Made available in DSpace on 2014-06-12T16:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4141_1.pdf: 1720990 bytes, checksum: 5e8e50cbfc6284c1ac5f25ade0f3d555 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa de compostos químicos biologicamente ativos para fins terap êuticos em plantas utilizadas na medicina popular e em seus micro -organismos endofíticos tem enriquecido as opções terapêuticas com novos fármacos antinflamatórios, antimicrobianos, antitumorais, entre outros. Em busca de soluções para conter o avanço da multirresistência microbiana, o presente trabalho buscou isolar e avaliar a bioatividade dos endofíticos de Eugenia uniflora L., pitanga, além de confirmar a eficácia antimicrobiana dos extratos de folhas da mesma planta. 43 fungos, 7 bactérias e uma actinobactéria foram isolados das folhas de três exemplares da pitangueira, os quais, foram testados frente às bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, leveduras de interesse clínico, fungos filamentosos e cepas de Staphylococcus aureus isoladas no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco, algumas com perfil de multirresistência. Os fungos endofíticos apresentaram atividade antimicrobiana para pelo menos um dos patógenos testados, com destaque para atividade frente a Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis e Escherichia coli. A produção de enzimas como amilase, celulase e protease também foi avaliada. A actinobactéria, Streptomyces sp.UFPEDA 968 apresentou os melhores resultados principalmente contra bactérias Gram-negativas como Shigella flexneri, Bacillus subtilis e para as cepas multirresistentes, foi conduzida ao processo de fermentação, a fim de selecionar o melhor tempo, meio de cultura, temperatura e pH para produção dos metabólitos secundários bioativos. Foi realizada a extra ção dos referidos metabólitos utilizando diferentes solventes, tanto do líquido fermentado como da biomassa celular, revelando o acetato de etila como melhor solvente, e a presença dos compostos bioativos apenas no líquido fermentado. Um estudo fitoquímic o comparativo foi realizado entre o extrato da planta e o extrato de Streptomyces sp. UFPEDA 968, apresentando flavonóides diferentes, ausência de alcalóides e taninos nos dois referidos extratos. A presença do esteróide β- sitosterol foi encontrada nos dois extratos. Entretanto, esta diversidade de vias metabólicas secundárias ressalta a importância da pesquisa destas duas fontes de metabólitos secundários biologicamente ativos

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-10T21:30:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Fungos fitopatogênicos são aqueles que, assim como endófitos, habitam no interior dos tecidos vegetais. No entanto, os micro-organismos denominados como fitopatogênicos, diante de estresses bióticos e abióticos, tornam-se patógenos e causam doenças nas plantas por meio de distúrbios em seu metabolismo celular. A família Cactaceae possui uma fisiologia propícia para o surgimento de doenças, a incidência de fungos fitopatogênicos é alta devido a sua fisiologia, por apresentarem caule, ramos e cladódios suculentos. O controle das doenças tem sido feito principalmente por meio da utilização de defensivos agrícolas, produtos como inseticidas, fungicidas, herbicidas, vermífugos e solventes. Porém, diante dos prejuízos causados por esses produtos de natureza química, tem levantado uma preocupação com a saúde e o meio ambiente e alternativas estão sendo procuradas para substituir o uso desses produtos. Entre as alternativas, encontram-se os fungos isolados de plantas da Caatinga, dentre elas os cactos. Esses fungos isolados das partes aéreas dos vegetais, denominados fungos endofíticos têm despertado o interesse da comunidade científica, especialmente por seus potenciais na produção de metabólitos. O presente estudo objetivou selecionar fungos endofíticos de cactáceas crescendo em áreas da Caatinga que estão depositados na Micoteca URM-UFPE quanto à atividade antagônica a fungos fitopatogênicos isolados de palma forrageira (Nopalea cochenillifera). Foram testados 20 espécies de fungos endofíticos frente a 10 isolados de fitopatógenos da palma forrageira. O potencial antagônico foi analisado por três parâmetros: inibição, parasitismo e competição. O antagonismo por inibição foi o mais expressivo, contando com 17 espécies de endófitos com potencial inibitório. As melhores espécies foram Aspergillus tamarii e Penicillium griseofulvum que inibiram todos os isolados de fitopatógenos utilizados no teste. Além destas, A. niger, A. ochraceus, A. parasiticus, A. versicolor, Cladosporium sphaerospermum, P. chrysogenum, P. commune e Purpureocillium lilacinum que obtiveram 90% no potencial de inibição. Trichoderma longibrachiatum obteve resultado expressivo, porém, apresentou apenas antagonismo por parasitismo. Todas as 20 espécies de fungos endofíticos isolados de cactáceas depositadas na Micoteca URM-UFPE mostraram-se eficientes na produção de quitinase. Aspergillus parasiticus URM6868 foi o fungo endofítico que apresentou maior atividade 4,28 (U/mL). / Phytopathogenic fungi live within internal plant tissues like endophytic fungi. However microorganisms phytopathogenic when when they are affected by biotic and abiotic stresses, these become pathogens and cause disease in plants through disturbances in their cellular metabolism. The Cactaceae family has a favorable physiology to the emergence of diseases, the incidence of pathogenic fungi is high due to their physiology, presenting stem, branches and succulent cladodes. The disease control has been done mainly through the use of pesticides. Such as insecticides, fungicides, herbicides, wormers and solvents. However, the damage caused by these products of chemical nature, a concern have been raised about health and environment and the alternatives are being sought to replace the use of these products. Amongst the alternatives are the fungi isolated from Caatinga's plants, among them fungi from cactaceae. These fungi isolated from the aerial parts of the plant, called endophytes have awoken the interest of the scientific community, especially for its potential in the production of metabolites. This study aimed to select endophytic fungi isolated from Caatinga's cactaceae that are deposited in the URM Culture Collection- UFPE with antagonistic activity to pathogenic fungi isolated from the cacti (Nopalea cochenillifera). Twenty species of endophytic fungi against 10 isolated of pathogenic fungiwere tested. The antagonistic potential was analyzed by three parameters: Inhibition, parasitism and competition. Antagonism by inhibition was the most expressive, presented 17 species of endophytic with inhibitory potential. The best species were Aspergillus tamarii and Penicillium griseofulvum with 100% of inhibition. Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus versicolor, Cladosporium sphaerospermum, Penicillium chrysogenum, Penicillium commune and Purpureocillium lilacinum showed 90% of inhibition. Trichoderma longibrachiatum obtained significant results, however, showed only antagonism by parasitism. All 20 species of endophytic fungi isolated from cactus deposited in the URM Culture Collection -UFPE were effective in producing chitinase. Aspergillus parasiticus URM 6868 was the endophytic fungus that demonstrated higher activity 4.28 (U / mL).

Orientador: Gláucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-16T15:25:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molina_Gustavo_M.pdf: 3663264 bytes, checksum: 94506067795fea82250b3e7365a128c0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi efetuar estudos de biotransformação de monoterpenos para a obtenção de compostos de aromas naturais, ou bioaromas, enfatizando os processos bioquímicos envolvidos nos procedimentos empregados para possíveis aplicações industriais. Assim, o estudo se iniciou com 70 linhagens, isoladas em uma planta de processamento de suco de laranja e selecionadas em um estudo prévio pois mostraramse capazes de utilizar este R-(+)-limoneno como única fonte de carbono. Estes microorganismos foram testados quanto a sua capacidade de biotransformar este monoterpeno em compostos de aroma. Dentre todas as linhagens potencialmente degradantes do R- (+)-limoneno, apenas a linhagem LB285JLB mostrou acúmulo significativo de metabólito de interesse em concentração que justifique estudos de otimização. A seguir, o método de Superfície de Resposta foi empregado para otimizar os principais parâmetros do processo de produção de biomassa desta linhagem, utilizando glicerol como fonte de carbono. Dentre os parâmetros analisados, três (concentração de substrato, temperatura e agitação) influenciaram significativamente (p < 0,10) a produção de biomassa da linhagem LB285JLB, dentro das faixas estudadas. A otimização dessas variáveis por um Delineamento Composto Central Rotacional revelou que as condições ótimas para a fermentação foram 6-9 g.L-1 de glicerol, temperatura entre 35-40 °C e agitação de 230 a 300 rpm. Finalmente, estudos preliminares de prospecção do potencial dos microorganismos endofíticos isolados do Baru (Dipteryx alata Vog.), visando o desenvolvimento de processos biotecnológicos de interesse industrial. Até o presente momento os trabalhos conduzidos demonstraram que as linhagens endofíticas podem ter aplicação potencial em processos de produção de bioaromas a partir da biotransformação de monoterpenos, juntamente com a co-produção de enzimas. Esses resultados abrem precedentes para que novas pesquisas sejam consideradas a fim de determinar o potencial deste nicho de micro-organismos / Abstract: The objective of the present work was to study the biotransformation of monoterpenes to obtain natural flavor compounds (bioflavors), focusing the biochemical processes involved in the procedures investigated for possible industrial applications. Therefore, the study started with 70 strains, isolated in a previous study from a citrus processing plant and capable of use R-(+)-limonene as sole carbon and energy source. These microorganisms were tested for their ability to biotransform this monoterpene on flavor compounds. Among the strains potentially degrading of R-(+)-limonene, just the strain LB285JLB showed significant accumulation of interest metabolite concentration which could justify optimization studies. Subsequently, the Response Surface Methodology was employed to optimize the main parameters of the process of LB285JLB biomass production, using glycerol as carbon source. Only three (glycerol concentration, temperature and agitation) of all parameters tested influenced significantly (p < 0.1) the biomass production. TheT optimization of these variables applying a Central Composite Design revealed that the optimal biotrasformation conditions were 6-9g.L-1, 35-40 °C and 230-300 rpm. Finally, preliminary propection studies evaluating the potential of endophytes isolated from Baru (Dipteryx alata Vog.), for the development of biotechnological processes of industrial interest. To date, the studies conducted have shown that endophytic microorganisms may have potential application in biotransformation process for bioflavors production, and also should be considered with process of enzymes co-production. These results encourages that further researchs should be considered to determine the potential of these microorganisms / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-07-15T16:37:00Z No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T17:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T17:43:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T17:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Edson Luís Marcon.pdf: 85655512 bytes, checksum: 1570974113b4b5ca83d06469e2e07f74 (MD5) Previous issue date: 2013-06-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A total of 282 endophytic fungi were collected from these two plants, which were classified into 19 groups according to their morphological characteristics. Of these groups, 12 had their genus identified (Penicillium, Fusarium, Colletotrichum, Guignardia, Phomopsis, Cephalosporium, Bionectria, Xylaria, Aspergillus, Lirula, Pestalotiopsis and Trichoderma). Five strains (Penicillium, Fusarium, Cephalosporium, and two Xylaria) were selected for large-scale culture, whose extracts were fractionated. Fiveisolatedsubstanceswereidentified(austdiol19-20epoxycytochalasin Q, cytochalasin D, 7-decloro griseofulvin and 5-methoxycarbonyl-melein), one of which – austdiol – was produced in large quantities by a fungus of the Fusarium genus, which is the first report of this substance being produced by a fungus of the Hypocreales class. The endophytic fungi proved be a good source of substances with biological activity. / Um total de 282 fungos endof´ıticos foram coletados nas duas plantas, que foram classificados em 19 grupos, de acordo com suas caracter´ısticas morfol´ogicas. Destes, 12 grupos tiveram o gˆenero identificado (Penicillium, Fusarium, Colletotrichum, Guignardia, Phomopsis, Cephalosporium, Bionectria, Xylaria, Aspergillus, Lirula, Trichoderma e Pestalotiopsis). Cinco cepas (Penicillium, Fusarium, Cephalosporium, e duas Xylaria) foram selecionadas para cultura em larga escala, cujos extratos foram fracionados. Cinco substˆancias isoladas foram identificadas (austdiol, 1920 epoxi citocalasina Q, citocalasina D, 7-decloro griseofulvina e 5-metoxicarbonilmele´ına), sendo que uma delas – austdiol – foi produzida em grande quantidade por um fungo do gˆenero Fusarium, sendo esta o primeiro relato desta substˆancia sendo produzida por um fungo da classe Hypocreales. Os fungos endof´ıticos se mostraram uma boa fonte de substˆancias com atividade biol´ogica.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-21T19:34:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Elissandro Banhos.pdf: 3415140 bytes, checksum: 18e4f7c6e72fc527d89f8b5250bd1035 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-21T19:35:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Elissandro Banhos.pdf: 3415140 bytes, checksum: 18e4f7c6e72fc527d89f8b5250bd1035 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-21T19:35:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Elissandro Banhos.pdf: 3415140 bytes, checksum: 18e4f7c6e72fc527d89f8b5250bd1035 (MD5) Previous issue date: 2016-07-06 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Fungi genus Pestalotiopsis can be found as parasites or endophytes, being quite disseminated to the various habitats. Bioprospecting of Pestalotiopsis spp. have demonstrated the potential of this strains in obtaining bioactive compounds as anticancer or antimicrobial, that due the diversity of secondary metabolites are capable of producing. At work we have expanded knowledge about genomics, proteomics and metabolomics Pestalotiopsis strains isolated from Amazonian environments. They were reactivated 33 Pestalotiopsis strains of LaBMicra collection of the Federal University of Amazonas - UFAM. Were evaluated about their morphological diversity (conidia structure), genetic (Its1 and Its2 / AFLP), protein (SDS-PAGE) and they secondary metabolites were evaluated for chemical profile obtained by mass spectrometry (APCI-MS ). Secondary metabolites were tested against tumor cells SKMEL-19, CAL-27, ACP02 and against strain of C. albicans CFAM - 1342, associating the results with yours metabolomic profile. The most promising strain was subjected to mutagenesis by UV (UVC) light induction. The 33 strains of Pestalotiopsis spp. were isolated from nine plant genera as Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., Pinus sp., and associated Basidiomycetes. The most representative species were P. mangiferae, P. microspora and P. clavispora with eight, seven and six strain respectively. The extracts did not showed promising results against any of the tumor cells and nine extracts showed activity against C. Albicans. The chemical profile assessed over 60 days showed that the strain P. microspora (P12 / AnspCg1.1.3a) isolated of Rollinia sp. initiates the stationary growth phase of 20 days of cultivation, and the cultivation time best for obtaining bioactive compounds is 30 days. The analyzes of the reduction of the carbon source, growth of mycelial mass and the pH of the fortified protein profile results confirmed that the strain arrive the metabolic apex with 25 days.The production of mutant strains PX was efficient, but the strains did not show anticandida activity in their extracts. The secreted protein profile was also modified proteins of 50 to 140 kDa being expressed with greater intensity. Through large-scale cultivation was possible positive evaluation by bioautography and CCDP isolation subfractions which analyzed by 1H and 13C NMR showed the presence of 3-phenyl-propionic acid molecule known for its ecological role in protecting the host against plant pathogens. / Fungos do gênero Pestalotiopsis podem ser encontrados como parasitas ou endófitos, sendo bastante disseminados aos diversos habitats. A bioprospecção de Pestalotiopsis spp. têm demonstrado o potencial deste gênero na obtenção de compostos bioativos como anticancerígenos e antimicrobianos, isso por conta da diversidade de metabólitos secundários que são capazes de produzir. No trabalho ampliou-se o conhecimento a cerca da genômica, proteômica e metabolômica de linhagens de Pestalotiopsis isolados de ambientes Amazônicos. Foram reativadas 33 linhagens do gênero Pestalotiopsis da Coleção do LaBMicra da Universidade Federal do Amazonas - UFAM. Foram avaliadas com relação a sua diversidade morfológica (estrutura de conídios), genética (Its1 e Its2/AFLP), proteica (SDS-PAGE) e seus metabólitos secundários foram avaliados através do perfil químico obtido por espectrometria de massas (APCI-MS). Os metabólitos secundários foram ensaiados frente a células tumorais SKMEL-19, CAL-27, ACP02 e frente a cepa de C. albicans CFAM – 1342, associando os resultados ao perfil metabolômico. A linhagem mais promissora foi submetida a mutagênese por indução de luz ultravioleta (UVC). As 33 linhagens de Pestalotiopsis spp. foram isoladas de nove gêneros vegetais como Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., e Pinus sp., além de associadas a Basidiomycetes. As espécies mais representativas foram P. mangiferae, P. microspora e P. clavispora, com oito, sete e seis linhagens respectivamente. Os extratos das linhagens não apresentaram resultado promissor contra nenhuma das células tumorais e nove extratos apresentaram atividade frente a C. albicans. O perfil químico avaliado ao longo de 60 dias demonstrou que a linhagem P. microspora (P12/ AnspCg1.1.3a) isolada de Rollinia sp. chega a fase estacionária de crescimento com 20 dias de cultivo, e que o melhor tempo de cultivo para a obtenção dos compostos bioativos é 30 dias. As análises da redução da fonte de carbono, crescimento da massa micelial e pH do meio fortaleceram os resultados do perfil proteico confirmando que a linhagem chega ao ápice metabólico com 25 dias. A produção de linhagens PX mutantes foi eficiente, mas as linhagens não apresentaram atividade anticandida em seus extratos. O perfil de proteínas secretadas também foi modificado com proteínas de 50 a 140kDa sendo expressas com maior intensidade. Através do cultivo em larga escala foi possível a avaliação positiva por bioautografia e por CCDP o isolamento de subfrações que analisadas por RMN de 1H e 13C revelaram a presença do ácido 3-fenil-propanóico, molécula conhecida por sua função ecológica na proteção da planta hospedeira contra patógenos.

Orientador: Gláucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-24T20:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Abrahao_MeissaRochaEssenfelder_M.pdf: 2164946 bytes, checksum: 5d4f141c4a784953c0b6ee598b74b6e3 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A biotecnologia é uma área interdisciplinar que tem possibilitado inúmeros avanços no desenvolvimento de processos sustentáveis e na obtenção de novos produtos de interesse industrial. Entre estes exemplos estão os aromas naturais que, atualmente, são preferidos por muitos consumidores e já dominam o mercado em certas regiões como a Europa. Uma das opções biotecnológicas para a obtenção destes compostos ocorre pela biotransformação de terpenos, que são derivados de isoprenos, e substratos amplamente distribuídos na natureza. Estes compostos são classe relevante dentre os compostos de aroma e alguns podem ser obtidos a custos relativamente baixos. Limoneno e ?-pineno, por exemplo, estão disponíveis como subprodutos de indústrias de frutas cítricas e de papel, respectivamente. Estes monoterpenos são considerados substratos ideais para obtenção de derivados oxigenados, os terpenóides, muitos dos quais de grande interesse comercial. Nessa perspectiva, 51 fungos endofíticos das frutas caju (Anacardium occidentale L.), jenipapo (Genipa americana L.), sapoti (Manilkara zapota L.) e camu-camu (Myrciaria dubia), foram isolados durante este trabalho. As linhagens foram também avaliadas quanto ao potencial para biotransformação de limoneno ou ?-pineno como fontes únicas de carbono. A partir deste segundo substrato, destacaram-se dois fungos produtores de verbenona, um dos compostos chave do aroma de alecrim (Rosmarinus officinalis). A produção de verbenona por via biotecnológica mostrou um grande potencial para a continuidade dos estudos, tendo em vista que a concentração obtida foi de, aproximadamente, 200 mg/L após 288 horas de contato com o subtrato ?-pineno. Além disso, outro fungo apresentou produção de álcool perílico a partir da biotransformação de limoneno. Este produto é um terpenóide, cujos mecanismos de proteção contra o câncer já tem sido investigados e reconhecidos, aumentando o interesse na sua pesquisa e produção biotecnológica. No encerramento do trabalho, os três fungos com resultados positivos pra biotransformação de terpenos foram analisados em microscopia óptica para observação de suas morfologias e auxílio na identificação / Abstract: As an interdisciplinary field, biotechnology has allowed several advances for the development of sustainable processes and many achievements concerning production of new compounds with industrial interest. Natural aroma compounds have been frequently prioritized by costumers and dominate a considerable market share in some regions such as Europe, and one of biotechnological routes for obtaining these compounds occurs through the biotransformation of terpenes. These substrates are naturally available compounds derived from isoprene units, and represent a relevant class of aroma compounds, which can be often obtained at relatively low costs. Limonene and ?-pinene, for instance, are available as by-products in citrus and pine industries, respectively. These monoterpenes represent ideal precursors for biotechnological production, leading to their oxygenated derivatives denominated terpenoids, some of which commercially valuable. In this perspective, fifty one endophytic fungi from Brazilian fruits, such as cashew (Anacardium occidentale L.), genipap (Genipa americana L.), sapodilla (Manilkara zapota L.) and camu-camu (Myrciaria dubia) were screened during this work. Furthermore, these fungal strains were tested in the biotransformation of limonene or ?-pinene as sole carbon source. Amongst all fungi, two strains showed noteworthy capability to biotransform ?-pinene into verbenone, key compound of rosemary (Rosmarinus officinalis) aroma. The biotechnological production of verbenone proved to be an interesting strategy with a great future potential, considering that that the concentration of this product reached approximately 200 mg/L after 288 hours of contact with the substrate ?-pinene. Moreover, from the biotransformation of limonene, one fungi produced perillyl alcohol. This important terpenoid presents protection mechanisms against cancer already investigated and recognized. The practical steps achieved in this project also involved the observation of these strains with positive results through optical microscopy, in order to verify their morphology and general characteristics / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Ian Castro-Gamboa / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: O presente trabalho apresenta os resultados obtidos sobre o estudo químico e biológico dos fungos endolíticos N odulisporium sp . e M icroascus sp . associados à alga vermelha Asparagopsis taxiformis . Para tanto, fez - se uso das técnicas cromat ográficas de sepa ração CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência), CG - EM (cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas) e cromatografia em coluna (CC), além da avaliação dos potenciais antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico dos extratos brutos, fraç ões e subfrações de N odulisporium sp . e M icroascus sp. O estudo químico levou ao isolamento de quatro substâncias pertencentes à classe das diidroisocumarinas (substâncias S 1, S 2, S 10 e S 11 ), duas dicetopiperazinas (substâncias S 3 e S 4 ), um composto fenólico ( S 12 ), uma isoflavona ( S 8 ), um derivado hidroxiimino ( S 9 ), uma mistura contendo uma amida ( S 5 ) e um diol vicinal ( S 6 ), além do isolamento de um composto aromático (substância S 7 ), ainda em fase de identificação. As estruturas das substâncias isoladas foram identificadas com base nos dados espectroscópicos de ressonância magnética nuclear uni e bidimensional (RMN de 1 H, RMN de 13 C, TOCSY - 1D, HSQC, HMBC, COSY e HSQC - TOCSY), UV - Vis e espectrometria de massas (EM). C omporta ressaltar que o diol vicinal ( S 6 ) está sendo descrito pela primeira vez na literatura e que as demais substâncias isoladas não haviam sido relatadas para os gêneros Nodulisporium ou Microascus . A avaliação das atividades antifúngica e anticolineste rásica evidenciaram o potencial de bioatividade de extratos e frações de N odulisporium sp . e M icroascus sp, sendo reveladas atividades forte e moderada frente à s enzimas acetilcolinesterase humana e de enguia elétrica. Este é o primeiro estudo químico e biológico relatado na literatura para os endófitos Nodulisporium sp . e Microascus... / Abstract: This work present s results from the chemical and biological study of endophytic fungal strains of Nodulisporium sp and Microascus sp associated to the red alga Asparagopsis taxiformis . Chromatographic separation techniques as HPLC, GC - MS and CC have been used in addition to bioassays for evaluation of the antifungal, anticholinesterasic and cytotoxic potential of crude extracts, fractions and subfractions of Nodulisporium sp and Microascus sp fungal strains. The c hemical study led to the isolation of four dihydroisocoumarins (compounds S1, S2, S10 and S11 ), two diketopiperazines (compounds S3 and S4 ), one phenolic compound ( S1 2 ), one isoflavone ( S8 ), o ne hydroxyl - imino derivative ( S9 ), a mixture containing one amide ( S5 ) and one novel vicinal diol ( S6 ), in addition to one aromatic compound (compounds S7 ) still under structural investigation. Their structures were identified based on 1D and 2D NMR spectroscopic data ( 1 H and 13 C NMR, TOCSY - 1D, HSQC, HM BC, COSY and HSQC - TOCSY), UV - Vis and mass spectrometry (MS) . Compound S 6 is an aliphatic vicinal diol and is herein described as a novel compound whereas the remaining compounds had not been described before neither for Nodulisporium nor Microascus genera. Antifungal and anticholinesterase activities evaluation of extracts and fractions of Nodulisporium sp e Microascus sp evidenced their strong and moderate potential against human and electric eel acetylcholinesterase enzymes. This is the first report on th e chemical and biological studies of endophytic fungi Nodulisporium sp and Microascus sp, associated to the red algae Asparagopsis taxiformis. Their promising results highlight the outstanding chemodiversity of extracts and fractions from such fungal strai ns from marine environment as well as their bioactivity potential. They also evidence the importance of further investigating such fungal strains aiming at rele... / Mestre

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: André Luiz Meleiro Porto / Banca: Ana Helena Januário / Resumo: Os Produtos Naturais desempenham um papel dominante na descoberta e desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de diversas doenças. Com isso, a busca por novas fontes de substâncias bioativas tem se intensificado, com destaque para estudos realizados com organismos e micro-organismos marinhos. As algas vermelhas marinhas (Rhodophyta) são as principais produtoras de metabólitos secundários biologicamente ativos dentre as algas e produzem principalmente substâncias halogenadas. Dentre os micro-organismos, podemos destacar os fungos endofíticos de algas marinhas, pois apresentam alta diversidade de espécies e diversidade estrutural dos metabólitos secundários, os quais têm mostrado potencial antitumoral, antimicrobiano e antifúngico. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo explorar o potencial das algas vermelhas Asparagopsis taxiformis (estágio Falkenbergia) e Pyropia spiralis, bem como de seus fungos endofíticos, como fontes de substâncias bioativas. O estudo de A. taxiformis e de P. spiralis levou à identificação de dezesseis substâncias por CG-EM, como os ácidos eicosapentaenóico e araquidônico, além de nucleosídeos, como a uridina e a timidina, obtidos de A. taxiformis, e a uridina e a inosina, obtidas de P. spiralis. Os extratos brutos e frações das algas estudadas foram avaliados frente ao fungo fitopatogênico Cladosporium sphaerospermum, frente à enzima acetilcolinesterase e frente a linhagens tumorais de carcinoma de ovário (OVCAR-8), adenocarcinoma de có... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Natural Products have a major role in the discovery and development of new drugs used for diseases treatments. Thus, the search for new sources of bioactive compounds has been intensified and studies have increasingly focused on marine organisms and microorganisms. Marine red algae (Rhodophyta) are the major producers of biologically active secondary metabolites among algae, and biosynthesize mainly halogenated compounds. Among microorganisms, we highlight endophytic fungi from marine algae, as they present marked species diversity as well as structural diversity of secondary metabolites. Such metabolites have shown interesting potential as antitumor, antimicrobial and antifungal agents. Therefore, this project aimed to explore the potential of red algae Asparagopsis taxiformis (Falkenbergia stage) and Pyropia spiralis and their endophytic fungi, as novel sources of bioactive compounds. The study of A. taxiformis and P. spiralis led to identification of sixteen compounds by GC-MS, as eicosapentaenoic and arachidonic acids, in addition to nucleosides uridine and thymidine, obtained from A. taxiformis, and uridine and inosine, obtained from P. spiralis. The crude extracts and fractions from the studied algae were evaluated against phytopathogenic fungus Cladosporium sphaerospermum, against acetylcholinesterase enzyme and against tumor cell lines of ovarian carcinoma (OVCAR-8), human colon adenocarcinoma (HCT-116) and human glioblastoma (SF-295). No significant antifungal or ace... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Muitos fatores, como variações sazonais, tipos de tecido vegetal, cultivares e espécies de hospedeiro, tipo de solo, interação com microrganismos benéficos ou patógenos entre outros, afetam a estrutura e a composição da comunidade bacteriana das plantas. A introdução de plantas geneticamente modificadas (PGM) foi somada ao conjunto desses fatores, podendo acarretar efeitos diretos e indiretos sobre a comunidade bacteriana. Cana-de-açúcar é uma cultura de grande importância no Brasil; a área de cultivo está em expansão devido aos incentivos para a produção de álcool. Uma bactéria potencialmente importante para a cultura de cana-de-açúcar é a Methylobacterium, um importante endófito de diversas culturas de interesse econômico e que, em cana-de-açúcar, pode melhorar a germinação de sementes, promover um aumento do peso da planta e da área foliar, além do número de internódios. Dessa forma, o trabalho teve como objetivos: i) avaliar os efeitos da canade- açúcar transgênica resistente a insetos e a herbicida sobre a comunidade bacteriana associada; ii) avaliar se o suposto efeito causado pela cana-de-açúcar transgênica resistente a herbicida deriva diretamente do transgene ou dos tratos culturais diferenciados aos quais a planta transgênica é submetida; iii) avaliar a interação entre Methylobacterium spp. e cana-de-açúcar. Analisando a densidade bacteriana das plantas de cana-de-açúcar convencionais e transgênicas não foi possível constatar diferenças relacionadas à introdução dessas plantas. Analisando somente quanto ao manejo de ambos os experimentos, foi possível observar que diferenças em trato cultural ou manejo de plantas, decorrentes ou não da transgenia, podem influenciar a comunidade bacteriana. Por meio de ARDRA, foi possível observar distribuição diferenciada dos ribotipos com a introdução das PGMs. No experimento realizado somente com plantas transgênicas para resistência a Imazapyr, foi possível notar que, em 17 meses, a presença da planta transgênica e a aplicação do herbicida Imazapyr podem ter resultado na redução da densidade bacteriana associada à rizosfera de cana-de-açúcar. Por meio de DGGE, foi visto que o estado fisiológico da planta foi a maior fonte de variação. Novamente por meio de ARDRA, foram observados ribotipos cuja presença foi afetada pelo cultivo da planta transgênica. Esses ribotipos diferentemente distribuídos poderiam resultar em alterações na atividade bacteriana dessas plantas, uma vez que esses ribotipos podem representar grupos funcionais importantes. A colonização de Methylobacterium spp. em cana-de-açúcar foi analisada por meio de microscopia eletrônica de varredura, reisolamento e microscopia óptica de fluorescência. Foi visto que as linhagens utilizadas colonizam cana-de-açúcar, sendo que os pontos de maior colonização são os flanges cuticulares e as regiões pilosas da raiz. Outros estudos são necessários para o melhor aproveitamento dessa bactéria na cultura de cana-de-açúcar. / Many factors, such as seasonal variations, kinds of vegetal tissue, cultivares and host species, kind of soil, interaction with beneficial or pathogen microorganisms, among others, affect the structure and composition of plants bacterial community. The introduction of genetically modified plants (GMP) was added to the set of these factors, making it possible to cause direct and indirect effects on the bacterial community. Sugarcane is a very important crop in Brazil; the cultivation area is expanding due to incentives to alcohol production. A potentially important bacterium for sugar cane cultivation is the Methylobacterium, which is an important endophyte for several cultures of economic interest and which can improve seed germination in sugar cane, promote an increase of plant weight and foliar area, and also the internodes. Thus, the work had as objectives: i) to assess the effects of transgenic sugarcane resistant to insects and herbicide on the associated bacterial community; ii) to assess if the presumed effect caused by transgenic sugarcane resistant to herbicides derives directly from the transgene or differentiated cultural handlings to which the genetically modified plant is undertaken; iii) to assess the interaction between Methylobacterium ssp. and sugarcane. Analyzing the bacterial density of conventional and transgenic sugarcane plants it was not possible to see differences related to the introduction of these plants. Analyzing only in relation to the handling of both experiments, it was possible to see that differences in cultural wielding or handling of plants derived or not from transgenia can influence the bacterial community. By means of ARDRA, it was possible to see a differentiated distribution of ribotypes with the introduction of GMPs. In the experiment made only with transgenic plants for Imazapyr resistance, it was possible to see that in 17 months, the presence of the transgenic plant and the application of Imazapyr herbicide can bring result regarding the bacterial density reduction associated to sugarcane rizosphere. By means of DGGE, it was seen that the physiological status of the plant was the greatest variation source. Again, by means of ARDRA, ribotypes whose presence was affected by transgenic plant cultivation were observed. If distributed differently, these ribotypes can represent important functional groups. The Methylobacterium ssp. Colonization in sugarcane was analyzed and by means of scanning electronic microscopy, re-isolation, and fluorescence optical microscopy. It was observed that the utilized lineages colonize sugarcane being cuticle flange and perilous regions of root the highest colonization points. Other studies are needed to a better good use of this bacterium in sugarcane culture.

Árvores evolutivas de espécies de Peperomia baseadas nas regiões de ITS e matK foram confrontadas com perfis metabólicos de extratos brutos obtidos por RMN 1H, HPLC-DAD e LC-ESI-MS. A análise de clusters (HCA) e a análise discriminante de componentes principais (DAPC) suportaram em parte os agrupamentos observados por ITS e matK. As principais classes de metabólicos secundários observadas foram policetídeos, meroterpenos, cromenos, fenilpropanoides e amidas, sendo que foram ainda isolados um policetídeo (malabaricona D) de P. megapotamica; o fenilpropanoide elemicina e a lignana tetraidrofurânica diyangambina de P. rotundifolia; e as flavonas 5,6,7-trimetoxiflavona e 4\',5,6,7- tetrametoxiflavona de P. sincorana. As PKS tipo chalcona sintase (CHS) de peperomias, diferiram daquelas de famílias filogeneticamente próximas como Myristicaceae (Virola) e Lauraceae (Aniba). Como muitos meroterpenos de espécies de Peperomia possuem como núcleo básico o ácido orselínico, produto típico de líquens e bactérias, o gene ácido orselínico sintase (OSAS) foi investigado nas plantas e nos 27 fungos endofíticos isolados de espécies de Peperomia (identificados pelas sequências de ITS1-5.8S-ITS2). Foram amplificadas pelo menos uma PKS (NR, HR e PR) em cada uma das linhagens e AOS em várias delas (UR1, UC3, UF1, UF2, UF3, UF4, GC3, NR1, NC1, NC2, NF1, AR1, AC1, AC4, OC1 e OF1). A homologia de 60% da OSAS amplificada de UR1 com a sequência de Streptomyces viridochromogenes é sugestivo de transferência horizontal de bactéria para fungos. / Phylogenetic tree of Peperomia species based on ITS and matK were compared to the metabolic profiling of crude extracts using 1H NMR, HPLC-DAD and LC-ESI-MS. Cluster analysis (HCA) and discriminant analysis of principal componentes (DAPC) supported significantly the clustering observed by ITS and matK. The major classes of secondary metabolites were polyketides, meroterpenes, chromenes, phenylpropanoids and amides and besides, one polyketide (malabaricone D) of P. megapotamica; the phenylpropanoid elemicin and the tetrahydrofuran lignan diyangambin from P. rotundifolia; and the flavones 5,6,7- trimethoxyflavone and 4\',5,6,7-tetramethoxyflavone were isolated from P. sincorana. The PKS chalcone synthase type (CHS) from peperomia, differed from phylogenetically related families Myristicaceae (Virola) and Lauraceae (Aniba). Since several meroterpenes from Peperomia species have the orsellinic acid as an aromatic core, typical of liquens and bacteria, the orsellinic acid (OSAS) was investigate in the plants and 27 endophytes isolated from Peperomia (identified based on ITS1-5.8S-ITS2 sequences). At least one PKS (NR, HR and PR) were isolated from each strains and AOS were isolated from several strains (UR1, UC3, UF1, UF2, UF3, UF4, GC3, NR1, NC1, NC2, NF1, AR1, AC1, AC4, OC1 and OF1). The 60% of homology observed for OSAS amplified from UR1 with that of Streptomyces viridochromogenes is suggestive of a horizontal transferring from bacteria to fungi.