Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-18T17:12:12Z No. of bitstreams: 1 Michelle da Silva Antunes.pdf: 1249773 bytes, checksum: c6cabdf0b8b789e160dc1913359bb015 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T17:12:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michelle da Silva Antunes.pdf: 1249773 bytes, checksum: c6cabdf0b8b789e160dc1913359bb015 (MD5) Previous issue date: 2013-07-05 / A doença de Parkinson (DP) é uma doença neurodegenerativa crônica que tem como principal característica neuropatológica a depleção de dopamina (DA) estriatal. Essa diminuição de DA leva ao aparecimento dos sintomas motores da doença, tais como instabilidade postural, tremores em repouso, rigidez, bradicinesia, entre outros. É uma doença de causa multifatorial relacionada ao envelhecimento, fatores genéticos e ambientais. Existe um grande número de evidências correlacionando o estresse oxidativo com a DP, na qual se observa um desequilíbrio entre a geração de espécies reativas (ER) e os mecanismos de defesa celular, e é esse desequilíbrio que leva ao envelhecimento precoce, morte celular e desenvolvimento de patologias neurodegenerativas. Estudos demonstram que o consumo de uma dieta rica em flavonoides pode diminuir a incidência e sintomas de doenças neurodegenerativas. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da administração do flavonoide hesperidina sobre o comportamento em testes de memória, de depressão, e marcadores de estresse oxidativo em um modelo de DP induzida por 6-hidroxidopamina (6-OHDA) em camundongos com dezoito meses de idade da linhagem C57B/6J. Os animais foram 5 distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: (1) veículo/veículo; (2) 6-OHDA/veículo; (3) veículo/hesperidina; (4) 6-OHDA/hesperidina. A neurotoxina 6-OHDA ou o veículo salina foram infundidos por injeção intracerebroventricular (i.c.v.) em uma só concentração (4 μg/2 μL em 0.9% NaCl com 0.2 μg/μL de ácido ascórbico). Após a injeção, os camundongos tiveram um período de recuperação de sete dias até o começo do tratamento. A hesperidina ou o veículo (50mg/kg) foram administrados pela via oral (gavagem) durante 28 dias. Após este período, os camundongos foram submetidos aos testes comportamentais (locomoção, memória e depressão) e à eutanásia. Os resultados demonstraram que o tratamento oral com hesperidina na dose de 50 mg/kg foi efetivo em diminuir o déficit cognitivo, o comportamento tipo depressivo; a diminuição dos níveis de espécies reativas (RS); o aumento das enzimas antioxidantes glutationa peroxidase (GPx), e catalase (CAT), além das defesas antioxidantes não enzimáticas totais (TRAP) e níveis de glutationa (GSH); na prevenção do aumento da glutationa redutase (GR). Além disso, o tratamento aumentou os níveis de DA, DOPAC e HVA no estriado em relação aos camundongos que não receberam o tratamento. Em conclusão, nós sugerimos que a administração com hesperidina foi eficaz em rever os danos cognitivos e marcadores de estresse oxidativo induzidos por 6-OHDA em camundongos, podendo contribuir como terapia alternativa na redução dos sintomas da DP. / Parkinson's disease (PD) is a chronic neurodegenerative disorder which has as main characteristic neuropathological depletion of dopamine (DA) striatal. This loss of DA leads to the onset of motor symptoms, such as postural instability, resting tremor, rigidity, bradykinesia, among others. It is a multifactorial disease in age-related, genetic and environmental factors. There is a large evidences correlating oxidative stress with the DP, where there is an imbalance between the generation of reactive species (RS) and cellular defense mechanisms, and it is this imbalance that leads to premature aging, cell death and development of neurodegenerative disorders. Studies show that consumption of a diet rich in flavonoids can reduce the incidence and symptoms of neurodegenerative diseases. The objective of this study was to investigate the effect of administration of the flavonoid hesperidin on behavior in tests of memory, depression, and markers of oxidative stress in a model of PD induced by 6-hydroxydopamine (6-OHDA) in mice eighteen months old lineage C57B/6J. The animals were randomly divided into four groups: (1) vehicle / vehicle, (2) 6-OHDA/veículo, (3) vehicle / hesperidin, (4) 6-OHDA/hesperidina. The neurotoxin 6-OHDA or vehicle saline were infused intracerebroventricular (icv) in one concentration (4 mg / 2 ¶ l in 0.9% NaCl 7 with 0.2 mg / uL ascorbic acid). After injection, the mice have had a recovery period of seven days until the start of treatment. The hesperidin or vehicle (50mg/kg) was administered orally (gavage) for 28 days. After this period, the mice were subjected to behavioral tests (locomotion, memory and depression) and euthanasia. The results demonstrate that oral treatment with hesperidin dose of 50 mg / kg was effective in reducing the cognitive deficits, behavior depressive-like; reduced levels of reactive species (RS), the increase of antioxidant enzyme glutathione peroxidase (GPx) and catalase (CAT), and the total non-enzymatic antioxidant defenses (TRAP) and glutathione (GSH), in the prevention an increase of glutathione reductase (GR). Furthermore, the treatment increased the levels of DA, DOPAC and HVA in striatum compared to mice that received no treatment. In conclusion, we suggest that administration with hesperidin was effective in reviewing the cognitive damage and markers of oxidative stress induced by 6-OHDA in mice, which may contribute as an alternative therapy in reducing symptoms of PD.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-18T18:12:36Z No. of bitstreams: 1 Stífani Machado Araujo.pdf: 2701104 bytes, checksum: db0f252b8e5b648fd9a2f147be16081a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T18:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stífani Machado Araujo.pdf: 2701104 bytes, checksum: db0f252b8e5b648fd9a2f147be16081a (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa mais comum no mundo, afetando cerca de 1% dos adultos com mais de 60 anos. A DP está relacionada com a degeneração de neurônios dopaminérgicos principais componentes da substância negra cerebral, concomitantemente, com a disfunção do complexo I mitocondrial e o estresse oxidativo que desempenham um papel crucial na patogênese desta doença. A rotenona (ROT) é um pesticida natural e muito utilizado para induzir fenótipo de DP em modelos animais, por ser lipofílico pode atravessar facilmente a barreira hematoencefálica causando disfunção do complexo I mitocondrial e possível morte de neurônios dopaminérgicos. Dentre as várias aplicações terapêuticas dos antioxidantes, ressalta-se sua ação neuroprotetora, uma vez que o sistema nervoso central exibe uma maior vulnerabilidade e susceptibilidade aos insultos oxidativos, o γ-orizanol (ORY) é um produto natural composto por uma mistura de ésteres de ácido ferúlico extraídos a partir do óleo de farelo de arroz, e é bem descrito na literatura por possuir propriedades antioxidantes. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar um possível efeito neuroprotetor do γ-orizanol sobre alterações comportamentais e bioquímicas causadas pela exposição crônica de Drosophila melanogaster a rotenona. A mosca da fruta Drosophila melanogaster, é uma espécie alternativa à utilização de modelos mamíferos que vem sendo usada com bastante confiabilidade na reprodução de modelos de disfunção dopaminérgica. As moscas (de ambos os sexos) com idades compreendidas entre 1 a 5 dias de idade foram divididos em quatro grupos de 50 moscas cada um: (1) de controle, (2) ORY 25 μM, (3) ROT 500 μM, (4) ORY 25 μM + ROT 500 μM. As moscas foram concomitantemente expostos a uma dieta contendo ROT e ORY durante 7 dias de acordo com os seus respectivos grupos. Após o tratamento foram feitas as analises comportamentais e bioquimicas. Como resultados, verificamos que o ORY ofereceu proteção contra as alterações locomotoras causadas por ROT, além de prevenir a mortalidade induzida por rotenona, protegeu contra geração de estresse oxidativo e disfunções mitocondriais além de otimizar as defesas antioxidantes celulares. Nossas descobertas apontam uma restauração dos déficits colinérgicos, e nos níveis de dopamina fornecida por pelo tratamento com ORY. Em conclusão, os presentes resultados mostram que ORY é eficaz na redução da toxicidade induzida ROT em Drosophila melanogaster, o que mostrou uma ação neuroprotetora, possivelmente devido à presença dos componentes de antioxidantes tais como o ácido ferúlico. / Parkinson's disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease in the world, affecting about 1% of adults over 60 years. The DP is linked to the degeneration of dopaminergic neurons main components of the substantia nigra brain, concurrently with mitochondrial complex I dysfunction and oxidative stress play a crucial role in the pathogenesis of this disease. The rotenone (ROT) is a natural pesticide, and used to induce PD phenotype in animal models, being lipophilic can easily cross the blood-brain barrier dysfunction causing mitochondrial complex I and possible death of dopaminergic neurons. Among the various therapeutic applications of antioxidants, it emphasizes its neuroprotective action, as the central nervous system displays a greater vulnerability and susceptibility to oxidative insults, the γ-oryzanol (ORY) is a natural product composed of a mixture of esters ferulic acid derived from rice bran oil, and is well described in the literature to possess antioxidant properties. The objective of this study was to investigate a possible neuroprotective effect of ORY on behavioral and biochemical changes caused by chronic exposure of Drosophila melanogaster the rotenone. The fly fruit Drosophila melanogaster, is an alternative species to the use of mammalian models that have been used quite reliable reproduction of dopaminergic dysfunction models. The flies (male and female) between the ages of 1 to 5 days of age were divided into four groups of 50 flies each: (1) control, (2) ORY 25 μM, (3) ROT 500 μM ( 4) ORY 25 μM + ROT 500 μM. The flies were simultaneously exposed to a diet containing ROT and ORY for 7 days according to their respective groups. After treatment were made behavioral and biochemical analysis. As a result, we find that the ORY offered protection against locomotor changes caused by ROT, and to prevent the mortality induced by rotenone, protected against the generation of oxidative stress and mitochondrial dysfunction and optimize cellular antioxidant defenses. Our findings point to a restoration of cholinergic deficits, and dopamine levels provided by the treatment ORY. In conclusion, the present results show that ORY is effective in reducing the ROT induced toxicity in Drosophila melanogaster, which showed a neuroprotective effect, possibly due to the presence of antioxidants components such as ferulic acid.

Per a modelar alguns aspectes bioquímics i anatomopatològics de la malaltia de Parkinson en la rata, en aquesta tesi hem començant utilitzant la neurotoxina MPP+, de relativament recent aparició i la més veterana 6-OHDA i hem acabat emprant el propi neurotransmissor de les neurones que degeneren, la dopamina, intentant esbrinar els seus mecanismes de lesió. L’estudi s’ha iniciat en el animal in vivo, ha continuat en talls gruixuts de teixit ex vivo i ha acabat en mitocondris in vitro. Hem volgut reproduir resultats d’altres grups però amb abordat¬ges experimentals més senzills i econòmics, al nostre abast. Hem volgut aplicar el nostre model animal per a estudis comparatius amb la malaltia humana Per a la introducció he partit d’uns 50 articles de revisió actualitzats, amb la voluntat d’adquirir una visió panoràmica de la malaltia de Parkinson: les hipòtesis etiopatogèniques, les manifestacions clíniques, els trets anatomopatològics i bioquímics, així com dels models animals que s’utilitzen per a reproduir-la. En aquests articles he trobat les referències biblogràfiques per aprofundir en els aspectes més directament relacionats amb els experiments realitzats. Per als resultats, que s’han de contemplar dins el marc de la participació en projectes dels nostre grup i d’altres que utilitzaven aquests models animals d’experimentació, hem triat aquells en els que he participat directament, treballs que en alguns casos han estat els preliminars per altres treballs de doctorat del grup. Pràcticament tots els resultats que presentem han estat publicats, com article, en revistes internacionals, aquí queden recollits en l’apartat d’annexes, raó per la qual en la introducció general no consten alguns conceptes introductoris que apareixen en cadascun d’ells.

El Objetivo General de esta Tesis ha sido investigar la formación y función de heterómeros entre receptores de dopamina y otros receptores que puedan estar implicados en la regulación de la transmisión dopaminérgica, como receptores de galanina, histamina, adrenérgicos o receptores sigma-1. Basándonos en que tanto la galanina como la dopamina modulan la liberación de acetilcolina en el hipocampo, se ha demostrado que los receptores de dopamina de la familia D1 (receptores D1 y D5) pueden formar heterómeros con los receptores de galanina Gal1 y Gal2 y se ha estudiado la función de estos heterómeros en la liberación de acetilcolina en el hipocampo. En el estriado, los receptores de dopamina D1 se localizan en las neuronas GABAérgicas dinorfinérgicas donde también se localizan receptores de histamina H3. Este hecho permite formular la hipótesis de que estos receptores de histamina modulen la transmisión dopaminérgica mediante la formación de heterómeros y que esto pueda explicar algunos de los resultados contradictorios sobre las interacciones funcionales entre receptores H3 y receptores de dopamina. Teniendo en cuenta todo ello, se ha demostrado que los receptores de dopamina D1 pueden formar heterómeros con los receptores de histamina H3 y se han estudiado las implicaciones funcionales de estos heterómeros en cultivos celulares y en el estriado. Las vías dopaminérgicas y especialmente la señalización mediada por los receptores D1 y D2 de dopamina, están profundamente implicadas en la adicción a cocaína. Una gran parte de los efectos mediados por la cocaína se atribuyen a una sobre-estimulación de la señalización de los receptores de dopamina debida al incremento de dopamina ocasionado por la inhibición por cocaína del transportador de dopamina (DAT). Sin embargo, la cocaína, además de interaccionar con DAT, puede unirse a otras proteínas como los receptores sigma-1. En este contexto, es interesante conocer si los receptores sigma 1 pueden modular la funcionalidad de los receptores de dopamina D1 y D2 mediante un proceso de heteromerización. Por ello, se ha demostrado que los receptores D1 y D2 de dopamina pueden formar heterómeros con los receptores sigma-1 e investigado el efecto que ejerce la cocaína, mediado por estos heterómeros, en la transmisión dopaminérgica. El receptor de dopamina D4 pertenece a la familia de receptores de dopamina D2 y, en humanos, es el único que presenta formas polimórficas, las más comunes D4.4, D4.2 y D4.7. Existe una clara relación entre la forma polimórfica D4.7 del receptor D4 humano con el trastorno de hiperactividad y déficit de atención. No existen muchas diferencias funcionales entre las formas polimórficas por lo que no se conoce cuales son las repercusiones bioquímicas de expresar una u otra forma. Nuestra hipótesis de trabajo es que podían existir diferencias en la capacidad de formar heterómeros con otros receptores de dopamina como el D2 y que estos heterómeros podrían modular la liberación de glutamato en el estriado, lo que podría ser relevante en el trastorno de hiperactividad y déficit de atención. Por ello, se ha demostrado que los receptores D2 y D4 de dopamina pueden formar heterómeros en células vivas y en el tejido estriatal y se ha estudiado su papel en la liberación de glutamato en el estriado. Otra particularidad del receptor de dopamina D4 es que es el único receptor dopaminérgico en la glándula pineal de rata sin que se conozca cual es su función a pesar de que se expresa de manera circadiana. Dado que la glándula pineal está bajo el control de los receptores alfa-1B y beta-1 adrenérgicos, cuya activación está altamente relacionada con la regulación del ritmo circadiano y la síntesis y liberación de serotonina y melatonina, una posibilidad es que los receptores de dopamina D4 puedan modular la función de los receptores adrenérgicos de la glándula pineal mediante un proceso de heteromerización. Para estudiar esta posibilidad se ha demostrado que los receptores D4 de dopamina pueden formar heterómeros con los receptores alfa-1B y beta-1 adrenérgicos y se ha investigado su presencia y función en la glándula pineal de rata. / DOPAMINE RECEPTOR´S HETEROMERS. NEW MECHANISMS FOR THE REGULATION OF DOPAMINERGIC TRANSMISSION The main objective of this Thesis has been to investigate the formation and function of heteromers between dopamine and other receptors that might be implicated in the regulation of dopaminergic transmission, such as galanin, histamine, adrenergic or sigma-1 receptors. Firstly, it has been demonstrated that dopamine D1-like family receptors (D1 and D5) can form heteromers with galanin Gal1 and Gal2 receptors. The functional association of these heteromers has been studied within the context of the liberation of acetylcholine in the hippocampus. Secondly, it has been shown that dopamine D1 receptors can form heteromers with histamine H3 receptors. The functional implications of these heteromers have been studied using cellular cultures and native striatum tissue. Thirdly, it has been demonstrated that dopamine D1 and D2 receptors can form heteromers with sigma-1 receptors. The effect of cocaine on the dopaminergic transmission mediated by these heteromers has been investigated. Fourthly, it has been shown that dopamine D2 and D4 receptors can form heteromers both in living cells and striatal tissue and their role on the release of glutamate in the striatum has been studied. Finally, it has been shown that dopamine D4 receptors can form heteromers with adrenergic α1B and β1 receptors, their presence and function has been investigated in rat pineal gland.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:32:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 243258.pdf: 1269501 bytes, checksum: f303d1819c487d037bf1be8c850acd98 (MD5) / Schinus molle L. (Anacardiaceae), among other uses, is popularly employed for the treatment of depression. In this study, the antidepressant-like effect of the ethanolic and hexanic extracts from leaves of Schinus molle was investigated in the mouse tail suspension test (TST) and/or in the forced swimming test (FST), two predictive models of depression. The ethanolic extract (600-1000 mg/kg, p.o.) significantly reduced the immobility time in the TST, but not in the FST, and produced a reduction in the locomotor activity in the open-field test (OF).The immobility time in the TST was significantly reduced by the hexanic extract (dose range 30-600 mg/kg, p.o.), without accompanying changes in ambulation when assessed in an open-field test. The efficacy of this extract was found to be comparable to that of fluoxetine (10 mg/kg, p.o.). The anti-immobility effect of the hexanic extract (100 mg/kg, p.o.) was prevented by pretreatment of mice with -chlorophenylalanine (PCPA, 100 mg/kg, i.p., an inhibitor of serotonin synthesis, for four consecutive days), NAN-190 (0.5 mg/kg, i.p., a 5-HT1A receptor antagonist), WAY100635 (0.1 mg/kg, s.c., a selective 5-HT1A receptor antagonist), ketanserin (5 mg/kg, i.p., a 5-HT2A/2C receptor antagonist), MDL72222 (0.1 mg/kg, i.p., a 5-HT3 receptor antagonist), prazosin (1 mg/kg, i.p., an á1-adrenoceptor antagonist), yohimbine (1 mg/kg, i.p., an á2-adrenoceptor antagonist), SCH23390 (0.05 mg/kg, s.c., a D1 receptor antagonist) or sulpiride (50 mg/kg, i.p., a D2 receptor antagonist). Rutin (1 mg/kg, p.o.) isolated from the ethanolic extract and the fraction I (6-17; fatty acid esthers), isolated from the hexanic extract significantly reduced the immobility time in the TST, without altering the locomotor activity in the open-field test. However, the fractions II (33-34; composed by a mixture of fatty alcohols) and III (43-45; mixture of triterpenes), isolated from the hexanic extract did not cause changes in the immobility time in the TST. It may be concluded that the hexanic extract of Schinus molle produces an antidepressant-like effect that seems to be dependent on its interaction with the serotonergic, noradrenergic and dopaminergic systems. These results provide evidence that the hexanic extract from S. molle shares with established antidepressants some pharmacological effects, at least at a preclinical level. Moreover, the fatty acid esthers (fraction 6-17) may be responsible for the antidepressant-like action of this extract in the TST. The ethanolic extract of Schinus molle significantly reduced the immobility time in the TST. Rutin, isolated from this extract, may be also responsible for the antidepressant-like action.

?rea de concentra??o: Qu?mica Anal?tica. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T13:22:00Z No. of bitstreams: 2 lucio_otavio_nunes.pdf: 2924698 bytes, checksum: 74e0e9e438062e96a5659921b4f248b1 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T13:22:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 lucio_otavio_nunes.pdf: 2924698 bytes, checksum: 74e0e9e438062e96a5659921b4f248b1 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T13:22:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 lucio_otavio_nunes.pdf: 2924698 bytes, checksum: 74e0e9e438062e96a5659921b4f248b1 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-19T13:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 lucio_otavio_nunes.pdf: 2924698 bytes, checksum: 74e0e9e438062e96a5659921b4f248b1 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2013 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq); Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / O presente trabalho descreve a s?ntese, caracteriza??o e aplica??o do ?xido de grafite e do grafeno visando o desenvolvimento de sensores. Inicialmente, o material sintetizado foi caracterizado por microscopia eletr?nica de varredura, difra??o de raios-X e espectroscopia no infravermelho. Microscopia eletroqu?mica de varredura foi empregada para a obten??o de ?imagens eletroqu?micas? e informa??es sobre a cin?tica de transfer?ncia de el?trons dos materiais. Por fim, o ?xido de grafite e o grafeno foram empregados na oxida??o seletiva de epinefrina, dopamina, ?cido asc?rbico e ?cido ?rico. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT The present work describes the synthesis, characterization and application of graphite oxide and graphene in sensor development. Initially, the material was characterized by scanning electron microscopy, X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy. Scanning electrochemical microscopy was employed to obtain electrochemical images and the rate constant of electron transfer of graphene and graphite oxide. Finally, the graphite oxide and graphene were used in selective oxidation of epinephrine, dopamine, uric acid and ascorbic acid.

Data de aprova??o ausente. / Orientador do trabalho n?o mencionado na lista da Folha de Aprova??o. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-06-06T20:09:48Z No. of bitstreams: 2 arthur_rocha_gomes.pdf: 1003362 bytes, checksum: 5a0f9deb382be48307e3a02a5951ad0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-06-14T19:38:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 arthur_rocha_gomes.pdf: 1003362 bytes, checksum: 5a0f9deb382be48307e3a02a5951ad0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T19:38:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arthur_rocha_gomes.pdf: 1003362 bytes, checksum: 5a0f9deb382be48307e3a02a5951ad0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016 / O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da efedrina no comportamento de ratos tratados com ra??o padr?o (comercial), dieta de cafeteria ou dieta de restri??o cal?rica desde a lacta??o. Foramutilizadas 12 ninhadas de ratos da linhagem Wistar (Rattus novergicus). Os animais foram alojados em gaiolas individuais, sob condi??es padr?es (umidade natural; temperatura de 23 ?C ? 2; e ciclo claro/escuro de 12 horas). Os ratos machos de cada ninhada formaram, da lacta??o at? a fase adulta, osgrupos: Controle (C) ?receberamra??o padr?o e?guaadlibitum(n = 24);Cafeteria (CAF)?receberam dieta de cafeteria e ?gua ad libitum (n = 24); Restri??o (R) ?receberam 50%dara??oconsumidapelo grupoControle e ?guaadlibitum (n = 24). Entre o 113? e o 117? dia de vida, os animais foram subdividos (n = 12) para receberemo tratamento com salina (C, CAF e R) ou efedrina (C-E, CAF-E e R-E) e realizarem os testes comportamentais. No 118? foram anestesiados e eutanasiados por exsanguina??o. Foram avaliados: o peso corporal, ganho de peso, consumo de ra??o, ingest?o cal?rica, coeficiente de efici?ncia alimentar, comprimento naso-anal e ?ndice de massa corporal; peso dos ?rg?os e tecido adiposo abdominal; comprimento do f?mur e t?bia, e teor de minerais totais; teores de colesterol total e fra??es, triacilglicerol e glicemia do soro; teor de lip?dios, colesterol total e triacilglicerol do f?gado; e os efeitos no comportamento pelos testes Labirinto em Cruz Elevado (LCE) eCampo Aberto. O grupo CAF demonstrou maior ingest?o cal?rica, configurando em maior CEA e ac?mulo de tecido adiposo abdominal, al?m de uma tend?ncia em aumento do peso e do IMC. Ademais, CAF obteve eleva??o dos n?veis de triacilglicerol plasm?tico e hep?tico, que possivelmente foram fatores respons?veis pelo aumento do tecido adiposo. Ao mesmo tempo, houve uma rela??o ruim entre as fra??es do colesterol plasm?tico (HDL-c, LDL-c e VLDL-c), com desenvolvimento de dislipidemia. Portanto, a dieta de cafeteria foi capaz de reproduzir um modelo de obesidade humana e de s?ndrome metab?lica em CAF. Os animais de dieta de restri??o obtiveram menor peso corporal e dos ?rg?os, apresentando ainda retardo no crescimento (menor CNA, da t?bia e do f?mur), e menores valores de IMC. O quadro nutricional desse grupo de animais indica que foi poss?vel desenvolver um modelo de desnutri??o. O grupo CAF obteve maior n?mero de entradas nos bra?os fechados do LCE e uma tend?ncia em atravessar maior n?mero de quadrantes no in?cio do teste de Campo Aberto, sugerindoaumento da locomo??o. A efedrina proporcionou: maior n?mero de entradas nos bra?os fechados; de entradas e tempo de perman?ncia nos bra?os abertos do LCE; maior n?mero de entradas, tempo de perman?ncia no centro do e n?mero de quadrantes atravessados no campo aberto; para ambos os tratamentos (CAF-E e R-E), sugerindo um efeito ansiol?tico e de aumento da locomo??o. As altera??es no comportamento frente ? efedrina indicam que os animais CAF e R possuem uma altera??o no sistema dopamin?rgico, que culmina com aumento do efeito ansiol?tico e de locomo??o da droga. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. / The objective of this work was to evaluate the effects of ephedrine on the behavior of rats treated with standard (commercial) chow, cafeteria diet or caloric restriction diet since lactation. Twelve litters of Wistar rats (Rattus novergicus) were used. The animals were housed in individual cages under standard conditions (natural humidity, temperature of 23 ? C ? 2 and light / dark cycle of 12 hours). The male rats of each litter formed, from lactation to adulthood, the following groups: Control (C) - received standard chow and water ad libitum (n = 24); Cafeteria (CAF) - received cafeteria diet and water ad libitum (n = 24); Restriction (R) - received 50% of the chow consumed by the Control group and water ad libitum (n = 24). Between the 113th and 117th days of life, the animals were subdivided (n = 12) to receive treatment with saline (C, CAF and R) or ephedrine (C-E, CAF-E and R-E) and perform behavioral tests. At 118th, they were anesthetized and euthanized by exsanguination. Body weight, weight gain, feed intake, caloric intake, food efficiency coefficient, naso-anal length and body mass index; weight of organs and abdominal adipose tissue; Length of femur and tibia, and total mineral content; levels of total cholesterol and fractions, triacylglycerol and serum glycemia; lipid content, total cholesterol and triacylglycerol of the liver; and effects on behavior through the Elevated Plus Maze (EPM) and Open Field tests were evaluated. The CAF group demonstrated a higher caloric intake, resulting in an increased CEA and abdominal adipose tissue accumulation, in addition to an increasing tendency of weight and BMI. In addition, CAF obtained an elevation in plasma and hepatic triacylglycerol levels, which were possibly responsible for the increase in adipose tissue. At the same time, there was a great relationship between fractions of plasma cholesterol (HDL-c, LDL-c and VLDL-c), with development of dyslipidemia. Therefore, the cafeteria diet was able to reproduce a model of human obesity and metabolic syndrome in CAF. Restriction diet animals had lower body and organ weight, with slower growth (lower CNA, tibia and femur), and lower BMI values. The nutritional picture of this group of animals indicates that it was possible to develop a model of malnutrition. The CAF group had a higher number of entries in the closed arms of the EPM and a tendency to cross more quadrants at the beginning of the Open Field test, suggesting an increase in locomotion. Ephedrine provided: high number of entries in the closed arms; entries and length of stay in the open arms of the EPM; high number of entries, length of stay in the center and number of quadrants crossed in the open field; for both treatments (CAF-E and R-E), suggesting an anxiolytic effect and increased locomotion. Changes in the behavior against ephedrine indicate that the CAF and R animals have a change in the dopaminergic system, which culminates with aniological increase and locomotion of the drug.

OBJETIVO: Desenvolver e validar a técnica de CLAE-DE para o doseamento de dopamina (DA), ácido diidrofenilacético (DOPAC), ácido homovanílico (HVA) e 3-metoxitiramina (3-MT); validar a técnica de microdiálise (MD) cerebral em animais conscientes e avaliar o efeito do tratamento agudo com um extrato lipofílico das partes aéreas de Hypericum caprifoliatum (HCP) sobre os níveis cerebrais de DA e seus metabólitos. MATERIAIS E MÉTODOS: A validação analítica foi realizada conforme o preconizado pela ANVISA, com análise dos parâmetros linearidade, precisão, exatidão, especificidade e limite inferior de quantificação. A técnica de microdiálise foi realizada de forma clássica: guias de sonda foram implantadas nas regiões cerebrais de interesse por cirurgia estereotáxica; os dialisados foram obtidos, 48 horas após a cirurgia, através da perfusão da sonda com líquido cérebroespinhal artificial (1 μL/min) e coleta durante três horas, em intervalos de 20 min; as três primeiras coletas foram utilizadas para determinação da linha de base e só então foram administrados os tratamentos. Para a validação da MD a sonda foi implantada no estriado (A: -0,3; L: + 3,2; P: - 4,5) e o tratamento foi sulfato de anfetamina (2 mg/kg, s.c.). Para a avaliação do efeito de HCP, a sonda foi implantada no núcleo acumbens (A: +2,2; L: -1,5; P: -5,8) e o tratamento foi uma dose de 270 mg/kg do extrato (v.o.). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os parâmetros avaliados para validar o método analítico ficaram dentro dos limites especificados pela ANVISA. O sulfato de anfetamina produziu um aumento nos níveis extracelulares de DA em 160% e uma redução de DOPAC e de HVA em 80% e 50%, respectivamente. O extrato HCP não alterou o conteúdo intersticial de DA, DOPAC e HVA no núcleo acumbens. Os valores basais encontrados estão de acordo com dados relatados na literatura. Não foi possível quantificar 3-MT. CONCLUSÃO: A metodologia analítica e as condições experimentais de microdiálise utilizadas permitiram a mensuração de mudanças induzidas por anfetamina nos níveis extracelulares de DA e seus principais metabólitos demonstrando que os fundamentos da técnica estão estabelecidos em nossas condições. O regime de tratamento empregado com HCP não foi suficiente para alterar os níveis de DA e seus principais metabólitos no núcleo acumbens de ratos. / OBJECTIVE: The objectives of this work were to validate the HLPC-ED technique for measuring dopamine (DA), dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC), homovanillic acid (HVA) and 3- methoxytyramine (3-MT); to put into operation the brain microdialysis technique (MD) in freely moving rats; to evaluate, by using MD, the effect of a single treatment with lipophilic extract from aerial parts of Hypericum caprifoliatum (HCP) on DA, DOPAC, HVA and 3-MT brain levels. MATERIALS AND METHODS: In order to validate the analytical technique we followed the parameters established by ANVISA for bioanalytical samples. The parameters were: precision, accuracy, specificity and also the lower limit of quantitation. The microdialysis technique was carried out following classical procedures: male Wistar rats were submitted to stereotaxic surgery for the guide cannula implantation in the brain regions of interest; 48 hours later, the microdiaysis probe was inserted and perfused with cerebrospinal fluid (1 μL/min). After baseline samples collecting (1 h), the treatments were administrated and samples were collected every 20 min, during 2h. To accomplish MD technique validation the animals were treated with amphetamine sulfate (2 mg/kg, s.c.) and the extracellular levels of DA, DOPAC e HVA were measured in striatum (A: -0,3; L: + 3,2; P: - 4,5). The effect of HCP acute treatment (270 mg/kg, p.o.) was evaluated in nucleus accumbens (A: +2,2; L: -1,5; P: -5,8). RESULTS AND DISCUSSION: The analytical parameters values found were within the acceptable ranges for bio-analytical limits specified by ANVISA. As expected, amphetamine sulfate administration significantly increased DA (160%) extracellular levels and decreased DOPAC (80%) and HVA (50%) levels. The quantification of 3-MT was not possible. Acute HCP administration did not affected DA, DOPAC and HVA levels in the nucleus accumbens. CONCLUSION: The HPLC-ED methodology and microdialysis procedures employed allowed the detection of amphetamineinduced changes in extracellular levels of DA and its metabolites demonstrating that the technical starting point was acceptable. The acute administration of 270 mg/kg, p.o. of HCP to rats was not sufficient to modify the extracellular levels of DA, DOPAC and HVA in the nucleus accumbens.

O Transtorno de Déficit de Atenção/ Hiperatividade (TDAH) é um transtorno comportamental caracterizado por desatenção e/ou hiperatividade, impulsividade causando prejuízo funcional em múltiplos ambientes. Anormalidades no circuito frontoestriatal, o qual é modulado pela dopamina, têm sido relatadas em pacientes com TDAH. Estudos estruturais e funcionais demonstram redução de tamanho e diminuição do fluxo sanguíneo cerebral (FSC) em áreas relacionadas à rede atencional como o lobos frontal, parietal e temporal, estriado e cerebelo. Da mesma forma, a maioria dos estudos que utilizaram radiofármacos seletivos para o transportador da dopamina (DAT), o qual tem um papel importante no metabolismo da dopamina, mostraram maior densidade de DAT estriatal em pacientes com TDAH em comparação com grupo controle. Devido ao fato de algumas pesquisas terem sugerido que anormalidades no fluxo sanguíneo cerebral em estruturas cortico-subcorticais poderiam estar relacionadas a mudanças no sistema dopaminérgico, decidimos investigar a relação entre a densidade do transportador da dopamina no estriado e a perfusão cerebral total. Foi utilizado, para avaliação do DAT, o radiofármaco Tc-99m TRODAT-1 com técnica tomográfica em SPECT e para avaliação da perfusão 99mTc- ECD. Dez adolescentes, diagnosticados com TDAH pelos critérios do DSM-IV, foram avaliados. A análise, através do SPM5, mostrou correlação negativa entre a densidade de DAT no estriado e o fluxo sanguíneo cerebral em cíngulo, frontal, temporal e cerebelo (pFDR<0,01). Buscando entender, um pouco mais, sobre a disponibilidade de DAT e o TDAH, desenvolvemos outra linha de pesquisa que teve como objetivo avaliar a densidade do DAT em indivíduos com TDAH usuários de substâncias psicoativas. O transtorno de uso de substâncias psicoativas (TUSP) é uma comorbidade frequente em adolescentes com TDAH. Crianças com TDAH, acompanhadas durante a transição para a adolescência, demonstram maior uso de drogas psicoativas que o grupo controle com crianças sem TDAH. Embora alguns estudos tenham demonstrado alterações na disponibilidade do DAT em indivíduos com TUSP pouco se sabe sobre a base neurobiológica da comorbidade. Muitas teorias tentam explicar o maior risco de TUSP em pacientes com TDAH. Alguns autores têm sugerido que indivíduos com TDAH fazem uso de drogas, como cocaína e maconha, na tentativa de minimizar os sintomas do TDAH. Indivíduos com TDAH têm disfunções que sugerem o envolvimento do sistema dopaminérgico, principalmente, os núcleos da base e córtex frontal. A literatura tem demonstrado que muitas drogas de abuso afetam tanto o córtex pré-frontal como estruturas subcorticais, apresentando alterações no sistema dopaminérgico. Assim, nós decidimos avaliar a densidade do DAT, utilizando SPECT com 99mTc- TRODAT-1, em adolescentes com TDAH, sem tratamento prévio com metilfenidato, que tinham a comorbidade de uso de substâncias psicoativas (cocaína e maconha) (TDAH+TUSP) e em adolescentes com TDAH sem a comorbidade (TDAH) e comparar com grupo controle sem TDAH e sem TUSP (controle) e grupo apenas com TUSP, sem comorbidade com TDAH (TUSP). Sessenta e dois indivíduos foram avaliados. TDAH (n=11), TDAH+TUSP (n=18), TUSP (n=14) e controle (n=19). A análise semi-quantitativa do potencial de ligação do 99mTc- TRODAT-1 mostrou que o grupo TDAH tinha aumento significativo da densidade de DAT em estriado em comparação aos outros três grupos. O grupo TDAH+TUSP, apesar de mostrar diminuição significativa da densidade de DAT em relação ao grupo TDAH, apresentou maior densidade em relação ao grupo somente TUSP sem que houvesse diferenças significativas em relação ao grupo controle (sem TDAH sem TUSP). Com base nestes achados, poderíamos especular que o uso de maconha e cocaína poderia ser a causa responsável por reduzir a densidade de DAT em indivíduos do grupo TDAH+TUSP e que esses resultados poderiam ajudar a entender a base da teoria de automedicação. / Attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) is a behavioral disorder characterized by marked symptoms of inattention and hyperactivity, impulsivity causing significant functional impairment in multiple settings (e.g., school and home). Abnormalities of frontostriatal circuits, which are modulated by dopamine, have been found by imaging studies in patients with ADHD. Structural and functional studies have demonstrated reduction in size and decrease in the cerebral blood flow (CBF) in regions related to attentional networks such as frontal lobe, striatum, parietal and temporal lobes and cerebellum. In the same way, studies using special radiolabeled ligands selective of the dopamine transporter (DAT), which has a key function in dopamine metabolism, have showed higher striatal DAT availability in untreated patients with ADHD compared with controls. Due to the fact that some investigations have suggested that CBF abnormalities in cortical-subcortical structures may reflect responses associated with dopaminergic changes, we decided evaluate the relationship between dopamine transporter density in striatum and cortical-subcortical impairment in cerebral blood flow. 99mTc- TRODAT-1 SPECT was used to evaluated DAT density and 99mTc- ECD SPECT to assess brain perfusion. Ten adolescents diagnosed with ADHD according to DSM-IV criteria were investigated. Analysis with SPM5 showed a significant negative correlation between DAT density in the striatum and cerebral blood flow in the cingulate gyrus, frontal lobe, temporal lobe and cerebellum (pFDR<0.01). Seeking to understand more about the availability of DAT and ADHD, we developed another investigation that aimed to evaluate the density of DAT in individuals with ADHD and substance use disorder. Substance use disorder (SUD) is a common comorbidity of ADHD, frequently seen during adolescence. Children with ADHD monitored up to adolescence have significantly greater psychoactive drug use than children without ADHD. Although several studies have shown changes in DAT in these disorders, little is known about the neurobiological basis of the comorbidity. Several theories have been proposed to explain the increased risk for SUD in patients with ADHD. Some authors suggested that patients with ADHD use addictive substances in an attempt to self-medicate the symptoms of the disorder. Children with ADHD have dysfunctions suggesting the involvement of the dopaminergic circuits, mainly in the basal ganglia and frontal cortex. It is well documented that many drugs of abuse affect both prefrontal and subcortical areas resulting in alterations in the dopaminergic system too. Thus, we decided to evaluate striatal DAT density with 99mTc- TRODAT-1 in treatment-naive ADHD adolescents with SUD (ADHD+SUD) and without SUD (ADHD), compared to SUD adolescents without ADHD (SUD) and healthy control subjects (HC). Sixty two male age-matched subjects diagnosed with DSM-IV criteria were included: ADHD (n=11), ADHD+SUD (n=18); SUD (n=14) and HC (n=19). The ADHD group presented significantly higher striatal DAT density compared with ADHD+SUD, SUD and HC groups. Adolescents with ADHD+SUD had significantly lower DAT density than those with ADHD, but significantly higher DAT density than those with SUD only and no significant difference from the healthy control group. Our results might suggest that the use of cannabis and cocaine are responsible for the lower striatal DAT density in the ADHD+SUD compared to the ADHD group which would help to understand the neurobiological basis for the self-medication theory.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-26 / A privação de sono (PS) durante a semana seguida pela compensação dessa perda nos finais de semana tem se tornado uma conduta freqüente na sociedade. Sendo o sono REM predominante na segunda metade da noite, pessoas que dormem menos do que necessitariam perdem grande quantidade dessa fase do sono. O objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações no padrão de sono e na densidade do transportador de dopamina (DAT) no estriado após duas noites de PS total ou quatro noites de PS REM, seguidas de três noites de rebote de sono, comparadas a um grupo controle. A densidade de DAT no estriado dos voluntários foi obtida por meio de Tomografia Computadorizada por Emissão de Fóton Único cerebral utilizando como radiotraçador o [99mTc]TRODAT- nas condições basal, após o período de PS e de rebote. Coletas diárias de sangue foram realizadas a para avaliar as concentrações de prolactina e estradiol, hormônios relacionados com a atividade dopaminérgica. Nossos resultados mostraram que o grupo PS total exibiu aumento marcante na porcentagem de sono de ondas lentas na primeira noite de rebote de sono. Esses voluntários já apresentaram seu padrão de sono regular na segunda noite de rebote. A PS REM promoveu repercussões mais duradouras na arquitetura e homeostase do sono quando comparada a de PS total. Esse grupo continuou apresentando aumento de sono REM até a terceira noite de recuperação. Ambos os protocolos de PS não provocaram alterações significativas na densidade do DAT e nas concentrações hormonais em nenhum dos grupos experimentais. Nossos resultados corroboram com recentes estudos indicando a importância do sistema dopaminérgico na regulação do sono REM. / One inherent repercussion to societal development is the sleep deprivation (SD) during the week followed by sleep compensation on weekends. Because REM sleep predominates in the latter half of the night, people who sleep less may lose REM sleep. Here, we report whether two nights of total SD or four nights of selective REM SD followed by three nights of sleep recovery changes polysomnographic pattern of sleep and dopamine transporter (DAT) density compared to a control group. Single positron emission computed tomography and [99mTc]TRODAT-1 were used to assess cerebral DAT density in the striatum at baseline, after total and REM SD and sleep recovery in healthy volunteers (n=10/group). Blood was collected daily in order to examine prolactin and estradiol levels and correlate these markers with dopaminergic activity. The total SD group exhibited a marked increased in slow wave sleep during the first night of recovery and regular sleep architecture was restored after the first night. However, the REM SD group had longer lasting effects on percentage of REM sleep seen during all the recovery period. Neither total and REM SD affected DAT density in striatum or the levels of cortisol, estradiol and prolactin during the protocol. Because DA activity has been related to REM sleep and selective loss of REM sleep creates a greater imbalance in sleep architecture than total SD, these findings are consistent with recent studies that indicate a novel role for DA in regulating REM sleep. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações