目錄…………………………………………………………………………I 圖目錄……………………………………………………………………IV 表目錄……………………………………………………………………VI 縮寫表……………………………………………………………………VII 謝誌………………………………………………………………………IX 中文摘要…………………………………………………………………XI 英文摘要…………………………………………………………………XIII 第壹章、前言………………………………………………………………1 第貳章、文獻探討…………………………………………………………3 第2-1節 紫外線…………………………………………………….…..4 2-1-1. 紫外線……………………………………………………….4 2-1-2. 紫外線的分類……………………………………………….5 2-1-3. 紫外線對人體健康的益處………………………………….6 2-1-4. 紫外線對人體的傷害……………………………………….7 第2-2節 自由基…………………………………………………………8 2-2-1. 自由基的介紹……………………………………………….8 2-2-2. 自由基的來源……………………………………………….8 2-2-3. 紫外線與自由基…………………………………………….9 2-2-4. 自由基種類………………………………………………….9 第2-3節 抗氧化酵素訊息的傳遞路徑………………………………..12 2-3-1. Nf2…………………………………………………………..12 2-3-2. Keap1………………………………………………………..12 2-3-3. ARE………………………………………………………….13 2-3-4. Nrf2的活化機制…………………………………………….14 第2-4節 細胞抗氧化的防禦系統……………………………………17 2-4-1. 酵素型抗氧化防禦系統…………………………………..18 2-4-2. 非酵素型抗氧化防禦系統………………………………...24 第參章、研究動機與實驗設計架構圖……………………………………...25 第3-1節 硏究動機……………………………………………………..26 第3-2節 實驗設計架構………………………………………………..27 第肆章、實驗材料與方法……………………… …………………………28 第4-1節 實驗材料……………………………………………………...29 第4-2節 實驗儀器……………………………………………………...32 第4-3節 實驗方法……………………………………………………...33 4-3-1. 細胞培養…………………………………………………...33 4-3-2. 存活率試驗………………………………………………...36 4-3-3. ROS產量測定………………………………………………38 4-3-4. 細胞毒性的測定…………………………………………...40 4-3-5. Comet assay彗星試驗………………………………………41 4-3-6. 細胞GSH含量測定………………………………………..44 4-3-7. 細胞凋亡試驗……………………………………………...46 4-3-8. 細胞總蛋白質萃取………………………………………...48 4-3-9. 細胞核與細胞質之蛋白質萃取…………………………...49 4-3-10. 蛋白質定量……………………………………………….51 4-3-11. 西方墨點分析…………………………………………….52 4-3-12. 免疫螢光染色…………………………………………….56 4-3-13. 轉染作用………………………………………………….58 4-3-14. 冷光酵素報導基因分析………………………………….60 4-3-15. RNA干擾…………………………………………………62 4-3-16. 統計分析………………………………………………….64 第伍章、實驗結果與圖表…………………………………………………65 第5-1節 ERG對HaCaT細胞的抗光氧化能力………………………66 5-1-1. ERG以及UVA對HaCaT細胞的細胞毒性影響…………66 5-1-2. ERG對UVA誘導活性氧物種含量之影響………………..66 5-1-3. ERG對UVA誘導的細胞膜損傷之影響…………………..67 5-1-4. ERG對UVA誘導的DNA損傷之影響……………………67 5-1-5. ERG對UVA所誘導之氧化傷害的影響…………………..68 5-1-6. ERG對UVA引發之細胞凋亡的影響……………………..68 第5-2節 ERG誘導之抗氧化系統的機制探討………………………..79 5-2-1. ERG對抗氧化酵素的影響…………………………………79 5-2-2. ERG活化Nrf2路徑探討……………………………………80 5-2-3. ERG影響Nrf2入核的表現………………………………..80 5-2-4. ERG對抗氧化酵素轉錄的影響……………………………81 5-2-5. 以siNrf2探討ERG的保護機制和Nrf2之間的關係……81 第陸章、討論………………………………………………………………95 第6-1節 ERG對於UVA刺激HaCaT細胞造成的細胞損傷之影響..97 第6-2節 ERG對抗氧化基因的表現之影響………………………….97 第6-3節 ERG與UVA影響Nrf2-Keap1 pathway……………………98 第6-4節 Nrf2對ERG所抑制UVA造成之光氧化傷害的影響……..98 第柒章、結論……………… …………………………………………..100 參考文獻 ………………….……………………………………………..102

Living elasmobranchs occupy every major aquatic ecosystem throughout the world (Compagno 2003; Compagno et al. 2005). Sensory ecology can be a good determinant in comprehending the processes occurring between an organism and its natural environment (Weissburg and Browman 2005). By utilizing ecophysiological tools, insight into the adaptive responses of the sensory systems to their ever-changing ecological niche can help explain behavioral and life history characteristics (Hueter 1991; Litherland 2009). Aquatic animals show structural and physiological adaptations in their visual sense specific to the ecological requirements of their habitat (Hart et al. 2004), implying that vision is an important modality. The visual system of the smooth dogfish (Mustelus canis, family Triakidae) was examined using corneal electrophysiological methods to determine the visual spectral range, irradiance sensitivity, and speed of vision (flicker fusion frequency, FFF). The smooth dogfish, a shallow water bottom feeder inhabiting inshore waters along the eastern United States, was found to be extremely sensitive to dim light (-3.1- 0.1 log light intensity), and have a slow FFF (13 Hz), thus being well adapted to the scotopic conditions of the turbid coastal inshore waters. This prompted a second set of experiments focusing on the chromatic adaptations of the photoreceptor cells and retina function following light adaptation. Light adaptation increased the photopic threshold by 2.0 log light units of intensity (LLI). However, the temporal resolution was not dramatically increased (to 17 Hz), indicating that the retinal integration time is very slow for this species under all circumstances. The spectral sensitivity peak for M. canis (470 nm) was found to be significantly blue-shifted in comparison to other members of the Triakidae family (Crescitelli et al. 1995; Sillman et al. 1996). Smooth dogfish appear to forgo high spatial and temporal resolution for the enhancement of photon capture. The sandbar shark inhabits the same inshore estuaries during the summer months but has a visual system with a higher temporal resolution (FFF, 54 Hz) and a brighter photopic threshold (1.2 LLI-50% max) (Litherland 2009). Furthermore, other elasmobranch or telelost species inhabiting similar photic environments also exhibit faster temporal resolution; little skate (FFF, 30 Hz), weakfish (FFF, 40 Hz), red drum (FFF, 50 Hz), spotted sea trout (FFF, 60 Hz), and Atlantic croaker (FFF, 58 Hz) (Horodysky et al. 2008; McComb et al. 2010). Coastal seas tend to contain more dissolved organics and particulates than the clear oceanic waters of the epipelagic and pelagic zones (McFarland 1986), therefore the retina of smooth dogfish has adapted to be extremely sensitive to dim light, has a long integration time, a low flicker fusion frequency and temporal resolution, and retinal cells that are able to adjust to changing light conditions. All of these factors contribute to the visual system to provide optimal visual ability to enable smooth dogfish to accurately exploit its surroundings.

Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

L'objectif de cette thèse étudie puis d'implémenter une méthode de reconstruction sur la tomographie aux rayons X qui permette de scanner des gros échantillons avec une bonne résolution qui permettrait de scanner l'intérieur d'un cylindre(tomographie locale) et caractériser des matériaux réels. Notre méthode peut être réalisé pour améliorer la quantitative et la qualitative d'image de fantôme. Dans cette thèse, cet méthode est utilisé sue les matériaux cellulaires. Nous avons réalisé des essais in situ en tomographie aux rayons X sur le mousse ERG et les sphères creuses. Un comparaison entre les résultats d'Élément Finis et des essais réels montre le mécanisme d'endommagement de ces matériaux.

The aim of this thesis was to assess the presence of fusion gene TMPRSS2:ERG and expressions of PCA3, miR23b, miR26 and miR221 in PCa. PSA was measured in peripheral blood and tumor tissue (FFPE samples). The presence of fusion gene TMPRSS2:ERG and expression of PCA3 gene and miRNA in FFPE tumor tissue was analysed by RT real-time PCR. This determination would help to identify patients with high-risk tumors.

Il est connu que le cannabis, par son action sur le système endocannabinoïde, affecte de multiples paramètres de la vision. Les fonctions de GPR55, un récepteur associé au système endocannabinoïde, ont moins été étudiées que celles des récepteurs cannabinoïdes les plus importants, CB1 et CB2. Nous savons cependant que GPR55 est présent dans la rétine de la souris et qu’il module la croissance et le guidage axonal des cellules ganglionnaires rétiniennes durant le développement. Le but de cette étude est d’étudier les effets de GPR55 sur la vision en utilisant un modèle de souris avec une délétion du gène Gpr55. Des électrorétinographies (ERG) plein champ scotopique et photopique ont été effectuées dans le but d’étudier le rôle du récepteur sur les fonctions rétiniennes. Nous avons trouvé que les souris Gpr55-/- ont, en ERG scotopique, une amplitude réduite de l’onde-b et des potentiels oscillatoires qui ont aussi une latence plus longue. Chez ces animaux, l’onde-a photopique a aussi une amplitude plus basse. Par la suite, pour vérifier les conséquences des déficits de fonction rétinienne sur les fonctions visuelles, le modèle de réflexe optomoteur a été utilisé sur des souris knock-out ou avec des injections systémiques d’un antagoniste et d’un agoniste de GPR55. L’absence de GPR55 retarde le développement de l’acuité visuelle, mais la délétion de Gpr55 ou l’action pharmacologique sur le récepteur ne change pas l’acuité visuelle chez les adultes. La délétion de Gpr55 et l’administration d’un antagoniste du récepteur diminuent la sensibilité au contraste. Ces observations suggèrent que GPR55 peut modifier l'activité des cônes, des cellules bipolaires et des cellules de la rétine interne avec des conséquences comportementales. / The observations on how cannabis affects multiple properties of vision have fostered the interest in the study of the functions of cannabinoid receptors CB1 and CB2 in the visual system. However, other non-classical cannabinoid receptors are thought to be involved in mediating the actions of cannabinoid ligands in the eye. One of these candidate receptors is GPR55, a receptor that modulates the growth and axonal guidance of retinal ganglion cells during development in mice. The purpose of this study was to investigate the effects of the deletion of the Gpr55 gene and the pharmacological modulation of GPR55 on retinal function and visual behavior. Full-field scotopic and photopic electroretinography (ERG) were used to functionally assess the state of the retina. Recordings obtained from Gpr55-/- mice revealed a diminution of the scotopic b-wave and the photopic a-wave responses. These animals also had reduced and delayed oscillatory potentials. The optomotor reflex method was used to evaluate the consequences of Gpr55 deletion on visual acuity and contrast sensitivity. The absence of GPR55 delayed the developmental trajectory of visual acuity in Gpr55 knockout mice without affecting the maximum visual acuity reached in adulthood. Pharmacological manipulation of GPR55 in adult wild-type mice did not alter visual acuity. Both the deletion of Gpr55 and the administration of a receptor antagonist decreased contrast sensitivity while an agonist of GPR55 increased contrast sensitivity. These observations suggest that GPR55 can modify the activity of cones, bipolar cells, and cells in the inner retina with behavioral consequences.

Le système endocannaboïde (eCB) est constitué des ligands, des récepteurs – les plus étudiés étant les récepteurs CB1 et CB2 – et les enzymes de synthèse et de dégradation. Les ligands étant lipophiles, ils ne sont pas encapsulés dans des vésicules, ce qui place les enzymes de synthèse et de dégradation dans une position de régulateurs clés. Plusieurs études démontrent une participation du système eCB à des processus de développement dans le système nerveux central (SNC). La rétine est un modèle important pour l’étude de ces processus car elle contient plusieurs types cellulaires bien connus, dont le patron de développement est clairement établi. Pour l’instant très peu est connu sur l’expression du système eCB durant le développement rétinien. C’est dans ce cadre que les patrons d’expression du récepteur CB1 et de l’enzyme de dégradation FAAH ont été étudiés pendant le développement rétinien postnatal chez le rat. Pour identifier les types cellulaires exprimant ces protéines, des co-marquages ont été accomplis pour le récepteur CB1 ou FAAH et des marqueurs des types cellulaires rétiniens. À P1, les cellules ganglionnaires, amacrines, horizontales et mitotiques expriment le récepteur CB1. Les cellules ganglionnaires et amacrines cholinergiques sont FAAH-positives. Au cours du développement, certains types cellulaires démontrent une expression transitoire de ces deux protéines, suggérant une implication du système eCB dans les processus de développement. Nos données démontrent également une importante expression du système eCB dans la rétine adulte, ce qui soutient l’hypothèse de son implication dans la réponse rétinienne. En bref, des études fonctionnelles in vitro sur des rétines de non-mammifères ont révélées que le récepteur CB1 modulait la réponse des cônes et des cellules bipolaires. Malgré la récente démonstration de sa présence dans la rétine, il n’existe pas de d’étude sur le rôle du récepteur CB2 dans la rétine. Dans cette thèse, les conséquences fonctionnelles de l’élimination des récepteurs CB1 ou CB2 ont été évaluées chez des souris transgéniques. Les réponses rétiniennes ont été enregistrées par électrorétinographie chez des souris cnr1-/- (CB1R-KO) et cnr2-/- (CB2R-KO). Nos données suggèrent une implication différente pour chaque récepteur dans la formation de la réponse rétinienne / The endocannabinoid (eCBs) system is composed of the ligands, the receptors - the most studied are CB1R and CB2R – and the synthesizing and degradative enzymes. The lipophilic ligands are not stored in vesicles, thereby placing the synthesizing and degradative enzymes as key regulators of the receptor function. The eCB system is thought to participate to developmental processes in the central nervous system (CNS). The rodent retina is a valuable model to study CNS development, as it contains well identified cell types with established developmental timelines. Very little is known about the distribution of this neuromodulationsystem in the developing retina. In this thesis, the expression patterns of CB1R and eCB degradative enzyme FAAH were investigated in the rat retina during postnatal development. To identify the cells expressing these proteins, co-stainings were carried out for CB1R or FAAH and retinal cell type markers. At P1, CB1R was expressed in ganglion, amacrine, horizontal and mitotic cells, whereas FAAH was present in ganglion and cholinergic amacrine cells. In the course of development, both CB1R and FAAH were transiently expressed in some cell type, suggesting a role of the eCB system in developmental processes. Furthermore, our data demonstrated an important expression of both proteins in adult animals, supporting the hypothesis that the eCB system is involved in retinal functions. Briefly, functional in vitro studies on non-mammalian retinae have revealed an effect of CB1R on cone photoreceptors and bipolar cells response. Despite the recent demonstration of CB2R mRNA and protein presence in the retina, there are no data on CB2R functional role in retina have been published. In this thesis, the consequences of removing either CB1R or CB2R from the retina of transgenic mice were evaluated. Retinal response was recorded by electroretinogram in cnr1-/- (CB1R-KO) and cnr2-/- (CB2R-KO) mice. This data suggests that both receptors are involved in shaping the retinal response to light and they have different roles in this process.

汽車產業早期在台灣一直都屬於重點產業，早從1950年代以前，台灣政府便開始發展汽車產業(陳釧瑤，1997)，然而若按照原定計畫，台灣汽車產業早該在1985年以後就邁入國際化以及自有品牌，不過現今大多數的台灣汽車廠商仍處於通路代理商和零組件代工製造階段，為了避免淘汰，本研究認為台灣汽車廠商應著手發展自有品牌，不過因為台灣廠商大多欠缺品牌知名度，謂此本研究認為台灣廠商可採行品牌聯盟策略。然而考量到市場未來趨勢與消費者需求的多元化，本次研究將以強調運動、休閒的SUV休旅車作為本次研究主要探討的車種，並希望能藉由品牌聯盟讓台灣汽車廠商得以自創品牌。 本次研究貢獻在學術方面有三，其一是產品屬性與產品屬性水準之詮釋、二是研究品牌聯盟議題時，需建立在品牌是否能替代某產品屬性的議題上，三是消費者在從事消費行為時確實會產生退縮或是漸進策略。在管理實務上，本研究所給予的建議有七，其一是品牌知名度高低將會影響消費者做出正確決定，其二是當消費者無法有效處理資訊時，車商品牌的重要性將會提升，其三是低辨識度品牌有動機發展成份品牌，其四是台灣汽車廠商自創品牌確實有其利基市場存在，其五是品牌自創過程中，必須不斷地做自我評估，其六是傳遞正確且為消費者所能承受並理解的正確資訊是價值創造的重要一環，其七是品牌建立本身即是策略規劃。 / Motor industry is one of the most important industry that Taiwan government energetically have developed and invested lots of resources since 1950(陳釧瑤，1997). Indeed, Taiwanese motor firms should have had their own brand and made it internationalized in 1985. However, most of Taiwanese motor firms are still on the stage of OEM or ODM. We regard this condition as a threat that will obstruct the profit growth and weaken the competitiveness of them. Therefore, we consider branding is one of the effective alternatives to strengthen the competitiveness of Taiwanese motor industry. Because of the low brand awareness of Taiwanese motor firms, brand alliance may be the best way that can help them to build their private label. Considering the trend of lifestyle in Taiwan, this literature will focus on “brand alliance of sport utility vehicle” and try to find some important attributes that will support them to select their partners and satisfy the consumer needs. As a result, this studying has three contributions to academic researcher. First, we redefine the meanings of product attribute and product attribute level that many academics confuse. Second, the consistency between the brand awareness of ingredient firms and product attribute should be considered when motor firms are finding the partners of alliance. Third, we verify either behavioral progression or behavioral depression may happen in purchase process (Alderfer, 1972). In practice, we find the fitness between product attributes and partner’s brand awareness will affect the result of brand alliance. The finding implies that ingredient firms which have great brand equity in B2B market may have low equity in B2C market. Second, the weight of car brand will be more important when asymmetric information exists. Third, the ingredient firms which have great equity in B2B market and low awareness in B2C market have the motive to cooperate with private label brand firms. Fourth, there are some niches in Taiwanese SUV market. Fifth, branding can’t success without self-audit. Sixth, delivering the appropriate and correct information to consumers is one of the most important things of value creation. Seventh, strategy is the nature of branding, so it will be very hard to brand without strategic planning.

Las enfermedades neurodegenerativas cursan con la degeneración y muerte de las neuronas las cuales son incapaces de suplir su propia muerte. Debido a esta característica enfermedades como el Alzheimer, el Parkinson o el Glaucoma no tienen cura en la actualidad. La retina es una proyección del sistema nervioso central (SNC) encapsulada en el globo ocular y aislada del resto del SNC, lo que la hace fácilmente accesible a la manipulación experimental. En este trabajo estudiamos las alteraciones funcionales de la retina con el electrorretinograma de campo completo (ERG), técnica basada en el registro de la respuesta eléctrica retiniana tras la presentación de un estímulo de luz homogéneo. Así hemos estudiado los efectos de la sección del nervio, del aumento de presión intraocular y de la fototoxicidad, dichas lesiones afectan selectivamente a determinadas poblaciones neuronales retinianas e imitan enfermedades neurodegenerativas como el Glaucoma o la Degeneración Macular Asociada a la Edad. / Neurodegenerative diseases are characterized by degeneration and death of neurons which are unable to recover after a given insult, thus impairing functional recuperation. Because of this, there is no cure for diseases such as Alzheimer, Parkinson or Glaucoma. The retina is a projection of the central nervous system (CNS) located in the eye and therefore, isolated from the rest of the CNS. This makes the retina a very good model for experimental manipulation. In this work we have studied the functional changes in the retina by full field electroretinograme (ERG). This technique records the electric response of the retina after presentation of homogeneous light stimuli. We have studied the effects that optic nerve sections, increase of the intraocular pressure and phototoxicity have on ERG recordings. These lesions impair selectively certain retinal neuronal populations and imitate neurodegenerative diseases as Glaucoma or Age-related Macular Degeneration.

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