A doença periodontal é um processo inflamatório crônico local em resposta ao acúmulo de biofilme bacteriano; porém, nas últimas décadas tem-se observado uma atenção maior aos efeitos sistêmicos da mesma. Estes efeitos sistêmicos podem acarretar em um aumento no risco à doença cardiovascular. As citocinas, as quais são produzidas pela resposta imunológica do hospedeiro, podem ser importantes marcadores da doença periodontal e das doenças cardiovasculares. Este estudo objetivou avaliar a associação entre condição periodontal e citocinas sanguíneas em pacientes com doença arterial coronariana crônica. Foi realizado um estudo observacional transversal no qual foram incluídos 89 pacientes com doença arterial coronariana que estavam sob cuidados cardiovasculares por no mínimo 6 meses. Amostras sanguíneas foram coletadas para mensuração dos níveis sistêmicos das citocinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ e TNF-α através da plataforma Multiplex. Foram realizados exames periodontais (seis sítios por dente em toda a boca) para registro da profundidade de sondagem (PS) e perda de inserção (PI). Modelos de regressão linear múltipla ajustado para gênero, índice de massa corporal e fumo foram usados para associação entre diversos parâmetros clínicos periodontais e níveis sistêmicos das citocinas individualmente. Observamos associação entre PS e PI com IFN-γ, TNF-α e IL-10. Número de dentes com PI e PS ≥6mm foram significativamente associados com maiores concentrações de IFN-γ. Média de PI e PS foram significativamente relacionadas com IL-10. Concentrações mais elevadas de TNF-α foram associadas com a média de PI. Pode-se concluir que pior condição periodontal é associada com maiores níveis de inflamação sistêmica em pacientes cardiopatas. Estes achados provém adicional evidência para suportar a doença periodontal como um provável fator de prognóstico em pacientes cardiopatas crônicos. / Periodontal disease is a chronic inflammatory disease resulting from dental biofilm deposition. However, in recent decades it has been observed an increased attention to the systemic effects of periodontal inflammation and destruction. This systemic effect could be associated to increased risk for cardiovascular diseases. Cytokines, which are produced by the host response, could be important predictors in periodontal disease and cardiovascular disease. The aim of this study was to assess the association between periodontal disease and low-grade inflammatory blood markers in stable coronary artery disease (CAD) patients. 89 patients under cardiovascular care for at least 6 months were included in this cross-sectional study. Blood levels of cytokines IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y and TNF-α were measured using the Multiplex technology. A full-mouth six sites per tooth periodontal examination was conducted to record probing depth (PD) and clinical attachment loss (CA loss). Multiple linear regression models adjusting for gender, body mass index and smoking were used to study the association between periodontal status and log levels of cytokines. Significant associations between periodontal parameters and IFN-γ, IL-10 and TNFα were observed. Higher numbers of teeth with CA loss and PD ≥6 mm were significantly associated with higher concentrations of IFN-γ. Mean CA loss and PD were significantly related to IL-10. Elevated concentrations of TNF-α were associated with higher mean CA loss. It can be concluded that periodontal disease is associated with increased systemic inflammation in cardiovascular patients. These findings provide additional evidence for supporting periodontal disease as a prognostic factor in cardiovascular patients.

Objetivo: Comparar dois métodos de aferição da perda de inserção clínica (PI) em pacientes periodontais. Materiais e métodos: Setenta e cinco exames (50,9 ± 8,02 anos, 72,2% mulheres e 49,4% não-fumantes), realizados por examinadores calibrados, com registro do Índice de placa visível (IPV), Índice de Sangramento gengival (ISG), Profundidade de Sondagem (PS), Sangramento à Sondagem (SS), Perda de Inserção Clínica aferida pelo método direto (PID) e Recessão Gengival (RG), em 6 sítios/dente, foram utilizados. Valores para PII (método indireto) resultaram do somatório da PS e RG dos sítios RG+ (sítios com recessão gengival). A PID foi considerada como referência. Os dados foram analisados por “clusters”. A dependência dos dados foi observada em níveis hierárquicos: indivíduo/exame, dente e sítio. Para a comparação entre PID e PII gerou-se o valor de d (diferença entre os métodos). Modelos multivariados foram aplicados para investigar o comportamento das demais variáveis em relação à estimação da PI. O Gráfico de Bland-Altman foi gerado para verificar a distribuição da concordância entre os métodos. Resultados: A média de PID (3,96±2,07) foi significativamente menor que a observada para PII (4,47±2,03). Portanto, o valor de d foi de 0,513±1,23. A análise multivariada revelou que ISG, SS, PS e o fato de ser sítio interproximal exerceram influência significativa nas aferições de PII em relação à PID (p≤0,05). A cada milímetro a mais de PS, a PII aumenta em até 0,38mm. Conclusão: Considerando-se a superestimação do dano periodontal determinada pelo método indireto, sugere-se que a PID seja preferível para a realização de exames periodontais, como uma forma de minimizar vieses de aferição. / Objective: This observational study sought to compare two methods for determination of clinical attachment loss (CAL) in periodontal evaluation. Materials and methods: The sample comprised 75 exams from periodontal patients (50.9±8.02 years; 72,2% female; 49.4% nonsmokers). Visible plaque index (VPI), gingival bleeding index (GBI), probing depth (PD), bleeding on probing (BOP), clinical attachment loss (CAL), and gingival recession (GR) were assessed at six sites per tooth. Direct clinical attachment level (CALD) measurements were obtained by measuring the distance between the CEJ and the most apical of probe penetration in the gingival sulcus/periodontal pocket. Indirect clinical attachment level (CALI) was calculated by adding the PD and GR measurements of sites with gingival recession (GR+). These measurements were obtained by three calibrated raters. Means were calculated for each indicator. Data were assessed by cluster analysis. Data dependence was observed at the following hierarchical levels: patient/examination, tooth, and site. The methods were compared by means of the difference (d) between CALD and CALI values. Univariate and multivariate mixed models were then applied. A Bland–Altman plot was generated to ascertain the distribution of agreement between the two methods for CAL determination. Results: The mean CALD and CALI values were 3.96±2.07and 4.47±2.03, respectively. Therefore, the indirect method overestimated CAL (d=0.513±1.23). On multivariate analysis, GBI, BOP, PD, and interproximal site location had a significant influence on CALI measurements as compared with CALD (p ≤ 0.05). With each additional 1 mm in PD, CALI increased by up to 0.38 mm. Conclusion: Given the extent to which periodontal damage is overestimated by the indirect method, we suggest that the directly measured clinical attachment level is preferable for periodontal examination, so as to minimize measurement bias.

A maioria das pessoas não consegue desenvolver em forma adequada, a remoção total do biofilme por médios mecânicos. Em decorrência a complementação com coadjuvantes químicos disponibilizados através de cremes dentais resulta em uma opção valida. O triclosan demonstrou ser efetivo na redução dos depósitos de biofilme supragengival em estudos clínicos com ausência de remoção mecânica por até quatro dias. Contudo, não se sabe o impacto dessa medida na inibição da formação do biofilme subgengival. O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito inibitório sobre a formação inicial do biofilme subgengival de uma suspensão de dentifrício contendo 0,3% de Triclosan e 2% de Copolimero com uma suspensão control sem triclosan. Para tanto um ensaio clínico controlado cruzado, randomizado, duplo-cego com quatro dias de duração sem medidas de higiene mecânica foi desenvolvido. Vinte e Seis indivíduos completaram os dois períodos previstos com uma fase de “wash-out” de 10 dias entre os dois. Os indivíduos bochecharam por um minuto com as suspensões a cada 12 horas. Ao longo desse período a presença da zona livre de placa foi registrada a cada 24 horas por um examinador calibrado. A formulação teste inibiu de forma significativa a formação do biofilme subgengival por até 72 horas. Pode-se concluir que bochechos diários com uma suspensão de dentifrício contendo triclosan inibiu de forma significativa a formação inicial do biofilme subgengival por um período de até 72 h comparado com um controle. / Daily systematic removal of dental biofilm in the vast majority of people does not prevent gingivitis and periodontits. Therefore the complement with chemical products delivered through toothpastes results in promising option. Triclosan has been shown effective in reducing supragingival biofilm on 4-days without tooth brushing, but unknown the impact on inhibition of biofilm subgingival. The aim of this study was to compare the inhibitory effect on the early formation of subgingival biofilm from a slurrie of toothpaste containing 0.3% Triclosan and 2% Copolymer vs. control slurrie without triclosan. A randomized crossover controlled double-blind clinical trial of 4-day period without mechanical hygiene was developed. 26 subjects completed 2 periods with wash-out period between them. People were rinsed with slurries at 12hs. A trained examiner evaluated every 24 hours, the plaque-free zone. In conclusion the triclosan/copolymer retards the early formation of biofilm subgingival up to 72 hours.

O corpo de evidências científicas a respeito da inter-relação entre câncer oral e doenças periodontais vem aumentando consideravelmente. Entretanto, estudos avaliando os mecanismos biológicos que permeiam esta associação ainda são escassos. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da exposição ao carcinógeno 4-nitroquinolina 1-óxido (4NQO), sobre a perda óssea alveolar induzida por ligadura e espontânea em ratos Wistar. Foram utilizados 84 ratos Wistar machos, divididos em quatro grupos experimentais: Grupo 1 (Controle total); Grupo 2 (Exposição ao 4NQO); Grupo 3 (Perda óssea alveolar); Grupo 4 (Exposição ao 4NQO e perda óssea alveolar). Os grupos 2 e 4 foram expostos ao carcinógeno, diluído em água (50ppm), por vinte semanas. A perda óssea alveolar foi induzida, por meio de ligadura com fio de seda no segundo molar da hemiarcada direita dos animais, nos grupos 3 e 4, sendo no grupo 4, após a exposição ao 4NQO. O peso corporal dos animais foi monitorado ao longo do estudo. Após decorridas vinte semanas do período experimental, os animais foram mortos e as peças maxilares e línguas foram analisadas em relação à perda óssea alveolar e lesões macroscópicas linguais. 71 animais completaram o estudo. Todos os animais expostos ao 4NQO apresentaram lesões macroscópicas na língua, demonstrando que o modelo experimental de exposição ao carcinógeno foi efetivo. A análise da perda óssea alveolar demonstrou diferenças significativas entre grupos expostos em relação a não expostos ao 4NQO na ocorrência de perda óssea alveolar espontânea. Essas diferenças não foram observadas nos lados com ligadura. Pode-se concluir que a exposição ao carcinógeno 4NQO potencialmente influencia a perda óssea alveolar espontânea em ratos. / Scientific evidence about the inter-relationship between periodontal disease and oral cancer has increased considerably. However, studies evaluating the biological mechanisms related to this association are still scarce. The aim of this study was to evaluate the effect of exposure to 4-nitroquinoline 1-oxide (4NQO) on spontaneous and ligature-induced alveolar bone loss. For this, 84 male Wistar rats were divided into four groups: Group 1 (Full Control), Group 2 (4NQO exposure), Group 3 (Alveolar bone loss), Group 4 (4NQO exposure and alveolar bone loss). Groups 2 and 4 were exposed to the carcinogen, diluted in water (50ppm) for twenty weeks. Alveolar bone loss was induced by silk ligatures at the upper right maxillae, around the second molar, for animals in groups 3 and 4; in group 4, ligatures were placed after exposure to 4NQO. Body weight of the animals was monitored throughout the study. After twenty weeks of the experimental period, the animals were killed and the maxillae and tongues were analyzed. Morphometric analysis of alveolar bone loss and macroscopic lesions in tongue were analyzed in 71 animals which completed the study. All animals exposed to 4NQO presented macroscopic lesions in dorsal part of tongue, demonstrating that the experimental model of carcinogen exposure was effective. The analysis of alveolar bone loss, was performed by medians and interquartile ranges and showed significant differences between animals exposed or not to 4NQO in terms of spontaneous alveolar bone loss. This was not observed in sites with ligatures. It can be concluded that exposure to carcinogenic 4NQO potentially influences spontaneous alveolar bone loss in rats.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência do álcool e /ou tabaco na perda óssea alveolar espontânea em ratos Wistar. Para isto, foram utilizados 24 animais machos, com aproximadamente 290 g de peso. Estes, foram divididos em quatro grupos experimentais: grupo controle (G1, N = 6), recebeu uma solução glicosada (5%) duas vezes por dia; grupo álcool (G2, N = 6) recebeu 2 g/kg de álcool (20%) duas vezes por dia; grupo tabaco (G3, N = 6) recebeu 6 cigarros duas vezes por dia; grupo álcool + tabaco (G4, N = 6) recebeu 2g/kg de álcool (20%) mais 6 cigarros, duas vezes por dia. O tempo experimental foi de 4 semanas. Todos os animais receberam alimento e água ad libitum. Para a análise morfométrica, as maxilas foram removidas e preparadas para fotografias padronizadas. Os resultados mostram que o consumo de ração ao longo do experimento diminuiu significativamente, exceto para o G3. Entretanto, todos os grupos experimentais aumentaram o peso significativamente durante o estudo. A média de perda óssea (±DP) alveolar foi de 0.31 mm (±0.08), 0.29 mm (±0.07), 0.33 mm (±0.10), e 0.33 mm (±0.08) para G1, G2, G3 e G4, respectivamente. Nenhuma diferença significativa foi encontrada entre os grupos. No entanto, quando avaliada a ocorrência de doença periodontal por meio de ponto de corte (percentil-75), pode-se observar que houve uma diminuição na ocorrência de perda óssea alveolar espontânea no grupo álcool e um aumento na ocorrência no grupo tabaco. A combinação de álcool+tabaco não diferiu estatisticamente do grupo controle. / The aim of the present study was to evaluate the effect of alcohol and/or tobacco exposure on spontaneous alveolar bone loss in Wistar rats. Twenty four, male, 60 days-old, Wistar rats were assigned to four groups: Group 1 received 10 mL/kg of glucose solution (5%). Group 2 received 2 g/kg alcohol (20%). Group 3 was exposed to tobacco smoke (6 cigarettes/60 min). Group 4 received both interventions of groups 2 and 3. Alcohol was given by gastric gavage and cigarette exposure was performed using a forced ventilation chamber. After 30 days, animals were sacrificed and the upper maxillae removed and defleshed. Morphometric analysis of alveolar bone loss (ABL) around the second molar was performed in standardized digital photographs. Analysis was conducted using paired t-test, one-way ANOVA and occurrence of spontaneous periodontal disease (ABL ≥ 0.39 mm) was analyzed by Fisher’s exact test. Significant differences in body weight were observed between all groups. Group 2 presented higher body weight as compared to the 3 other groups at 4 weeks (P ≤ 0.05). Mean ABL (±SD) values were 0.31 mm (±0.08), 0.29 mm (±0.07), 0.33 mm (±0.10), and 0.33 mm (±0.08) for groups 1, 2, 3, and 4, respectively. No significant differences were found among groups. In the analysis of occurrence of periodontal breakdown, alcohol exposure decreased the occurrence of ABL and cigarette exposure increased ABL. The combination of alcohol and cigarette exposure did not differ from the control group. Light to moderate alcohol consumption decreased the occurrence of periodontal breakdown, while tobacco increased this rate.

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Gilson Cesar Nobre Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaSallesBrancode_D.pdf: 18183834 bytes, checksum: 7e68ca8a08aa330701eecf3a55349a69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A fluoxetina é um droga inibidora seletiva da recaptação de serotonina que apresenta propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal (DP). In vitro, avaliou-se a influência da fluoxetina sobre a capacidade das células dendríticas (DCs) em apresentar antígeno aos linfócitos T. As DCs foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6 e diferenciadas utilizando-se GM-CSF (20 ng/mL). As DCs foram tratadas com a fluoxetina (concentrações: 0,01, 0,1 ou 1 ?M) para análise da produção de citocinas e quimiocinas, bem como da expressão de MHC-II e moléculas co-estimuladoras (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) aos linfócitos T, utilizando-se ensaios de ELISA e citometria de fluxo respectivamente. Culturas de DCs e linfócitos T reativos ao Aggregatibacter actinomycetemcomitans (×Aa-T) foram utilizadas para avaliação de proliferação/ativação de linfócitos T. A desipramina, um inibidor seletivo da recaptação de norepinefrina, também foi incluída nos ensaios in vitro para comparação. In vivo, avaliou-se os efeitos da fluoxetina sobre a resposta inflamatória e a destruição tecidual utilizando-se modelo de DP induzida por ligadura. Ratos Wistar machos (SPF) foram submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo): 1) ratos sem ligadura e sem tratamento (grupo controle); 2) ratos com ligadura e tratados com solução salina (grupo ligadura); 3) ratos com ligadura e tratados com a fluoxetina (20 mg/kg/dia, grupo ligadura + fluoxetina). Análises de reabsorção óssea na região de furca (lâminas coradas com H&E) e de colágeno no tecido conjuntivo da mesial dos primeiros molares (coloração de picrosirius) foram realizadas nos ratos submetidos a 15 dias de indução da DP. Tecidos gengivais de ratos submetidos a 3 dias de indução da DP foram submetidos às seguintes análises: expressão de IL-1?, COX-2, MMP-9 e iNOS utilizando-se RT-PCR e atividade da MMP-9 utilizando-se zimografia. Como resultados, a fluoxetina diminuiu a produção de IL-12, IL-1?, TNF-?, RANTES e MIP-1??pelas DCs estimuladas com LPS (P < 0,05, ANOVA, teste t de Student), bem como diminuiu significativamente a expressão de ICOSL. Além disso, reduziu a proliferação de ×Aa-T estimulados com Aa pelas DCs. A serotonina (5- HT) aumentou a proliferação de ×Aa-T, indicando que os efeitos da fluoxetina são independentes da 5-HT. A desipramina apresentou perfil semelhante à fluoxetina nos ensaios in vitro. No estudo in vivo, a fluoxetina reduziu a perda óssea em região de furca quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05 ANOVA, teste t de Student) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P > 0,05). Ainda, a fluoxetina reduziu a expressão de IL-1??e COX-2 e a atividade da MMP-9 quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05). Em conjunto, os dados demonstram que a fluoxetina diminuiu a capacidade de apresentação de antígeno das DCs, bem como a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a perda de colágeno na DP, indicando que ela pode constituir uma abordagem terapêutica promissora como moduladora da resposta do hospedeiro na DP / Abstract: Fluoxetine is a selective serotonin reuptake inhibitor presenting immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to evaluate the fluoxetine effects on immunoinflammatory response associated with periodontal disease (PD). The in vitro study evaluated the effects of fluoxetine on antigen-presentation capacity of dendritic cells (DCs). Bone marrow DCs obtained from C57BL/6 wild type mice were differentiated using GM-CSF (20 ng/mL). DCs were treated with fluoxetine (concentrations of 0.01, 0.1 or 1 ?M) for subsequent cytokine/chemokine assays (ELISA) and analysis of expression of MHC-class II and co-stimulatory molecules (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) to T cell activation using flow cytometry. Fluoxetine was also applied to cultures with both DCs and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)-reactive T cells (×Aa-T), which were used for analysis of T cells proliferation/activation using thymidine and ELISA assays. Desipramine, a selective norepinephrine reuptake inhibitor, was also tested in vitro for comparison to fluoxetine. In vivo, male Wistar rats received ligature placement around mandibular first molars and were randomly assigned into three experimental groups (n=10/group): 1) Control rats (without ligature); 2) rats with ligature + placebo (saline; oral gavage); 3) rats with ligature + fluoxetine (20 mg/kg/day in saline; oral gavage). Histometric and histological analyses were performed for measurement of loss of bone in furcation region (H&E stain) and collagen fibers (picrosirius red stain) in the connective tissue of rats submitted to 15 days of PD induction. Gingival tissues were collected from animals submitted to 3 days of PD induction for analyses of mRNA expression of IL-1?, COX-2, MMP-9 and iNOS using RT-PCR, measurement of total protein concentration and MMP-9 activity using zymogram. Fluoxetine suppressed IL 12, IL-1?, TNF-?, RANTES and MIP-1??production by LPS-stimulated DCs (P < 0.05, ANOVA, Student's t test), as well as significantly reduced the expression of ICOS-L. Fluoxetine suppressed the proliferation of ×Aa-T stimulated with Aa-antigen presentation by DCs from co-cultures. When applied to ×Aa-T/DCs co-cultures, serotonin (5-HT) increased T cell proliferation, indicating that fluoxetine effects are independent of 5-HT. Desipramine effects were similar to those of fluoxetine. In the in vivo study, fluoxetine reduced alveolar bone loss as compared to ligature group (P < 0.05, ANOVA, Student's t test) and maintained collagen fibers levels similarly to control group (P > 0.05). Fluoxetine reduced IL-1??and COX-2 expression, as well as MMP-9 activity, from gingival tissues when compared to ligature group (P < 0.05). Altogether, data showed that fluoxetine can modulate the antigenpresentation capacity of DCs and reduce inflammatory response and loss of bone and collagen associated with PD. In conclusion, fluoxetine can modulate both immune and inflammatory responses on PD, suggesting that it may constitute a new therapeutic approach for modulation of host response in periodontal therapy / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Reginaldo Bruno Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Napimoga_MarceloHenrique_D.pdf: 980827 bytes, checksum: d6e89bf1b359918d8c502f0a7367d2c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Porphyromonas gingivalis (Pg) sintetiza diversas classes de fosfolipídeos. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos biológicos que estes lipídeos exercem sobre a reabsorção óssea. Células precursoras de osteoclastos de camundongos, incluindo RAW264.7 e células da medula óssea, foram estimuladas com um lipídeo recém caracterizado isolado de Pg (F24), LPS de Pg, RANKL e um isômero estrutural isolado de mamíferos (DMPE), seguida de coloração das células por fosfatase ácida (TRAP) para detecção de osteoclastos. A formação de lacunas de reabsorção em discos de dentina foi realizados para identificar a presença de osteoclastos maduros. Proteínas de células precursoras RAW264.7 com afinidade a F24 foram identificadas como sendo nucleolin através de espectometria de massa, e confirmada sua presença através de ensaio em microscopia confocal. Utilizando Western-blot e RNAi, a sinalização intracelular desencadeada pela F24 durante a osteoclastogênese foi analisada. A F24 mas não o LPS ou DMPE induziu números significantemente maiores de células multinucleadas TRAP+ quando comparado ao RANKL, assim como a formação de lacunas de desmineralização em discos de dentina, o qual não foi inibida pelo repressor do RANKL, a OPG. LPS de Pg, mas não a F24, induziu a produção de TNF-a, IL-1ß e IL-6 pelas células RAW264.7. Microscopia confocal mostrou que a F24 está co-localizada com este receptor na superfície de células RAW264.7. A F24 induziu a fosforilação de maior intensidade do p38 e JNK comparado ao RANKL. Este novo fosfolipídeo isolado de P. gingivalis, distinto do LPS, mostrou-se capaz de induzir osteoclastogênese utilizando nucleolin como a molécula receptora através de uma via independente do RANK / Abstract: Porphyromonas gingivalis (Pg) synthesizes several classes of complex phospholipids in addition to LPS. However, little is known about the biological effects of these phospholipids on bone resorption. Mouse osteoclast precursors cells including, RAW264.7 and bone marrow cells, were stimulated with phospholipids isolated from Pg (F24), Pg LPS, RANKL and a mammalian structural isomer (DMPE). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and a dentine-pit formation assay were used for the identification of activated mature osteoclasts. F24¿s counter-ligand expressed on RAW264.7 cells were identified by affinity purification and mass-spectrometry based proteomics, and counter-examined by a confocal microscopy. Using Western-blot, signaling pathways triggered by F24 during osteoclastogenesis were examined with RNAi technology. F24, but not LPS or DMPE, induced significantly higher number of TRAP+ multinuclear cells from osteoclast precursors than RANKL, along with dentine-pit formation, which was not inhibited by RANKL decoy receptor OPG. Pg LPS, but not F24, induced TNF-a, IL-1ß and IL-6 by RAW264.7 cells. Proteomics analyses identified nucleolin as a ligand for F24. Confocal microscopy revealed the co-localization of F24 and its ligand on the surface of RAW264.7 cells. F24 induced stronger phosphorylation of p38 MAP kinase than RANKL. A novel P. gingivalis phospholipid that is distinct from LPS represents a new class of RANK-independent osteoclast differentiation factor / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Celia Marisa Rizzati-Barbosa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mengatto_CristianeMachado_M.pdf: 911060 bytes, checksum: 2e1e0d90cd78db26bbc3b3ab221b99f9 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A maioria dos estudos anteriores a respeito dos efeitos do uso de próteses parciais removíveis (PPRs) sobre as condições periodontais dos dentes retentores demonstraram resultados contraditórios, e variabilidade nos métodos de padronização e avaliação. O objetivo desse estudo foi avaliar clinica e radiograficamente as condições periodontais dos dentes retentores diretos de prótese parcial removível (PPR) em pacientes edêntulas na arcada superior, e parcialmente dentadas (Classe I de Kennedy) na arcada inferior. Foram investigados: Índice Dicotômico de Placa (IPL), Índice de Sangramento à Sondagem (ISS), Mobilidade Dental (MD), Nível Clínico de Inserção Relativo (NCIR), Profundidade de Sondagem (PS), Nível da Margem Gengival (NMG), e Altura da Crista Óssea Percentual (ACOP). As avaliações foram feitas antes (t0) e após seis meses (t1) da instalação das próteses, com auxílio de sonda periodontal eletrônica de pressão controlada, guias para sondagem, registro oclusal em silicone para padronização das radiografias, e de um software (Image Tool®) para mensuração das radiografias periapicais. Para comparações que atenderam as pressuposições das análises paramétricas, utilizou-se o teste-t para amostras pareadas, para as que não atenderam, utilizou-se o teste de Wilcoxon para amostras pareadas, a 5% de significância. Entre t0 e t1, houve aumento estatisticamente significativo do IPL, ISS e MD (p<0,05); diminuição da ACOP distal (p<0,05); perda do NCIR e aumento da PS para as faces mesial, distal e lingual (p<0,05); perda do NCIR e diminuição do NMG para a face vestibular (p<0,05). Não houve diferença estatística significativa entre t0 e t1 para PS na face vestibular, ACOP mesial e NMG para a face lingual, mesial e distal (p>0,05). Considerando as condições deste estudo, concluiu-se que houve piora do acúmulo de biofilme e inflamação gengival, e das condições periodontais clínicas e radiográficas dos dentes retentores diretos após seis meses de uso da PPR de extensão distal / Abstract: Most previous studies about the influence of removable partial dentures (RPD) in periodontal conditions of abutment teeth have shown contradictory results, and variability regarding the methods of standardization and evaluation. Consequently, few comparisons can be made with the literature, as there is little systematic approach about the information reported. The aim of this study was to evaluate periodontal conditions of abutment teeth of 19 female patients (45 to 79 years old) rehabilitated with distal extension mandibular RPD and maxillary complete denture. Initially all were given oral hygiene instructions and motivation. Plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), tooth mobility (TM), relative attachment level (RAL), probing depth (PD), gingival margin level (GML), and radiographic height of alveolar bone crest (HAC) were assessed immediately prior to (t0) and six months after (t1) prosthesis setting. Evaluations were carried with electronic periodontal probe, acrylic probing stents, and customized silicone occlusal stents to facilitate standardized periapical radiographs of abutment teeth. Radiographic measurements were taken by special software (Image Tool). Data were submitted either to paired Wilcoxon test or paired t-test, at 5% significance. There were increase in PI, BOP and TM; reduction of HAC for distal surface; attachment loss and increase in PD for mesial, distal and lingual surfaces; attachment loss and reduction in GML for buccal surface (p<0.05). There was no significant statistical difference between t0 and t1 in PD for buccal surface, HAC for mesial surface, and GML for lingual, mesial and distal surfaces (p>0.05). Within the limitations of the present study, it was concluded that biofilm accumulation, gingival inflammation, and periodontal and radiographic conditions of abutment teeth deteriorated six months after prosthesis setting / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Dagmar Ruth Stach-Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T14:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JulieteAparecidaFranciscoda_M.pdf: 1928631 bytes, checksum: b86edaf3408398f4a27c1c24171c8108 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A doença periodontal é caracterizada como um grupo de lesões que afetam os tecidos que rodeiam e suportam os dentes nos seus alvéolos. A placa bacteriana é seu agente etiológico principal, todavia inúmeras evidências sugerem que a doença periodontal não está simplesmente associada à colonização da cavidade oral por microrganismos patogênicos, mas à susceptibilidade ou resistência do hospedeiro, uma vez que, dependendo da resposta imune mediada a estes microrganismos poderá resultar ou não na destruição do tecido periodontal. Nos tecidos periodontais saudáveis, há um delicado equilíbrio entre os microrganismos encontrados na placa e a resposta do hospedeiro. Embora a resposta seja essencialmente protetora é influenciada por diversos fatores que podem gerar uma resposta imune exacerbada e deste modo, contribui para o agravamento das lesões e cronificação da doença periodontal. Entre os fatores de risco está o Diabetes Mellitus, caracterizado pela ineficiência na produção ou utilização inadequada de insulina pelo organismo, afetando o metabolismo de proteínas, carboidratos e gordura, resultando em severas desordens metabólicas. O objetivo inicial deste trabalho foi estudar o desenvolvimento da doença periodontal experimental em ratos sob influência do diabetes induzido por estreptozotocina (STZ), caracterizando as alterações morfológicas encontradas no tecido epitelial e conjuntivo, uma vez que, indivíduos diabéticos apresentam um retardo na capacidade de cicatrização. Os resultados obtidos confirmaram que os animais diabéticos tiveram cronificação da resposta inflamatória com aumento de células inflamatórias no tecido do periodonto, degradação maior e mais rápida de fibras colágenas, que levou ao acúmulo de fibras colágenas densas, aumentou aparentemente a quantidade de fibroblastos, aumentou a degradação de fibras reticulares que sustentam a membrana da basal, houve involução das papilas dérmicas e aumento da camada córnea. Uma vez que, nos animais diabéticos o processo fibrótico foi mais acentuado com o avanço da inflamação afetando a organização estrutural do tecido epitelial e conjuntivo, provavelmente devido ao aumento da degradação da matriz extracelular. Deste modo, efetuamos a avaliação das MMP2 e 9, também denominadas gelatinases, as quais entre outras atividades biológicas atuam na degradação proteolítica da matriz extracelular. Os resultados obtidos na quantificação da atividade enzimática das MMPs por zimografia mostrou que,a expressão das isoformas de MMP 2 foram significativamente menores nos animais diabéticos quando comparados aos animais normais durante todo decorrer do tempo experimental. Todavia, a atividade enzimática da MMP9 foi maior nos animais diabéticos. Estes dados foram confirmados pela imunofluorescência, uma vez que a MMP2 em animais normais foi expressa em vários tipos celulares como as células basais do epitélio, endotélio dos vasos, no tecido conjuntivo e algumas regiões entre fibras musculares. Todavia, em animais diabéticos sua expressão esteve mais limitada às células do epitélio e do tecido conjuntivo. Enquanto que, a expressão da MMP9 é mais evidente nos animais diabéticos. Entretanto, a análise da expressão da MMP2 por PCR quantitativo mostrou não haver diferença significativa entre os animais diabéticos e normais, todavia a expressão gênica da MMP9 apresentou expressão inversamente proporcional. Nos animais normais a sua expressão foi mínima na ausência do estimulo inflamatório e apresentou aumento no decorrer dos tempos experimentais. No animal diabético ocorreu o contrário, uma vez que, na ausência do estimulo inflamatório o nível de expressão da MMP9 foi elevado e durante a resposta inflamatória houve diminuição significativa da sua expressão. Estes dados sugerem que as MMP2 e MMP9 podem estar envolvidas na dinâmica da resposta do tecido periodontal atuando na degradação da matriz extracelular e resultam em diferentes padrões de fibrose nos animais normais e diabéticos / Abstract: The periodontal disease is characterized as a group of lesions that affect the tissues which surround and support the teeth in their correct places. The bacterial plaque is the major ethiological agent, and most evidences suggest the periodontal disease is not simply associated with oral cavity colonization by pathogenic microorganisms, but to host susceptibility or resistance to the disease, once that, the destruction of periodontal tissue can occur depending on the immune response activated by these microorganisms. In health periodontal tissues there is a slightly equilibrium between bacterial plaque microorganisms and host response. Although the immune response is essentially protective, ir s influenced by some factors which can develop an exacerbated immune response, and in this way, contributing to appearance of worse lesions and a periodontal disease more severe. The Diabetes Mellitus is one of many risk factors and is characterized by inefficient production of insulin or its inadequate utilization by the individual, affecting the protein, carbohydrate and lipids metabolisms, resulting in severe metabolic disorders. The aim of this project was to study the development of experimental periodontal disease in rats under influence of diabetes induced by streptozotocin (STZ), characterizing the morphological changes found in epithelial and connective tissues, considering that patients affected by this disease shows a delay in the healing capacities. Our results confirmed that the diabetic animaIs presented a chronic inflammatory response with an increase of inflammatory cells in the periodontal tissues, and higher and faster collagen fibers degradation occurred, causing their accumulation. Moreover, the amount of fibroblasts raised, the reticulin fibers that support the basal membrane were more destroyed, and finally there was an involution in dermic papillas and a comium layer thicker. In the diabetic animaIs, the fibrosis was more emphasized with the inflammation progression, affecting the structural organization of epithelial and connective tissues, probably due to the increase in extracellular matrix degradation. In this way, we evaluated the MMP 2 and 9, called gelatinases, which has a proteolytic activity in the extracellular matrix. The MMPs enzymatic activity quantification by zymography showed that, the MMP2 isoform expressions was significantly lower in diabetic animaIs when compared to controls, during alI the experimental time. However, the MMP9 enzymatic activity was higher in diabetic animaIs. These data were confirmed by immunoflorescence, because MMP2 in controls was expressed in more than one cellular type such as basal epithelial cells, endothelium cells, Cl»)J)ecÚve tjssues and some regions between musc1e fibers. Otherwise, in diabetic animaIs, its expression was limited to epithelial cells and connective tissue. The MMP2 expression in quantitative PCR showed no significant differences between diabetic and control animaIs, while MMP9 presented a genic expression inversely proportional. In controls, the MMP9 expression was minimal in lack of inflammatory stimulation and showed an increase during the experimental time. Otherwise, in the diabetic animaIs the MMP9 expression was higher, and during the inflammatory response, its expression decreased. These data suggest that MMP2 and MMP9 can be involved in dynamics of periodontal tissue response, acting in the extracellular matrix and resulting in different pattems of fibrosis in control and diabetic animaIs / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T07:17:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Higa_KarenCristiane_M.pdf: 2248937 bytes, checksum: 985d6be8df78440d12226577db008021 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Existem indicações de que há uma relação bidirecional entre diabetes mellitus e doença periodontal. Tanto o diabetes quanto a doença periodontal podem estimular a liberação crônica de citocinas pró-inflamatórias que têm um efeito deletério nos tecidos periodontals e na sensibilidade à insulina. Entretanto, não se investigou ainda o efeito da doença periodontal na via de sinalização insulínica. Portanto, os objetivos do presente estudo são: avaliar o efeito da doença periodontal na via de transmissão do sinal insulínico em ratos Wistar machos. Utilizou-se a extração de tecidos hepáticos e muscular após estimulação com insulina e imunoprecipitação seguida de "immunoblotting" com anticorpos anti receptor de insulina, anti-ERS-1, anti-IRS-2, antifosfotirosina, anti-p-Akt, anti-p-ERK Vi, anti-p-JNKl/2, anti-lKfi-o: e anti- fosfoserina 307 IRS-1 nos grupos controle e com periodontite. Os resultados mostraram que a concentração do receptor de insulina, do IRS-1, do IR.S-2, da Akt, da JNK1/2, da ERK 112 estimulada e não estimulada pela insulina no fígado e músculo permaneceram inalteradas nos dois grupos. No músculo, os animais com periodontite estimulados com insulina sofreram uma redução de 15±33% na fosforilação em tirosina do receptor de insulina, de 55±3% na fosforilação em tirosina do IRS-1, de 48±1,5% na fosforilação em tirosina do IRS-2, de 34 ±2,8% na fosforilação em serina da Akt e de 20±1% na fosforilação em tirosina da ERK1/2 (p< 0,05). Além disso, nos ratos com periodontite houve um aumento de 40±0,4% na fosforilação em tirosina da JNK 1/2, de 60±5,4% na fosforilação em serina 307 do IRS-1 e a expressão do iKp-a foi reduzida em 70±4,2% (p< 0,05). No fígado, os animais com periodontite estimulados com insulina sofreram uma redução de 62±2% na fosforilação em tirosina do receptor de insulina, de 45±3,8% na fosforilação em tirosina do IRS-1, de 55±0,5% na fosforilação em tirosina do IRS-2, de 31 ±3% na fosforilação em serina da Akt e de 22±4% na fosforilação em tirosina da ERK1/2 (p< 0,05). Além disso, nos ratos com periodontite houve um aumento de 50±0,5% na fosforilação em tirosina da JNK 1/2, de 40±4% na fosforilação em serina 307 do IRS-1 e a expressão do iKp-ct foi reduzida em 55±4,2% (p< 0,05). Além disso, ao realizar o teste de tolerância a glicose (ITT), o Kitt dos ratos com periodontite apresentaram valores menores como de 2,17± 0.38 em relação aos controles 4,88+ 0.56. No teste oral de tolerância a glicose (oGTT) a área sobre a curva da glicemia dos ratos com periodontite foi 18,7% maior em relação aos controles e a área sobre a curva da insulinemia dos ratos com periodontite foi 43,4% maior em relação aos controles. Tais resultados sugerem que alterações na via de sinalização da insulina no fígado e no músculo, podem estar envolvidas na resistência a insulina apresentada nesse modelo animal / Abstract: Traditional thinking/paradigms have maintained that periodontits is na oral disease and that the tissue destructive response remains localized within the periodontium, limiting effects of the disease to oral tissues supporting the teeth. Recent studies have indicated that periodontits may produce any number of alterations in systemic health and in the present study we investigated the pathophysiological relationships between periodontitis and insulin resistance. However, the exact molecular mechanism in unknown. We have examined the levels and the tirosine phosphorylation status of insulin receptor (IR), IRS-1, IRS-2, ERK1/2, JNK1/2, the serine phosphorylation status of Akt , IRS-1 and the expression of IicjJ-a, in liver and muscle of rats with periodontitis by immunoblotting with specific antibodies. The results show that the levels of the insulin receptor, IRS-1, IRS-2, Akt, JNK1/2, ERK 1/2 with and without insulin stimulated remains unchanged in both tissues. In the muscle, animals with periodontits, the insulin stimulated IR tirosine phosphorylation was decrease to 15±33%, the IRS-1 tirosine phosphorylation was decrease to 55±3%, the IRS-2 tirosine phosphorylation was decrease to 48±1,5%, the Akt serine phosphorylation was decrease to 34 ±2,8%, the ERK1/2 tirosine phosphorylation was decrease to 20±1% (p< 0,05). In addition, rats with periodontitis had a increase of 40±0,4% in tyrosine phosphorylation of JNK. 1/2, 60±5,4% in serine phosphorylation of IRS-1 and the expression of Ik(3-o. was reduced in 70±4,2% (p< 0,05). In the liver, animals with periodontite insulin stimulated had a decrease of 62±2% in tirosine phosphorylation of insulin receptor, the IRS-1 tirosine phosphorylation was decrease to 45±3,8%, the IRS-2 tirosine phosphorylation was decrease to 55±0,5%, the Akt serine phosphorylation was decrease to 31 ±3%, the ERK1/2 tirosine phosphorylation was decrease to 22±4% (p< 0,05). In addition, rats with periodontitis had a increase of 50±0,5% in tirosine phosphorylation of INK 1/2, 40±4% in serine phosphorylation of IRS-1 and the expression of Ik(3-o; was reduced in 55±4,2% (p< 0,05). In addition, the thirty minute insulin tolerance test (ITT), the rats with periodontitis had a decrease of 50% in the value of Kitt. In the oral glucose tolerance test (oGTT) the area under the glucose curve was 18,7% higher in rats with periodontitis and the area under the insulin curve was 43,4% higher in rats with periodontitis. These data suggest that periodontitis impair insulin signaling in muscle and liver of rats Wistar / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Fisiopatologia Médica