Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-27 / P. aeruginosa é um importante microorganismo em infecções de corrente sanguínea. O tratamento da P. aeruginosa resistente aos carbapenêmicos é um desafio, já que as drogas mais utilizadas para este fim, as polimixinas, tem uma ação inferior aos carbapenêmicos. No entanto, o uso combinado de polimixinas com carbapenêmicos tem demonstrado sinergismo em estudos in vitro. Objetivos: Avaliar a resposta ao tratamento com polimixina B versus polimixina B e imipenem em pacientes com infecção da corrente sanguínea associada a assistência à saúde, primária ou secundária, causada por Pseudomonas aeruginosa resistente aos carbapenêmicos e identificar os fatores associados à mortalidade. Métodos: Realizamos um estudo tipo coorte retrospectivo, com pacientes internados no Hospital São Paulo - UNIFESP, no período de 01 de janeiro de 2000 à 31 de dezembro de 2009. A identificação dos pacientes foi realizada através de levantamento de dados da ficha de notificação de hemoculturas com posterior revisão dos prontuários. Os pacientes foram inicialmente divididos em óbitos e sobreviventes e avaliados quanto a exposição a diversos fatores associados à letalidade hospitalar e relacionada a infecção. Foi realizada pesquisa de metalobetalactamase nas amostras de P. aeruginosa que puderam ser recuperadas, por técnica de biologia molecular. Resultados: Foram estudadas 69 infecções de corrente sanguínea por P. aeruginosa resistente aos carbapenêmicos, das quais 35 foram tratadas com monoterapia com polimixina B e 34 com terapia combinada. O óbito relacionado a infecção, definido como aquele que ocorreu nos primeiros 14 dias do diagnóstico da infecção da corrente sanguínea, foi de 42,8% nos pacientes que utilizaram monoterapia e 44,1% naqueles que utilizaram terapia combinada (p=0,917). Foram fatores associados à mortalidade durante a internação hospitalar, o uso prévio de glicopeptídeos (OR 10,71, IC 1,20-95,34, p=0,033) e o escore de Charlson no momento da internação (OR 1,9, IC 1,22-2,94, p=0,004). Foram variáveis associadas à mortalidade relacionada à infecção, a presença de choque séptico (OR 9,99, IC 1,81- 55,22, p=0,006) e uso de nutrição parenteral (OR 7,45, IC 1,23-45,24, p=0,029). Foi encontrada uma alta taxa de mortalidade. A terapia combinada não modificou a evolução dos pacientes. A mortalidade hospitalar no grupo com monoterapia foi de 77,1% entre os pacientes que receberam monoterapia e 79,4% nos que receberam terapia combinada (p=0,819). Em pacientes tratados com terapia combinada, quando analisada a presença ou não de metalobetalactamase, não houve diferença estatisticamente significativa quanto aos desfechos. Conclusões: Nesta população, foram fatores independentes para o óbito durante a internação o uso prévio de glicopeptídeos e a pontuação no score de Charlson e, para o óbito relacionado à infecção, a presença de choque séptico e o uso de nutrição parenteral. A presença de metalo-beta-lactamase não influiu no desfecho. / Pseudomonas aeruginosa is an important pathogen causing nosocomial bloodstream infections. The treatment of carbapenem-resistant P. aeruginosa is a challenge as the drugs used for this purpose, the polymyxins, have lower activity compared with carbapenems. However, it has been suggested that polymyxins have the ability to make gram-negative bacteria more susceptible to other antibiotics. As carbapenems are considered the main drugs against P. aeruginosa, it would be interesting to demonstrate the efficacy of this combination in vivo, targeting a more effective therapy. Objectives: To evaluate the response of the treatment with polymyxin B versus polymyxin B and carbapenem in patients with nosocomial bloodstream infection caused by carbapenenresistant Pseudomonas aeruginosa and identify factors associated with mortality among those patients Methods: A retrospective cohort study was performed at Hospital São Paulo - UNIFESP, from January 1st, 2000 to December 31, 2009. The identification of patients was done through data collection from the blood cultures report. Patients were initially divided into deaths and survivors, and assessed for exposure to various factors potentially associated with in-hospital mortality and infection-related mortality. Presence of metalobetalactamase was tested trough PCR technique. Results: We studied 69 bloodstream infections caused by carbapenems-resistant P. aeruginosa. Thirthy-five were treated with polymyxin B monotherapy and 34 with combined therapy. In- hospital mortality was 77.1% and 79.4% in the monotherapy group and combined therapy group, respectively (p = 0.819). The infection-related mortality was 42.8% among patients who received monotherapy, and 44.1% in those receiving combined therapy (p = 0.917). Factors associated with mortality were previous use of glycopeptides (OR 10.71, CI95% 1.20 to 95.34, p = 0.033) and Charlson score (OR 1.9, CI95% 1, 22 to 2.94, p = 0.004). Infection-related mortality was associated with the presence of septic shock (OR 9.99, CI95% 1.81 to 55.22, p = 0.006) and parenteral nutrition (OR 7.45, CI95% 1.23 - 45.24, p = 0.029). No statistically significant difference was found between patients with MBLharboring and non-MBL-harboring strains treated with combined therapy. Conclusions: No difference was found between the monotherapy and combined therapy group regarding mortality. Independent factors related to in- hospital mortality were prior use of glycopeptides and the Charlson score. Presence of septic shock and use of parenteral nutrition were independently associated with infection-related mortality. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: Estimativas mostram que mais de dois terços das mulheres com câncer de mama possuem receptores hormonais positivos, e recebem terapia endócrina como tratamento, sendo tamoxifeno (TAM) o tratamento padrão (EBCTCG 2005; Davies et al., 2012). Porém, muitas pacientes se tornam resistentes com o passar do tempo. Estudos prévios mostraram que a expressão do receptor de estrogênio β (REβ) aumenta a resposta ao tratamento com TAM em células de câncer de mama, assim como a coexpressão de REα e REβ esta associada com maior ação proliferativa de TAM (Treeck et al., 2010; Sun et al., 2014). Também foi observada a existência de “cross-talk” entre os RE e a família do receptor do fator de crescimento epidérmico (HER) na resposta ao tratamento com TAM (Lindberg et al., 2011; Blows et al., 2010). Objetivo: Verificar a expressão do REβ, e suas interações com REα e receptores HER, durante o tratamento com TAM e em células resistentes ao TAM. Métodos: A expressão do REβ foi analisada em dois bancos de dados contendo informações de pacientes com câncer de mama. A expressão de RNAm dos RE, receptores HER e vias de sinalização PTEN, Akt e MAPK foram avaliadas após tratamento com TAM, em células resistentes ao TAM e em células silenciadas para os genes dos RE. Também foi avaliada a viabilidade celular após tratamento com TAM e nas células silenciadas para os genes dos RE. Resultados: Pacientes com câncer de mama apresentaram expressão reduzida do REβ, e os subtipos de câncer de mama REα positivos apresentaram baixa expressão do REβ quando comparados aos subtipos REα negativos. Células expressando níveis moderados de REβ apresentaram melhor resposta ao tratamento com TAM. Diminuição nos níveis dos RE é acompanhada por aumento nos níveis dos receptores ErbB2 e ErbB3, aumento de PTEN e diminuição de Akt e MAPK3 após tratamento com TAM. ERβ modula a ação antiproliferativa do TAM através da via de MAPK3. Células resistentes ao TAM apresentaram baixos níveis dos RE e altos níveis dos receptores EGFR, ErbB3 e ErbB4. Conclusão: Estes resultados demonstram que o REβ, e suas interações com REα e receptores HER, possuem papel importante na resposta ao tratamento com TAM. / Introduction: Approximately two-thirds of all breast cancer patients overexpress hormonal receptors, and are treated with endocrine therapy, being tamoxifen (TAM) the standard treatment. However many of initial responders to TAM as first-line experience relapse. Several mechanisms have been proposed to explain the occurrence of acquired TAM resistance. Previous studies showed that estrogen receptor β (ERβ) expression is associated with better response to tamoxifen treatment, as the co-expression of ERα and ERβ is associated with TAM antiproliferative effects. Moreover, there is growing interest about the cross-talk between ERs and ErbB family in response to endocrine therapy. Suggesting that TAM can acts through ERβ and/or ErbB family as compensatory pathways. Objective: To evaluate the expression of ERβ and the relation of ERβ with ERα and ErbB family in response to TAM treatment and in TAM resistant cells. Methods: ERβ expression was analyzed in two different databases of breast cancer patients. The mRNA levels of ER, HER receptors and PTEN, Akt and MAPK signal pathways were measured after TAM treatment, in TAM resistance cells and in cells silenced for ER genes. The cellular viability was also measured after TAM treatment, in TAM resistance cells and in cells silenced for ER genes. Results: Breast cancer patients presented reduced ERβ expression and the ERα-positive breast cancer subtypes presented lower ERβ levels when compared to ERα-negative breast cancer subtypes. Cells expressing moderates levels of ERβ presented better response to TAM treatment. Down-regulation of ERs induced by TAM treatment are accompanied with an increase in ErbB2 and ErbB3, reduced AKT and MAPK3 mRNA levels and increased PTEN levels. ERβ modulates TAM anti-proliferative effects through MAPK3 pathway. TAM– resistant cells expressed decreased ER mRNA levels and increased EGFR, ErbB3 and ErbB4 levels. Demonstrating that the cross-talk between ERs and HER family influence the response to TAM treatment. Conclusion: These results provide additional data indicating the importance of ERβ, and the relation with ERα and HER receptors, to predict TAM responsiveness.

A presente tese teve como objetivo realizar a descrição dos microrganismos que já foram isolados ou detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos em pacientes infantis por meio de uma revisão sistemática, além de avaliar a composição bacteriana e a presença de genes de resistência a antibióticos em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB), dentina (D) e câmara pulpar (RC) de dentes decíduos com infecções endodônticas. No Capítulo 1, realizou-se revisão sistemática em bancos de dados eletrônicos, tendo sido incluídos estudos clínicos que avaliaram presença de microrganismos em dentes decíduos com infecções endodônticas, por meio de análise microbiológica com cultivo ou de métodos moleculares. Foi realizada análise descritiva dos dados. A análise identificou 44 títulos, sendo revisados, na íntegra, 17 artigos. Foram selecionados 8 estudos clínicos, de acordo com os critérios de inclusão determinados. Por meio de busca manual, foram selecionados 2 artigos adicionais, totalizando 11 artigos excluídos desta revisão. Nos oito estudos clínicos incluídos na revisão sistemática, a identificação dos microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas foi realizada por meio de várias técnicas como: cultura microbiológica, hibridização DNA-DNA, PCR e suas variações, clonagem, sequenciamento e pirossequenciamento, confirmando a diversidade de microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas de dentes decíduos. A análise dos dados sugere que as infecções endodônticas em dentes decíduos são causadas por múltiplas combinações de espécies de micro-organismos, confirmando a sua natureza polibacteriana. No Capítulo 2, amostras de S, SB, D e RC foram coletadas de pacientes infantis com infecções endodônticas. O perfil das comunidades microbianas foram obtidos por meio da análise da região espaçadora intergênica relacionada aos genes 16S e 23S rRNA (PCR-RISA). Determinaram-se e índices de riqueza, dominância, índice de Shannon, índice de Chao-1 (alfa-diversidade) e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis) e análise de coordenadas principais (PCoA) (beta-diversidade). Há um baixo grau de agrupamento entre as amostras de S, BS, D e RC, obtidas de um mesmo participante. Se presentes, os agrupamentos acontecem para sítios contíguos, mas com baixo percentual de similaridade. Amostras de um mesmo ecossistema obtidas de diferentes participantes abrigam comunidades bacterianas distintas, com baixa similaridade. Não parece haver uma relação entre a presença de um sinal/sintoma clínico e acréscimo no perfil de similaridade das comunidades bacterianas em RC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os índices de alfa-diversidade (riqueza, dominância, Shannon e Chao-1) entre S, SB, D e RC. O uso prévio de antibióticos não modificou os resultados de alfa diversidade ou de beta diversidade obtidos. No Capítulo 3, verificou-se a distribuição dos genes de resistência bacteriana aos principais grupos de antibióticos em S, SB, D, e RC dentes decíduos em pacientes infantis com infecções endodônticas e também de amostras de saliva dos responsáveis (R) por meio de PCR para os genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, lsaB. Realizou-se análise estatística descritiva e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis). Dos pacientes selecionados, 3/8 utilizaram antibiótico previamente à coleta. Nenhum gene de resistência foi observado em todos os ecossistemas de um mesmo participante. Os genes mais frequentemente detectados foram os genes de resistência à tetraciclina tetQ e tetW. Não foram detectados nas amostras os genes ampC, mecA, lnuB e lsaB. A presença simultânea de um gene em dois nichos ocorre em ecossistemas contíguos. Não se observa um comportamento uniforme quanto ao perfil de agrupamento de diferentes amostras de um mesmo participante, e nem entre as amostras de saliva do participante infantil (S) e seu responsável (R). Há múltiplos perfis de distribuição de genes de resistência a agentes antimicrobianos em amostras de ecossistemas bucais contíguos em um mesmo paciente portador de infecção endodôntica. A análise conjunta dos dados permite concluir que cada um dos ecossistemas da cavidade bucal de crianças portadoras de infecções endodônticas avaliado apresenta espécies bacterianas e fatores de virulência distribuídos de forma única e distintas, a partir de uma perspectiva de análise de diversidade. / This thesis aimed assessing information on the bacteria that were isolated/detected in teeth with endodontic infections from infant patients through a sistematic review of the literature. Furthermore, the bacterial composition and the presence of resistance genes to antimicrobial agents was determined in saliva (S), in supragengival biofilm (SB), in dentine (D) and in pulp cavity (RC) samples. In the Chapter 1, a sistematic review was conducted in electronic databasis. Clinical studies that evaluated the presence of microorganims in primary teeth with endodontic infections through culture and molecular methods were included. Fourty-four titles were selected and 17 articles were fully revised. Eight clinical studies were selected for data extraction. Two articles were included following the hand search. According to the data analysis, microbial identification was performed by culture, DNA-DNA hybridization, PCR, cloning and sequencing and next-generation sequencing methods. A high diversity in the microbial components identificated/detected was reported. Endodontic infections in primary teeth are polymicrobial, with a multi-species consortia. In the Chapter 2, the S, SB, D and RC samples were collected from infanti patients with endodontic infections. The ribossomal intergenic spacer analysis (PCR-RISA) for the 16S-23S rRNA genes interspacer region was employed to determine the bacterial fingerprint for each sample. Metrics for alfa and beta diversity were employed, such as richness, dominance, Shannon Index, Chao-1 Index, cluster analysis (UPGMA, Bray-Curtis Index) and principal coordenate analysis (PCoA). There was a low grouping profile for shared samples of S, BS, D and RC from the same participant. When detected, clustering behavior was observed for contiguous sites, with low percentual of similarity between them. Samples from the same site but from different subjects harboured distinct bacterial communities, with low similarity. No clinical sign/symptom was detected as a grouping factor for RC sample from different subjects. No statistical difference was detected for the alfa-diversity indexes among S, SB, D and RC. The previous exposition to antimicrobial agentes has no effect over the alfa- and beta-diversity indexes. In the Chapter 3, the distribution of bacterial genes for antimicrobial resistance in S, SB, D and RC was determined in samples from children with endodontic infections and their relatives (R) by PCR. The presence of the genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, and lsaB was detecte in the samples. Descriptive statistical analysis and multivariate anlysis (cluster analyisis, UPGMA and Bray-Curtis similarity index) were carried out. Three out of 8 patients had antimicrobial agents previously to the apointment. No resistance gene was shared by all envirnments in the same participant. The most frequently detected genes were tetQ and tetW. The genes ampC, mecA, lnuB, and lsaB were not detected in any the samples. The same gene was detected only in two contiguous niches. Clustering analysis revealed no grouping pattern among the samples, despite they were or not from the same participant or his/her relative. Multiple profiles of resistance genes distribution were detected in the oral cavity samples from infant participants. The oral cavity in children with endodontic infection is a complex environment that harbours unique bacterial communities profiles and a distinct distribution of resitance genes to antimicrobial agents, considering an ecological perspective.

Benznidazol (BZ) é uma das duas drogas usadas no tratamento da doença de Chagas. Falhas terapêuticas são observadas em muitos pacientes, que foram atribuídas, principalmente, às diferenças na suscetibilidade de cepas do Trypanosoma cruzi a essa droga. Alguns genes foram implicados na resistência induzida a BZ, mas não na resistência natural. O objetivo geral deste estudo foi investigar diferenças de expressão gênica em cepas de T. cruzi naturalmente resistentes e suscetíveis a BZ, utilizando microarranjos de DNA. Quantificamos a sensibilidade à droga em cepas de laboratório e isolados obtidos de pacientes crônicos submetidos a quimioterapia com BZ. Concluímos que os valores de CI50 não são preditivos cura. Os experimentos de microarranjos e ensaios de RT-PCR mostram que a abundância de transcritos do gene TcABCG1, foi maior em cepas naturalmente resistentes a BZ. Não observamos variação na abundância de transcritos de alguns genes implicados no fenótipo de resistência induzida. Nossos dados sugerem o envolvimento do transportador TcABCG1 na resistência a BZ. / Benznidazole (BZ) is one of the two drugs used to treat Chagas disease. Therapeutic failures were reported in many chronic patients, which were mostly attributed to different susceptibilities of Trypanosoma cruzi strains to BZ. A few genes have been implicated in the induced resistance to BZ, but none in the natural resistance. The general goal of this study was to investigate differences in gene expression between susceptible and naturally resistant T. cruzi strains employing DNA microarray technology. We have quantified the drug activity for laboratory strains and for isolates retrieved from chronic patients submitted to BZ therapy. Our results indicate that the IC50 values are not predictive of cure. The microarray and RT-PCR experiments showed the higher abundance of transcript of TcABCG1 gene in naturally resistant strains as compared to sensitive strains. We observed no variation in the transcripts levels of the genes implicated in the induced drug resistance. Our data suggest that TcABCG1 transporter may be involved in natural drug resistance in T. cruzi.

Thesis (MTech (Biomedical Sciences))--Cape Peninsula University of Technology, 2015. / BACKGROUND AND OBJECTIVES: Group B Streptococci (GBS) can asymptomatically colonise the vagina and rectum of women. Studies have shown that this bacterium is the leading cause of septicemia, meningitis and pneumonia in neonates. In Namibia no known studies have investigated GBS colonisation and the antibiotic resistance profile of GBS isolates in pregnant women. This study accessed the GBS colonisation rate amongst the pregnant women who attended the Windhoek Central Hospital Antenatal Clinic (Khomas region), in Namibia for a period of 13 months. Furthermore, using the VITEK 2 system, the GBS isolates were tested against the following antimicrobial substances; benzylpenicillin, ampicillin, clindamycin, erythromycin, tetracycline, vancomycin, cefotaxime, ceftriaxone, linezolid and trimethoprim/sulfamethoxazole. Penicillin G is the drug of choice in the majority of studies, and seems to be the most effective drug for intrapartum antibiotic prophylaxis (IAP). All the GBS isolates found in this study were also analysed for the presence of selected genes known to be associated with resistance to key antibiotics using specific primers within a polymerase chain reaction (PCR).

Introdução: Estimativas mostram que mais de dois terços das mulheres com câncer de mama possuem receptores hormonais positivos, e recebem terapia endócrina como tratamento, sendo tamoxifeno (TAM) o tratamento padrão (EBCTCG 2005; Davies et al., 2012). Porém, muitas pacientes se tornam resistentes com o passar do tempo. Estudos prévios mostraram que a expressão do receptor de estrogênio β (REβ) aumenta a resposta ao tratamento com TAM em células de câncer de mama, assim como a coexpressão de REα e REβ esta associada com maior ação proliferativa de TAM (Treeck et al., 2010; Sun et al., 2014). Também foi observada a existência de “cross-talk” entre os RE e a família do receptor do fator de crescimento epidérmico (HER) na resposta ao tratamento com TAM (Lindberg et al., 2011; Blows et al., 2010). Objetivo: Verificar a expressão do REβ, e suas interações com REα e receptores HER, durante o tratamento com TAM e em células resistentes ao TAM. Métodos: A expressão do REβ foi analisada em dois bancos de dados contendo informações de pacientes com câncer de mama. A expressão de RNAm dos RE, receptores HER e vias de sinalização PTEN, Akt e MAPK foram avaliadas após tratamento com TAM, em células resistentes ao TAM e em células silenciadas para os genes dos RE. Também foi avaliada a viabilidade celular após tratamento com TAM e nas células silenciadas para os genes dos RE. Resultados: Pacientes com câncer de mama apresentaram expressão reduzida do REβ, e os subtipos de câncer de mama REα positivos apresentaram baixa expressão do REβ quando comparados aos subtipos REα negativos. Células expressando níveis moderados de REβ apresentaram melhor resposta ao tratamento com TAM. Diminuição nos níveis dos RE é acompanhada por aumento nos níveis dos receptores ErbB2 e ErbB3, aumento de PTEN e diminuição de Akt e MAPK3 após tratamento com TAM. ERβ modula a ação antiproliferativa do TAM através da via de MAPK3. Células resistentes ao TAM apresentaram baixos níveis dos RE e altos níveis dos receptores EGFR, ErbB3 e ErbB4. Conclusão: Estes resultados demonstram que o REβ, e suas interações com REα e receptores HER, possuem papel importante na resposta ao tratamento com TAM. / Introduction: Approximately two-thirds of all breast cancer patients overexpress hormonal receptors, and are treated with endocrine therapy, being tamoxifen (TAM) the standard treatment. However many of initial responders to TAM as first-line experience relapse. Several mechanisms have been proposed to explain the occurrence of acquired TAM resistance. Previous studies showed that estrogen receptor β (ERβ) expression is associated with better response to tamoxifen treatment, as the co-expression of ERα and ERβ is associated with TAM antiproliferative effects. Moreover, there is growing interest about the cross-talk between ERs and ErbB family in response to endocrine therapy. Suggesting that TAM can acts through ERβ and/or ErbB family as compensatory pathways. Objective: To evaluate the expression of ERβ and the relation of ERβ with ERα and ErbB family in response to TAM treatment and in TAM resistant cells. Methods: ERβ expression was analyzed in two different databases of breast cancer patients. The mRNA levels of ER, HER receptors and PTEN, Akt and MAPK signal pathways were measured after TAM treatment, in TAM resistance cells and in cells silenced for ER genes. The cellular viability was also measured after TAM treatment, in TAM resistance cells and in cells silenced for ER genes. Results: Breast cancer patients presented reduced ERβ expression and the ERα-positive breast cancer subtypes presented lower ERβ levels when compared to ERα-negative breast cancer subtypes. Cells expressing moderates levels of ERβ presented better response to TAM treatment. Down-regulation of ERs induced by TAM treatment are accompanied with an increase in ErbB2 and ErbB3, reduced AKT and MAPK3 mRNA levels and increased PTEN levels. ERβ modulates TAM anti-proliferative effects through MAPK3 pathway. TAM– resistant cells expressed decreased ER mRNA levels and increased EGFR, ErbB3 and ErbB4 levels. Demonstrating that the cross-talk between ERs and HER family influence the response to TAM treatment. Conclusion: These results provide additional data indicating the importance of ERβ, and the relation with ERα and HER receptors, to predict TAM responsiveness.

A presente tese teve como objetivo realizar a descrição dos microrganismos que já foram isolados ou detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos em pacientes infantis por meio de uma revisão sistemática, além de avaliar a composição bacteriana e a presença de genes de resistência a antibióticos em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB), dentina (D) e câmara pulpar (RC) de dentes decíduos com infecções endodônticas. No Capítulo 1, realizou-se revisão sistemática em bancos de dados eletrônicos, tendo sido incluídos estudos clínicos que avaliaram presença de microrganismos em dentes decíduos com infecções endodônticas, por meio de análise microbiológica com cultivo ou de métodos moleculares. Foi realizada análise descritiva dos dados. A análise identificou 44 títulos, sendo revisados, na íntegra, 17 artigos. Foram selecionados 8 estudos clínicos, de acordo com os critérios de inclusão determinados. Por meio de busca manual, foram selecionados 2 artigos adicionais, totalizando 11 artigos excluídos desta revisão. Nos oito estudos clínicos incluídos na revisão sistemática, a identificação dos microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas foi realizada por meio de várias técnicas como: cultura microbiológica, hibridização DNA-DNA, PCR e suas variações, clonagem, sequenciamento e pirossequenciamento, confirmando a diversidade de microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas de dentes decíduos. A análise dos dados sugere que as infecções endodônticas em dentes decíduos são causadas por múltiplas combinações de espécies de micro-organismos, confirmando a sua natureza polibacteriana. No Capítulo 2, amostras de S, SB, D e RC foram coletadas de pacientes infantis com infecções endodônticas. O perfil das comunidades microbianas foram obtidos por meio da análise da região espaçadora intergênica relacionada aos genes 16S e 23S rRNA (PCR-RISA). Determinaram-se e índices de riqueza, dominância, índice de Shannon, índice de Chao-1 (alfa-diversidade) e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis) e análise de coordenadas principais (PCoA) (beta-diversidade). Há um baixo grau de agrupamento entre as amostras de S, BS, D e RC, obtidas de um mesmo participante. Se presentes, os agrupamentos acontecem para sítios contíguos, mas com baixo percentual de similaridade. Amostras de um mesmo ecossistema obtidas de diferentes participantes abrigam comunidades bacterianas distintas, com baixa similaridade. Não parece haver uma relação entre a presença de um sinal/sintoma clínico e acréscimo no perfil de similaridade das comunidades bacterianas em RC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os índices de alfa-diversidade (riqueza, dominância, Shannon e Chao-1) entre S, SB, D e RC. O uso prévio de antibióticos não modificou os resultados de alfa diversidade ou de beta diversidade obtidos. No Capítulo 3, verificou-se a distribuição dos genes de resistência bacteriana aos principais grupos de antibióticos em S, SB, D, e RC dentes decíduos em pacientes infantis com infecções endodônticas e também de amostras de saliva dos responsáveis (R) por meio de PCR para os genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, lsaB. Realizou-se análise estatística descritiva e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis). Dos pacientes selecionados, 3/8 utilizaram antibiótico previamente à coleta. Nenhum gene de resistência foi observado em todos os ecossistemas de um mesmo participante. Os genes mais frequentemente detectados foram os genes de resistência à tetraciclina tetQ e tetW. Não foram detectados nas amostras os genes ampC, mecA, lnuB e lsaB. A presença simultânea de um gene em dois nichos ocorre em ecossistemas contíguos. Não se observa um comportamento uniforme quanto ao perfil de agrupamento de diferentes amostras de um mesmo participante, e nem entre as amostras de saliva do participante infantil (S) e seu responsável (R). Há múltiplos perfis de distribuição de genes de resistência a agentes antimicrobianos em amostras de ecossistemas bucais contíguos em um mesmo paciente portador de infecção endodôntica. A análise conjunta dos dados permite concluir que cada um dos ecossistemas da cavidade bucal de crianças portadoras de infecções endodônticas avaliado apresenta espécies bacterianas e fatores de virulência distribuídos de forma única e distintas, a partir de uma perspectiva de análise de diversidade. / This thesis aimed assessing information on the bacteria that were isolated/detected in teeth with endodontic infections from infant patients through a sistematic review of the literature. Furthermore, the bacterial composition and the presence of resistance genes to antimicrobial agents was determined in saliva (S), in supragengival biofilm (SB), in dentine (D) and in pulp cavity (RC) samples. In the Chapter 1, a sistematic review was conducted in electronic databasis. Clinical studies that evaluated the presence of microorganims in primary teeth with endodontic infections through culture and molecular methods were included. Fourty-four titles were selected and 17 articles were fully revised. Eight clinical studies were selected for data extraction. Two articles were included following the hand search. According to the data analysis, microbial identification was performed by culture, DNA-DNA hybridization, PCR, cloning and sequencing and next-generation sequencing methods. A high diversity in the microbial components identificated/detected was reported. Endodontic infections in primary teeth are polymicrobial, with a multi-species consortia. In the Chapter 2, the S, SB, D and RC samples were collected from infanti patients with endodontic infections. The ribossomal intergenic spacer analysis (PCR-RISA) for the 16S-23S rRNA genes interspacer region was employed to determine the bacterial fingerprint for each sample. Metrics for alfa and beta diversity were employed, such as richness, dominance, Shannon Index, Chao-1 Index, cluster analysis (UPGMA, Bray-Curtis Index) and principal coordenate analysis (PCoA). There was a low grouping profile for shared samples of S, BS, D and RC from the same participant. When detected, clustering behavior was observed for contiguous sites, with low percentual of similarity between them. Samples from the same site but from different subjects harboured distinct bacterial communities, with low similarity. No clinical sign/symptom was detected as a grouping factor for RC sample from different subjects. No statistical difference was detected for the alfa-diversity indexes among S, SB, D and RC. The previous exposition to antimicrobial agentes has no effect over the alfa- and beta-diversity indexes. In the Chapter 3, the distribution of bacterial genes for antimicrobial resistance in S, SB, D and RC was determined in samples from children with endodontic infections and their relatives (R) by PCR. The presence of the genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, and lsaB was detecte in the samples. Descriptive statistical analysis and multivariate anlysis (cluster analyisis, UPGMA and Bray-Curtis similarity index) were carried out. Three out of 8 patients had antimicrobial agents previously to the apointment. No resistance gene was shared by all envirnments in the same participant. The most frequently detected genes were tetQ and tetW. The genes ampC, mecA, lnuB, and lsaB were not detected in any the samples. The same gene was detected only in two contiguous niches. Clustering analysis revealed no grouping pattern among the samples, despite they were or not from the same participant or his/her relative. Multiple profiles of resistance genes distribution were detected in the oral cavity samples from infant participants. The oral cavity in children with endodontic infection is a complex environment that harbours unique bacterial communities profiles and a distinct distribution of resitance genes to antimicrobial agents, considering an ecological perspective.

In the works presented here, we studied molecular changes associated with drug resistance in human mantle cell lymphoma (MCL) cells using proteomics. Our analyses allowed us to identify causal and/or secondary changes in protein expression associated with the development of resistance to the experimental drug TRAIL and the clinically used antimetabolites cytarabine and fludarabine. Resistance of MCL cells to the recombinant proapoptotic cytokine TRAIL was associated with downregulation of key enzymes of purine metabolism. This pathway potentially represents a molecular "weakness", which could be used as a therapeutic target for selective elimination of such resistant cells. Resistance to the pyrimidine analog drug cytarabine was associated with cross-resistance to other antinucleosides. Proteomic and transcriptomic analyses showed pronounced downregulation of deoxycytidine kinase (dCK), which activates both purine and pyrimidine antinucleosides. This change explains the cross-resistance and is the causal mechanism of resistance to cytarabine. Our observations suggest that MCL patients, who do not respond to cytarabine-based therapy, should be treated with non-nucleoside drugs. MCL cells resistant to purine-derived antinucleoside fludarabine were cross-resistant to all tested antinucleosides and...

Neutropenia febril (NF) constitui complicação frequente do tratamento quimioterápico do câncer e está associada a altas taxas de morbimortalidade. O reconhecimento dos principais fatores associados ao desenvolvimento de desfechos clínicos desfavoráveis na NF é fundamental, uma vez que estes podem ser utilizados como marcadores prognósticos ou alvos terapêuticos. Este estudo objetiva determinar os principais fatores associados com mortalidade, tempo de hospitalização, incidência de bacteremia por patógenos multirresistentes e incidência de choque séptico no início da febre em pacientes hospitalizados com NF secundária à quimioterapia citotóxica para o câncer. Na presente coorte prospectiva composta por 305 episódios consecutivos de NF (em 169 pacientes com câncer) realizada em um hospital terciário no período de outubro de 2009 a agosto de 2011, as seguintes questões de pesquisa foram avaliadas: impacto do tempo de início da antibioticoterapia na mortalidade em 28 dias; fatores relacionados com tempo de hospitalização; impacto dos fatores microbiológicos da bacteremia no desenvolvimento de choque séptico no início do episódio de NF; fatores de risco para bacteremia por patógenos multirresistentes; impacto da bacteremia por Staphylococcus coagulase-negativo na mortalidade em 28 dias. Em 5 publicações distintas, os seguintes resultados foram notados: o atraso do início da antibioticoterapia está associado a maiores taxas de mortalidade em 28 dias; neoplasia hematológica, regimes quimioterápicos de altas doses, duração da neutropenia e bacteremia por Gram-negativos multirresistentes estão associados com períodos prolongados de internação por NF; infecção de corrente sanguínea polimicrobiana, bacteremia por Escherichia coli e bacteremia por Streptococcus viridans estão associados a choque séptico no início do episódio de NF; idade avançada, duração da neutropenia e presença de cateter venoso central estão associados com bacteremia por patógenos multirresistentes; bacteremia por Staphylococcus coagulase-negativo está associada a menores taxas de mortalidade em 28 dias quando comparado à bacteremia por outros patógenos. / Febrile neutropenia (FN) is a common complication of cancer chemotherapy and is associated with high morbidity and mortality rates. Recognition of the main factors associated with the development of adverse clinical outcomes in FN is crucial, given that these factors can be used as prognostic markers or therapeutic targets. This study aims to determine the main factors associated with mortality, length of hospital stay, incidence of bacteremia by multidrug-resistant pathogens and incidence of septic shock at the onset of fever in hospitalized patients with FN secondary to cancer cytotoxic chemotherapy. In the present prospective cohort of 305 FN episodes (in 169 cancer patients) conducted at a tertiary hospital from October 2009 to August 2011, the following research questions were evaluated: impact of time to antibiotic administration on 28-day mortality; factors associated with length of hospital stay; impact of microbiological factors of bacteremia on the development of septic shock at the onset of FN; risk factors for bacteremia by multidrug-resistant pathogens; impact of coagulasenegative Staphylococcus bacteremia on 28-day mortality. In 5 distinct publications, the following results were noted: delay of antibiotic administration is associated with higher 28-day mortality rates; hematologic malignancy, high-dose chemotherapy regimens, duration of neutropenia and bacteremia by multidrug-resistant Gram-negative bacteria are associated with prolonged length of hospital stay; polymicrobial bloodstream infection, bacteremia by Escherichia coli, and bacteremia by viridans sreptococci are associated with septic shock at the onset of FN; advanced age, duration of neutropenia and presence of indwelling central venous catheters are associated with bacteremia by multidrug-resistant pathogens; coagulase-negative Staphylococcus bacteremia is associated with lower 28-day mortality rates compared with bacteremia by other pathogens.

Introdução: a infecção hospitalar tem se tornado um problema de saúde pública, no Brasil e na maioria dos países do mundo, sobretudo devido ao aumento gradativo da resistência dos microrganismos aos antimicrobianos. Nos pacientes que apresentam deficiências no sistema imunológigo como os indivíduos que vivem com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou com a síndrome da imunodeficiência adquirida (aids) o quadro clínico dessas infecções pode se tornar extremamente grave, aumentando a morbimortalidade. Objetivo: determinar a prevalência de microorganismos gram-negativos em indivíduos com HIV/aids internados num hospital escola do interior paulista. Material e Método: trata-se de um estudo de corte transversal, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. No período de 01 agosto de 2011 a 28 de fevereiro de 2013, foram abordados 365 indivíduos internados em duas unidades especializadas de um hospital escola público do interior paulista, sendo a população do presente estudo composta por 220 sujeitos. Os dados sociodemográficos, clínicos e hábitos de saúde foram obtidos por meio de entrevista individual e consulta aos prontuários. Coletou-se também amostras de saliva e swab nasal nas primeiras 24 horas de internação, as quais foram processadas pelo Laboratório de Microbiologia do referido hospital. Os dados foram inicialmente digitados em planilha do Microsoft Office Excel for Windows 2011, realizada dupla digitação e validação dos dados, a fim de identificar possíveis erros de digitação. Posteriormente, a planilha definitva foi transportada para o programa Statistical Package for the Social Science (SPSS), versão 17.0 for Windows, onde foi estruturado o banco de dados e realizada análise estatística. Resultados: a prevalência de microorganismos gram negativos nos indivíduos com HIV/aids foi de 15,4% independente do sítio onde foi isolado. Pseudomonas aeruginosa foi o micoorganismo mais frequentemente isolado tanto na saliva (50%), quanto no swab nasal (37,5%), seguida por Klebsiella pneumoniae (30,7%) isolada somente na saliva. Em relação aos aspectos clínicos 29,4% dos indivíduos com amostras positivas para microorganismos gram negativos tinham carga viral acima de 1000.000 cópias,ml, CD4 menor que 200 céluas/mm3 (50%), tiveram internações prévias (52,9%), estavam em uso de antimicrobiano (64,7%), não usavam antirretrovirais (52,9%) e tinham algum procedimento invasivo no momento da coleta (67,6%). Nenhum microorganismo apresentou resistência aos antimicrobianos. Conclusão: a prevalência de microorganismos gram-negativos foi maior na saliva (11,8%) que no swab nasal (3,6%), indicando que coletar amostras de mais de um sítio pode favorecer a identificação de indivíduos colonizados e ou infectados / Introduction: the hospital infection has become a public health problem in Brazil and in most countries of the world, mainly due to the gradual increase of resistance of microorganisms to antibiotics. In patients who have deficiencies in the immune system such as individuals living with human immunodeficiency virus (HIV) or acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), the clinical picture of these infections can become very serious, increasing morbidity and mortality. Objective: to determine the prevalence of gram-negative microorganisms in individuals with HIV/AIDS hospitalized at a teaching hospital in the interior of São Paulo state. Material and Method: this is a cross-sectional study, approved by the Ethics Research Committee of the University of São Paulo at Ribeirão Preto College of Nursing. In the period from August 01, 2011 to February 28, 2013, 365 individuals hospitalized in two specialized units of a public teaching hospital in the interior of São Paulo state were approached, and the study population was comprised of 220 subjects. The sociodemographic and clinical data and health habits were obtained through individual interviews and medical records. Saliva samples and nasal swabs were collected in the first 24 hours of admission, which were processed by the Microbiology Laboratory of the hospital. The instrument variables were coded and cataloged in a dictionary (codebook). The data were initially recorded in a Microsoft Office Excel spreadsheet for Windows 2011, performed a double entry and data validation in order to identify possible typing errors. Subsequently, the final worksheet was transported to the Statistical Package for Social Science (SPSS), version 17.0 for Windows, in which database was structured and statistical analysis was performed. Results: the prevalence of gram-negative microorganisms in individuals with HIV/AIDS was 15.4% regardless of where it was isolated. Pseudomonas aeruginosa is the most frequently isolated microorganisms both in saliva (50%) and in nasal swabs (37.5%), followed by Klebsiella pneumoniae (30.7%) isolated only in saliva. In regard to clinical aspects, 29.4% of individuals with positive samples for gram-negative microorganisms had viral load above 1000,000 copies/ml, CD4 less than 200 cells/mm3 (50%), had previous hospitalizations (52.9%), were using antimicrobials (64.7%), did not use antiretroviral drugs (52.9%) and had some invasive procedure at the time of collection (67.6%). No microorganism was resistant to antimicrobials. Conclusion: the prevalence of gram-negative microorganisms was higher in saliva (11.8%) than in nasal swabs (3.6%), indicating that collecting samples from more than one location may facilitate the identification of individuals colonized and/or infected