Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los cartílagos ungueales, extensiones cartilaginosas de la falange distal, proporcionan apoyo en la cara palmar del pie, ayudan al retorno venoso de este y disipan fuerzas de impacto. Estos pueden osificarse reduciendo la disipación de energía provocando un T-BIRT generando lesiones en estructuras óseas y blandas del pie. Las alteraciones de conformación de los miembros y del casco tendrían un efecto predisponente en la osificación, asociándose esta última con lesiones en otras estructuras como ligamentos colaterales de la articulación interfalángica distal y falange distal. El objetivo del presente estudio fue analizar algunas variables podométricas del casco y su relación con la caracterización radiográfica de los cartílagos ungueales de la falange distal en equinos de equitación. Se utilizaron 22 equinos mestizos de entre dos a 25 años de edad, sometidos a despalme en los últimos 30 días, a los cuales se le efectuaron estudios radiográficos y mediciones podométricas en ambos miembros torácicos. Se evaluó conformación a través de la vista latero medial estricta y dorso palmar sin oblicuidad realizando el estudio podométrico a través de diversas mediciones. Los cartílagos ungueales se evaluaron a través de la vista dorso palmar sin oblicuidad siguiendo la clasificación establecida por Dyson (2010) (grado 0 a 5). Además, se utilizó la vista dorso proximal dorso distal en 45° y pálmaro proximal pálmaro distal oblicua para pesquisar cualquier alteración de los miembros en estudio. Los datos fueron sometidos a estadística descriptiva y análisis de correlación de Spearman o Pearson, dependiendo de la normalidad de las variables, utilizando el programa InfoStat®. Los resultados en la vista dorso palmar indicaron que un 90,9% de los animales presentó algún grado de osificación, y solo 40,9% un grado igual o superior a tres. Esta osificación fue mayor en el miembro izquierdo y en el cartílago lateral posiblemente relacionado al tipo de trabajo al cual son sometidos estos ejemplares y a que el lado lateral aterriza primero al momento del apoyo del casco causando vibraciones que son disipadas a través de este lado del cartílago. Además, se observó que el grado de osificación en el miembro izquierdo y derecho aumento con la edad. En la vista latero medial estricta un 51% de los miembros totales presentó un eje podofalángico normal, y un 49% un eje podofalángico alterado, del cual un 42% corresponde a un eje quebrado hacia atrás y un 7% un eje quebrado hacia adelante, posiblemente por una disminución excesiva de talones por los herradores. En el estudio estadístico no existió una asociación significativa entre las variables podométricas de la falange distal y el grado de osificación de los cartílagos ungueales. Existió una asociación positiva entre el valor de la carga podal relativa y absoluta de la primera y segunda región del pie, y entre el grado de osificación del cartílago ungueal del lado lateral con el medial. / Ungueal cartilages of the foot, cartilaginous extensions of the distal phalanx, provide support to the palmar aspect of foot, help venous return of it and dissipate impact forces. These can be ossified reducing the dissipation of energy causing a T-BIRT generating lesions in bone and soft structures of the foot. Alterations in the conformation of the limbs and the hoof would have a predisposing effect on ossification, the latter being associated with lesions in other structures such as collateral ligaments of the distal interphalangeal joint and distal phalanx. The objective of the present study was to analyze some podometric variables of the hoof and its relationship with the radiographic characterization of the cartilage of the foot in the distal phalanx in horses. Twenty two crossbreed horses were used, between two and 25 years old, subjected to hoof trimming in the last 30 days, which were submitted to radiographic studies and podiatric measurements in both thoracic limbs. Conformation was evaluated through a strict lateromedial view and the dorsopalmar view without obliquity, developing the podometric study through various measurements. Ungular cartilages were evaluated through the dorsopalmar view without obliquity following the classification established by Dyson (2010) (grade 0 to 5). In addition, we used the dorsoproximal-palmarodistal oblique view at 45° and the palmaroproximal-palmarodistal oblique view, to investigate any alteration of the limbs under study. Data were subjected to descriptive statistics and Spearman or Pearson correlation analysis, depending on the normality of the variables, using the InfoStat® program. The results in the dorsopalmar radiographic view indicated that 90.9% of the animals presented some degree of ossification, and only 40.9% had a degree equal or greater than three. This ossification was greater in the left limb and in the lateral cartilage, possibly related to the type of work that these specimens are submitted, since the lateral side lands first at the moment of the support of the hoof causing vibrations that are dissipated through this side of the cartilage. It was also observed that the degree of ossification in the left and right limb increases with age. In the strict lateromedial view, 51% of the total limbs presented a normal phalangeal axis, and 49% an altered phalangeal axis, of which 42% corresponds to a broken back axis and 7% a forward broken axis, possibly due to an excessive reduction of heels by the farrier. In the statistical study there was no significant association between the podometric variables of the distal phalanx and the degree of ossification of the ungular cartilages. There was a positive association between the value of the relative and absolute foot loading of the first and second region of the foot, and between the degree of ossification of the ungual cartilage on the lateral and medial side of the foot

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Compara el nivel de conocimiento sobre VIH/SIDA y la percepción de riesgo de contagio de VIH en alumnos de tres instituciones educativas. Estudio correlacional de corte transversal, se entrevistó a 489 estudiantes que cumplían con los criterios de selección. El instrumento utilizado fue un cuestionario codificado y validado, el cual fue aplicado a alumnos de quinto año de secundaria es sus respectivos centros educativos. El análisis de los datos fue mediante el programa estadístico SPSS v 10, el análisis fue a través de Chi cuadrado, significativo p<0.05. La edad promedio de los entrevistados fue 15.9 años, de religión católica (65.8%), sexo femenino (50.3 %), el 52.3% ya había iniciado relaciones sexuales coitales a una edad promedio de 14.9 años. La calificación promedio del conocimiento en VIH/SIDA fue de 15.1 puntos de un total de 32, el 22.8% de las mujeres y el 33.3% de los varones tienen conocimiento adecuado. El 55.5% de los alumnos con adecuado conocimiento consideran alto riesgo de contagio de VIH en una relación sexual casual sin protección. Se observa una correlación negativa mínima entre el nivel de conocimiento en VIH/SIDA y la percepción de riesgo de contagio de VIH (R 2 =0.04). El promedio de calificación del conocimiento en VIH/SIDA de las tres instituciones educativas es de 15.1 puntos, con un nivel de conocimiento adecuado mayor en los varones. La calificación del conocimiento en VIH/SIDA y la percepción de riesgo de contagio de VIH muestran una correlación negativa mínima. / Tesis

Determina la relación entre la independencia funcional y el estadio de la enfermedad de Parkinson en pacientes del Centro Médico Naval “Cirujano Mayor Santiago Távara” Lima-2019. Realiza un estudio de tipo cuantitativo, observacional, correlacional, prospectivo de corte transversal. La población de estudio fueron 39 pacientes con enfermedad de Parkinson del servicio de geriatría del Centro Médico “Cirujano Mayor Santiago Távara”. Se encontró que sí existe relación entre la independencia funcional y el estadio de la enfermedad de Parkinson, con una significancia de p=0.00 siendo menor a lo esperado. En el nivel motor el 76.9% de la población (30 pacientes) tienen un nivel motor independiente, en el nivel cognitivo el 71,8% de la población (28 pacientes) tiene un nivel cognitivo independiente, según los estadios de la enfermedad de Parkinson se encontró que el mayor porcentaje de la población 33,3% (13 pacientes) se encuentran en un estadio 2 de la enfermedad, 14 pacientes de entre 70 a 79 años presentan un nivel independiente, 7 pacientes de entre 70 a 79 años se encuentran en un Estadio 2, la mayoría de la población estudiada es del sexo masculino (28 pacientes). Se determinó que existe relación entre la independencia funcional y el estadio de la enfermedad de Parkinson en pacientes del Centro Médico Naval “Cirujano Mayor Santiago Távara”. Por lo tanto, el estadio de la enfermedad de Parkinson influye en la independencia funcional de los pacientes. / Tesis

Grado de magíster en informática médica / Durante los últimos años la medicina traslacional ha surgido como un enfoque potente para el estudio de enfermedades complejas, en que la idea fundamental es fortalecer la retroalimentación entre los estudios en ciencias básicas y la clínica para mejorar los diagnósticos y tratamientos de los pacientes. Accediendo a mayor información del paciente, en particular genómica, se busca definir de mejor manera el fenotipo de su enfermedad y con ello decidir su mejor tratamiento. Sin embargo, la gran cantidad y heterogeneidad de los datos disponibles hace complejo el descubrimiento de información relevante (definir el fenotipo). Para abordar este problema es necesario desarrollar un sistema que permita integrar los estudios realizados a cada paciente y asociar sus resultados. En este trabajo se propone implementar una plataforma (Datagenomed) constituida por un modelo de base de datos “híbrida” basado en PostgreSQL y almacenamiento JSON (NoSQL) y un conjunto de herramientas computacionales que permitan asociar la información clínica del paciente con la información genómica. Un software de gestión de datos que registre tanto información clínica (diagnóstica) como los resultados de secuenciación de ADN y que permita la búsqueda de información pertinente en repositorios biológicos, añadiendo reportes estadísticos basados en el software R. La plataforma se adaptó a dos casos de estudio: i) información sobre Alzheimer basado en el proyecto Fondecyt No. 1140423 “Fisiopatología de la Apatía en la Enfermedad de Alzheimer: Un Estudio Experimental de Neuropsicología y Neuroimagen” (CA) liderado por la Dra. Andrea Slachevsky y ii) información de cáncer de mama del proyecto Fondef N. D11I1029 “Incorporación de la Secuenciación de Última Generación en el Cuidado de los Pacientes con Cáncer” (CC) proporcionado por la Dra. Katherine Marcelain. Los datos clínicos provinieron de recolección de fichas clínicas hospitalarias, junto a datos demográficos (solo para CA). Los datos genómicos se obtuvieron del análisis de archivos Fastq de muestras de sangre y/o tejido procesados mediante next-generation DNA sequencing (NGS) (CC). Para adaptarse a la naturaleza disímil de los datos registrados, la información se almacenó en un nuevo sistema de bases de datos híbrido, permitiendo tanto datos clínicos estructurados como datos genómicos de tipo documental. La implementación resultante cuenta con un sistema de filtrado y búsquedas de términos en bases bibliográficas e información genómica en bases de datos biológicas; Pubmed, RefSeqGene, MedGen, dbSNP, Clinvar, Cosmic, Gene pudiendo agregarse otros recursos según necesidad. El objetivo de esta tesis es diseñar e implementar un conjunto de herramientas de software para permitir procesos de extracción, transformación y carga (ETL) de información sobre las bases de datos creadas y permitir consultas en línea mediante webservice. Dichos webservice se construyeron utilizando software open source y las mejores prácticas de diseño de interface, fuerte prototipado y técnicas de desarrollo xtreme programming. El fin último es que la información resultante esté disponible remotamente vía una plataforma que pueda ser consultada utilizando webservice desde cualquier sistema de registro clínico asociado. Como resultado se construyó una plataforma basada en tecnología web soportado sobre un motor de base de datos PostgreSQL utilizando Knime como herramienta para procesos de ETL. / In recent years translational medicine has emerged as a powerful tool for the study of complex diseases approach, the fundamental idea is to strengthen the feedback between basic and clinical studies to improve diagnosis and treatment of patients. Accessing more information on the patient, particularly genomics, seeks to better define the phenotype of the disease and thus determine their best treatment. However, due to the large amount of data and its heterogeneity the discovery of relevant information becomes complex (defining the phenotype). To address this problem it is necessary to develop a system that integrate studies and associate the patient outcomes. In this thesis we propose to implement a platform (DataGenomed) consisting of a database model and a set of computational tools that allow to associate clinical information with genomic information of patients. The proposed data management software to record clinical information (diagnostic) and the results of DNA sequencing and allows the search for relevant information in biological repositories, adding statistical reports based on the software R. The platform will tested two case studies: i) information on Alzheimer disease based on Fondecyt No. 1140423 project "Apathy Pathophysiology of Alzheimer's Disease: An Experimental Study of Neuropsychology and neuroimaging" project (CA) led by Dra. Andrea Slachevsky and ii) breast cancer information Fondef N. D11I1029 project "Incorporating Next Generation Sequencing Care in cancer Patients" (CC) led by Dra. Katherine Marcelain. Clinical data collection came from hospital medical records, along with demographic data (CA only). Genomic data was obtained from analysis files Fastq blood samples and / or tissue processed using next-generation DNA sequencing (NGS) (CC). To adapt us to the dissimilar nature of the recorded data, the information was stored in a new hybrid database system data, allowing both clinical structured data and genomic non structured document type. The resulting implementation has a filtering system and search terms in bibliographic databases and genomic information in biological databases; Pubmed, RefSeqGene, MedGen, dbSNP, Clinvar, Cosmic, Gene and it is posible to add other resources as needed. The aim of this thesis is to design and implement a set of software tools to allow extraction, transformation and loading (ETL) of information on databases created and allow online consultations via webservice. These best practices webservice interface design, prototyping and strong development techniques xtreme programming will be built using open source software. The final goal is that the resulting information is available remotely via a platform that can be accessed from any system using webservice and associated clinical record.

Brinda información sobre el mastocitoma en caninos abarcando temas como presentación clínica, diagnóstico y tratamiento. El mastocitoma es una enfermedad neoplásica constituida por la agrupación de mastocitos atípicos, la cual ha sido reportada en diversas especies, como bovinos, ovinos, porcinos, equinos, siendo en los caninos y felinos donde se manifiesta con mayor agresividad (Moulton, J. 1978). El mastocitoma es una de las neoplasias más comunes que afecta a la piel en los caninos, pudiendo desarrollarse en cualquier raza, pero es en el Bulldog Ingles, Bull Terrier, Boston Terrier y Boxer donde existe una mayor predisposición. No existe predilección sexual (Gieger, T. 2005), y tiende a afectar a canes de 8 años en promedio (Pulley. L. 1990). / Tesis

La investigación de doctorado reconstructiva y analítica descriptiva realizada ha constado de tres partes, una primera, cuyo carácter general de introducción conceptual y metodológica contiene la función explicativa del objeto, y dos restantes en las que se aborda la representación de la enfermedad propiamente dicha, primero en cuanto a sus fundamentos y modos y segundo, en cuanto a sus objetos y circunstancias, constituyen un artefacto descriptivo por sí mismo, pero que a su vez permite un replanteamiento categorial tanto sintético como conclusivo que contempla la visión de un horizonte de aspecto general, al tiempo que también completamente efectivo. Se ha realizado la elaboración categorial de la obra artística completa de Pío Baroja y Thomas Mann en cinco categorías. Mediante las cuales estos autores acometen la representación de la enfermedad, y en ellas quedan integradas la totalidad de los textos analizados en el artefacto descriptivo que constituye la investigación. Las categorías son: filosófica, personal, retórica, convencional y facultativa.

"I Concurso de Investigación, Proyectos de Intervención y de Emprendedurismo", evento académico desarrollado el 16 de diciembre de 2020 de manera virtual, Lima, Perú. Se presentaron los proyectos de intervención y de Emprendedurismo desarrollado por la comunidad de Odontología en UPC. / Determinar la asociación entre el uso del hilo dental y la enfermedad periodontal en adultos de los Estados Unidos de América entre el 2013 al 2014.

Carta al editor. / Revisión por pares

La enfermedad de Parkinson (EP) es el segundo trastorno neurodegenerativo más común en la población mundial. Esta patología es causada principalmente por la degeneración y muerte progresiva de las neuronas dopaminérgicas de la substantia nigra pars compacta (SNpc). La señalización celular en la EP ha sido y es uno de los aspectos más estudiados de la enfermedad, para tratar de comprender su etiopatogenia y encontrar nuevas dianas terapéuticas que permitan un tratamiento más específico de la enfermedad. Un componente clave en la muerte de las neuronas dopaminérgicas es el estrés oxidativo (EO), sin embargo, poco se sabe sobre el papel que juega la señalización mediada por las fosfolipasas D y A2 (PLD y PLA2, respectivamente) en este evento que inicia en etapas tempranas de la EP. El objetivo de este trabajo de tesis fue caracterizar el rol que cumplen las isoformas más importantes y estudiadas de las enzimas PLD y PLA2 en la respuesta neuronal frente al daño oxidativo. Para esto, se utilizaron como estímulo la 6-hidroxidopamina (6-OHDA) y la sobrecarga de hierro (Fe), dos agentes neurotóxicos ampliamente utilizados en el estudio de esta patología. La exposición neuronal a la 6-OHDA, un análogo hidroxilado de la dopamina, constituye una estrategia útil para estudiar los eventos moleculares asociados con la muerte neuronal en la EP. La 6-OHDA aumenta los niveles de oxidantes celulares y deteriora la cadena respiratoria mitocondrial, promoviendo así la lesión neuronal y la muerte. A pesar del uso extensivo de 6-OHDA en modelos animales, los eventos moleculares precisos desencadenados por este neurotóxico a nivel neuronal aún no se han dilucidado completamente. Las células de neuroblastoma humano IMR-32 expuestas a concentraciones crecientes de 6-OHDA mostraron altos niveles de especies reactivas de oxígeno (EROs) y aumento de la permeabilidad de la membrana plasmática con disminución concomitante de la viabilidad celular. Como parte de la respuesta neuronal a la exposición a 6-OHDA, se observó la translocación de la subunidad p65 del factor nuclear potenciador de las cadenas ligeras kappa de las células B activadas (NF-κB) hacia el núcleo. La localización nuclear de NF-κB también fue acompañada por un aumento de la fosforilación del inhibidor de kappa B (IκB), así como por un aumento en los niveles de ARNm de la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y el receptor 4 de prostaglandina E2 (RP4). Aunque las vías canónicas que participan en la modulación de NF-κB se han descrito ampliamente, aquí se trabajó con la hipótesis de que la lesión inducida por 6-OHDA puede activar las vías de señalización de lípidos y, a su vez, modular la respuesta transcripcional. El EO generado en la célula por la 6-OHDA desencadenó la activación de vías de señalización de lípidos y produjo un aumento de los niveles de ácido fosfatídico (PA), diacilglicerol (DAG) y ácidos grasos libres en las células de neuroblastoma humano. La inhibición de la producción de PA pudo prevenir la disminución de la viabilidad celular provocada por 6-OHDA, la translocación nuclear de la subunidad p65 de NF-κB y el aumento en la expresión del ARNm de COX-2. En el primer capítulo de esta tesis, nuestros resultados indican que la respuesta neuronal desencadenada por 6-OHDA implica la activación de vías de señalización mediadas por PA que, a su vez, gobiernan la localización subcelular de NF-κB y la expresión de COX-2 de manera diferencial. La acumulación de Fe y la sobre-expresión de α-sinucleína son rasgos característicos de varios trastornos neurodegenerativos. Previamente en nuestro laboratorio hemos demostrado que el EO inducido por Fe activa la liberación de ácidos grasos catalizada por diferentes isoformas de PLA2 en el sistema nervioso. En este trabajo, nuestro objetivo fue estudiar la participación de las PLA2 en la regulación de la biología de la α-sinucleína y en la respuesta neuronal a la sobrecarga de Fe. También investigamos el papel de los factores secretados por la glía en la resolución del daño oxidativo por parte de las neuronas. Se estudió el estado redox, la fosforilación de α-sinucleína y la participación de las isoformas de PLA2 citosólica e independiente de calcio (cPLA2 e iPLA2, respectivamente) en la regulación de estos eventos. Las neuronas IMR-32 expuestas a una sobrecarga de Fe, bajo la forma del compuesto denominado citrato amonio férrico (FAC), mostraron un aumento de los niveles de expresión de iPLA2, concomitantemente con un aumento de los peróxidos lipídicos y las EROs. El bloqueo farmacológico de la actividad de iPLA2 aumentó, aún más, los niveles de peróxidos lipídicos y el contenido de EROs. Por el contrario, la inhibición conjunta de cPLA2 e iPLA2 mostró el efecto opuesto al promover una disminución de los marcadores de EO asociados con una mayor viabilidad neuronal. Las neuronas estimuladas con Fe también mostraron un aumento de la fosforilación de α-sinucleína. La fosforilación de α-sinucleína fue bloqueada por la inhibición de la actividad de la iPLA2. Gran parte de estos resultados también fueron corroborados por estudios en la línea celular de neuronas dopaminérgicas de rata (N27). Para estudiar el papel de la glía en la respuesta neuronal al Fe, se expusieron las células de astroglioma C6 a FAC o su vehículo, y los medios derivados de los astrocitos incubados en estas condiciones se añadieron, luego, a cultivos neuronales. En la caracterización de los astrocitos expuestos a Fe, estos mostraron un aumento en el marcador glial S100β y en los niveles de peroxidación lipídica, indicando una reactividad al EO. Los astrocitos fueron positivos para γ-glutamilcisteína ligasa, enzima limitante de la reacción de biosíntesis de glutatión. La respuesta de las neuronas a los medios condicionados de los astrocitos fue diferente dependiendo del origen de la línea celular. Mientras que el medio condicionado de astrocitos demostró ser neuroprotector para las neuronas humanas IMR-32, el efecto contrario se observó en las células dopaminergicas N27 derivadas de mesencéfalo de rata. Los resultados del segundo capítulo de esta tesis muestran roles específicos para la iPLA2 en cuanto a la neuroprotección y modulación de la fosforilacion de α-sinucleína en la respuesta neuronal a la lesión inducida por Fe. En conjunto los hallazgos de este trabajo de tesis contribuyen a dilucidar nuevos mecanismos de acción de determinadas isoformas de la PLA2 y la PLD en procesos de injuria neuronal asociados con la EP. / Parkinson's disease (PD) is the second most common neurodegenerative disorder worldwide. This pathology is mainly caused by the degeneration and progressive death of the dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta (SNpc). Cell signaling in PD has always been one of the most studied key aspects of the disease in an attempt not only to understand its etiopathogenesis but also to find new therapeutic targets towards a more specific treatment of this pathology. However, little is known to date about the role of phospholipase D and A2 signaling (PLD and PLA2, respectively) in the neuronal response to oxidative injury, beginning in the early stages of PD. The objective of this thesis work was to begin to delineate the role played by the most important and studied isoforms of PLD and PLA2 enzymes in the neuronal response to oxidative damage, when they were subjected to the stimulus of 6-hydroxydopamine (6-OHDA) and to iron overload (Fe), two neurotoxic agents widely used in the study of PD. Likewise, the relationship and impact of the latter on the biology of α-synuclein were figured. Neuronal exposure to 6-OHDA, a hydroxylated analog of dopamine, is a useful strategy to study the molecular events associated with neuronal death in PD. 6-OHDA increases the levels of cellular oxidants and impairs the mitochondrial respiratory chain, thus promoting neuronal damage and death. Despite the extensive use of 6-OHDA in animal models, the exact molecular events triggered by this neurotoxic at the neuronal level have not yet been fully understood. Human IMR-32 neuroblastoma cells exposed to increasing concentrations of 6-OHDA showed high levels of reactive oxygen species (ROS) and increased plasma membrane permeability with concomitant decrease in cell viability. As part of the neuronal response to exposure to 6-OHDA, the translocation to the nucleus of the p65 subunit of the nuclear factor enhancer of the kappa light chains of activated B cells (NF-κB) was observed. The nuclear localization of NF-κB was also accompanied by an increase in phosphorylation of the inhibitor of kappa B (IκB) as well as an increase in the levels of mRNA of cyclooxygenase-2 (COX-2) and prostaglandin E2 receptor 4 (RP4). Although the canonical pathways involved in NF-κB modulation have been extensively described, the hypothesis that 6-OHDA-induced injury can activate lipid signaling pathways and, in turn, modulate the transcriptional response has been challenged here. The oxidative stress generated in the cell by 6-OHDA triggered the activation of lipid signaling pathways and produced an increase in the levels of phosphatidic acid (PA), diacylglycerol (DAG) and free fatty acids in human neuroblastoma cells. Inhibition of PA production could prevent the decrease in cell viability caused by 6-OHDA, the nuclear translocation of the p65 subunit of NF-κB and the increase in the expression of COX-2 mRNA. Our results indicate that the initiation of the inflammatory process triggered by 6-OHDA involves the activation of PA signaling which, in turn, governs the subcellular localization of NF-κB and the expression of COX-2 mRNA. Iron accumulation and α-synuclein overexpression are characteristic features of several neurodegenerative disorders. We have previously shown in our laboratory that oxidative stress induced by Fe activates the release of fatty acids catalyzed by different isoforms of PLA2 in the nervous system. In this work, our objective was to study the participation of PLA2 in the regulation of α-synuclein biology and the redox response developed by neurons in response to Fe overload. We also investigated the role of factors secreted by the glia in the resolution of oxidative damage by neurons. The redox state, the phosphorylation of α- synuclein and the participation of the calcium-dependent and independent PLA2 isoforms (cPLA2 and iPLA2, respectively) in the regulation of these events were studied. IMR-32 neurons exposed to Fe overload, in the form of the compound called ferric ammonium citrate (FAC), showed an increase in iPLA2 expression levels, concomitantly with an increase in lipid peroxides and ROS. The pharmacological blocking of iPLA2 activity further increased the levels of lipid peroxides and the content of ROS. In contrast, cPLA2 inhibition showed the opposite effect by promoting a decrease in oxidative stress markers associated with higher neuronal viability. Fe-stimulated neurons also showed increased α-synuclein phosphorylation. The phosphorylation of α-synuclein was blocked by the inhibition of iPLA2 activity. Several of these results were also corroborated by studies in the rat dopaminergic neuron cell line (N27). To study the role of glia in the neuronal response to Fe, C6 astroglioma cells were subjected to FAC or vehicle, and astrocyte-derived media was added to neuronal cultures of the same species (N27). In the characterization of the astrocytes exposed to Fe, they showed an increase in the glial marker S100β and the levels of lipid peroxidation, indicating a reactivity to oxidative stress. Neurons incubated with the above-mentioned astrocyte-derived media showed higher levels of oxidative damage than neurons exposed solely to Fe. Astrocytes were positive for the rate-limiting step enzyme for glutathione biosynthesis. Taken together, our results show specific roles for iPLA2 in terms of neuroprotection and modulation of α-synuclein phosphorylation in the neuronal response to Fe-induced injury. Together, the results of this thesis work contribute to elucidate new mechanisms of action of certain isoforms of PLA2 and PLD in neuronal injury processes associated with PD.

La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía de carácter autoinmune en la que intervienen factores genéticos y ambientales. Es la enfermedad crónica intestinal más frecuente, y aunque puede presentarse a cualquier edad y con una gran variedad de síntomas, los casos típicos suelen manifestarse durante la infancia y cursar con síntomas gastrointestinales. En individuos genéticamente susceptibles a desarrollar la enfermedad la ingesta del gluten de la dieta causa una inflamación crónica en el intestino delgado que conduce a pérdidas en la integridad y la función de la mucosa intestinal. Los cambios histológicos que se generan en la mucosa de los enfermos celíacos pueden provocar la atrofia de las microvellosidades intestinales lo que conlleva malabsorción de nutrientes y manifestaciones intestinales y/o extraintestinales. El único tratamiento que existe para los celíacos es una dieta estricta exenta de gluten durante toda la vida. El mantenimiento de esta recomendación dietética es complejo debido a la presencia de gluten en la mayoría de los alimentos elaborados, de modo que los pacientes siguen expuestos al gluten y algunos continúan teniendo sintomatología, principalmente gastrointestinal, y mayores riesgos de salud. Como consecuencia se han abierto diversas líneas de investigación con el fin de desarrollar terapias complementarias y/o alternativas a la dieta sin gluten. Además del gluten y las características genéticas de los individuos, en el desarrollo de la EC intervienen otros factores como el tipo de lactancia o la incidencia de infecciones durante la infancia. Estos factores que pueden influir en la microbiota intestinal y en el desarrollo del sistema inmunitario. En los últimos años se ha demostrado que los pacientes celíacos presentan alteraciones en su microbiota intestinal en comparación con sujetos sanos. El objetivo de esta tesis ha sido avanzar en la caracterización de las alteraciones de la composición de la microbiota intestinal asociadas de forma primaria o secundaria a la EC, y establecer la posible función de los grupos microbianos relevantes en la patogénesis de la enfermedad. El estudio de las funciones de componentes específicos de la microbiota en la patogénesis y el riesgo de sufrir la enfermedad podrían permitir el posterior desarrollo de estrategias de intervención nutricional basadas en probióticos y/o prebióticos para mejorar el estado de salud de estos pacientes o reducir el riesgo de padecer la enfermedad. En el primer capítulo (estudios 1 y 2) se analizaron las poblaciones bacterianas fecales y duodenales de niños con EC y se compararon con las de controles mediante la utilización de la técnica de electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE). Mediante el uso de esta técnica se detectaron cambios en la diversidad y composición de las poblaciones bacterianas entre los grupos de individuos en estudiados. El siguiente capítulo se basó en la caracterización de algunos de los grupos bacterianos relevantes en la EC, bien por las diferencias detectadas a nivel cuantitativo respecto a controles o bien por su posible acción como patógenos oportunistas, mediante el uso de técnicas dependientes de cultivo. Se aislaron representantes de las poblaciones fecales de enterobacterias, estafilococos y bacteroides de individuos celíacos y controles y se identificaron a nivel de especie. Las especies dominantes se caracterizaron con el fin de determinar la presencia/ausencia de factores de virulencia. En estos estudios (estudios 3, 4 y 5) se observó que los individuos celíacos mostraban una mayor abundancia de las especies Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis y Bacteroides fragilis que los controles, y en general estas especies presentaban mayor cantidad de genes que codifican factores de virulencia que los clones aislados del grupo control. Además se aislaron e identificaron bacterias cultivables asociadas a la mucosa duodenal de pacientes celíacos y controles con el fin de establecer posibles diferencias. En este estudio (estudios 6) se observó que los pacientes con EC presentaban una menor abundancia de miembros de la familia Streptococcaceae y una mayor abundancia de miembros de las familias Enterobacteriaceae y Staphylococcaceae, y en particular de Klebsiella oxytoca, S. epidermidis y Staphylococcus pasteuri. El último capítulo (estudio 7) se planteó con el fin de caracterizar el proceso de colonización intestinal de especies de Bacteroides en recién nacidos con riesgo de desarrollar la EC y determinar su relación con factores ambientales y genéticos. Para ello se monitorizó por DGGE las poblaciones de bacteroides de recién nacidos sanos con riesgo genético a desarrollar la EC. Los resultados determinaron que el genotipo de los recién nacidos sanos puede influir en los patrones de colonización de las poblaciones de Bacteroides y por lo tanto en el riesgo a desarrollar la enfermedad. / Sánchez Sánchez, E. (2013). Caracterización molecular de la microbiota de individuos celíacos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/32059