Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:35:10Z : No. of bitstreams: 1 000739913.pdf: 3500532 bytes, checksum: d1f5204e156e6108ea196d3ebbee589a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A perda do bulbo ocular compromete não só a estética, mas também a tonicidade muscular da região facial do paciente, uma vez que com a ausência do globo ocular os músculos orbiculares dos olhos podem sofrer atrofia. Desse modo, o objetivo do presente estudo foi verificar a atividade elétrica dos músculos orbiculares, antes e após a instalação de próteses oculares em pacientes que foram submetidos à enucleação unilateral do bulbo ocular. Foram selecionados, por meio de anamnese e exame clínico, 12 pacientes voluntários com indicação de prótese. O sinal eletromiográfico foi realizado com o auxílio do eletromiógrafo, em quatro situações clínicas: Repouso (R), Abertura e Fechamento Normal das Pálpebras (AFN), Abertura e Fechamento Rápido das Pálpebras (AFR) e Apertamento (A). Esses registros foram realizados antes da instalação da prótese ocular, e após 7, 30 e 60 dias da instalação e uso da mesma. Os mesmos ensaios foram realizados no músculo orbicular do olho sadio do paciente, resultados que serviram como controle do estudo. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística pelo programa SPSS (p<0.05) e o t-teste foi utilizado para comparar os músculos superior e inferior por período de tratamento (inicial, 7, 14, 30 e 60 dias), para as quatro condições clínicas. Nas quatro condições clínicas avaliadas foi verificado diferença estatisticamente significativa em relação ao período inicial e após 7 dias da instalação da prótese. O fascículo superior do músculo orbicular do olho apresentou maiores valores de atividade elétrica em relação ao fascículo inferior em todas as situações clínicas avaliadas. Os menores valores de atividade elétrica foram observados durante o período inicial para a condição de repouso (OS 8.418 / OI 5.933) e os maiores após 60 dias na condição... / The eye loss besides affecting patient’s aesthetics, it compromises the muscle tone of the facial region owing to the atrophy of orbicular muscles. Thus, although the use of ocular prosthesis does not return patient’s vision, it fills the anophtalmic cavity restoring the cosmetic and muscle tone. The aim of this present study was to evaluate the electrical activity of orbicular muscles before and after ocular prosthesis insertion of patients who underwent unilateral enucleation of eyeball. The electrical activity of the orbicular muscles was assessed through the Myosystem BR1 electromyograph in four clinical situations: (1) rest, (2) normal opening and closing of the eyelid, (3) fast opening and closing of the eyelids, and (4) clenching. The electrodes were placed in the fascicles of upper (UO) and lower (LO) orbicular muscles. Electromyographic examinations were performed before and after 7, 14, 30 and 60 days of prosthesis insertion. T-test (p<.05) was used to compare the upper and lower orbicular muscles for each period of evaluation in all clinical conditions. A total of 12 patients of both genders were treated and they aged from 42 to 80 years. Several factors were the cause of anophthalmia and the trauma during job accident was the main reason. A statistical significant difference in the electromyographic data was observed for all four clinical conditions when comparing the baseline with the 7-day prosthesis insertion periods. The UO exhibited higher values of electrical activity than LO for all clinical situations. The lowest electrical activity was noted for the baseline period during the rest condition (UO 8.418 /LO 5.933), while the greatest one after 60 days of prosthesis insertion during clenching (UO 131.504 / LO 117.123). After ocular prosthesis insertion, a significant increase in the electrical activity values of the orbicular muscles was observed.

Orientador: Daniela Micheline dos Santos / Co-orientador: Marcelo Coelho Goiato / Banca: Eduardo Piza Pellizzer / Banca: Aldiéris Alves Pesqueira / Resumo: A perda do bulbo ocular compromete não só a estética, mas também a tonicidade muscular da região facial do paciente, uma vez que com a ausência do globo ocular os músculos orbiculares dos olhos podem sofrer atrofia. Desse modo, o objetivo do presente estudo foi verificar a atividade elétrica dos músculos orbiculares, antes e após a instalação de próteses oculares em pacientes que foram submetidos à enucleação unilateral do bulbo ocular. Foram selecionados, por meio de anamnese e exame clínico, 12 pacientes voluntários com indicação de prótese. O sinal eletromiográfico foi realizado com o auxílio do eletromiógrafo, em quatro situações clínicas: Repouso (R), Abertura e Fechamento Normal das Pálpebras (AFN), Abertura e Fechamento Rápido das Pálpebras (AFR) e Apertamento (A). Esses registros foram realizados antes da instalação da prótese ocular, e após 7, 30 e 60 dias da instalação e uso da mesma. Os mesmos ensaios foram realizados no músculo orbicular do olho sadio do paciente, resultados que serviram como controle do estudo. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística pelo programa SPSS (p<0.05) e o t-teste foi utilizado para comparar os músculos superior e inferior por período de tratamento (inicial, 7, 14, 30 e 60 dias), para as quatro condições clínicas. Nas quatro condições clínicas avaliadas foi verificado diferença estatisticamente significativa em relação ao período inicial e após 7 dias da instalação da prótese. O fascículo superior do músculo orbicular do olho apresentou maiores valores de atividade elétrica em relação ao fascículo inferior em todas as situações clínicas avaliadas. Os menores valores de atividade elétrica foram observados durante o período inicial para a condição de repouso (OS 8.418 / OI 5.933) e os maiores após 60 dias na condição... / Abstract: The eye loss besides affecting patient's aesthetics, it compromises the muscle tone of the facial region owing to the atrophy of orbicular muscles. Thus, although the use of ocular prosthesis does not return patient's vision, it fills the anophtalmic cavity restoring the cosmetic and muscle tone. The aim of this present study was to evaluate the electrical activity of orbicular muscles before and after ocular prosthesis insertion of patients who underwent unilateral enucleation of eyeball. The electrical activity of the orbicular muscles was assessed through the Myosystem BR1 electromyograph in four clinical situations: (1) rest, (2) normal opening and closing of the eyelid, (3) fast opening and closing of the eyelids, and (4) clenching. The electrodes were placed in the fascicles of upper (UO) and lower (LO) orbicular muscles. Electromyographic examinations were performed before and after 7, 14, 30 and 60 days of prosthesis insertion. T-test (p<.05) was used to compare the upper and lower orbicular muscles for each period of evaluation in all clinical conditions. A total of 12 patients of both genders were treated and they aged from 42 to 80 years. Several factors were the cause of anophthalmia and the trauma during job accident was the main reason. A statistical significant difference in the electromyographic data was observed for all four clinical conditions when comparing the baseline with the 7-day prosthesis insertion periods. The UO exhibited higher values of electrical activity than LO for all clinical situations. The lowest electrical activity was noted for the baseline period during the rest condition (UO 8.418 /LO 5.933), while the greatest one after 60 days of prosthesis insertion during clenching (UO 131.504 / LO 117.123). After ocular prosthesis insertion, a significant increase in the electrical activity values of the orbicular muscles was observed. / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Rosane Cossich Furtado (rosanecossich@gmail.com) on 2009-12-04T11:36:14Z No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2009-12-04T18:36:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-04T18:36:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) Previous issue date: 2007-05-17 / A clonagem por Transferência Nuclear (TN) é uma técnica pouco eficiente e laboriosa. O processo, do ponto de vista técnico, é um dos principais fatores responsáveis pela quantidade e qualidade dos embriões produzidos. A enucleação é a etapa mais agressiva da TN. Apesar dos métodos alternativos propostos, a enucleação permanece sendo realizada como inicialmente descrita nos anos 50. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do inibidor irreversível de transcrição e replicação actinomicina D (Fluka®, Suiça) como método de enucleação química de ovócitos. Ovócitos foram maturados in vitro (MIV) por 4 ou 6 horas e expostos a actinomicina D (T1, controle; T2 = 1,0 μg ml-¹ / 16hs; T3 = 1,0 μg ml-¹ / 14hs; T4 = 2,5 μg ml-¹ / 14hs; T5 = 5,0 μg ml-¹ / 14hs). Os ovócitos foram desnudados após 20 horas de MIV e ativados com 24-26 horas de MIV. As taxas de clivagem foram avaliadas 48 horas após a ativação (D2) e as de blastocisto após 168 (D7) e 192 (D8) horas de cultivo. Parte dos ovócitos foi fixada e corada com lacmóide ou orceína para determinação da fase da meiose ou para visualização da morfologia dos cromossomos, respectivamente. Posteriormente, ovócitos tratados com actinomicina D foram utilizados para clonagem por TN, sendo que parte dos embriões (D3) foi fixada para avaliar o percentual de células apoptóticas através do teste de TUNEL. Os dados relativos às taxas de maturação, clivagem e blastocisto foram analisados pelo teste do Qui-quadrado e os percentuais de apoptose pelo teste de Mann-Whitney. A taxa de maturação (T1 = 90,4%; T2 = 82,3%; T3 = 79,1%; T4 = 83,4%; T5 = 74,7%), clivagem (T1 = 68,9%; T2 = 46,0%; T3 = 49,7%; T4= 33,4; T5= 29,3%) e de blastocisto em D8 (T1 = 41,1%; T2 = 1,4%; T3= 1,3%; T4= 0,9%; T5= 0,0%) após o tratamento com actinomicina D foi significativamente menor. Dos ovócitos fixados, 63,2% estavam em metáfase II (MII). Ao avaliar os cromossomos, foi observada uma descondensação significativa com as concentrações mais altas (2,5 e 5,0 μg ml-¹). Os demais tratamentos não apresentaram modificações perceptíveis. Ovócitos tratados com 1,0 μg ml-¹ por 14 horas foram utilizados como citoplasmas receptores. A taxa de clivagem dos embriões reconstruídos (61,3%) foi semelhante ao grupo partenogenético tratado (61,3%) e inferior ao não tratado com actinomicina D (70,2%), embora a taxa de blastocisto tenha sido mais alta no grupo de TN (11,8%) em relação ao controle tratado (3,6%) e inferior ao controle sem tratamento (38,0%). Ao analisar o índice apoptótico dos embriões, os embriões partenogenéticos tratados tiveram um índice maior que os partenogenéticos não tratados (24,2% contra 4,8%). No entanto, os embriões oriundos de TN com ovócito tratado não foram diferentes estatisticamente dos TN controle (9,3 contra 13,0%). A actinomicina D é eficiente no bloqueio da transcrição e replicação embrionária. Além disso, foi possível obter embriões reconstruídos que apresentavam percentual de células apoptóticas indistinguível do controle. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cloning by Nuclear Transfer (NT) is a low efficiency and labor intense technique. The process, in technical terms, is one of the main factors responsible for both embryo quality and quantity. Enucleation is the most aggressive step. Although alternative methods have been proposed, it remains mainly as it has been first described in the early fifties. The objective of the present work was to evaluate the effect of transcription and replication inhibitor actinomycin D as a chemical enucleation method for oocytes. Oocytes were matured in vitro (MIV) for 4 or 6 hours and exposed to actinomycin D (T1, control; T2 = 1,0 μg ml-¹ / 16hs; T3 = 1,0 μg ml-¹ / 14hs; T4 = 2,5 μg ml-¹ / 14hs; T5 = 5,0 μg ml-¹ / 14hs). The oocytes were denuded 20 hours after MIV and activated 24-26 hours after MIV. The cleavage rate was recorded 48 hours post activation and the blastocyst at 168 (D7) and 192 (D8) hours of culture. Some oocytes were fixed and stained with lacmoyd or orcein to determine the maturation status or for chromosome morphology evaluation, respectively. Furthermore, oocytes treated with actinomycin D were used as recipient cytoplasts for NT, while some embryos (D3) were fixed to evaluate the percentage of apoptotic nuclei by the TUNEL assay. The data relative to the maturation, cleavage and blastocyst rate were analyzed by the chi-square test and apoptosis percentages by the Mann-Whitney test. The maturation (T1 = 90,4%; T2 = 82,3%; T3 = 79,1%; T4 = 83,4%; T5 = 74,7%), cleavage (T1 = 68,9%; T2 = 46,0%; T3 = 49,7%; T4 = 33,4%; T5 = 29,3%) and blastocyst rate at D8 (T1 = 41,1%; T2 = 1,4%; T3 = 1,3%; T4 = 0,9%; T5 = 0,0%) after actinomycin D treatment was significantly different. Analyzing the fixed oocytes, 63,2% were in MII. While evaluating the chromosomes, it was observed a significant uncoiling when exposed to higher concentrations (2,5 and 5,0 μg ml-¹). The remaining groups had no apparent perceptible modifications. Furthermore, oocytes treated with 1 μg ml-¹ for 14 hours were used as recipient cytoplasts. The cleavage rate (61,3%) was similar to the actinomycin D treated control group (61,3%) and lower than the non-treated control (70,2%), although the blastocyst rate was higher in the NT group (11,8%) comparing to the treated control (3,6%) and lower to the untreated control (38,0%). After analyzing the embryos for apoptotic cells, the treated parthenogenetic embryos had a higher index than the parthenogenetic control (24,2% vs. 4,8%). However, the NT embryos generated by treated cytoplasts wasn’t statistically different from the NT control (9,3 vs. 13,0%). The actinomycin D treatment is efficient to block embryonic transcription and replication. Moreover, it was possible to obtain reconstructed embryos that possess an apoptotic cell index indistinguishable from the control.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:46:31Z : No. of bitstreams: 1 saraiva_nz_dr_jabo.pdf: 2226785 bytes, checksum: ed58cf70cd41ad428b58b7a952966bd3 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Uma das etapas mais críticas do procedimento de transferência nuclear (TN) é a remoção da cromatina do oócito para a produção de citoplastos. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito de diferentes ambientes citoplasmáticos obtidos a partir de três técnicas de enucleação (convencional, assistida quimicamente e induzida quimicamente) sobre o remodelamento nuclear e desenvolvimento embrionário, avaliando-se o perfil de expressão dos genes XIST, G6PD e HSPA1A em embriões bovinos. Para isso, quatro experimentos foram delineados. No primeiro experimento, verificou-se que o processo de enucleação pode ser iniciado a partir de 1,0 h de tratamento com demecolcina nas duas técnicas de enucleação química. A dinâmica nuclear e de microtúbulos de oócitos ativados tratados com demecolcina foi avaliada em um segundo experimento, e oócitos tratados apresentaram redução da densidade dos microtúbulos, porém, essas estruturas não desapareceram completamente na maioria dos oócitos. No experimento III, a demecolcina não apresentou efeitos significativos na atividade do fator promotor de maturação (MPF) e da proteína cinase ativada por mitógeno (MAPK) quando utilizada na concentração 0,05μg/mL. No último experimento, a demecolcina não prejudicou o desenvolvimento embrionário e também não alterou o perfil de expressão dos genes XIST, G6PD e HSPA1A em embriões reconstituídos com células embrionárias; porém, quando foram avaliados os níveis de transcritos desses genes em embriões reconstituídos com células somáticas, observou-se maior expressão relativa do XIST e do G6PD em embriões oriundos da técnica de enucleação assistida quimicamente em comparação aos embriões produzidos pela técnica convencional. Portanto, conclui-se que a enucleação química não altera a reprogramação nuclear nem... / Removal of the oocyte chromatin for production of cytoplasts is one of the most critical steps of the standard nuclear transfer (NT) procedure. The aim of this work was to study the effect of different cytoplasmic environments from three enucleation techniques (conventional, chemical-assisted, and chemical-induced enucleation) on nuclear reprogramming and embryonic development, evaluating the expression patterns of XIST, G6PD and HSPA1A genes in bovine embryos. Therefore, four experiments were designed. In the first experiment, it was verified that the enucleation procedure can be initiated 1.0 h after starting demecolcine treatment on both chemical enucleation techniques. The nuclear and microtubular dynamics of activated oocytes treated with demecolcine were evaluated in a second experiment, and treated oocytes showed decreased microtubule density, but these structures did not completely disappear in most oocytes. In experiment III, demecolcine at a concentration of 0.05μg/mL had no significant effect on maturation promoting factor (MPF) and mitogen activated protein kinase (MAPK) activity. In the last experiment, demecolcine had no detrimental effects on embryonic development. Also, the expression patterns of XIST, G6PD and HSPA1A were not altered in reconstituted embryos derived from embryonic donor cells; however, evaluation of transcript levels of these genes in embryos reconstituted using somatic donor cells revealed higher relative expression of XIST and G6PD in embryos derived from chemicalassisted enucleation in comparison to embryos those produced by the conventional technique. In conclusion, chemical enucleation has no effect on nuclear reprogramming and embryonic development after nuclear transfer using embryonic donor cells. Also, chemical-assisted enucleation increases XIST and G6PD expression in nuclear transfer embryos... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-20Bitstream added on 2014-06-13T18:58:52Z : No. of bitstreams: 1 saraiva_nz_me_jabo.pdf: 431247 bytes, checksum: a83cbb84b25e1b75bfb892f8bc6cc5d0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse estudo foi avaliar a ação da demecolcina na composição de microtúbulos, maturação e desenvolvimento in vitro de oócitos bovinos, submetidos ao tratamento em metáfase I (MI) e metáfase II (MII). No experimento I, observamos que a concentração 0,05æg/mL foi a mais eficaz na indução de enucleação no grupo MI (15,2%) e na formação de protrusão no grupo MII (55,1%). No experimento II, verificamos manifestações da demecolcina em apenas 0,5 h de tratamento, pelo aumento significativo de categorias de oócitos sem microtúbulos. Houve nova polimerização dessas estruturas, quando oócitos expostos à droga em MII, foram cultivados em meio livre desse agente. No experimento III, evidenciamos influência negativa da demecolcina na maturação nuclear de oócitos tratados em MI, durante 12 horas (4,9% de oócitos em MII) e um diferente comportamento quanto à distribuição de grânulos corticais (GC); enquanto no grupo MI houve tendência à antecipação na migração de GC para a periferia, após 2 horas de exposição à droga, no grupo MII, observou-se nesse momento, ação prejudicial da mesma. Ainda, verificamos incompleta expansão das células do cumulus em oócitos expostos à demecolcina por 12 horas. No experimento IV, obtivemos alta eficácia da técnica de enucleação (90,6%) e grande variação quanto ao desenvolvimento até o estádio de blastocisto (12,5 a 47%), não verificando-se ação prejudicial da droga no desenvolvimento embrionário. / The aim of this study was to evaluate demecolcine action on microtubules composition, maturation and in vitro development of bovine oocytes, submitted to the treatment in metaphase I (MI) and metaphase II (MII). In the experiment I, we observed that 0.05æg/mL was the most efficient concentration to induce the enucleation in group MI (15.2%) and protrusion formation in group MII (55.1%). In experiment II, we verified demecolcine manifestations already after 0.5 hour of treatment, supported by the significant increase of categories of oocytes without microtubules. There was new polymerization of these structures when oocytes exposed to the drug in MII were cultured in agent-free medium. In experiment III, we evidenced negative influence of demecolcine on nuclear maturation of oocytes treated on MI for 12 hours (4.9% of oocytes in MII) and a different behavior for cortical granules (CG) distribution; while in MI group there was a tendency for the anticipation of CG migration to periphery, after 2 hours of drug exposition, in the MIII group, was observed a harmful effect of the drug. Moreover, we verified incomplete expansion of cumulus cells in oocytes exposed to demecolcine for 12 hours. In experiment IV, we got high effectiveness of enucleation technique (90.6%) and wide variation for development to the blastocyst stage (12.5 to 47%), and no harmful effects of the drug on embryonic development were observed.

Os receptores glutamatérgicos metabotrópicos (mGluRs) estão envolvidos nos processos de plasticidade, neurodegeneração e neuroproteção. Avaliamos a expressão de mGluRs no sistema visual de ratos e pintos em diferentes tempos após enucleação ocular. Os animais foram avaliados pelo método de imuno-histoquímica, immunoblotting e RT-PCR, para detecção dos receptores mGluR1,2/3,5 e 7. Foi observado aumento da imunorreatividade (IR) de mGluR1, 5 e 7 no colículo superior, porém não foi observada diferença no núcleo geniculado lateral. Houve aumento na expressão protéica para mGluR1, 5 e 7 e aumento da expressão gênica para mGluR1,5 e 7; por outro lado, ocorreu uma diminuição de mGluR3. No TeO, foi observado aumento da IR para mGluR1 e 5 e diminuição para mGluR2/3. As análises de immunoblotting confirmaram o aumento observado de mGluR1 e diminuição de mGluR2/3. Os resultados indicam uma modulação diferencial na expressão gênica e protéica dos mGluRs, sugerindo a participação desses receptores em processos plásticos decorrentes de lesões no sistema visual adulto. / The metabotropic glutamate receptors (mGluRs) are involved in neuronal plasticity and neuroprotection. We analyzed the expression of mGluRs in the visual system of rats and chicks in several periods after ocular enucleation. The localization and expression of mGluR1, 5, 2/3 and 7 receptors were evaluated by standard immunoperoxidase, immunoblotting and real-time PCR protocols. The immunorreativity, protein and gene expression of mGluR1, 5 and 7 receptors in the superior colliculus showed an increase, whereas no changes were seen in the lateral geniculate nucleus. For mGluR3, gene expression was decreased. In the TeO, mGluR1 and 5 increased for all survival periods analyzed. Immunoblotting analyses confirmed the increases for mGluR1 and 5, decreases for mGluR2/3. These results indicate that the expression of mGluRs is regulated by the glutamatergic retinal input, and add data on a possible role of these receptors in neuroplasticity in adult animals.

O modelo de enucleação ocular em roedores é frequentemente empregado para o estudo dos efeitos da desaferentação de estruturas retinorrecipientes. Avaliamos a geração de espécies reativas de oxigênio (EROs), no colículo superior (CS) e núcleo geniculado lateral dorsal do tálamo (GLD) após enucleação ocular. A oxidação da dihidroetidina revelou o aumento da geração de EROs no CS e no GLD após a lesão. Os resultados de RT-PCR revelaram aumento da expressão gênica de Nox 2 em ambas as estruturas avaliadas. Em contrapartida, observou-se aumento da expressão gênica de Nox 1 e 4 apenas no CS. Com a finalidade de avaliarmos o envolvimento de EROs no remodelamento estrutural após a lesão, animais foram tratados com apocinina e ensaios de imuno-histoquímica foram realizados utilizando-se anticorpos contra neurofilamentos (NFs) e proteínas associadas a microtúbulos-2 (MAP-2). Os resultados revelaram que a enucleação ocular produz um aumento na imunorreatividade para NFs e MAP-2 no CS e GLD, o que foi atenuado pelo tratamento com apocinina. / Unilateral ocular enucleation represents a useful model to study visual system plasticity. We evaluated the reactive oxygen species (ROS) generation in the main visual relays of the mammalian brain, namely the superior colliculus (SC) and the dorsal lateral geniculate nucleus (DLG), after ocular enucleation. Dihydroethidium oxidation revealed increased ROS generation in SC and DLG. ROS generation was decreased by the Nox inhibitors DPI and apocynin. Real-time PCR results revealed that Nox 2 was upregulated in both retinorecipient structures after deafferentation, whereas Nox 1 and Nox 4 were upregulated only in the SC. To evaluate the role of ROS in structural remodeling after the lesions, apocynin was given to enucleated rats and immunohistochemistry was conducted for markers of neuronal remodeling into SC and DLG. Immunohistochemical data showed that ocular enucleation produces an increase of neurofilament and microtubule-associated protein-2 immunostaining in both SC and DLG, which was markedly attenuated by apocynin treatment.

Os receptores glutamatérgicos metabotrópicos (mGluRs) estão envolvidos nos processos de plasticidade, neurodegeneração e neuroproteção. Avaliamos a expressão de mGluRs no sistema visual de ratos e pintos em diferentes tempos após enucleação ocular. Os animais foram avaliados pelo método de imuno-histoquímica, immunoblotting e RT-PCR, para detecção dos receptores mGluR1,2/3,5 e 7. Foi observado aumento da imunorreatividade (IR) de mGluR1, 5 e 7 no colículo superior, porém não foi observada diferença no núcleo geniculado lateral. Houve aumento na expressão protéica para mGluR1, 5 e 7 e aumento da expressão gênica para mGluR1,5 e 7; por outro lado, ocorreu uma diminuição de mGluR3. No TeO, foi observado aumento da IR para mGluR1 e 5 e diminuição para mGluR2/3. As análises de immunoblotting confirmaram o aumento observado de mGluR1 e diminuição de mGluR2/3. Os resultados indicam uma modulação diferencial na expressão gênica e protéica dos mGluRs, sugerindo a participação desses receptores em processos plásticos decorrentes de lesões no sistema visual adulto. / The metabotropic glutamate receptors (mGluRs) are involved in neuronal plasticity and neuroprotection. We analyzed the expression of mGluRs in the visual system of rats and chicks in several periods after ocular enucleation. The localization and expression of mGluR1, 5, 2/3 and 7 receptors were evaluated by standard immunoperoxidase, immunoblotting and real-time PCR protocols. The immunorreativity, protein and gene expression of mGluR1, 5 and 7 receptors in the superior colliculus showed an increase, whereas no changes were seen in the lateral geniculate nucleus. For mGluR3, gene expression was decreased. In the TeO, mGluR1 and 5 increased for all survival periods analyzed. Immunoblotting analyses confirmed the increases for mGluR1 and 5, decreases for mGluR2/3. These results indicate that the expression of mGluRs is regulated by the glutamatergic retinal input, and add data on a possible role of these receptors in neuroplasticity in adult animals.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2017-11-27T15:54:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE_SIDCLEY_ARAUJO.pdf: 1399431 bytes, checksum: 122da0f972194a86c65f5d711727814c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-27T15:54:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE_SIDCLEY_ARAUJO.pdf: 1399431 bytes, checksum: 122da0f972194a86c65f5d711727814c (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Investigar características do processo de integração e biocompatibilidade de um implante de gel celulósico nas cavidades anoftálmicas de coelhos. Analisar a proliferação celular em geral, a angiogênese, a proliferação de células multinucleadas gigantes e a fibrogênese, por técnicas de histomorfométria e imunohistoquímica. Estudo experimental de intervenção empregando 18 coelhos divididos em 6 grupos. O olho direito de todos os animais foi eviscerado e os esquedo não sofreu nenhum tipo de intervenção. Após a evisceração a bolsa escleral foi suturada e preenchida com gel celulósico gel. Diariamente, todos os animais foram examinados clinicamente, sob biomicroscopia, até o 7º dia do implante e uma vez por semana até o dia da eutanásia. Os animais foram submetidos a eutanásia e enucleações dos olhos no 7º, 30º, 60º, 90º, 120º e 240º dia após o implante. Os olhos, inclusive os esquerdos, foram avaliados macroscopicamente e processados para análises histopatológica, histomorfométricas, imunohistoquímicas e imunofluorescência. Clinicamente, todos os animais, não exibiram sinais de alergias, intoxicação, extrusão e infecção. Em todos os grupos ao exame macroscópico, histopatológico e histomordo olho esquerdo, não revelou alterações anatômicas. No entanto, nesta análise, olho direito exibiu redução de 8% no volume do bulbo. O corte do saco escleral mostrou um conteúdo sólido, compacto, elástico, resistente à tração, com superfície lisa e brancacenta.Não foram observados sinais de necrose, ou liquefação. O tecido epiescleral estava algo hipertrofiado. As preparações histológicas estudadas, nas diversas colorações, revelaram uma infiltração linfomonomorfonuclear inicial, substituída posteriormente por uma proliferação fibrocitária e histiocitária com formação de células multinucleadas gigantes. Foram também encontrados poucos polimorfonucleares neutrófilos e eosinófilos. A partir do 30o dia houve proliferação vascular e deposição de colágeno em todos os espécimes estudados, embora, no 240º dia do experimento, a resposta inflamatória crônica, a neovascularização e a deposição do colágeno não tinham ainda atingido o centro do implante. Neste modelo, o gel da celulose produzido pela Zoogleia sp, mostrou-se biocompatível e integrado às órbitas. Fica, portanto, comprovado que o gel celulósico, utilizadoneste experimento, além de biocompatível, se integrou às órbitas dos coelhos. / To evaluate histologically the integration process of cellulose gel produced by Zoogloea sp when implanted into rabbits’ eviscerated eyes. This experimental study employed 36 eyes of 18 rabbits subjected toEvisceration of their right eyes. The sclerocorneal bag was sutured and filled withbiopolymer from sugar cane in the gel state. All animals were clinically examinedby biomicroscopy until the day of their sacrifice which occurred on the 7º, 30º, 60º, 90º, 120º, or 240º day. The eyeballs obtained, including the left eyes considered controls were sent for histopathological study by optical macroscopyand microscopy. Tissue staining techniques used included hematoxylin-eosin, Masson trichrome (with aniline), Gomori trichrome, Van Gienson, Picrosirius red and periodic acid-Schiff (PAS). No clinical signs of infection, allergy, toxicity, or extrusion were observed throughout the experiment. The corneas were relatively preserved. Macroscopic examination revealed a decrease of ~ 8% in the volume of the bulbs implanted with the biopolymer. After cutting, the sclerocorneal bag was solid, compact, elastic, and resistant to traction, with a smooth and whitish surface, and showed no signs of necrosis or liquefaction. The episcleral tissues were somewhat hypertrophied. The histological preparations studied in different colors revealed an initial lymphoplasmacytic infiltration, replaced by a fibroblastic response and proliferation of histiocytes, along with formation of giant cells. Few polymorphonuclearneutrophils and eosinophils were also found. Neovascularization and collagen deposition were present in all animals starting from day 30; although on the 240º day of the experiment the chronic inflammatory response, neovascularization and collagen deposition had not yet reached the center of the implant. In this model, the cellulose gel produced by Zoogloea sp proved to be biocompatible and integrated into the orbits.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-01-18T14:06:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Célia Regina Malveste Ito - 2017.pdf: 2187840 bytes, checksum: ce24431d5cefc9c1e1356d4d3763413d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-18T14:29:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Célia Regina Malveste Ito - 2017.pdf: 2187840 bytes, checksum: ce24431d5cefc9c1e1356d4d3763413d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-18T14:29:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Célia Regina Malveste Ito - 2017.pdf: 2187840 bytes, checksum: ce24431d5cefc9c1e1356d4d3763413d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-09-26 / Decontamination of the surface of the donor eyeballs is part of the operational norms that eye banks advocate before preservation, and antisepsis procedures are effective, ensuring greater transplantation safety. The objective of the present study was to evaluate the antiseptic effect in reducing the microbiota of the ocular globe of donors of corneas prior to enucleation, with 5% povidone-iodine (PVP-I) and 0.05% chlorhexidine gluconate (GC), In the action times of 5, 10 and 15 minutes, as well as the susceptibility profile of the microbiota isolated from gentamicin. Thirty pairs of corneas received antiseptics, with PVP-I in the right eye and GC in the left, and for each time of action 10 pairs of eyeballs were used. Swabs were collected from the ocular surface before application of the solutions, after and at the time of preservation of the corneal tissue, to evaluate the reduction of the microbiota. After identification of the microbiota, an antibiogram test was performed with gentamicin. The data were computed and evaluated by Chi-square or Fisher's exact test, T-test and McNemar test paired, and the statistical significance level was 5% (p <0.05). In the second collection, after antisepsis, there was a reduction of 39,5% in the total of gram positive bacteria (G +), and of 76,5% in the gram negative (G-) bacteria, with no statistically significant difference (p = 0.183), which demonstrated that the bacterial elimination capacity of the antiseptics was similar. It was observed that, in the second collection, both were more effective for G-, with a statistically significant difference (p <0.001), than for G +, with no statistically significant difference (p = 0.494). In the third collection, after the residual effect of the antiseptics, there was a reduction of 99.1% of all the microorganisms. In the antibiogram test, 88% of the isolated microorganisms were sensitive to gentamicin. It was concluded that the use of antiseptics is essential for the effective decontamination of donated corneas prior to preservation. The residual time of the antiseptics increased the decontamination power of PVP-I and GC, being similar in reducing the microbiota of the ocular globe of the donor of corneas. Gentamycin contained in the cornea preservation medium complements the antisepsis of the donated tissues. / A descontaminação da superfície dos globos oculares doados são normas operacionais que os bancos de olhos preconizam antes da preservação e os procedimentos de antissepsia são eficazes, garantindo uma maior segurança ao transplante. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antisséptico na redução da microbiota do globo ocular de doadores de córneas antes da enucleação, com o povidona-iodo (PVP-I) a 5% e gluconato de clorexidina (GC) a 0,05%, nos tempos de ação de 5, 10 e 15 minutos, bem como o perfil de susceptibilidade da microbiota isolada à gentamicina. Trinta pares de córneas receberam antissépticos, sendo o PVP-I no olho direito e o GC no esquerdo, e para cada tempo de ação foram utilizados 10 pares de globos oculares. Foram colhidos swabs da superfície ocular antes da aplicação das soluções, após e no momento da preservação do tecido corneano, para avaliar a redução da microbiota. Após identificação da microbiota, foi realizado teste de antibiograma com gentamicina. Os dados foram computados e avaliados pelos testes Qui-Quadrado ou Exato de Fisher, teste T e Teste McNemar pareado, e o nível de significância estatística foi (p<0,05). Com relação aos dados obtidos na segunda coleta, após o uso de antissépticos, houve uma redução de 39,5% no total de bactérias gram positivas (G+) e de 76,5% nas gram negativas (G-), não havendo diferença estatística significativa (p=0,183), sendo semelhante a capacidade de eliminação bacteriana dos antissépticos. Observa-se que, na segunda coleta, ambos foram mais eficazes para as G-, com diferença estatisticamente significativa (p<0,001), do que para as G+, sem diferença estatisticamente significativa (p=0,494). Na terceira coleta, após o efeito residual dos antissépticos, houve redução de 99,1% de todos os micro-organismos. No teste de antibiograma, 88% dos micro-organismos isolados foram sensíveis à gentamicina. Concluiu-se que o uso de antissépticos é essencial para a efetiva descontaminação das córneas doadas antes da preservação. O tempo residual dos antissépticos aumentou o poder de descontaminação do PVP-I e GC, sendo semelhantes na redução da microbiota do globo ocular do doador de córneas. A gentamicina contida no meio de preservação de córnea complementa a antissepsia dos tecidos doados.