Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-09-06T20:18:32Z No. of bitstreams: 1 SabinaDosSantosPaulinoDaSilva_DISSERT.pdf: 971170 bytes, checksum: de3fd16a5be3f838661b201aef9e1cbc (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-09-06T23:23:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SabinaDosSantosPaulinoDaSilva_DISSERT.pdf: 971170 bytes, checksum: de3fd16a5be3f838661b201aef9e1cbc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T23:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SabinaDosSantosPaulinoDaSilva_DISSERT.pdf: 971170 bytes, checksum: de3fd16a5be3f838661b201aef9e1cbc (MD5) Previous issue date: 2015-09-24 / Os manipuladores de alimentos colonizados por Staphylococcus produtores de enterotoxinas s?o uma fonte potencial de intoxica??o alimentar. O objetivo deste estudo foi pesquisar a presen?a de genes que codificam enterotoxinas em Estafilococos Coagulase Positivos (ECP) e Estafilococos Coagulase Negativos (ECN) isolados das narinas e das m?os dos manipuladores de alimentos de um restaurante universit?rio na cidade de Natal-RN. Trinta manipuladores de alimentos foram inclu?dos no estudo. O material das m?os e das narinas foi coletado utilizando um swab est?ril. Os isolados foram submetidos ? colora??o de Gram, teste de sensibilidade a bacitracina, fermenta??o de manitol e provas para a catalase e coagulase livre. Os ECNs e ECPs foram posteriormente identificados atrav?s de testes bioqu?micos e pelo sistema Vitek 2 (BioMerieux, Fran?a). A t?cnica da rea??o em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para a detec??o dos genes para as enterotoxinas A, B, C, D, E, G, H, e I (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, e sei) e o m?todo de disco-difus?o foi utilizado para a determina??o da susceptibilidade aos antimicrobianos. Todos os manipuladores de alimentos apresentaram Estafilococos em suas m?os e/ou narinas. Foram isolados 58 Staphylococcus sp., dos quais 20,7% eram ECP e 79,3% eram ECN. Staphylococcus epidermidis foi a esp?cie mais prevalente. Vinte e nove Estafilococos (50%) apresentaram um ou mais genes para enterotoxinas e os genes mais prevalentes foram seg e sei, com uma frequ?ncia de 29,3% para ambos. Dentre as cepas de Staphylococcus aureus, 75% possu?am genes para enterotoxinas. Entretanto, os ECNs apresentaram uma frequ?ncia elevada de genes (43,5%). A maioria dos isolados mostrou sensibilidade aos antibi?ticos testados, com exce??o da penicilina para a qual apenas 35% das cepas foram sens?veis. Os resultados deste estudo mostram que n?o somente os Estafilococos coagulase positivos, mas tamb?m os coagulase negativos s?o portadores de genes para enterotoxinas. / Food handlers carrying enterotoxin-producing Staphylococcus are a potential source of food contamination. The aim of this study was to analyze genes enconding enterotoxins in coagulase-positive Staphylococcus (CoPS) and coagulase-negative Staphylococcus (CoNS) isolated from the anterior nostrils and hands of food handlers at a university restaurant in the city of Natal, Northeast Brazil. Thirty food handlers were screened for the study and the collected Staphylococcus sp. Most isolates were subjected to Gram staining, a bacitracin sensitivity test, mannitol fermentation, and catalase and coagulase tests. CoNS and CoPS strains were subsequently identified by biochemical tests and a Vitek 2 System (BioMerieux, France). PCR was used to detect genes for enterotoxins A, B, C, D, E, G, H, and I (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, and sei) and a disc-diffusion method was used to determine susceptibility to several classes of antimicrobials. All food handlers presented staphylococci on their hands and/or noses. The study found 58 Staphylococcus sp., of which 20.7% were CoPS and 79.3% were CoNS. Staphylococcus epidermidis was the most prevalent species. Fifty percent of Staphylococcus spp. isolated was positive for one or more enterotoxin genes, and the most prevalent genes were seg and sei, each with a frequency of 29.3%. Indeed, CoNS encoded high percentage of enterotoxin genes (43.5%). However, Staphylococcus aureus encoded even more enterotoxin genes (75%). Most isolates showed sensitivity to the antibiotics used for testing, except for penicillin (only 35% sensitive). The results from this study reinforce that coagulase-negative as well as coagulase-positive staphylococci isolated from food handler are capable of genotypic enterotoxigenicity.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1370501 bytes, checksum: 64432b0656ba736f2b945a205fa9a8c4 (MD5) Previous issue date: 2012-11-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Staphylococcus is constituted of numerous pathogenic species, including S. aureus, which is often related to food poisoning cases and outbreaks, especially in dairy products. Its pathogenic activity is due to the ability of some strains to produce thermostable enterotoxins (SE). S. aureus detection in foods is often performed using conventional methods, which requires additional tests, such as biochemical and molecular characterization with the purpose of estimating its enterotoxigenic potential. The aim of this study was to characterize the enterotoxigenic potential of Staphylococcus spp. isolates and determine their genetic variability. In a previous study, a Staphylococcus spp. culture collection was obtained, from which 89 isolates were selected and subjected to phenotypical (coagulase and thermonuclease production, biochemical profile and SE production) and molecular analysis (SmaI macrorestriction, SE gene detection by PCR and DNA sequencing). PFGE analysis obtained by SmaI macrorestriction patterns revealed a highly heterogeneous population. Of the 89 isolates, 15.7% were capable of producing classical enterotoxins (SEA-SEE). 21.4% of isolates showed matching results between production of enterotoxins and detection of classical SE genes. 62.9% of isolates showed at least one of the classical SE genes, in association with other non-classical SE genes. SE genes were observed in all isolates and in different combinations, which revealed 59 distinct genotypes. sek was the least frequent observed SE gene, while sei was present in 98.9% of isolates. Partial sequencing of agr locus in 41 isolates showed the ocurrence of agr groups I (68.3%) and II (31.7%). No significant associations were found between agr groups, enterotoxin genes profiles, occurrence of egc cluster, PFGE profiles and/or SE production. Our findings suggest the absence of phenotypic or genotypic markers ideally correlated with the enterotoxigenic production of staphylococci of food origin, which demands further studies for better understanding the occurrence of these associations. / O gênero Staphylococcus é constituído de inúmeras espécies patôgenicas, especialmente S. aureus, que estão frequentemente relacionados a surtos de intoxicação alimentar, principalmente em leite e derivados. Essa atividade patogênica se deve à capacidade de algumas cepas em produzir enterotoxinas termoestáveis. A detecção de S. aureus em alimentos é realizada através de métodos clássicos de cultivo, porém requer testes complementares, que visam a caracterização adequada do potencial patogênico dos isolados. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o potencial enterotoxigênico e determinar o grau de variabilidade genética de isolados de Staphylococcus spp.. A partir de uma coleção de microorganismos obtidos de leite cru e queijo frescal em um estudo preliminar, 89 isolados foram selecionados e submetidos à análises fenotípicas (produção de coagulase e termonuclease, perfil bioquímico e produção de enterotoxinas) e moleculares (macrorrestrição por SmaI, PCR para genes de enterotoxinas e sequenciamento de DNA). As análises de PFGE dos perfis de macrorrestrição por SmaI revelaram uma população altamente heterogênea. Dos 89 isolados, 15,7% dos isolados foram produtores de enterotoxinas clássicas. 21,4% dos isolados apresentaram resultados correspondentes entre a presença de genes e a detecção de enterotoxinas. 62,9% dos isolados apresentaram ao menos um dos genes de enterotoxinas clássicas, sempre em associações com os demais genes de enterotoxinas pesquisados. Todos os isolados apresentaram ao menos um dos genes de enterotoxinas pesquisados, em diversas combinações, com a ocorrência de 59 genótipos diferentes. sek foi o gene menos observado, enquanto sei esteve presente em 98,9% dos isolados. O locus egc foi detectado em 5 isolados, porém sua presença foi observada de forma incompleta em diversos isolados. O sequenciamento parcial do locus agr em 41 isolados revelou a ocorrência dos grupos agr I (68,3%) e II (31,7%). Não foram encontradas associações significativas entre grupos agr, perfis de genes de enterotoxinas, ocorrência do egc, perfis obtidos na PFGE e produção de enterotoxinas. As observações do presente estudo sugerem a ausência de marcadores idealmente correlacionados com a capacidade enterotoxigênica de isolados de estafilococos provenientes de amostras de alimentos, o que demanda a realização de outros estudos para compreender melhor a ocorrência dessas associações.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-05-12T20:45:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mariana de Andrade Ferreira - 2015.pdf: 2863875 bytes, checksum: 62c67ecc0abf8022b7bf54c6de62a20c (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-13T12:05:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mariana de Andrade Ferreira - 2015.pdf: 2863875 bytes, checksum: 62c67ecc0abf8022b7bf54c6de62a20c (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T12:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mariana de Andrade Ferreira - 2015.pdf: 2863875 bytes, checksum: 62c67ecc0abf8022b7bf54c6de62a20c (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-08-28 / Staphylococcus aureus is an important foodborne pathogen, able to produce extracellular toxins and to express antimicrobial resistance. Among the foods involved in staphylococcal food poisoning, stands out the cheese, especially when manufactured under improper hygienic and sanitary conditions. The objectives of this study were to characterize Staphylococcus aureus isolated from artisanal and industrialized Minas frescal cheeses, to determine their antimicrobial susceptibility profile as well as the genetic similarity among the isolates. The isolates were also tested for staphylococcal enterotoxins (SE) genes and other virulence factors. Fifty-six artisanal raw milk cheeses sold at street fairs and 10 industrialized cheeses commercialized in supermarkets of Goiânia, Goiás were analyzed between June and August 2014. S. aureus was confirmed in 19 samples (33.9%) of artisanal cheese by detection of femA gene, in which 29 isolates were obtained. These isolates were submitted to the antimicrobial susceptibility test and classified into nine different profiles (A - I). Thirteen isolates (44.8%) were resistant to penicillin and three (10.3%) to tetracycline, with two (7.4%) resistant to both. The Multiplex PCR technique was performed to detect virulence genes that code for the production of hemolysins (Hla and Hlb), toxic shock syndrome toxin (TSST-1), exfoliative toxins (ETa and ETb) and enterotoxins (SEA - SEE, SEG - SEJ, SEM - SEO). Genes encoding TSST-1 and exfoliative toxins were not detected. All the isolates amplified for the hla gene and 14 (48.3%) for the hbl gene. The seh gene was the most frequently detected (n=11, 37.9%) followed by seo gene (n = 3; 10.3%), seg, sem and sen genes (n = 2, 6.9%) and sec and sei genes (n = 1, 3.4%). In one isolate (3.4%), four enterotoxins genes were detected, and in another, six (3.4%). The comparison performed by Pulsed Field Gel Electrophoresis technique revealed 18 different DNA banding patterns which were grouped into five clusters. The genotyping found high genetic similarity among the isolates. Identical isolates were obtained from different samples and one sample showed more than one genetically different isolate. It was identified up to four different isolates from the same sample. The high prevalence of S. aureus in a widely consumed product like Minas fresh cheese, as well as the detection of toxin encoding genes identified in this study, warns of the necessity to reduce the contamination levels in this type of cheese through monitoring and controling the production and trade of the product. / S. aureus é um importante patógeno de origem alimentar com capacidade de produção de toxinas extracelulares e resistência antimicrobiana. Entre os alimentos envolvidos em intoxicação alimentar estafilocócica, destaca-se o queijo, principalmente quando fabricado em condições higienicossanitárias impróprias. Os objetivos deste estudo foram caracterizar S. aureus isolados de queijo Minas frescal artesanal e industrializado, determinar o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos, bem como determinar a similaridade genética entre os isolados. Os isolados foram também testados para genes de enterotoxinas estafilocócicas (SE) e outros fatores de virulência. Foram analisadas 56 amostras de queijo Minas frescal de fabricação artesanal e dez de fabricação industrial comercializados em feiras livres e supermercados de Goiânia-GO, coletadas entre junho e agosto de 2014. S. aureus foi confirmado em 19 amostras (33,9) de queijo artesanal através da detecção do gene femA, onde 29 isolados foram obtidos. Estes isolados foram submetidos ao teste de susceptibilidade aos antimicrobianos e classificados em nove diferentes perfis (A - I). Treze isolados (44,8%) foram resistentes à penicilina e três (10,3%) à tetracilina, sendo dois (7,4%) resistentes a ambos. A técnica de multiplex PCR foi realizada para a detecção de genes de virulência que codificam a produção de hemolisinas (Hla e Hlb), TSST-1, toxinas esfoliativas (ETa e ETb) e enterotoxinas (EEA - EEE, EEG - EEJ, EEM - EEO). Genes que codificam as toxinas TSST-1 e esfoliativa não foram detectados. Todos os isolados amplificaram para o gene hla e 14 (48,3%) para o gene hlb. O gene seh foi o mais frequentemente detectado (n=11; 37,9%), seguido do gene seo (n=3; 10,3%), genes seg, sem, sen (n=2; 6,9%) e os genes sec e sei (n=1; 3,4%). Um isolado (3,4%) amplificou genes para quatro enterotoxinas e outro (3,4%) para seis. A comparação dos 29 isolados de S. aureus feita por PFGE revelou 18 padrões de bandas diferentes de DNA agrupados em cinco clusters. A genotipagem demonstrou alta similaridade genética entre os isolados. Isolados idênticos foram obtidos de amostras diferentes e uma mesma amostra apresentou mais de um isolado geneticamente diferente. Identificou-se até quatro diferentes isolados da mesma amostra. A alta prevalência de S. aureus nas amostras de queijo Minas Frescal, bem como a detecção de genes para produção de toxinas, alertam para a necessidade de reduzir os níveis de contaminação neste tipo de queijo através de monitoramento e controle da produção e comércio do produto.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-15T16:50:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_mario_coppola.pdf: 733232 bytes, checksum: aefd4ed8b53d5285cb8c54b6894c3fc1 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-15T19:51:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_mario_coppola.pdf: 733232 bytes, checksum: aefd4ed8b53d5285cb8c54b6894c3fc1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T19:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_mario_coppola.pdf: 733232 bytes, checksum: aefd4ed8b53d5285cb8c54b6894c3fc1 (MD5) Previous issue date: 2014-04-04 / Sem bolsa / A mastite bovina é uma doença importante dos rebanhos leiteiros por trazer prejuízos à sanidade e produção. Os objetivos desse estudo foram isolar Staphylococcus de amostras de leite de casos de mastite bovina clínica e subclínica no Rio Grande do Sul, confirmar a presença de S. aureus através da amplificação do gene nuc por PCR, identificar os genes das EEs A, B e D e os grupos agr I-IV e a relação entre os genes dos grupos agr e de EEs. Duzentas e sessenta e seis amostras de leite foram analisadas, sendo 218 provenientes de vacas com mastite subclínica e 48 de casos clínicos. Bactérias do gênero Staphylococcus foram isoladas em 88 amostras. A identificação por PCR confirmou 58 amostras como S. aureus, o que correspondeu a 21,7% do total de amostras, 25 foram classificadas como Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e 5 como coagulase positiva. Nas amostras de leite originárias de vacas com mastite subclínica e nos casos clínicos o isolamento de S. aureus foi superior aos SCN e Staphylococcus coagulase positiva. S. aureus foi isolado em maior número de rebanhos, comparado aos SCN e Staphylococcus coagulase positiva. Esses 58 isolados de S. aureus juntamente com outros 32 isolados de casos de mastite bovina no Rio Grande do Sul pertencentes ao banco de isolados do Laboratório de Bacteriologia do IPVDF, num total de 90 isolados foram testados por PCR para a presença de genes dos grupos agr I-IV e das EEs A, B e D. O gene agr mais frequente foi agr-III, seguido por agr-I. Quanto à distribuição por rebanhos, foi identificada maior ocorrência do gene agr-III. O gene de EEs mais encontrado foi sea e quanto à relação entre gene de EEs e agr, foi observada associação significativa entre a presença de sea e agr-I. / Bovine mastitis is an important disease of dairy cattle, which affects sanity and production. The objectives of this study were to isolate Staphylococcus on milk samples from subclinical and clinical cases in the Rio Grande do Sul state, to confirm the presence of S. aureus through amplification of the nuc gene by PCR, to identify the occurrence of enterotoxin (SE) genes A, B e D and agr I-IV groups in S. aureus and the relationship among agr genes and SEs. Two hundred sixty six milk samples were analyzed, 218 from cows with subclinical mastitis and 48 from clinical cases. The Staphylococcus genus was identified in 88 samples. The PCR identification confirmed 58 samples as S. aureus which corresponded to 21,7% of all samples, 25 were classified as CNS and 5 as coagulase positive In milk samples from cows with subclinical mastitis and clinical cases, the isolation of S. aureus was superior to CNS and coagulase positive Staphylococcus. S. aureus was isolated on most herds compared to CNS and coagulase positive Staphylococcus. This 58 isolates of S. aureus with others 32 isolates of bovine mastitis cases from Bacteriology Laboratory of IPVDF, were tested through PCR to presence of agr-I-IV groups and SEs A, B e D genes. The most frequent agr gene was agr-III, followed by agr-I. On herds, the most occurrence gene was agr-III. The most frequent SEs gene found was sea and as for the relationship among SEs genes and agr genes, occurred association for sea and agr-I.

Orientadores: Tomomasa Yano, Maria Celia S. Lanna / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T10:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_DanielaAlves_M.pdf: 9526817 bytes, checksum: 451baed1219c35350316a70f67d5b336 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Estudos de infecções causadas pela ingestão de águas contaminadas, em especial por Escherichia coli, são importantes para definir o papel dessas bactérias em casos de gastroenterites. Devido à ocorrência freqüente da diarréia infantil na cidade de Ouro Preto-MG, análises microbiológicas da sua água de consumo determinaram a presença de E. coli. No presente trabalho, propriedades fenotípicas e genotípicas de virulência foram estudadas em 97 amostras de E. coli isoladas da água de consumo desse município. Os resultados obtidos para padrões de adesão mostraram que 79 (81,4%) amostras aderiram a células HEp-2 em diferentes padrões de adesão, sendo que 49 (62%) amostras aderiram de forma agregativa, 16 (20,3%) apresentaram o padrão difuso, 12 (15,2%) aderiram de forma não característica e 2 (2,5%) apresentaram o perfil de adesão localizada ¿like¿. Por ensaios de hemaglutinação verificou-se que 70 (72%) amostras hemaglutinaram hemácias de cobaia, 64 (65,9%) aglutinaram hemácias eqüinas, 5 (5,2%) foram positivas com hemácias humanas do grupo A e 10 (10,3%) aglutinaram hemácias bovinas. Todas essas amostras evidenciaram um perfil de hemaglutinação manose sensível, o que está associado à presença da fímbria tipo 1. Outro fator de virulência detectado foi a produção de aerobactina em 11 (11,3%) isolados. Em relação à expressão de hemolisinas em meio sólido, 50 amostras de E. coli foram positivas em placas de ágar sangue contendo hemácias de cavalo, 37 lisaram hemácias de carneiro, 28 lisaram eritrócitos de cobaia, nove lisaram eritrócitos humanos e seis foram positivas com hemácias bovinas. Entretanto, os sobrenadantes de cultura de todas essas bactérias não apresentaram atividade hemolítica ¿in vitro¿. Em relação à atividade citotóxica dos sobrenadantes de cultura das amostras, verificou-se que 89 deles provocaram diferentes alterações morfológicas em células Vero, HeLa e CHO. Deste total, 39 apresentaram efeito citotóxico caracterísitico de desarranjo do citoesqueleto celular, foram estáveis ao aquecimento por 100ºC e demonstraram atividade enterotóxica em camundongos recém nascidos. Estudos genotípicos pela PCR, identificaram nove amostras eltIA+, uma amostra stI+, 14 stII+, seis _ hLy+, três sat+, três astA+, duas pic+, 10 kps+, 11 iucD+, 88 fimH+, seis eae+, três papC+ e uma papG1+. Nenhuma amostra foi positiva para os genes stx1, stx2, stx2v, eltIIA, cnfs, cdt, enhly, pet, bfp, inv, K88 e 987p, aggA, aafA e papGII/GIII. Baseado na aderência em células, na produção de toxinas e na presença de genes de virulência, classificou-se 24 amostras como ETEC, 6 como EPEC atípicas , 36 EAEC e 13 como DAEC. Nenhuma amostra foi classificada como EHEC e EIEC. Estes resultados sugerem um possível envolvimento destas amostras de E. coli como um dos agentes enteropatogênicos envolvidos nas infecções entéricas ocorridas na cidade de Ouro Preto / Abstract: Infections studies caused by the ingestion of contaminated water, especially by Escherichia coli, are important to define the pathogenic role of these bacteria in gastroenteritis. Due to frequent infantile diarrhea in the city of Ouro Preto-MG, this city's water microbiologic analysis displayed the presence of E. coli. In the present study, genotypic and phenotypic virulence properties were studied among 97 E. coli strains isolated from the drinking water provided for this city. The obtained results for adhesion patterns showed that 81,4% of the samples adhere to HEp-2 cells in different adhesion patterns, wherein 49 strains adhere in a aggregative pattern, 16 displayed the diffuse pattern, 12 adhered in a non-characteristic pattern and 2 showed the localized adhesion profile ¿like¿. By means of hemagglutination tests we verified that 72 % of the strains hemagglutinated guinea pig erythrocytes, 65,9% agglutinated horse erythrocytes, 5,2% were positives on group A human erythrocytes and 10,3% agglutinated bovine erythrocytes. All these strains made evident a manose sensible hemagglutination profile, which is associated with type 1 fimbriae. Another virulence factor detected was the production of aerobactin in 11,3% of the isolates. Regarding the hemolysin expression in solid medium, 50 E. coli strains were positive in blood agar plates containing horse erythrocytes, 37 lysated sheep erythrocytes, 28 lysated guinea pig erythrocytes, 9 lysated human erythrocytes and 6 were positives on bovine erythrocytes. However, the culture supernatants of all these bacterias didn't displayed any hemolytic activity ¿in vitro¿. This could be associated with a possible b-hemolysin production. In respect of the cytotoxic activity produced by the strains culture supernatants, we verified that 89 of them provoked different morphological alterations in Vero, HeLa and CHO cells. From these, 39 showed a characteristic cytotoxic effect of disarrangement of the cellular cytoskeleton, remained stable when heated by 100ºC and also showed enterotoxic activity in suckling mice. Genotipic studies performed by PCR identified nine eltIA+ strains, one stI+ strain, 14 stII+, six _ hLy+, three sat+, three astA+, two pic+, 10 kps+, 11 iucD+, 88 fimH+, six eae+, three papC+ and one papG1+. None of these results were positive for the following genes stx1, stx2, stx2v, eltIIA, cnfs, cdt, enhly, pet, bfp, inv, K88 e 987p, aggA, aafA e papGII/GIII. Based on the adherence to cells, toxin production and the presence of the virulence genes, 24 strains were classified as ETEC, 6 as atypical EPEC, 36 as EAEC and 13 as DAEC. Anyone strain were classified as EHEC and EIEC. These results suggest a possible involvement of these E.coli strains as one of the enterophatogenic agents related with the enteric infections occurred in the city of Ouro Preto / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Jose Luiz Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-07T14:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_KarenSignori_D.pdf: 795788 bytes, checksum: 3c56762962a9dfbb567a0cc78805f20c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As bactérias pertencentes ao gênero Staphylococcus são bastante peculiares porque apesar de terem distribuição ubiqüitária e formarem a microbiota residente na pele e mucosa de humanos também podem ser causadoras de diversas enfermidades aos mesmos, tais como a intoxicação alimentar estafilocócica.Todavia, para a indústria de produtos cárneos a importância dos estafilococos está além do fato de serem microrganismos patogênicos. Algumas espécies do gênero são coadjuvantes de tecnologia para a fabricação de salames, estando presentes como componentes de culturas starter ou iniciadoras. Entre as características importantes das espécies utilizadas em culturas iniciadoras está a incapacidade enterotoxigênica, o que tem sido diretamente relacionado às espécies coagulase positiva. Diversos trabalhos, porém, têm demonstrado a capacidade de estafilococos coagulase negativa produzirem enterotoxina em meio de cultivo laboratorial e há, inclusive, registros de surtos de intoxicação estafilocócica associados a espécies não produtoras de coagulase. Assim, 90 amostras de salames industrializados, pertencentes a seis diferentes marcas, foram analisadas visando a enumeração, identificação e verificação do potencial enterotoxigênico das espécies de estafilococos coagulase negativa (ECN). Determinações de pH, Aw, análises de coliformes termotolerantes, Salmonella, Staphylococcus coagulase positiva e bactérias láticas também foram realizadas. Salmonella foi detectada em uma amostra. Entre os 266 isolados de ECN nenhum produziu enterotoxina, e dos 252 identificados cerca de 90% eram S. xylosus e S. carnosus / Abstract: Staphylococcus is ubiquitous distribution bacteria and present in skin of humans and other animals. However, staphylococci species can cause various diseases. Staphylococcal food poisoning is one of these diseases. But for meat industry staphylococci importance is not only because diseases. Some species are very important for the fermented sausage¿s manufacture like starter cultures. To be used, staphylococci have do not produce coagulase. However, many researches have demonstrated capacity of coagulase negative staphylococci (CNS) to produce enterotoxin and there are registers of staphylococcal food poisoning outbreaks linked to CNS. Ninety samples of industrialized salamis, for six different brands, had been studied. Enumeration, identification and potencial enterotoxigenic of CNS were analyzed. Additionally, termotolerants coliforms, staphylococci coagulase positive and lactic acid were counted; Salmonella isolated; pH and Aw measured. Salmonella was isolated of one sample. None of 266 CNS produced enterotoxins, 252 were identified and about 90% were S. xylosus and S. carnosus / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

INTRODUÇÃO: A dermatite atópica (DA) é uma doença cutânea inflamatória, acompanhada por prurido intenso e xerose cutânea. A etiopatogenia da DA é multifatorial, envolvendo fatores genéticos, ambientais e imunológicos, dentre outros. OBJETIVOS: Avaliar a influência das enterotoxinas A e B do Staphylococcus aureus (SEA e SEB) na resposta mediada por células Th17 e Th22 nos indivíduos adultos com DA. MÉTODOS: Foram selecionados 38 pacientes adultos com DA e um grupo controle com 40 indivíduos adultos, pareados por idade e gênero Os métodos utilizados foram: 1) ELISA: dosagem dos níveis séricos de IL-6, IL-17, IL-22 e IL-12p40/IL-23 e em sobrenadantes de culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas com SEA e SEB; 2) Imuno-histoquímica: análise da expressão de IL-17 em fragmentos de pele; 3) Citometria de fluxo: a) análise das citocinas circulantes em amostras de soro: IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IL-17A e IFN-y b)avaliação das células T CD4+ mono e polifuncionais secretoras de IL-17, IL-22, TNF, IFN-y, MIP-1beta, e expressão do marcador de ativação celular CD38; c) células Th22 e Tc22 estimuladas com SEA e SEB. RESULTADOS: 1) Através do ELISA, a secreção de IL-22 sérica e em PBMC induzidas por SEA e SEB foi significativamente mais elevada, quando comparada ao grupo controle; 2) houve aumento na expressão de IL-17 em amostras de pele de doentes de DA através da imuno-histoquímica; 3) Através da citometria de fluxo, foram detectados: a) níveis séricos de IL-2, 5, 6, 10, 17A e IFN-y elevados no grupo com DA em relação aos controles; houve diferença significativa nos níveis circulantes de IL-17A nos pacientes com DA moderada e grave; b) na avaliação monofuncional das células T CD4+ sob estímulo de SEA/SEB, houve redução da expressão das citocinas IFN-y, IL-17A, IL-22 ou TNF na DA, quando comparadas ao grupo controle; na análise polifuncional das células T CD4+/CD8+, ocorreu redução da resposta na DA em relação aos controles; nos pacientes atópicos encontramos aumento da resposta em situação basal na dependência de CD38, e redução na resposta frente a SEA/SEB na ausência de CD38; c) encontramos resposta reduzida das células Th22, e elevada de células Tc22 frente aos estímulos SEA e SEB, nos pacientes com DA. CONCLUSÕES: O estudo corrobora o papel patogênico das enterotoxinas estafilocócicas na DA. A ativação crônica com superantígenos estafilocócicos pode contribuir com a alta frequência de células T CD4+ CD38+ polifuncionais, e com a resposta polifuncional anérgica, mediadas por células T CD38- / BACKGROUND: Atopic dermatitis (AD) is an inflammatory skin disease with intense itching and xerosis. AD pathogenesis is multifactorial, involving genetic, environmental, and immunological factors, among others. OBJECTIVES: To evaluate the influence of enterotoxins A and B from Staphylococcus aureus (SEA and SEB) in Th17 and Th22 cell response in adults with AD. METHODS: We evaluated 38 adult patients with AD, and a control group of 40 adults, age and gender matched. Assays: 1) ELISA: evaluation of IL-6, IL-17, IL-12p40/IL-23 and IL-22 serum levels and in supernatants of mononuclear cell cultures from peripheral blood (PBMC), stimulated with SEA/SEB; 2) Immunohistochemistry: analysis of IL-17 expression in skin specimens; 3) Flow cytometry: a) analysis of circulating cytokines in serum samples: IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IL-17A and IFN-y b) evaluation of mono and polyfunctional TCD4+ cells that secrete IL-17, IL-22, TNF, IFN-y, MIP-1beta, and expression of the activation marker CD38; c) analysis of Tc22 and Th22 cells stimulated with SEA and SEB. RESULTS: 1) Secretion of IL-22 in the serum and from supernatants of cell cultures from PBMC, stimulated with SEA and SEB were higher in AD patients, when compared to the control group by ELISA; 2) there was an increase of IL-17 expression in skin samples by immunohistochemistry; 3) Flow cytometry showed: a) elevated serum levels of IL-2, 5, 6, 10, 17A and IFN-y in AD, when compared to controls; there was a significant difference in circulating levels of IL-17A in patients with moderate and severe disease; b) monofunctional evaluation of T CD4+ cells under SEA/SEB stimuli showed reduced expression of IFN-y, IL-17A, IL-22 or TNF cytokines in AD, compared to controls; the same was observed for polyfunctional CD4+/CD8+ T cells analysis, exhibiting a diminished response in AD. In atopic patients under basal conditions, there was an augmented CD38- dependent response and reduced pattern to SEA/SEB in the absence of CD38; c) finally, we observed a reduced response of Th22 cells and enhanced Tc22 cells under SEA/SEB stimuli in patients with AD. CONCLUSIONS: This study corroborates the pathogenic role of staphylococcal enterotoxins in AD. Chronic activation with staphylococcal superantigens may contribute to the high frequency of polyfunctional CD4 +CD38+ T cells and with the anergic polyfunctional response mediated by T CD38- T cells

Resumo: Entre agosto de 2005 e dezembro de 2006, foram obtidas 245 estirpes de Staphylococcus aureus isoladas de amostras de leite de vacas com mastite, de óstios papilares da glândula mamária e de insufladores da ordenhadeira, procedentes de um rebanho bovino produtor de leite tipo B. Com a finalidade de monitorar as estirpes de S. aureus envolvidas em casos de mastite bovina por meio da verificação da relação epidemiológica existente entre as estirpes isoladas, especialmente com vistas aos sítios de localização e vias de transmissão, as estirpes foram submetidas à Eletroforese de Campo Pulsado (PFGE), à amplificação das seqüências codificadoras (sea, seb, sec, sed e tst), por intermédio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e suas sensibilidades in vitro a 12 antimicrobianos foram determinadas. Os resultados obtidos revelaram 51 diferentes perfis, sendo que a resistência à penicilina foi a predominante entre as 179 (73,1%) estirpes de S. aureus, quando considerada de forma particular (54,8%) ou em conjunto (29,4%). As 66 (26,9%) estirpes restantes foram sensíveis aos 12 antimicrobianos testados e a vancomicina foi o único princípio ativo que se mostrou eficiente a 100% das estirpes testadas. A PFGE revelou 39 pulsotipos distintos, dos quais 25 (64,1%) encontraram-se distribuídos nas 137 (55,9%) estirpes obtidas do leite. Dentre estas, 92 (67,1%) estirpes apresentaram resistência a um ou mais antimicrobianos e foram agrupadas em 22 (88,0%) pulsotipos distintos. Foi observado, também, por meio da PFGE, que nenhum pulsotipo foi isolado por mais de três colheitas consecutivas e que somente o pulsotipo 29 foi identificado em 5 (31,2%) colheitas...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Two hundred and forty five Staphylococcus aureus strains were isolated between August of 2005 and December of 2006 from samples collected from a type-B milk-producing herd. Samples encompassed milk collected directly from mastitic cows, papillas osteuns of mammary glands, and milking machine cups. Samples were subjected to Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) to monitor for the strains of S. aureus and to determine epidemiologic relationships between the isolated strains, taking into account the different precedence of strains. PFGE was used to monitor the presence of specific coding sequences (i.e., sea, seb, sec, sed, and tst) in the milk samples using polymerase chain reaction (PCR) amplification. Moreover, sensitivity of strains to 12 different antibiotics was determined in vitro. Results revealed the presence of 51 different PFGE profiles of S. aureus in the samples, and highlighted 179 (73.1%) penicillin resistant strains. Nonetheless, the 66 (26.9%) other strains were sensitive to all 12 antibiotics tested, and vancomycin was the only antibiotic effective against all tested strains. PFGE also revealed 39 distinct peaks with 25 of them (64.1%) being present in 137 (55.9%) strains obtained from milk. Of these strains, 92 (67.1%) were resistant to one or more antibiotics, and were further grouped in 22 (88.0%) distinct peaks. Additionally, PFGE revealed the presence of no distinct peaks in samples from three consecutive collection times, and that peak 29 was the only one identified in 5 collection times (31.2%). Importantly, PGFE also indicated that in the periods A and H, which corresponded to 12.5% of the total time points, the isolated strains from one collection day (samples from all 3 sources) all had the peaks 2 and 12, respectively...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Antonio Nader Filho / Coorientador: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Carlos Augusto Fernande de Oliveira / Banca: Naiá Carla Marchi de Rezende Lago / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Doutor

As condições de produção de queijos frescos são favoráveis à ocorrência e à produção de enterotoxinas produzidas por estafilococos, sendo estes os principais micro-organismos relacionados aos casos de intoxicação alimentar no mundo, tornando-se necessários estudos sobre a rastreabilidade das fontes de contaminação durante a fabricação, identificação genotípica e habilidade de cepas em produzir enterotoxinas. Este trabalho teve como objetivo isolar e identificar estafilococos positivos para o teste de coagulase, potencialmente produtores de enterotoxinas em laticínios do estado de São Paulo, desde o leite recebido até o produto final. A técnica da mPCR foi utilizada para identificar três espécies de Staphylococcus coagulase-positiva (S. aureus, S. hyicus e S. intermedius) entre os isolados obtidos de diferentes pontos de processamento em laticínios do Estado de São Paulo. O perfil genético das cepas foi avaliado através da comparação de bandas pela técnica Enterobacteria Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR) e graficamente demonstrados por um dendrograma. O DNA de 102 cepas isoladas, de amostras de leite cru, leite pasteurizado, coágulo, manipulador, superfícies de equipamentos de laticínios do Estado de São Paulo e queijos foi extraído e submetido à reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando-se primers específicos para a detecção de fragmentos dos genes envolvidos na síntese das toxinas (SE) do tipo A, B, C, D, E, G, H, I e J. Das 102 cepas avaliadas, 5 apresentaram amplificação do fragmento do gene responsável pela codificação da toxina A, 3 para toxina C, 56 para toxina G, 59 para toxina H, 9 para toxina I, e nenhuma para toxinas B, D, E e J. Amostras de leite cru, leite pasteurizado e queijos produzidos nos laticínios e dos isolados de Staphylococcus spp. coagulase positiva que apresentaram ao menos algum dos genes relacionados à produção de toxinas clássicas (A, B, C, D e E) foram submetidos a um teste de detecção de enterotoxinas pelo sistema VIDAS® Staph Enterotoxin (SET2). Os dados obtidos para a identificação molecular das cepas, da ocorrência de cepas portadoras dos genes relacionados à produção de enterotoxinas e da produção fenotípica das enterotoxinas foram submetidos ao teste qui-quadrado. O presente trabalhou confirmou que o risco de intoxicação estafilocócica é real, pois foi encontrada enterotoxina em amostras de leite pasteurizado e queijos. / The production conditions of fresh cheese are favorable to the occurrence and production of enterotoxin produced by Staphylococci, which are the main microorganisms related to food poisoning cases in the world, requiring studies to trace the sources of contamination during manufacturing and genotypic identification ability of strains to produce enterotoxin. This study aimed to isolate and identify staphylococci positive for coagulase test, potentially producing enterotoxins in dairy products in the state of São Paulo, from milk receiving to final product. In three dairy producers of Minas fresh cheese, samples were collected from various points in the manufacturing process. the technique of mPCR was used to identify three coagulase-positive species (S. aureus, S. hyicus and S. intermedius) between isolates from different points of a processing dairy in the state of São Paulo. The genetic profile of the strains were evaluated by comparing the bands through the technique Enterobacteria Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR) and were graphically displayed by a dendrogram. The DNA of 102 strains isolated from samples of raw milk , pasteurized milk , curd, handler and equipment surface from dairies in São Paulo State and cheese were subjected to the polymerase chain reaction (PCR), using primers for the detection of specific fragments of the genes involved in the synthesis of toxins (SE) of type A, B , C , D, E, G , H, I and J. Of the 102 strains tested, five showed amplification of the gene fragment encoding toxin A, three for toxin C , 56 to toxin G, 59 to toxin H, 9 to toxin I, and none for toxins B D, E and J. For confirmation, each isolated strain carrying at least some of the genes related to the production of classical enterotoxinas, cheese and milk samples was subjected to detection by enterotoxigenic VIDAS® Staph Enterotoxin II (VIDAS SET2) bioMérieux. This identification reinforces the need to adopt proper hygiene practices in the dairy, avoiding thus the spread of these microorganisms and the possible production of enterotoxin . The data obtained for the molecular identification of the strains, the occurrence of strains carrying the genes related to the production of enterotoxin production and phenotypic enterotoxins were subjected to the Chi-squared test. This work confirmed that the risk of staphylococcal food poisoning is real, because enterotoxin was found in samples of pasteurized milk and cheeses.

A resposta proliferativa das células mononucleares do sangue periférico dos adultos com dermatite atópica mostrou-se diminuída após estímulos com mitógenos (enterotoxinas estafilocócicas A e B, "pokeweed" e fitohemaglutinina) e antígenos (toxóide tetânico e Candida albicans). A correlação positiva dos níveis séricos de interleucina-18, IgE e escore de gravidade da doença sugerem que esta citocina seria um marcador de atividade da dermatite atópica do adulto / A reduced proliferative response of peripheral blood mononuclear cells in adults with atopic dermatitis was detected when stimuli with mitogens (staphylococcal enterotoxins A and B, phytohemaglutinin, pokeweed), and with antigens (tetanus toxoid and Candida albicans) were performed. A positive correlation of interleukin-18, IgE levels and severity scores of the disease suggest that this cytokine could be a marker of disease activity in adult atopic dermatitis