivary stasis and esophageal hiatal hernia were the most frequent esophageal abnormalities, followed by esophagitis. The mild enanthematous gastritis in antrum was the most common gastric change followed by moderate enanthematous pangastritis and enlarged cardia. The most common duodenal change was the mild enanthematous bulboduodenite. Half of the patients had diffuse systemic sclerosis and half had limited systemic sclerosis. Fifteen patients were antinuclear factor positive. The association between the data collected and endoscopic changes did not show statistical significance, except for the association between salivary stasis and the limited clinical form of systemic sclerosis. Conclusions: Patients with systemic sclerosis have esophageal, gastric and duodenal endoscopic Abstract xx A changes. Associations are not found between gastric and duodenal endoscopic manifestations and clinical forms of the disease. Esophageal salivary stasis is associated with limited clinical form of systemic sclerosis. There is no association between the esophagus-gastroduodenal endoscopic manifestations and the presence of autoantibodies / A esclerose sistêmica (ES) é uma doença auto-imune do tecido conjuntivo, de etiologia desconhecida, caracterizada por fibrose e inflamação. O trato gastrointestinal esta acometido em até 90% dos pacientes, sendo o esôfago o órgão mais atingido. Objetivos: Analisar as alterações esôfago-gastroduodenais, por meio de endoscopia digestiva alta, nos pacientes com esclerose sistêmica. Descrever as alterações endoscópicas esôfago-gastroduodenais encontradas. Verificar a associação entre as alterações endoscópicas esôfago-gastroduodenais, as formas clínicas da esclerose sistêmica e os auto-anticorpos, nos pacientes estudados. Métodos: Estudo transversal descritivo de 20 pacientes, maiores do que 18 anos, com diagnóstico de esclerose sistêmica. Os pacientes foram submetidos à endoscopia digestiva alta e os dados epidemiológicos foram coletados nos prontuários. Os achados endoscópicos foram descritos e associados com os dados coletados. A análise estatística foi realizada pelo programa SPSS® for Windows®, versão 16.0. O teste Exato de Fisher foi utilizados para comparação das variáveis. Foi utilizado como nível de significância o valor 5% (p<0,05). Resultados: A média de idade dos pacientes era de 45,65 anos (29-67 anos). Dezoito pacientes eram do sexo feminino e a duração média da doença era de 6,94 anos. Dezesseis pacientes (80%) apresentaram uma ou mais alterações esofágicas, sendo um deles acometido de estenose esofágica. Dos 19 pacientes que tiveram a avaliação gástrica e duodenal realizadas, todos apresentaram um ou mais acometimento gástrico e cinco pacientes apresentaram alteração duodenal. A estase salivar esofágica e a hérnia de hiato por deslizamento foram as alterações esofágicas mais encontradas, seguidas da esofagite. A gastrite enantematosa leve de antro foi a alteração gástrica mais frequente, seguida da pangastrite enantematosa moderada e do cárdia alargado. A alteração duodenal mais frequente foi a bulboduodenite enantematosa leve. Metade dos pacientes eram portadores da forma difusa e metade eram portadores da forma limitada. Quinze pacientes apresentavam FAN positivos. As associações entre os dados coletados e as alterações endoscópicas não mostraram significado estatístico, com exceção da associação entre a estase salivar e a forma limitada. Conclusões: Pacientes com esclerose sistêmica apresentam alterações endoscópicas esofágicas, gástricas e duodenais. Não são observadas associações entre as manifestações endoscópicas gástricas e duodenais e as formas clínicas da doença. A estase salivar esofágica está associada à forma clínica limitada da esclerose sistêmica. Não há associação entre as manifestações endoscópicas esôfago-gastroduodenais e a presença de auto-anticorpos.

Serina endopeptidases de insetos, principalmente tripsinas e quimotripsinas, estão envolvidas na digestão inicial de proteínas. Genes codificadores para estas enzimas estão organizados em famílias multigênicas tendo expressão diferencial de acordo com a dieta do inseto, estando envolvidos no desenvolvimento de resistência a diferentes metabólitos secundários vegetais. Para uma melhor compreensão desta interação, fez-se necessário o isolamento destas enzimas para insetos de diferentes ordens, bem como a caracterização de suas especificidades por duas abordagens: (a) caracterização cinética dos subsítios componentes do sítio de ligação de tripsinas e quimotripsinas, utilizando diferentes substratos, modificadores químicos e inibidores e (b) estudos estruturais por modelagem molecular, clonagem, expressão e cristalização destas enzimas de insetos. Além disso, estudos evolutivos por análise de distância possibilitaram uma caracterização inicial da interação insetoplanta. Estas determinações permitiram verificar que tripsinas de insetos apresentam diferenças de especificidade tanto dentre as diferentes ordens de insetos quanto em relação às tripsinas de vertebrados, sendo que as tripsinas da ordem Lepidóptera apresentam troca de especificidade primária hidrolisando preferencialmente substratos P1 Lys. Foram também observadas diferenças de hidrofobicidade para os subsítios caracterizados sendo que estes apresentam hidrofobicidades crescentes segundo o grau de complexidade dos insetos na sua escala evolutiva. A troca de especificidade e o aumento da hidrofobicidade podem permitir a hidrólise dos inibidores vegetais protéicos. A análise das sequências de tripsinas de insetos por Neighbor Joining (NJ) compõe uma árvore de distâncias topologicamente semelhante à árvore de relações filogenéticas determinadas por morfologia. A sobreposição de estruturas pré -determinadas de tripsina complexada a diferentes inibidores permite a identificação de posições de interação enzima-inibidor que justificam a classificação em grupos distintos de enzimas sensíveis ou resistentes a presença de inibidores na dieta de insetos. Da mesma forma: a caracterização da especificidade das quimotripsinas de insetos permitiu a separação de grupos distintos de quimotripsinas. Estes grupos são sustentados pela substituição do resíduo 59 em insetos polífagos que alimentam-se de plantas que contêm cetonas naturais reativas. Estas caracterizações demonstram a importância de um estudo detalhado da especificidade de serina endopeptidases possibilitando o desenho de moléculas apropriadas para inibição destas e desenvolvimento de estratégias de controle de insetos. / Insect serine endopeptidases, mairily trypsin and chymotrypsin are involved in initial protein digestion. Genes that encode these proteins are members of complex multigene families and are differentially expressed according to insects diet , thus being involved with resistance to plant metabolites. Purification of trypsins from different insect orders and chymotrypsins, as well as, characterization of their specificity are essential to a better understanding of this interaction. Characterization relied on two approaches: (a) kinetic characterization of the binding subsities of trypsins and chymotrypsins using different substrates, chemical modification and inhibition assays and (b) study of protein structure by molecular modelling and cloning, expression and crystallization of these enzymes. Besides that, evolutionary studies performed through distance analysis, permitted the investigation of plantinsect interaction. These characterizations showed that insect trypsins, in terms of specificity, are quite different from vertebrate trypsins and among insect orders. Lepidopterans trypsins have a distinct primary specificity, since they hydrolyses preferentially P1 Lys substrates, and present a crescent subsite hydrophobicity, which is directly correlated with the evolutionary scale. Both, the specificity exchange and the crescent hydrophobicity can allow the hydrolysis of vegetal proteic inhibitors. The analysis of trypsin sequences in Neighbor-Joining (NJ) algorithm yield a distance tree that is coherent with morphological phylogenetic relationships. The superposition of predicted structures of trypsins-inhibitors complexes permits to observe amino acid residues of interaction between enzyme-inhibitor, which support the distinction of different groups between sensitive and insensitive trypsins to the presence of inhibitors on insect diet. Similarly, characterization of insect chymotrypsins according to their specificity allowed us to classify these enzymes into different groups. These groups are supported by residue 59 replacements in polyphagous insects, which feed on plants bearing natural reactive ketones. These studies show the irnportance of a detailed study of serine endopeptidases, which may help in the development of better insect control strategies.

Tripsinas são enzimas comuns à maioria dos insetos e de fundamental importância para a digestão inicial de proteínas. Desta forma, tornam-se alvos importantes para orientar a construção de plantas transgênicas resistentes a insetos. As tripsinas são serina endopeptidases que clivam cadeias protéicas na porção carboxílica de resíduos de aminoácidos básicos como lisina e arginina, sendo que a hidrólise da ligação peptídica formada por um resíduo de arginina é de duas a dez vezes mais eficiente que a hidrólise da ligação peptídica formada por lisina. A purificação das tripsinas de insetos de diferentes ordens e o estudo da especificidade de seus subsítios utilizando substratos de fluorescência apagada servem de base para a seleção de um método mais eficiente de inibição da sua atividade, assim como para desvendar as tendências evolutivas da especificidade destas enzimas. O trabalho dessa dissertação levou ao desenvolvimento de processos de purificação das tripsinas de Periplaneta americana, Tenebrio molitor, Musca domestica e Diatraea saccharalis. O estudo da especificidade dos subsítios S1, S2, S3 e S1\' das tripsinas demonstraram que, diferentemente das tripsinas dos outros insetos e das tripsinas de mamíferos, a tripsina de Diatraea saccharalis hidrolisa com maior eficiência substratos que apresentem lisina em P1, demonstrando uma diferença na especificidade primária desta enzima. Além disso, é possível verificar ao longo da evolução dos grupos de insetos estudados uma tendência a tornar os subsítios cada vez mais hidrofóbicos. / Trypsins are serine endopeptidases that hydrolyze peptide bonds at the carboxyl side of positively charged residues: arginine and lysine. Mammalian trypsin preferentially cleaves the peptide bond formed by arginine. Site directed mutagenesis has shown that trypsin specificity is related to residues present at the primary specificity site and to structural determinants like two surface loops. Differences in trypsins specificity may be the cause of some insects be resistant to serine endopeptidases plant inhibitors and to Bacillus thuringiensis toxins. Trypsins are usual enzymes in insects and are very important to protein digestion. There are few studies dealing with insect trypsin specificity. They generally consist in analyses of fragments formed by the action of the enzyme on peptide chains like insulin &#946; chain. As these studies were semi-quantitative, insect trypsin specificity requires a better characterization. This dissertation describes the purification of trypsins from Periplaneta americana, Tenebrio molitor, Musca domestica and Diatraea saccharalis and the characterization of the specificity of the subsites S1, S2, S3 e S1\' by the use of quenched fluorescence peptide substrates. The results showed that trypsins from the mentioned insects have different specificities, including the primary specificity. Thus, Diatraea saccharalis trypsin cleaves at Lys more efficiently than at Arg, whereas the eontrary is true for the other insects. The data also showed that trypsin subsites tend to beeome more hydrophobic as the insects are more evolved.

Introducción: La hemorragia digestiva alta (HDA) es una de las emergencias más frecuentes en medicina. Parte de su abordaje incluye la realización de una segunda endoscopia de control programada llamada “second look” (SL) con el propósito de reducir la incidencia de resangrado. No obstante, existe controversia en cuando su indicación y utilidad. Objetivo: Evaluar la efectividad del SL en la prevención del resangrado intrahospitalario en pacientes adultos con HDA no variceal. Métodos: Se llevó a cabo un estudio de cohorte retrospectivo sobre 1 144 pacientes con diagnóstico de HDA admitidos en la Unidad de Hemorragia Digestiva de un centro de referencia de la Seguridad Social en Lima, Perú; durante los años 2012 y 2014. La variable de respuesta fue el resangrado y la variable de exposición fue la programación a SL. Además se midió la hemoglobina al ingreso, comorbilidades, trasfusión de paquetes globulares y variables endoscópicas. Se calculó la incidencia acumulada (IA), riesgo relativo (RR), efectividad y mediante un modelo lineal generalizado de familia Poisson link log con errores estándar robustos se estimaron razones de tasas de incidencia (RTI). Resultados: La IA global de resangrado fue de 24,48% (n=280). Se encontró diferencia significativa entre las incidencias acumuladas (IA) entre el grupo de SL y el grupo de control (11,7 % vs 29,0 %, respectivamente, p<0,01). El RR fue 0,40 (IC95%:0,29-0,56) y la efectividad fue de 59,81% (IC95%: 44,17-71,08). En los modelos de regresión también se encontró una disminución de las tasas de incidencia tanto en el modelo crudo (RTI: 0,34 IC95%: 0,24-0,49), como en el modelo ajustado con diferencia estadística significativa entre los sometidos y no sometidos a SL (RTI: 0,12 IC95%: 0,08-0,18), por las variables asociadas con el resangrado (RTI: 0,21 IC95%: 0,15-0,30) y por las variables que cumplían los criterios clásicos de confusión (RTI: 0,12 IC95%: 0,08-0,18). Conclusiones: El SL es efectivo en la prevención de resangrado intrahospitalario en pacientes adultos con HDA en un hospital de referencia nacional. / Background: Upper gastrointestinal bleeding (UGIB) is one of the most common medical emergencies. Part of its approach includes performing a second endoscopy, known as second look (SL). However, its indications and usefulness are controversial. Objectives: To evaluate the effectiveness of SL in preventing nosocomial rebleeding in adult patients with non-variceal upper gastrointestinal bleeding. Methods: A retrospective cohort of 1144 patients diagnosed with UGIB admitted at a Digestive Bleeding Unit of a reference center for Social Security in Lima, Peru was performed; during the years 2012 and 2014. The response variable was rebleeding and the exposure variable was programmed SL. Besides hemoglobin on admission, comorbidities, blood transfusion and endoscopic variables were measured. The cumulative incidence, relative risk (RR) and effectiveness were calculated, and using a generalized linear model of the Poisson family link log with robust standard errors, incidence rate ratios (IRR) were estimated. Results: The cumulative incidence rebleeding overall was 24.48% (n = 280). Significant difference between the cumulative incidences (IA) between the SL group and the control group (11.7% vs 29.0%, respectively, p <0.01) was found. The RR was 0.40 (95% CI 0.29 - 0.56) .The calculated effectiveness was 59.81% (95% CI: 44.17 - 71.08). The regression models also found a decrease in incidence in both crude model (IRR: 0.34 95% CI 0.24 to 0.49) and in the adjusted models. The first model was adjusted for variables with statistically significant differences between exposed and unexposed (IRR: 0.12 95% CI 1.8 to 0.18), the second was adjusted for variables that were significantly associated with rebleeding (IRR 0.21 95% CI 0.15-0.30). The third model was adjusted for variables that met classical criteria of confusion (IRR: 0.12 95% CI 0.08 to 0.18). / Tesis

Orientador: Érika Veruska Paiva Ortolan / Resumo: Introdução: A aspiração pulmonar de conteúdo gástrico configura importante causa de morbidade associada à anestesia. O volume gástrico residual é suficiente para aumentar esse risco. Deste modo, as atuais diretrizes recomendam um jejum pré-anestésico de 2 horas em crianças para líquidos claros, bem como os guidelines da Sociedade Europeia de Anestesiologia e o protocolo ERAS (Enhanced Recovery After Surgery) recomendam ingestão de bebidas ricas em carboidratos no período pré-operatório. Entretanto, a análise quantitativa e comparativa do volume residual gástrico das diferentes soluções ricas em carboidratos disponíveis comercialmente é inexistente, especialmente em pacientes pediátricos. Objetivo: Comparar o volume residual gástrico, em crianças que consumiram três soluções ricas em carboidratos, após jejum abreviado de 2 horas, assim como, a visibilização da mucosa e características do lago mucoso. Métodos: Ensaio clínico prospectivo, randomizado, duplo-cego nos grupos intervenção, envolvendo pacientes pediátricos, de 3 a 15 anos. Os pacientes foram randomizados em grupo de soluções ricas em carboidratos (suco de maçã, maltodextrina e Fresubin®) e no grupo controle (jejum), sendo oferecidos 10 ml/kg das soluções (máximo de 200ml). Após 2 horas foram submetidos à endoscopia digestiva alta de rotina sendo aspirado todo o conteúdo da câmara gástrica. Após 24 meses do início do estudo, foi previsto uma análise parcial dos resultados. O nível de significância considerado foi de 5... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: The pulmonary aspiration of gastric contents is an important cause of morbidity associated with anesthesia. The residual gastric volume is sufficient to increase this risk. Thus, the current guidelines recommend a 2-hour preanesthetic fast in children for clear liquids, as well as the guidelines of the European Society of Anesthesiology and the ERAS protocol (Enhanced Recovery After Surgery) recommend intake of drinks rich in carbohydrates in the pre-operative period. However, quantitative and comparative analysis of gastric residual volume of different commercially available solutions rich in carbohydrates is non-existent, especially in pediatric patients. Objective: To compare the gastric residual volume in children who consumed three solutions rich in carbohydrates, after an abbreviated fast of 2 hours, as well as the visualization of the mucosa and characteristics of the mucous lake. Methods: Prospective, randomized, double-blind clinical trial in intervention groups, involving pediatric patients, aged 3 to 15 years. The patients were randomized into a group of solutions rich in carbohydrates (apple juice, maltodextrin and Fresubin®) and in the control group (fasting), being offered 10 ml/kg of the solutions (maximum 200ml). After 2 hours, they underwent routine upper digestive endoscopy and the entire contents of the gastric chamber were aspirated. Twenty-four months after the start of the study, a partial analysis of the results was foreseen. The level of ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Em função de sua disponibilidade no mercado e qualidade nutricional, derivados da soja são importantes fontes de proteína na alimentação animal. Apresentam perfil de aminoácidos semelhante ao de fontes animais, o que estimula seu uso como potencial substituto da farinha de peixe nas rações para aquicultura. No entanto, são deficientes em aminoácidos sulfurados e apresentam fatores antinutricionais que prejudicam o crescimento de peixes. O processamento da soja permite obter produtos mais refinados e altamente digestíveis, como concentrados proteicos (CPS), que têm elevado teor proteico e baixa quantidade de fatores antinutricionais, extraídos no processo de fabricação. Neste contexto, foi determinado o Coeficiente de Digestibilidade Aparente (CDA) do CPS em dietas para juvenis de duas espécies de Characidae autóctones: pacu (Piaractus mesopotamicus) e dourado (Salminus brasiliensis). Também foram avaliados os efeitos do uso deste ingrediente em níveis crescentes de substituição da farinha de peixe na dieta (ensaios com seis tratamentos e quatro repetições), com o objetivo de determinar o nível seguro de substituição sem prejudicar o ganho de peso. O pacu apresentou CDA para proteína (95,33 %) e energia (84,29 %) mais altos que o dourado (CDAproteína = 82,6 %; CDAenergia = 66,6 %), indicando maior plasticidade da espécie para o aproveitamento de fontes vegetais. Baseado em ensaios de desempenho, nas dietas para pacu foi possível substituir até 78,05 % da farinha de peixe das dietas experimentais, enquanto que para dourados, até 37,2%. Acima destes níveis, houve redução no crescimento. A substituição crescente da farinha de peixe pelo CPS exerceu efeito regulatório sobre a atividade de enzimas pancreáticas nos primeiros segmentos do intestino das duas espécies, mensurada através da atividade da protease inespecífica, lipase inespecífica e &alpha;-amilase. Também promoveu redução na altura das dobras intestinais quando a substituição foi total, detectada através da morfometria da parede intestinal do intestino anterior. Estes efeitos podem ser consequência da ação conjunta de fatores antinutricionais da soja, principalmente inibidores de enzimas, potencializados quando a farinha de peixe foi totalmente substituída pelo CPS; e da habilidade com a qual cada espécie digere / absorve os nutrientes. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que o CPS pode ser utilizado em substituições parciais da farinha de peixe em dietas para peixes onívoros e carnívoros. / Because of market availability and nutritional quality, soybean and its by-products are important sources of protein for the animal feed industry. The amino acid profile of soy products is similar to that of animal sources, encouraging their use as surrogate protein source to fishmeal (FM) in aquafeeds. However, soy products and by-products are deficient in sulfur amino acids and contain anti-nutritional factors that hamper fish growth. Secondary processing of soybean meals yield more refined and highly digestible protein ingredients such as the soy protein concentrate (SPC), which have higher protein contents and lower concentration of anti-nutritional factors, partially extracted or inactivated during the manufacturing process. In such a context, this work determined SPC\'s Apparent Digestibility Coefficient (ADC) in diets for two juveniles neotropical, native Characins species: pacu (Piaractus mesopotamicus), and dourado (Salminus brasiliensis), and also studied the effects of replacing graded levels of FM by SPC (six treatment levels and four repetions) in the aim to determine the optimum substitution level for better growth. Pacu presented higher ADC for protein (95,33 %) and energy (84,29 %) than dourado (ADCprotein = 82,6 %; ADCenergy = 66,6 %), indicating the plasticity of the specie to utilize plant sources. Based on growth performance, for pacu it was possible to substitute until 78,05% of FM, whereas for dourado, until 37,20%. Above these levels, there were reduction on growth performance. The increasing replacement of FM by SPC had regulatory effect on the activity of pancreatic enzymes in the first segment of the intestine of both species, measured through enzymatic assays for unspecific protease, unspecific lipase and &alpha;-amylase. It also caused a reduction on intestinal fold height of proximal intestine. All of these effects can be attributed to soybean anti-nutritional factors, especially enzyme inhibitors, whose action was enhanced when FM was completely replaced by the SPC; and the specific ability of each specie to digest / absorb plant nutrients. It is safe to infer that SPC can only be used as partial replacement of FM in diets for omnivore and carnivore fish.

A desconexão ázigo-portal e esplenectomia (DAPE) é a operação mais aceita e realizada em nosso meio para a profilaxia da recidiva hemorrágica por ruptura de varizes esofágicas ou gástricas em pacientes portadores de esquistossomose hepato-esplênica. Menores índices de ressangramento são obtidos através da associação da DAPE com escleroterapia ou ligadura elástica endoscópica das varizes esofágicas realizada no pós-operatório. Faltam trabalhos mostrando a evolução, a longo prazo, dos doentes esquistossomóticos submetidos a este tratamento. Este estudo retrospectivo tem como objetivo avaliar a evolução destes pacientes com tempo mínimo de seguimento de 5 anos. Foram analisados os prontuários dos pacientes operados no Serviço de Cirurgia de Fígado e Hipertensão Portal da Disciplina de Cirurgia do Aparelho Digestivo do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, no período compreendido entre março de 1989 a março de 2001 e que foram acompanhados prospectivamente. Avaliamos dados clínicos, laboratoriais, endoscópicos e ultra-sonográficos de 97 pacientes com seguimento de 116,4 ± 46,7 meses. Nenhum paciente cursou com insuficiência hepática clínica ou laboratorial. Ocorreu, no pós-operatório tardio, correção da anemia, leucopenia e plaquetopenia, diminuição dos níveis de bilirrubinas total e indireta séricas e aumento do tempo de atividade da protrombina. Houve significativa redução do número e calibre das varizes esofágicas, assim como da presença de sinais de manchas vermelhas e de varizes gástricas. Houve aumento na freqüência de gastropatia congestiva, entretanto, sem repercussão clínica significativa. A recidiva hemorrágica xviii ocorreu em 24,7% dos pacientes, sendo em 14,6% quando considerada apenas por varizes esofágicas, gástricas ou duodenais. A probabilidade estimada de não ocorrer ressangramento em 20 anos é de 67,1%, sendo de 82,5% quando considerada recidiva por varizes. Em quatro pacientes a recidiva hemorrágica ocorreu por varizes, mesmo após o relato, em exame endoscópico prévio, de erradicação das varizes esofágicas. À avaliação ultrassonográfica observou-se redução do calibre da veia porta no pósoperatório tardio, em comparação ao pré-operatório. Concluímos que a desconexão ázigo-portal com esplenectomia, associada ao tratamento endoscópico de varizes esofágicas no pós-operatório, propicia bons resultados do ponto de vista clínico com baixa morbidade e mortalidade; permite melhora laboratorial da função hepática e correção do hiperesplenismo; determina a redução da incidência dos sinais endoscópicos preditivos de sangramento digestivo por hipertensão portal (varizes esofágicas de grosso calibre, sinais de manchas vermelhas e varizes de fundo gástrico), porém, a gastropatia congestiva é mais freqüente; permite adequada profilaxia da recidiva hemorrágica em 67% dos pacientes ao longo de 20 anos. A recidiva hemorrágica por varizes pode ocorrer mesmo após a erradicação das varizes esofágicas, tanto por recidiva de varizes como por varizes de outro sítio (gástrica ou duodenal). Ocorre redução do calibre da veia porta no pós-operatório tardio, observado em exame ultrassonográfico em comparação ao pré-operatório. / Esophagogastric devascularization and splenectomy (EGDS) is nowadays the most performed operation for esophageal varices bleeding recurrence prophylaxis in hepatosplenic schistosomiasis. Lower rebleeding rates are obtained through the association of EGDS with postoperative endoscopic sclerotherapy or elastic bandage of esophageal varices, however, there is a lack of studies showing long term results. The objectives of this study were to evaluate retrospectively EGDS results in patients with at least five years of follow-up. Clinical, laboratorial, endoscopic and ultrasonographic data of 97 patients submitted to EGDS from March 1989 to March 2001 were analyzed. The mean follow-up was 116.4 months. There was no postoperative clinical or laboratorial hepatic insufficiency. In the late follow-up we observed normalization of preexisting anemia, leucopenia, thrombocytopenia, hyperbilirubinemia, and a prothrombin activity time increase. There was a significant esophageal varices caliber and number reduction, cherry red spots signs and gastric varices decrease. Congestive gastropathy was observed more frequently but without clinical importance. Bleeding recurrence occurred in 24.7% of the patients, however, in 14.6% when esophageal varices hemorrhage was considered. Estimated probability of rebleeding prophylaxis over 20 years is 67.1% and 82.5% when variceal recurrence was considered. Bleeding recurrence occurred in four patients even after endoscopic evaluation showing esophageal varices eradication. There was a significant portal vein caliber reduction on late ultrasound assessment, compared to preoperative. We concluded that the EGDS with postoperative endoscopic treatment leads to good clinical results with low morbidity and mortality; provides laboratorial liver function improve and xx hypersplenism correction; determines endoscopic predictive signs of portal hypertension digestive bleeding decrease (large esophageal varices, cherry red spots signs and gastric varices), however congestive gastropathy is more frequent; allows appropriate bleeding prophylaxis in 67% of the patients over 20 years. Variceal hemorrhagic recurrence may occur even when esophageal varices eradication is reached suggesting the need of an endoscopic surveillance even in this group of patients.

A mosca domestica (Musca domestica) é um dos insetos largamente distribuído e conhecido pelo homem. A larva de M. domestica possui no conteúdo luminal do ventrículo anterior e médio uma atividade proteolítica com pH ótimo entre 3,0 3,5 e propriedades cinéticas similares a catepsina-D. Três cDNAs codificantes para preprocatepsina-D (ppCAD1, ppCAD2 e ppCAD3) foram clonados a partir de uma biblioteca de cDNA ventricular de larvas de M. domestica. As sequências possuem o peptídeo sinal, o propeptídeo e a enzima madura contendo os resíduos catalíticos e todos os resíduos de ligação ao substrato conservados, achados em uma catepsina-D lisossomal bovina. Um cladograma de sequências de aminoácidos de catepsinas-D de insetos e vertebrados depositados no GENBANK formou um grande grupo dividido em duas ramificações monofiléticas: Uma com sequências de vertebrados e a outra com sequências de catepsinas-D lisossomais de insetos incluindo a ppCAD1. A sequência do pepsinogênio humana, ppCAD2, ppCAD3 e uma sequência de D. melanogaster são excluídas desse grande grupo indicando uma função não lisossomal para essas sequências. ppCAD3 deve corresponder a uma catepsina-D digestiva encontrada no conteúdo luminal em larvas do inseto devido: (1) Análise por RT-PCR indicam que os transcritos codificantes para a CAD3 são expressos no ventrículo anterior e porção proximal do ventrículo médio. (2) pCAD3 recombinante após autoativação sob condições ácidas possui um pH ótimo entre 2,5 3,0 que é próximo ao pH luminal do ventrículo médio onde essa enzima atua. (3) Imunoblots das proteínas de diferentes tecidos e marcadas com o anticorpo preparado contra a pCAD3 foi positiva apenas nos tecidos e conteúdo do ventrículo anterior e médio. (4) CAD3 é localizada pela técnica de imuno-ouro no interior de vesículas de secreção e próxima a microvilosidades nas células do ventrículo anterior e médio. Esses dados suportam a idéia que ao se adaptar a um hábito detritivo, a CAD digestiva da mosca (e de outros Diptera Cyclorrhapha) resultou do mesmo gene ancestral da catepsina-D lisossomal intracelular, da mesma forma que se acredita que ocorreu com a pepsina em vertebrados. Uma limitada quantidade de informações de sequências de DNA e aspectos moleculares de M. domestica é disponível até o presente momento. Nós então propusemos gerar sequências de ESTs a partir de uma bibilioteca de cDNA ventricular da larva desse inseto. Um total de 826 ESTs randomicamente selecionados presentes no ventrículos de larvas de M. domestica foram seqüenciados e analisados com programas de bioinformática e separado em 323 clusters. As sequências foram manualmente anotadas e separadas em 3 categorias: (S) produtos provavelmente secretados, (H) produtos de metabolismo em geral (housekeeping) e (U) produtos sem função conhecida. Cento e sessenta clusters (423 ESTs) codificavam para proteínas secretadas tais como: lisozimas, lipases, tripsinas, quimotripsinas, dipeptidades, carboxipeptidase e &#945;-amilases. Cento e trinta e dois clusters (190 ESTs) codificavam para sequências de metabolismo em energético, síntese de proteínas, transdução de sinal e outras funções celulares. Noventa e cinco clusters (231 ESTs) codificaram para proteínas sem similaridades com proteínas conhecidas no banco de dados. Estudos de expressão, localização e imunocitoquímica de sequências alvos deverão no futuro nos fornecer um melhor entendimento da fisiologia digestiva da larva de Musca domestica em detalhes moleculares. Uma enzima lipolítica (LipMD) foi identificada no item anterior. A sequência de aminoácidos obtidas é homóloga a lipases e contém os três bem conservados resíduos de aminoácidos que compõe a tríade catalítica (Ser183, His273 e Asp208) para esse grupo de enzimas. O fragmento de cDNA codificante para a LipMD foi clonado em vetor pAE (Ramos et al., 2004) e expresso em E. coli produzindo uma enzima com massa molecular de 37,3 kDa. A LipMD recombinante foi purificada e é capaz de hidrolizar tributirina e um grande número de substratos (pNP-acetato a pNP-esterato) e possui um pH ótimo próximo de 7,5. Analise por RT-PCR mostrou que os transcritos codificantes para a LipMD são expressos apenas no ventrículo anterior. Western-blots após SDS-PAGE das proteínas de vários tecidos e marcados com o anticorpo produzido contra a LipMD revelou a ocorrência da enzima principalmente no conteúdo luminal do ventrículo anterior. A LipMD é localizada pela técnica de imuno-ouro no interior de vesículas de secreção próximas a microvilosidades no interior das células do ventrículo anterior. Esta enzima pode atuar como uma enzima lipolítica digestiva secretada nessa região do ventrículo de larvas de M. domestica / The house fly, Musca domestica is one the best known and most widely distributed insects known to humans. M. domestica larvae display in anterior and middle midgut contents, a proteolytic activity with pH optimum of 3.0-3.5 and kinetical properties like cathepsin-D. Three cDNAs coding for preprocatepsin D-like proteinases (ppCAD1, ppCAD2, ppCAD3) were cloned from a M. domestica midgut cDNA library. The sequences encoding the signal peptide, propeptide and mature enzyme having all conserved catalytic and substrate binding residues found in bovine lysosomal cathepsin-D. A cladogram of sequences of insect and vertebrate cathepsin-D-like proteinases deposited on GENBANK form a large grouping divided into two monophyletic branches: one with vertebrate and the other with insect lysosomal sequences including ppCAD1. Human pepsinogen, ppCAD2, ppCAD3, and a sequence from Drosophila melanogaster are excluded indicating a nonlysosomal function for them. CAD3 should correspond to the digestive CAD found in enzyme assays because: (1) The mRNA for CAD3 is expressed (RT-PCR) only in the anterior and proximal middle midgut. (2) Recombinant pCAD3, after auto activation has a pH optimum of 2.5-3.0 that is close to the luminal pH of M. domestica midgut. (3) Immunoblots of proteins from different tissues and stained with antiserum prepared against recombinant pCAD3 were positive only for the anterior and middle midgut tissue and contents. (4) CAD3 is localized with immunogold labeling inside secretory vesicles and around microvilli in anterior and middle midgut cells. The data support the view that on adapting to a detritivorous habit M. domestica digestive CAD (and of other Diptera Cyclorrhapha) resulted from the same archetypical gene as the intracellular cathepsin-D, paralleling what happened with vertebrates. A limited amount of data regarding DNA sequences and molecular aspects of Musca domestica species is avaliable. We proposed to generate ESTs sequences from a cDNA library constructed from larval midguts. A total of 826 randomly selected midgut derived cDNAs were sequenced and assembled based on their similarities into 323 clusters. The sequences were classified into three categories: (S) probably secretory products, (H) housekeeping products and (U) products with unknown cell localization and function. One hundred and sixty clusters (423 ESTs) encode putative secreted proteins such as lysozymes, lipases, trypsins, chymotrypsins, dipeptidases, carboxypeptidases A and &#945;-amylases. One hundred and thirty two clusters (190 ESTs) encode housekeeping sequences associated with energy metabolism, protein syntesis, signal transduction and other cellular functions. Ninety five clusters (213 ESTs) encode proteins with no similarity with known proteins. Expression and high-throughput bioassay screening of target sequences must provide us with a better understanding of the digestive physiology of Musca domestica midgut larvae, in molecular detail. A lipolytic enzyme (LipMD) was identified from expressed sequence tags (EST) constructed from midgut larvae cDNA library. The deduced amino acid sequence is homologous to lipases and contained the three well-conserved amino acid residues, Ser183, His273, and Asp208, which form the catalytic triad of the enzyme. The cDNA fragment encoding for LipMD was cloned into a pAE vector (Ramos et al., 2004) and expressed in E. coli producing an enzyme with a molecular mass of 37.3 kDa. The recombinant LipMD was purified and was able to hydrolyse tributyrin and a broad range of substrates, from C2 to C18 p-nitrophenyl-esters and displayed an optimal pH of approximately 7.5. RT-PCR analysis in tissue homogenates (anterior, middle and posterior midguts, hemolymph, fat body and Malpighian tubules) showed that LipMD mRNA transcripts were expressed only in anterior midgut. Western-blots after SDS PAGE of proteins from different tissues and stained with anti-LipMD serum revealed that the enzyme occurs mainly in the anterior midgut lumen. LipMD is localized with immunogold labeling inside secretory vesicles and around microvilli in anterior midgut cells. LipMD is a candidate to be the digestive lipolytic enzyme found in that midgut region