Este trabalho descreve a fabricação de filmes nanoestruturados de quitosana (Q) e metaloftalocianinastetrassulfonadas de níquel (NiTsPc), cobre (CuTsPc) e ferro (FeTsPc) pela técnica de automontagem. A formação dos filmes foi monitorada por espectroscopia na região do UV−vis, focalizando a absorbância da banda Q das metaloftalocianinas. A absorção aumentou linearmente com o número de bicamadas, indicando que a quantidade de metaloftalocianina adsorvida no filme é a mesma a cada bicamada depositada. A espessura média por bicamada variou entre 1,1 e 1,3 nm. Interações específicas nos filmes automontados foram analisadas por espectroscopia FTIR, nos modos de transmissão e reflexão, e Micro−Espectroscopia Raman, evidenciando a formação de interações iônicas entre grupos sulfônicos (SO3− da metaloftalocianina e grupos amina (NH3+) protonados da quitosana. Medidas de voltametria cíclica mostraram que os filmes de QNiTsPc sobre ITO são eletroativos, possuindo um par redox estável, reversível e bem definido em 0,80 V e 0,75 V, respectivamente. A corrente de pico anódica aumentou linearmente com a velocidade de varredura, indicando que a reação eletroquímica é controlada por um mecanismo de transferência de carga na superfície do eletrodo via saltos de elétrons (electronhopping). Entretanto, os filmes automontados de QCuTsPc e QFeTsPc apresentaram comportamentos instáveis e irreversíveis devido à possível formação de espécies agregadas adsorvidas no ITO. A partir dos resultados de voltametria cíclica e UV−vis determinaram−se os parâmetros de energia de gap (Eg), eletroafinidade (EA) e potencial de ionização (IP), mostrando que a energia de transição necessária do nível HOMO para o LUMO foi de 1,7 eV. Os eletrodos com filmes automontados foram utilizados como sensores de dopamina (DA) e ácido ascórbico (AA). Para ambos analitos, as concentrações utilizadas variaram de 5 x 10−6 a 1,5 x 10−4 mol L−1. O filme de QNiTsPc apresentou atividade eletrocalítica, alterando o potencial de oxidação da DA de 1,44 V, em ITO puro, para 0,76 V. Para os filmes de QCuTsPc e QFeTsPc, esse fenômeno não foi observado. O limite de detecção (LD) de DA e a AA foi obtido usando a equação de calibração de cada eletrodo, sendo da ordem de 10−5 mol L−1. O eletrodo com filme de QNiTsPc apresentou maior sensibilidade para ambos analitos. A seletividade dos eletrodos foi testada em soluções contendo AA e DA em diferentes proporções. A distinção entre os picos de oxidação do AA e DA não ocorreu para o filme automontado de QNiTsPc, devido ao efeito eletrocatalítico na oxidação da DA Por outro lado, os filmes de QCuTsPc e QFeTsPc apresentaram comportamento seletivo, distinguindo os picos de oxidação destes analitos. A seletividade apresentada pelo filme de QCuTsPc iniciou−se para concentrações de DA três vezes menor que AA e para o filme de QFeTsPc foi dez vezes menor que a de AA / ThisworkdescribesthefabricationofnanostructuredfilmswiththeLayer−by−layer (LbL) techniqueusingchitosan (Q) andmetallophthalocyaninesofnickel (NiTsPc), copper (CuTsPc) andiron (FeTsPc). The filmgrowthwasmonitoredwith UV−vis spectroscopy, focusingonthe Q−band ofthemetallophthalocyanines. The absorption increased linearly with the number of bilayers, thus pointing to the same amount of phthalocyanine being adsorbed in each bilayer. The average thickness per bilayer varied between 1.1 and 1.3 nm. Specific interactions in the LbL films were analysed with FTIR in transmission and reflection modes and Raman micro−Spectroscopy, which confirmed ionic interactions between the phthalocyanine sulfonic groups (SO3&#8722) and the chitosan amine groups (NH3+). Cyclic voltammograms showed that QNiTsPcLbL films on ITO are electroactive, with a well−defined, stable and reversible redox pair at 0.80 V and 0.75 V. The anodic peak current increased linearly with the scan rate, characteristic of electrochemical reactions controlled by electron hopping on the electrode surface. In contrast, CuTsPc and FeTsPcLbL films showed unstable and irreversible behaviour, probably due to adsorbed aggregated species on ITO. From the UV−VIS. Data and cyclic voltammograms, the energy gap (Eg), electroaffinity (EA) and ionization potencial (IP) were determined, leading to a HOMO−LUMO energy difference of 1.7 eV. Electrodes with LbL films were used for detecting dopamine (DA) and ascorbic acid (AA), in the concentration range from 5 x 10−6 to 1.5 X 10−4mol L−1. QNiTsPcLbL films showed electrocatalytic activity, by shifting the oxidation potential of DA from 1.44 V (for bare ITO) to 0.76 V. This did not occur with QCuTsPc and QFeTsPcLbL films. The limit of detection (LD) of DA and AA was obtained using the calibration equation for each electrode, being of the order to 10−5mol L−1. Electrodes made with QNiTsPcLbL films were the most sensitive. The selectivity of the electrodes was tested by using solutions containing DA and AA in different proportions. There was no distinction between AA and DA oxidation peaks for QNiTsPcLbL films, because of their electrocatalytic effect. On the other hand, using QCuTsPc and QFeTsPcLbL films one could distinguish between the two analytes. Distinction was made possible with QCuTsPcLbL films and DA concentrations three times less than the concentration of AA, while for QFeTsPcLbL films it was possible to distinguish DA concentrations ten times less than that of AA

OBJETIVO: Desenvolver e validar a técnica de CLAE-DE para o doseamento de dopamina (DA), ácido diidrofenilacético (DOPAC), ácido homovanílico (HVA) e 3-metoxitiramina (3-MT); validar a técnica de microdiálise (MD) cerebral em animais conscientes e avaliar o efeito do tratamento agudo com um extrato lipofílico das partes aéreas de Hypericum caprifoliatum (HCP) sobre os níveis cerebrais de DA e seus metabólitos. MATERIAIS E MÉTODOS: A validação analítica foi realizada conforme o preconizado pela ANVISA, com análise dos parâmetros linearidade, precisão, exatidão, especificidade e limite inferior de quantificação. A técnica de microdiálise foi realizada de forma clássica: guias de sonda foram implantadas nas regiões cerebrais de interesse por cirurgia estereotáxica; os dialisados foram obtidos, 48 horas após a cirurgia, através da perfusão da sonda com líquido cérebroespinhal artificial (1 μL/min) e coleta durante três horas, em intervalos de 20 min; as três primeiras coletas foram utilizadas para determinação da linha de base e só então foram administrados os tratamentos. Para a validação da MD a sonda foi implantada no estriado (A: -0,3; L: + 3,2; P: - 4,5) e o tratamento foi sulfato de anfetamina (2 mg/kg, s.c.). Para a avaliação do efeito de HCP, a sonda foi implantada no núcleo acumbens (A: +2,2; L: -1,5; P: -5,8) e o tratamento foi uma dose de 270 mg/kg do extrato (v.o.). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os parâmetros avaliados para validar o método analítico ficaram dentro dos limites especificados pela ANVISA. O sulfato de anfetamina produziu um aumento nos níveis extracelulares de DA em 160% e uma redução de DOPAC e de HVA em 80% e 50%, respectivamente. O extrato HCP não alterou o conteúdo intersticial de DA, DOPAC e HVA no núcleo acumbens. Os valores basais encontrados estão de acordo com dados relatados na literatura. Não foi possível quantificar 3-MT. CONCLUSÃO: A metodologia analítica e as condições experimentais de microdiálise utilizadas permitiram a mensuração de mudanças induzidas por anfetamina nos níveis extracelulares de DA e seus principais metabólitos demonstrando que os fundamentos da técnica estão estabelecidos em nossas condições. O regime de tratamento empregado com HCP não foi suficiente para alterar os níveis de DA e seus principais metabólitos no núcleo acumbens de ratos. / OBJECTIVE: The objectives of this work were to validate the HLPC-ED technique for measuring dopamine (DA), dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC), homovanillic acid (HVA) and 3- methoxytyramine (3-MT); to put into operation the brain microdialysis technique (MD) in freely moving rats; to evaluate, by using MD, the effect of a single treatment with lipophilic extract from aerial parts of Hypericum caprifoliatum (HCP) on DA, DOPAC, HVA and 3-MT brain levels. MATERIALS AND METHODS: In order to validate the analytical technique we followed the parameters established by ANVISA for bioanalytical samples. The parameters were: precision, accuracy, specificity and also the lower limit of quantitation. The microdialysis technique was carried out following classical procedures: male Wistar rats were submitted to stereotaxic surgery for the guide cannula implantation in the brain regions of interest; 48 hours later, the microdiaysis probe was inserted and perfused with cerebrospinal fluid (1 μL/min). After baseline samples collecting (1 h), the treatments were administrated and samples were collected every 20 min, during 2h. To accomplish MD technique validation the animals were treated with amphetamine sulfate (2 mg/kg, s.c.) and the extracellular levels of DA, DOPAC e HVA were measured in striatum (A: -0,3; L: + 3,2; P: - 4,5). The effect of HCP acute treatment (270 mg/kg, p.o.) was evaluated in nucleus accumbens (A: +2,2; L: -1,5; P: -5,8). RESULTS AND DISCUSSION: The analytical parameters values found were within the acceptable ranges for bio-analytical limits specified by ANVISA. As expected, amphetamine sulfate administration significantly increased DA (160%) extracellular levels and decreased DOPAC (80%) and HVA (50%) levels. The quantification of 3-MT was not possible. Acute HCP administration did not affected DA, DOPAC and HVA levels in the nucleus accumbens. CONCLUSION: The HPLC-ED methodology and microdialysis procedures employed allowed the detection of amphetamineinduced changes in extracellular levels of DA and its metabolites demonstrating that the technical starting point was acceptable. The acute administration of 270 mg/kg, p.o. of HCP to rats was not sufficient to modify the extracellular levels of DA, DOPAC and HVA in the nucleus accumbens.

A introdução dos antipsicóticos na clínica psiquiátrica promoveu intensas mudanças no tratamento dos transtornos mentais. Apesar do sucesso terapêutico, a administração dos primeiros antipsicóticos, conhecidos como agentes típicos, foi associada a sérios efeitos adversos, principalmente sintomas extrapiramidais (SEP), comprometendo a adesão ao tratamento. Os SEP incluem distonias, acatisia, pseudoparkinsonismo e discinesia tardia. Após o surgimento da clozapina, uma nova geração de compostos, conhecida como agentes atípicos, de alto valor terapêutico e reduzida incidência de SEP foi desenvolvida. Investigações conduziram a hipótese dopaminérgica da esquizofrenia e demonstraram que o efeito terapêutico destes agentes está associado ao bloqueio de receptores de dopamina da subfamília D2. Acredita-se que os agentes atípicos ocupem somente cerca de 65-80% dos receptores na região nigroestriatal e por isso atinjam o efeito terapêutico sem desencadear o surgimento de SEP, enquanto que agentes típicos ocupam níveis acima de 80%. Para explicar as diferenças entre agentes típicos e atípicos, foi proposto que, enquanto os primeiros se ligam com alta afinidade e bloqueiam os receptores por um longo período, os atípicos se ligam com baixa afinidade e se dissociam do receptor rapidamente, restabelecendo da sinalização dopaminérgica. Estudos recentes também demonstram o bloqueio de receptores D3 como importante alvo terapêutico para o tratamento da esquizofrenia e da dependência química, entre outros transtornos. Neste trabalho foi utilizada a estrutura tridimensional do receptor humano de dopamina D3 co-cristalizado com a eticloprida para investigar o perfil de ligação dos antipsicóticos eticloprida, haloperidol e risperidona neste receptor, através de métodos computacionais classicos e quânticos. A eticloprida é um potente agente com alta seletividade para receptores D2/D3 e de grande utilidade na pesquisa farmacológica. Este agente consiste no único antipsicótico co-cristalizado com um receptor de dopamina existente no momento. Nossos resultados destacam o papel central do resíduo Asp110 no ancoramento da eticloprida, além dos resíduos Val82, Val107, Cys114, Ser182, Ile183, Val189, Trp342, Phe345, Phe346 e Tyr373. Dentre estes, Val107, Ser182, Phe188, Val82 e Asn185 foram pela primeira vez relacionados diretamente com o mecanismo de ligação da eticloprida no receptor D3. O haloperidol é um agente típico com alta afinidade por receptores da subfamília D2. Apesar de estar associado ao surgimento de SEP, o haloperidol é muito utilizado na clínica por suas propriedades terapêuticas e baixo custo. A compreensão do bloqueio de receptores de dopamina pelo haloperidol é de fundamental importância para o desenvolvimento de derivados/novos compostos com reduzido índice de SEP. Nossos resultados descrevem a orientação do haloperidol durante a interação com o receptor D3 e demonstraram a relevância dos resíduos Asp110, Cys114, Ile183, Phe345, Phe346, Tyr365 e Tyr373. A risperidona é um importante antipsicótico atípico utilizado no tratamento de esquizofrenia e sintomas de irritabilidade associado com autismo em crianças. Em nosso estudo, observamos que a risperidona pode ligar-se no receptor D3 em duas orientações distintas, RO1 e RO2. A análise da contribuição individual de cada resíduo juntamente com simulações de dinâmica molecular indicam que RO2 é mais propensa a desligar-se do receptor do que RO1, sugerindo um perfil de ligação misto, com rápida dissociação de uma fração dos antipsicóticos ligados. Os resultados apresentados neste estudo auxiliam na elucidação do mecanismo de ligação da eticloprida, haloperidol e risperidona no receptor de dopamina D3 e consolidam o uso de ferramentas clássicas e quânticas para a obtenção de estruturas tridimensionais e a análise do perfil de contribuição energética individual dos resíduos de aminoácido que compõem o sítio de ligação do receptor de dopamina D3. / The introduction of antipsychotics in the clinic significantly improved the treatment of mental diseases. Nevertheless, besides the therapeutic success of the first antipsychotics (known as typical agents), their administration was associated with serious side-effects known as extrapiramidal symptoms (EPS), that compromised the treatment. The EPS include dystonic reactions, akathisia, pseudoparkinsonism and tardive dyskinesia. Following the synthesis of clozapine, a new generation of antipsychotics (known as atypical agents) with reduced EPS incidence began to appear. A set of evidences lead to the dopaminergic hypothesis of schizophrenia and many studies associated the mechanism of action of antipsychotics with the blockade of D2-like receptors. It was demonstrated that while atypical antipsychotics elicit clinical effects through 65-80% of dopamine receptor occupancy, typical agents show occupancy levels above 80%, triggering EPS. To explain the differences between typical and atypical agents, it was proposed that the former have higher affinity for the receptors, blocking them for a longer period, while atypical agents show lower affinity and are easily dissociated from the receptor, allowing the restablishment of the dopamine signaling in the nigrostriatal pathway. Recently, the blockade of D3 receptors has been discovered as an important strategy for the treatment of schizophrenia and other neurological diseases. In this study, we took advantage from the published crystallographic data of D3R complexed with eticlopride, to investigate the binding profile of the antipsychotics eticlopride, haloperidol and risperidone, through classical and quantum computational methods. Eticlopride is a potent and selective D2/D3 antagonist agent and is widely used in pharmacological research. Moreover, up to date, it is the only antipsychotic co-crystallized with a dopamine receptor. Our results highlight the central role of the residue Asp110, followed by Val82, Val107, Cys114, Ser182, Ile183, Val189, Trp342, Phe345, Phe346 and Tyr373, among others, and demonstrated for the first time the participation of Val107, Ser182, Phe188, Val82 e Asn185 in this binding. Haloperidol is a typical agent with high affinity for D2-like receptors. Although associated with the onset of EPS, haloperidol is still widely used in clinic due to its clinical properties and lower cost. In this way, the understanding of the mechanism involving dopamine receptor blockade by haloperidol is of great importance for the development of derivatives/novel agents with reduced EPS incidence. Our results unveil the conformation of haloperidol during its interaction with the D3 receptor and highlight the role of residues Asp110, Cys114, Ile183, Phe345, Phe346, Tyr365 and Tyr373. Risperidone is an atypical antipsychotics used in the treatment of schizophrenia and symptoms of irritability associated with autism spectrum disorder (ASD) in children. Our results show that risperidone binds to D3 receptor in two possible orientations, RO1 and RO2. The analyses of the individual amino acid contribution and the molecular dynamics simulations indicated that RO2 exhibits a trend to dissociate faster from the receptor than RO1, suggesting the existence of a mixing binding profile, with a fast-off behavior observed in only a fraction of ligands corresponding to orientation RO2. Our results give support to the understanding of the binding mechanisms of the important antipsychotics eticlopride, haloperidol and risperidone in the human dopamine receptor D3. Also, our results highlight the relevance of the use of classical and quantum approaches in the modeling and analysis of the individual energy contribution of every amino acid residue in the binding site of the D3 dopamine receptor.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Studies have shown that pesticide exposure is a risk factor to Parkinson Disease (PD) development in urban areas and mainly in rural areas. One of these pesticides, Deltamethrin (DM), is used indiscriminately for vector control in crops, veterinary medicine and control of domestic pests. The aim of the study is investigate the motor, cognitive and neurochemical changes caused by repeated administration of DM in rats. 38 Male Wistar rats were used, 9-10 months-old, from the Neurophysiology Laboratory animal house of UFS. The study was divided into two experiments: (1) intranasal (i.n.) and (2) intracerebroventricular (i.c.v.). In the (1), the animals were divided into 2 groups (CTR, 0.9% saline solution, n=9) and DM 0.5 (treated with DM 0.5 mg, n=10), that received 3 infusions administrated one every 7 days. During the treatment, the animal were subjected to behavior test: catalepsy, novel object recognition task, spontaneous alternation and contextual conditioned fear. In i.c.v. experiment, the animals were divided into 3 groups: control (CTR, n=7); DM 0.5 (treated with DM 0.5 μg diluted in 2 μL, n=7) and DM 5 (treated with DM 5 μg diluted in 2 μL, n=5). In the experiment (2), the animals received 3 i.c.v. injections (2 μL/injection), one each 48 hours. During the treatment, the rats were submitted to behavior test: catalepsy, open field test and spontaneous alternation. After the behavior tests of both experiments, the rats were anesthized, perfused transcardially, their brains removed and submitted to Tyrosine Hydroxylase (TH) immunochemistry in Substancia Nigra pars compacta (SNpc), Ventral Tegmental Area (VTA) and dorsal striatum areas. In i.n. experiment, there were motor changes in open field and cognitive changes in novel object recognition task and contextual conditioned fear. The immunohistochemistry shows a reduction of TH+ cells in SNpc and VTA and an increase of Optical Density in dorsal striatum. In i.c.v. experiment, it was observed motor changes in open field and cognitive changes in spontaneous alternation. In immunohistochemical there was a decrease of TH + cells in DM 5ug animals in SNpc and VTA and decreased their levels in DM 0.5 g and DM 5 ug groups in the dorsal striatum. In both experiments, cognitive changes preceded the motor changes. The data presented contribute to understanding of physiological and behavioral changes after exposure to DM and more studies are needed to elucidate the DM as a possible cause of parkinsonism symptoms. / Estudos tem demonstrado que a exposição a pesticidas é um fator de risco para o desenvolvimento da doença de Parkinson (DP) em áreas urbanas e principalmente em áreas rurais. Um desses pesticidas, a deltametrina (DM), é utilizada indiscriminadamente no controle de vetores na lavoura, na medicina veterinária e no controle de pestes domésticas. Diante disso, o objetivo da pesquisa é avaliar as alterações motoras, cognitivas e neuroquímicas causadas pela administração repetida da DM em ratos. Foram utilizados 38 ratos Wistar machos, com idade entre 9-10 meses, provenientes do Biotério do Laboratório de Neurofisiologia da UFS. O trabalho foi dividido em dois experimentos: (1) administração intranasal (i.n.) e (2) intracerebroventricular (i.c.v.) de DM. No experimento 1 (intranasal), os animais foram divididos em 2 grupos: controle (CTR, solução salina 0,9%, n=9) e DM 0,5 (tratados com DM 0,5 mg, n=10), que receberam 3 infusões intranasais administradas 1 a cada 7 dias. Durante o tratamento, os animais foram submetidos a testes comportamentais: catalepsia, reconhecimento de objeto novo, alternação espontânea e medo condicionado ao contexto. No experimento 2 (i.c.v.), os animais foram divididos em 3 grupos: controle (CTR, n=7), DM 0,5 (tratados com DM 0,5 μg em 2 μL, n=7) e DM 5 (tratados com DM 5 μg em 2 μL, n=5). Nessa etapa, os animais receberam 3 injeções i.c.v. (2 μL por injeção), uma a cada 48h. Ao longo do tratamento, os ratos foram avaliados nos testes da catalepsia, campo aberto e alternação espontânea. Após os testes de comportamento em ambos experimentos, os ratos foram anestesiados, perfundidos, seus cérebros removidos e submetidos a imunohistoquímica para Tirosina Hidroxilase (TH) na substância negra parte compacta, área tegmental ventral e estriado dorsal. Foi observado no experimento i.n. que houve alterações motoras no campo aberto e cognitivas no reconhecimento de objeto novo e no medo condicionado ao contexto. A imunohistoquímica mostrou redução de células TH+ na SNpc e VTA e aumento de TH+ no estriado dorsal. No experimento i.c.v., foram observadas alterações motoras no campo aberto e cognitivas na alternação espontânea. Na imunohistoquímica houve diminuição de células TH+ nos animais DM 5 μg na SNpc e em VTA e redução de seus níveis nos grupos DM 0,5 μg e DM 5 μg no estriado dorsal. Em ambos os experimentos, alterações cognitivas precederam as alterações motoras. Os dados apresentados contribuem no entendimento sobre alterações fisiológicas e comportamentais após exposição a DM e mais estudos deverão ser realizados para elucidar a DM como um possível causador de sintomas de parkinsonismo.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-11-13T12:25:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sérgio Alberto Cunha Vencio - 2017.pdf: 2722594 bytes, checksum: 80a33a6cb62da8ad55462ad15376f83c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-11-13T12:26:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sérgio Alberto Cunha Vencio - 2017.pdf: 2722594 bytes, checksum: 80a33a6cb62da8ad55462ad15376f83c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-13T12:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sérgio Alberto Cunha Vencio - 2017.pdf: 2722594 bytes, checksum: 80a33a6cb62da8ad55462ad15376f83c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / Objective - To evaluate the HPA axis and the mental health status in a non-pathological dissociation condition (mediumship) Methods - In this prospective and controlled study, 29 psychophonic mediums (group 1) were evaluated before and after psychophony and compared to 22 non-medium volunteers of the same religious context (group 2) before and after a creative visualization, simulating a mediumistic assistance. Plasma catecholamines, ACTH, cortisol and glucose were measured pre-and 1 hour after the intervention. A structured questionnaire - DDIS was applied (Dissociative Disorders Interview Schedule) and the results were compared with historical data from patients with dissociative disorder (DD) who answered the DDIS. Results - In group 1, cortisol and ACTH decreased (14.7 μg/dl to 11.2 μg/dl with p-0.001 and 20.6 pg/ml to 13.9 pg/ml with p-0.001, respectively), However, the HPA axis showed diversified responses with epinephrine and noradrenaline decreasing after the intervention (39 pg/ml at 33 pg/ml and 311.2 pg/ml at 284.1 pg/ml, respectively) and an increased in dopamine (41.7 pg/ml to 44.4 pg/ml with p-0.046). In group 2, cortisol decreased from 15.5 μg/dl to 13.4 μg/dl (p -0.01). The scores obtained in the structured interview (DDIS) were similar in both groups, but with considerable differences when compared with historical data from TD patients. Conclusion - This study showed that one hour after psychophony the HPA axis remains preserved in mediums. Dopamine is the main neurochemistry of religious manifestations and may eventually constitute a biomarker of this phenomenon. / Objetivo - Avaliar o eixo HHA e o estado de saúde mental em uma condição de dissociação não-patológica (mediunidade) Métodos - Neste estudo prospectivo e controlado, 29 médiuns de psicofonia (grupo1) foram avaliados pré e pós psicofonia e comparados com 22 voluntários não médiuns do mesmo contexto religioso (grupo 2) pré e pós uma visualização criativa, simulando uma assistência mediúnica. Catecolaminas plasmáticas, ACTH, cortisol e glicose foram medidas pré e 1 hora após a intervenção. Um questionário estruturado DDIS foi aplicado (Dissociative Disorders Interview Schedule) e os resultados foram comparados com dados históricos de pacientes com transtorno dissociativo (TD) que responderam ao DDIS. Resultados - No grupo 1, o cortisol e o ACTH diminuíram (14,7 μg/dl para 11,2 μg/dl com p- 0,001 e 20,6 pg/ml para 13,9 pg/ml com p-0,001, respectivamente), apesar disso, o eixo HHA mostrou respostas diversificadas com epinefrina e noradrenalina diminuindo após a intervenção (39 pg/ml a 33 pg/ml e 311,2 pg/ml para 284,1 pg/ml, respectivamente) e aumento da dopamina (41,7 pg/ml a 44,4 pg/ml com p-0,046). No grupo 2, o cortisol diminuiu de 15,5 μg/dl para 13,4 μg/dl (p-0,01). Os escores obtidos na entrevista estruturada (DDIS) foram semelhantes nos dois grupos, porém com diferenças consideráveis quando comparados com os valores históricos de pacientes com TD. Conclusão - Este estudo mostrou que uma hora após a psicofonia o eixo HHA permanece preservado em médiuns. A dopamina é a principal neuroquímica de manifestações religiosas e pode eventualmente se constituir num marcador desse fenômeno.

O trabalho apresentado nesta Dissertação de Mestrado descreve o desenvolvimento e aplicação de eletrodos de pasta de carbono modificados eletroquimicamente em soluções de guanina e de eletrodos de grafite pirolítico modificados em soluções de dopamina. Estes eletrodos foram empregados na detecção e, a quantificação, por voltametria de pulso diferencial (VPD), de alguns compostos de importância biológicas tais como NADH, NADPH, 8-oxo-guanina, ácido úrico (AU), ácido ascórbico (AA), dopamina (DA) e xantina (XA). No primeiro caso, os eletrodos de pasta de carbono foram modificados em solução de guanina por aplicação de um potencial de 1,1 V (vs Ag/AgCl, KClsat) ao eletrodo de trabalho por 12 minutos sob sat agitação constante. Com estes eletrodos detectaram-se NADH, NADPH, 8-oxo-guanina e AU, com limites de detecção de 3,3, 3,7, 2,0 e 6,6 x 10-6 mol L-1 respectivamente, na faixa de concentração de 7,5 x 10-6 a 8,1 x 10-4 mol L-1 . No segundo caso, eletrodos de grafite pirolítico, previamente tratados em solução de NaOH, foram modificados eletroquimicamente em solução de DA por aplicação de um potencial 1,5 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) ao eletrodo de trabalho durante 2 minutos. Com estes eletrodos foi possível a determinação simultânea de AA, AU e DA. Para obtenção das curvas analíticas variou- se a concentração do analito de interesse, mantendo-se constante a concentração dos possíveis interferentes nos valores de 1,0 x 10-4 mol L-1 (DA), 5,0 x 10-5 mol L-1 (AU) e 1,0 x 10-3 mol L-1 (AA). Os limites de detecção calculados para AU, AA e DA foram respectivamente de 1,4 x 10-6 mol l-1 , 2,5 x 10-5 mol l-1 e 1,1 x 10-7 mol l-1 . Ácido úrico foi determinado em amostras de urina, sangue e soro humano com 92 a 103 % de recuperação, sem a necessidade de tratamento prévio das amostras. / Chemically Modified Carbon Paste and Pyrolitic Graphite Electrodes were prepared via electrochemical deposition from guanine and dopamine solutions. Carbon paste electrodes were modified in guanine solutions under an applied potential of 1.1 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) during 12 minutes under constant stirring. They were used for sat electrochemical detection of NADH, NADPH, uric acid and 8-oxoguanine. Detection limits were 3.3, 3.7, 6.6 and 2.0 10-6 mol L-1 respectively, with sensitivity of 0.13, 0.10, 0.26 and 0.40 A mol-1 L cm-2 , respectively. The electrodes showed high reproducibility and absence of surface poisoning effects. Good analytical performance was attributed to the formation of superficial dimer or trimers species of guanine during the modification process. Pyrolitic graphite electrodes, previously submitted an electrochemical treatment in NaOH solution, were modified in dopamine solution (phosphate buffer, pH 10) under an applied potential of 1.5 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) during 2 minutes under constant sat stirring and, further used for the simultaneous determination of ascorbic acid (AA), uric acid (AU) and dopamine (DA). The analytical curves were obtained changing the concentration of the wished analyte, at constant concentration levels of the interferences: 1.0 x 10-4 mol L-1 (DA), 5.0 x 10-5 mol L-1 (UA) and 1.0 x 10-3 mol L-1 (AA). Detection limits were 1.4 x 10-6 mol L-1 , 2.5 x 10-5 mol L-1 and 1.1 x 10-7 mol L-1 for UA, AA and DA, respectively. Uric acid was determined in human urine, blood and serum samples without any previous treatment. Recovering percentages of 92 to 103 % were obtained.

Corujas se destacam por suas habilidades visuais e auditivas. Pouco é conhecido sobre a neuroanatomia do seu telencéfalo. Assim, caracterizamos através de técnicas histo/imunoistoquímicas o telencéfalo da coruja-da-igreja. Os núcleos da base foram delineados através da sua intensa imunomarcação para DARPP-32 e tirosina hidroxilase. Áreas sensoriais primárias tálamorrecipientes, como o entopálio (E), L2 do Field L auditório e o núcleo basorostral palial, foram caracterizadas pela quase ausência de DARPP-32 e alta atividade da citocromo oxidase (CO). As pseudo-camadas do Wulst visual foram delineadas com uma combinação de métodos, incluindo a ativação da CO, e imunomarcação para DARPP-32. O Wulst visual e o Field L se destacaram como regiões enormes, enquanto o E se revelou menor. Os dados sugerem que a morfologia de muitas regiões telencefálicas da coruja-da-igreja é semelhante àquela em outras aves. Contudo, o Wulst e o Field L se destacaram por seu tamanho e grau de organização, refletindo a importância do sistema visual e auditivo no comportamento de corujas. / Owls possess exceptional visual and auditory capacities. There is only limited information about the neuroanatomy of their forebrain. Thus, we characterized by histo/immunohistochemical techniques the forebrain of the barn owl. The basal ganglia were delineated by their intense immunostaining for DARPP-32 and tyrosine hydroxylase. Primary thalamorecipient sensory areas, such as the entopallium (E), L2 of the auditory Field L and the basorostral palial nucleus were characterized by the almost absence of DARPP-32 and their high citocrome oxidase (CO) activity. The pseudo layers of the visual Wulst were delineated by a combination of methods, including CO activity and immunostaining for DARPP-32.The Wulst and Field L were outlined by their huge size, whereas the E was small. These data suggest that the morphology of many telencephalic regions of the barn owl is similar to that in other birds. However, the Wulst and Field L were highlighted by their size and degree of organization, reflecting the importance of the visual and auditory system for the behavior of owls.

Orientador: Carlos Amilcar Parada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_ElayneVieira_D.pdf: 15528641 bytes, checksum: d53f9d8a514c6239af90a41cfe787afb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The complete abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Fisiologia / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

O núcleo acumbens (Acb) é envolvido em comportamentos adaptativos e emocionais. A maioria dos neurônios do Acb são neurônios de projeção (MSNs) que contém a fosfoproteína DARPP-32 e são modulados por distintos tipos de interneurônios. Há pouca informação sobre os receptores de glutamato (Glu) expressos no Acb. Este estudo investiga, através de técnicas de imunohistoquímica, a distribuição e co-localização de marcadores do sistema dopaminérgico, dos receptores de Glu do tipo AMPA (GluR1-GluR4) e NMDAR1 e marcadores de interneurônios. Nossos resultados mostram que o Acb possui uma neuroquímica semelhante ao estriado dorsal. Porém, detectamos uma distribuição distinta de alguns dos marcadores no Acb. Os estudos de co-localização revelam que quase todos os neurônios no Acb expressam GluR2/3 ou GluR2. Em contraste, GluR1 e GluR4 são fracamente expressas e co-localizam com parvalbumina. Esses resultados indicam que GluR2 e GluR2/3 são expressas em MSNs DARPP-32+ e na maioria dos interneurônios do Acb enquanto GluR1 e GluR4 são exclusivamente expressas em interneurônios. / The nucleus accumbens is involved in adaptive and emotional behaviors. The majority of neurons in the Acb are projection neurons that express the phosphoprotein DARPP-32 and are modulated by distinct types of interneurons. There is little information about the glutamate receptors expressed in the Acb. This study investigates by immunohistochemical methods the distribution and co-localization of markers of the dopaminergic system, AMPA (GluR1-4) and NMDAR1 type Glu receptor subunits and specific markers of interneurons. Our results show that the neurochemistry of the Acb is similar to that of the dorsal striatum. However, we detected a distinct distribution of some markers in the Acb. Our co-localization studies reveal that almost all neurons of the Acb express GluR2/3 or GluR2. In contrast, GluR1 and GluR4 are weakly expressed and are co-localized with parvalbumin. These results indicate that GluR2 and GluR2/3 are expressed by MSNs DARPP-32+ and by the majority of interneurons of the Acb, whereas GluR1 and GluR4 are exclusively expressed by interneurons.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-15T14:05:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_AndersonFelipe_Versão Final.pdf: 4770513 bytes, checksum: bd8c869ddc087cfbf7bc953f303cf9e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T14:05:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_AndersonFelipe_Versão Final.pdf: 4770513 bytes, checksum: bd8c869ddc087cfbf7bc953f303cf9e5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / A desnutrição durante o período perinatal tem sido associada a aumento da compulsão alimentar, preferência por alimentos palatáveis e risco de desenvolvimento de obesidade na vida adulta. O apetite é controlado por vários sistemas fisiológicos, dentre os quais o sistema neural de recompensa. A dopamina é um conhecido neurotransmissor deste sistema, estando envolvida nas relações de prazer proporcionado por alimentos e drogas, agindo através da ligação em receptores neuronais, de duas classes: D1-like e D2-like. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos receptores dopaminérgicos D1 no Núcleo Accumbens e estriado, áreas relacionadas ao comportamento alimentar, em ratas desnutridas. Dois grupos experimentais foram formados: grupo-controle (CF - fêmeas gestadas por mães normonutridas durante a gestação e lactação) e grupo-desnutrido (DF - fêmeas gestadas por mães que receberam dieta hipoprotéíca no período perinatal). Os animais passaram a receber dieta-padrão de laboratório após o desmame e tiveram o peso avaliado em diferentes momentos da vida. No 120º dia, foram sacrificadas e submetidas à perfusão, para retirada dos encéfalos. Após os cortes dos cérebros em micrótomo de congelamento, procedeu-se a Imunohistoquímica para contagem de neurônios marcados para DRD1. As imagens foram obtidas através de câmera acoplada ao microscópio óptico e a morfometria realizada no software livre ImageJ. Os dados estatísticos foram expressos em média±desvio-padrão, sendo analisados no software livre GraphPad Prism 5. Os animais desnutridos apresentaram menor peso em relação aos normonutridos desde o nascimento até o sacrifício. Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos na expressão de DRD1 nas áreas cerebrais analisadas (Estriado: CF: 230,0 ± 86,40, n=4; DF: 225,50 ± 89,90, n=4; Núcleo Accumbens: CF: 109,80 ± 41,40, n=4; DF: 128,0 ± 49,50, n=5; test t de Student, p<0,05). Estes dados sugerem que a expressão dos receptores D1 está diretamente relacionada à quantidade de dopamina liberada na fenda sináptica, quantidade essa que é maior na apresentação de alimentos novos e palatáveis. / Malnutrition during the perinatal period has been linked to increased binge eating, preference for palatable foods and risk of obesity developing in adulthood. Appetite is controlled by several physiological systems, including the neural reward system. Dopamine is a neurotransmitter in this system and it is involved in relations of pleasure provided by foods and drugs, acting through its binding to neuronal receptors of two classes: D1-like and D2-like. The goal of this study was to evaluate the expression of dopamine D1 receptors in the striatum and Nucleus Accumbens, areas related to feeding behavior, in malnourished rats. Two experimental groups were formed: the control group (CF - rats coming from normonutridas mothers during pregnancy and lactation) and group-malnourished (DF - coming rats of mothers who received low protein diet during the perinatal period). The animals began to receive standard laboratory diet after weaning and had the weight assessed at different times of life. In 120 days, they were sacrificed and submitted to perfusion, to remove the brains. After the cuts of the brains in freezing microtome, it proceeded to Immunohistochemistry for counting neurons marked for DRD1. The images were obtained through camera coupled to an optical microscope and morphometry performed on the Free Software ImageJ. Statistical data were expressed as mean ± standard deviation and analyzed the free software GraphPad Prism 5. Malnourished animals showed lower weight compared to well-nourished from birth to the sacrifice. There was no significant difference between groups in the expression of DRD1 the analyzed brain areas (Striatum: CF: 230.0 ± 86.40, n = 4; DF: 225.50 ± 89.90, n = 4; Nucleus Accumbens: CF: 109.80 ± 41.40, n = 4; DF: 128.0 ± 49.50, n = 5; Student's t test, p <0.05). These data suggest that the expression of D1 receptors is directly related to the amount of dopamine released in the synaptic cleft, which amount is higher in presenting new and palatable food.