Orientador : Nelson Duran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-16T21:16:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Makita_Yoshiko_M.pdf: 3845679 bytes, checksum: e5c5e0f8c3edade138a63bbd6754a1c8 (MD5) Previous issue date: 1980 / Mestrado

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T18:32:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RicardodeSouzaRibeiro.pdf: 1191496 bytes, checksum: cdb1da9294c409d1a1f2a403b87cf9c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T18:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RicardodeSouzaRibeiro.pdf: 1191496 bytes, checksum: cdb1da9294c409d1a1f2a403b87cf9c9 (MD5) Previous issue date: 2013 / A malária é uma doença que provoca um enorme impacto em todo mundo e muitos esforços tem sido feitos na tentativa de eliminar esta doença há séculos. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra esta doença se tornou prioridade para muitos grupos de pesquisa, entretanto apenas um antígeno apresentou resultados promissores em ensaios clínicos de fase III. O processo de identificação de candidatos promissores para comporem uma vacina é muito laborioso e demanda um tempo muito grande, principalmente devido à biologia complexa destes parasitos intracelulares. Identificar proteínas nesses tipos de patógenos intracelulares é um grande desafio e requer a análise de diferentes fatores ao mesmo tempo. Um bom candidato a antígeno deve possuir características que façam com que a proteína ou pelo menos parte dela, entre em contato com o sistema imune do hospedeiro em algum momento do ciclo de vida do parasito e que este contato seja capaz de gerar uma resposta imune capaz de neutralizar o parasito e acabar com a infecção. As proteínas secretadas/exportadas se encaixam perfeitamente nessas características e foi justamente com o objetivo de identificá-las que foi desenvolvida uma estratégia automática integrando diferentes programas para buscar estas proteínas. Dessa forma, o proteoma predito de 5 espécies diferentes do gênero Plasmodium foi submetidas à análise de três programas que procuram por características importantes para proteínas exportadas/secretadas nesse gênero. O peptídeo sinal foi investigado utilizando o SignalP, um script em Perl foi desenvolvido para buscar um motivo que é crucial para a exportação de algumas proteínas (PEXEL) e os domínios transmembrana foram buscados utilizando o TMHMM. Algumas proteínas selecionadas foram submetidas à predição de epitopos de células B. Com esta abordagem foi possível identificar algumas famílias de proteínas que já são conhecidas como proteínas exportadas, como Rifin e Stevor, o que mostra que esta abordagem pode ser uma ferramenta útil na identificação de novos prováveis alvos para o desenvolvimento de uma vacina eficaz. Utilizando esta metodologia, esperamos contribuir para aumentar o número de proteínas em testes para formulação de um antígeno que seja capaz de ajudar no controle e erradicação desta doença que causa tantos prejuízos para a humanidade. / Malaria is a disease that causes a huge impact around the world and many efforts have been made in an attempt to eliminate this disease for centuries. The development of an effective vaccine against this disease has become a priority for many research groups, however only one antigen showed promising results in phase III clinical trials. The process of identifying promising candidates to compose a vaccine is very laborious and requires a very long time, mainly due to the complex biology of these intracellular parasites. Identify proteins in these types ofintracellular pathogens is a major challenge and requires the analysis of different factors simultaneously. A good candidate antigen must possess characteristics that make the protein or at least part of it, contact the host immune system at some point in the life cycle of the parasite and that this contact is able to generate an immune response capable to neutralize the parasite and stop the infection. The proteins secreted / exported fit perfectly and it was precisely these characteristics in order to identify them we developed a strategy that automatically integrating different programs to find these proteins. Thus, the predicted proteome of 5 different species of the genus Plasmodium was subjected to analysis of three programs looking for important features for proteins exported/secreted in this genre. The signal peptide was investigated using SignalP, a Perl script was developed to find a subject that is crucial for the export of some proteins (PEXEL) and transmembrane domains using TMHMM were searched. Some selected proteins were subjected to prediction of B cell epitopes With this approach it was possible to identify some protein families that are already known as proteinsexported as Rifin and Stevor, showing that this approach can be a useful tool in identifying new likely targets for the development of an effective vaccine. Using this methodology, we hope to contribute to increasing the number of proteins in tests for formulation of an antigen that is able to help control and eradicate the disease that causes so much harm to humanity.

Orientadora : Maria Suely Soares Leonart / Co-orientadores : Aguinaldo José do Nascimento e Tomoe Nakashima / Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde / Resumo: O eritrócito humano maduro, quando submetido à sobrecarga oxidativa por condições patológicas do eritrócito ou por agentes oxidantes pode apresentar depleção de glutationa reduzida (GSH), um dos responsáveis pelo sistema de defesa antioxidante do eritrócito; oxidação da molécula de hemoglobina; e agregação de complexos de ferro junto à membrana. Tais conseqüências podem ocasionar anormalidades na membrana eritrocitária e hemólise. Este trabalho tem por objetivo, estudar a ação antioxidante dos flavonóides quercetina e rutina, e de extrato hidroalcoólico de Vitis virtifera (EHV), em eritrócitos humanos normais, submetidos à sobrecarga oxidativa, in vitro, induzida por agentes oxidantes como terc-butilhidroperóxido (TBH) ou cloridrato de fenil-hidrazina (CF). Coletou-se sangue venoso de 12 indivíduos com idades entre 18 e 40 anos e considerados saudáveis, em EDTAK3. Lavou-se os eritrócitos em tampão fosfato 28 mM, NaCl 123 mM, pH 7,4 três vezes por centrifugação a 1220 x g, ressuspendendo-os até volume globular de cerca de 40 %. Submeteu-se os eritrócitos, pré incubados ou não com quercetina 100 (xM, à ação oxidante de CF 0,5 mM durante 15 minutos e; pré-incubados ou não com quercetina, rutina ou extrato hidroalcoólico de Vitis virtifera, à ação oxidante de TBH (0,5 - 5 mM), durante 0 a 30 minutos. Realizou-se a determinação da concentração de GSH [BEUTLER, Red cell metabolism, 1984], da formação de metahemoglobina (MetHb) [EVELYN; MALLOY, JJBioLChem., 126: 655, 1938], modificado por BEUTLER (1995) e realizou-se a contagem de corpos de Heinz (CH) segundo técnica preconizada por BEUTLER et ai [J.Lab.&Clin.Méd., 45: 40, 1955], modificado por CLARO (2002). Observou-se uma diminuição da concentração de GSH (4,0-0,1 nmoles/ g Hb) proporcional ao aumento da concentração de TBH (0,5 - 1,0 mM). A formação de MetHb aumentou (8 - 35 %) assim como a de CH (2 -16 %), em função da concentração de TBH (0,5 - 5 mM). A incubação com quercetina 100 pM (10 - 30 minutos) preveniu parcialmente a formação de GSH (0,25 -1,3 junoles/g Hb) induzida por TBH 1 mM. Quercetina (2 - 20 JIM) preveniu parcialmente a formação de CH (7,5 - 6,7 %) induzida por TBH 3 mM. Em amostras oxidadas por CF 0,5 mM, a quercetina 10 - 120 pM preveniu parcialmente a formação de MetHb (4 - 3,6 %). A rutina 100 (xM preveniu parcialmente a depleção de GSH (0,4 pmoles/g Hb) por TBH (0 pmoles/g Hb). A rutina (40 - 140 jiM) preveniu parcialmente a formação de CH (7,6 - 4,9 %) induzida por TBH 3 mM (9,0 %). O EHV (0,1 mg/ml) preveniu parcialmente a depleção de GSH (4,4 ±0,1 jimoles/g Hb) induzida por TBH 0,5 mM enquanto que EHV (0,5 - 1,0 mg/ml) preveniu quase que na totalidade a depleção de GSH (7,4 ± 0,4 e 7,3 ±0,1 (imoles/ g Hb, respectivamente) induzida por TBH 0,5 mM. O EHV (1,0 - 5,0 mg/ml) preveniu parcialmente a formação de CH (6,4 - 4,0 %) induzida por TBH 3 mM. A associação entre quercetina 100 pM e mesilato de desferrioxamina 4 mM, inibiu parcialmente a formação de MetHb (30 ± 1,2 %) induzida por TBH 5 mM. Os resultados sugerem que, nas concentrações testadas, a quercetina é parcialmente eficaz contra a sobrecarga oxidativa promovida por CF. O estresse oxidativo promovido por TBH foi parcialmente prevenido na presença de quercetina, rutina ou EHV. / Abstract: The mature human erythocytes, submitted to oxidative stress under pathological conditions or by oxidizer agents can present: depletion of reduced glutatione (GSH), responsible for the antioxidant defense system of the erythocytes, oxidation of the hemoglobin molecule, or aggregation of complexes of iron close to the membrane. These can cause abnormalities in the membrane and hemolysis. The aim of this work was to study the antioxidative action of the flavonoids quercetin and rutin, and of hydroalchoolic extract of Vitis vinifera (HEV), in human erythocytes submitted to the oxidative stress, induced by oxidizer agents fert-butylhydroperoxide (TBH) or phenylhydrazine hydrochloride (PH), in vitro. Venous blood was collected in EDTAK3 from 12 healthy individuals with ages between 18 and 40 years. The erythocytes was washed three times under centrifugation at 1220 x g, in 28 mM phosphate buffer, pH 7.4, and 123 mM NaCL, and ressuspended at a final globular volume of 40%. The erythocytes was then preincubated with 100 jiM quercetine and then submitted to the oxidizer action of 0.5 mM PH for 15 min and, preincubated with quercetin, rutin and hydroalchoolic extract of Vitis vinifera, to the oxidizer action of TBH (0.5 - 5 mM), for up to 30 min. The concentration of GSH was determinate [BEUTLER, Red cell metabolism, 1984], the methemoglobin (MetHb) was monitored [EVELYN; MALLOY, J.BioI.Chem., 126: 655, 1938], modified by BEUTLER et at. (1995) and tiie Heinz bodies (HB) was evaluated acording to BEUTLER et al. [J.Lab.&CIin.Med,, 45: 40, 1955], modified by CLARO (2002). A concentration decrease of GSH was observed (4.0 - 0.1 jimoles /g Hb) as a function of the increase of the concentration of TBH (0.5 - 1.0 mM). The formation of MetHb (8 - 35 %) and HB (2 -16 %), increased as a function of the TBH concentration (0.5 - 5 mM). The incubation with 100 (iM quercetin (10 - 30 min) partially prevented the GSH formation (0.25 - 1.3 jimoles/g Hb) induced by 1 mM TBH. Quercetin (2 - 20 pM) partially prevented HB formation (7.5 - 6.7 %) induced by 3 mM TBH. Erythrocyte samples oxidized by 0.5 mM PH and treated with 10 - 120 jiM quercetin had the formation of MetHb (4 - 3.6%) partially prevented. The 100 pM rutin partially prevented the depletion of GSH (0.4 junoles/g Hb) in the absence of TBH. The rutin (40 - 140 pM) partially prevented the formation of HB (7.6 - 4.9 %) induced by 3 mM TBH (9.0 %). HEV (0.1 mg/ml) partially prevented the depletion of GSH (4.4 ± 0.1 jimoles/g Hb) induced by 0.5 mM TBH while HEV (0.5 - 1.0 mg/ml) almost prevented the totally depletion of GSH (7.4 ± 0.4 and 7.3 ± 0 . 1 junoles/g Hb, respectively) induced by 0.5 mM TBH. HEV (1.0 - 5.0 mg/ml) partially prevented the formation of HB (6.4 - 4.0 %) induced by 3 mM TBH. The association of 100 JIM quercetin and 4 mM deferrioxamine mesilate, partially inhibited the formation of MetHb (30 ± 1.2 %) induced by 5 mM TBH. The results suggest that quercetin, at the used concentrations was partially effective against the oxidative stress promoted by PH. The erythrocyte oxidative stress promoted by TBH was partially prevented in the presence of quercetin, rutin and HEV.

Orientador : Helena Zerlotti Wolf Grotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:05:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Noronha_JoseFernandodeAlmeida_M.pdf: 21963250 bytes, checksum: a96068d0dd466ef3dd89fe108f2b493f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Introdução: A contagem de reticulócitos e a determinação de sua fração de imaturidade têm mostrado ser satisfatórios na avaliação da eritropoiese após o transplante de medula óssea (TMO). O propósito deste estudo foi avaliar os parâmetros reticulocitários através da contagem de reticulócitos pela citometria de fluxo, em um grupo de pacientes que foram submetidos à TMO autólogo e alogênico. Foram estudados, o modelo de resposta do reticulócito e o valor preditivo da contagem absoluta de neutrófilos (ANC), contagem de plaquetas, número de células CD34+ infundidas e a fonte de enxerto em relação à resposta do reticulócito. Material e Métodos: Foram comparadas a contagem absoluta do reticulócito (RetAbs), o índice médio de fluorescência (MFI) e a razão entre o volume corpuscular médio do reticulócitol volume corpuscular médio do eritrócito maduro (VCMrNCM) com os critérios convencionais (ANC e contagem de plaquetas) em 22 pacientes submetidos à TMO alogênico e 20 pacientes submetidos à TMO autólogo. Resultados: Um aumento abrupto da razão VCMrNCM ou uma elevação no valor do MFI foram os primeiros sinais da recuperação eritropoiética no transplante alogênico (63,8% e 22,8% dos casos, respectivamente). Em 13,6% dos casos, ambos parâmetros reticulocitários apareceram simultaneamente. Dos 20 pacientes submetidos à transplante autólogo, dezessete mostraram a recuperação da eritropoiese, representada pelos parâmetros reticulocitários, mais precoce do que quando indicada pela elevação da ANC. A recuperação de granulócitos e o enxerto de células progenitoras periféricas (CPP) foram variáveis preditivas para resposta de RetAbs no transplante alogênico. No grupo de autólogos, o alto número de células CD34+infundidas, e a recuperação de plaquetas foram variáveis preditivas da resposta de RetAbs. Conclusão: Uma elevação na população de reticulócitos imaturos é o primeiro sinal da recuperação hematopoiética pós -TMO e pode ser útil como um preditor adicional do enxerto medular / Abstract: Introduction: Reticulocyte counts and immature reticulocyte fraction have shown to be adequate in the evaluation of erythropoiesis after bone marrow transplantation (BMT). The purpose of this study was to evaluate reticulocyte parameters by means of flow cytometric reticulocyte counting in a group of patients who had undergone autologous and allogeneic BMT. Pattem of reticulocyte response and predictive value of absolute neutrophil count (ANC), platelet count, number of CD34+cell infused and graft source for reticulocyte response have been studied. Material and Methods: We compared absolute reticulocyte count (RetAbs), Mean fluorescence index (MFI) and Mean reticulocyte volume/ Mean corpuscular volume ratio (MRV/MCV) with conventional criteria (ANC and platelet count) in 22 allogeneic and 20 autologous BMT patients. Results: An abrupt increase of MRV/MCV ratio or a rise in:MFI value were the earliest sign of erythropoietic recovery in allogeneic transplantation (63.6% and 22.8% of cases, respectively). In 13.6% of cases both parameters presented simultaneously. AlI, but 3 autologous transplants showed reticulocyte parameters earlier than ANC recovery. Granulocyte recovery and peripheral blood progenitor cells (PBPC) graft were predictive variables for RetAbs response in allogenic transplantoIn autologous group high number of CD 34+ infused cells and platelet recovery were predictive variables for RetAbs response. Conclusion: A rise in the immature reticulocyte population is the earliest sign of haematopoietic recovery post BMT and may be useful as an additional predictor of engraftment / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Nelson Massini, Eduardo Daruge Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-01T00:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caldas_JoseCarlosdeFreitasGarcia_M.pdf: 2132075 bytes, checksum: 0b2e6ed5583096bd70f989d9f1a7d5e4 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo selecionar um método para identificação de animais, fornecendo subsídios indispensáveis para a caracterização ou descaracterização de crime, tanto na matança de animais silvestres como torturas de animais domésticos, ambos protegidos por lei, bem como verificar a cristalização da hemoglobina, mais precisamente da oxihemoglobina, em sangue "in natura", com anticoagulante e coagulado de capivaras. Esta é a mais delicada prova das diferenças de constituição química da hemoglobina, pois se acompanha da diferença de estrutura física. Aliado a isto, esta técnica possui baixo custo de implantação, rapidez na obtenção dos resultados, por ser de fácil preparação e manejo. No presente trabalho foram utilizadas preparações modificadas de COSTA (1933). Após a compilação e análise dos dados verificou-se que a quantidade, o tamanho, a cor, o local e o contorno do cristal não estão associados ao sexo do animal e que a quantidade de cristal depende da técnica empregada, sendo a técnica 2 (sangue fresco oxalatado é centrifugado, o sedimento é laqueado pela saponina; junta-se sulfato de sódio, agita-se energicamente e em seguida centrifuga-se durante 10 minutos na velocidade 4 ) a que produz mais cristais. Observou-se também que das técnicas empregadas, nenhuma influenciou o contorno do cristal obtido. Das técnicas utilizadas constatou-se que a técnica de n° 02 é a que produz cristais maiores, com coloração mais intensa (rosa intenso) e com distribuição regular na lâmina. Também .observou-se que a quantidade, o tamanho e a localização do cristal não estão associados à utilização ou não do luto, somente após 48 horas com luto, houve influência na coloração e no contorno dos cristais / Abstract: The present work had as objective to select a method for identification of animaIs, supplying indispensable subsidies the characterization or descaracterização of crime, as much in the slaughter of wild animais as tortures of domestic animaIs, both proteges for law, as wel/ as verifying the crystallization of the hemoglobina, more necessarily of the oxihemoglobina, in blood " in natura ", with anticoagulant and coagulado of capivaras. This verification of the crystallization, aimed at to supply to the professionals, invested in the skillful function, daily pay-establishing the probable limits of this important test-of-certainty, consisting in a great al/y of Justice, it wants Civilian, or Criminal. This is the most delicate test of the differences of chemical constitution of the hemoglobina, therefore it is accompanied by of the difference of physical structure. AI/y to this, this technique possesss low cost of implantation, rapidity in the attainment of the results, for being of easy red tape and handling. In the present work modified red tapes of Coast had been used. After the compilation and analysis of the data were verified that the amount, the size, the color, the place and the contour of the crystal are not assoei ates to the sex of the animal and that the amount of crystal depends on the used technique, being technique 2 (blood cool oxalatado are centrifugado, the sediment are laqueado by the saponina; sodium sulphate is joined, is agitated energicamente and after that centrifuga during 10 minutes in 4 speed) the one that produced more crystals. It was also observed that of the used techniques, none influenced the contour of the gotten crystal. Of the used techniques one evidenced that the technique of n° 02 is the one that obtia bigger crystals, with more intense coloration (pink intense) and with regular distribution in the blade. Also one observed that the amount, the size and the location of the crystal are not assoei ates to the use or of 1 do not fight it, after 48 hours with 1 only fight, had influence in the coloration and the contour of crystals / Mestrado / Mestre em Odontologia Legal e Deontologia

Foram estudadas as proteínas da membrana eritrocitária de quarenta e seis espécies diferentes pertencentes à treze ordens da classe Mammalia, através de eletroforese em gel de poliacrilamida. Observamos que: 1. não parece haver correlação entre as concentrações relativas de espectrinas e o volume corpuscular médio. 2. não parece haver correlação entre as concentrações relativas de banda 3 e o volume corpuscular médio. 3. parece haver uma correlação inversa entre as concentrações relativas das anquirinas e o volume corpuscular médio. Assim, a maior parte dos animais pertencentes à ordem dos Artiodacty/a estudados (girafa, cervo nobre, veado campeiro, veado catingueiro, carneiro, cabra), que apresentam volume corpuscular baixo, exibe aumento significativo da concentração das anquirinas. 4. observou-se, o aparecimento de uma banda difusa na região 4.5 no Didelphis marsupialis (gambá), Arctocephalus tropicalis e Arctocephalus australis (lobo marinho subantártico e lobo marinho das ilhas do sul) e Panthera leo (leão) quando os estromas são submetidos à ação do NEM na concentração de 200 µM, e o não encontro desta banda nas demais espécies estudadas. Este fato poderia advir da hipótese de haver, nas três espécies, sequências de aminoácidos comuns que possibilitariam a ação química direta do NEM. 5. observou-se que, nos mamíferos estudados, embora houvesse variações qualitativas e quantitativas das proteínas da membrana nas espécies estudadas, práticamente todas elas apresentaram as proteínas descritas no Homo sapiens, mostrando serem todas elas importantes na manutenção do citoesqueleto e da membrana como um todo. 6. Com exceção da cutia, que exibe provavelmente quatro formas de espectrinas, todas as demais espécies exibiram duas formas, embora com variações qualitativas e quantitativas. 7. A banda 3 foi a proteína que mais exibiu variação, seja no peso molecular, com variação desde 95 kDa (Capra hircus, cabra) até 169 kDa (Alouatta sp, bugio), seja no aspecto difuso ou bem definido. 8. Houve na região 4.1/4.2 uma variabilidade grande, seja qualitativa, seja quantitativa com aparentes ausências dê\' uma ou de outra. Alguns roedores, a cobaia, cutia, hamster exibiram somente uma banda protéica na região 4.1/4.2. 9. Entre os primatas, todas as proteínas apresentaram o mesmo padrão entre os Hominoidea (macacos antropóides, Gorilla gorilla e Pongo pygmaeus e homem, Homo sapiens) e os do Velho Mundo (Cercopithecoidea, Papio cynocephalus e Erythrocebus pata). Mas, os primatas do Novo Mundo (Ceboidea, Cebus apella, Alouatta sp e AteIes paniscus chamek) apresentaram variação do peso molecular da banda 3, apresentando no entanto o mesmo aspecto difuso dos outros primatas descritos anteriormente. 10. Com exceção do Didelphis marsupialis (gambá) e Giraffa came/opardalis (girafa), que apresentaram evidência da ação de serina-proteases sobre uma anquirina, as demais espécies não exibiram proteases intra-eritrocitárias ativas nas condições estudadas. / Forty six different mammal species from thirteen regarding their erythrocyte membrane proteins, following data were observed: 1. No correlation was observed between mean corpuscular volume and spectrins concentration. 2. No correlation was observed between mean corpuscular volume and band 3 concentration. 3. It seems that there is inverse correlation between mean corpuscular volume and ankyrins concentration. Most of the studied animmals belonging to Artiodactyla, which exhibit low mean corpuscular volume, present higher ankyrin concentration. 4. A diffuse band in 4.5 region was observed among the Didelphis marsupialis, Arctocephalus tropicalis, Arctocephalus australis and Panthera leo when the ghosts were treated with 200 µM NEM, what was not found in the others species. This fact could be ascribed to hypothetical sequence of the Iysine, hystidine and cysteine which may be prone to NEM direct chemical action. 5. Although some qualitative and quantitative changes were observed among ali the studied species, ali of them seem to occur in the humans, disclosing that they are \"house-keeping\" proteins which participate as important pieces in the cytoskeleton structure and the membrane as well. 6. Ali the species presented two spectrins, with exception of Dasyprocta sp., which exhibited fours bands in the spectrins region. 7. The band 3 was the protein which showed the greatest variation, since 95 kDa in the Capra hircus up to 169 kDa in the Alouatta sp., as well as in the aspect, diffuse or well defined. 8. A great variability was observed in the 4.1/4.2 region, with apparent absence of one or another. Some Rodentia exhibited only one protein in the 4.1/4.2 region. 9. Among the Primates, the Hominoidea and the Cercopithecoidea presented an uniform pattern, but the New World monkeys (Cebus apella, Alouatta sp. and Ateies paniscus chamek) exhibited a striking molecular weight band 3 variation, although keeping the common diffuse pattern. 11. Ali the studied species did not present the evidence of protease action upon the membrane proteins, except the Didelphis marsupialis and Giraffa camelopardalis, which disclosed a proteolytic action upon the ankyrin.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T15:01:12Z No. of bitstreams: 1 Tese Paulo Totino 2012.pdf: 4009343 bytes, checksum: 0cf12e4e6c9631d541933a237d4cea87 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T15:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Paulo Totino 2012.pdf: 4009343 bytes, checksum: 0cf12e4e6c9631d541933a237d4cea87 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A anemia grave é sem dúvida uma das complicações mais comuns durante a infecção malárica e é uma das principais responsáveis pela elevada taxa de mortalidade de crianças e mulheres grávidas em regiões hiperendêmicas africanas. Embora os mecanismos que desencadeiam a anemia grave da malária ainda não tenham sido completamente elucidados, sabe-se que o aumento da destruição dos eritrócitos não parasitados tem importante contribuição na gênese dessa manifestação clínica. Frente a esse fato e tendo em vista a já descrita susceptibilidade dos eritrócitos ao processo de apoptose, que inclusive parece estar relacionado com a anemia de diversas patologias e pode ser induzida por diferentes tipos de drogas, decidimos estudar a apoptose eritrocitária e sua participação na anemia no decurso da infecção malárica. Primeiramente, avaliamos in vitro a capacidade da cloroquina, mefloquina, artemisinina e quinina em induzir apoptose em eritrócitos humanos. Nesta primeira investigação, observamos que os antimaláricos não tiveram efeito proapoptótico nestas células e, portanto, parecem não participar da anemia da malária através da indução de apoptose eritrocitária. Em seguida, estudando a infecção experimental de camundongos Balb/c pelo Plasmodium yoelii 17XL, constatamos um aumento nos níveis basais de apoptose de eritrócitos não parasitadas e sugerimos que este aumento poderia estar contribuindo com a anemia neste modelo experimental de malária. Porém, quando posteriormente examinamos em paralelo os níveis de apoptose e o grau de anemia, não foi possível observar relação entre estes dois eventos, mas sim entre a carga parasitária e os níveis de apoptose detectados na fase tardia da infecção. A possível influência da parasitemia nos níveis de apoptose eritrocitária parece ter encontrado suporte quando estudamos pacientes infectados pelo P. vivax. De fato, nessa infecção, que cursa com baixa parasitemia, não detectamos alteração nos níveis de apoptose eritrocitária. Como a apoptose além de ter propriedades patogênicas, também está envolvida com a limitação da propagação de parasitas intracelulares, avaliamos então in vitro a capacidade do P. falciparum de infectar eritrócitos apoptóticos. Neste último estudo, verificamos que estas células apoptóticas são refratárias à infecção plasmodial e, portanto, poderiam participar no controle da parasitemia na malária. / Severe anaemia is a common complication associated to malaria and plays an important role on mortality, particularly in children and pregnant woman living in malaria hyperendemic African regions. It is well known that together to other mechanisms leading to severe malaria anaemia, premature elimination of non-parasitized red blood cells (nRBC) contributes to the genesis of this malarial complication. Thus, considering the susceptibility of RBC to apoptosis – process that has been related to the anaemia of several pathologies and that can be induced by different drugs – we decided to study erythrocytic apoptosis and its involvement in malaria-associated anaemia. Firstly, we evaluated the in vitro capacity of chloroquine, quinine, artemisinin and mefloquine to induce apoptosis in human RBC. In this first study, it was observed that antimalarial drugs were not able to induce apoptosis in RBC and, therefore, it seems that these drugs do not participate in malaria anameia through induction of erythrocytic apoptosis. Next, studying the experimental infection of P. yoelii 17XL in Balb/c mice, we noted increased levels of nRBC apoptosis that could be related to anaemia in this malaria model. However, when we analyzed, in parallel, apoptotic levels and anaemia degree, no relationship between these two parameters was observed, although an association between parasite load and apoptosis at the later stages of infection had been observed. The putative influence of parasitaemia on apoptotic levels seems to be supported by our studies with P. vivax malaria patients, since the low parasitaemia observed in this infection was not followed by an increase of erytrocytic apoptosis. Considering that besides to pathogenic proprieties, apoptosis also participates in the innate defense trough restriction of intracellular pathogens propagation, we also investigated if P. falciparum parasites were able to infect apoptotic RBC. In this last study, it was possible to observe that apoptotic RBC were refractory to in vitro plasmodial infection and, therefore, it could act protectively by controlling malaria parasite propagation.

COSTA, Erivelton Façanha da. Caracterização de Células Vermelhas por Microscopia de Força Atômica. 2006. 146 f. Dissertação (Mestrado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2015-05-05T20:59:55Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_efcosta.pdf: 10007653 bytes, checksum: e0be816e57ec642d42d294c9688b5c9f (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2015-05-07T16:55:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_efcosta.pdf: 10007653 bytes, checksum: e0be816e57ec642d42d294c9688b5c9f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-07T16:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_efcosta.pdf: 10007653 bytes, checksum: e0be816e57ec642d42d294c9688b5c9f (MD5) Previous issue date: 2006 / The optical microscopy is the most employed technique used for visualize red blood cells (RBCs). But, due to its resolution limit, it is necessary to use other complementary techniques to study the cells, such as: the scanning and transmission electron microscopy, and the scanning probing microscopy. The Atomic Force Microscopy (AFM) is included in the last group. This work refers to the possibilities of using AFM in life science, focusing on the erythrocytes characterization. Five experiments involving red blood cells and AFM were carried out: AB+ and O+ blood types differentiation; RBCs membrane study of donors and patients with MDS (Myelodysplastic Syndrome); suitable preparation of red blood cells for AFM analysis; volume study of erythrocytes; and finally aging process observation of RBC in air. The first experiment determined the cell membrane roughness for AB+ and O+ groups, which were different. For the second one, depressions were found on the cell surface of both MSD patients and healthy people. These "holes" were deeper in the first group. The third experiment showed the importance of sample (RBCs) preparation for each AFM specific analysis. The fourth experimental procedure showed the AFM technique capability for providing volume information, which was also used in the last experiment to monitor the aging process of RBCs in air. / A maneira mais difundida na observação de células sanguineas (hemácias) é aquela que utiliza microscopia ótica convencional. Devido ao limite de resolução dos instrumentos óticos, novas técnicas de microscopia colocam-se como alternativas para o estudo de células, tais como: a microscopia eletrônica (de varredura e transmissão) e as técnicas de varredura por sonda. Inclui-se neste último grupo a microscopia de força atômica (AFM). Este trabalho discute as possibilidades de uso da Microscopia de Força Atômica ($emph{Atomic Force Microscopy}$ - AFM) em ciências da vida, para ser mais específico, na caracterização de eritrócitos. Cinco experimentos envolvendo hemácias e AFM estão aqui descritos: diferenciação entre os grupos sanguíneos AB+ e O+; análise do perfil da membrana eritrocitária de indivíduos sadios e portadores de SMD; preparação de células vermelhas para análise em microscopia de força atômica; análise volumétrica de células vermelhas; e monitoramento do envelhecimento de um eritrócito ao ar usando o AFM. No primeiro experimento, a rugosidade das membranas celulares dos grupos AB+ e O+ mostraram-se diferentes. Já no segundo experimento, depressões foram encontradas sobre a membrana de pacientes com SMD e indivíduos sadios, contudo, aparentemente mais profundas no primeiro grupo. O terceiro estudo trouxe à tona a importância da preparação adequada dos eritrócitos para medidas específicas em AFM. A quarta experiência comprovou a capacidade da técnica AFM de fornecer informação de volume, o que também foi utilizado no último experimento para monitorar o envelhecimento de uma hemácia ao ar.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T15:36:22Z No. of bitstreams: 1 2018_CamilaSantosNobre.pdf: 3490385 bytes, checksum: 37e699e83a4907edf3cf4812cecfc4bc (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T17:28:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_CamilaSantosNobre.pdf: 3490385 bytes, checksum: 37e699e83a4907edf3cf4812cecfc4bc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T17:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_CamilaSantosNobre.pdf: 3490385 bytes, checksum: 37e699e83a4907edf3cf4812cecfc4bc (MD5) Previous issue date: 2018-07-09 / O teste de fragilidade osmótica por citometria de fluxo foi recentemente introduzido na prática clínica. No entanto, o teste ainda encontra-se em desenvolvimento. Algumas variáveis importantes para o teste de fragilidade osmótica tradicional ainda não foram totalmente testadas na citometria de fluxo. Neste estudo, avaliou-se a fragilidade osmótica de indivíduos com esferocitose hereditária (casos) e indivíduos saudáveis (controles) por citometria de fluxo usando uma série de tubos contendo concentrações decrescentes de NaCl. As análises foram executadas em amostras de sangue frescas e incubadas (37oC por 24h) colhidos em EDTA e heparina como anticoagulante. As percentagens de hemácias residuais em cada concentração de NaCl foram utilizadas para traçar as curvas de fragilidade osmótica. As curvas fragilidade osmótica de cada condição testada foram comparadas por meio da fragilidade corpuscular mediana. Curvas ROC foram empregadas para avaliar as concentrações de NaCl com maior acurácia na diferenciação entre casos e controles saudáveis. Como resultado, as curvas de fragilidade osmóticas por citometria de fluxo assumiram um formato de dose-resposta típico e a fragilidade corpuscular mediana dos casos e dos controles foram diferentes em todos as condições préanalíticas testadas. A comparação das fragilidades corpuscular mediana revelou que a incubação e o anticoagulante têm efeitos maior e menor sobre o fragilidade osmóticas por citometria de fluxo, respectivamente. Cem por cento de sensibilidade e especificidade foram obtidos de 5,5 a 6 g/L de NaCl no sangue fresco-EDTA, de 6 a 8 g / L de NaCl em sangue incubado-EDTA e em nenhuma das concentrações de NaCl testadas no sangue heparinizado. Assim, o EDTA é o anticoagulante de escolha para o ensaio. A incubação à 37oC para 24h aumenta sua capacidade de diagnóstica. A concentração de NaCl mais confiável para a discriminação entre casos e controles foi de 6 g/L de NaCl em sangue fresco EDTA e 7,5 g/L de NaCl no sangue incubado-EDTA. / Background: The flow cytometric osmotic fragility test (FC-OFT) was recently introduced. However, the test is still under development and some variables were not fully tested. Methods: The osmotic fragility of hereditary spherocytosis (HS) cases and healthy controls were evaluated by FC-OFT using a series of tubes containing decreasing concentrations of NaCl. The analyses were executed in fresh and incubated (37oC for 24h) blood samples anticoagulated with EDTA and heparin. The percentages of residual red blood cells were used to plot the osmotic fragility curves. The OF curves of each tested condition were compared using the median corpuscular fragility (MCF). ROC curve analyses reveled the most acurated NaCl concentrations for differentiation between HS cases and healthy controls. Results: FC-OFT curves assumed a sigmoidal dose-response shape and the MCF of cases and controls were different in all instances. MCF comparisons reveled that incubation and the anticoagulant have a major and a minor effect over the FC-OFT, respectively. One hundred percent of sensitivity and specificity were obtained from 5.5 to 6.0 g/L of NaCl in EDTA-treated fresh blood, from 6.0 to 8.0 g/L of NaCl in EDTA-treated incubated blood and in none of the tested NaCl concentration in heparinized blood. Conclusions: EDTA is the anticoagulant of choice for the assay. Incubation at 37oC for 24h increased its diagnostic capability. The most reliable NaCl concentration for the discrimination of HS case from controls was 6.0 g/L of NaCL in fresh EDTA-treated blood and was 7.5 g/L of NaCl in incubated EDTA-treated blood.

Orientador: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T22:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pitassi_LuizaHelenaUrso_M.pdf: 12609657 bytes, checksum: 75cfaf4f2545cde781142bf97752e052 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Bartonella henselae, uma bactéria intracelular facultativa, é conhecida como agente da doença da arranhadura do gato, da angiomatose bacilar, da peliose bacilar hepática, de endocardites e de síndromes bacterêmicas em humanos. As espécies de Bartonella podem causar infecções intra-eritrocitárias e têm sido isoladas do sangue de pacientes por vários métodos. Foi demonstrado que a B. bacilliformis e a B. quintana infectam células endoteliais e eritrócitos humanos e que a B. henselae infecta células humanas (células endoteliais, células epiteliais, monócitos, macrófagos) e eritrócitos de gatos. O objetivo deste estudo foi investigar, através da microscopia eletrônica de transmissão, se a B. henselae infecta eritrócitos humanos maduros. Uma amostra de um concentrado de hemácias foi infectada experimentalmente com uma cepa-padrão de B. henselae. Alíquotas de sangue foram coletadas da amostra imediatamente após a infecção experimental, no minuto 30 e nas horas 1, 5, 10 e 72 para avaliação ultra-estrutural. A B. henselae foi vista aderida a eritrócitos humanos dez horas após a inoculação e no interior de eritrócitos após setenta e duas horas. Este estudo demonstra que a B. henselae se adere a e invade eritrócitos humanos maduros. Nossos resultados favorecem a possibilidade de que os eritrócitos possam servir como um nicho primário nas infecções causadas por Bartonella spp.. Diante desta observação, novos estudos deverão ser realizados para prevenir a transmissão transfusional da Bartonella sp / Abstract: Bartonella henselae, a facultative intracellular bacterium, has been known as the agent of cat scratch disease, bacillary angiomatosis, peliosis hepatis, endocarditis and bacteraemic syndrome in humans. Bartonella species can cause intraerythrocytic infections and have been isolated from patients blood stream by several methods. It was demonstrated that B. bacilliformis and B. quintana infect human endothelial cells and human erythrocytes and B. henselae infects erythrocytes of cats. The aim of our study was to investigate through transmission electron microscopy whether B. henselae infects mature human erythrocytes. One sample of red blood cell (RBC) unit received experimentally standard strain of B. henselae. Blood aliquots were collected from infected unit immediately after inoculation, on minute 30 and on hours 1, 5, 10 and 72 for ultrastructural evaluation. B. henselae was seen adhered to human erythrocytes ten hours after inoculation and inside the erythrocyte after seventy two hours. This study demonstrates that B. henselae adhere to and invades mature human erythrocytes. Our results favor the possibility that erythrocytes can serve as a primary target in Bartonella spp. infections. From this observation, further studies are warranted to prevent Bartonella transfusional transmission / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica