Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-01T14:13:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 11919399 bytes, checksum: 7b65e307cd59fdd0169cabc3a06ca449 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-01T14:13:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 11919399 bytes, checksum: 7b65e307cd59fdd0169cabc3a06ca449 (MD5) Previous issue date: 1999-08-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A presença e a distribuição de bactérias e leveduras em frutos de café, desinfestados superficialmente, foram observadas, ulilizando-se técnicas de microscopia com colorações biológicas e fluorocromo, inclusão em parafina e técnicas imunológicas. As preparações a fresco e de inclusão em parafina possibilitaram observar a existência de um gradiente de distribuição de bactérias e leveduras na polpa do café, com predomínio de leveduras em sua porção mais externa. Foram encontradas, também, bactérias nas sementes de café. A aplicação de fluoresceína diacetato, em cortes a fresco, não se mostrou eficiente, dada a dificuldade de visualização dos microrganismos in situ e a inespecificidade da reação. Os anticorpos específicos, para a bactéria Klebsiella oxytoca, foram obtidos; porém, a aplicação de imunofluorescência usando anticorpos como sonda, para detecção das bactérias,em tecidos de frutos de café, necessita de adaptações. / The presence and distribution of bacteria and yeast in coffee beans disinfected superficially were observed microscopically with biological and fluorochromic dyes, pemianent slides and immunological techniques. Fresh preparations and permanent slides permitted observation of the existence of a distribution gradient of bacteria and yeast within the coffee pulp, with a predominance of yeast in the outer portion. Bacteria were also found in the coffee seeds. Application of fluorescein diacetate in fresh cuts was not found efficient due to difficulty in visualizing the microorganisms in situ and the non specificity of the reaction. Specific antibodies for the bacteria Klebsiella oxytoca were obtained but the application of immunofluorescence using antibodies as probes for the detection of bacteria in coffee bean tissues requires further adaptations. / Dissertação antiga escaneada.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Aline Mequita (alinealmeida@bce.unb.br) on 2016-11-21T16:28:26Z No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-06T18:37:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T18:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Proteases são enzimas, que catalisam a hidrolise das ligações peptídicas. Estas enzimas são aplicadas em diversas indústrias como a alimentícia, farmacêutica, cosmética, de couro e de detergente. São produzidas por animais, plantas e microrganismos. Entre seus produtores encontram-se os fungos endofíticos, que são microrganismos que vivem no interior de plantas de forma simbiótica. Sabendo disso, o objetivo principal deste trabalho foi isolar fungos endofíticos de plantas do cerrado, avalia-los quanto á produção de proteases extracelulares, visando aplicação industrial. Foram isolados 58 fungos de 13 espécies de plantas endêmicas do cerrado. Primeiramente, foi realizada uma triagem para avaliar quais fungos eram produtores de protease, 36 fungos demonstraram halo indicando produção de protease em meio de cultura ágar-leite. Foi realizado ensaio enzimático utilizando azocaseína 0,5% como substrato para avaliar quantitativamente a produção de proteases. Os produtores que demonstraram maior atividade de protease foram os fungos endofíticos codificados como BR, OH03, PT02, PEQ03 e KC01. O fungo BR, apresentou 41 UI/mL de atividade proteolítica, pH ótimo 7,0 e temperatura ótima de 60°C e foi escolhido para dar continuidade ao trabalho. Visando a otimização da produção de protease foram testados meios com diferentes fontes de nitrogênio e carbono, a maior produção de proteases ocorreu no meio contendo peptona, extrato de levedura e glicose. A curva de crescimento mostrou que o melhor dia de produção da enzima foi o 9° dia. A protease foi parcialmente purificada utilizando cromatografia de troca iônica. A fração parcialmente purificada foi caracterizada com atividade ótima em pH 7,0 e 60°C e manteve 100% desta atividade a 60°C por 1 hora. A enzima foi testada como removedor de manchas para a indústria de detergentes melhorando a remoção de manchas quando adicionada a um detergente comercial e demonstrou ser compatível com marcas de detergente para roupas comerciais. ___________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Proteases are enzymes which catalyze the hydrolysis of peptides bonds. These enzymes are applied in various industries such as food, pharmaceutical, cosmetics, leather and detergent. They are produced by animals, plants and microorganisms. Among its producers are the endophytic fungi, which are microorganisms that live inside plants symbiotically. Thus, the aim of this study was to isolate endophytic fungi of the Cerrado biome plants and evaluate the production of extracellular proteases for an industrial application. It was isolated 58 endophytic fungi from 13 different species of endemic plants. First, a screening was performed to evaluate fungi protease producing. 36 fungi has shown halo production using milk agar culture. Enzyme assay was performed using azocasein 0.5% as substrate to evaluate quantitatively the production of proteases. The best producers were endophytes encoded as BR, OH03, PT02, PEQ03 and KC01. Since then BR fungus stood out among them. BR showed 41 IU / mL of proteolytic activity, optimum pH 7.0 and optimum temperature of 60 °C and was chosen. To optimize protease production the medium were tested with different carbon and nitrogen sources. The best production of proteases occurred in a medium containing peptone, yeast extract and glucose. The best day of the enzyme production, based on growth curve curve, was the 9th day. The protease was partially purified using ion exchange chromatography. The partially purified fraction was characterized and showed highest activity at pH 7.0, 60 °C and maintained 100% stability at 60 °C for 1 hour. The enzyme was tested as stain remover detergent industry to improve the spot removal. When added to a commercial detergent, the enzyme demonstrated to be compatible with commercial brands of detergent clothes.

Resumo: No trabalho foi abordado o estudo de extratos do fungo Phomopsis stipata cultivado em diferentes meios de cultura na implementação da metodologia in silico utilizando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução conjugados com a base de dados do dicionário de produtos naturais (http://dnp.chemnetbase.com). Foi realizada a comparação da diversidade na produção metabólica do fungo endofítico quando cultivado em diferentes meios de cultura comerciais e em cereal (milho), através do perfil cromatográfico, assim como avaliação das atividades antioxidante e propriedades de inibição da polimerização do heme. Nos extratos diclorometânicos foram identificadas oito substâncias. No extrato diclorometânico do fungo endofítico, crescido em milho, cinco substâncias foram detectadas, sendo elas: 1- derivado -lactônico; 2- ácido n-hexadecanóico; 3- ácido 16-octadecanóico; 4- di-hexanoato de 2-etilhexila e 5- hexadecanoato de iso-propilodiol. E, para o extrato diclorometânico de P. stipata, crescido em meio batata dextrose, três substâncias foram detectadas, dentre elas: 6- ciclohexen-2-ol- 3,5,5-trimetil-ona; 7- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-benzil e 8- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-isometil. O emprego de CLAE-DAD-EM e espectrometria de massas tandem possibilitou a identificação, diretamente a partir dos extratos brutos do fungo, de seis substâncias que já foram relatadas para outras espécies do gênero Phomopsis e duas substâncias já antes identificadas na espécie Phomopsis stipata, totalizando oito substâncias detectadas. Para o extrato acetato de etila, crescido em extrato de malte, no modo estático, três substâncias foram detectadas, sendo elas: 10- phomopsidina; 11- phomopsilactona e 12- phomosina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work show the study of extracts of the fungus Phomopsis stipata grown in different culture broth in the implementation of in silico methods using gas chromatography coupled to mass spectrometry and high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer for high resolution, combined with the database dictionary of natural products (http://dnp.chemnetbase.com). A comparison of diversity in the metabolic production of endophytic fungus when grown in different culture broth and cereal (corn) by the chromatographic profile was made, as well as assessment of activities of antioxidant properties and inhibition of heme polymerization. In dichloromethane extracts eight substances were identified. In dichloromethane extract of the endophytic fungus, grown in corn, five substances were detected, which were: 1- -lactone derivative; 2- n-hexadecanoic acid; 3- 16- octadecenoic acid; 4- hexanedioic acid, bis(2-ethylhexyl) ester and 5- hexadecanoic acid, 2-hydroxy-1-(hydroxymetil)ethyl ester, And for the dichloromethane extract of P. stipata, grown on potato dextrose broth, three substances were detected, among them:... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ian Castro-Gamboa / Coorientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Miriam Sannomiya / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-19Bitstream added on 2014-06-13T20:59:22Z : No. of bitstreams: 1 ropero_dr_me_araiq.pdf: 1613178 bytes, checksum: 4039eae1665cf85998495d5bfd16da01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No trabalho foi abordado o estudo de extratos do fungo Phomopsis stipata cultivado em diferentes meios de cultura na implementação da metodologia in silico utilizando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução conjugados com a base de dados do dicionário de produtos naturais (http://dnp.chemnetbase.com). Foi realizada a comparação da diversidade na produção metabólica do fungo endofítico quando cultivado em diferentes meios de cultura comerciais e em cereal (milho), através do perfil cromatográfico, assim como avaliação das atividades antioxidante e propriedades de inibição da polimerização do heme. Nos extratos diclorometânicos foram identificadas oito substâncias. No extrato diclorometânico do fungo endofítico, crescido em milho, cinco substâncias foram detectadas, sendo elas: 1- derivado -lactônico; 2- ácido n-hexadecanóico; 3- ácido 16-octadecanóico; 4- di-hexanoato de 2-etilhexila e 5- hexadecanoato de iso-propilodiol. E, para o extrato diclorometânico de P. stipata, crescido em meio batata dextrose, três substâncias foram detectadas, dentre elas: 6- ciclohexen-2-ol- 3,5,5-trimetil-ona; 7- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-benzil e 8- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-isometil. O emprego de CLAE-DAD-EM e espectrometria de massas tandem possibilitou a identificação, diretamente a partir dos extratos brutos do fungo, de seis substâncias que já foram relatadas para outras espécies do gênero Phomopsis e duas substâncias já antes identificadas na espécie Phomopsis stipata, totalizando oito substâncias detectadas. Para o extrato acetato de etila, crescido em extrato de malte, no modo estático, três substâncias foram detectadas, sendo elas: 10- phomopsidina; 11- phomopsilactona e 12- phomosina... / This work show the study of extracts of the fungus Phomopsis stipata grown in different culture broth in the implementation of in silico methods using gas chromatography coupled to mass spectrometry and high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer for high resolution, combined with the database dictionary of natural products (http://dnp.chemnetbase.com). A comparison of diversity in the metabolic production of endophytic fungus when grown in different culture broth and cereal (corn) by the chromatographic profile was made, as well as assessment of activities of antioxidant properties and inhibition of heme polymerization. In dichloromethane extracts eight substances were identified. In dichloromethane extract of the endophytic fungus, grown in corn, five substances were detected, which were: 1- -lactone derivative; 2- n-hexadecanoic acid; 3- 16- octadecenoic acid; 4- hexanedioic acid, bis(2-ethylhexyl) ester and 5- hexadecanoic acid, 2-hydroxy-1-(hydroxymetil)ethyl ester, And for the dichloromethane extract of P. stipata, grown on potato dextrose broth, three substances were detected, among them:... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de Garcinia xanthochymus, foi cultivado em pequena escala nos meios líquidos, (400 mL) MDB, Extrato de Malte, YM, Czapek e em meio sólido (150 g) de milho tipo canjica, a 28ºC, em regime estático. Após triagem por ensaios biológicos, e análise por 1H RMN e HPLC-DAD, os meios de milho e extrato de malte foram selecionados para o estudo químico, sendo cultivados em larga escala. As matrizes brutas foram submetidas a estratégias de separação e de desreplicação utilizando as técnicas hifenadas: cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos e espectrometria de massas de alta resolução, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e também a ressonância magnética nuclear, sendo a detecção dos constituintes majoritários realizada in silico, através do uso de bases de dados públicas e pertencentes ao NuBBE. Os experimentos realizados permitiram a detecção de 14 substâncias: 6 por CG-MS (extrato DCM de milho) - dihexadecanoato de glicerila (1); trioctadec-9-enoato de glicerila (2); sn1', 2' octadeca-9,12-dienoato de glicerila (3); sn1',3' octadeca-9,12-dienoato de glicerila (4); ácido 6,11-hexadecanóico (5); geranilinalol (6); e 7 por HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerina (8); sambutoxina (9); micosporina-glicina (10); ciperina (11); micosporina serina (12); arginomicina (13) e aspergillomarasmina B (14). Os compostos 2, 3 e 4, majoritários na matriz bruta foram isolados. Os metabolitos detectados por HPLC-DAD-HRMS (7-10) foram também detectados por 1H RMN / Abstract: Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic fungi isolated from Garcinia xanthochymus, was initially cultivated on the following liquid media (400 mL): MDB, YM, Czapek and static solid medium (150 g) using bleached corn at 28 C. After careful screening using bioassays, 1H NMR and HPLC-DAD, the corn and malt extract were selected for further studies and large-scale growth. The crude matrixes were submitted to several separation strategies using dereplication and hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD), high resolution mass spectrometry (HRMS), gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS) as well as nuclear magnetic resonance (NMR). Most of the detected molecules were achieved using an in silico approach towards the data mining of public and NuBBE's databases. This approach lead us to detect 14 substances; 6 by means of CG-MS (dichloromethane extract from corn's media): glyceril dihexadecanoate (1); glyceril trioctadec-9-enoate (2); sn1', 2' glyceril octadec-9,12-dienoate (3); sn1', 3' gliceryl octadec-9,12-dienoate (4); 6,11-hexadecanóic acid (5); geranyl linalool (6); and 7 by means of HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerin (8); sambutoxin (9); micosporin glycin (10); cyperin (11); micosporin serin (12); arginomicin (13) e aspergillomarasmin B (14). Compounds 2, 3 and 4, been the most abundant in the matrix, were isolated and individually characterized. Compounds 7-10 were also confirmed using 1H NMR by means of in situ elucidation / Orientador: Ian Castro-Gamboa / Coorientador: Márcia Nasser Lopes / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Patrícia Mendonça Pauletti / Mestre

Orientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Hosana Maria Debonsi / Banca: Dionéia Camilo Rodrigues de Oliveira / Resumo: Este trabalho descreve a triagem de 21 fungos endofíticos associados a espécies vegetais de Cerrado e Mata Atlântica. Os extratos brutos fornecidos por estes fungos foram avaliados quimicamente (CLAE e RMN1H) e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostraram promissores. Após esta triagem, os fungos Xylaria sp. E Colletotrichum crassipes, associados a Casearia sylvestris, foram selecionados para o estudo químico/biológico. Estes fungos foram cultivados nos meios líquido (MDB) e sólido (milho) para obtenção dos extratos brutos. O extrato bruto de Xylaria sp. em milho foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento da griseofulvina, 7-desclorogriseofulvina e citocalasina B, enquanto que o extrato obtido do meio líquido conduziu ao isolamento da citocalasina D, citocalasina C e 5-carbóxi-6-hidroxi-3-metil-3,4- diidroisocumarina. Após fracionamento do extrato bruto do endófito C. crassipes no meio líquido MDB foram isoladas 8 substâncias da classe de dicetopiperazinas, N-(2-feniletil)acetamida, tirosol e as substâncias inéditas 1-hidroxi-1-feniletil-tirosol e (6-metil-3- (feniletóxi)-1,4-dioxan-2-il)metanol. Algumas substâncias puras foram submetidas à bioensaios e apresentaram potencial bioatividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum e nos ensaios antioxidante e anticolinesterásico. As citocalasinas D e B isoladas durante este trabalho e outras 5 citocalasinas isoladas anteriormente foram submetidas à avaliação da citotoxicidade utilizando linhagens de células de adenocarcinoma murino e se mostraram muito ativas. Os fungos endofíticos Xylaria sp. e C. crassipes foram utilizados em biotransformação do substrato 4-etilciclohexanona. Este experimento foi realizado através do cultivo ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work describes the screening of 21 endophytic fungi from plant species from Cerrado and Atlantic Forest. The crude extracts produced by these fungi after fermentation in potato dextrose broth (PDB) were evaluated by HPLC, 1HNMR and potential biological activities: antifungal, antioxidant and anticholinesterasic. After screening, the extracts of Xylaria sp. and Colletotrichum crassipes, isolated from Casearia sylvestris, were selected, based on the chemical/biological results. These endophytic fungi were cultivated in PDB and corn for crude extract preparation. The crude corn extract of Xylaria sp. led to isolation of griseofulvin, 7- dechlorogriseofulvin and cytochalasin B while the crude PDB extract led to isolation of cytochalasin C, cytochalasin D and 5-carboxy-6- hidroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin. The crude PDB extract of Colletotrichum crassipes led to isolation of eight diketopiperazines, N-(2-phenylethyl)acetamide, tyrosol, 1-hidroxy-1- phenylethyl-tyrosol and (6-methyl-3-(phenethyloxy)-1,4-dioxan-2- yl)methanol. The some of them pure compounds showed potential antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaeropermum, antioxidant and anticholinesterasic activities. The Cytochalasins D and B, isolated in this work, and other five cytochalasins produced by Xylaria sp.1 showed potential activity for cytotoxic activity against adenocarcinomatous murine cells. The fungi Xylaria sp. and C. crassipes were evaluated as biocatalysts for biotransformation of 4-ethylcyclohexanone. Four biotransformation products were isolated. Their structures were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques and comparison with published data. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-20Bitstream added on 2014-06-13T19:00:05Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_jb_me_araiq.pdf: 3851893 bytes, checksum: ca39fa9d9a3d6332fa80515bbbc4edf6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A área de biocatálise está em franco desenvolvimento e fungos associados a espécies vegetais dos biomas brasileiros são biocatalisadores em potencial, praticamente inexplorados. Nesse contexto, o presente trabalho descreve a avaliação do potencial biocatalítico de 7 fungos endófitos isolados de espécies vegetais do Cerrado. Foi avaliada a capacidade dos micro-organismos Nigrospora sphaerica, Schizophyllum commune, Phomopsis sp., Tricoderma viridae, Aspergillus versicolor, Xylaria sp. e Phomopsis stipata biotransformarem ou biodegradarem os substratos ácido gálico e cassina. O estudo de tolerância dos micro-organismos aos substratos permitiu selecionar as concentrações nas quais o ácido gálico (1,0 g L-1) e a cassina (0,5 g L-1) foram adicionados ao meio reacional na etapa de biotransformação/biodegradação. Todos os micro-organismos estudados se mostraram capazes de biotransformar o substrato ácido gálico. Os 26 produtos biotransformados são mais apolares que o composto de partida e foram encontrados na fase aquosa ou no micélio microbiano. Em relação à cassina, os endófitos Schizophyllum commune, Tricoderma viridae e Xylaria sp. não a metabolizaram, mesmo após 14 dias de incubação.Os endófitos Nigrospora sphaerica e Aspergillus versicolor a biodegradaram, enquanto que Phomopsis stipata e Phomopsis sp. a biotransformaram em 6 e 3 novos compostos, respectivamente. Os produtos de biotransformação do ácido gálico e da cassina terão suas estruturas determinadas em trabalhos futuros, e a partir desses dados poderemos inferir as reações que os fungos são capazes de realizar, e consequentemente sugerir as atividades enzimáticas presentes nos fungos endófitos estudados / The area of biocatalysis is developing fast and fungi associated with plant species of Brazilian biomes are potential biocatalysts, virtually unexplored. In this context, this work describes the evaluation of biocatalytic potential of seven fungal endophytes isolated from species of the Cerrado. We evaluated the ability of the micro-organisms Nigrospora sphaerica, Schizophyllum commune, Phomopsis sp., Tricoderma viridae, Aspergillus versicolor, Xylaria sp. and Phomopsis stipata to biotransform or biodegrade the substrates gallic acid and cassine. The study of microorganisms tolerance to the substrate allowed to select the concentrations in which the gallic acid (1.0 g L-1) and cassine (0.5 g L-1) were added to the reaction medium in step biotransformation/ biodegradation. All microorganisms studied are quite capable of biotransform substrate gallic acid. The 26 biotransformed products are less polar than the starting compound and were found in the aqueous phase or microbial mycelium. In relation to the cassine, the endophytes Schizophyllum commune, Tricoderma viridae and Xylaria sp. didn´t metabolize it, even after 14 days of incubation. Endophytes Nigrospora sphaerica and Aspergillus versicolor biodegraded the cassine, while Phomopsis stipata and Phomopsis sp. biotransformed this substrat in six and three new compounds, respectively. The biotransformation products of gallic acid and cassine will have their structures determined in future studies, allowing to infer which biotransformations occurred, and therefore suggest which the enzyme activities are found in the fungal endophyte studied

Orientadora: Daniela Alonso Bocchini / Coorientadora: kelly Johana Dussan Medina / Banca: Rubens Monti / Banca: Jonas Contiero / Resumo: Celulases microbianas têm sido empregadas na sacarificação de materiais lignocelulósicos para a obtenção de glicose, visando a produção de etanol celulósico. Entretanto, o custo dessas enzimas encarece o processo, e por isso a produção das mesmas a partir de fungos filamentosos cultivados em materiais lignocelulósicos, substratos de baixo custo, amplamente disponíveis e indutores da síntese enzimática, torna-se uma boa opção. Neste trabalho, com o objetivo de melhorar a produção de celulases através de metodologias de planejamento de experimentos, foram utilizados dois fungos endofíticos, cultivados por fermentação submersa (FSbm), usando como substratos o farelo de soja e a palha de cana de açúcar pré-tratada hidrotermicamente, cedida pela empresa GranBio, em cultivos isolados e co-cultivos, agitados. As atividades máximas obtidas nos extratos enzimáticos produzidos por planejamento experimental foram de 3,77 U/mL e 3,66 U/mL de endoglucanase, e 18,8 U/mL e 17,5 U/mL de β-glicosidase, no co-cultivo dos fungos Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04, e no cultivo isolado de Botryosphaeria sp. AM01, respectivamente. As condições ótimas de atividade das enzimas endoglucanase e β-glicosidase do melhor extrato foram pH 5,5 e 60 ºC. Estas enzimas foram estáveis quando incubadas por 24 horas em pH 5,0 e 5,5, e menos de 20% da atividade de ambas foi perdida entre 35 e 55 ºC. Os ensaios de inibição por glicose mostraram que a β-glicosidase tem sua atividade reduzida proporci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microbial cellulases have been used in the saccharification of lignocellulosic materials to obtain glucose, aiming to produce cellulosic ethanol. However, the cost of these enzymes makes the process expensive, so their production from filamentous fungi grown in lignocellulosic materials, low-cost and widely available substrates and inducers of enzymatic synthesis, is a good option. In order to improve cellulase production through experiment planning methodologies, two endophytic fungi, were cultivated by submerged fermentation (FSbm). Soybean meal and hydrothermally pretreated sugarcane straw, provided by GranBio, were used as substrate, in agitated isolated cultures and co-cultivations. The maximal activities obtained in the enzymatic extracts produced by the experimental design were 3.77 U/mL and 3.66 U/mL endoglucanase and 18.8 U/mL and 17.5 U/mL β-glycosidase in the co-cultivation of the fungi Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04, and in the isolated cultivation of Botryosphaeria sp. AM01, respectively.. The optimal activity conditions of the endoglucanase and β-glucosidase enzymes from the best selected extract were pH 5.5 and 60 ° C. These enzymes were stable when incubated for 24 hours at pH 5.0 and 5.5, and less than 20% of the activity of both of them was lost at 35-55 °C. The glucose-inhibition assays showed that β-glucosidase activity was reduced proportionally to the supply of this sugar, but even with the maximum amount of glucose supply (12 mmol/L)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-09T18:53:23Z No. of bitstreams: 2 Tese Michelle Silva.pdf: 1263837 bytes, checksum: d0c870e1adc5b9222b3441e165742228 (MD5) license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-09T18:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Michelle Silva.pdf: 1263837 bytes, checksum: d0c870e1adc5b9222b3441e165742228 (MD5) license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) Previous issue date: 2009-07-01 / Fungos endofíticos são reconhecidos pela sua relevância ecológica, habilidade para produzir metabólitos secundários com diferentes estruturas químicas e importância biotecnológica. A proposta deste trabalho foi estimar a riqueza, abundância e diversidade dos fungos endofíticos de Laguncularia racemosa (L.) Gaertn., bem como avaliar a atividade antibacteriana e isolar o princípio ativo. As folhas de L. racemosa foram coletadas no estuário do rio Paripe, Vila Velha, Itamaracá, Pernambuco. Setenta linhagens de fungos endofíticos foram obtidas a partir de 140 fragmentos de folhas, resultando numa colonização de 50%. A espécie Paecilomyces variotii foi a mais representativa com 19,3% de colonização, seguida por Mycelia Sterilia (8,6%), Penicillium sp. (7,2%), Trichoderma sp. (5%) e Aspergillus niger (4,3%) e espécies que foram pouco expressivas como Fusarium sp., Guignardia bidwellii e Basidiomycota com 1,4%, enquanto Curvularia pallescens e Periconia sp. com 0,7%. O teste de atividade antibacteriana foi realizado pelo método de difusão em disco de papel e, dentre as 70 linhagens de fungos, apenas 34 (48,6%) foram capazes de produzir metabólitos secundários com atividade antibacteriana. Micrococcus luteus foi o microrganismo mais sensível, seguido por Bacillus subtilis (10 a 23,5 mm), Staphylococcus aureus (10 a 21 mm), Enterococcus faecalis (10,5 a 20 mm) e Escherichia coli (10,5 a 16,75 mm). O extrato bruto de P. variotii FEL32 foi submetido à cromatografia e camada delgada usando o sistema de solvente AcOEt:MeOH (9:1,v/v) e resultou em duas bandas de Rf 0,48 e 0,70. A bioatividade frente à B. subtilis foi confirmada ao redor das bandas. O extrato foi submetido à cromatografia em coluna de sílica gel eluído com CHCl3/MeOH e o princípio ativo identificado por ressonância magnética nuclear e espectroscopia de massa, sendo identificada como viriditoxina (6-6’-binafto-α-pirona). A concentração mínima inibitória de viriditoxina resultou em valores de 0,5 μg/mL para Staphylococcus aureus, 1 μg/mL para Staphylococcus sp. coagulase negativa, 1 μg/mL para Micrococcus sp. e 2 μg/mL para Enterococcus sp. Nossos resultados confirmam o grande potencial dos fungos endofíticos, especialmente de ambiente estuarino. Este trabalho é o primeiro relato do isolamento de viriditoxina pelo fungo de ambiente estuarino P. variotii. Como perspectiva, muitos grupos de fungos de diferentes biomas estão esperando para serem explorados.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T13:28:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Mardonny Chagas.pdf: 1774580 bytes, checksum: eb35360e3dc589b04bcfcf126fcf22ca (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Mardonny Chagas.pdf: 1774580 bytes, checksum: eb35360e3dc589b04bcfcf126fcf22ca (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / Entre os micro-organismos endofíticos, os fungos têm despertado o interesse da comunidade científica especialmente por seu potencial na produção de metabólitos de interesse econômico, incluindo os relacionados às plantas hospedeiras. Hancornia speciosa Gomes, conhecida como mangabeira, é uma espécie frutífera da família Apocynaceae bastante utilizada na medicina popular para diversos fins. Este trabalho teve como objetivo contribuir no conhecimento da micobiota endofítica associada a H. speciosa e avaliar o potencial antimicrobiano destes micro-organismos. Os fungos endofíticos foram isolados da casca do caule de H. speciosa em diferentes períodos do ano. Foram isolados 116 fungos endofíticos pertencentes a 14 espécies, sendo Phoma cava a espécie mais frequente (13,8%), seguida de Colletotrichum gloeosporioides (12,1%) e Lasiodiplodia theobromae (11,2%). Todos os isolados foram submetidos ao ensaio antimicrobiano em meio sólido com bloco de ágar. Os micro-organismos teste utilizados foram Staphylococcus aureus - UFPEDA - 02, Bacillus subtilis - UFPEDA - 86, Escherichia coli - UFPEDA - 224, Klebsiella pneumoniae - UFPEDA - 396, Pseudomonas aeruginosa - UFPEDA - 416, Proteus mirabilis - UFPEDA - 767, Candida albicans URM - 5825, Candida krusei UFPEDA - 1002, Candida tropicalis URM - 5871 e Malassezia furfur URM - 4220. No total, 39 dos 116 fungos endofíticos apresentaram atividade antimicrobiana frente a, no mínimo, um micro-organismo teste com as médias dos halos de inibição variando de 11 a 39 mm de diâmetro. Após a triagem antimicrobiana, os isolados Aspergillus flavus (FHS012), A. flavus (FHS018), Aspergillus niger (FHS058), A. niger (FHS059), A. niger (FHS061), Fusarium solani (FHS105), F. solani (FHS106), Lasiodiplodia theobromae (FHS070), L. theobromae (FHS074) e Penicillium fellutanum (FHS089) apresentaram os melhores resultados entre todos e seguiram para o cultivo em meio semi-sólido de arroz e milho por 21 dias. Após este período, foram obtidos os extratos metanólicos brutos dos fungos endofíticos e determinadas as concentrações mínimas inibitória (CMI) e bactericida/fungicida (CMB/CMF) através do método de microdiluição em caldo. As CMI’s variaram entre 19 e 2.500 μg/mL-1 e as CMB’s / CMF’s entre 312 e >5.000 μg/mL-1. Esses resultados demonstram o grande potencial antimicrobiano dos fungos endofíticos desta planta medicinal. Em pesquisas futuras poderão ser identificados compostos bioativos, provavelmente derivados da complexa interação endofítico/hospedeiro, como sua utilização no desenvolvimento de novas drogas.