Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003.pdf: 2958413 bytes, checksum: 4160426061ec67f4e48d4d92b60d4806 (MD5) Previous issue date: 2006-12-15 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work reports the study of a surprising plant microorganism relationship, involving the plant Sapindus saponaria, which is rich in antigungal saponins, and an endophyte fungus isolated from the pericarpe of the fruits collected in the host plant, and identified as Xylaria sp. The main objective of this work was to understand the survival mechanism of this fungus in such inhospitable ambient. It was found that this fungus biotransforms the structure of the saponins present in S. saponaria, making it less toxic, allowing the fungus to survive in the plant tissue. The reaction involved in this survival mechanism was a hidroxilation at ring C of the aglicone skeleton of saponins present in S. saponaria. This study also had as objective the stablishment of a fast method for the isolation and identification of saponins and ASOG (Acyclic Sesquiterpene Oligoglycosides) present in the plant s fruits. For the isolation of these compounds, the Sephadex® LH-20 column showed to be very efficient and the mass spectrometry technique (ESI-MS) was used as a rapid method of identification of this substances. The Xylaria sp. fungus was cultivated in synthetic mediums for the isolation of secondary metabolites. The microorganism showed a great potential for the production of several compounds, especially the isocoumarins. The analytical tools used to monitor all the experiments reported here comprises chromatographic and spectrometric techniques as HPLC, GC, open column chromatography, MS and MS/MS, 1D NMR and 2D NMR. Mechanisms of fragmentation were tentativelly suggested for all compounds studied by mass spectrometry. / Esse trabalho relata o estudo de uma surpreendente relação planta-microrganismo envolvendo a planta Sapindus saponaria, uma espécie extremamente rica em saponinas, em concentrações elevadas, as quais são compostos que possuem ação antifúngica bastante acentuada e, e um fungo do gênero Xylaria. O trabalho em questão teve por objetivo compreender o mecanismo de sobrevivência deste fungo em um ambiente tão inóspito. A resposta encontrada para esta questão foi que o fungo realiza uma biotransformação na estrutura das saponinas presentes em S. saponaria, possibilitando assim a sobrevivência deste nos tecidos da planta. Trata-se de uma reação de hidroxilação localizada no esqueleto triterpênico das saponinas presentes em S. saponaria. Outro objetivo do estudo foi encontrar um método rápido para o isolamento e identificação de saponinas e OGSA (Oligoglicosídeos Sesquiterpênicos Acíclicos) presentes nos frutos da planta. Para o isolamento destes compostos a fase estacionária Sephadex® LH-20 apresentou grande eficiência e a técnica de espectrometria de massas (MS) foi utilizada como um método rápido para identificação destas substâncias. O fungo Xylaria sp. foi cultivado em meios sintéticos para isolamento de metabólitos secundários. O microrganismo apresentou grande potencial para produção de diversos compostos, dando destaque para a classe das isocumarinas. Para realização deste trabalho foram utilizadas técnicas cromatográficas e espectrométricas como HPLC, GC, cromatografia em coluna, MS e MS/MS, 1D NMR e 2D NMR. Foram realizadas propostas de fragmentação para todos os compostos estudados por espectrometria de massas.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2027.pdf: 10143285 bytes, checksum: fd172e3d0d0149c5a14f335d7f813025 (MD5) Previous issue date: 2008-02-14 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describes the use of the high performance liquid cromatography (HPLC) technic coupled to the mass spectrometry technique for the analysis of fungal extracts, and the main purpose was the detection of meroterpens produced by P. Brasilianum. The fungal species P. Brasilianum was cultivated in a variety of artificial culture media: rice, wheat, maize, rice broth, solid decanted from rice broth and liquid medium Czapeck. In all the culture media tested the fungus presented a very good development, and also, the ions related to the meroterpens in study were detected in all the fungal extracts produced by these cultivations, except in Czapeck medium. The atmospheric pressure chemical ionization (APCI) was compared to the electrospray ionization, for the meroterpens analysis, and the result obtained was a great increase in detection power for this class of compounds, with the use of APCI. The P. brasilianum fungus was cultivated in Czapeck medium in the presence of Pinus taeda resin, alizarin, oleanolic, benzoic, salicylic, 2,5-dihydroxybenzoic, 2,6-dihydroxy-4-methyl-benzoic, 3,5-dinitrosalicylic, 3,5-dinitrobenzoic and ferulic acids, and 2 ,4 ,6 -trihydroxyacetophenone. The presence of these exogenous aditives modified the fungal metabolic profile, because the cromatographic profiles of the extracts produced showed a differentiation, in comparation to the fungal extract without aditive. Only the fungal extract produced in the presence of ferulic acid presented the meroterpens PSP-3 and PSP-8. The fungal extracts produced without any aditive also did not present meroterpens. / Este trabalho descreve o uso da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplada com a técnica de espectrometria de massas para análise de extratos fúngicos, visando principalmente a detecção de meroterpenos, produzidos por P. brasilianum. A espécie fúngica P. brasilianum foi cultivada em diversos meios de cultura artificiais: arroz, trigo, milho, caldo de arroz, filtrado do caldo de arroz e meio líquido Czapeck. Em todos os meios de cultivo testados o fungo apresentou um ótimo crescimento, e também, em todos os extratos fúngicos produzidos através destes cultivos foram detectados íons relacionados aos meroterpenos de interesse, exceto no meio Czapeck. A técnica de ionização química a pressão atmosférica (APCI) foi comparada com a de electrospray, para a análise destes meroterpenos, e o resultado obtido foi um aumento significativo no poder de detecção desta classe de compostos com o uso de APCI. O fungo P. brasilianum foi cultivado em meio Czapeck, na presença de resina de Pinus taeda, alizarina, ácidos oleanólico, benzóico, salicílico, 2,5-dihidroxibenzóico, 2,6-dihidroxi-4-metilbenzóico, 3,5-dinitrosalicílico, 3,5-dinitrobenzóico e ferúlico, e a 2 ,4 ,6 -trihidroxiacetofenona. A presença destes aditivos exógenos modificou o perfil metabólico do fungo, pois os perfis cromatográficos dos extratos produzidos se diferenciaram em relação ao extrato fúngico sem nenhum aditivo. Somente o extrato fúngico produzido na presença de ácido ferúlico apresentou os meroterpenos PSP-3 e PSP-8. Os extratos fúngicos produzidos na ausência de aditivos também não apresentaram meroterpenos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2236.pdf: 4508455 bytes, checksum: da224f07c31e180bc11a5171a3f168f6 (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Universidade Federal de Minas Gerais / In the present work it was developed analytical methodologies for investigation of biosynthesis of bis-phenylpropanoyl amides, using labeled precursors in the culture medium. The effect of different nitrogen sources on the bis-phenylpropanoyl amides production was also evaluated. These amides are reported as antiparasitary compounds and they also showed activity against gram-positive Bacillus subtilis in bioassays conducted at LaBioMMi (DQ/UFSCar). The analytical methodologies developed were based on High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Mass Spectrometry techniques, mainly electrospray ionization (ESI) and MS/MS. Using the methodologies developed for preparative liquid chromatography it were isolated the bis-phenylpropanoyl amides, brasiliamide A and B and other secondary metabolites co-produced. Liquid chromatography coupled with mass spectrometry techniques allowed fragmentation studies which lead to selective detection experiments of brasiliamides in mediums enhanced with different nitrogen sources. The quantitative analysis (HPLC/UV-MS/MS) indicated great influence of the amino acid L-phenylalanine on the bis-phenylpropanoyl amides production. From these results, the biosynthesis of the phenylapropanoids was investigated using [2-13CPhe]. The RMN 13C and HPLC/UV-MS analysis showed the incorporation of two amino acid units on brasiliamides structure formed by the phenylpropanoids pathway, which is uncommon in fungi. The first phenylpropanoid pathway step was evaluated throw using enzymatic extract with Phenylalanine ammoniolyase (PAL). The HPLC/UV analysis indicates the formation of cinnamic acid from Lphenylalanine. / ESTUDOS BIOSSINTÉTICOS DE AMIDAS BIS-FENILPROPANOÍDICAS PRODUZIDAS PELO FUNGO Penicillium brasilianum, UM ENDOFÍTICO DE Melia azedarach. Foi o título do trabalho no qual foram desenvolvidas metodologias de análise para a investigação da biossíntese de amidas bisfenilpropanoídicas, pela adição de precursores isotopicamente marcados ao meio de cultura e otimização da produção destas amidas pelo micro-organismo quando submetido à variadas fontes nitrogenadas. As amidas, substâncias relatadas como bons antiparasitários, apresentaram também atividade contra a bactéria gram-positiva Bacillus subtilis. As metodologias de análise desenvolvidas foram baseadas em cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e técnicas de espectrometria de massas com ionização por Electrospray (ESI). A utilização da técnica de cromatografia líquida em escala preparativa permitiu o isolamento das amidas bis-fenilpropanoidicas, brasiliamida A e B e ainda, metabólitos secundários co-produzidos com estes compostos. A utilização do acoplamento entre as metodologias de análise LC/MS permitiu, através de estudos de fragmentação MS/MS, determinar condições otimizadas para a detecção seletiva das amidas nos meios de cultura, enriquecidos com diferentes fontes nitrogenadas. As análises quantitativas por HPLC/UV-MS/MS indicaram que o aminoácido L-fenilalanina intensifica a produção das brasiliamidas no extrato fúngico, e, a partir destes resultados, a rota biossintética dos fenilpropanóides produzidos pelo fungo P. brasilianum foi avaliada com a adição de [2-13C-Phe]. As análises dos extratos enriquecidos com aminoácido isotopicamente marcado via RMN 13C e HPLC/UV-MS, indicaram a incorporação de duas unidades do aminoácido L-fenilalanina na estrutura das brasiliamidas e a rota biossintética foi estabelecida a partir do caminho geral dos fenilpropanóides, metabólitos pouco reportados em fungos. A primeira etapa da rota biossintética foi avaliada usando extratos de ensaios enzimáticos com a enzima Fenilalanina Amônioliase (PAL), onde se visualizou a formação do ácido cinâmico a partir do aminoácido Phe através de monitoramento por HPLC/UV.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2421.pdf: 6588064 bytes, checksum: 002b104af419727d81cefcf85c47c6dd (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Universidade Federal de Sao Carlos / Some phytopatogenic fungi found in Cupressus species produces phytotoxins very aggressive to the host plant. Surprisingly, these toxins are diterpenoids structures, as well as some endogenus metabolites in Cupressus species. This fungi ability appears to be a specialized strategy in the association fungi-plant. These observations motivated the development of the present work, which relates the isolation of microorganisms associated to the species Cupressus lusitanica, and to its study, aiming a correlation of the chemical profile among the organisms involved in this association. During two collects of plant material from an exemplar found in the campus of the UFSCar, five endophytic fungi had been isolated and called NICL1-5. A preliminary identification indicated that possibly four of them belong to the Xylaria genus, and one to the Guignardia genus (NICL4). The analysis with GC-MS had detected three isocoumarins (mellein, mellein methyl ether, 5- formylmellein), as well as an eremophilane sesquiterpene (valencene) in extracts of NICL3 fungi. From the extracts of the same fungi, had been obtained three eremophilanes sesquiterpenes (two news in literature) by the use of classical methodologies of chromatography. These compounds had been identified using a series of NMR data in 1D and 2D. From the study of the secondary metabolites of NICL5 had been obtained ergosterol, sorbitol and three cytochalasins (cytochalasin C, cytochalasin D and cytochalasin Q). The metabolism if NICL5 had also been studied, when free amino acids were added in the culture medium. By the analysis with HPLC-MS significant alterations in the NICL5 metabolism had been detected, as a possible induction of the biosynthesis of a new cytochalasin, from the amino acid tryptofane. The analysis of the plant material indicated the presence of biflavonoids and some diterpenes. However, these compounds had not been detected in fungi extracts, being identified only sesquiterpenes. / Alguns fungos fitopatogênicos a Cupressus produzem fitotoxinas bastante agressivas à hospedeira. Surpreendentemente, essas fitotoxinas são, em geral, de estruturas diterpenoídicas, assim como vários metabólitos endógenos nas espécies de Cupressus. Essa habilidade mostrada pelo fungo parece ser uma estratégia bastante especializada de associação fungo-planta. Essas observações motivaram o desenvolvimento do presente trabalho, o qual se refere ao isolamento de microrganismos associados à espécie Cupressus lusitanica, e o seu estudo visando uma correlação do perfil químico entre os organismos envolvidos nessa associação. Durante duas coletas de material vegetal a partir de um indivíduo encontrado no campus da UFSCar, foram isolados cinco fungos endofíticos, denominados NICL1-5. Identificação preliminar indicou que possivelmente quatro deles pertencem ao gênero Xylaria e um ao gênero Guignardia (NICL4). Através de análises por CG-EM, detectouse três isocumarinas (meleína, éter metílico da meleína e 5-formil meleina), bem como um sesquiterpeno eremofilano (valenceno) em extratos do fungo NICL3. Dos extratos deste mesmo fungo, foram obtidos três sesquiterpenos eremofilanos (sendo dois novos na literatura), usando metodologias clássicas de cromatografia. Esses sesquiterpenos foram identificados usando uma série de dados de RMN em 1D e 2D. Do estudo dos metabólitos secundários de NICL5 foram obtidos o ergosterol, o sorbitol e três citocalasinas (citocalasina C, citocalasina D e citocalasina Q). Foi estudado também o metabolismo de NICL5 frente à adição de aminoácidos livres ao meio de cultura. Usando análises por CLAE-EM, detectaram-se significantes alterações no metabolismo de NICL5, como uma possível indução da biossíntese de uma nova citocalasina, a partir do aminoácido triptofano. As análises do material vegetal indicaram a presença de biflavonóides e vários diterpenos. Porém, esses compostos não foram detectados nos extratos fúngicos, sendo identificados apenas sesquiterpenos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2881.pdf: 3532657 bytes, checksum: 5670ee3071139d4a77feaf760225b2f8 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Studies about interaction between microorganisms and plants are focused mainly in the vegetal tissues like roots, steam and leaves. Fruits are a right target for microorganism attacks. Nevertheless, endophytic microorganisms isolated from fruits, seems to be not so explored in chemical point of view. Thus, in this work, it was developed the chemical study about the metabolism referred to endophytic microorganisms from edible fruits, commonly consumed in Brazil: banana, pear, apple and guava fruit. Through HPLC/UV analysis, it were realized and compared, the isolated microorganisms metabolic development, in different media cultures. It was included the media with the proper host fruits. The indolic alkaloid n-acetiltryptamine was isolated from a extract of the bacteria associated to the pear fruit (BP1). From the extracts of guava fruit endophytic fungus, Cladosporium uredinicola (FG1), it were isolated four new depsides in literature: 3-hidroxi-2,5-dimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate (D1), 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate(D2), 3-hidroxi-2,5- dimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D3) e 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6- hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D4). The identification of these metabolites was performed according to the respective data from RMN 1 D and 2D, and MS of high and low resolution. It was checked the MIC intervals of D1, D3 and D4 against five tested bacteria. It was realized the bactericide activity of D1 in a concentration of 25μg/mL against Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. It was also verified the photosynthesis inhibitory activity of depsides D1 and D3 produced by the fungus. The fungus C.uredinicola, showed a great depsides production ability. However, this production showed signifcants alterations when fenolic substrates were given to the fungus, in a usual culture media. The estimative of D3 and D4 production curve was also established. The LC-MS/MS technique use, allowed the selective depsides D3 and D4 detection in guava fruit extract, in low concentration ranges. / Estudos envolvendo a interação entre micro-organismos e plantas enfocam predominantemente tecidos vegetais como raízes, caules e folhas. Embora os frutos sejam alvos fáceis de ataques microbianos, micro-organismos endofíticos de frutos parecem não ser tão explorados do ponto de vista químico. Sendo assim, neste trabalho, buscou-se enfatizar o estudo químico do metabolismo referente à microbiota endofítica de frutos comestíves popularmente consumidos no Brasil, a banana, a pêra, a maçã e a goiaba. Através de análises por HPLC/UV, foram verificados e comparados os desenvolvimentos metabólicos, em diferentes meios de cultura, dos micro-organismos isolados, incluindo àqueles constituídos com as próprias frutas hospedeiras. Foi isolado o alcalóide indólico Nacetiltriptamina a partir de um extrato da bactéria associada à pêra (BP1). Dos extratos do fungo Cladosporium uredinicola (FG1), associado à goiaba, foram isolados quatro novos depsídeos na literatura: 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,5- dimetilfenila (D1), 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D2), 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoato de 3- hidroxi-2,5-dimetilfenila (D3) e 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi- 2,4-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D4). A identificação destes metabólitos foi realizada de acordo com os respectivos dados de RMN 1 D e 2D e EM de alta e baixa resolução. Foram verificados os intervalos de MIC para D1, D3 e D4, frente a cinco bactérias testadas, destacando-se a atividade bactericida de D1, a 25μg/mL, contra Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis. Verificou-se também a atividade inibitória da fotossíntese de D1 e D3. Contudo, o fungo C.uredinicola, mostrou-se como um potente produtor de depsídeos. Esta produção mostrou significativas alterações quando compostos fenólicos foram administrados ao fungo junto ao meio de cultura usual de crescimento. Foi também estabelecida a estimativa da curva de produção para os metabólitos D3 e D4 produzidos pelo fungo. A utilização da técnica LC-MS/MS permitiu a detecção seletiva dos depsídeos D3 e D4 em extrato da fruta goiaba em baixas faixas de concentração.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3297.pdf: 4903073 bytes, checksum: cbdd29ac2b2d99c76de709a3b4226f39 (MD5) Previous issue date: 2010-10-08 / Universidade Federal de Sao Carlos / Was conducted the study of chemical constituents volatiles and fixed of endophytes fungi. For this, we used the Penicillium griseoroseum, Penicillium brasilianum, Xylaria (NICL3) and different species of the genus Trichoderma, was also carried out a study of host plants, such as Cupressus lusitanica and Melia azedarach. Through analysis by GC-MS and methodologies for calculations of retention indices were identified monoterpenes, sesquiterpenes and diterpenes in the oils of plant and fungus. Compounds similar to essential oils of plants and associated microorganisms led to believe in the existence of biochemical interactions. Transesterification acid reactions was used for extraction of lipid compounds that were identified, characterized and quantified by techniques GC-MS, ¹H NMR and GC-FID. Profiles of methyl esters of fatty acids were found varied according to the species used, leading to mounting a chemo-taxonomic classification. Data quantification according to EN 14 103 showed that two endophytic fungi can be considered a promising source of biofuels. Antifungal assays of essential oil of Cupressus lusitanica were performed against endophytes be showing the importance of volatile compounds in the plant-endophytic microorganism. / Foi realizado o estudo dos constituintes quimicos voláteis e fixos de fungos endofíticos. Para isto, foram utilizados os fungos Penicillium griseoroseum, Penicillium brasilianum, Xylaria (NICL3) e conservas de diferentes espécies do gênero Trichoderma, além de ser realizado também o estudo de plantas hospedeiras, como Cupressus lusitanica e Melia azedarach. Através de análises por GC-MS e metodologias de cálculos de índices de retenção, foram identificados monoterpenos, sesquiterpenos e diterpenos nos óleos essenciais tanto da planta como dos fungo endofíticos. Compostos semelhantes ao óleos essencial da planta e microorganismo associados levaram a crer na existência de interações bioquímicas. Reações de transesterificação ácida foi utilizada para extração de compostos lipídicos, que foram identificados, caracterizados e quantificados pela técnicas de GC-MS, GC-FID e RMN ¹H. Perfis de ésteres metílicos de ácidos graxos diversificados foram encontrados de acordo com a espécie utilizada, levando a montar uma classificação quimio-taxonômica. Dados de quantificação de acordo com a norma EN 14 103 mostraram que dois fungos endofíticos podem ser considerados uma fonte promissora de biocombustíveis. Ensaio anti-fúngicos do óleo essencial de Cupressus lusitanica foram realizados contra fungos endofíticos associados mostrando haver importância dos compostos voláteis na relação plantamicroorganismo endofítico.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3601.pdf: 23843273 bytes, checksum: 9749b85bea7922b896f2c98d31db0fc3 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Universidade Federal de Minas Gerais / Alternanthera brasiliana is widely used by Brazilian people as a folk medicine for the treatment of numerous diseases. However, little is known about its chemical composition and the microorganisms that live in association with it. This work proposed the use of dereplication strategies to establish a correlation between chemical compounds present in the plant and the antibiotic activity associated with it. These strategies were also used for study endophytic micro-organisms associated with this plant, since the metabolites present in plant tissues are often result of interaction between plants and different factors present in their habitat, such as micro-organisms. 50 strains of endophytic micro-organisms associated to Alternanthera brasiliana were isolated. High-Throughput Screening strategies, which envolved analytical techniques as LC-PDA-MS, LC-PDA-MS/MS, LC-SPE-NMR and antibiosis assays allowed identification of antibiotic compounds present in the A. brasiliana stems. These compounds are member of oxylipins group, among which we highlight the 13-Z,E-KODE, 13-E,E-KODE, 9-E,Z-KODE and 9-E,EKODE. Furthermore, were identified some depsipeptides compounds produced by a strain of Fusarium fungus, isolated as endophyte of A. brasiliana. Beauvericin, which is one of these compounds , is known for its antibiotic and insecticide activities. This compound was also found in the plant extracts, suggesting that endophyte microorganism could play a role in producing antibiotic compounds inside plant tissues. / A planta Alternanthera brasiliana é popularmente conhecida por suas diversas atividades biológicas. Assim, o presente trabalho pretende contribuir com o uso de estratégias de desreplicação a fim de estabelecer uma correlação entre os compostos químicos presentes nesta planta e a atividade antibiótica associada a ela. Além disso, essas estratégias de desreplicação foram utilizadas para o estudo dos micro-organismos endofiticos associados a esta planta, uma vez que os metabólitos secundários presentes nos tecidos das plantas muitas vezes são resultado da interação desta planta com diversos fatores presentes em seu habitat, e dentre eles a interação com microorganismos merece destaque. Foram isoladas 50 cepas de micro-organismos endofiticos associados à planta Alternanthera brasiliana. O uso de abordagens de High Throughput Screening aliadas a técnicas analíticas como LC-PDA-MS, LC-PDA-MS/MS, LC-SPE-NMR e ensaios de antibiose permitiram a identificação dos compostos antibióticos presentes no caule de A. brasiliana. Esses compostos pertencem a classe das oxilipinas, dentre os quais se destacam o 13-Z,E-KODE, 13-E,E-KODE, 9-E,Z-KODE e 9-E,E-KODE. Tambem foram identificados compostos da classe dos depsipeptídeos nos extratos de uma cepa do gênero Fusarium, isolada como endofítico de A. brasiliana. Dentre os depsipeptídeos encontrados, a beauvericina estava presente em grande quantidade no extrato deste micro-organismo. Este composto, conhecido por suas atividades antibiótica e inseticida, foi encontrado também no extrato da planta, sugerindo que o micro-organismo endofítico poderia estar produzindo compostos desta classe no interior dos tecidos da planta, onde ele está alojado.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5703.pdf: 9636340 bytes, checksum: f0c2d44d2cef3dc3b41ae4d5b56d8d1c (MD5) Previous issue date: 2011-08-05 / Universidade Federal de Sao Carlos / In the present work, the lanostane triterpenes Lanosta-8,24-diene-3β,23-diol and Lanosta-8,23-diene-3β,25-diol were isolated from the basidiomycete Scleroderma sp., an extremely rich source of triterpenes and not yet reported as having it. The molecular structures were completely determined by 1D and 2D NMR and mass spectrometry (MS) analyses with fragmentation mechanisms being also suggested. These and other substrates were considered for terpenoids metabolism study in Xylaria sp., a micro-organism known from previous projects, at the research group LaBioMMi, by living in mutuality with Sapindus saponaria, a saponins producer plant, known for its antifungal metabolites. Different substrates were considered for fungal experiments, including oleanolic acid, isolated from clove and identified by 1H NMR, stevioside, obtained from commercial source, avenacosides A and B from oats, used in its natural way (known for being rich in these glycosides) and the previously isolated lanosterols from Scleroderma sp. As in their habitat, Xylaria fungus has proved to have great glycosides affinity, promoting deglycosylations reactions or even combining them with different sugar patterns. Oleanolic acid was completely consumed by the micro-organism, while lanosterol were fully incorporated into the fungus mycelium. Using high-resolution LC/MS analysis with Q-TOF hybrid analyzer, the metabolites were accurately identified so as some biotransformation products. / No presente trabalho foram isolados os triterpenos lanostanos Lanosta-8,24-diene-3ß,23-diol e Lanosta-8,23-diene-3ß,25-diol do basidiomiceto Scleroderma sp., uma fonte rica em triterpenos e ainda não reportada como produtora destes metabólitos. As estruturas moleculares foram completamente determinadas por RMN 1D e 2D e análises de espectrometria de massas, tendo ainda as fragmentações propostas. Esses e outros substratos foram considerados para o estudo do metabolismo de terpenóides em Xylaria sp., um micro-organismo conhecido de pesquisas anteriores do grupo LaBioMMi por viver em mutualismo com Sapindus saponaria, uma planta rica em saponinas, que são metabólitos conhecidos pelo potencial antifúngico. Diferentes substratos foram utilizados nos experimentos com o fungo, dentre eles o ácido oleanólico isolado do cravo da Índia (com sua estrutura determinada por RMN 1H), steviosídeo, proveniente de fonte comercial, avenacosídeos A e B, utilizados sem isolamento prévio a partir da aveia (a qual é uma fonte rica nesses glicosídeos) e os lanosteróis isolados de Scleroderma sp. Assim como em seu habitat, a Xylaria mostrou grande afinidade pelos glicosídeos, promovendo reações de desglicosilações ou mesmo acumulando-os com diferentes padrões de glicosilação. O ácido oleanólico foi completamente consumido pelo micro-organismo, enquanto que os lanosteróis foram totalmente incorporados ao micélio do fungo. Através de análise em LC/MS de alta resolução com analisador híbrido Q-TOF foi possível determinar com precisão a identidade dos metabólitos utilizados, assim como alguns produtos de biotransformação.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6548.pdf: 4383232 bytes, checksum: 8fc19ea524835c26efc13265b5ea37ad (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Endophytic microorganisms have a great enzymatic potential to biotransformate substances of natural and synthetic origin due to strategies developed during colonization to coexist with the plant in an initial hostile environment. Microbial transformation of Diels-Alder cycloadducts were trailed by the endophyte P. brasilianum using intact cells and resulted in the production of several products (17). These products were identified as products of chlorination (Q4_F2_15), epoxidation (Q1A_CR_16, Q2A_CR_6, Q3A_CR_5), epoxidation and reduction of conjugated double bond (Q2A_CR_5), reduction of conjugated double bond (Q2A_CR_9, Q3A_CR_7_pico2, Q3A_CR_8, Q4A_CR_23), reduction of isolated double bond (Q1A_CR_26), oxidation of allilic methyl group and reduction of conjugated double bond (Q4A_CR_10), reduction of carbonyl and conjugated double bond (Q4A_CR_20), reduction of carbonyl and ether formation (Q5A_CR_15) and finally, reduction of carbonyl group (Q4A_CR_15 e Q5A_CR_18). The reduction of conjugated double bond can be performed by enzymes called Old Yellow Enzymes (OYE), also known as enoate reductase enzymes. The products of carbonilic or double bond reduction were also synthesized chemically and the enantioselectivity of both in vitro and in vivo process were compared. In all cases, microbiological transformations were more enantioselectivity. / Devido às estratégias usadas para a colonização do hospedeiro e à convivência com a planta em um ambiente inicialmente hostil, os micro-organismos endofíticos possuem um grande potencial enzimático para biotransformar substâncias de origem natural e seus análogos sintéticos. A transformação dos cicloadutos de Diels-Alder feitas pelo endofítico P. brasilianum utilizando-se células intactas resultou na produção de 17 produtos de biotransformação. Esses produtos foram identificados como sendo produtos de halogenação (Q4_F2_15), epoxidação (Q1A_CR_16, Q2A_CR_6, Q3A_CR_5), epoxidação e redução da olefina conjugada (Q2A_CR_5), redução da dupla ligação α, β- insaturada (Q2A_CR_9, Q3A_CR_7_pico2, Q3A_CR_8, Q4A_CR_23), redução da olefina isolada (Q1A_CR_26), oxidação alílica de metila e redução da dupla conjugada (Q4A_CR_10), redução carbonílica e dupla conjugada (Q4A_CR_20), redução carbonílica e formação de éter (Q5A_CR_15) e redução de grupos carbonílicos (Q4A_CR_15 e Q5A_CR_18). As reduções das olefinas pertencentes ao sistema α, β- insaturada podem ter sido catalisadas por enzimas da família Old Yellow Enzymes (OYE), também conhecidas por enoato redutases. Os produtos de redução C=C do sistema α, β- insaturado e redução carbonílica também foram sintetizados quimicamente e a enantiosseletividade de ambos os processos foram comparadas. Em todos os casos, as transformações microbiológicas apresentaram uma maior enantiosseletividade.

Orientador: Maria de Lourdes Corradi da Silva / Coorientador: Ana Flora Dalberto Vasconcelos / Banca: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Roberto da Silva / Banca: Maria Antônia P. Colabone Celligoi / Banca: Luis Octavio Regasini / Resumo: A atividade metabólica fúngica, especialmente nos endofíticos, favorece a secreção de moléculas como antibióticos, pigmentos, enzimas e polissacarídeos, que podem ser aplicadas nas indústrias alimentícia, cosmética, farmacêutica, entre outras. A diversidade química dos exopolissacarídeos (EPS) bem como a possibilidade de sua utilização como substrato para diferentes modificações químicas (carboxilação, sulfatação e metilação) aumentam seu espectro de aplicação. Realizar o cultivo submerso dos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides para a produção de EPS foi o primeiro objetivo deste trabalho. Uma vez obtidos, os EPS foram purificados e quimicamente caracterizados. Sulfatação e ensaio da atividade anticoagulante foram realizados. Os parâmetros concentração de inóculo e tempo de cultivo foram estabelecidos para maior produção dos EPS, por fermentação submersa. Etapas de purificação, por centrifugação, foram efetuadas após análises por cromatografia de exclusão estérica a alta pressão, com detecção por índice de refração (HPSEC/RID). Os EPS purificados [precipitado do C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) e os três sobrenadantes] mostraram-se praticamente isentos de proteínas. A hidrólise ácida e subsequente análise dos hidrolisados por cromatografia de troca aniônica a alta pressão com detecção por amperometria pulsada (HPAEC/PAD) indicaram que apenas o C. gloeosporioidesprec era uma glucana. A análise por cromatografia... / Abstract: Fungal metabolic activity, especially in the endophytic, favors secretion of molecules such as antibiotics, pigments, enzymes and polysaccharides, which can be applicable by food, cosmetic and pharmaceutical industries, and others. The chemical diversity of the exopolysaccharides (EPS), as well as the possibility of their use as substrate for different chemical modifications (carboxylation, sulfation and methylation) increases their application spectrum. Submerged cultivation of the endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides for the production of EPS was the first aim of this study. Once the EPS were obtained, they were purified and chemically characterized. Chemical modification by sulfation and anticoagulant activity assays were performed. Cultivation to obtain EPS were performed in submerged fermentation. The inoculum concentration and incubation time parameters were set in order to obtain a higher amount of EPS. Purification by centrifugation was performed after analysis by high pressure steric exclusion chromatography with refractive index detection (HPSEC / RID). Purified EPS [precipitate of C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) and the three supernatants] proved to be virtually free of protein polysaccharides. Acid hydrolysis and subsequent analysis of the hydrolysates with high performance anionic exchange chromatography with amperometric detection (HPAEC/PAD) indicated that only the C. gloeosporioidesprec was a glucan. Analysis from gas chromatography and mass spectrometry showed a single derivative, 1,3,5-tri-Oacetyl, 2,4,6-tri-O-methyl glucitol with mass fragments (m/z 118, 161, 203, 234.1) consistent with a (1→3)-glucan. FT-IR spectra showed absorption bands typical from carbohydrate and signals in the digital region at 926 cm-1 and 820 cm-1, typical of polysaccharides in the α- configuration. These results were... / Doutor