Foi construído o modelo tridimensional da enzima gliceraldeído-3- fosfato desidrogenase de Trypanosoma cruzi, o causador da doença de Chagas, usando técnicas computacionais de modelagem por homologia. O modelo foi comparado a enzima muscular homóloga de humanos quanto as diferenças no sitio de ligação do cofator NAD+. Sobre o modelo da enzima de T.cruzi foram construidas moléculas anaJogas ao grupo adenosina do cofator NAD+ como tentativa de se obter um inibidor seletivo a enzima do parasita e não efetivo quanto à enzima de humanos. Alguns dos compostos haviam sido ensaiados quanto à afinidade pela enzima análoga de Trypanosoma brucei. Foi escrito um programa de visualização gráfica de modelos moleculares que permite a análise dos parâmetros esteroquímicos com rapidez e simplicidade / The three-dimensional model of the glycossomal enzyme gliceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease, was built using homology modeling computational techniques. The model was compared against the human muscle homologous enzyme with regard to the differences in the NAD+ binding site. Adenosine analogs were designed based on the model of the T.cruzi enzyme as an attempt to build selective inhibitors of the parasite enzyme with no activity against the human enzyme. Some of the compounds were previously tested for their affinity for the homologous enzyme from Trypanosoma brucei. A graphical program was written that allows the representation and analysis of stereo chemical parameters of molecular models with ease and speed

Com o objetivo de avaliar o desempenho de diferentes doses e produtos fitossanitários utilizados no tratamento de sementes de soja, foi efetuada a caracterização do efeito fisiológico na germinação e no desenvolvimento das plântulas por intermédio dos testes de germinação e de vigor (índice de velocidade de germinação, envelhecimento acelerado, comprimento e massa de matéria seca de plântula, teste de frio e análise computadorizada de imagem) em laboratório, além da determinação do teor de clorofila (por intermédio do valor SPAD), fotossíntese líquida, condutância estomática, transpiração, temperatura foliar, conteúdo de peróxido de hidrogênio, peroxidação de lipídios, atividade da catalase (enzima antioxidante), e teor de proteína e de nitrogênio total. Com base nos resultados obtidos observou-se que todos os tratamentos apresentaram desempenho satisfatório no que diz respeito à germinação. Não se observaram diferenças em termos de índice de velocidade de germinação, envelhecimento acelerado, comprimento e massa de matéria seca de raiz, índice de vigor e de crescimento (análise de imagem) e peroxidação de lipídeos. O tratamento com Fipronil + Piraclostrobina + Tiofanato Metílico apresentou tendência de melhor desempenho em termos de comprimento de parte aérea, enquanto o tratamento Controle apresentou tendência de melhor desempenho, mas não diferiu dos tratamentos: Fipronil + Piraclostrobina + Tiofanato Metílico, Fluxapiroxade e Piraclostrobina em termos de massa de matéria seca de parte aérea. Os tratamentos Fipronil e Fluxapiroxade apresentaram melhor desempenho que o Controle, em termos de relação massa de matéria seca de raiz e de parte aérea. O tratamento com Fipronil apresentou melhor tendência de desempenho pelo teste de frio e juntamente com Fipronil + Piraclostrobina + Tiofanato Metílico e Fluxapiroxade apresentou desempenho melhor que o Controle no de índice de uniformidade. A Piraclostrobina apresentou desempenho melhor que o Controle em termos de teor de clorofila, fotossíntese líquida e temperatura foliar, enquanto o tratamento com Fipronil foi melhor que o Controle e os demais tratamentos em termos de condutância estomática e transpiração. Os tratamentos com Fipronil e Piraclostrobina apresentaram desempenho melhor que o Controle, em termos de conteúdo de peróxido de hidrogênio e os tratamentos com Fipronil + Piraclostrobina + Tiofanato Metílico e Fluxapiroxade e Piraclostrobina apresentaram desempenho melhor que o Controle, em termos da atividade da catalase. O Fluxapiroxade (50 g por 100 kg de sementes) apresentou melhor desempenho, mas não diferiu do Controle e dos tratamentos com Fipronil, Fluxapiroxade (25 e 75 g por 100 kg de sementes) e Piraclostrobina em termos do teor de proteína e nitrogênio total. Com os resultados apresentados, conclui-se que não houve prejuízo ao vigor das plântulas quando realizado o tratamento de sementes. Além disso, pode-se concluir que esta constitui prática agronômica eficiente não só no que diz respeito ao controle de doenças e pragas, mas também apresenta benefícios no que diz respeito à fisiologia das plântulas de soja, sobretudo para tratamento realizado com estrobilurinas. Esses benefícios podem favorecer um melhor estabelecimento das plântulas no campo. / This study aimed to evaluate the physiological effects of soybean seed treatment with different pesticides and doses on germination and seedling development. Germination and vigor tests, such as speed of germination index, accelerated aging, length and dry weight of seedling, cold test and computerized image analysis were performed in the laboratory, besides the determination of chlorophyll content (SPAD value), net photosynthesis, stomatal conductance, leaves transpiration and temperature, content of hydrogen peroxide, lipid peroxidation, catalase (an antioxidant enzyme) activity, protein and total nitrogen. The results obtained revealed that all treatments showed satisfactory performance in germination. No differences in terms of speed index, accelerated aging, root length and dry weight, vigor and growth index (image analysis) and lipid peroxidation were observed. Treatment with Fipronil + Pyraclostrobin + Methyl Tiophanate tended to perform better in terms of shoot, while control treatment tended to perform better, but did not differ from treatments with Fipronil + Pyraclostrobin + Methyl Tiophanate, Fluxapyroxad and Pyraclostrobin in terms of shoot dry matter. Fipronil and Fluxapyroxad treatments performed better than the control in terms of relationship between root and shoot dry weight. Treatment with Fipronil showed better performance trend for the cold test and along with Fipronil + Pyraclostrobin + Methyl Tiophanate and Fluxapyroxad performed better than control on the uniformity index. Pyraclostrobin showed better performance than the control in terms of chlorophyll content, net photosynthesis and leaf temperature, whereas treatment with Fipronil was better than the control and other treatments in terms of stomatal conductance and transpiration. Treatments with Fipronil and Pyraclostrobin performed better than the control in terms of content of hydrogen peroxide and treatments with Fipronil + Pyraclostrobin + Methyl Tiophanate, Fluxapyroxad and Pyraclostrobin performed better than the control in terms of catalase activity. Fluxapyroxad (50 g per 100 kg of seeds) performed better, but did not differ from control, Fipronil, Fluxapyroxad (25 and 75 g per 100 kg of seeds) and Pyraclostrobin in terms of protein content and total nitrogen. With the results presented, we conclude that there was no damage to seedling vigor when seed treatment was applied. Furthermore, it can be concluded that this is an efficient agronomic practice with regard to the control of diseases and pests and it also has benefits to the physiology of soybean seedlings, mainly when treatment is done with Strobilurins. These benefits can favorable to a better seedling establishment in the field.

Periplaneta americana apresenta em seu tubo digestivo pelo menos oito atividades β-glucanásicas distintas. Destas, cinco puderam ser purificadas até a homogeneidade e parcialmente caracterizadas. LAM (Mr=46.000) apresenta atividade exclusiva sobre laminarina, é inibida por altas concentrações de substrato e gera oligossacarídeos de baixo grau de polimerização (1 a 4) a partir de laminarina solúvel. LIQl (Mr=24.600) é capaz de hidrolisar laminarina e liquenana, produzindo oligossacarídeos de grau de polimerização 1, 2 e 4 a partir de laminarina solúvel e um único oligossacarídeo (grau de polimerização entre 3 e 4) a partir de liquenana. LIQ 2 (Mr= 22.300) é capaz de clivar laminarina e liquenana e é inibida por laminarina, clivando apenas ligações internas ao polímero. CELl e CEL2 (Mr=71.600 e 72.700) clivam liquenana e carboximetilcelulose, também atacando apenas ligações internas destes polissacarídeos. CELl e CEL2 também são capazes de atacar celulose cristalina. Todas as β-glucanases purificadas apresentam um pH ótimo em torno de 6,0, próximo ao pH luminal, e são relativamente estáveis em condições fisiológicas. Estas enzimas são purificadas a partir da fração solúvel do tubo digestivo do inseto em quantidades muito pequenas (até 7µg), o que inviabiliza sua caracterização estrutural refinada. Além destas proteínas, o sistema β-glucanásico de P. americana conta com duas celulases de baixo peso molecular (Mr= 15.000 e 17.000), e uma atividade ainda não caracterizada. Aparentemente, estas enzimas estão envolvidas na digestão incompleta da celulose e hemiceluloses ingeridas pelo inseto. LIQ 1 possui capacidade lítica sobre células de Saccharomyces cerevisiae, podendo estar envolvida na defesa do epitélio contra agentes infecciosos. / P. americana midgut has at least eight β-glucanases. Five were purified and partially characterized. LAM (Mr=46,000) is active only upon soluble laminarin, is inhibited by high amounts of substrate, and releases small oligosaccharides (1 to 4 glucoses). LIQ1 (Mr=24,600) is active upon laminarin and lichenan, releasing oligosaccharides with 1,2 and 4 glucosyl residues from soluble laminarin and only one oligossacharide, with a degree of polimerization between 3 and 4, from lichenan. LIQ2 (Mr=22,300) is active upon laminarin and lichenan and hydrolyzes only internal bond. CEL1 and CEL2 are active upon lichenan and carboxymethylcellulose, hydrolyzing internal bonds in these substrates. CEL1 and CEL2 also attack AVICEL. All β-glucanase activities have an optimum pH around 6.0 (near luminal pH) and are stable under physiological conditions. These enzymes are purified in very low amounts (up to 7µg from 10 animais). P. americana &#946,-glucanasic system also has two cellulases of low molecular weight (Mr= 15,000 and 17,000), and another not yet characterized. Probably these enzymes are involved in incomplete digestion of cellulose and hemicellulose ingested by the insect. LIQ 1 lyses Saccharomyces cerevisiae cells, and may be involved in epithelium defense against microorganisms.

Neste trabalho são apresentados resultados relacionados a estudos sobre o comportamento eletroquímico do lactato e do peróxido de hidrogênio em diversos eletrodos em meio de diferentes pHs utilizando voltametria cíclica. Também foi investigado o comportamento eletroquímico do peróxido de hidrogênio em eletrodos modificados com filmes de hexacianoferratos utilizando eletrodos de platina e carbono vítreo. A vantagem do uso do CTAB na modificação da superfície de carbono vítreo com Azul da Prússia foi confirmada no que se refere à melhora da sensibilidade e da estabilidade das medidas. Numa etapa posterior desenvolveu-se um biossensor para a determinação de lactato pelo monitoramento de peróxido de hidrogênio produzido na reação catalisada de lactato com oxigênio na presença da enzima lactato oxidase. Nessa etapa, o trabalho consistiu em imobilizar a enzima lactato oxidase na superfície do eletrodo, previamente, modificado com Azul da Prússia, com o auxílio de Nafion®. Após a construção do biossensor e a otimização das condições de análise (pH, quantidade de enzima, volume da amostra e vazão) para obtenção de maior sinal analítico no desenvolvimento do método para a determinação de lactato por análise em fluxo, averiguou-se a repetibilidade das medidas (Clactato = 0,28 mmol L-1) obtendo-se um desvio padrão de 2,2% para 18 repetições. A freqüência analítica foi estimada em 160 injeções por hora com limite de detecção de 0,84 µmol L-1 e linearidade até 0,28 mmol L-1 de lactato. O biossensor foi aplicado na quantificação de lactato em amostras alimentares (cervejas alcoólicas e não alcoólicas) e biológicas (sangue liofilizado e recém coletado). Por fim, realizaram-se estudos envolvendo a variação da concentração de lactato sanguíneo em função da intensidade de atividade esportiva. Os resultados obtidos pelo método proposto foram comparados com aqueles oriundos do uso de método de referência. / Results on the investigation of the electrochemical behavior of lactate and hydrogen peroxide at various electrodic surfaces at different pHs using cyclic voltammetry are presented. Experiments were also carried out with platinum and glassy carbon electrodes modified with hexacyanoferrate films. The advantage of using CTAB in the electrodeposition step of Prussian Blue films onto glassy carbon surfaces was confirmed taking into account both the stability and sensitivity of measurements. The immobilization of lactate oxidase onto glassy carbon electrodes modified with a Prussian Blue layer using Nafion® was performed to fabricate a biosensor for lactate. The biosensor was used in the development of a FIA amperometric method for the determination of lactate. Under optimal operating conditions (pH = 6.9, E = -0.1 V), the linear response of the method was extended up to 0.28 mmol L-1 lactate with a limit of detection of 0.84 µmol L-1. The repeatability of the method for injections of a 0.28 mmol L-1 lactate solution was 2.2 % (n = 18). The analytical frequency was calculated as 160 injections h-1. The usefulness of the method was demonstrated by determining lactate in beer (alcoholic and nonalcoholic beers) and blood samples (lyophilized and freshly collected). Finally, the influence of physical exercise on the blood lactate level was studied. Results obtained by using the proposed amperometric detector compared well with the reference method.

Os ésteres são importantes compostos orgânicos, obtidos por síntese química ou extraídos de alguns produtos naturais utilizando-se solvente em meio adequado. Estudos mostram que enzimas, em particular lipases, podem ser aplicadas na síntese de diversos ésteres. O principal objetivo deste trabalho foi a obtenção de acetato de butila, um éster de aroma característico de abacaxi, utilizando lipase de Geotrichum candidum produzida em fermentação submersa e imobilizada em matriz polimérica de alginato de bário e gelatina reticulada com glutaraldeído. A caracterização bioquímica foi realizada tanto para a lipase na forma livre como para a lipase na forma imobilizada. O rendimento em conversão molar de substrato foi determinado por cromatografia gasosa. A enzima apresentou atividade enzimática máxima após 48 horas de fermentação de 37,7 U/mL. Os valores ótimos para pH e temperatura da enzima na forma livre e imobilizada foram pH 6,5 e 40 °C e pH 7,5 e 45 °C, respectivamente. A enzima na forma livre foi estável do pH 6,0 ao 8,0 e à temperatura de 35 a 45 °C, já na forma imobilizada, foi estável do pH 5,5 ao 8,5 e na faixa de temperatura de 30 a 55 °C. A lipase imobilizada teve seus parâmetros cinéticos determinados, e os valores obtidos para o Km e Vmax, foram 0,115 mmol e 0,718 µmol.mL-1.min-1, respectivamente. As melhores condições de síntese do bioaroma para a enzima na forma livre foram: temperatura de 30 °C, 12,5% de enzima em relação à quantidade de butanol utilizada, proporção molar do substrato 60% de acetato de vinila em um período de 24 horas. O rendimento alcançado neste caso foi de 97,2 % de conversão molar em acetato de butila. Para a enzima imobilizada as melhores condições foram: temperatura de 45 °C, 12,5% de enzima em relação à quantidade de butanol utilizada, proporção molar do substrato 60% de acetato de vinila em um período de 24 horas. O rendimento alcançado neste caso foi de 99,1%, que demonstra que lipase produzida por Geotrichum candidum na forma imobilizada apresenta excelente capacidade de sintetizar acetato de butila (bioaroma de abacaxi). / Esters are important organic compounds obtained by chemical synthesis or derived from some natural products using a solvent in appropriate medium. Studies have shown that enzymes, particularly lipases, ca be applied in the synthesis of various esters. The main objective of this study was to obtain butyl acetate, a characteristic ester aroma of pineapple, using lipase from Geotrichum candidum produced in submerged fermentation and immobilized in a barium alginate and gelatin polymer matrix crosslinked with glutaraldehyde. The biochemical characterization was performed for both free and immobilized lipases. The yield in molar conversion of substrate was determined by gas chromatography. The enzyme showed maximum enzymatic activity after 48 hours of fermentation of 37.7 U/mL. The optimum values for pH and temperature of the enzyme in free and immobilize form were pH 6.5 and 40 °C and pH 7.5 and 45 °C, respectively. The enzyme was stable in free form from pH 6.0 to 8.0 and at temperatures from 35 to 45 °C, and in the immobilized form from pH 5.5 to 8.5 and at temperatures from 30 to 55 °C. Kinetic parameters of the immobilized lipase were determined, and the values obtained for Km and Vmax were 0.115 mmol and 0.718 µmol.mL-1.min-1, respectively. The best conditions for the synthesis of flavor by enzyme in free form were: 30 °C of temperature, 12.5% of enzyme for the amount of butanol used, and molar ratio of substrate 60% of vinyl acetate in a 24 hours period. The yield achieved in this case was 97.2% of molar conversion in butyl acetate. For the immobilized enzyme the best conditions were: 45 °C of temperature, 12.5% of enzyme for the amount of butanol used, and molar ratio of substrate 60% of vinyl acetate in a 24 hours period. The yield achieved in this case was 99.1%, demonstrating that lipase produced by Geotrichum candidum in immobilized form has an excellent ability to synthesize butyl acetate (pineapple flavor).

Este experimento foi realizado com o objetivo de avaliar a redução dos níveis de cálcio e fósforo disponível em dietas suplementadas com doses crescentes de fitase para frangos de corte. Foram utilizados pintinhos machos da linhagem Cobb (n = 1152) distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x4 (três níveis de cálcio e fósforo disponível e quatro níveis de fitase) com 12 tratamentos e oito repetições de 12 aves cada. Os tratamentos experimentais foram: T1 Dieta com níveis de cálcio e fósforo disponível de acordo com o proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T2 Dieta com 90% dos níveis de cálcio e fósforo disponível proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T3 Dieta com 80% dos níveis cálcio e fósforo disponível proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T4 Dieta do T1 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T5 Dieta do T2 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T6 Dieta do T3 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T7 Dieta do T1 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T8 Dieta do T2 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T9 Dieta do T3 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T10 Dieta do T1 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração; T11 Dieta do T2 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração; T12 Dieta do T3 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração. As dietas foram a base de milho e farelo de soja. As aves foram pesadas aos 7, 21 e 42 dias de idade. As características de desempenho foram avaliadas e, aos 42 dias de idade, foram avaliados o rendimento de carcaça e os cortes comerciais. O estudo da qualidade óssea, como a análise da densidade e resistência da tíbia, também foi realizado. Com o aumento das inclusões de fitase houve aumento linear de ganho de peso médio aos 7 dias e aos 21 dias. Da mesma forma, houve redução linear na conversão alimentar aos 21 dias, com o aumento dos níveis de fitase. Considerando o período de 1 a 42 dias, a dieta sem inclusão da enzima apresentou resultados inferiores ao uso das dietas contendo fitase, resultando em um índice de eficiência produtiva com melhores resultados em dietas contendo 500 e 1500 FTU/Kg de ração da enzima. Houve interação entre o nível de cálcio e fosforo na dieta e adição de fitase para os parâmetros de ganho de peso e resistência óssea que neste trabalho foi representada pela força máxima (N). / This trial was conducted with the objective of evaluating the reduction of calcium and phosphorus available for broilers fed diets containing increased levels of phytase. One thousand and one hundred and fifty-two male chicks Cobb-500 (n = 1152) were submitted to a completely randomized factorial 3 x 4 (three levels of calcium and phosphorus available and four levels of phytase and were distributed among 12 treatments and 8 replicates with 12 broilers each replicate. The experimental treatments were: T1 - diet containing calcium and phosphorus availableas proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T2 diet containing 90% of calcium and phosphoru available in the diet as proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T3 - diet containing 80% of calcium and available phosphorus in the diet as proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T4 - T1 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T5 - T2 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T6 - T3 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T7 - T1 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T8 - T2 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T9 - T3 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T10 - T1 Diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet; T11 - the T2 diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet; T12 - T3 Diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet. The diets were corn and soybean meal - based. The broilers were weighed at 7, 21 and 42 days of age. Performance traits s were evaluated and, at 42 days of age. Carcass yield and commercial cuts were also evaluated. Furthermore, a bone quality study, with the analysis of density and tibial resistance, were performed. The increased levels of phytase in the diets determined a linear increased in average weight gain at 7 and 21 days of age. Likewise, the increased levels of phytase in the diets reduced linearly the feed conversion at 21 days of age. Considering the period from day 1 to day 42 the diets without phytase determined inferior results than the diets with phytase inclusion. The better results were found when the diets have between 500 and 1500 FTU of phytase per kg of concentrate. There were an interaction between the calcium and phosphorus levels with phytase concentration for weight gain e bone resistance. In this work, those parameters were represented by the maximum strength (N).

Objetivou-se elaborar uma revisão sistemática da literatura das exigências de cálcio e fósforo com o uso da enzima fitase em ração para frangos de corte e avaliar altas doses de 6-fitase híbrida em rações, com ajuste na matriz nutricional, sobre o desempenho produtivo, aspectos econômicos, qualidade óssea e características de carcaça de frangos de corte. Para a revisão sistemática adotou-se a metodologia proposta por Lovatto et al. (2007), com a localização de artigos relacionados com o tema, coleta de dados, análise crítica dos artigos, interpretação e representação dos resultados encontrados. Para o desempenho, conduziu-se um experimento com 1200 pintos de um dia, Cobb500®, com peso médio de 47,94 ± 0,54 g, distribuídos em um delineamento em blocos casualizados com cinco tratamentos, com oito repetições de 30 aves cada. Os tratamentos utilizados foram: 1) Controle positivo de acordo com as exigências da Tabela Brasileira para Aves e Suínos; 2) Controle negativo (CN) com redução na matriz nutricional equivalente a dose de fitase de 750 FTU/kg, mas sem a inclusão da enzima; 3) CN com inclusão da fitase em 750 FTU/kg; 4) CN com inclusão da fitase em 1000 FTU/kg; e 5) CN com inclusão da fitase em 1500 FTU/kg. A redução dos nutrientes no controle negativo foi de 0,184% de fósforo disponível, 84,8 kcal/kg de energia metabolizável, 0,36% de proteína bruta, 0,206% de cálcio, 0,002% de sódio, 0,006% de lisina digestível e 0,019% de metionina+cistina digestível. A enzima utilizada foi Natuphos® E 10.000 FTU/g, nova 6-fitase de origem híbrida. Para o desempenho e o rendimento de carcaça foram observadas diferenças entre os tratamentos (p<0,05), sendo que o controle negativo gerou resultados inferiores em relação aos demais tratamentos, enquanto que, para a análise econômica gerou resultados inferiores para as receitas brutas e superiores para os custos de produção (p<0,05). Para a qualidade óssea, a suplementação de fitase nos níveis de 1000 e 1500 FTU/kg geraram resultados semelhantes aos encontrados para o controle o positivo (p<0,05). Dessa maneira, concluiu-se que a suplementação da 6-fitase híbrida em níveis de 1000 e 1500 FTU/kg, com redução de nutrientes na matriz nutricional, melhora o desempenho, as características de carcaça, os aspectos econômicos e os parâmetros de qualidade óssea, conseguindo alcançar a mesma qualidade óssea do controle positivo, porém com um custo reduzido. / The objective of this study was to systematically review the literature on calcium and phosphorus requirements with the use of phytase enzyme in broiler feed and evaluate the levels of hybrid 6-phytase in diets, with an adjustment in the nutritional matrix, on the productive performance, bone quality, and carcass characteristics of broiler chickens. For the systematic review, the methodology proposed by Lovatto et al. (2007), for the localization of articles related to the theme, data collection, critical analysis of the articles, interpretation and representation of the results found. For broilers from 1 to 21 days, the enzyme phytase Natuphos is the most studied and levels above 500 FTU / kg can be used without compromising the performance of the animals, in addition to significantly improving the cost of. An experiment was carried out with 1200 day-old Cobb500® chickens, with a mean weight of 47.94 ± 0.54 g, distributed in a randomized block design with five treatments, with eight replicates of 30 birds each. The treatments used were: 1) Positive control according to the requirements of the Brazilian Poultry and Pork Table; 2) Negative control (CN) with reduction in nutritional matrix equivalent to phytase dose of 750 FTU / kg, but without inclusion of the enzyme; 3) CN with phytase inclusion at 750 FTU / kg; 4) CN with phytase inclusion at 1000 FTU / kg; and 5) CN with phytase inclusion at 1500 FTU / kg. The nutrient reduction in the negative control was 0.184% of available phosphorus, 84.8 kcal / kg of metabolizable energy, 0.36% crude protein, 0.206% calcium, 0.002% sodium, 0.006% digestible lysine and 0.019 % digestible methionine + cystine. The enzyme used was Natuphos® E 10,000 FTU / g, a novel 6-phytase of hybrid origin. For carcass performance and yield, differences between treatments (p <0.05) were observed, and the negative control generated lower results in relation to the other treatments, whereas, for the economic analysis, lower results were obtained for gross and production costs (p <0.05). For bone quality, phytase supplementation at 1000 and 1500 FTU / kg levels were found to be similar to the positive control results (p <0.05). Thus, it is concluded that supplementation of hybrid 6-phytase at levels of 1000 and 1500 FTU / kg, with nutrient reduction in the nutritional matrix, improves performance, carcass characteristics, economic aspects and parameters of bone quality, achieving the same quality bone of the positive control, but with a reduced cost.

A Xylella fastidiosa é uma bactéria gram-negativa que infecta o xilema das plantas causando muitas vezes a maturação precoce e a diminuição dos frutos. Ela é responsável por importantes perdas na economia, no Brasil é a causadora de doenças de Citrus Variegated Chlorosis (CVC) e a da doença de Pierce nos Estados Unidos. As proteases desempenham funções vitais no ciclo de vida de muitos parasitas, muitas estão envolvidas em processos infecciosos, a Xylellaína é uma cisteíno protease que é diferentemente expressa em cepas patogênicas a não patogênica. A compreensão de seu mecanismo catalítico, através do estudo da sua estrutura e função, pode ajudar no planejamento de inibidores seletivos, potenciais agentes contra as doenças fitopatológicas ocasionadas pela X. fastidiosa. Sua estrutura molecular foi elucidada no Laboratório de Cristalografia de Proteínas e Biologia Estrutural do Instituto de Física de São Carlos (USP), estudos estruturais mostraram que a proteína se apresenta na forma de uma pró-proteína, pois está inativa devido a uma pró-região que bloqueia o sítio catalítico. Também foi verificada a presença de um nucleotídeo na estrutura da Xylellaína próximo a pró-região, como hipótese foi considerada a relação entre o nucleotídeo e o mecanismo de ativação da proteína. A influência do nucleotídeo na atividade funcional da enzima foi constatada através da comparação de ensaios enzimáticos entre a enzima nativa e mutantes. As mutações foram planejadas com a intenção de ocasionar a desestabilização do nucleotídeo, por isso foram mutados os resíduos da pró-região que interagem diretamente com o ele. As mutações foram Fenilalanina 45 (F45), Arginina 43 (R43) e F45/R43, todos os resíduos foram mutados para Alaninas (A). Os resultados mostraram que os valores de Km obtidos para a proteína nativa e suas mutantes apresentaram consideráveis alterações quando comparado entre eles, esse efeito não foi percebido para a eficiência catalítica. Conclui-se que as mutações pouco alteraram a capacidade da enzima converter o subsrato em produto, mas houve significantes alterações no reconhecimento do substrato. Esse resultado corrobora com a hipótese de que a existência do nucleotídeo está relacionada com o mecanismo de ativação da proteína. / Xylella fastidiosa is a Gram-negative bacterium which infects the plant xylem system causing in many cases precocious maturation and diminution of fruits. It is responsible for economically important plant diseases, such as the Citrus Variegated Chlorosis (CVC). Proteases might be involved in the infection process by disrupting plant tissue. Xylellain is a cysteine protease which is differently expressed in strain pathogen and non-pathogen of X. fastidiosa. The 3D structure of xylellain was solved by our group and structural studies show that this protein has a proenzyme form and a ribonucleotideo close to the amine terminal region. Our hypothesis is that protein-nucleotide interactions are related to xylellains activation mechanism. To evaluate the influence of the nucleotide in the functional activity of enzyme, point mutations in aminoacids which interact directly with this ribonucleotide were carried out. The point mutations are phenylalanine 45 (F45) and arginine 43 (R43), individually mutated for alanine (A) residues. One way to quantify the changes caused by the alteration of a nucleotide is the direct comparison between the kinetic enzyme assays of native and mutant proteins. Greater variations between the values of Km than in the values of catalytic efficiency were observed. This suggests that the speed of production varied by enzyme-substrate. However the mutations caused little change on the ability of the protease to catalyze the reaction. This result is in agreement with the hypothesis that the nucleotide provides the structural support for the hinge formation on the N-terminal domain, thus directing the inhibitory peptide inside the active site of the enzyme. Therefore, the nucleotide may be exerting regulatory functions in vivo, possibly in the folding or activation of the protein and performance of catalytic function.

A Floresta Amazônica, o maior bioma brasileiro, é caracterizado pela ampla diversidade e heterogeneidade de seus ecossistemas. Os solos amazônicos, em geral, abrigam elevada diversidade microbiana que desempenha papeis importantes na ciclagem de nutrientes, mediante a decomposição da matéria orgânica. Dentre os micro-organismos, os fungos se destacam como os principais agentes envolvidos na biodegradação. Esses micro-organismos produzem um coquetel de enzimas do complexo celulolítico que são de grande importância biotecnológica. Desse modo, diante da importância econômica dos fungos, o presente trabalho propôs, acessar fungo do gênero Trichoderma, obtidos de solos da Floresta Amazônica, na busca por linhagens com alto potencial celulolítico. Assim, a partir de amostras de solos coletados em doze pontos da floresta foram obtidos 151 isolados de Trichoderma spp. O sequenciamento do gene que codifica para o de elongação da transcrição alfa-1, evidenciou a prevalência de sete espécies de Trichoderma. Do total de isolados, as mais abundantes foram: Trichoderma spirale (37%), Trichoderma strigosum (22%), Trichoderma harzianum (18%) e Trichoderma asperellum (17%). As linhagens foram submetidas a triagem para atividade celulolítica. Duas linhagens, T. harzianum AMS 23.14 e T. harzianum AMS 29.14 apresentaram atividade enzimática superior ao padrão, T. reesei RUT C-30 e foram submetidas a avaliação da atividade enzimática em diferentes condições de cultivos (bagaço de cana-deaçúcar tratado e não tratado, em dois pHs: 3 e 5). Foi observado atividade superior das linhagens amazônicas para as três enzimas estudadas (endoglucanase, exoglucanase e β-glicosidase), quando comparadas à linhagem padrão utilizada. A atividade enzimática foi positivamente influenciada pelo pH ácido, assim como pelo substrato não tratado. A partir destes resultados é notório que as linhagens isoladas desse bioma possuem grande potencial de atividade celulolítica, e que estudos mais aprofundados podem proporcionar o futuro emprego desses fungos em diversas áreas industriais. / The Amazon Rain Forest, the largest Brazilian biome, is characterized by the wide diversity and heterogeneity of its ecosystems. Amazonian soils, in general, harbor high microbial diversity that plays important roles in the cycling of nutrients, through the decomposition of organic matter. Among the microorganisms, fungi stand out as biodegradation agents. These microorganisms produce cellulolytic enzymes that are of great economic and biotechnological importance. The present work proposed to access the fungal population of the genus Trichoderma, isolated from Amazonian Forest soils, in the search for lineages with high potential of cellulolytic activity. Twelve soil samples were collected, resulting in the isolation of 151 strains of Trichoderma spp. Gene sequencing of the alpha-1 transcription elongation factor region with the EF1 and TEFR primers evidenced the prevalence of seven Trichoderma species. Of the total isolates, Trichoderma spirale (37%), Trichoderma strigosum (22%), Trichoderma harzianum (18%) and Trichoderma asperellum (17%) were the most abundant. The strains were screened for qualitative cellulolytic activity in solid medium and quantitative in liquid medium. Two strains, T. harzianum AMS 23.14 and T. harzianum AMS 29.14 showed enzymatic activity superior to T. reesei RUT C-30, and were sent to the evaluation of the enzymatic activity in different conditions (sugarcane bagasse treated and untreated, in two pHs: 3 and 5). Superior activity of the Amazonian strains was observed for the three enzymes studied (endoglucanase, exoglucanase and β-glucosidase) when compared to the T. reesei RUT C-30 standard. The enzymatic activity was positively influenced by pH 3, as well as by the untreated substrate. From these results, it is well known that isolated strains of the Amazonian environment have a great potential for cellulolytic activity, and that further studies may provide the future employment of these strains in several areas of industry.

Este trabalho teve como objetivos avaliar as condições de cultivo para a produção de lipase e acúmulo de lipídio pela levedura Candida viswanathii utilizando diferentes fontes de carbono e nitrogênio em condições submersas, imobilizar a lipase e avaliar o seu potencial em reação de hidrólise de gordura de frango em biorreator tipo cesto. Os cultivos submersos em condições limitantes de nitrogênio com diferentes fontes de lipídios puros ou complexos mostraram que C. viswanathii acumulou 44% de lipídio intracelular em trioleína e 39% em azeite de oliva utilizando extrato de levedura como fonte de nitrogênio. Nestas condições, a produção de lipase foi 26,78 U/ml em azeite de oliva e 23,6 U/ml em trioleína. O nitrato de amônio inibiu a produção de lipase em 48% em trioleína e 69% em azeite de oliva. Além disso, a análise dos ácidos graxos revelou predominância de ácido oleico (C18:1), em proporções de 69,31, 60,69 e 68,84%, para azeite de oliva, glicose e azeite/glicose, respectivamente. Quanto à imobilização, estudou-se a influência do diâmetro da esfera e da concentração de alginato, obtendo-se o melhor diâmetro de 2 mm e concentração de 2% de alginato, com atividade enzimática de 13,42 U/g e 28 U/g, respectivamente. Utilizou-se alginato de sódio em sua forma convencional e modificado com glutaraldeído, álcool polivinílico e carboximetilcelulose, sendo que o alginato na forma convencional foi o que apresentou melhores resultados, obtendo-se 28,6 U/g e mais de 50% de atividade após 15 ciclos de reuso. A caracterização da lipase livre e encapsulada de C. viswanathii revelou temperatura ótima de atividade de 35 ºC para a enzima encapsulada e na faixa de 40 – 45 ºC para a lipase livre sobre a hidrólise do p-NPP. Sobre a hidrólise de gordura de frango, tanto enzima livre quanto encapsulada apresentaram temperatura ótima de atividade à 40 ºC. Quanto à estabilidade térmica, a enzima livre apresentou boa estabilidade até 12h de incubação nas temperaturas de 30 e 40 ºC. Já a enzima encapsulada mostrou-se estável em até 72 horas de incubação nas mesmas temperaturas. A enzima livre apresentou aumento de atividade na presença de NH4Cl e CaCl2 (117,50% e 111,25%, respectivamente). Já a lipase encapsulada apresentou aumento na atividade com todos os íons analisados, sendo CaCl2 (152,94%), NH4Cl (145,88%), BaCl2 (144,12%) e NaCl (138,24%). Em relação à hidrólise, observou-se que tanto a enzima livre como encapsulada apresentaram maior atividade hidrolítica após 96 horas de incubação, em que a enzima encapsulada obteve 34,66% de hidrólise e a enzima livre obteve 17,91% de hidrólise. Assim, a levedura Candida viswanathii mostrou-se eficiente tanto para o acúmulo de lipídio, quanto para a produção de lipase nas condições estabelecidas. Além disso, a enzima encapsulada apresentou boa estabilidade e potencial para aplicação na hidrólise de gordura de frango. / The aim of this work was to evaluate the culture conditions for lipase production and lipid accumulation by yeast Candida viswanathii using different carbon sources and nitrogen under submerged conditions; and to immobilize the lipase produced in alginate and to evaluate its potential for poultry fat hydrolysis in basket type bioreactor. Submerged cultures under nitrogen-limiting conditions with different sources of pure or complex lipids showed that C. viswanathii accumulated 44% intracellular lipid in triolein and 39% in olive oil using yeast extract as a source of nitrogen. Under these conditions, lipase production was 26.78 U/ml using olive oil and 23,6 U/ml with triolein. Ammonium nitrate inhibited lipase production in 48% with triolein and 69% wiht olive oil. In addition, analysis of fatty acids showed a predominance of oleic acid (C18:1), in proportions of 69.31, 60.69 and 68.84%, for olive oil, glucose and olive oil/glucose, respectively. The influence of drop diameter and alginate concentration was studied, obtaining the best 2 mm diameter and 2% alginate concentration, with enzymatic activity of 13.42 U/g and 28.0 U/g , respectively. Sodium alginate was used in its conventional form and modified with glutaraldehyde, polyvinyl alcohol and carboxymethylcellulose, and the alginate in the conventional form gave the best results, obtaining 28.6 U/g and more than 50% activity after 15 cycles of reuse. The free and encapsulated lipase characterization of C. viswanathii revealed an optimal activity temperature of 35 °C for the encapsulated enzyme and in the 40-45 °C range for free lipase on the hydrolysis of p-NPP. On the hydrolysis of poultry fat, both free and encapsulated enzyme presented optimum temperature of activity at 40 ºC. As for thermal stability, the free enzyme presented good stability up to 12 h of incubation at temperatures of 30 and 40 ºC. The encapsulated enzyme was stable in up to 72 hours of incubation at the same temperatures. The free enzyme showed increased activity in the presence of NH4Cl and CaCl2 (117.50% and 111.25%, respectively). In addition, the encapsulated lipase presented increased activity with all the ions analyzed, being CaCl2 (152.94%), NH4Cl (145.88%), BaCl2 (144.12%) and NaCl (138.24%). In relation to the hydrolysis, it was observed that both the free and encapsulated enzyme presented higher hydrolytic activity after 96 hours of incubation, in which the encapsulated enzyme obtained 34.66% hydrolysis and the free enzyme obtained 17.91% hydrolysis. Thus, yeast Candida viswanathii proved to be efficient both for lipid accumulation and for lipase production under the established conditions. In addition, the encapsulated enzyme presented good stability and potential for application in poultry fat hydrolysis.