A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença genética recessiva e hereditária, ligada ao cromossomo X, caracterizada pela ausência ou insuficiência da proteína distrofina no sarcolema das fibras musculares. É uma doença muscular progressiva, que afeta um em cada 3.500 meninos. Atualmente, os cães da raça Golden Retriever, portadores da distrofia muscular do Golden Retriever (GRMD), que exibem mudanças musculares, patogenia, bem como o fenótipo, comparáveis aos vistos nos casos de DMD, vêm sendo considerados o melhor modelo animal para o estudo da DMD. Nos GRMDs a fraqueza muscular inicia-se a partir do segundo mês de vida e é progressiva, portanto, a expectativa de vida destes cães é muito reduzida. Histologicamente, os músculos mostram necrose, fibrose e regeneração. As manifestações patológicas da GRMD já se iniciam na vida intra-uterina com o desenvolvimento de lesões nos músculos da língua. A hipertrofia da língua está associada com disfunção da faringe e do esôfago, o que resulta em disfagia,regurgitação e sialorréia. O objetivo desse estudo foi avaliar no modelo animal, utilizando cães golden retrievers normais e afetados pela distrofia muscular de duchenne, a proteína na urina e o peso molecular das proteínas urinárias, além de acompanhar a bioquímica sérica. Durante quatro meses seis cães machos com distrofia muscular e idade entre dois e seis anos tiveram amostras de urina coletadas a cada duas semanas e amostras de sangue coletadas uma vez por mês, e três cães normais foram avaliados para estabelecer uma comparação. Nas amostras sanguíneas foram realizados exames para avaliar a função renal e a urina foi usada para a mensuração de proteína, creatinina e a realização da eletroforese. Não foi encontrado indício de lesão renal nos exames realizados nas amostras de sangue e também na relação proteína:creatinina nas amostras de urina. Na análise das eletroforeses, foi encontrado diferenças na quantidade de bandas protéicas apresentadas entre os animais normais e os cães com distrofia muscular. Os cães com distrofia apresentam uma maior distribuição de bandas de alto peso molecular que não são encontradas nos cães normais, além de terem ainda uma maior quantidade de proteínas de baixo peso molecular. Apesar de se manterem dentro dos parâmetros estabelecidos para lesão renal, os cães com distrofia, tem bandas protéicas que não são vistas em animais normais e que mantém a integridade do parênquima renal. / Duchennes Muscular Dystrophy (DMD) is a lethal childhood disease, a X-linked recessive disorder, caused by mutations of the dystrophyn gene, a protein that has a vital role in maintaining muscle structure and function. DMD is a progressive muscular disease, which affects 1:3500 born boys. At this moment, the dogs with Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD), are the best animal model to study DMD. GRMD dog exhibits muscle changes, pathogenesis and phenotype comparable with the DMD boys. In GRMDs, the muscular weakness beginning with 60 days of life and this is progressive. Histologically, the muscles show necrosis, fibrosis, degeneration and regeneration. The pathogenesis manifests in utero with the development of lingual muscle lesions. The tongue hypertrophy is associated with pharyngeal and esophageal dysfunction, and results in dysphagia, regurgitation and drooling. The aim of this research was investigates in normal dogs and in dogs affected by the Duchene muscular dystrophy the protein in the total urinary proteins and their separation with SDS-PAGE. During four months, six male dogs between two and six years were evaluated. The blood was examined once a month and the urine twice a month, three normal dogs were examined to establish a comparison between both. In blood samples were carried out tests to evaluate renal function and urine was used for the measurement of protein, creatinine and for electrophoresis. We found no evidence of kidney damage in tests performed on blood samples and also in the protein: creatinine ratio in urine samples. In the analysis of electrophoresis, we found differences in the amount of protein bands presented between normal dogs and dogs with muscular dystrophy. GRMD dogs have a wider distribution of bands with high molecular weight, which are not found in normal dogs. In addition they have a greater amount of protein with low molecular weight. While staying within the parameters established for renal injury, the dogs with dystrophy, has protein bands not seen in normal animals that maintains the integrity of the renal parenchyma.

Multiple myeloma (MM) is an incurable progressive hematologic malignancy with heterogeneous evolution. It is a disease characterized by abnormal clonal proliferation of plasma cells in the bone marrow producing monoclonal immunoglobulins and causing a number of organ dysfunctions. Most patients relapse after treatment. Therefore, the use of methods of analysis of serum and urinary samples in order to detect as early as possible the presence of monoclonal immunoglobulins, before the occurrence of relapses, may aid in the treatment of patients with MM, improving its quality and prolonging survival. In this study we compared the effectiveness of the techniques of immunofixation (IF) and electrophoresis (EP) in the detection of MM relapses. For this, 52 patients under treatment in the University Hospital of Santa Maria (HUSM) were monitored, being detected the relapse of the disease in nine of these patients. A retrospective analysis of serum proteins of the nine patients, between January 2012 and July 2014, showed that IF was more effective than EP in early detection of relapse, regardless of the present class of immunoglobulins. The precocity of IF in relation to EP in detecting MM relapses in the nine patients studied, ranged from 2.0 to 18.8 months, with a mean of 6.6 months. Thus, we suggest the implementation of IF in the Clinical Analysis Laboratory (CAL) of HUSM to help onco-hematology physicians in the diagnosis and supportive care for patients with MM. / O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica progressiva, com evolução heterogênea e ainda incurável. É uma doença caracterizada pela proliferação clonal anormal de plasmócitos na medula óssea produzindo imunoglobulinas monoclonais e ocasionando uma série de disfunções orgânicas. A maioria dos pacientes recidivam após o tratamento. Portanto, a utilização de métodos de análise de amostras séricas e urinárias, que permitam detectar o mais precocemente possível a presença de imunoglobulinas monoclonais, antes da ocorrência das recidivas, pode auxiliar no tratamento de pacientes com MM, melhorando a qualidade e ampliando o tempo de sobrevida dos mesmos. No presente estudo foram comparadas as técnicas de imunofixação (IF) e eletroforese (EF) quanto a sua eficácia na detecção das recidivas do MM. Para isso, foram monitorados 52 pacientes em tratamento junto ao Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM), sendo detectada a recidiva da doença em nove destes pacientes. A análise retrospectiva de proteínas séricas dos nove pacientes, no período entre janeiro de 2012 e julho de 2014, mostrou que a IF foi mais eficaz do que a EF em detectar precocemente as recidivas, independentemente da classe de imunoglobulinas presente. Nos nove pacientes recidivados, a precocidade da IF, em relação à EF, na detecção das recidivas do MM variou de 2,0 a 18,8 meses, com um tempo médio de 6,6 meses.

O líquido folicular é o microambiente do oócito durante sua maturação in vivo que é, em parte constituído por exsudato do soro sanguíneo e por substâncias produzidas localmente, que estão relacionados com a atividade metabólica das células ovarianas. Tais substâncias podem ser essenciais para a proliferação e diferenciação das células somáticas bem como na maturação e posterior fertilização de um oócito competente. A busca por biomarcadores capazes de predizer a saúde de um folículo ou a capacidade do oócito em se tornar um embrião saudável é objeto de estudo na medicina reprodutiva humana e veterinária. Para tanto é essencial o conhecimento a nível molecular dos constituintes do liquido folicular e suas funções. O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil proteico do líquido folicular de éguas submetidas à indução de ovulação, com dois diferentes protocolos usuais na prática clínica, utilizando eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Para tanto 19 amostras de liquido folicular de éguas que tiveram sua ovulação induzida por dois diferentes protocolos (1000UI hCG IV, Grupo H, ou 1000UI hCG IV + 1,5mg de acetato de deslorelina IM, Grupo H + G) foram submetidos a eletroforese 2D e posterior análise dos géis no PDQuest. Os valores de proteína total foram significativamente diferente nos Grupo H e Grupo H+G, 63,97 ± 6,97 e 73,07 ± 6,42, respectivamente. O número máximo de spots em um mesmo gel foi de 157 e o mínimo de 34, com média de 90 spots para o Grupo H e 83 spots para o Grupo H+G. Os 19 géis foram avaliados e a porcentagem máxima de spots relacionados foi de 52% e a mínima de 0%. Com média de 37,8% de similaridade entre spots para o Grupo H e 22% para o Grupo H+G. Estes resultados são de grande importância devido à escassez de trabalhos com proteômica de liquido folicular de éguas induzidas a ovulação e demonstram que a associação entre hCG e acetato de deslorelina aumenta a concentração de proteínas no líquido folicular em folículos pré-ovulatórios (>35 mm). / Follicular fluid is the oocyte microenvironment during its in vivo maturation. It is partly composed by blood serum exudate, and also by locally produced substances, related to ovarian cells metabolic activity. These substances may be essential for somatic cells proliferation and differentiation, as well as on the oocyte maturation and fertilization. The search for biomarkers able to predict oocyte ability to grow into a healthy embryo are targets on human and veterinary reproductive medicine. It is essential to know the components of follicular fluid and their functions. The aim of the present study was to evaluate protein profile of the follicular fluid in mares with inducted ovulation, in two different protocols, using 2D electrophoresis in polyacrylamide gel. 19 follicular fluid samples from mares in which ovulation induction was performed with two different protocols (1000UI hCG IV or 1000UI hCG IV + 1,5mg deslorelin acetate IM), submitted to 2D electrophoresis, and gel analysis on PDQuest. Total protein values were significantly different in Group H and Group H+G, 63,97 ± 6,97 and 73,07 ± 6,42, respectively. The highest number of spots on a same gel was 157 and the minimum was 34, with a mean of 90 spots to Group H and 83 spots for Group H+G. All of the19 gels were evaluated according to MasterGel and the highest percent of related spots was 52% and the lowest, 0%, with mean similarity between spots 37,8% to Group H and 22% to Group H+G. These results are of great importance, due to lack of works on follicular fluid proteomics using fluid from mares with induced ovulation, and demonstrate that the association hCG + deslorelin acetate increase proteins concentration on pre-ovulatory follicles fluid.

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:24:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabetta_CarmenSilvia_M.pdf: 642277 bytes, checksum: 9c3fa4d0b21882840d4d106d571f5952 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As hemoglobinopatias constituem o distúrbio genético de maior prevalência na raça humana, sendo a Doença Falciforme a mais freqüente dentre as hemoglobinopatias chegando a atingir 1 a cada 500 indivíduos da raça negra. No Brasil estima-se a presença de 6.000.000 de portadores para esta doença. Justificativa: Com a triagem neonatal podemos avaliar a freqüência real dessas alterações hemoglobínicas. Objetivos: Verificar a freqüência gênica das hemoglobinopatias na região metropolitana de Campinas diagnosticada pela triagem neonatal. Casuística: Os resultados de 12 anos de trabalho foram obtidos da triagem neonatal para hemoglobinopatias, no período entre 28 de agosto de 1992 a 31 de dezembro de 2004. Materiais e Métodos: A triagem para hemoglobinopatias foi realizada inicialmente pela técnica de eletroforese em acetato de celulose em amostras de sangue obtidas do cordão umbilical no momento do nascimento. Posteriormente, esta técnica foi substituída pela técnica de focalização isoelétrica em gel de agarose, e as amostras de sangue passaram a ser coletadas em papel filtro da punção plantar da criança após 48 horas de vida. Resultados: Foram analisadas 433.306 amostras de recém nascidos no período de 28 de agosto de 1992 a 31 de dezembro de 2004, 128 (0,029%) doentes falciformes foram detectados e inseridos no Programa de Atenção ao Doente Falcêmico do Centro Infantil Boldrini. Em 7.494 neonatos foi identificado o traço falciforme, o que corresponde à freqüência de 1,73% na população estudada. Já o portador de traço C foi encontrado a freqüência de 0,53% / Abstract: The hemoglobinopathies are the genetic pathology of higher prevalence in the human race, and among them the most frequent is the Sickle Cell Disease, reaching frequency of at least 1 in 500 individuals of the black race. In Brazil there are the presence of 6.000.000 carriers for this disease. With the neonatal screening, we can evaluate the real frequency of hemoglobin alterations. We obtain the results of 12 years of work, from the neonatal screening for hemoglobinopathies, in the period between August 28, 1992 and December 31, 2004. Initially, the screening for hemoglobinopathies was carried by the electrophoresis in cellulose acetate in blood samples from the umbilical cord at birth. More recently, this technique was replaced by isoelectric focusing on agarose gel, in blood samples collected in filter paper by hell pick in children after 48 hours of life. We screened the 433,306 newborn samples in the study period and 128 patients with sickle cell disease were identified and refered to Sickle Cell Disease Attention Program. In 7.494 newborn the sickle trait was identified, corresponding to 1,73% incidence. In addition, the C trait carrier was found, corresponding to 0,53% incidences / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Ana Valéria Colnaghi Simionato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-24T11:07:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Buzatto_AdrianaZardini_M.pdf: 6706551 bytes, checksum: 371c3400224fcd4031972f241185d555 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O câncer está entre as maiores causas de óbitos no mundo, porém, se a enfermidade for detectada no início, grande parte dos casos pode atingir a cura. Os nucleosídeos são moléculas originadas da degradação do RNA e suas concentrações em fluidos biológicos são alteradas na presença de tumores devido à maior taxa de replicação celular, portanto são potenciais biomarcadores tumorais. A investigação do perfil de tais metabólitos pode auxiliar no diagnóstico e no tratamento do câncer. Neste trabalho, um novo método para a análise de nucleosídeos em soro sanguíneo por eletroforese capilar (CE-UV) no modo cromatografia micelar eletrocinética capilar (MECK) foi desenvolvido e validado. O surfactante catiônico brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) foi empregado, com consequente inversão do fluxo eletrosmótico. Os analitos foram extraídos da matriz de soro sanguíneo através de extração em fase sólida (SPE) e um amplo estudo sobre estratégias de pré-concentração foi realizado para obtenção de limites de quantificação mais baixos e adequados. Sete padrões de nucleosídeos mais o padrão interno foram separados em c.a. 25 min sob as condições de análise otimizadas, i.e. eletrólito de corrida composto por ácido bórico 30 mmol/L, CTAB 50 mmol/L e metanol 10% (v/v) em pH 9,90; tensão de -10 kV; temperatura de 20°C; injeção hidrodinâmica a 50 mbar por 120 s seguida por aplicação 25 kV entre vials de eletrólito por 15 s; e capilar de sílica fundida com 50 µm de diâmetro interno e 56 cm de comprimento efetivo. Foram atingidas eficiências entre 4,3 ? 104 e 1,0 ? 105 e resolução mínima de 1,5. A metodologia foi validada em um pool de soro sanguíneo de indivíduos sadios e foram obtidos limites de quantificação entre 1,0 e 4,0 µmol/L, coeficientes de correlação linear entre 0,9801 e 0,9969 e precisões e exatidões menores que 20%. O método foi aplicado a amostras de 60 indivíduos sadios e 66 portadores de câncer de próstata e um estudo quimiométrico foi realizado para avaliação da potencialidade dos nucleosídeos como biomarcadores tumorais, com obtenção de especificidade acima de 90%. Tal metodologia, portanto, pode ser empregada em conjunto com as já bem estabelecidas para o diagnóstico do câncer de próstata / Abstract: Cancer is amongst the major causes of death worldwide, but, if the disease is detected early, most cases can be cured. Nucleosides are molecules originated from RNA degradation and their concentrations in biological fluids are altered during tumor development due to a higher rate of cell replication; therefore, they are putative tumor biomarkers. The investigation of the profile of such metabolites may aid in the diagnosis and treatment of cancer. In this work, a novel method for the analysis of nucleosides in blood serum by capillary electrophoresis (CE-UV) under micellar electrokinetic capillary chromatography (MECK) mode was developed and validated. The cationic surfactant cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB) was employed, with consequent reversal of the electrosmotic flow. The analytes were extracted from blood serum samples by solid phase extraction (SPE) and a wide study on pre-concentration strategies was accomplished in order to obtain lower and more adequate limits of quantification. Seven nucleoside standards plus the internal standard were separated within c.a. 25 min under the optimized conditions, i.e. electrolyte composed by 30 mmol/L boric acid, 50 mmol/L CTAB and 10% methanol (v/v) with pH 9,90; voltage of -10 kV; temperature of 20°C; hydrodynamic injection under 50 mbar for 120 s followed by 25 kV for 15 s between electrolyte vials; and fused silica capillary with 50 µm internal diameter and 56 cm of effective length. Efficiencies between 4.3 ? 104 and 1.0 ? 105 and a minimum resolution of 1.5 were achieved. The methodology was validated in a pool of blood serum samples from healthy individuals and limits of quantification between 1,0 and 4,0 µmol/L were obtained, as well as linear correlation coefficients between 0,9801 and 0,9969 and precision and accuracy lower than 20%. The method was applied to samples from 60 healthy individuals and 66 prostate cancer patients and a chemometric study was employed in order to evaluate the potentiality of the nucleosides as tumor biomarkers, with specificity higher than 90%. Therefore, this methodology may be applied in conjunction with those already established for prostate cancer diagnosis / Mestrado / Quimica Analitica / Mestra em Química

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T10:08:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_Sergiode_M.pdf: 2918078 bytes, checksum: aeeeeec5bff54c7dcfc9509300308c5e (MD5) Previous issue date: 1994 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

O Brasil é o maior produtor mundial de feijão com produção média anual de 3,5 milhões de toneladas, entretanto, um dos maiores problemas enfrentados por essa cultura é o déficit hídrico, que leva a uma redução considerável em seu rendimento. Dessa forma, a identificação de genes que controlam os mecanismos de defesa e adaptação do feijoeiro à falta de água durante o seu desenvolvimento é de grande utilidade. E, como a tolerância à seca é um caráter multigênico, genótipos com diferentes graus de tolerância apresentam expressão gênica diferencial, com ativação e/ou repressão de determinados genes. Diante disso, esse trabalho teve como objetivos: (i) identificar genes diferencialmente expressos em dois genótipos de feijoeiro comum, sendo um tolerante (BAT 477) e o outro suscetível (IACCarioca 80SH) à seca; (ii) verificar a expressão gênica espacial (em raízes, caules e folhas) e temporal (cinco níveis crescentes de déficit hídrico - 24 h, 48 h, 72 h, 96 h e 120 h de exposição ao estresse) por meio de RT-qPCR; (iii) predizer a função dos genes identificados, com base nos genes ortólogos de Arabidopsis thaliana, usando dados públicos de microarranjo disponíveis na plataforma Genevestigator. Para atingir esses objetivos, foi conduzido um experimento em casa-de-vegetação, sendo induzido o déficit hídrico, por meio da suspensão da irrigação, quando as plantas atingiram o estádio fenológico R5, mantendo sob suprimento hídrico adequado as plantas-controle. Foi então utilizada a técnica de cDNA-AFLP para isolar os transcritos diferencialmente expressos entre os dois genótipos, sob seca, a qual aliada ao sequenciamento possibilitou a identificação e anotação de 45 transcritos, sendo 21 exclusivamente expressos no genótipo tolerante e 24 no genótipo suscetível. Dentre os transcritos identificados no genótipo tolerante, podem ser listados pelo menos 11, com potencial de serem usados para transformação genética (chlorophyll A-B binding protein, HSP40, HSP70, glycosyl hydrolase, serine/threonine protein kinase, trehalose-6-phosphate synthase, E3 ubiquitin ligase, fructose biphosphate aldolase, mediator complex subunit 13, aquaporin nodulin MTN-3-related e TCP transcription factor), e no genótipo suscetível, podem ser listados nove (coatomer protein complex, monoamine-oxidase A repressor R1, synaptobrevin, haloacid dehalogenase-like hydrolase, ADP-ribosylation factor, mTERF, serine protease S1C HtrA-related, legume lectin e SWI/SNF-related chromatin binding). Na análise de expressão gênica espacial e temporal, os transcritos mais promissores para uso em trabalhos futuros de transformação genética foram: aquaporin nodulin MTN3, E3 ubiquitin ligase, serine/threonine protein kinase, glycosyl hydrolase e HSP 70 protein, uma vez que tiveram uma expressão bastante pronunciada no genótipo tolerante. Através das análises in silico, baseadas nos genes ortólogos de A. thaliana, foram descobertos processos e vias metabólicas que podem estar envolvidos na resposta do feijoeiro comum ao déficit hídrico. Além disso, foram identificados genes associados com a tolerância à seca, corroborando os dados experimentais. Sendo assim, os resultados obtidos nesse trabalho fornecem o entendimento necessário ao desenvolvimento de ferramentas moleculares (marcadores para genes diferencialmente regulados) para serem utilizados em programas de melhoramento, bem como para informação genética básica na anotação funcional do genoma do feijoeiro e também para utilização desses genes candidatos em trabalhos de transformação genética para obtenção de plantas mais tolerantes à seca. / Brazil is the largest producer of common beans, with average annual production of 3.5 million tonnes; however, one of the biggest problems faced by this crop is drought, which leads to a considerable reduction in their yield. Thus, the identification of genes that control the defense mechanisms and adaptation of common bean to drought during its development is very useful. Drought tolerance is a multigenic character, so genotypes with different degrees of water deficit tolerance exhibit differential gene expression, with activation and/or repression of certain genes. Therefore, this study aimed to: (i) identify differentially expressed genes in two common bean genotypes, one tolerant (BAT 477) and other susceptible (IAC-Carioca 80SH) to drought, (ii) verify the spatial (root, stem and leaves) and temporal (five increasing levels of water deficit - 24 h, 48 h, 72 h, 96 h and 120 h of stress exposition) gene expression by RTqPCR (iii) predict the genes function, based on Arabidopsis thaliana orthologous genes, using available data in the public microarray platform Genevestigator. To achieve these objectives, an experiment was conducted in a green house, being induced water deficit, by withholding water when the plants reached growth stage R5, maintaining adequate water supply under the control plants. To isolate transcripts differentially expressed between the two genotypes under drought was used the cDNA-AFLP technique, which coupled with sequencing enabled the identification and annotation of 45 transcripts, 21 exclusively expressed in the tolerant genotype and 24 in the susceptible one. Among the transcripts identified in the tolerant genotype, may be listed at least 11, with potential to be used in genetic transformation (chlorophyll A-B binding protein, HSP40, HSP70, glycosyl hydrolase, serine/threonine protein kinase, trehalose-6-phosphate synthase, E3 ubiquitin ligase, fructose biphosphate aldolase, mediator complex subunit 13, aquaporin nodulin MTN-3-related and TCP transcription factor), and in the susceptible genotype, can be listed nine (coatomer protein complex, monoamine-oxidase A repressor R1, synaptobrevin, haloacid dehalogenase-like hydrolase, ADP-ribosylation factor, mTERF, serine protease S1C HtrA-related, legume lectin and SWI/SNF-related chromatin binding). In the spatial and temporal gene expression analysis, the transcripts that stood out for use in genetic transformation future studies were: aquaporin nodulin MTN3, E3 ubiquitin ligase, serine/threonine protein kinase, glycosyl hydrolase and HSP 70 protein, since it had an expression quite pronounced in the tolerant genotype. Through the in silico analysis, based on orthologous genes of A. thaliana, was discovered processes and metabolic pathways that may be involved in the common bean response to drought. In addition, we identified genes associated with drought tolerance, corroborating the experimental data. Thus, the present results provide the necessary understanding to develop molecular tools (markers for differentially regulated genes) to be used in breeding programs, as well as basic genetic information in the common bean functional genome annotation and also to use these candidate genes for genetic transformation to obtain drought-tolerant plants.

Orientador: Gustavo Henrique Ribeiro da Silva / Banca: Jandira Liria B. Talamoni / Banca: Eduardo Luiz de Oliveira / Resumo: Esta pessoa avaliou o desempenho de um sistema que combinou os processos anaeróbio e aeróbio para o tratamento de esgoto sanitário de baixa carga orgânica, utilizando uma nova configuração de reator compartilhamento anaeróbio/aeróbio, operado sob diferentes Tempos de Detenção Hidráulica (TDHA). A combinação dos processos anaeróbio e aeróbio visa aproveitar as vantagens de cada um, minimizando possíveis aspectos negativos, já a configuração em compartilhamento visa à implantação do sistema em pequenas áreas urbanas e rurais. Foi utilizado um reator compartimentado construído com tubulação de Policloreto de vinila (PVC), composto por quatro câmaras, sendo três anaeróbias e uma aeróbia, sendo que a esta última (câmara aeróbia) foi adicionada uma camada constituída por aneis de bambu, além do fornecimento de ar por meio de um compressor e difusores de ar microporosos. O desempenho do sistema foi avaliado em quatro diferentes TDHs (33; 22; 16,5 e 8,25 horas para o sistema completo), aqui caracaterizado como fases, por meio de análises físico-químicas, bacteriológicas e microbiológicas. A eficiência média de remoção de matéria orgânica em temos de Demanda Química de Oxigênio chegou a 77% e a maior eficiência de remoção foi obtida com TDH de 22 horas (79%). Em termos de Demanda Bioquímica de Oxigênio, a eficiência média de remoção foi de 70%. A eficiência de remoção de Sólidos em Suspensão esteve em torno de 90%. o reator avaliado apresentou estabilidade operacional, alta remoção de matéria orgânica, sólidos em suspensão e com relação à remoção de Nitrogênio, o RCAA, não atingiu os padrões exigidos pela Legislação Federal no que diz respeito à remoção de N-Amoniacal, porém as baixas concentrações de Nitrato e Nitrito ocorridas na ultima fase de monitoramento, podem inferir a possibilidade de remoção de Nitrogênio pela desnitrificação, o que pode ser promissor na... / Abstract: This research evaluated the performance of a system that combined anaerobic and aerobic processes, for the treatment of low strength sanitary sewage using a new configuration of anaerobic/aerobic baffled reactor, which operated under different hydraulic retention periods (HRP). The combination of the anaerobic/aerobic processes aimed to take the maximal advantages of each, minimizing the negative aspects, and the configuration through clambers aimed to built the system in small urban and rural areas. The baffled reactor was built using Polyvinyl Chloride (PVC) and it was composed by four chambers (three anaerobics and one aerobic). In the aerobic chamber was added a bamboo ring layer, with constant air supply, provided by an air compressor and diffuser. The system's performance was evaluated under four different HRPs (33; 22; 16,5 and 8,25 hours for the complete system), divided in Phases. Regarding the organic matter average removal percentages, in terms of Chemical Oxygen Demand, the reactor reached a average removal of 77% and the highest removal percentage was obtained with a HRP of 22 hours (79%). The Biochemical Oxignen Demand average percentage was 70% and the Total Suspended Solids was 90%. The reactor in question showed operation stability, effective organic matter and optimal solids removal. Regarding the Nitrogen removal, the reactor did not reached the standards required by the Federal Legislation. However the low Nitrate and Nitrite concentrations occurred in the last phase of monitoring, which may infer the possibility of nitrogen removal, in the ammonia form, through desnitrification. This may be promising to Ammonia Nitrogen removal if an extra anaerobic chamber is installed, after the aerobic chamber. Regarding the microorganism community evaluated through molecular biology techniques (PCR and DGGE), it was observed a big diversity settlement of the Bacteria Domain communities, having the inoculum a considerable influence... / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Maria Angélica Dias / Banca: Elzylene Lega Palazzo / Banca: Alessandra Kataoka / Resumo: O linfoma é o tumor de tecido hemolinfopoiético mais comum nos cães e um dos tumores malignos de maior ocorrência na referida espécie. Um importante complemento ao seu diagnóstico é a investigação imunofenotípica da subpopulação de linfócitos envolvida e caracterização do subestádio do tumor, estabelecida pela Organização Mundial de Saúde (OMS). Adicionalmente a avaliação das proteínas séricas em cães com neoplasias, poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Inflamações, infecções, doenças imunológicas e neoplasias, podem estimular a resposta de fase aguda (RFA), que inclui alterações nas concentrações de determinadas proteínas, chamadas proteínas de fase aguda (PFA). A avaliação das PFA em cães com linfoma poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Este ensaio foi concebido para avaliar as proteínas séricas totais e suas frações, através da técnica de SDS-PAGE, correlacionando-as aos fatores prognósticos do linfoma canino, tais como imunofenotipagem dos linfócitos, resposta ao tratamento e estadiamento clínico da doença. Para tanto, foram avaliados 30 cães, machos ou fêmeas, sendo 10 hígidos e 20 acometidos por linfoma multicêntrico, atendidos junto ao Hospital Veterinário "Governador Laudo Natel" da FCAV/UNESP, Campus de Jaboticabal/SP. Os animais foram distribuídos em três grupos, sendo um grupo controle (GC) constituído de cães hígidos (n=10), um grupo de cães acometidos por linfoma B (GLB) (n=12) e um grupo de cães acometidos por linfoma T (GLT) (n=8). Os animais foram avaliados em três diferentes momentos: M0 (diagnóstico), M5 (5ª semana de quimioterapia) e MR (recidiva da doença). As proteínas séricas totais e suas frações não apresentaram correlação com a imunofenotipagem, nem com a resposta ao tratamento, nos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lymphoma is the tumor of hematolymphopoietic tissue most common in dogs and one of the most frequent malignant tumors in that specie. An important adjunct in diagnosis is to investigate the subpopulation involved and the immunophenotypic characterization of the tumor subtype stated by the World Health Organization (WHO). In addition, the valuation of serum proteins in dogs with cancer, could aid in the diagnosis, prognosis and monitoring of disease. Inflammations, infections, autoimmune diseases and cancers, can stimulate acute phase response, including abnormal levels of certain proteins called acute phase proteins (APP). This trial was designed to evaluate the serum total protein and its fractions by SDS-PAGE technique, and relate if to prognostic factors in canine lymphoma, such as immunophenotyping of lymphocyte, clinical stage of disease and response to treatment. Therefore, we evaluated 30 dogs, males or females, being 10 healthy and 20 affected by multicentric lymphoma, treated with the Veterinary Hospital "Governor Laudo Natel", FCAV / UNESP, Jaboticabal / SP. The animals were divided into three groups, one control group (GC) formed by healthy dogs (n = 10), a group of dogs with B lymphoma (GLB) (n = 12) and a group of dogs with T lymphoma (GLT) (n = 8). The animals were evaluated at three different moments: M0 (at diagnosis), M5 (5th week of chemotherapy) and MR (disease recurrence). Serum total proteins and its fractions did not correlate with immunophenotype, or the response to treatment in dogs with lymphoma. Albumin correlated with staging and clinical substaging lymphoma. Some APP were more elevated in the GLB and others in the GLT, therefore these proteins showed significant... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Ana Paula Ulian de Araujo / Banca: Julio Cesar Borges / Resumo: Trabalhos anteriores realizados pelo nosso grupo levaram à identificação da proteína RVB-1 de Neurospora crassa como capaz de se ligar a um fragmento de DNA contendo o motif STRE (Stress Responsive Element). Este elemento de DNA, em Saccharomyces cerevisiae, é descrito estar presente na região promotora de genes responsivos a estresse, incluindo o estresse térmico. Uma busca nos bancos de dados de proteínas mostrou que a RVB-1 apresenta homologia estrutural à proteína RuvBL1 de humanos. Além disso, esta proteína é descrita possuir uma proteína paráloga, RuvBL2 ou Rvb2 de humano e S. cerevisiae, respectivamente, cuja proteína ortóloga em N. crassa foi denominada RVB-2. As proteínas RuvBLs foram encontradas estarem associadas a vários processos celulares, muito provavelmente devido as suas capacidades de formar grandes complexos proteicos e possuírem atividade ATPásica. Neste trabalho, estas proteínas foram parcialmente caracterizadas do ponto de vista funcional, bioquímico e biofísico. Os resultados obtidos por microscopia de fluorescência mostraram que ambas apresentam localização nuclear quando o fungo foi exposto a estresse térmico. A análise da expressão da proteína RVB-V5 mostrou estar aumentada, nessa mesma condição ambiental, quando analisada por Western blot. As duas proteínas foram produzidas na forma recombinante em Escherichia coli, tanto isoladamente quanto juntas, e a análise da expressão mostrou alta estabilidade em solução quando ambas foram produzidas em uma me... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Previous work by our group identified the Neurospora crassa RVB - 1 protein as able of binding to a DNA fragment containing the Stress Responsive Element (STRE). In Saccharomyces cerevisiae, this element is present in the promoter region of genes responsive to stress, including heat stress. RVB - 1 shows structural homology to human RuvBL1 protein, and is described to have a paralog, the RuvBL2 or Rvb2 protein in human and S. cerevisiae, respect ively. The N. crassa orthologous protein was identified and named RVB - 2. The RuvBLs proteins have been found to be associated with diverse cellular processes, most likely due to their ability to form large protein complexes and to have ATPase activity. In this work, these proteins were functional, biochemical and biophysically characterized. The fluorescence microscopy results showed that both proteins present nuclear localization in the fungus exposed to heat stress. Analyses of protein expression by Weste rn blot showed an increased expression of the RVB - 1 - v5 protei n in this same condition . The two proteins were produced in Escherichia coli, and expression analyses showed higher stability in solution when both were produced together. Both proteins showed in vitro interaction by pulldown analysis. The RVB - 1/2 complex has the secondary structure mostly formed by α - helices as analysis by CD. The size - exclusion chromatography suggested that the complex present different oligomeric structures when analyzed in the absence a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre