Objetivo: Caracterizar o perfil das habilidades de linguagem (oral e escrita) de indivíduos com Displasia Frontonasal com e sem anomalias do sistema nervoso central. Modelo: Análise perspectiva descrevendo os achados da avaliação de linguagem em indivíduos com sinais clínicos de Displasia Frontonasal. Local de execução: Setor de Genética Clínica, HRAC-USP. Participantes: 14 indivíduos, com faixa etária variável, sendo 9 do gênero feminino e 5 do gênero masculino. O GI constituído por 7 indivíduos com displasia frontonasal isolada e 7 com displasia frontonasal associada a anomalias estruturais do Sistema Nervoso Central. Resultados: No GI, 3 Indivíduos (43%) apresentaram alterações nas habilidades de linguagem (oral e escrita), enquanto que no GII, 5 (71%) apresentaram os mesmos achados Na avaliação complementar, os resultados foram parcialmente concordantes com a avaliação clínica, sendo que 43% do GI apresentaram escores abaixo do esperado e no GII foram 71%. Conclusão: Conclui-se que a DFN associada a anomalias estruturais do SNC, como corpo caloso, apresentam em sua maioria, alterações nas habilidades de linguagem oral e escrita em porcentagem bem maior a DFN isolada. Porém as alterações de linguagem/aprendizagem podem estar associadas a DFN, uma vez que esta afecção apresenta um quadro de características fenotípicas bem distintas. / Objective: To characterize the profile of language skills (oral and written) of patients with frontonasal dysplasia with and without central nervous system anomalies. Model: Analysis perspective describing the findings of the evaluation of language in individuals with clinical features of frontonasal dysplasia. Setting: Genetics Departament, HRAC-USP. Participants: 14 individuals with varying ages, 9 females and 5 males. The GI consist 7 individuals with isolated frontonasal dysplasia and 7 with frontonasal dysplasia associated with central nervous system anomalies. Results: In GI, 3 individuals (43%) showed alterations in language skills (oral and escreita), whereas in GII, five individuals (71%) showed the same results. On supplementary assessment, the findings were consistent to the clinical evaluation, and 43% had scores below in GI and 71% in GII. Conclusions: It is concluded that the FND associated with structural abnormalities of the CNS, such as the corpus callosum, have mostly changes in the skills of oral and written language in a much larger percentage DFN isolated. However the language / learning disabilities may be associated with DFN, since this disease presents with distinct phenotypic characteristics.

Um dos objetivos da pesquisa científica, atualmente, é encontrar biomarcadores que possam auxiliar na definição da probabilidade de progressão das lesões orais displásicas, e ainda sejam capazes de identificar os principais agentes moleculares envolvidos na carcinogênese de um determinado tipo de tumor. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar a expressão de β-catenina, ciclina D1 e Ki-67 em 15 espécimes de epitélio oral normal, 45 queilites actínicas displásicas e em 30 carcinomas espinocelulares de lábio. Essa amostra foi constituída por pacientes tratados na Faculdade de Medicina de Botucatu (Brasil) e no Hospital Clínico San Cecílio de Granada (Espanha). O grau de displasia epitelial e de diferenciação tumoral foi classificado com base nos critérios definidos pela Organização Mundial da Saúde. A avaliação dos biomarcadores foi realizada por meio da técnica imunohistoquímica, dividindo a espessura do epitélio em quatro compartimentos (basal, suprabasal, terço médio e terço superior) para o grupo controle e para as queilites actínicas e em três compartimentos (basal, suprabasal e região interna) para o grupo dos carcinomas espinocelulares de lábio. Para a comparação da média de expressão de cada marcador, nas diferentes localizações do epitélio foi utilizado o teste estatístico de Kruskal-Wallis. Para a correlação da expressão dos três marcadores entre os grupos foi utilizada a correlação de Spearman, com nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram uma perda discreta da expressão membranosa de β-catenina na camada basal das queilites actínicas com displasia epitelial intensa (Cis) e nos carcinomas espinocelulares de lábio, assim como uma expressão citoplasmática e nuclear, discreta e diretamente proporcional à desorganização epitelial nas camadas basal e suprabasal das queilites actínicas e carcinomas espinocelulares de lábio. Notou-se também um aumento da expressão de ciclina D1 e Ki-67 na camada basal à medida que aumentava a desorganização epitelial. Houve uma associação estatisticamente significativa da expressão de ciclina D1 e Ki-67 na camada suprabasal do grupo controle (p=0,030) e das queilites actínicas (p=0,001) e ainda na região interna dos carcinomas espinocelulares de lábio (p=0,000). Não houve correlação significativa entre as expressões nucleares de ß-catenina e de ciclina D1. Nossos resultados reforçam que a β-catenina, a ciclina D1 e o Ki-67, podem ser utilizados como biomarcadores preditivos para o câncer de lábio. Além disso, sugerem que a β-catenina e a ciclina D1 participam da carcinogênese labial, em eventos independentes da via de sinalização/Wnt. / One of the goals of scientific research today is to find predictive biomarkers that can help define the probability of progression of dysplastic oral lesions, and are still able to identify key molecular agents involved in the carcinogenesis of a particular type of tumor. The objective of this study was to investigate β-catenin, cyclin D1 and Ki-67 expression in 15 specimens of normal oral epithelium, 45 dysplastic actinic cheilitis and 30 squamous cell carcinoma of the lip. This sample consisted of patients treated at the Botucatu Medicine School (Brazil) and the Clinical Hospital San Cecilio of Granada (Spain). The degree of epithelial dysplasia and tumor differentiation was classified based on the criteria defined by the World Health Organization. The evaluation of biomarkers was performed by immunohistochemical technique, dividing the thickness of the epithelium into four compartments (basal, suprabasal, middle third and upper third) for the control group and actinic cheilitis and three compartments (basal, suprabasal and inner region) to the group of squamous cell carcinoma of the lip. For comparing the average expression of each marker in different locations of the epithelium we used the statistical test of Kruskal-Wallis. For the correlation of the three markers expression between the groups was used Spearman, with 5% significance level. The results showed a slight loss of membranous expression of β-catenin in the basal layer of actinic cheilitis with severe epithelial dysplasia (Cis) and squamous cell carcinoma of the lip, and a cytoplasmic and nuclear expression, slight and directly proportional to the epithelial disorganization in layers basal and suprabasal of actinic cheilitis and squamous cell carcinoma of the lip. It was also noted an increase in expression of cyclin D1 and Ki-67 in the basal layer as increased epithelial disorganization. There was a statistically significant association of cyclin expression D1 and Ki-67 in the suprabasal layer of the control group (p=0.030) and actinic cheilitis (p=0.001) and also in the inner region of squamous cell carcinoma of the lip (p=0.000). There was no significant correlation between the nuclear expression of ß-catenin and cyclin D1. Our results emphasize that β-catenin, cyclin D1 and Ki-67 can be used as predictive biomarkers for lip cancer. Moreover, they suggest that β-catenin and cyclin D1 acts on the lip carcinogenesis, in independent events signaling pathway/Wnt.

Displasia ectodérmica hipoidrótica é uma doença genética rara, clinicamente caracterizada por alterações envolvendo os dentes, pele e suas estruturas anexas. Manifestações orais comuns incluem anadontia ou oligodontia, dentes conóides e xerostomia. Poucos relatos associam displasia ectodérmica e redução do fluxo salivar. O objetivo desse estudo é analisar possíveis alterações nas glândulas salivares de dez portadores de displasia ectodérmica que fazem acompanhamento no Departamento de Dermatologia Pediátrica da Universidade de São Paulo. Ultrassonografia foi realizada em dez casos em infantes portadores de displasia ectodérmica hipoidrótica nas suas glândulas salivares parótida e submandibular. Três apresentaram alterações na glândula parótida e/ou submandibular. Aplasia ou hipoplasia das glândulas salivares maiores é associada a casos de displasia ectodérmica e sugere-se acompanhamento rotineiro das glândulas salivares maiores usando ultrassonografia para prevenção de alterações decorrentes da hiposalivação na cavidade oral. / Background- Hypohidrotic ectodermal dysplasia is a rare genetic disease, clinically characterized by defects involving skin and their adnexal structures, as well as oral structures such as teeth, and occasionally salivary glands. These latter manifestations include anodontia or hypodontia, conical teeth and xerostomia. Objective- To analyze possible alterations in major salivary glands of ten patients with ectodermal dysplasia, using image exam. Methods- Ultrasonography was performed in ten pediatric cases of hypohidrotic ectodermal dysplasia to investigate the status of parotid and submandibular salivary gland. Results- Three patients presented aplasia/hypoplasia of at least one gland examined. The other 7 patients did not present any alterations in parotid and submandibular glands. Limitations- Although ultrasonography exam is adequate to investigate the presence and status of major salivary glands, other important glands such as sublingual and minor mucous salivary glands are not well-visualized using this technique. Conclusions- Aplasia or hypoplasia of the major salivary gland is strongly related to ectodermal dysplasia and we suggest routine evaluation of the major salivary gland using ultrasound to monitor and manage the possible impact of xerostomia in oral health.

O presente estudo avaliou o sistema oculomotor medido por movimentos oculares em bebês com diagnóstico de Displasia Broncopulmonar (DBP). Bebês com idade gestacional 37 semanas, dependentes de oxigênio em concentrações acima de 21% por mais de 28 dias foram incluídos no grupo DBP, bebês nascidos a Termo (idade gestacional > 37 semanas), não internados foram incluídos no grupo nascido a termo e bebês prematuros (idade gestacional < 37 semanas), que permaneceram internados e que não fizeram uso de oxigênio por mais de 10 dias foram incluídos no grupo prematuro. Os bebês dos três grupos tinham exame oftalmológico de biomicroscopia e de fundo de olho com resultados normais. Foram excluídos do estudo, bebês em uso de oxigênio sob ventilação mecânica e/ou drogas vasoativas, com diagnóstico de hemorragia intracraniana, retinopatia da prematuridade e malformações motoras e/ou neurológicas congênitas ou adquiridas identificadas no exame neonatal ou durante a estadia no berçário. Todos os bebês realizaram uma única avaliação binocular. As avaliações foram realizadas com os bebês sentados confortavelmente e eram compostas pela avaliação de quatro movimentos oculares: sacadas (SAC), perseguição lenta (PL), reflexo vestíbulo-ocular (RVO) e nistagmo optocinéticos (NOC). Os movimentos oculares foram transcritos em variável categórica (presente ou ausente) e para análise estatística foram feitas comparações entre o grupo DBP, grupo nascido a termo e grupo prematuro (Teste Cochran Q), para garantir a confiabilidade dos resultados apresentados durante a avaliação, 28% da amostra foi avaliada por três observadores e um teste de aderência X2 foi utilizado para medir a confiabilidade entre os três observadores. Durante o estudo foram avaliados 109 bebês, 107 foram incluídos no estudo, dois bebês, com IG < 37 semanas, foram excluídos por usarem oxigênio por um tempo igual há 15 dias. Dos 107 bebês avaliados, 23 foram inclusos no grupo DBP, 47 no grupo nascido a termo e 37 no grupo prematuro. Os bebês do grupo DBP tiveram IG média de 32 semanas ± 3 semanas, APGAR 1° minuto 6 ± 1, 5° minuto 8 ± 2, 37 dias em oxigênio ± 10 dias, na quantidade média de 2 L/min ± 0,5 L/min. O peso de nascimento, idade gestacional, APGAR NO 1° e 5° minutos do grupo nascido a termo, DBP e Prematuro diferem significativamente entre si (Teste Kruskal-Wallis p = 0.0000, 0.0000, 0.0000, 0.0013 e 0.0001, respectivamente). O grupo nascido a termo apresentou maiores valores quando comparado ao grupo DBP e prematuro. Bebês com DBP manifestam ausência de três dos quatro tipos de movimentos oculares medidos quando comparado com o grupo nascido a termo e prematuro (Teste Q Cochran onde Q > 2 e p, < 0,05) / This study evaluated the oculomotor system measured by eye movements in infants diagnosed with bronchopulmonary dysplasia (BPD). Infants 37 weeks gestational age, oxygen-dependent at concentrations above 21% for more than 28 days were included in the BPD group, term infants (gestational age > 37 weeks), not hospitalized were included in term groups and preterm infants (gestational age < 37 weeks), who remained hospitalized and did not use oxygen for more than 10 days were included in the premature group. The three groups of babies had eye examination and biomicroscopy of the fundus with normal results. Excluded from the study, babies on oxygen in mechanical ventilation and/ or vasoactive drugs; with a diagnosis of intracranial hemorrhage, retinopathy of prematurity, motor and/or neurological congenital or acquired malformations identified in neonatal or during the stay in the nursery. All infants made a single binocular assessment. The evaluations were conducted with babies seated comfortably and were composed by the evaluation of four eye movements: saccades (SAC), slow pursuit (PL), vestibuloocular reflex (VOR) and optokinetic nystagmus (NOC). Eye movements were transcribed into a categorical variable (present or absent) and statistical analysis were made between BPD group, term group and premature group (Cochran Q test) to ensure reliable of the results presented during the evaluation, 28 % of the sample was evaluated by three observers and an adherence X2 test was used to measure the reliable between three observers. During the study, 109 infants were evaluated, 107 were included in the study, two infants with GA < 37 weeks, were excluded by using oxygen for a time equal to 15 days. Of the 107 infants evaluated, 23 were included in the BPD group, 47 in the term group and 37 in the premature group. Babies in the BPD group had GA of 32 weeks ± 3 weeks, APGAR 1st minute 6 ± 1, 5th minutes 8 ± 2, 37 days ± 10 days in oxygen, in the median amount of 2 L / min ± 0.5 L / min. Birth weight, gestational age, APGAR score at 1st and 5th minutes from the term group, DBP and Premature differ significantly (Kruskal-Wallis test p = 0.0000, 0.0000, 0.0013 and 0.0001, respectively). The term group had higher values when compared to the BPD and premature. Babies with BPD manifest absence of three of the four types of eye movements measured when compared with the term group and preterm (Cochran Q test where Q > 2 and p < 0.05)

A displasia fibrosa é uma alteração de desenvolvimento caracterizada pela substituição do osso normal por tecido conjuntivo denso e trabéculas ósseas imaturas, geralmente encontrada em adolescentes e adultos jovens. Uma alteração genética que envolve a proteína Gs-alfa parece ser a base do processo. A exata incidência e prevalência são difíceis de estabelecer, mas as lesões representam cerca de 5% a 7% dos tumores ósseos benignos. Nos ossos craniofaciais tem predileção pela maxila, podendo causar deformidade grave e assimetria, afetando igualmente ambos os sexos. Radiograficamente, pode apresentar diferentes padrões de imagem dependendo do grau de mineralização e maturação da lesão. .A avaliação da displasia fibrosa nas radiografias da região craniofacial pode ser difícil por causa das aparências variáveis e das estruturas que se sobrepõem, de modo que a tomografia computadorizada é um recurso relevante para o seu correto diagnóstico e planejamento de tratamento. O objetivo deste estudo foi caracterizar a displasia fibrosa através da análise da lacunaridade, um método multiescala para descrever padrões de dispersão espacial. Foram avaliados 10 pacientes (6 homens e 4 mulheres) comprometendo a maxila em sua grande maioria. Para a análise da lacunaridade, empregou-se cortes tomográficos axiais e coronais e, posteriormente, selecionou-se as regiões de interesse das áreas displásicas e do osso normal contralateral por meio do software MATLAB®. Após testes e análises estatísticas, concluiu-se que os cortes coronais, com ampliação de 3x do seu tamanho original, mostraram superioridade em relação aos axiais e, que a lacunaridade foi menor nas áreas da região displásica em relação ao osso normal, ou seja, a primeira apresentou uma maior homogeneidade de textura que a segunda. Mediante isso, pela técnica da validação cruzada leave-one-out é possível separar os grupos com uma alta acurácia (94,75%) concluindo-se que a lacunaridade é um método de análise de imagens contributivo na caracterização da displasia fibrosa. / Fibrous dysplasia is an alteration of development characterized by replacing normal bone for dense connective tissue and immature trabecular bones, typically found in teenagers and young adults. Genetic modification which involves alpha-Gs protein appears to be the basis of the process. The exact incidence and prevalence are difficult to be established, but injuries represent about 5% to 7% of benign bone tumors. On the craniofacial bones, the tumors have a predilection for the maxilla and often can cause severe deformity and asymmetry affecting both sexes equally. Radiographically, it may have different patterns depending on the image degree of mineralization and maturation of the lesion. The evaluation of radiographs of fibrous dysplasia in the craniofacial region can be difficult because of the different appearances and structures that overlaps, however, CT is an important resource for proper diagnosis and treatment planning. The aim of this study was to characterize the fibrous dysplasia by analyzing the lacunarity which is a multiscale method to describe patterns of spatial dispersion. We evaluated 10 patients (6 males and 4 females) and the maxillary was the most affected area. To the lacunarity analysis, we used an axial and coronal view and then were selected the regions of interest in the areas of dysplastic and contralateral normal bone by means of MATLAB® software. After tests and statistical analysis can be conclued that the coronal magnification 3x its original size showed superiority compared to thrust, and that the lacunarity was lower in the areas of dysplastic region in relation to normal bone, namely the first presented a more uniform texture than the second. Through this, the technique of cross-validation \"leave-one-out\" is possible to separate the groups with a high accuracy (94.75%) concluding that the lacunarity is a method of image analysis to characterize the contributory fibrous dysplasia.

A displasia coxofemoral (DCF) é uma doença poligênica, hereditária que acomete várias espécies e é influenciada por diversos fatores durante o desenvolvimento causando incongruência articular. É uma das afecções ortopédicas mais comuns em cães e possui alta incidência em animais da raça Pastor Alemão. O objetivo desse estudo foi correlacionar o grau de severidade da DCF com a locomoção dos cães através da análise cinética pelo sistema de baropodometria (Tekscan®) que propicia de modo quantitativo os valores das forças verticais de reação ao solo verificando assim alterações no apoio de cães displásicos durante a locomoção. Foram formados 5 grupos de acordo com a classificação de DCF segundo as categorias A, B, C, D e E com 8 pastores alemães em cada. Os animais foram examinados para controle e descrição dos sinais apresentados, bem como realizaram o teste de análise cinética do qual foi retirado 5 passagens válidas sobre a plataforma múltipla para comparação entre as forças de reação ao solo (FRS). Na análise cinética foram avaliados: - pico de força vertical (PFV), impulso vertical (IV) e tempo de apoio (TA) com a velocidade constante entre 1,3 a 1,6 m/s. Além da metodologia convencional foi realizada a análise de cada região de apoio, a fim de verificar a distribuição das FRS nos coxins e dígitos. Dos resultados obtidos nota-se uma tendência a diminuição progressiva do PFV nos membros pélvicos (MPs) a partir do grupo de cães com displasia leve (C) e o impulso se apresentou diminuído nos cães displásicos sem qualquer correlação com a severidade da doença. Nenhuma compensação relevante foi encontrada nos membros torácicos (MTs) e não houve diferença entre o TA em cães displásicos. A simetria entre o lado direito e esquerdo foi constatada em todos os grupos pela análise convencional. A nova metodologia permitiu a descrição detalhada do padrão da curva de força em formato de M realizada pelo coxim no inicio do apoio e pelos dígitos em um segundo momento. Entretanto dada a variabilidade e assimetria do apoio nessas regiões pode-se inferir que o coxim dos MTs têm maior porcentagem de apoio em relação aos dos MPs e essa distribuição não é afetada de modo regular na DCF. Os sinais clínicos apresentados ao exame físico como a dor, claudicação, atrofia muscular e diminuição de amplitude articular, corroboram com a diminuição do apoio em cães displásicos. Conclui-se que de acordo com o grau de severidade da DCF os animais têm uma tendência a apoiarem menos nos MPs, entretanto deve-se levar em conta a condição individual de cada animal, pois há cães displásicos que possuem o mesmo padrão de apoio de cães livres de DCF. / Hip dysplasia (HD) is a polygenic disease, inherited that affects many species and is influenced by several factors during development causing joint incongruity. It is one of the most common orthopedic disorders in dogs and has a high incidence in German shepherd dogs. The objective of this study was to correlate the degree of severity of the HD with the locomotion of dogs by kinetic analysis trough the pressure walkway system (Tekscan®) that provides quantitative values of vertical ground reaction forces (GRF) to the changes in the support of dysplastic dogs during locomotion. Five groups were performed according to HD´s classification in the categories A, B, C, D and E in German shepherd dogs total of 8 animals in each group. Dogs were examined and kinetic analysis was performed with 5 valid passages on the multiple platforms were used for comparison each groups. In kinetic analysis was assessed the peak vertical force (PVF), vertical impulse (VI), and stance phase (SF) with a constant speed between 1.3 to 1.6m/s. Besides conventional methodology the analysis of support checking the distribution of GRF in the pad and digits in each region were innovative. Results had a tendency to decrease progressively the PVF in the hindlimbs (HL) from group C (mild dysplasia) and VI is decreased in dysplastic dogs without any correlation with the severity of disease. Relevant compensation was not found in the forelimbs (FL) and even in dysplastic dogs there were no difference between the SF. Symmetry between the right and left side was found in all groups by conventional analyze. The new methodology has allowed a detailed description of the standard curve of force in M-shaped held by the support pad at the beginning and the digits in a second time. However given the variability and asymmetry of support in these areas we can only assert that the FL pads have a higher percentage of support from HL and this distribution is not affected on a regular basis in the HD. The clinical signs presented by physical examination like pain, lameness, muscle atrophy and articulate amplitude decreased, corroborated with the support decrease in dysplastic dogs. We conclude that according to the severity HD degree animals have tendencies to support less at the HL. However it should be consider the individual response because there are dysplastic dogs that have the same pattern of support that dogs free of HD.

A displasia coxo-femoral tem sido descrita como moléstia de origem genética, caracterizada por incongruência articular, com alterações dos tecidos conectivos da articulação. Podendo afetar qualquer raça, é particularmente prevalente em raças grandes e gigantes e está apontada como a principal causa do desenvolvimento de osteoartrite em cães. Muitas técnicas são apontadas para o tratamento destes quadros, e novas pesquisas têm sido desenvolvidas no intuito de se obter técnicas mais eficazes e menos cruentas, diminuindo também o tempo de recuperação. Destas, a denervação da articulação coxo-femoral surge como técnica simples e eficaz que recupera a atividade funcional dos membros afetados em tempo significativamente menor em relação às demais. Esta técnica consiste em remoção do periósteo acetabular, eliminando as fibras nervosas sensitivas da região com conseqüente promoção da analgesia. Este estudo visou quantificar as fibras nervosas presentes na região descrita, relacionando a densidade encontrada com a técnica cirúrgica, na intenção de torná-la mais precisa e eficaz. Foram utilizados 30 acetábulos, provenientes de 15 cães, machos e fêmeas, com peso variando entre 22,0 Kg e 62,0 Kg. A dissecção macroscópica revelou simetria bilateral com variação individual da enervação regional, com ramos originados dos nervos glúteo cranial, isquiático e femoral. A enervação do periósteo acetabular foi estudada por método de impregnação pela prata e os resultados obtidos apontam uma diferença estatística significativa entre a densidade (fibras/mm2) da região crânio-lateral em relação à região caudo-lateral do acetábulo. Demonstraram ainda haver simetria entre os antímeros estudados. As fibras nervosas apresentam disposição quase vertical no periósteo acetabular, em direção à cápsual articular, o que sugere a densidade nervosa também presente na região. / Hip dysplasia has been described as a genetic disease, caracterized by articular incongruence with alterations in the articular connective tissues. It may affect all breeds, prevailing in large and very large ones and it is supposedly the main cause in the development of osteoarthrites in dogs. Many techniques are indicated for the treatment of this disease, and new researches are being developed in the meaning of obtaining more efficient and less traumatic techniques, keeping the post operative time as short as possible. Among these, the denervation of the hip joint capsule comes as a simple and effective technique, that recovers the functional activity of the affected limbs in significantly less time then the others. This surgical procedure consists in removing the acetabular periosteum, eliminating the nervous fibers with consequent analgesy This study tried to quantify the nervous fibers present in the mentioned region, relating the density found with the surgical technique, intending to make it more efficient. Thirty acetabular fragments, from 15 dogs, both male and female, weighting between 22,0 and 62,0 Kg, were used. Macroscopic dissection showed bilateral symmetry, with individual variation of regional innervation, and branches from the cranial gluteal, ischiaticus and femoral nerves. The acetabular periosteal innervation was studied by silver staining and the results showed a significatn difference between the nervous fiber density (fibers/mm2) of the cranial lateral portion and caudal lateral portions of the acetabulum. They also showed both antimeres are symmetric. Nervous fibers are positioned almost in a vertical position in the acetabular periosteum, running directed to the joint capsule, suggesting nervous density also in that region.

Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2018-03-26T16:55:48Z No. of bitstreams: 1 RODRIGO_BRACCINI_MADEIRA_DA_SILVA_TES.pdf: 6388000 bytes, checksum: c5e864eb62bd553c3a29e7bad1b85fef (MD5) / Rejected by Tatiana Lopes (tatiana.lopes@pucrs.br), reason: Devolvido porque o pdf inserido no TEDE ? de outro aluno. on 2018-03-28T14:20:43Z (GMT) / Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2018-03-28T14:24:15Z No. of bitstreams: 1 FERNANDA_MAJOLO_TES.pdf: 6002507 bytes, checksum: 764acb66fc06c518428a40b9eb5bdd26 (MD5) / Approved for entry into archive by Tatiana Lopes (tatiana.lopes@pucrs.br) on 2018-03-28T16:23:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FERNANDA_MAJOLO_TES.pdf: 6002507 bytes, checksum: 764acb66fc06c518428a40b9eb5bdd26 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T16:29:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FERNANDA_MAJOLO_TES.pdf: 6002507 bytes, checksum: 764acb66fc06c518428a40b9eb5bdd26 (MD5) Previous issue date: 2018-01-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Malformations of cortical development (MDC) include a wide spectrum of Central Nervous System (CNS) disorders related to a complex process of cortex formation. Focal Cortical Dysplasia (FCD), a common type of MDC, is reported as the most frequent structural brain lesion found in children with refractory epilepsy to drug treatment undergoing surgery. Surgical treatment, with complete resection of the dysplastic lesion, is able to stop the seizure resistant to antiepileptic drugs, improving the individual's quality of life and reducing morbidity. FCD is characterized by multiple types of alterations both in cortical architecture and in cytologic abnormalities and it?s pathogenesis is still unknown. In 2004, Palmini et al. classified DCF according to white matter and cortical layer architecture. Taylor-type FCD is characterized by cortical laminar disorganization and dysplastic neurons, compromising the organization of the cortex into six-layered traditionally known. Understanding the mechanisms of action of neurological diseases has involved the use of animal models. However, in the case of brain development of epileptic syndromes, many decades of study have failed to provide a conclusive insight of their mechanisms. Modeling neurological diseases is especially attractive for the application of induced pluripotent stem cells (iPSCs), making possible to derive specific neurons for in vitro studies, contributing to the investigation of the disease. The aim of the present study was to investigate the possible differences in neurogenesis and neurodifferentiation of iPSCs from fibroblasts of individuals affected by Taylor-type FCD and normal individuals. iPSCs were generated from skin fibroblasts of two FCD individuals and two healthy individuals, to form the control group. The reprogramming was done through the fibroblasts exposure to viral vectors containing the OCT4, KLF4, SOX2, and c-MYC genes and the clones were characterized by immunohistochemistry. iPSCs were neurodifferentiated and analyzed at the 14th, 22nd and 35th days. We also analyzed the brain tissue, fibroblasts and iPSCs cells from the individuals. Through qRT-PCR, the expression of 14 genes involved in the neurodifferentiation process were quantified. These genes are associated to neural migration and differentiation, synaptic aspects and Notch signaling. Both individuals were diagnosed with Taylor-type FCD, more specifically, type IIb. In general, individuals with dysplasia presented alterations in the relative quantification in the most genes analyzed compared to control individuals in all processes and study groups (fibroblasts, brain tissue, iPSCs 8 and neurodifferentiated cells). The genes involved in the neural migration and differentiation processes, as well as synaptic aspects and Notch signaling presented quite altered expressions in dysplastic individuals, with the beginning of the majority processes early, before the physiologically typical period. From the found results, we can infer that during the embryonic period, in the neurogenesis and neurodifferentiation process, individuals affected by the disease, possibly presents neuroblasts more sensitive to stimulus, presenting differences in the development of the Nervous System. These changes may be directly related to dysplastic brain development. This work extends the understanding of embryonic neurodevelopment, open up opportunities to further investigations of the involvement and influence of each genes analyzed in the pathogenesis of FCD, as well as in each mechanism of action involved in the brain development. / As Malforma??es do Desenvolvimento Cortical (MDC) re?nem uma ampla gama de patologias do Sistema Nervoso Central (SNC) relacionadas a um complexo processo de forma??o do c?rtex. A Displasia Cortical Focal (DCF), tipo comum de MDC, ? relatada como a les?o cerebral estrutural mais frequente encontrada em crian?as com epilepsia refrat?ria ao tratamento medicamentoso submetidas ? cirurgia. O tratamento cir?rgico, com a ressec??o completa da les?o displ?sica, ? capaz de cessar a convuls?o resistente a drogas antiepil?ticas, melhorando a qualidade de vida do indiv?duo e diminuindo a morbidade. A DCF ? caracterizada por m?ltiplos tipos de altera??es tanto na arquitetura cortical quanto em anormalidades citol?gicas e sua patog?nese ainda ? desconhecida. Em 2004, Palmini e colaboradores classificaram as DCF de acordo com observa??es na subst?ncia branca e na arquitetura da camada cortical. A DCF do tipo Taylor ? caracterizada por uma desorganiza??o laminar e neur?nios displ?sicos, comprometendo a organiza??o do c?rtex em seis camadas histol?gicas tradicionalmente conhecidas. A compreens?o dos mecanismos de a??o das doen?as neurol?gicas tem envolvido o uso de modelos animais. Por?m, no caso do desenvolvimento cerebral das s?ndromes epil?pticas muitas d?cadas de estudo n?o conseguiram fornecer uma vis?o conclusiva sobre seus mecanismos. Modelar doen?as neurol?gicas ? especialmente atraente para aplica??o das c?lulas pluripotentes induzidas (iPSCs), possibilitando derivar neur?nios espec?ficos do pr?prio paciente para estudos in vitro, contribuindo para a investiga??o da doen?a. O objetivo do presente estudo foi investigar as poss?veis diferen?as na neurog?nese e neurodiferencia??o de iPSCs a partir de fibroblastos de indiv?duos acometidos pela DCF do tipo Taylor e indiv?duos normais. As iPSCs foram geradas a partir de fibroblastos de pele de dois indiv?duos displ?sicos e dois indiv?duos saud?veis, para compor o grupo controle. A reprograma??o se deu atrav?s da exposi??o dos fibroblastos a vetores virais contendo os genes OCT4, KLF4, SOX2, e c-MYC e os clones gerados foram caracterizados por imunohistoqu?mica. As c?lulas iPSCs foram neurodiferenciadas e analisadas nos per?odos de 14, 22 e 35 dias. Tamb?m foram analisados o tecido cerebral, fibroblastos e c?lulas iPSCs dos indiv?duos. Atrav?s de qRT-PCR, a express?o de 14 genes envolvidos no processo de neurodiferencia??o foram quantificados. Estes genes est?o associados a migra??o e diferencia??o neural, 6 aspectos sin?pticos e sinaliza??o Notch. Ambos os indiv?duos foram diagnosticados com DCF do tipo Taylor, mais especificadamente, do tipo IIb. No geral, os indiv?duos displ?sicos apresentaram altera??es na quantifica??o relativa na maioria dos genes analisados comparados aos indiv?duos controle, em todos os processos e grupos de estudo (fibroblastos, tecido cerebral, iPSCs e c?lulas neurodiferenciadas). Os genes envolvidos nos processos de migra??o e diferencia??o neural, aspectos sin?pticos e sinaliza??o Notch apresentaram express?es bastante alteradas nos indiv?duos displ?sicos, com o in?cio da maioria dos processos precoces, antes do per?odo fisiologicamente t?pico. A partir dos resultados encontrados, podemos inferir que durante o per?odo embrion?rio, no processo de neurog?nese e neurodiferencia??o, indiv?duos acometidos pela doen?a, possivelmente possuem neuroblastos mais sens?veis a est?mulos, apresentando diferen?as no desenvolvimento do Sistema Nervoso. Essas altera??es podem estar diretamente relacionadas com a forma??o do c?rebro displ?sico. Este trabalho amplia a compreens?o do neurodesenvolvimento embrion?rio, abrindo portas para futuras investiga??es de forma mais aprofundada sobre o envolvimento e influ?ncia de cada um dos genes analisados na patog?nese da DCF, bem como em cada mecanismo de a??o envolvido na forma??o do c?rebro.

Este trabalho teve como objetivo estudar um caso específico de epilepsia refratária causada por uma má formação no tecido cerebral, denominada displasia cortical focal (DCF). Por ser uma má formação no cérebro, suas consequências aparecem desde a infância, em que ela, a DCF, é a principal causadora das epilepsias de caso refratário. O mapeamento da região com DCF geralmente é feito por meio de imagens de ressonância magnética em conjunto com outras técnicas, como, por exemplo, o PET (positron emission tomography), o EEG (eletroencefalograma) intracraniano, entre outras. Contudo, por serem técnicas muito caras, de difícil realização ou muito invasivas, e por sabermos que as regiões displásicas possuem uma rigidez diferente da do restante do cérebro, foi proposto nesta dissertação o estudo desses casos utilizando uma técnica barata, simples, não invasiva e sensível à rigidez tecidual, a elastografia por ultrassom, na qual, para causar a deformação do tecido cerebral, foram usadas próprias artérias internas do cérebro. Para tal estudo, criamos um algoritmo de processamento de dados com uma interface gráfica GUI (graphical user interface) capaz de mudar os parâmetros de processamento e ver seus resultados em tempo real. Em seguida, esse algoritmo foi estudado em um ambiente controlado em material mimetizador de tecido biológico (phantom), no qual construímos um bloco de 10 x 10 x 12cm3, preenchido com material que mimetiza as propriedades mecânicas e acústicas do tecido mole e inserimos nele uma bexiga canudo preenchida com um uido simulador de sangue e uma inclusão mais rígida do que a base do material, posicionada acima do canudo. Foi utilizado, também, um acionador mecânico pulsátil para simular a pulsação mecânica equivalente à pulsação sanguínea da artéria cerebral. Foram feitas imagens elastográcas e de velocidade utilizando somente a deformação causada pelo deslocamento da bexiga, no interior do phantom, e, através de uma transformada de Fourier, foi calculado o período de pulsação da bexiga. Vimos que as imagens elastográcas e de velocidade foram capazes de localizar a inclusão, e o processamento temporal pode nos mostrar com precisão a frequência de pulsação da bexiga canudo. Finalizada essa etapa laboratorial, zemos o mesmo procedimento, porém in vivo, para dois casos: um com DCF tipo III-B, no qual não enxergávamos nada no modo B; e outro com tipo II-B, no qual foi observado uma diferença de impedância mecânica pelo modo B. As imagens foram coletadas durante o procedimento cirúrgico pelo próprio cirurgião usando um transdutor microconvexo acoplado a uma plataforma de ultrassom, modelo Sonix RP, e processadas num segundo momento. Vimos, no primeiro caso, pelas imagens elastográcas, as regiões mais rígidas, supostamente displásicas, que não estavam aparecendo no modo B e, no segundo caso, uma região maior do que a apresentada no modo B. Nossos resultados das medidas de frequência da pulsação arterial, para ambas as situações, 61; 5BPM e 91BPM, caram bastante próximos do valor medido com o eletrocardiograma durante a coleta do sinal, 65BPM e 94BPM, respectivamente. Por meio dos resultados da análise histológica, pudemos conrmar que o que estávamos enxergando com nosso programa era realmente uma região displásica. Dessa forma, concluímos que nosso algoritmo funcionou bem para esses casos clínicos. / The mainly goal of this work was to study a specic case of refractory epilepsy generated by a malformation in the brain tissue, called focal cortical dysplasia (FCD). Due the fact it is a brain malformation its eects show up since the childhood where it is the principal epilepsy generator. The mapping of this region is usually made by magnetic resonance images with another technique, such as, for instance, the PET (position emition tomography), the EEG (electrocardiogram), and others. However, for the fact that these techniques are expensive, dicult to perform or invasive, and knowing that the dysplastic regions are stier than the regular brain tissue, it was proposed in this dissertation the use of ultrasound elastography as a cheaper, simpler and noninvasive image modality capable to detect dierences in the tissue stiness of the FCD region. To generate the strain in the brain tissue it was used the pulsation of the local arteries. To achieve our goal, we created a data processing algorithm in MATLAB with a graphic user interface (GUI) capable to change the processing parameters to see its results in real time. This algorithm was tested in phantom using a block of tissue mimicking material (10 x 10 x 12 cm3). A balloon of latex led with a blood mimicking uid was immersed in the middle of the phantom and a cylindrical inclusion of 1 cm of diameter was immersed above the balloon. The bulb of the balloon was keep outside of the phantom to be mechanically pressured by a dedicated magnetic actuator, simulating the mechanical pulsation of the brain arteries. The velocity and elastography images were studied using just the strain caused by the displacement of the wall of the balloon tube inside the phantom. The period of pulsation was precisely calculated from these images. After that, we did the same procedure in two in vivo cases: one with FCD type III-B; and the other with FCD type II-B. All our intraoperative images were acquired for the surgeons using a micro convex transducer linked to an Ultrasound platform (Sonix RP) and, then, processed o-line. In the B mode scanning we didnât see any formation inside the brain for the rst case, and for the second, we did. In the elastographic images we saw a clearly stiffer region in the rst case that was invisible in the B mode; and for the second case, we saw a bigger stiffer region than we saw in the B mode imaging too. And for both results, the arteria pulsation frequency, 61.5 BPM and 91 BPM, were veryclose to the measured value collected in the electrocardiogram during the surgery, 65 BPM and 94 BPM, respectively. Analyzing the histological results we could conrm that what we were showing in our elastographic images were FCD, indeed. Thereby we concluded that our algorithm had worked in these clinical data.

INTRODUÇÃO: A lesão pulmonar da nova displasia broncopulmonar se caracteriza por uma diminuição da septação alveolar e do desenvolvimento vascular, ocorre um bloqueio no desenvolvimento pulmonar e consequentemente uma diminuição da alveolarização. A lesão pulmonar ocorre devido à associação de diversos fatores, incluindo a prematuridade, defesas antioxidantes inadequadas, e a ativação da resposta inflamatória. A exposição prolongada ao oxigênio também resulta em anormalidades na formação e na morfologia dos alvéolos, com redução tanto do volume pulmonar como da área de superfície interna alveolar. O objetivo do presente estudo foi comparar dois modelos de indução de lesão pulmonar através da exposição à hiperoxia prolongada em coelhos. MÉTODOS: Coelhas grávidas da raça New-Zealand-White foram sedadas para realização do parto cesáreo no 28º dia de gestação (termo = 31dias), coelhos prematuros foram expostos ao ar ambiente ou FiO295%. Outro grupo nasceu no 29º dia de gestação e foi exposto ao ar ambiente ou a uma FiO2=80%. Os animais foram mantidos em incubadora com controle de temperatura e alimentação e uma fórmula especial de leite similar ao leite de coelha por 11 dias. Desta forma, foram constituídos quatro grupos de estudo: Ar ambiente com 28 dias de gestação (Ar 28); exposição ao oxigênio (FiO2 95%) com 28 dias de gestação (O2 28); ar ambiente com 29 dias de gestação (Ar 29); exposição ao oxigênio (FiO2 = 80%) com 29 dias de gestação (O2 29). Após o sacrifício os pulmões foram fixados com 30 cmH2O de pressão transtraqueal. As lâminas do tecido pulmonar foram submetidas às seguintes colorações: hematoxilina e eosina para análise morfométrica; Weigert, resorcina-orceína modificado para a análise das fibras elásticas e Picrosirius para análise do colágeno. Foi realizada a contagem do Intercepto Linear Médio (Lm), determinada a Área de Superfície Interna (ISA), o número de alvéolos por campo microscópico, o espessamento septal e a proporção de fibras elásticas e colágenas. Análise Estatística: As variáveis contínuas foram analisadas por ANOVA One Way e a análise da sobrevida foi realizada através de uma curva de Kaplan-Meyer. O nível de significância adotado foi de 0.05. RESULTADOS: A sobrevida nos grupos de 29 dias foi melhor quando comparados com o grupo 28 dias. A hiperoxia bloqueou o desenvolvimento normal do pulmão, demonstrado por um aumento no Lm, uma diminuição significativa na ISA, uma diminuição no número de alvéolos, um aumento na espessura do septo interalveolar e também um aumento na proporção de fibras elásticas e uma diminuição na proporção de fibras colágenas nos dois grupos de animais expostos ao oxigênio em relação aos grupos que permaneceram em ar ambiente. CONCLUSÕES: Em coelhos prematuros o uso de uma concentração de oxigênio menor e um dia a mais de gestação reduziu a taxa de mortalidade mantendo os achados histopatológicos compatíveis aos da displasia broncopulmonar em humanos / INTRODUCTION: The lung injury of the \"new\" bronchopulmonary dysplasia is characterized by a decrease in alveolar septation and vascular development, resulting in a pulmonary arrest and a decrease in alveolarization. Lung damage occurs due to the association of many factors, including prematurity, inadequate antioxidant defenses and activation of the inflammatory response. Prolonged exposure to oxygen also results in abnormalities in the formation and morphology of the alveoli, with reduced lung volume and alveolar internal surface area. The aim of this study was to compare two models of lung injury induced by prolonged exposure to hyperoxia in rabbits. METHODS: New Zealand-White pregnant rabbits were sedated to perform a cesarean section on day 28 of gestation (term = 31days), premature rabbits were exposed to room air or FiO295%. Another group of animals was born at day 29 of gestation and was exposed to room air or FiO2=80%. The animals were kept in an incubator with temperature control and fed with a special milk formula similar to rabbit milk for 11 days. Four study groups were formed: Room air and 28 days of gestation (Air 28); exposure to oxygen (FiO295%) and 28 days of gestation (O2 28); room air and 29 days of gestation (Air 29 ); exposure to oxygen (FiO2=80%) and 29 days of gestation (O2 29). For microscopic evaluation, after sacrifice the lungs were fixed in situ at a constant inflation pressure of 30 cm H20. Lung slices were processed for hematoxylin-eosin staining - for morphometric analysis, Weigert\'s resorcin-orcein modified for the analysis of elastic fibers and Picrosirius - for analysis of collagen. The mean linear intercept (Lm), the internal surface area (ISA), the number of alveoli, the septal thickness and the proportion of elastic and collagen fibers were quantified. Statistical analysis was by One Way ANOVA for continuous variables, survival analysis was performed using a Kaplan-Meyer plot. The level of significance was 0.05. RESULTS: Survival in both 29 days groups was better when compared with 28 days groups. Hyperoxia impaired the normal development of the lung, demonstrated by an increase in Lm, a significant decrease in ISA, a decrease in the alveoli number, an increase in the septal thickness and an increase in the proportion of fibers elastic and a decrease in the proportion of collagen fibers in oxygen exposed animals. CONCLUSIONS: In premature rabbits using a lower concentration of oxygen and one more day of gestation reduced the mortality rate maintaining the histopathological findings similar to bronchopulmonary dysplasia in humans