Introdução: Staphylococcus aureus são microrganismos causadores de diversos tipos de doenças. Existem dois grandes agravantes a sua presença: a produção de toxinas e a resistência a antimicrobianos. S. aureus produzem enterotoxinas termolábeis que, quando presentes nos alimentos, podem levar a uma toxinfecção a quem o consumir. Esta espécie também é conhecida por facilmente responder adaptativamente ao uso de drogas tornandose cada vez mais difícil controlá-la. Um dos maiores responsáveis por esta preocupação são os MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus), resistentes a beta-lactâmicos através da produção de uma proteína diferenciada de parede codificada pelo gene mecA. A presença deste patógeno resistente fora do ambiente hospitalar é registrada há alguns anos e pouco a pouco vem se descobrindo que a via alimentar pode ser um meio deste gene se disseminar. Objetivos: procurar pelo gene mecA e o codificador da enterotoxina em Staphylococcus aureus de amostras alimentares para discutir a presença do gene de resistência em uma nova via de transmissão e a validade de apenas se fiscalizar a presença apenas de Staphylococcus coagulase positivo em produtos alimentares como forma de manter o alimento seguro contra toxinfecções. Métodos: Cinquenta e sete amostras de S. aureus provenientes de amostras de quatro tipos de fontes alimentares foram testadas por PCR com primer específico para o gene mecA e para o gene codificador da enterotoxina. Resultados: Destas, cinco (8,8 por cento do total) amostras apresentaram o gene de resistência e onze (19,2 por cento do total) continham o gene codificador da enterotoxina termolábil. Conclusão: A presença do gene de enterotoxina em produtos prontos para consumo e peixe cru de feira é uma realidade, assim como o debate sobre qual a melhor forma de se legislar sobre o assunto que deve ser mantido e melhor avaliado. Já no caso do gene de resistência, evidenciou-se que a via alimentar é sim local de circulação do gene de resistência. Também é a primeira vez que se notifica o gene mecA em alimentos prontos para consumo no Brasil e América Latina / Introduction: Staphylococcus aureus are a bacterium that causes various types of diseases. There are two major aggravating to its presence: the toxins production and antimicrobial resistance. S. aureus produce heat-labile enterotoxina that, when present in food, can lead to poisoning of those who consume. This specie is also known to easily respond adaptively to drug use becoming increasingly difficult to control it. One of the main reasons for this concern are MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) which are resistant to betalactams drugs through a differentiated wall protein production encoded by the mecA gene. The presence of this resistant pathogen outside hospitals has been recorded a few years ago and gradually comes to discover that the food chain can be a way for the gene spread. Objectives: Search for the mecA gene and the enterotoxins encoded gene in Staphylococcus aureus from food samples to discuss the presence of the resistance gene in a new transmission route and the validity of only review the presence of Staphylococcus coagulase positive in food product as a way to keep insurance against food poisoning. Methods: Fifty-seven samples of S. aureus from five different sources of food samples were tested by PCR with specific primer for the mecA gene and the enterotoxins gene. Results: Of these, five (8,8 per cent of total) samples showed the resistance gene and eleven (19,2 per cent of total) contained the gene encoding the heat-labile enterotoxin. Conclusion: The presence of enterotoxin encoded gene in food products ready for consumption and raw fish is a fact and a debate about how best to legislate should be maintained and better evaluated. In the case of the resistance gene, the food chain is really a way where this gene can spread. It is also the first time the mecA gene from food ready for consumption is reported in Brazil and Latin America

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Banca: Hélio Langoni / Banca: Renata Bonini Pardo / Resumo: O presente estudo teve como objetivo o isolamento de Staphylococcus aureus e estafilococos coagulase negativos (ECN), associados com casos de mastite subclínica, a partir de amostras de leite de 134 vacas, em dez pequenas propriedades leiteiras familiares, da região de Bauru - SP, determinar a susceptibilidade a antimicrobianos e investigar a presença de genes de enterotoxinas e do gene mecA de resistência à oxacilina, dos casos de mastite subclínica, a partir das cepas bacterianas isoladas do leite dos animais, e dos tanques de resfriamento. Isolaram se 105 amostras de Staphylococcus spp, sendo 55 (52,4%) estafilococos coagulase positivos (ECP) e 50 (47,6%) ECN. Entre os ECP, S.aureus foi isolado em 48 (87,3%) dos casos. Das 12 espécies de ECN isoladas, as mais freqüentes foram S. warneri, S. hyicus, e S. xylosus. Os maiores níveis de resistência, foram observados frente ao grupo dos beta-lactâmicos tanto para os ECP - 92,7% para penicilina e 90,9% para ampicilina, como para os ECN - 56% e 52% de resistência, respectivamente. Todas amostras de ECP foram sensíveis a cefalexina, e 96% dos isolados de ECN a enrofloxacina. Em relação a presença de genes codificadores de enterotoxinas, dos casos de mastite subclínica, 17/142 (12%) foi positiva para algum dos genes estudados. O gene sea foi o mais prevalente, sendo detectado em 11 (7,7%). O gene seb em 05 (3,5%) e o sec em 01 (0,7%) das amostras. Todas foram negativas para o gene sed. Dos Staphylococcus spp isolados das mastites subclínicas, houve detecção do gene sec em 8/105 (7,6%), sendo que cinco (4,7%) eram ECP, e três (2,8%) ECN. Das 10 amostras de leite dos tanques, duas (20%) foram positivas para sea e uma (10%) para seb. O gene mecA foi detectado em três cepas de S. aureus, (6,2%). A identificação de genes codificadores de enterotoxinas em casos de mastite subclínica e em tanques comunitários, sinalizam a importância do monitoramento destes agentes visando a... / Abstract: This study aimed at the isolation of Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci, from bovine milk samples, associated with cases of subclinical mastitis detected in ten small properties from Bauru - SP. Also, determine the antimicrobial susceptibility of the agents isolated and to investigate the presence of enterotoxin gene and the mecA gene of oxacillin resistance from the bacterial strains, and milk samples from bulk tanks . Of 105 samples obtained, 55 ( 52.4 %) were coagulase positive staphylococcus (CPS) and 50 (47.6%) coagulase negative staphylococcus (CNS). Among the CPS, S. aureus was isolated in most cases, 48 ( 87.3 %). Of the 12 CNS species isolated, the most frequent were S. warneri, S. hyicus, both with 8 (16%) and S. xylosus 7 (14%) . The highest levels of antibiotics resistance were observed for the group of β - lactam antibiotics - penicillin 92.7% and ampicillin 90.9% CPS and ECN - 56 % and 52 % respectively. The greatest sensitivity of the CPS strains was to cephalexin, and for CNS isolates to enrofloxacin. From the cases of subclinical mastitis, genes encoding enterotoxins were found in, 17/142 (12%) . The sea gene was the most prevalent being detected in 11 ( 7.7 %). The seb gene was detected in five (3.5%) samples, and in one sec (0.7%). All were negative for sed gene. When we consider the results directly from cultures of Staphylococcus spp. isolated from subclinical mastitis, there was only the gene sec in 8/105 (7.6%).From these isolates of Staphylococcus spp., positive for sec 05/105 (4.8%) were CPS, (03 S. aureus and 02 S.intermedius) and 03/105 (2.8%) CNS, (01 S. xylosus, 01 S.hyicus and 01 S.lugdunensis). To sea, seb and sed samples were negative. Of the ten samples from the bulk tanks, 02/10 (20%) were positive for sea and 01/10 (10%) to seb. The mecA gene was detected in three strains of S. aureus, representing 6.2% of the total of 48 S. aureus strains isolated. The identification ... / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-23T02:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 254509.pdf: 1099832 bytes, checksum: ad323b369db90cc2baf7b784ad030145 (MD5) / O leite materno é o alimento ideal ao bebê humano, porém, devido a diversos fatores, não são todas as mães que podem amamentar, sendo necessários, assim, os Bancos de Leite Humano, que são centros de coleta, tratamento e distribuição de leite materno. Este trabalho objetivou a verificação da presença de S. aureus, bem como suas toxinas, em leite materno cru (doado pelas mães e que não sofreu nenhum processamento), pasteurizado e descongelado no lactário do hospital. O Capítulo 1 compreende uma pequena revisão bibliográfica que abrange o assunto trabalhado. O Capítulo 2 apresenta uma revisão sobre enterotoxinas estafilocócicas presentes em leite materno, sendo que esta revisão foi enviada à Revista Brasileira de Saúde Materno Infantil. Os dados obtidos, bem como as metodologias utilizadas, estão relatados no Capítulo 3, que foi elaborado segundo o modelo da Journal of Human Lactation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-graduação em Ciência dos Alimentos / Made available in DSpace on 2012-10-23T21:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 263770.pdf: 3998274 bytes, checksum: 425226ccd7df05c5e380b6db8a2580d6 (MD5) / Staphylococcus xylosus é um microrganismo envolvido na fermentação de produtos cárneos e produtor de lipases extracelulares, que catalisam a hidrólise e a síntese de ésteres formados por glicerol e ácidos graxos e são ferramentas valiosas em biotecnolgia. O objetivo deste trabalho foi clonar, expressar e purificar lipase recombinante de uma linhagem de Staphylococcus xylosus isolada de lingüiça colonial produzida no sul do Brasil. A extração de DNA foi realizada a partir de linhagens de S. xylosus isoladas de lingüiça colonial e de uma linhagem padrão de S. xylosus (ATCC 29971). Os fragmentos correspondentes a região madura da lipase (AF208229) foram amplificados (1,1 kb) e clonados em plasmídio pGEM-T Easy. As seqüências obtidas apresentaram homologia de 99% com o gene de lipase de S. xylosus AF208229. Estes fragmentos que correspondem à região de codificação da lipase madura foram inseridos em um plasmídeo pET14b para construir as proteínas-fusão. As proteínasfusão foram expressas em E. coli e purificadas em coluna de afinidade por metal imobilizado de níquel. As proteínas purificadas apresentaram atividade de lipase usando ésteres de p-nitrofenilpalmitato e p-nitrofenilbutirato como substratos. Desta forma, a lipase obtida a partir de Staphylococcus xylosus apresenta potencial de aplicabilidade na indústria de embutidos cárneos fermentados. Entre as bactérias predominantes envolvidas em doenças transmitidas por alimentos está a bactéria Staphylococcus aureus que produz enterotoxinas nos alimentos provocando intoxicação gastrintestinal. Os objetivos da pesquisa foram avaliar a contaminação por estafilococos coagulase positiva (ECP) em produtos cárneos e derivados de leite comercializados em Santa Catarina e detectar por PCR multiplex a presença dos genes que codificam as enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e SEE e gene específico para espécie S. aureus. Foram coletadas 72 amostras de alimentos entre queijos tipo mussarella (15), prato (15) e colonial (15), lingüiça colonial (18) e salaminho (09) em estabelecimentos comerciais na região do Alto Uruguai Catarinense em Santa Catarina. Foram realizadas a contagem de estafilococos coagulase positiva (ECP) e a detecção por PCR dos genes específicos para S. aureus (femA) e para os genes (sea, seb, sec, sed e see) das enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e SEE, a partir do DNA extraído de 102 cepas isoladas das amostras. A presença de ECP foi detectada em 33 amostras (45,8%) de produtos de origem animal analisadas e as contagens de ECP estavam acima do valor máximo permitido pela legislação (103 UFC.g-1) em 22 amostras (30,5%). De 102 cepas isoladas ECP, para 91 (89,2%) cepas ocorreu a amplificação do gene femA. A amplificação dos genes sea, sed e see que codificam as enterotoxinas, ocorreu em 10, 12 e 4 cepas, respectivamente. Os resultados do presente trabalho confirmam que a PCR multiplex é um método rápido e sensível para análise de varredura de Staphylococcus coagulase positiva interotoxigênico, sendo altamente específica. Este trabalho sugere que os produtos analisados podem conter as enterotoxinas SEA, SED e SEE e aponta a necessidade de melhoria na produção e nos sistemas de fiscalização dos produtos analisados. Staphylococcus xylosus causes fermentation in meat products and produces extracellular lipases which catalyze hydrolysis and synthesis from esters formed by glycerol and fatty acids. These lipases are also valuable tools to biotechnolgy. The aim of this work was cloning, sequencing and express a S. xylosus recombinant lipase. The DNA extraction was made from S. xylosus strains isolated from artisanal salami and from a S. xylosus standard strain (ATCC 29971). Fragments corresponding to a mature lipase (AF208229) were amplified (1.1 kb) and cloned into pGEM-T Easy plasmid. The sequences obtained showed 99% homology with the lipase gene of S. xylosus AF208229. Fragments corresponding to the mature region of lipase were inserted into a pET14b plasmid to build fusion proteins containing histidine tail. Fusion-proteins were expressed into E. coli and then purified with nickel affinity column. Purified proteins showed lipase activity using p-nitrophenilpalmitate and p-nitrophenilbutirate esters as substrates. The lipase obtained from Staphylococcus xylosus has a potential applicability in the fermented meat industry. The other organism studied was Staphylococcus aureus which is involved in food diseases and produce enterotoxins in food causing gastrointestinal poisoning. Contamination by coagulase-positive Staphylococci (CPS) in meat and milk-derived products commercialized in Santa Catarina, Brazil was evaluated and the presence of genes for classical staphylococcal enterotoxins A, B, C, D and E (sea, seb, sec, sed and see) and for gene femA, specific por S. aureus species, by multiplex PCR, detected. A total of 72 food samples including mozzarella (15 samples), American cheese (15 samples), colonial cheese (15 samples), colonial sausage (18 samples) and salaminho (09 samples) were analised. Of 102 strains isolated CPS, for 91 (89.2%) strains of gene amplification occurred at fema. The amplification of genes sea, sed and see coding for enterotoxins, occurred in 10, 12 and 4 strains, respectively. Results of the present work confirm that multiplex PCR is a rapid and sensitive method for screening of enterotoxigenic coagulase-positive Staphylococci, being highly specific. Results also indicate that better hygiene practices and better inspection are required in the production of the foods included in the study.

Submitted by Luciana de Cenço Correa Lacerda (lulacerda2@yahoo.com.br) on 2018-06-21T19:31:05Z No. of bitstreams: 1 TESE Luciana 21.06.18 PRONTA.pdf: 1525467 bytes, checksum: a6d6df3286d60500baf769d3035234e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-06-25T18:40:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lacerda_lcc_dr_jabo.pdf: 1525467 bytes, checksum: a6d6df3286d60500baf769d3035234e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-25T18:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lacerda_lcc_dr_jabo.pdf: 1525467 bytes, checksum: a6d6df3286d60500baf769d3035234e1 (MD5) Previous issue date: 2018-05-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Lesões na pele podem resultar em feridas que, dependendo do tempo de reparação tissular podem ser classificadas como agudas ou crônicas, sendo crônicas aquelas que não apresentaram cicatrização dentro do período de quatro semanas. A ferida é contaminada por diferentes espécies bacterianas, sendo o sistema imunológico da pele o responsável por impedir que tais contaminações evoluam para infecções. No entanto, muitas vezes o quadro infeccioso é instalado, havendo necessidade de tratamento com antimicrobianos. Tendo em vista que o mau uso de antimicrobianos provoca resistência a multidrogas em estirpes bacterianas potencialmente patogênicas, este trabalho teve como objetivo identificar as bactérias prevalentes em feridas agudas e crônicas de cães por meio de sequenciamento da região 16S rRNA e testar a sensibilidade dos isolados a diferentes antimicrobianos. Para tanto, foram amostradas 20 feridas, sendo cada uma de um cão atendido no Hospital Veterinário da UNESP, Câmpus de Jaboticabal. De cada ferida foram obtidos dez isolados, os quais foram selecionados para o sequenciamento de DNA por meio de comparação entre os perfis genéticos obtidos pelo emprego de marcador molecular randômico. Foram sequenciados 74 isolados identificados como pertencentes a oito gêneros de bactérias gram-negativas, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana e Providencia stuartii, e três de gram-positivas, Enterococcus sp., Staphylococcus spp. e Bacillus spp. Casos de cães com feridas agudas ou crônicas, associadas a mais de um gênero bacteriano, foram de 85,7% e 30,7%, respectivamente. Isolados da espécie S. aureus apresentaram amplificação para quatro genes codificadores das enterotoxinas sea, seh, see e hlg, enquanto um isolado de B. cereus foi positivo para a presença dos genes hblA, hblC, hblD, nheA, nheB, nheC e entFM. Dois dos isolados de E. coli (6%) apresentaram o gene blaCTX-M-2 e provaram ser resistentes à cefotaxima, um antibiótico do grupo dos β-lactâmicos. Todos os isolados avaliados apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados, sendo metronidazol, cefalexina e cefazolina, aqueles pelos quais os isolados mostraram maior resistência. Cinco pacientes que estavam sob antibioticoterapia no momento da coleta possuíam estirpes resistentes aos antimicrobianos pelos quais estavam sendo tratados. Tendo em vista que há uma grande diversidade bacteriana resistente à multidrogas colonizando feridas cutâneas agudas e crônicas de cães, a implantação de antibiogramas previamente à recomendação de antimicrobianos é prática imprescindível e deve ser implantada para preservação da saúde animal e, consequentemente, pública. / Skin lesions can result in cutaneous wounds that may be classified as acute or chronic depending on the period of time spent in tissue repairment. Wounds that have not healed within four weeks are generally classified as chronic. The wound is contaminated by different bacterial species and the immune system of the skin is responsible for preventing infections. Nonetheless, the infectious process is often developed and antimicrobial treatment become necessary. Considering that the misuse of antimicrobials provokes multidrug resistance in potentially pathogenic bacterial strains, this work aimed to identify prevalent bacteria in acute and chronic wounds of dogs by 16S rRNA sequencing and to test the sensitivity of the isolates to different antimicrobials. For that, 20 wounds were sampled, each one from a dog admitted at the Veterinary Hospital of UNESP, Jaboticabal, São Paulo, Brazil. From each wound ten isolates were obtained, which were selected for DNA sequencing through genetic profiles comparison by applying a random molecular marker. Seventy-five isolates were identified as belonging to eight Gram-negative bacteria genera, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana and Providencia stuartii, and to three gram-positive bacteria genera, Enterococcus sp., Staphylococcus spp. and Bacillus spp. Cases of dogs with acute or chronic wounds associated to more than one bacterial genus were 85.7% and 30.7%, respectively. Staphylococcus aureus isolates presented amplification to four enterotoxin encoding the genes sea, seh, see and hlg, whereas a B. cereus isolate was positive for hblA, hblC, hblD, nheA, nheB, nheC and entFM genes. Two of the E. coli isolates (6%) presented the blaCTX-M-2 gene and proved to be resistant to cefotaxime, a β-lactam antibiotic. All isolates evaluated were resistant to at least one of the antimicrobials tested, being metronidazole, cephalexin and cefazolin the ones for those the isolates showed to be more resistant. Five patients undergoing antibiotic therapy at the same period of sampling presented resistants bacterial strains to the antibiotics by which the patients were being treated. Considering that there is great multidrug resistant bacterial diversity colonizing acute and chronic cutaneous wounds of dogs, the implantation of antibiograms prior to the antimicrobials recommendation is a practice to be implemented in order to preserve animal and, consequently, public health.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:56Z : No. of bitstreams: 1 000849670.pdf: 1421991 bytes, checksum: 5b10092e2a2350f4d4a5b9c0411c1341 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo o isolamento de Staphylococcus aureus e estafilococos coagulase negativos (ECN), associados com casos de mastite subclínica, a partir de amostras de leite de 134 vacas, em dez pequenas propriedades leiteiras familiares, da região de Bauru - SP, determinar a susceptibilidade a antimicrobianos e investigar a presença de genes de enterotoxinas e do gene mecA de resistência à oxacilina, dos casos de mastite subclínica, a partir das cepas bacterianas isoladas do leite dos animais, e dos tanques de resfriamento. Isolaram se 105 amostras de Staphylococcus spp, sendo 55 (52,4%) estafilococos coagulase positivos (ECP) e 50 (47,6%) ECN. Entre os ECP, S.aureus foi isolado em 48 (87,3%) dos casos. Das 12 espécies de ECN isoladas, as mais freqüentes foram S. warneri, S. hyicus, e S. xylosus. Os maiores níveis de resistência, foram observados frente ao grupo dos beta-lactâmicos tanto para os ECP - 92,7% para penicilina e 90,9% para ampicilina, como para os ECN - 56% e 52% de resistência, respectivamente. Todas amostras de ECP foram sensíveis a cefalexina, e 96% dos isolados de ECN a enrofloxacina. Em relação a presença de genes codificadores de enterotoxinas, dos casos de mastite subclínica, 17/142 (12%) foi positiva para algum dos genes estudados. O gene sea foi o mais prevalente, sendo detectado em 11 (7,7%). O gene seb em 05 (3,5%) e o sec em 01 (0,7%) das amostras. Todas foram negativas para o gene sed. Dos Staphylococcus spp isolados das mastites subclínicas, houve detecção do gene sec em 8/105 (7,6%), sendo que cinco (4,7%) eram ECP, e três (2,8%) ECN. Das 10 amostras de leite dos tanques, duas (20%) foram positivas para sea e uma (10%) para seb. O gene mecA foi detectado em três cepas de S. aureus, (6,2%). A identificação de genes codificadores de enterotoxinas em casos de mastite subclínica e em tanques comunitários, sinalizam a importância do monitoramento destes agentes visando a... / This study aimed at the isolation of Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci, from bovine milk samples, associated with cases of subclinical mastitis detected in ten small properties from Bauru - SP. Also, determine the antimicrobial susceptibility of the agents isolated and to investigate the presence of enterotoxin gene and the mecA gene of oxacillin resistance from the bacterial strains, and milk samples from bulk tanks . Of 105 samples obtained, 55 ( 52.4 %) were coagulase positive staphylococcus (CPS) and 50 (47.6%) coagulase negative staphylococcus (CNS). Among the CPS, S. aureus was isolated in most cases, 48 ( 87.3 %). Of the 12 CNS species isolated, the most frequent were S. warneri, S. hyicus, both with 8 (16%) and S. xylosus 7 (14%) . The highest levels of antibiotics resistance were observed for the group of β - lactam antibiotics - penicillin 92.7% and ampicillin 90.9% CPS and ECN - 56 % and 52 % respectively. The greatest sensitivity of the CPS strains was to cephalexin, and for CNS isolates to enrofloxacin. From the cases of subclinical mastitis, genes encoding enterotoxins were found in, 17/142 (12%) . The sea gene was the most prevalent being detected in 11 ( 7.7 %). The seb gene was detected in five (3.5%) samples, and in one sec (0.7%). All were negative for sed gene. When we consider the results directly from cultures of Staphylococcus spp. isolated from subclinical mastitis, there was only the gene sec in 8/105 (7.6%).From these isolates of Staphylococcus spp., positive for sec 05/105 (4.8%) were CPS, (03 S. aureus and 02 S.intermedius) and 03/105 (2.8%) CNS, (01 S. xylosus, 01 S.hyicus and 01 S.lugdunensis). To sea, seb and sed samples were negative. Of the ten samples from the bulk tanks, 02/10 (20%) were positive for sea and 01/10 (10%) to seb. The mecA gene was detected in three strains of S. aureus, representing 6.2% of the total of 48 S. aureus strains isolated. The identification ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-09Bitstream added on 2014-06-13T18:44:22Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_mim_dr_jabo.pdf: 522825 bytes, checksum: 066e5211f8954b4b476c5f2c60691d33 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foi realizado o estudo epidemiológico molecular de estirpes de Staphylococcus aureus potencialmente toxigênicas isoladas no processo de produção do Queijo Tipo Minas Frescal em uma micro-usina no Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas seis amostragens durante o período de junho de 2008 a julho de 2009, de modo a perfazer um total de 140 amostras, as quais foram colhidas do leite cru e pasteurizado, mãos do manipulador, queijo embalado para consumo e diversos pontos do fluxograma de seu processamento. A confirmação molecular da espécie dos isolados e a presença de genes codificadores das enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e da toxina TSST-1, foram realizadas a partir da amplificação dos fragmentos de DNA genômico específico. Entre as 41 (29,3,4%) das estirpes confirmadas como sendo S. aureus, 25 (61%) mostraram-se positivas na pesquisa de genes codificadores de toxinas estafilocócicas. Os pontos de maior frequência de estirpes de S. aureus toxigênico foram as mãos do manipulador (16,0%), o leite cru do tanque de recepção (12,0%), o leite pasteurizado (12,0%) e o Queijo Tipo Minas Frescal pronto para consumo (12,0%). O gene codificador de enterotoxina de maior frequência identificada foi o sea. Na determinação do potencial toxigênico das estirpes com genes codificadores de enterotoxinas por imunodifusão, apenas uma estirpe isolada da superfície interna do tanque de estocagem do leite cru foi produtora da enterotoxina SEC. Houve variabilidade genética entre as 41 estirpes de S. aureus isoladas, uma vez que foram identificados 22 pulsotipos diferentes pelo PFGE. Os resultados obtidos permitem a adoção de medidas para a melhoria do processamento do Queijo Tipo Minas Frescal de modo a reduzir o risco potencial que estas toxinas podem representar para a saúde da população consumidora deste produto / We performed molecular epidemiological study of strains of Staphylococcus aureus isolated toxigenic potential in the process of producing the Frescal Minas Type Cheese in a micro-mill in State of São Paulo. For this, six samples were taken during the period June 2008 to July 2009 in order to make a total of 140 samples, which were collected raw and pasteurized milk, the handler's hands, cheese packaged for consumption and different points flowchart of processing. Confirmation of the molecular species of the isolates and the presence of genes encoding enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and TSST-1 toxin, were made from the amplification of specific fragments of genomic DNA. Among the 41 (29.3%) of strains confirmed as S. aureus, 25 (61%) were positive in the research of genes encoding staphylococcal toxins. Points higher frequency of toxigenic strains of S. aureus were the hands of the handler (16.0%), raw milk receiving tank (12.0%), pasteurized milk (12.0%) and Frescal Minas Type Cheese ready for consumption (12.0%). The gene encoding enterotoxin most frequently identified was the sea. In determining the potential toxigenic strains with genes encoding enterotoxins by immunodiffusion, only one strain isolated from the inside surface of the storage tank of raw milk was the producer of enterotoxin SEC. There was genetic variability among the 41 strains of S. aureus isolated, since they were identified by 22 different PFGE pulsotypes. The results obtained allow the adoption of measures to improve the processing of Frescal Minas Type Cheese to reduce the potential risk that these toxins can pose to the health of consumers of this product

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2104-07-18. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:21Z : No. of bitstreams: 1 000830226.pdf: 861219 bytes, checksum: 814efdb359b08c3f5dab035dde587b30 (MD5) / A atividade leiteira na agricultura familiar é fundamental para sobrevivência e manutenção do homem no campo. A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e oferece riscos à saúde pública. O presente estudo avaliou a qualidade do leite proveniente da agricultura familiar na região de Botucatu-SP, as dificuldades enfrentadas pelos produtores, a etiologia das mastites, e o perfil de sensibilidade dos patógenos aos antimicrobianos. Avaliou-se também a presença de genes produtores de enterotoxinas em linhagens de Staphylococcus isoladas. Objetivou também a recomendação de ações para melhoria na produção, visando a qualidade do leite. Aplicou-se um questionário socioeconômico aos produtores e foram coletadas amostras individuais do leite do conjunto de latões de cada propriedade e de vacas diagnosticadas com mastite pelo California Mastitis Test (CMT). Avaliou-se os teores de gordura, proteína, lactose, extrato seco, extrato seco desengordurado, a contagem bacteriana total (CBT), e a contagem de células somáticas (CCS). Foram analisadas 21 propriedades onde constatou-se que a idade média dos produtores era de 59 anos. Apenas cinco deles (23,8%) tinham ensino médio completo ou superior, sendo que nenhum (0%) contava com assessoria veterinária. Quanto às instalações da sala de ordenha, apenas quatro (19,0%) possuíam estábulos com piso concretado e quatro (19,0%) utilizavam sistema de ordenha mecânica. Quanto ao manejo, apenas um (4,8%) realizava pré-dipping corretamente, nenhum (0%) realizava pós-dipping, dois (9,5%) utilizavam papel toalha descartável na ordenha e somente dois produtores (9,5%) utilizavam o CMT com periodicidade. Em contrapartida, 15 produtores (71,4%) revelaram terem utilizado antimastíticos para tratamento das vacas. Com relação aos animais, foram avaliadas 239 vacas (média = 11,4 animais/propriedade). A mastite clínica foi verificada em apenas duas vacas (<1%), enquanto que ... / Dairy farming on family farms is critical for survival and maintenance of the rural worker. Bovine mastitis negatively impacts milk production and presents risks to public health. This study evaluated the quality of the milk from the family farm in the region of Botucatu-SP, the difficulties faced by producers, the mastitis etiology, and sensitivity profile of pathogens against antimicrobials. Also evaluated the presence of enterotoxin producing genes in isolated staphylococcal strains. Also aimed the recommendation of actions to improve the production, seeking the quality of the milk. A Socioeconomic questionnaire was applied to producers and individual milk samples were collected from the set of brasses of each property and from cows diagnosed with mastitis by California Mastitis Test (CMT). It was evaluated the levels of fat, protein, lactose, dried extract and nonfat dry extract, the total bacterial count (TBC) and the somatic cell count (SCC). Twenty one (21) properties were analyzed where it was found that the average of the farmers was 59 years. Only five of them (23.8%) had completed high school or higher, and none (0%) counted on veterinary advice. As for their facilities of milking parlor, only four (19.0%) had stables with concreted floor and four (19.0%) used mechanical milking system. As to the handling, only one (4.8%) performed pre-dipping correctly, none (0%) performed post-dipping, two (9.5%) used disposable paper for milking and only two producers (9.5%) used the CMT with periodicity. On the other hand, 15 producers (71.4%) stated that they used anti mastitis for treating the cows. Regarding the animals, 239 cows (average = 11.4 animals / property) were evaluated. The clinical mastitis was detected in only two cows (<1%), whereas 86 animals showed milk positive to CMT (35.9% of subclinical mastitis). One hundred seventy-seven (177) milk samples were cultured, on 55 (31.1%) of them it was identified staphylococci, on ...

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-05. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:51Z : No. of bitstreams: 1 000865506.pdf: 1455699 bytes, checksum: 95843a06b568521fddadf478cd152d92 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram estudados 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina de diferentes propriedades do estado de São Paulo: 150 Staphylococcus coagulase positiva (SCP) e 150 Staphylococcus coagulase negativa (SCN). A presença de genes para produção de enterotoxinas foi detectada pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) e a expressão gênica pela PCR transcriptase reversa (RT-PCR). Os isolados foram submetidos ao perfil de sensibilidade correlacionada com a detecção dos genes mecA e vanA, pela técnica de PCR. Os 150 SCN isolados foram identificados como sendo: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2,7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(0,7%) S. saprophyticus subsp. bovis e 1(0,7%) S. capitis. Entre os SCP foram isolados: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. A concordância entre a identificação fenotípica e genotípica do total de linhagens de SCN e SCP foi de 96,7% e 98,7%, respectivamente. Foram detectados genes codificadores para enterotoxinas clássicas (sea, seb, sec, sed) e outras enterotoxinas (see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq) em 175 (58%) dos 300 Staphylococcus spp. pesquisados. Estes genes foram detectados em 109 (73%) dos SCN isolados, resultado significantemente maior que entre SCP 66 (44%), P<0,0001. Entre os 109 SCN foram detectados genes codificadores de enterotoxinas nas seguintes espécies: 37(33,9%) S. warneri, 17(15,6%) S. epidermidis, 16(14,7%) S. hyicus, 5(4,6%) S. xylosus, 5(4,6%) S. haemolyticus, 4(3,7%) S. simulans, 4(3,7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3,7%) S. homini, 4(3,7%) S. pasteuri, 3(2,7%) S. saprophyticus... / A total of 300 isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied, respectively: 150 CPS and 150 CNS strains. The isolates were analyzed to enterotoxins codifying genes by Polymerase Chain Reaction (PCR). Gene expression was evaluated by reverse transcription PCR (RT-PCR). The isolates were subjected to sensitivity profile correlated with the detection of mecA and vanA gene by PCR. Among the CNS the following species were identified: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis and 1(0.7%) S. capitis. Among the 150 CPS: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius and 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. The identification by phenotypic and genotypic tests showed a concordance of 96.7% in the CNS isolates, and 98.7% in the CPS. The codifying genes to enterotoxins production were detected to classical and enterotoxin-like in 175 (58%) out of 300 staphylococci isolates. These genes were detected significantly higher among the CNS (73%) in relation to CPS (44%), P<0.0001. In 109 CNS codifying genes to enterotoxins were detected in the following species: 37(33.9%) S. warneri, 17(15.6%) S. epidermidis, 16(14.7%) S. hyicus, 5(4.6%) S. xylosus, 5(4.6%) S. haemolyticus, 4(3.7%) S. simulans, 4(3.7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3.7%) S. homini, 4(3.7%) S. pasteuri, 3(2.7%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3(2.7%) S. cohnii, 3(2.7%) S. chromogenes, 2(1.8%) S. sciuri, 1(0.9%) S. lugdunensis and 1(0.9%) S. capitis. Among the 66 CPS, the enterotoxin genes were observed in the following species: 48(73 %) S. aureus, 10(15%) S. hyicus, ... / FAPESP: 11/21142-2

Orientador: Antonio Nader Filho / Coorientador: Luis Manuel Medina Canalejo / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Luciano Menezes Ferreira / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Foi realizado o estudo epidemiológico molecular de estirpes de Staphylococcus aureus potencialmente toxigênicas isoladas no processo de produção do Queijo Tipo Minas Frescal em uma micro-usina no Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas seis amostragens durante o período de junho de 2008 a julho de 2009, de modo a perfazer um total de 140 amostras, as quais foram colhidas do leite cru e pasteurizado, mãos do manipulador, queijo embalado para consumo e diversos pontos do fluxograma de seu processamento. A confirmação molecular da espécie dos isolados e a presença de genes codificadores das enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e da toxina TSST-1, foram realizadas a partir da amplificação dos fragmentos de DNA genômico específico. Entre as 41 (29,3,4%) das estirpes confirmadas como sendo S. aureus, 25 (61%) mostraram-se positivas na pesquisa de genes codificadores de toxinas estafilocócicas. Os pontos de maior frequência de estirpes de S. aureus toxigênico foram as mãos do manipulador (16,0%), o leite cru do tanque de recepção (12,0%), o leite pasteurizado (12,0%) e o Queijo Tipo Minas Frescal pronto para consumo (12,0%). O gene codificador de enterotoxina de maior frequência identificada foi o sea. Na determinação do potencial toxigênico das estirpes com genes codificadores de enterotoxinas por imunodifusão, apenas uma estirpe isolada da superfície interna do tanque de estocagem do leite cru foi produtora da enterotoxina SEC. Houve variabilidade genética entre as 41 estirpes de S. aureus isoladas, uma vez que foram identificados 22 pulsotipos diferentes pelo PFGE. Os resultados obtidos permitem a adoção de medidas para a melhoria do processamento do Queijo Tipo Minas Frescal de modo a reduzir o risco potencial que estas toxinas podem representar para a saúde da população consumidora deste produto / Abstract: We performed molecular epidemiological study of strains of Staphylococcus aureus isolated toxigenic potential in the process of producing the Frescal Minas Type Cheese in a micro-mill in State of São Paulo. For this, six samples were taken during the period June 2008 to July 2009 in order to make a total of 140 samples, which were collected raw and pasteurized milk, the handler's hands, cheese packaged for consumption and different points flowchart of processing. Confirmation of the molecular species of the isolates and the presence of genes encoding enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and TSST-1 toxin, were made from the amplification of specific fragments of genomic DNA. Among the 41 (29.3%) of strains confirmed as S. aureus, 25 (61%) were positive in the research of genes encoding staphylococcal toxins. Points higher frequency of toxigenic strains of S. aureus were the hands of the handler (16.0%), raw milk receiving tank (12.0%), pasteurized milk (12.0%) and Frescal Minas Type Cheese ready for consumption (12.0%). The gene encoding enterotoxin most frequently identified was the sea. In determining the potential toxigenic strains with genes encoding enterotoxins by immunodiffusion, only one strain isolated from the inside surface of the storage tank of raw milk was the producer of enterotoxin SEC. There was genetic variability among the 41 strains of S. aureus isolated, since they were identified by 22 different PFGE pulsotypes. The results obtained allow the adoption of measures to improve the processing of Frescal Minas Type Cheese to reduce the potential risk that these toxins can pose to the health of consumers of this product / Doutor