Orientador: Ângela Regina Araujo / Banca: Silvia Noeli López / Banca: Mônica Tallarico Pupo / Banca: Maria da Conceição Farreira de Oliveira / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Resumo: Este trabalho, descreve a busca de substâncias bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos AM-01 identificado como Penicillium sp1, AM-02 e AM-03 não identificados e AM-04, também pertencente ao gênero Penicillium, que foram isolados das folhas de Alibertia macrophylla. Os fungos endofíticos isolados, foram cultivados em meio líquido MBD, e sólido (milho) a 25oC, sob agitação, e no modo estático, respectivamente. Para o meio líquido, o caldo foi separado do micélio e submetido à partição com AcOEt, fornecendo os extratos brutos após a evaporação do solvente. Para o meio sólido, foi realizado uma extração com metanol, seguido de filtração e evaporação do solvente, originando os extratos brutos. Após análises por RMN de ¹H e CLAE-DAD, os extratos brutos obtidos em milho, foram fracionados por cromatografia em coluna, seguida de separação via Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAEprep.). O extrato bruto de AM-01 (Penicillium sp1) forneceu seis substâncias da classe das isocumarinas, sendo duas inéditas. O fracionamento cromatográfico do extrato bruto de AM-02, conduziu ao isolamento de três sesquiterpenos inéditos identificados como Xylarenonas C, D e E. Também do extrato bruto de AM-02 foi isolado um composto furânico identificado como (E)-5-(1- hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-ácido carboxílico. O fracionamento cromatográfico de AM-04, permitiu o isolamento de um benzenóide, identificado como orcinol. O estudo químico dos extratos brutos obtidos em MBD, de AM-03 e AM-04, permitiram o isolamento das dicetopiperazinas ciclo (Pro-Try) e ciclo (L-Pro- L-Val), além da uracila. As substâncias isoladas foram identificadas por análises de RMN 1D e 2D e espectrometria de massas, bem como por comparação com dados da literatura... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work describes the search for bioactive substances from the chemical/biological of the crude extracts produced by endophytic fungi AM-01 identified as Penicillium sp1, AM-02, AM-03 and AM-04 also belonging to the genus Penicillium isolated from the leaves of Alibertia macrophylla. The endophytic fungal isolates were grown in liquid medium and solid MBD to 25 °C under shaking and static mode, respectively. For the liquid medium the mycelium was separated from the broth and subjected to partition with AcOEt, giving the crude extracts after evaporation of the solvent. For solid medium, the extraction was performed with MeOH, followed by filtration and evaporation of the solvent yielding the crude extracts. After analysis by the ¹H NMR and HPLC-DAD, the crude extracts from maize were fractionated by chromatography on a column followed by separation using High Performance Liquid Chromatography (HPLCprep.). The crude extract of AM-01 (Penicillium sp1) provided six isocoumarins, two news. Chromatographic fractionation of the crude extract of AM-02 led to the isolation of three novel sesquiterpenes identified as Xylarenonas C, D and E and a furanic compound identified as 2,5-dihydro-5-(1-hydroxyallyl)-4-(E)-pent-1-enyl)furan-3-carboxylic acid. Chromatographic fractionation of AM-04 allowed the isolation of a benzenoid, identified as orcinol. The chemical study of AM-03 crude extracts and AM-04 cultivated in MDB allowed the isolation of diketopiperazines cyclo (Pro-Try), cyclo (L-Pro-L-Val), and uracil. The substances isolated were identified through analysis of 1H NMR, mass spectrometry and by comparison with literature data. The crude extracts and pure substances were submited for trials for antifungal agents, antioxidants, anticholinesterasic and inhibition of protease. All substances showed biological activities. / Doutor

Orientador: Ângela Regina Araujo / Banca: Alberto José Cavalheiro / Banca: Antonio Gilberto Ferreira / Resumo: O presente trabalho descreve o desenvolvimento de método de extração e quantificação da citocalasina D, produzida pelo fungo endofítico Xylaria sp.. A técnica de extração tem embasamento no planejamento fatorial utilizando um gráfico ternário como referência, onde cada vértice foi constituído de um solvente puro. Os solventes utilizados foram: acetato de etila, álcool isopropílico e éter etílico. Foram selecionados 10 pontos no gráfico a partir dos quais foram realizadas as devidas extrações em triplicata, resultando em 30 amostras do extrato bruto de Xylaria sp.. A avaliação da quantidade de citocalasina D no extrato bruto foi feita por quantificação por RMN de 1H utilizando-se o antraceno como padrão interno. A escolha do melhor solvente extrator ocorreu após a quantificação, em que foi levado em conta: o teor de citocalasina D no extrato bruto, o rendimento do extrato bruto, a quantidade total de citocalasina D presente no extrato bruto e o custo de extração. A análise das variáveis nos permitiu a escolha do acetato de etila como melhor solvente extrator. / Abstract: The present work describes the development of method for extraction and quantification of cytochalasin D, produced by the endophytic fungus Xylaria sp. The technique of extracting makes uses of a factorial design with a ternary graph as reference, where each vertex has consisting of one solvent. The solvents used were: ethyl acetate, ethyl ether and isopropyl alcohol. It was selected 10 points at the graph which were due to extractions in triplicate, resulting in 30 samples of crude extract of Xylaria sp .. For the avaliation of the amount of cytochalasin D in crude extract it was developed a quantification technique by 1H NMR of which the internal standard used was the anthracene.. Choosing the best solvent extractor occurred after the quantification, which was taken into account: the content of cytochalasin D in the crude extract, the yield of the crude extract, the total cytochalasin D present in the crude extract and the cost of extraction. After the analysis, the ethyl acetate was elected the best solvent for the extraction. / Mestre

Submitted by Carolina Rabal Biasetto null (carolinarabal@yahoo.com.br) on 2016-05-18T19:36:08Z No. of bitstreams: 1 Tese_Doutorado_Carolina_Rabal_Biasetto_2016.pdf: 15348096 bytes, checksum: 59245cf961f6aaf1a999156f53853b5d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-05-20T18:01:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 biasetto_cr_dr_araiq_par.pdf: 1896284 bytes, checksum: 8b4dcb25761fe239f657abc24e10c1e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T18:01:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 biasetto_cr_dr_araiq_par.pdf: 1896284 bytes, checksum: 8b4dcb25761fe239f657abc24e10c1e7 (MD5) Previous issue date: 2016-04-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A capacidade biossintética dos fungos endofíticos, aliado aos estudos químico e biológicos relatados para Eugenia brasiliensis, motivou a idealização do projeto, a prospecção química, biológica e enzimática em fungos endofíticos associados a folhas, caules e frutos saudáveis de Eugenia brasiliensis e a avaliação do co-cultivo e epigenética em Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., na obtenção de novas substâncias. O isolamento dos fungos endofíticos, resultou em dezessete linhagens de fungos endofíticos, sendo estes cultivados em escala reduzida em meio líquido de batata e dextrose (PDB) e Czapek, a 25 oC, sob modo estático para obtenção dos respectivos extratos brutos em AcOEt. A avaliação metabólica destes extratos foi realizada por CCDC, HPLC-DAD e RMN de 1H, como também a potencialidade enzimática e biológica pela avaliação das atividades antifúngica, anticolinesterásica e citotóxica, sendo que estes extratos demonstraram ser promissores. A prospecção inicial conduziu a seleção de três fungos endofíticos identificados como Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4), e Colletotrichum sp. (Eb_frmH_1), os quais foram cultivados (escala ampliada) em PDB para isolamento e determinação/elucidação estrutural dos metabólitos secundários. O estudo de Xylaria cubensis, resultou no isolamento de 8 substâncias, sendo da classe dos nucleosídeos, dicetopirazinas, isocumarinas e citocalasinas. De Diaporthe sp. foi isolado e identificado 8 substâncias: duas dicetopiperazinas, ácido nitropropiônico, uracila, tirosol, zygosporina D, pirrolidona (inédita) e alternariol. Colletotrichum sp. resultou no isolamento de 6 substâncias, sendo três dicetopiperazinas, além das substâncias N-(2-feniletil)acetamida, N-acetiltriptamina e metanoato de 2-hidroxibutila 3-indol (inédita). Todas as classes de substâncias produzidas por estes fungos endofíticos apresentam diversas atividades biológicas relatadas na literatura. Destaca-se a atividade fitotóxica da citocalasina D frente a coleóptilos de trigo superior ao herbicida comercial GOAL®. Para verificar a influência na produção metabólica de Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., utilizou-se estratégias como o co-cultivo em meio sólido (PDA) e líquido (PDB) e a epigenética (escala reduzida), nas quais os endófitos mostraram produção metabólica diferente em relação à produção das monoculturas e na ausência do modulador epigenético ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA), respectivamente. As ferramentas estatísticas, como PCA (Análise de componentes principais) e PLS-DA (Análise discriminante com calibração multivariada por mínimos quadrados parciais) permitiram uma rápida identificação e localização dos perfis metabólicos dos co-cultivos comparados às monoculturas. Estes dados contribuem para o conhecimento dos perfis metabólicos, biológicos e enzimáticos dos fungos endofíticos isolados de Eugenia brasiliensis, bem como suas interações com o hospedeiro. / The biosynthetic capacity of endophytic fungi, allied chemical and biological studies reported to Eugenia brasiliensis motivated the idealization of the project, prospection chemical, biological and enzymatic in endophytic fungi associated with healthy leaves, stems and fruits from Eugenia brasiliensis and evaluation co-culture and epigenetic in Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., in obtaining new substances. The isolation of endophytic fungi resulted in seventeen endophytics fungi, these being cultivated in small scale on potato dextrose broth (PDB) and Czapek at 25 °C under static mode to obtain the corresponding crude extracts in AcOEt. The metabolic evaluation of these extracts was performed by CCDC, HPLC-DAD and 1H NMR, also enzymatic and biological potential were performed by antifungal, cytotoxic, and anticholinesterase activities, and these extracts have shown promise. The preliminary prospection led to the selection of three endophytic fungi identified as Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4) and Colletotrichum sp. (Eb_frmad_1) which were cultivated (larger scale) in PDB for isolation and determination or structural elucidation of secondary metabolites. The study of Xylaria cubensis resulted in the isolation of eight substances, as follows: nucleoside, diketopiperazines, isocoumarins and cytochalasins class. From Diaporthe sp. was isolated and identified eight substances, as follows: two diketopiperazines, nitropropionic acid, uracil, tyrosol, zygosporin D, pyrrolidone (unpublished) and alternariol. Colletotrichum sp. resulted in the isolation of six substances, three diketopiperazines, besides the substances N-(2-phenylethyl) acetamide, Nβ-acetyltryptamine and 3-hydroxybutan-2-yl-1H-indol-3-ylacetate (unpublished). All classes of substances produced by these endophytic fungi present several biological activities reported in the literature. Noteworthy is the phytotoxic activity of cytochalasin D against wheat coleoptile higher than commercial herbicide GOAL®. To verify the influence on the metabolic production of Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., used strategies such as the co-culture on solid (PDA) and liquid medium (PDB) and epigenetic (small scale), in which endophytes showed an interesting and different metabolic production when compared with the production of monocultures and the absence of epigenetic modulator SAHA, respectively. The statistical tools, such as PCA (Principal component analysis) and PLS-DA (discriminant analysis with multivariate calibration partial least squares) allowed quick identification and location of the metabolic profiles of the co-culture compared monocultures. These data will contribute to the knowledge of the metabolic profiles, biological and enzymatic of endophytic fungi isolated from Eugenia brasiliensis and their interactions with host. / CNPq: 140980/2012-1

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6576.pdf: 2966508 bytes, checksum: 60d9666ae228bda42b9fc4a21dae76c6 (MD5) Previous issue date: 2014-11-28 / Universidade Federal de Sao Carlos / Microorganisms, such as those belonging to the groups of Penicillium, Bacillus, Paenibacillus, represent represent an important source for the production of bioactive metabolites with varied applications. The production of these substances is directly related to the culture media, as well as the available carbon and nitrogen sources, conditions of pH, temperature and agitation (gas exchange). Among the microbial groups most studied about the production of various interest metabolites are the fungi and bacteria that inhabit the interior of plants, the endophytics. Thus, the present study aimed to isolate and identify endophytics microorganisms from leaves of four species of Tabebuia spp. and Hymenaea courbaril and study the production of interest metabolites by the lineages found. The microbial activities were studied: antibiotic capability against Gram positive and Gram negative bacteria, antifungal, antibiotic resistance, enzyme production, antitumor activity and pigment production. Microorganisms that stood out due to production of antibiotics, cytotoxicity against tumor cells and pigment production. This study selected microorganisms based on their most relevant production, in this case, it was the antibiotics production, pigments production and cytotoxicity, they were cultured in larger scale aiming at the improvement of the production of metabolite chosen according to the results. The selected microorganisms were a bacterium identified as Paenibacillus terrae and a fungus identified as Penicillium minioluteum/Talaromyces minioluteus complex. The P. terrae proved producing bioactive metabolites against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans, in addition to novel cytotoxic activity against HTC, and OVCAR8 SF295 tumor cells. This bacterium also showed unprecedented anti-Leishimania activity, acting against the promastigote form of the parasite. The isolated fungus proved producing a red pigment, in large quantities without cytotoxic, antifungal or antibacterial activity, favoring its industrials applications. Both selected microorganisms demonstrated potential for biotechnological and industrial applications, suggesting the viability of promising continuity of the work performed. / Os microrganismos, como os pertencentes ao grupo dos Penicillium, Bacillus, Paenibacillus, representam uma fonte importante para produção de metabólitos bioativos com diversas aplicações. A produção destas substâncias está diretamente relacionada ao cultivo em meios de cultura assim como as fontes de carbono e nitrogênio disponíveis, condições de pH, temperatura e trocas gasosas. Dentre os grupos microbianos que mais se destacam nas pesquisas para produção de diversos metabólitos encontram-se os fungos e bactérias que habitam o interior de plantas, os microrganismos endofíticos. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar microrganismos endofíticos do cerrado a partir de folhas de quatro espécies de Tabebuia spp. e um exemplar de Hymenaea courbaril e estudar a produção de metabólitos de interesse biotecnológico das linhagens encontradas. As atividades microbianas estudadas foram: capacidade antibiótica contra bactérias Gram positivas e Gram negativas, atividade antifúngica, resistência a antibióticos, produção enzimática, atividade antitumoral e produção de pigmentos. Os microrganismos que se destacaram devido a produção de antibióticos, citotoxicidade contra células tumorais e produção de pigmentos foram selecionados e cultivadas em maior escala objetivando o melhoramento da produção do metabólito escolhido por testes bioguiados. Selecionou-se Paenibacillus terrae e Penicillium complexo minioluteum/Talaromyces complexo minioluteus. O P. terrae mostrou-se produtor de metabólitos bioativos contra bactérias Gram positivas, Gram negativas e fungos leveduriformes, além da inédita atividade citotóxica contra células HTC, SF295 e OVCAR8. Esta bactéria apresentou também inédita atividade anti-Leishimania, atuando contra a forma promastigota do parasita. O fungo produziu pigmento de coloração vermelha em grande quantidade e foi selecionado devido à ausência de atividade citotóxica, antifúngica e antibacteriana. Ambos microrganismos selecionados demonstraram potencial de aplicações biotecnológicas e industriais, sugerindo a viabilidade promissora da continuidade dos trabalhos desenvolvidos.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3694.pdf: 1040825 bytes, checksum: 07255db3fd1638e75419879ee51ac8ab (MD5) Previous issue date: 2009-09-03 / Universidade Federal de Sao Carlos / Endophytic microorganisms lives in symbiotic association with plants and in one unique biological niche, and they are potential producers of natural bioactive substances with different chemical structure and biological activity. This study aimed to isolate and characterize endophytic microorganisms from Miconia albicans from Cerrado of São Carlos - SP. Samples were characterized phenotypically from typical features of colony morphology and macroscopic measurements, physiological, biochemical and morphodyeing and genotypically by 16S rRNA analysis. We evaluated the antagonistic potential of the isolates against Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Serratia marcensis IAL 1475, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Shigella sonnei ATCC 10231 and Candida albicans ATCC 10231. Two samples (1 and 3) showed bioactivity against E. faecalis, with inhibition halos of 1.30 and 1.90 cm in diameter, respectively. A single sample (2) showed activity against S. marcensis (3.60 cm) with no significant bioactivity against the other microorganisms tested. In one sample (4) showed activity against four of the six microorganisms tested: E. faecalis (3,15 cm) , S. aureus (3,50 cm), C. albicans (3,35 cm) e S. sonnei (3,20 cm). In another sample (6) was detected bioactivity against E. faecalis and S. aureus, with inhibition zones of 1.80 and 1.50 cm, respectively. One of the samples (8) showed bioactivity against the greatest number of indicator microorganisms with inhibitory halos of 2.60 cm against E. faecalis, 1.50 cm against S. aureus, 2.40 cm against C. albicans, 2.10 cm against E. coli and 2.50 cm against S. sonnei. In two samples (5 and 7) there was no evidence the bioactive ability against indicator microorganisms tested. Phenotypic analysis of 8 endophytic microorganisms isolated allowed us to classify 50% of these (samples 4, 6, 7 and 8) in the Actinomyces group and the others were classified in the genus Streptomyces (samples 1, 2, 3 and 5). In the genotypic analysis of two isolates with bioactivity were identified as Nocardiopsis Dassonville (sample 3) and Amycolatopsis orientalis (sample 8), reporting for the first time his association with endophytic aerial parts of Miconia albicans from Cerrado of São Carlos, SP. / Microrganismos endofíticos vivem em associação simbiótica com plantas e habitam nichos biológicos únicos, além de serem potenciais produtores de substâncias naturais bioativas com estrutura química e atividade biológica diversas. Este trabalho objetivou isolar e caracterizar microrganismos endofíticos a partir de Miconia albicans do Cerrado de São Carlos SP. Amostras foram caracterizadas fenotipicamente a partir de tipicidade de morfologia colonial e determinações macroscópicas, fisiológicas, bioquímicas e morfo-tintoriais e genotipicamente através de análises de RNAr 16S. Foi avaliado o potencial antagônico dos isolados contra Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Serratia marcensis IAL 1475, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Shigella sonnei ATCC 10231 e Candida albicans ATCC 10231. Duas amostras (1 e 3) apresentaram bioatividade contra E. faecalis, com halos de inibição de 1,30 e 1,90 cm de diâmetro, respectivamente. Uma única amostra (2) apresentou atividade contra S. marcensis (3,60 cm), não apresentando bioatividade contra os demais microrganismos testados. Em uma amostra (4) observou-se atividade contra quatro dos seis microrganismos testados: E. faecalis (3,15 cm) , S. aureus (3,50 cm), C. albicans (3,35 cm) e S. sonnei (3,20 cm). Em outra amostra (6) detectou-se bioatividade contra E. faecalis e S. aureus, com halos de inibição de 1,80 e 1,50 cm, respectivamente. Uma das amostras (8) apresentou bioatividade contra o maior número de microrganismos indicadores, com halos inibitórios de 2,60 cm contra E. faecalis, 1,50 cm contra S. aureus, 2,40 cm contra C. albicans, 2,10 cm contra E. coli e 2,50 cm contra S. sonnei. Em duas amostras (5 e 7) não foi evidenciada habilidade bioativa contra os microrganismos indicadores testados. Análises fenotípicas dos 8 microrganismos endofíticos isolados permitiram classificar 50% destes (amostras 4, 6, 7 e 8) no grupo Actinomyces e os outros foram classificados no gênero Streptomyces (amostras 1, 2, 3 e 5). Na análise genotípica dois dos isolados apresentando bioatividade foram caracterizados como Nocardiopsis dassonvillei (amostra 3) e Amycolatopsis orientalis (amostra 8), relatando pela primeira vez sua associação endofitica com partes aéreas de Miconia albicans do Cerrado de São Carlos, SP.

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:01Z : No. of bitstreams: 1 000854197_20160828.pdf: 403693 bytes, checksum: 025674c6cd0c158cac2006b424eef93b (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-29T14:25:05Z: 000854197_20160828.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-29T14:25:41Z : No. of bitstreams: 1 000854197.pdf: 2677013 bytes, checksum: 20a30ff3c5aeec8d0949351629d25f3d (MD5) / Eriocaulaceae se destacam como uma das famílias mais representativas dos campos rupestres da Cadeia do Espinhaço - MG, não só pela grande riqueza de espécies, mas também pelo elevado número de táxons endêmicos desta formação geológica. Dos capítulos de Paepalanthus planifolius, um dos gêneros mais representativos da família já foram isoladas do extrato etanólico e diclorometano as naftopiranonas, substâncias com comprovadas atividades biológicas como antirradicalar, antiúlcera e mutagênica. Apesar, dos estudos realizados até o momento com espécies de Eriocaulaceae, é importante destacar que ainda existe uma grande variedade de substâncias ainda não isoladas e identificadas e que ainda não foram avaliadas para várias atividades biológicas. Portanto, neste trabalho descrevemos o isolamento, purificação, identificação de substâncias e preservação dos endófitos associados à espécie de P. planifolius. A triagem química foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada com detector de arranjo de fotodiodos HPLC-DAD, cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e ensaio antirradicalar realizada com os extratos particionados com acetato de etila (AcOEt) dos endofíticos isolados dos capitulos de P. planifolius em escala reduzida. Os perfis químicos desta triagem preliminar nos permitiu selecionar o extrato produzido pelo fungo endofitico identificado como Anthostomella brabeji para o estudo em escala ampliada em meio de cultivo PDB. A estratégia de fracionamento por HPLC-DAD em escala semipreparativa do extrato AcOEt do endófito A. brabeji permitiu isolar e identificar quatro metabólitos secundários [(6-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-7,8-epoxicroman-4-ona (Ab1), Sicaina (Ab2), Eutipinol (Ab3) e 6,7,8-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-croman-4-ona (Ab4)] que foram identificados por técnicas de RMN mono e bi-dimensionais e... / Eriocaulaceae stand out as one of the most representative families of the rocky fields of the Espinhaço - MG, not only for the great richness of species, but also the high number of endemic taxa of this geological formation. The capitula of Paepalanthus planifolius, one of the most representative genera of the family, have been isolated from the ethanol extract and dichloromethane the naphytopyranones, substances with proven biological activity as antiradical, anti-ulcer and mutagenic. Despite the studies performed to date with Eriocaulaceae species, it is important to note that there is still a wide variety of substances were not yet isolated and identified and that have not been evaluated for various biological activities So in this paper we describe the isolation, purification, identification of substances and preservation of endophytes associated with the P. planifolius specie. The chemical screening was performed by high-performance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector HPLC-DAD, comparative thin layer chromatography (TLC) and antiradical assay conducted with extracts partitioned with ethyl acetate (EtOAc) of the capitula of the isolated endophytic P. planifolius, on a reduced scaled. The chemical profile of this preliminary screening allowed us to select the extract produced by the endophytic fungus identified as Anthostomella brabeji for the study on a large scale in the PDB culture media. The fractionation strategy by HPLC-DAD in semi-preparative scale EtOAc extract endophyte A. brabeji allowed to isolate and identify four secondary metabolites [(6-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-7,8-epoxychroman-4-one (Ab1), Siccayne (Ab2), Eutypinol (Ab3) e 6,7,8-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-chroman-4-one (Ab4)] which were identified by NMR techniques mono- and bi-dimensional and mass spectrometry, and the Ab4 substance is being described at the first time in...

Submitted by NATÁLIA PAGANINI MARQUES null (nataliapaganini@hotmail.com) on 2017-10-25T16:35:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_Natália Marques_2017 FINAL_CD ROOM.pdf: 4045053 bytes, checksum: 8bb94d90641523ae3af09e85b33d82cd (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-31T16:36:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marques_np_dr_araiq.pdf: 4045053 bytes, checksum: 8bb94d90641523ae3af09e85b33d82cd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T16:36:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marques_np_dr_araiq.pdf: 4045053 bytes, checksum: 8bb94d90641523ae3af09e85b33d82cd (MD5) Previous issue date: 2017-09-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Atualmente, há um crescente interesse na produção de bioetanol celulósico como biocombustível de segunda geração, sendo uma alternativa promissora aos combustíveis fósseis. Fungos tem sido constantemente isolados na busca por novas fontes de celulases e os endofíticos são interessantes para esta finalidade, por serem potenciais produtores de enzimas de degradação de material vegetal, incluindo celulases, e pouco estudados neste sendido. O presente estudo teve por finalidade a avaliação da influência das condições de cultivo (isolado e co-cultivo) para a produção de celulases pelos fungos endofíticos Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04, por meio de metodologias estatísticas, além da utilização dos extratos enzimáticos na sacarificação do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado hidrotérmicamente com NaOH, otimizando-se também esta etapa empregando-se as ferramentas estatísticas citadas. Para a condição de co-cultivo dos fungos, a quantidade de substrato (5,7g) e a umidade inicial do substrato (60,6%) foram otimizadas visando maximizar a produção de endoglunacase (121,56 U/g). Para o cultivo isolado de Botryosphaeria sp. AM01, foi possível a produção de endoglunacase (168,99 U/g), empregando a concentração de NaNO3 a 6,0 g/L e 5,0 g como quantidade de substrato. Para o cultivo isolado de Saccharicola sp. EJC04, obteve-se a condição ótima para produção de β-glicosidase (750,37 U/g) na concentração de ureia de 0,0836 g/L, teor de umidade de 49,2% e quantidade de substrato de 3,84 g. Os extratos enzimáticos obtidos sob as condições ótimas de cultivo foram utilizados na sacarificação do bagaço pré-tratado hidrotérmicamente com NaOH. A caracterização do bagaço pré-tratado indicou 59,52, 31,62 e 11,32% como teores de celulose, hemicelulose e lignina, respectivamente. A sacarificação realizada com o extrato enzimático produzido por Botryosphaeria sp. AM01 foi mais eficiente quanto à obtenção de glicose, sendo selecionada para os experimentos envolvendo a otimização deste processo. Sob a condição otimizada de sacarificação (carga de bagaço a 18,82%, carga de enzima de 410,71 U totais de endoglucanase, 50 °C, 280 rpm e 24h) obteve-se a concentração máxima de glicose de 8,05 mg/mL. Quanto à presença de inibidores de fermentação no hidrolisado obtido sob condições otimizadas, observou-se a presença de ácido vanílico e ácido ferúlico nas concentrações de 0,111 e 0,054 g/L respectivamente. Não foi detectada a presença de 5-Hidroximetilfurfural, furfural, ácido siringico e ácido cumárico. Sendo baixas as concentrações dos inibidores presentes no hidrolisado, este apresenta potencial para ser utilizado em processos de fermentação alcoólica. Destaca-se a importância dos resultados obtidos como pesquisa básica, uma vez que não são relatados na literatura estudos quantitativos da produção de celulases pelos gêneros estudados. / There is a great interest in the production of cellulosic bioethanol as second generation biofuel and it is a promising alternative to fossil fuels. Fungi have been constantly isolated in the search for new sources of cellulases and the endophytics interesting for this purpose, being potential producers of plant material degrading enzymes, including cellulases, and underexploited in this sense.The present study had as purpose the optimization of culture conditions (monoculture and co-cultivation) for the production of cellulases by the endophytic fungi Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04, by statistics methodology, and also the use of enzymatic extracts in saccharification of sugarcane bagasse submitted to hydrothermal pretreatment with NaOH, optimizing this step using those statistical tools. For the fungi co-cultivation, the amount of substrate (5.7g) and the substrate initial moisture (60.6%) were optimized to maximize the production of endoglunacase (121.56 U/g). For the monoculture of Botryosphaeria sp. AM01, it was possible to produce endoglunacase (168.99 U/g), using the concentration of NaNO3 at 6.0 g/L and 5.0 g as substrate amount. For the monoculture of Saccharicola sp. EJC04, the optimal condition for β- glycosidase production (750.37 U/g) was obtained using urea at 0.0836 g/L, initial substrate moisture at 49.2% and substrate amount of 3.84 g. The enzymatic extracts obtained under optimized conditions were used in the saccharification of sugarcane bagasse submitted to alkaline hydrothermal pretreatment with NaOH. The pre-treated bagasse characterization indicated 59.52, 31.62 and 11.32% as the contents of cellulose, hemicellulose and lignin, respectively. The saccharification performed with the enzymatic extract produced by Botryosphaeria sp. AM01 was more efficient in glucose obtainment, being selected for the experiments involving the optimization of this process. Under the optimized saccharification condition (18.828% bagasse load, enzyme loading of 410.71 total U of endoglucanase, at 50 °C, 280 rpm and 24h) the maximum glucose concentration of 8.05 mg/mL was obtained. Regarding the presence of fermentation inhibitors in the hydrolyzate, it was detected the presence of ferulic acid and vanillic acid at the concentrations of 0.111 and 0.054 g/L, respectively. The presence of 5-Hydroxymethylfurfural, furfural, syringic acid and coumaric acid was not detected. Since the concentrations of inhibitors present in the hydrolyzate are low, it has potential to be used in alcoholic fermentation processes. This study highlights the importance of the results obtained as basic research, since quantitative studies of cellulases production by the studied genus are not reported in literature. / CNPq: 147995/2013-2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-04Bitstream added on 2014-06-13T19:17:26Z : No. of bitstreams: 1 chapla_vm_me_araiq.pdf: 10108428 bytes, checksum: 973c5f6fd78cf8a4c8aa3bfaf65f6843 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos habitam os espaços intra e intercelular de um hospedeiro, durante todo ou parte de seu ciclo de vida, sem causar danos aparentes. Esses micro- organismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. associado à espécie vegetal do cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. foi cultivado em diferentes meios de cultura para avaliar a variação metabólica em relação a composição dos nutrientes. Foram usados 5 meios líquidos comerciais (MBD, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) e 2 meios sólidos (Milho e Arroz). Os extratos brutos Acetato e Acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de 1 H, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica. Os resultados evidenciaram extratos com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos. Destes, os meios MDB e Milho foram selecionados para obtenção dos extratos brutos em escala ampliada. O extrato bruto acetato obtido em MDB foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação da uracila (1), ácido nitropropanóico (2), citocalasina H (3), tirosol (4), ciclo(L- Pro-L-Leu), (5), ciclo(L-Pro-L-Ile) (6), ciclo(L-Pro-L-Val) (7), ciclo(L-Pro-L-Tyr) (8) e ciclo(L-Pro-L-Phe) (9). Este é o primeiro relato de dicetopiperazinas obtidos de fungos do gênero Phomopsis. Esta classe de substâncias apresenta inúmeras bioatividades, principalmente antimicrobiana. O extrato bruto acetonitrila obtido de milho conduziu ao isolamento da citocalasina H (3), citocalasina J (10), alternariol monometil éter (11).... não descritos / Endophytic microorganisms inhabit the intra and intercellular spaces of a host, during all or part of their life cycle, without causing any apparent damage. Microorganisms are regarded as an important source for the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumoral actions, among others. This work describes the chemical and biological study of endophytic fungus Phomopsis sp. associated with plant species of Cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. was cultived in different culture media to assess the metabolic variation in relation to nutrient composition. Were used 5 commercial liquid media (PDB, YM, Malt extract, nutrient and Czapek) and 2 solid mediums (Corn and Rice). The acetate and acetonitrile crude extracts were evaluated by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector and 1 H Nuclear Magnetic Resonance and subjected to assays for the evaluation of potential antifungal, antioxidant and anticholinesterase. The results showed extracts with an intense metabolic variation and potentially bioactive. From these, the mediums PDB and Corn were selected to obtain the crude extracts on a large scale. The crude acetate extract obtained in PDB was submitted to chromatographic separation and led to the identification of uracil (1), 3-nitropropionic acid (2), cytochalasin H (3), tyrosol (4), cyclo (L- Pro-L-Leu) (5), cyclo (L-Pro-L-Ile) (6), cyclo (L-Pro-L-Val) (7), cyclo (L-Pro-L-Tyr) (8) and cyclo (L-Pro-L-Phe) (9). This is the first report of diketopiperazines obtained from fungi of the Phomopsis genus. This class of substances shows many bioactivities, especially antimicrobial. The crude acetonitrile extract obtained from Corn led to the isolation of cytochalasin H (3), cytochalasin J (10), alternariol monomethyl ether (11), alternariol (12) and 2-hydroxy-alternariol (13), being the last one reported for the first time as a natural product and with NMR data not reported

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:59:23Z : No. of bitstreams: 1 sordi_r_me_araiq.pdf: 4684192 bytes, checksum: 0a6b1815e11680895d32ba50f99dffeb (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Microrganismos endofíticos são definidos como organismos que habitam pelo menos um período de seu ciclo vital, o interior de um vegetal, sem causar aparentemente nenhum dano a este. Na busca de novos organismos e novos metabólitos secundários, um estudo foi conduzido visando avaliar a diversidade química de fungos endofíticos por meio do isolamento e identificação de metabólitos secundários produzidos por Phomopsis stipata, um fungo endofítico obtido das folhas de Styrax camporum, uma planta do Cerrado brasileiro. Sete fungos foram isolados das folhas de Styrax camporum (SC-01, 02, 03, 04, 05, 06 e 07) e cultivados em meio de cultura líquido MDB, inicialmente em pequena escala (400 mL), durante 28 dias em incubadora rotatória à temperatura ambiente. A seguir, os caldos contendo os metabólitos secretados pelos fungos foram separados do micélio por filtração e submetidos à partição líquido-líquido com AcOEt, fornecendo os extratos brutos. Os extratos brutos obtidos foram submetidos a um processo de triagem química e biológica, que compreendeu análise do perfil cromatográfico e espectroscópico e avaliação das atividades: antioxidante (através do teste com DPPH), antifúngica (frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium sphaerospermum e Cladosporium cladosporioides), antibacteriana (frente ao Mycobacterium tuberculosis), e anticolinesterásica. Dos microrganismos triados, SC-04 (Phomopsis stipata) foi cultivado em larga escala e seu extrato bruto obtido em MBD submetido a fracionamento cromatográfico resultando no isolamento das substâncias 1 e 2. Paralelamente, foi realizada a comparação da diversidade na produção metabólica do fungo quando cultivado em cereais (arroz e milho) e em diferentes meios de cultura comerciais, através de dados espectroscópicos e do perfil cromatográfico via RMN e CLAE, assim como avaliação das atividades antioxidante... / Endophytic microorganisms are defined as organisms that inhabit the interior of a vegetable at least during a period of the vital cycle, without causing any apparent damage. In the search for new organisms and new secondary metabolites, a study was conducted to evaluate the chemical diversity of endophytic fungi through the isolation and identification of secondary metabolites produced by Phomopsis stipata, an endophytic fungi obtained from the leaves of Styrax camporum, a plant of the Brazilian Cerrado. Seven fungi had been isolated from the Styrax camporum leaves (SC-01, 02, 03, 04, 05, 06 e 07) and cultivated on a liquid medium of MDB culture, initially in a small scale (400 ml), during 28 days in a rotating incubator at room temperature. To follow, the culture broth containing the metabolites secreted by the fungi had been separated from the micelium by filtration and submitted to the liquid-liquid partition with AcOEt, to give the crude extracts. These extracts had been submitted to a chemical and biological screening process, which consisted in an analysis of the chromatographic and spectroscopic profile and evaluation of the following activities: antioxidant (by DPPH test), antifungal (in relation to the phytopathogenic fungi Cladosporium sphaerospermum and Cladosporium cladosporioides), bactericidal (in relation to Mycobacterium tuberculosis), and anticolinesterasic. From the screened fungi, SC-04 (Phomopsis stipata) had been cultivated in large scale and its raw extract obtained by MBD had been submitted in a chromatographic fragmentation, resulting in an isolation of substances 1and 2. At the same time, had been made a comparison of the diversity in the metabolic production of the fungi when cultivated in cereals (rice and corn) and in different commercial culture way, through spectroscopic data and chromatographic profile by RMN e CLAE, as well as evaluation...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Co-orientador: Angela Regina Araujo / Banca: Alberto José Cavalheiro / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: Eriocaulaceae se destacam como uma das famílias mais representativas dos campos rupestres da Cadeia do Espinhaço - MG, não só pela grande riqueza de espécies, mas também pelo elevado número de táxons endêmicos desta formação geológica. Dos capítulos de Paepalanthus planifolius, um dos gêneros mais representativos da família já foram isoladas do extrato etanólico e diclorometano as naftopiranonas, substâncias com comprovadas atividades biológicas como antirradicalar, antiúlcera e mutagênica. Apesar, dos estudos realizados até o momento com espécies de Eriocaulaceae, é importante destacar que ainda existe uma grande variedade de substâncias ainda não isoladas e identificadas e que ainda não foram avaliadas para várias atividades biológicas. Portanto, neste trabalho descrevemos o isolamento, purificação, identificação de substâncias e preservação dos endófitos associados à espécie de P. planifolius. A triagem química foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada com detector de arranjo de fotodiodos HPLC-DAD, cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e ensaio antirradicalar realizada com os extratos particionados com acetato de etila (AcOEt) dos endofíticos isolados dos capitulos de P. planifolius em escala reduzida. Os perfis químicos desta triagem preliminar nos permitiu selecionar o extrato produzido pelo fungo endofitico identificado como Anthostomella brabeji para o estudo em escala ampliada em meio de cultivo PDB. A estratégia de fracionamento por HPLC-DAD em escala semipreparativa do extrato AcOEt do endófito A. brabeji permitiu isolar e identificar quatro metabólitos secundários [(6-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-7,8-epoxicroman-4-ona (Ab1), Sicaina (Ab2), Eutipinol (Ab3) e 6,7,8-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-croman-4-ona (Ab4)] que foram identificados por técnicas de RMN mono e bi-dimensionais e... / Abstract: Eriocaulaceae stand out as one of the most representative families of the rocky fields of the Espinhaço - MG, not only for the great richness of species, but also the high number of endemic taxa of this geological formation. The capitula of Paepalanthus planifolius, one of the most representative genera of the family, have been isolated from the ethanol extract and dichloromethane the naphytopyranones, substances with proven biological activity as antiradical, anti-ulcer and mutagenic. Despite the studies performed to date with Eriocaulaceae species, it is important to note that there is still a wide variety of substances were not yet isolated and identified and that have not been evaluated for various biological activities So in this paper we describe the isolation, purification, identification of substances and preservation of endophytes associated with the P. planifolius specie. The chemical screening was performed by high-performance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector HPLC-DAD, comparative thin layer chromatography (TLC) and antiradical assay conducted with extracts partitioned with ethyl acetate (EtOAc) of the capitula of the isolated endophytic P. planifolius, on a reduced scaled. The chemical profile of this preliminary screening allowed us to select the extract produced by the endophytic fungus identified as Anthostomella brabeji for the study on a large scale in the PDB culture media. The fractionation strategy by HPLC-DAD in semi-preparative scale EtOAc extract endophyte A. brabeji allowed to isolate and identify four secondary metabolites [(6-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-7,8-epoxychroman-4-one (Ab1), Siccayne (Ab2), Eutypinol (Ab3) e 6,7,8-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-chroman-4-one (Ab4)] which were identified by NMR techniques mono- and bi-dimensional and mass spectrometry, and the Ab4 substance is being described at the first time in... / Mestre