Apesar da importância econômica e ambiental que a madeira representa como fonte natural e renovável de energia e fibras, pouco é conhecido sobre os processos celulares, moleculares e bioquímicos envolvidos com a sua formação. Usando metodologias proteômicas como 2D-PAGE e espectrometria de massas foi iniciada a análise do proteoma do caule de Eucalyptus grandis em diferentes estádios de desenvolvimento (5 meses, 3 anos e 6 anos). O presente trabalho baseou-se especificamente na idade de cinco meses. As plantas tiveram suas folhas, raízes e cascas removidas e seus caules foram macerados em almofariz com nitrogênio líquido e as proteínas extraídas pelo método de extração fenólica. As proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional em fitas IPG com gradiente de pH imobilizado linear de 4-7 na primeira dimensão e gel de poliacrilamida (12,5%) na segunda dimensão. A coloração dos géis foi realizada com coomassie G250. Foram detectados 438 spots e um total de 168 spots foram retirados do gel, digeridos com tripsina e submetidos ao sequenciamento por espectrometria de massas através do sistema LCMS/ MS. O sequenciamento por MS apresentou uma eficiência de 72,02% possibilitando a identificação de 121 spots, enquanto que 35 (20,83%) não apresentaram homologia com nenhuma base de dados. Entre as proteínas identificadas 22 foram representadas por mais de um spot, podendo indicar a ocorrência e eventos provenientes do splicing alternativo, modificações pós-traducional, variações alélicas de uma mesma proteína ou degradação da amostra. Entre os spots analisados, 22,02% estão relacionados com a produção de energia, (17,86%) metabolismo, (13,69%) processes celulares, (0,60%) transporte, (8,33%) componentes estruturais, (5,36%) metabolismo macromolecular, (4,17%) proteínas putativas, (20,83%) não apresentaram homologia com nenhuma base de dados e (7,14%) não demonstraram resultado. A comparação realizada entre o volume de 59 proteínas e os seus respectivos transcritos demonstrou que não existe correlação entre mRNA e as proteínas do caule. O método possibilitou uma rápida e precisa separação e identificação das proteínas do caule de Eucalyptus grandis que são diferencialmente expressas durante a fase de crescimento de cinco meses. / The process of wood formation is an important economical factor for the forestry industry and it is also of ecological importance, although little is known about the proteins involved in wood formation. The sequencing, identification and analysis of proteins provides such information of wood formation. Using proteomics techniques such as two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry we have started a proteomic analysis of wood formation in Eucalyptus grandis at different stages of development (5 months, 3 and 6 years old). This work presents data related to the stage of 5 months. Using high resolution 2DE with linear pH gradient ranging from 4 to 7, a total of 438 spots were detected. However, only 168 spots were analyzed by LC ESIMS/ MS and 121 were identified (72.02%) while 35 (20.83%) presented no homology in the database used. Overall, 22 proteins appeared as multiple spots and accounted for most of the proteins found in the group. This observation may reflect post-translation modification, alternative splicing events, isozyme variation, allelic variation of the same protein, but also protein degradation. Over the 168 spots analysed, (22.02%) play a role in energy, (17.86%) metabolism, (13.69%) cellular processes, (0.60%) transport, (8.33%) structural components, (5.36%) macromolecular metabolism, (4.17%) putative protein, (20.83%) no homology and (7.14%) no result. For 59 proteins, the spot volume was compared with their respective transcript with mRNAs extracted from wood forming tissue. The method provided a faster and accurate tool for separation and identify of protein which are differentially expressed under different stages of development in Eucalyptus grandis.

O Brasil é um país de vocação florestal, mantendo atualmente grandes áreas reflorestadas com Eucalyptus, cuja madeira é utilizada como matéria-prima em diversas indústrias de base florestal. A projeção é de uma crescente demanda de madeira e, em função disso, é necessário associar novas estratégias aos programas de melhoramento genético, que resultem não somente no aumento da produtividade, como também na adequação de caracteres da qualidade da madeira para um produto final. A qualidade da madeira depende de diversas propriedades do xilema secundário, tecido que constitui a madeira. O desenvolvimento de tecnologias proteômicas, que permitem analisar os genes diretamente ao nível de seus produtos, pode contribuir para o maior entendimento dos processos relacionados à formação da madeira. O objetivo principal deste trabalho foi identificar as proteínas mais abundantemente expressas na região cambial, envolvidas na formação da madeira de Eucalyptus grandis, aos 6,3 anos de idade. A região cambial foi caracterizada por células do câmbio e por células diferenciadas em floema e xilema secundários. A amostragem foi realizada por meio da abertura de painéis nas árvores, seguido da raspagem de sua casca interna e da superfície do fuste. Foram testados dois métodos de extração de proteínas, que utilizam ácido tricloroacético e fenol, respectivamente, a fim de avaliar qual deles proporciona a obtenção de extratos protéicos concentrados e livres de contaminantes. Ensaios foram realizados para ajustar o tempo e o tampão de focalização isoelétrica das proteínas. Um extrato contendo cerca de 500 μg de proteínas foi utilizado para a preparação dos géis 2D de pH 4-7. Dois tipos de coloração de géis foram avaliados. Os spots foram recortados para proceder a digestão tríptica das proteínas. A solução contendo os peptídeos de uma amostra foi analisada por espectrometria de massa. As seqüências experimentais foram contrastadas com uma base de seqüências peptídicas e um banco de ESTs espécie-específico. As imagens dos géis bidimensionais foram analisadas, com a finalidade de fazer inferências sobre o nível de expressão de cada proteína identificada na região cambial, como também correlacioná-la com a expressão de seu transcrito correspondente. O método com fenol mostrou-se o mais eficiente para extrair proteínas da região cambial. Foi observado que as proteínas foram totalmente focalizadas a 74.000 Vh. A coloração com Coomassie Brilliant Blue G-250 permitiu a revelação de um número maior de spots e mostrou-se compatível com a espectrometria de massa. A análise LC/MS/MS das amostras permitiu a identificação de 69 spots, correspondendo a 41 proteínas distintas da região cambial, sendo 34,15% delas, representadas em múltiplos spots, As proteínas identificadas exercem seu papel biológico na produção de energia (22%), em processos celulares (19,5%), como componentes estruturais (17,1%), nos metabolismos de aminoácidos (14,6%) e macromolecular (19,5%), e no transporte de moléculas (2,4%). Oito spots mostraram similaridade de seqüências em ambas bases de dados, mas nenhuma função foi atribuída a eles. A análise da correlação revelou uma tendência para um grupo restrito de proteínas, de que os transcritos que se mostraram pouco abundantes corresponderam a proteínas altamente expressas na região cambial. / Brasil is a country with forestry inclination, currently keeping large areas planted with Eucalyptus, which wood is used as raw material in several forest-based industries. The projection is an increasing demand of wood and, as a function of it, it is necessary to link new strategies to the programs of genetic improvement that result not only in the increase of the productivity, but also in the adequacy of characters of wood quality for a final product. The wood quality depends on several properties of secondary xylem, a tissue that forms the wood. The development of proteomic technologies, which permit to analyze directly the genes at their products’ level, can contribute to a better comprehension of the processes related to the wood formation. The main objective of this work was to identify the most abundant proteins expressed in the cambial region that are involved in the Eucalyptus grandis wood formation at 6.3 years of age. The cambial region was characterized by cambium cells differentiated into secondary phloem and xylem. The sampling was performed by means of opening panels in the trees, followed by rubbing their internal barks and the stem surface. Two protein extraction methods were tested. These methods use trichloroacetic acid and phenol, respectively, in order to evaluate which one proportionates the acquisition of concentrated proteic extracts and is free from contaminants. Essays were performed to adjust the time and the buffer for isoelectric focus of proteins. Extracts containing around 500 μg of protein were used to prepare 2D gels with pH ranging from 4 to 7. Two types of gel staining were evaluated. The spots were cut out in order to obtain the tripitic digestion of the proteins. The solution containing peptides from each sample was analyzed by mass spectrometry. The experimental sequences were contrasted in a peptidic sequences base and in a speciespecific ESTs. The bidimensional gels images were analyzed in order to make inferences about the level of expression of each protein identified in the cambial region, as well as to correlate them with the expression of its corresponding transcript. The method using phenol showed to be more efficiently to extract proteins from the cambial region. It was observed that the proteins were totally focused at 74,000 Vh. The staining with Coomassie Brilliant Blue G-250 allowed the revealing of a higher number of spots and showed to be compatible with mass spectrometry. The LC/MS/MS sample analyses allowed the identification of 69 spots, corresponding to 41 different proteins from the cambial region, where 34.15% of them were represented in multiple spots. The identified proteins play their biological role in the production of energy (22%), in cellular processes (19.5%), as structural components (17.1%), in metabolism of aminoacids (14.6%) and macromolecular metabolism (19.5%), and in the transportation of molecules (2.4%). Eight spots showed similarity in sequences in both databases, but no function was attributed to them. The correlation analysis revealed a tendency for a restrict group of proteins, whose transcripts showed a little abundant, corresponds to proteins highly expressed in the cambial region.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-10T15:07:06Z No. of bitstreams: 1 leandranataliadeoliveiraneves.pdf: 2553405 bytes, checksum: ca2d010014f08aa1f723b669f468fc96 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-15T18:59:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leandranataliadeoliveiraneves.pdf: 2553405 bytes, checksum: ca2d010014f08aa1f723b669f468fc96 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T18:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leandranataliadeoliveiraneves.pdf: 2553405 bytes, checksum: ca2d010014f08aa1f723b669f468fc96 (MD5) Previous issue date: 2015-04-17 / O leite é considerado um alimento rico nutricionalmente por ser fonte de proteínas, carboidrato, vitaminas e minerais. Durante o processamento térmico do leite, reações químicas podem ocorrer gerando modificações de compostos pré-existentes ou formação de novos compostos, os quais se comportam como indicadores do tratamento térmico utilizado. O monitoramento destes indicadores em leite UHT é de grande importância uma vez que permite traçar o perfil do produto e do processo, podendo sugerir intervenções tecnológicas capazes de minimizar custos de produção bem como reduzir a ocorrência de eventuais perdas nutricionais e descaracterização do produto. O presente trabalho teve como objetivo quantificar os indicadores índice de soroproteína não desnaturada – WPNI, 5-hidroximetilfurfural – HMF e lactulose em amostras de leite UHT, com teor regular e reduzido de lactose, comercializadas no mercado nacional. Metodologias analíticas para WPNI e HMF, ambos determinados por métodos espectrofotométricos, foram implantadas e os modelos estatísticos foram ajustados. Dois métodos analíticos de separação para determinação de lactulose foram desenvolvidos e validados utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção por índice de refração e eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção indireta no ultravioleta. Os resultados obtidos no teste de comparação de médias do teor de lactulose pelos métodos por HPLC e CZE indicaram não haver diferença significativa entre os métodos propostos. A média do índice de WPNI indicou que 76% das amostras em estudo são classificadas como “médio tratamento térmico”. Os índices de HMF livre e total mostraram-se capazes de discriminar amostras com teor regular e com teor reduzido de lactose. Flutuações nos índices de WPNI e HMF livre e no teor de lactulose das amostras analisadas sugeriram a ocorrência de falta de uniformidade do processamento adotado pelas indústrias nacionais processadoras de leite UHT, o que foi confirmado pelo efeito de marca sobre estes índices no produto. Verificou-se que os métodos analíticos implantados e desenvolvidos são capazes de atender à demanda de métodos de controle aptos em avaliar o processo e oferecer suporte para desenvolvimento e estudo do processamento. Os indicadores monitorados remetem a ocorrência de despadronização do perfil químico do leite UHT atualmente comercializado no mercado nacional, refletindo a necessidade de um maior controle do processamento pelas indústrias processadoras. / Milk is considered a nutritionally rich food because it is a source of protein, carbohydrate, vitamins and minerals. During milk heat treatment, chemical reactions can occur causing changes of pre-existing compounds or formation of new compounds, which can be used as indicators of heat treatment used. The monitoring of these indicators in UHT milk is very important since they allow to draw the product and process profile and can suggest technological interventions that can minimize production costs and reduce the occurrence of any nutritional losses and distortion of the product. This study aimed to quantify the indicators whey protein nitrogen index - WPNI, 5-hydroxymethylfurfural – HMF and lactulose in UHT milk samples, with regular and reduced lactose content, sold in the domestic market. Analytical methodologies for WPNI and HMF (both measured by spectrophotometric methods) were implemented and the statistical models were fitted. Two analytical methods of separation for lactulose determination were developed and validated using high performance liquid chromatography (HPLC) with detection by refractive index and capillary zone electrophoresis (CZE) with indirect UV detection. The results obtained in the mean comparison test of lactulose content by HPLC and CZE methods showed no significant difference between the proposed methods. The average WPNI index indicated that 76% of the samples studied are classified as "medium heat treatment". The contents of free and total HMF were able to discriminate samples with regular and reduced lactose content. Fluctuations in WPNI, free HMF and lactulose content of the examined samples suggested the occurrence of non-uniformity of processing adopted in processing UHT milk of national industries, which was confirmed by the effect of these indicators in the product. It was found that analytical methods studied are able to achieve the control methods demanded to evaluate the process and support the development and study of processing. The monitored indicators refer to the occurrence of lack of standardization in the chemical profile of UHT milk currently commercialized in Brazilian market, reflecting the need for greater control of processing by milk processing industries.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-20T14:21:30Z No. of bitstreams: 1 vaneidamariameurer.pdf: 2513462 bytes, checksum: e60f0acb50beb60e528dbf29fee51cad (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T15:24:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vaneidamariameurer.pdf: 2513462 bytes, checksum: e60f0acb50beb60e528dbf29fee51cad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T15:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vaneidamariameurer.pdf: 2513462 bytes, checksum: e60f0acb50beb60e528dbf29fee51cad (MD5) Previous issue date: 2014-01-31 / O leite é um alimento de grande relevância na alimentação humana. Não obstante, dos diferentes setores da indústria alimentícia, o setor de laticínios destaca-se por estar entre os mais expressivos economicamente no Brasil. O leite de vaca, o mais consumido, pode ser substituído pelo leite de cabra principalmente porque este apresenta maior digestibilidade e baixo potencial alergênico. No entanto, uma prática fraudulenta consiste na adulteração do leite caprino com leite bovino. Dentre alguns fatores que contribuem para tal, estão o menor rendimento na produção de leite de cabra, em conjunto com o preço mais baixo do leite de vaca. O presente estudo objetivou avaliar as técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de ureia (UREIA-PAGE) e eletroforese microfluídica lab-on-a-chip, a fim de caracterizar o perfil proteico do leite de cabra e vaca e estabelecer técnicas rápidas e eficientes para detecção de fraude no leite de cabra. A detecção da fraude no leite de cabra por adição do leite de vaca foi testada pelo perfil eletroforético das proteínas usando os dois métodos citados acima. Os dois métodos avaliados mostraram que a fração αS1 - caseína bovina pode ser utilizada como um marcador para detecção desta fraude. Com a técnica de UREIA-PAGE foi possível detectar a presença da αS1-caseína do leite bovino a partir de 2% de leite bovino adicionado ao leite caprino. Entretanto com a técnica lab-on-a-chip só foi possível detectar a partir de 20% de adição. Pelo método de eletroforese microfluídica foi possível visualizar o perfil proteico do leite das diferentes espécies (bovino e caprino) traçando seus respectivos perfis eletroforético, com disponibilização rápida dos resultados. O que permite uma investigação de fraude de leite para laboratórios de rotina por meio de um método rápido, já que todo o procedimento dura cerca de 4 horas e permite um grau de automação maior. Devido à necessidade de técnicas eficientes, rápidas, automatizadas para atender a demanda da indústria de laticínios e dos órgãos de fiscalização, faz-se necessário o aperfeiçoamento da técnica lab-on-a-chip com o intuito de melhorar seu desempenho e aplicabilidade, possibilitando a detecção de níveis mais baixos de fraude. / Milk is a food of great relevance in human nutrition. In addition, among the different food industries in Brazil, the dairy industry is one of the economically expressive. Cow's milk was be substituted for goat‟s milk in any situation. The goat‟s milk presents better digestibility and low allergenic potential. However, it is common adulteration of goat milk with cow‟s milk. Some factors like low income of goat milk and the lower price of cow‟s milk contribute for this kind of fraud. The present study aimed to evaluate polyacrylamide gel electrophoresis techniques in presence of urea (UREA-PAGE) and microfluidic lab–on–a–chip, in order to characterize the protein profile of milk in the different species goat and cow. In addition, establish faster and efficient techniques for fraud detection in goat‟s milk. The fraud detection in goat‟s milk by the addition of cow milk was analyzed using the electrophoretic profiles of the proteins by the polyacrylamide gel electrophoresis methods UREA–PAGE and microfluidic lab-on-a-chip electrophoresis. Both studded methods showed the αs1 – casein bovine as a marked for this fraud detection. The UREA–PAGE techniques detected the bovine‟s milk αs1- casein from 2% of cow milk added to caprine milk. However lab-on–a-chip technique detected bovine‟s milk αs1- casein from 20% of addition. The microfluidic electrophoresis in microchip allowed the separation of the milk‟s proteins from the both species tracing their respective electrophoretic profiles with fast results availability; this method has great relevance in milk‟s fraud investigations in routine labs. The use of lab-on-a-chip has resulted in the rapid procedures as the run time is about four hours. Due to the need for automated, fast and efficient techniques to attend the dairy industry and the regulatory agencies request, it‟s necessary the development of the lab-on-a–chip technique in order to improve their performance and applicability.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-27T19:14:39Z No. of bitstreams: 1 brendaleesimasporto.pdf: 3956605 bytes, checksum: 32b00948733f7848c86a90a83bbc6b81 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-13T13:05:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 brendaleesimasporto.pdf: 3956605 bytes, checksum: 32b00948733f7848c86a90a83bbc6b81 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-13T13:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 brendaleesimasporto.pdf: 3956605 bytes, checksum: 32b00948733f7848c86a90a83bbc6b81 (MD5) Previous issue date: 2011-07-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os ovos são considerados essenciais para uma dieta balanceada em função de sua composição protéica de alta qualidade, grande variedade de aminoácidos essenciais, ácidos graxos, vitaminas e minerais. A busca por alimentos de maior qualidade fez com que ovos enriquecidos com ácidos graxos poliinsaturados da família dos ômega 3 e com vitamina E passassem a ser produzidos. No entanto nenhuma diferença visual é encontrada entre ovos enriquecidos e naturais, e uma dúzia de ovos enriquecidos pode custar até 2,0 vezes o preço pago por uma dúzia de ovos naturais. Por ainda haver espaço considerável para a viabilidade de novas propostas para análise de ácidos graxos poliinsaturados em alimentos é que este trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de metodologia por eletroforese capilar capaz de diferenciar ovos enriquecidos e naturais usando o perfil de ácidos graxos ω como marcador químico. No presente trabalho foi desenvolvida metodologia de análise para a diferenciação qualitativa entre os ovos enriquecidos e naturais através do perfil de ácidos graxos ômega por eletroforese capilar com detecção direta por UV em 200 nm. O eletrólito consistiu de 12,0 mmol/L de tampão tetraborato (pH 9,2), 12,0 mmol/L de Brij 35, 17% de acetonitrila e 33% de metanol. O perfil de ácidos graxos ômega 3 foram analisados em amostras de ovos por eletroforese capilar e confirmado por espectrometria de massas com quadrupolo simples e ionização por electrospray, após preparo das amostras pelo método de Folch. Os resultados mostraram que o perfil de ácidos graxos ω analisados podem diferenciar ovos naturais de ovos enriquecidos em 10 minutos de corrida. O método desenvolvido apresenta como vantagens: curto tempo de análise, baixo custo, ausência de passos de derivatização no preparo das amostras e fácil interpretação de dados. / Eggs are considered essential feed for a balanced diet due to their high protein composition associated with a wide variety of essential amino acids, fatty acids, vitamins and minerals. In order to achieve a healthier diet, modified eggs have been produced by addition of omega 3 polyunsaturated fatty acids and vitamin E through hens’ diet changing. However no visual difference is found between enriched and natural chicken eggs, and a dozen enriched eggs can cost up to 2.0 times the price paid for a dozen natural eggs. By still having a considerable room for the viability of new proposals for analysis of polyunsaturated fatty acids in foods is that this work has as the main objective the development of a methodology by cappilary electrophoresis able to differentiate enriched and naturals eggs using the ω fatty acid profile as a chemical marker. In the present work it was developed a methodology for the analysis of qualitative differentiation between enriched and naturals eggs through omega 3 fatty acid profiles by capillary electrophoresis under direct UV detection at 200 nm. The electrolyte background consisted of 12.0 mmol/L tetraborate buffer (pH 9.2) mixed with 12.0 mmol/L Brij 35, 17% acetonitrile and 33% methanol. Omega 3 fatty acid profile in egg samples were analyzed by capillary electrophoresis system and confirmed by single-quadrupole mass spectrometry with an electrospray ionization after the preparation sample of the sample by the Folch method. The results showed that ω fatty acid profiles analyzed can differentiate naturals eggs from the and enriched eggs with time of run 10 minutes. The developed method the present as advantages short analysis time, low cost, absence of derivatization steps for sample preparation and easy data interpretation.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-02T20:06:11Z No. of bitstreams: 1 renatatakabayashisato.pdf: 571688 bytes, checksum: e73a293f3bcef45eebb1b707c7f5b2ab (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-13T13:12:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 renatatakabayashisato.pdf: 571688 bytes, checksum: e73a293f3bcef45eebb1b707c7f5b2ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-13T13:12:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renatatakabayashisato.pdf: 571688 bytes, checksum: e73a293f3bcef45eebb1b707c7f5b2ab (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As gorduras representam, aproximadamente, 33% do total dos recursos energéticos ingeridos pela população mundial, em média, diariamente. No presente trabalho, foram determinados os valores de acidez livre de óleos vegetais, através da técnica de eletroforese capilar de zona, com capilar revestido externamente com flúor-polímero (TSH), e detecção indireta por UV em 224 nm, temperatura controlada no interior do cartucho em 25ºC. As amostras foram injetadas hidrodinamicamente (12.0 mbar por 4 s) e o sistema eletroforético foi operado sob polaridade normal sob voltagem constante de + 19 kV. O eletrólito utilizado consistiu em 15 mmol L-1 de solução tampão NaH2PO4 / Na2HPO4 (pH ~ 6.86); 4,0 mmol L-1 de SDBS; 8,3 mmol L-1 de Brij 35®, 45% v/v de ACN e 2,1% de 1-octanol. Os resultados demonstraram que a eletroforese capilar de zona pode ser utilizada como metodologia alternativa nas análises de acidez livre em óleos vegetais, já que não houve diferenças significativas, em um intervalo de 95% de confiança, quando comparados com o método oficial por titulação volumétrica alcalina. As vantagens da metodologia alternativa proposta neste trabalho é a identificação individual dos ácidos graxos livres presentes, o menor volume de solventes e amostras, além da menor intervenção humana. / Fats represent, approximately, 33 % of total energy resources consumed by the world population, on average, daily. In the present study, the vegetable oils free acidity values were determined by the technique of capillary zone electrophoresis , with a capillary externally coated with fluoro - polymer ( TSH ), indirect UV detection at 224 nm and temperature controlled within the cartridge at 25 ° C. Samples were injected hydrodynamically ( 12.0 mbar for 4 s ) and the electrophoretic system was operated at normal polarity under constant voltage of + 19 kV . The electrolyte used was 15 mmol L -1 of buffer NaH2PO4 / Na2HPO4 (pH ~ 6.86 ); 4.0 mmol L- 1 SDBS ; 8.3 mmol L-1 Brij 35 ® , 45% v / v ACN and 2.1 % 1- octanol . The results showed that capillary zone electrophoresis can be used as an alternative method in the analysis of free acidity vegetable oils, since there were no significant differences in a range of 95 % confidence , when compared with the official method by alkali titration volume . The advantages of the alternative methodology proposed in this work is the identification of individual present free fatty acids, the lowest volume of solvents and samples, and the lowest human intervention .

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-03T13:51:14Z No. of bitstreams: 1 vivannazaretholiveirafernandes.pdf: 1261363 bytes, checksum: 29d944a0020a492413570231b2056b50 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-13T13:34:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vivannazaretholiveirafernandes.pdf: 1261363 bytes, checksum: 29d944a0020a492413570231b2056b50 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-13T13:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vivannazaretholiveirafernandes.pdf: 1261363 bytes, checksum: 29d944a0020a492413570231b2056b50 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Foi desenvolvida inovadora metodologia para a separação e quantificação simultânea de aspartame, ciclamato, sacarina e acesulfame-K por eletroforese capilar, com detecção direta e indireta UV, tempo de análise de aproximadamente 6 minutos e sem derivatização da amostra. Como o ciclamato possui baixa absortividade, foi utilizado um sistema de eletrólito adicionado de um cromóforo, possibilitando a detecção indireta deste analito. O comprimento de onda foi escolhido considerando-se uma absortividade intermediária entre o cromóforo do eletrólito, o aspartame, sacarina e acesulfame-K. Após teste de alguns cromóforos, o ácido benzóico foi selecionado como o mais adequado. Um ponto a ser considerado é que matrizes de alimento possuem ácido benzóico em sua constituição, sendo utilizado como conservante. Apesar dele ainda ser detectado no sistema de eletrólito e condições de análise propostos, sua quantificação não pode ser realizada, devido sua inclusão no eletrólito, demonstrando indícios de falta de ajuste do modelo linear, com 95% de confiança. A condição ótima para separação eletroforética foi obtida mediante uso de planejamento fatorial 32. A otimização consistiu de 20,0 mmol L-1 de tetraborato de sódio e 15,0 mmol L-1 de tampão Tris-ABen (pH 9,15 ± 0,03), tensão de +20 kV, injeção de 4 segundos a 50 mbar, 215 nm, utilizando levofloxacina como padrão interno. Uma amostra de preparado sólido para bebida de chá sabor limão, possuindo em sua constituição os quatro edulcorantes foi analisada, sendo o seu pré-tratamento constituído unicamente da filtração da mesma, após reconstituição, sem nenhuma derivatização. Apesar da metodologia analítica não ter sido validada, algumas figuras de mérito foram avaliados: linearidade, seletividade, limites de detecção e quantificação, precisão, recuperação e robustez. Os parâmetros avaliados demonstram um coeficiente de regressão maior que 0,98, além não apresentar falta de ajuste na faixa de concentração testada, avaliado com 95% de confiança, para todos os analitos. A seletividade foi testada mediante curva de adição de padrão, podendo-se observar um paralelismo entre os coeficientes angulares dos padrões e na amostra, indicando seletividade da metodologia. O RSD (%) para tempo de migração e área utilizando razão com padrão interno foi menor que 5% para a área e menor que 2% para o tempo de migração para os quatro analitos, considerando amostra e padrão. Os limites de detecção encontrados foram 6,8 mg L-1 para aspartame, 12 mg L-1 para ciclamato, 0,50 mg L-1 para sacarina e 3,3 mg L-1 para acesulfame-K, sendo valores mais significativos do que aqueles encontrados na literatura para determinação por CE e muito competitivos, senão melhores, que a determinação por outras técnicas. A exatidão mostrou-se dentro de limites aceitáveis, tendo os valores de recuperação no intervalo de 91,9 a 102,2%. / An innovative methodology was developed to simultaneously separate and quantify aspartame, cyclamate, saccharin and acesulfame-K through capillary electrophoresis with direct and indirect detection of UV, analysis time of roughly 6 minutes and with no sample derivatization. As the cyclamate has low absorptivity we used a system of electrolyte added to a chromophore, which allowed the indirect detection of this analyte. The wavelength was chosen taking into account an intermediary absorptivity among chromophore electrolyte, aspartame, saccharin and acesulfame-K. After testing some chromophores, the benzoic acid was selected as the most appropriate. A point to be considered is that food matrices have benzoic acid in its constitution, used as a preservative. Although it is still detected in the electrolyte system and the proposed analytical conditions, its quantification cannot be attained due to its inclusion in the electrolyte, showing signs of lack of adjustments of the linear model with 95% confidence. The ideal condition for electrophoretic separation was obtained by applying 32 factorial design. The optimization consisted of 20.0 mmol L-1 of sodium tetraborate and 15.0 mmol L-1 Tris-Aben (pH 9.15 ± 0.03), voltage of +20 kV, injection of 4 seconds at 50 mbar, 215 nm, using levofloxacin as internal standard. A sample of a solid prepared for drink lemon tea with the four sweeteners in its constitution was analyzed, and its pre-treatment consisting only of filtering the sample, after reconstitution, without any derivatization. Even though the analytical methodology was not validated, some important figures were evaluated: linearity, selectivity, limits of detection and quantification, precision, recovery and strength. The parameters assessed showed a regression coefficient greater than 0.98 and did not show lack of adjustment in the concentration range tested, evaluated as 95% granted for all analytes. Selectivity was tested through standard addition curve, which makes possible the observation of parallelism between the slopes of the patterns and the sample, indicating selectivity of the methodology. The RSD (%) for migration time and area using ratio as internal standard was less than 5% for the area and less than 2% for migration time for the four analytes, considering sample and standard. The detection limits found were 6.8 mg L-1 for aspartame, 12 mg L-1 for cyclamate, 0.50 mg L-1 for saccharin and 3.3 mg L-1 for acesulfame-K. These values are more significant than those found in the literature for determination by CE and they are very competitive, if not better, than the determination by other techniques. The accuracy was found to be within acceptable limits, and the recovery values in the range of 91.9 to 102.2%.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-03T14:31:10Z No. of bitstreams: 1 manoelaruchigabalesteros.pdf: 1664800 bytes, checksum: d111e7d7f7aea2c149294c2fa1980bd3 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-13T13:36:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 manoelaruchigabalesteros.pdf: 1664800 bytes, checksum: d111e7d7f7aea2c149294c2fa1980bd3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-13T13:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 manoelaruchigabalesteros.pdf: 1664800 bytes, checksum: d111e7d7f7aea2c149294c2fa1980bd3 (MD5) Previous issue date: 2009-04-06 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A atrazina é um herbicida muito utilizado em culturas de grande expressão econômica como o milho e a cana-de-açúcar. Entretanto, sua ampla utilização pode provocar o acúmulo deste herbicida, ou ainda dos seus derivados de degradação, em matrizes ambientais, tais como solo e água. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de metodologias para a análise de atrazina e derivados por eletroforese capilar (EC) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e aplicação destas metodologias na detecção e quantificação destes compostos na degradação da atrazina pelo fungo Pleurotus ostreatus. As melhores condições cromatográficas para análise de atrazina, simazina e propazina por CLAE foram obtidas utilizando como fase móvel ACN/H2O 30/70 (v/v%), coluna analítica C18 150 x 4,6 mm 5 µm, fluxo de 1 mL/min, temperatura de 25 °C e detecção em 221nm. Antecedendo as análises por CLAE foram realizadas extrações liquido-liquido com acetato de etila. A análise de atrazina, desetilatrazina (DEA), deisoprilatrazina (DIA), hidroxiatrazina (HA), desetildeisopropilatrazina (DEDIA), desetilhidroxiatrazina (DEHA) e deisopropilhidroxiatrazina (DIHA) foi realizada por EC em meio não aquoso. O eletrólito consistiu de Tris-HCl 100 mmol/L em ACN/MeOH 50/50 (v/v%), com comprimento total do capilar de 48,5 cm (comprimento efetivo 40 cm), 25 °C, +20 kV, 50 mbar/1s, detecção em 221 nm e tempo de análise de 9 min. Apesar de ocorrer a coeluição de três compostos nesta separação (HÁ, DEHA, DEDIA), o curto tempo de análise e uso de pequenos volume de solvente orgânico faz com que o método seja utilizado de forma qualitativa na análise de atrazina e seus produtos de degradação, indicando os possíveis compostos presentes. A análise destes compostos por CLAE foi realizada utilizando-se como fase móvel ACN/Tampão fosfato de sódio 5 mmol/L pH 7,2 em um gradiente de eluição, com um fluxo de 1 mL/min, temperatura de 25 °C, em 221 nm. Apesar do tempo de análise elevado (70 min), esta metodologia permite a quantificação de todas as triazinas estudadas. Portanto as duas técnicas desenvolvidas podem ser utilizadas em conjunto, já que a identificação dos compostos pode ser realizada por CE sem utilizar grandes volumes de solventes orgânicos em um curto intervalo de tempo, e sua quantificação pode ser realizada por CLAE. A degradação promovida por P. ostreatus num período de 15 dias, gerou majoritariamente o derivado DEA. A formação deste composto foi observada por CLAE e confirmada por CG-MS, ratificando que as metodologias desenvolvidas no presente trabalho podem ser utilizadas em matrizes aquosas complexas, apesar de possuírem LODs superiores aos determinados pela legislação. / Atrazine is an herbicide widely used on crops of major economic relevance as corn and sugar cane. The widespread use of this herbicide can cause its accumulation or contamination of environmental matrices. In addition, the degradation products of atrazine also deserve attention. This study aims to develop methodology for the analysis of atrazine and its derivatives by capillary electrophoresis (CE) and high performance liquid chromatography (HPLC). Both methodologies developed during the present work, HPLC and CE, were applied to the detection and quantification of atrazine and its degradation products after treatment using the white-rot fungus Pleurotus ostreatus. The best chromatographic conditions for atrazine, simazine and propazine analysis by HPLC were obtained using as mobile phase ACN/H2O 30/70 (v/v%), with analytical column C18 (150 X 4.6 mm 5µm), flow of 1 mL/min, temperature at 25 °C and detection at 221 nm . Liquid-liquid extractions with ethyl acetate were performed before the HPLC analyses. Analysis of atrazine, desetilatrazina (DEA), deisoprilatrazina (DIA), hidroxiatrazina (HA), desetildeisopropilatrazina (DEDIA), desetilhidroxiatrazina (DEHA) and deisopropilhidroxiatrazina (DIHA) was performed by CE in a nonaqueous medium (NACE) . The electrolyte consisted of Tris-HCl 100 mmol/L in ACN / MeOH 50/50 (v/v%) with total capillary length of 48.5 cm (effective length of 40 cm) Experimental conditions were: cartridge temperature at 25 ° C, voltage applied of +20 kV, injection of 50 mbar.1s, detection at 221 nm and the analysis time of 9 min. Despite the co-elution of three compounds (HA, DEHA, DEDIA), due to the short time of analysis and the use of small quantity of organic solvent, the method is very useful for the screening of atrazine and its degradation products. The HPLC analysis of these compounds was performed using as mobile phase ACN / sodium phosphate buffer 5 mmol/L (pH 7.2) under gradient elution mode, flow of 1 mL/min, temperature at 25 ° C and wavelength at 221 nm. Although the long time required for the analysis (70 min), the methodology allows the quantification of all triazines compounds studied. Therefore, the two methodologies developed can be used in a complementary way, since that the compounds identification can be performed by CE without using large volumes of organic solvents in a short time analysis; and their quantification can be performed by HPLC. The degradation promoted by P. ostreatus during a period of 15 days generated predominantly the DEA derivative. The degradation product obtained was detected by HPLC and confirmed by GC-MS, supporting that the methodologies developed in this work can be used in complex aqueous matrices, successfully.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-10T18:25:16Z No. of bitstreams: 1 patriciamendoncadecastro.pdf: 1709438 bytes, checksum: 8a160d714175f2a01b3cebc4f7a10f7b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-11T13:28:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 patriciamendoncadecastro.pdf: 1709438 bytes, checksum: 8a160d714175f2a01b3cebc4f7a10f7b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-11T13:28:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patriciamendoncadecastro.pdf: 1709438 bytes, checksum: 8a160d714175f2a01b3cebc4f7a10f7b (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foi desenvolvido um método alternativo para determinação do teor de trans total expresso em ácido elaídico utilizando eletroforese capilar de zona (CZE), com detecção indireta no UV em 224 nm e tempo de análise em torno de 8 minutos. O eletrólito de corrida otimizado é composto por 15,0 mmol L-1 KH2PO4 / Na2HPO4 (pH em torno de 6,8); Brij 35 8,0 mmol L-1, SDBS 4,0 mmol L-1, n-octanol 1,5% v/v, acetonitrila 45% v/v e metanol 8% v/v. A separação do par crítico C18:1 9t/C18:1 9c alcançou a linha base do eletroferograma com resolução acima do mínimo desejado de 1,50. Utilizou-se espectroscopia Raman para estudo sobre a composição do tampão fosfato utilizado no eletrólito e planejamento de experimentos 32 para determinação dos níveis ótimos de Brij 35 e n-octanol. Logo, após a otimização do sistema de eletrólito, realizou-se uma curva de calibração utilizando C15:0 como padrão interno e, após a verificar que não houve falta de ajuste no modelo proposto, o fator de resposta (Rf) foi calculado e aplicado na quantificação das amostras de gordura vegetal hidrogenada, margarina, requeijão e biscoito recheado por CE. O método otimizado por CE foi comparado com a metodologia oficial por cromatografia gasosa da American Oil Chemists’ Society (AOCS) para amostra de gordura vegetal hidrogenada. Os métodos foram comparados usando o teste t-student para amostras independentes com réplicas autênticas de seis e os resultados obtidos não apresentaram diferença significativa para o intervalo de confiança de 95% estimado. Os resultados alcançados foram satisfatórios, indicando que o método otimizado por eletroforese capilar pode ser usado para determinação do teor total de trans em diversas amostras alimentícias apresentando como vantagens: menor tempo de análise, ausência de passos de derivatização no preparo da amostra, uso de colunas não-específicas e baixo custo. / A different method for determination of total trans fatty acids expressed as elaidic acid by capillary zone electrophoresis (CZE) under indirect UV detection at 224 nm within an analysis time of 8 min was developed. The optimized running electrolyte includes 15.0 mmol L-1 KH2PO4/Na2HPO4 buffer (pH ∼ 6,8), 4.0 mmol L-1 SDBS, 8.0 mmol L-1 Brij 35, 45% v/v ACN, 8% v/v methanol and 1.5% v/v n-octanol. Baseline separation of the critical pair C18:1-9t / C18-9cis with a resolution higher than 1.5 was achieved. The optimum capillary electrophoresis (CE) conditions for the background electrolyte were established with the support of Raman spectroscopy and experiments of a 32 factorial design were used to better level of Brij 35 and noctanol determination. Following optimization electrolyte system was made calibration curve using C15:0 as the internal standard and, after certification where no lack of fit within proposed model the response factor (RF) was calculated and applied to total trans fatty acid (TTFA) analysis in a hydrogenated vegetable fat (HVF), margarine, spreadable cheese and strawberry cookies samples by CE. The CZE method was compared with the American Oil Chemists’ Society (AOCS) official method by gas chromatography (GC) to hydrogenated vegetable fat samples using independent sample t-student test for six genuine replicates and no significant difference was found within 95% confidence interval. The results obtained were satisfactory, indicating that the optimized methodology by CE can be useful for TTFA analysis in different matrix foods presenting as advantages short analysis time, no derivatization step in sample preparation, no specific separation columns and low cost.

Orientadores: Helena Teixeira Godoy, Adriana Dillenburg Meinhart / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T01:34:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamposJunior_FranciscoAlbertodeSouza_M.pdf: 1246600 bytes, checksum: b905d07826fda5d8fec16d039f87c03e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Dentre as propriedades funcionais apresentadas pelos cogumelos, destacam-se as propriedades antioxidantes. A principal classe de compostos que colaboram com a atividade antioxidante são os compostos fenólicos. Alguns trabalhos já relataram a presença de compostos fenólicos em diversas espécies de cogumelos, porém estudos que avaliam o perfil dos compostos fenólicos em cogumelos comestíveis cultivados no Brasil são muito escassos. O objetivo desse trabalho foi identificar e quantificar os compostos fenólicos presentes em 4 espécies de cogumelos comestíveis (Agaricus bisporus, Pleurotus ostreatus, Pleurotus ostreatoroseus e Lentinula edodes) produzidas no Brasil, portanto foi desenvolvida uma metodologia de análise por eletroforese capilar através da otimização univariada do pH e análise da curva de mobilidade dos compostos fenólicos. Foi possível separar 11 compostos fenólicos já relatados em cogumelos. O método utilizou os seguintes parâmetros: 175 mmol.L-1 de ácido bórico, pH 8,5, 25°C, 30 kV, capilar 50 µm x 72 cm injeção de 50 mbar durante 5 segundos e detecção em 210 nm, em um tempo de corrida de 21 minutos. Foi realizado um estudo multivariado, utilizando-se um planejamento composto central (otimizando a concentração de ácido clorídrico, tempo e temperatura de extração) para a otimização da extração e hidrólise ácida dos compostos fenólicos presentes na matriz. A condição ótima de extração e hidrólise foi obtida analisando-se 0,3 g de amostra, com 6 mL de ácido clorídrico a 2 mol.L-1, sob refluxo a 79,9°C por 30 minutos. Dentre os compostos investigados, foram identificados e quantificados os ácidos homogentísico, p-cumárico e cinâmico, com predominância do último. O teor de ácido homogentísico variou entre 169,85 e 388,6, p-coumárico entre 25,97 e 103,32 e ácido cinâmico entre 23,38 e 454,07, todos em mg.kg-1 de amostra liofilizada. Foi possível visualizar diferença no perfil dos compostos fenólicos de cogumelos de diferentes variedades. O tipo de substrato no qual os cogumelos são cultivados também foi significativo para os resultados. Da mesma forma, foi possível identificar diferenças em amostras com diferentes graus de maturação / Abstract: Among the celebrated functional properties of mushrooms, it calls the attention their antioxidant properties. Antioxidant compounds of the mushrooms are mailing the phenolic compounds. Some studies have reported the presence of phenolic compounds in several species of mushrooms, but studies that evaluate the phenolic content in edible mushrooms grown in Brazil are scarce. The aim of this study was to identify and measure phenolic compounds present in four species of edible mushrooms (Agaricus bisporus, Pleurotus ostreatus, Lentinula edodes and Pleurotus ostreatoroseus) cultivated in Brazil. A methodology of analysis was developed using capillary electrophoresis with pH univariate optimization and analysis of the mobility curve of phenolic compounds, separating 11 phenolic compounds already described in the literature. The following conditions were determinated: 175 mmol.L-1 of boric acid, pH 8.5, 25°C, 30 kV, capillary of 50 µm x 72 with an injection of 50 mbar for 5 seconds and detection at 210nm, at a running time of 21 minutes. A multivariate study was conducted for the optimization of extraction and acid hydrolysis of phenolic compounds present in pattern. It was used a central composite design (optimizing the concentration of hydrochloric acid and extraction time and temperature). It was determined that the optimum condition for extraction and hydrolysis was samples of 0.3 g, 6 mL of hydrochloric acid at 2 mol.l-1 under reflux at 79.9°C for 30 minutes. Among other compounds investigated, homogentisic, p-coumaric and cinnamic acids were identified and quantified, with predominance of the last one. Homogentisic acid content varied from 169.85 to 388.6; p-coumaric acid from 25.97 to 103.32 and cinnamic acid from 23.38 to 454.07, in mg.kg-1 of lyophilized sample. Differences in phenolic content were observed for different varieties of mushrooms, type of substrate on which the mushrooms were grown and stage of maturity / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos