Orientador: Mario Sergio Palma / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Roberta Cornello Ferreira Nocelli / Banca: Maria Elena de Lima Perez Garcia / Resumo: Consideráveis esforços estão sendo feitos no sentido de isolar e identificar compostos neuroativos presentes em secreções de Artrópodes, resultando na descoberta de muitos peptídeos e moléculas pequenas com ação bloqueadora de receptores de glutamato e/ou canais de cálcio. Tendo isso em vista, a secreção de muitos desses animais tornaram-se ferramentas úteis para os estudos fisiológicos de diversas funções neurais, e muitos dos compostos neurotóxicos produzidos por suas secreções agressivas/defensivas podem se tornar modelos estruturais e funcionais para o desenvolvimento racional de agentes neuroprotetores para diversas desordens neurológicas. Assim, os venenos das vespas Agelaia pallipes pallipes, Agelaia vicina e Polybia paulista foram fracionados em HPLC, e as frações puras, mais abundantes, foram investigadas por espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear para elucidação estrutural das mesmas; e posteriormente, estas frações foram submetidas a diversos ensaios para a determinação de suas atividades biológicas, principalmente daquelas atividades relacionadas à neurotoxicidade/ neuroproteção, tanto em artrópodes como em mamíferos. Através desta abordagem foi possível identificar alguns dos compostos de baixas massas moleculares mais abundantes nos venenos das vespas sociais citadas acima, como a Histamina, a Serotonina, que são comuns a todos estes venenos e possuem como principal função, a potencialização da dor e inflamação, além de outros efeitos no SNC de vertebrados. Também foi isolado um novo tripeptídeo de sequência Gly-Leu-Leu-OH a partir do veneno da vespa A. vicina, cuja função ainda não é conhecida e a síntese e ensaios biológicos do mesmo serão realizados em algumas ramificações dessa tese. A partir do veneno da vespa P. paulista foi isolada 2-feniletilamina, um composto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considerable research efforts have been mounted to isolate and identify neuroactive compounds in Arthropods secretions, resulting in the discovery of many peptides and small molecules which block glutamate receptors and/or calcium channels. Thus, the secretion of many of these animals proved to be useful tools for physiological studies of neuronal function, and several of the neurotoxic compounds produced by their defensive/aggressive secretions may become structural and functional models for the rational development of neuroprotective agents for different neurological disorders. Thus, the venoms of Agelaia pallipes pallipes, Agelaia vicina e Polybia paulista were fractionated in a HPLC system, and the most abundant and pure fractions were investigated by Mass Spectrometry and Nuclear Magnetic Resonance for structural elucidation, and then, these compounds were assayed for biological activity determination, focusing the neuronal activities for these compounds, both in Arthropods and mammals. Considering this approach, it was possible to identify some of the most low molecular mass compounds in the venoms of the social wasps cited above, such as: Histamine and Serotonin, which were common to all of these species, presenting as main function to increase the pain and inflammation, in addition to other effects in the CNS of vertebrates. It was also isolated from the venom of the wasp A. vicina a new tripetide which had its sequence determined as Gly-Leu-Leu- OH, and whose function has not been determined. From the venom of the wasp P. paulista it was isolated 2-phenylethylamine, an amphetamine-like compound, whose occurrence is uncommon in animal venoms, and which has stimulatory effects on the CNS primarily related to dopaminergic neurotransmission. It caused effects of paralysis on Africanized bees, probably by hyper-excitability in the CNS of this organism. We have also observed locomotor... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A qualidade da água e preservação dos ambientes aquáticos assumiu papel fundamental para a sustentabilidade, não só relacionado ao abastecimento, mas também à preservação destes ecossistemas. O uso da água, especialmente para abastecimento dos centros urbanos e irrigação na agricultura tem favorecido a tendência à diminuição das reservas de águas limpas e consequentemente a menor diluição de poluentes presentes, entre eles os pesticidas. Os pesticidas fazem parte do grupo de poluentes que podem gerar impactos significativos nos ambientes em que são inseridos, impactos dos quais alguns ainda não são totalmente conhecidos. Em função do crescente aumento da demanda por alimentos e sua consequente necessidade de se obter maior produtividade, o uso de pesticidas tem aumentado significativamente favorecendo o aumento destes impactos. Este modelo agrícola de produção é predominante em todo o mundo e resulta na presença destes poluentes nos mais diversos ambientes aquáticos, especialmente os superficiais próximos a regiões de cultivo. Neste contexto, o monitoramento destes poluentes em campo indica seu destino nos ambientes próximos à sua aplicação demonstrando mais fielmente seu comportamento neles, bem como fornece informações de referência para programas de monitoramento e avaliação de pesticidas nestes ambientes. O presente estudo avaliou amostras de água e sedimento do Rio Piquiri, localizado em uma região de alta produção de trigo, soja e milho, no estado do Paraná, Brasil. Este rio sofre influência direta da aplicação de pesticidas das lavouras da região. As amostras de água foram extraídas com uma mistura de diclorometano:hexano e as amostras de sedimento com uma mistura de acetona:hexano, tendo sido concentradas 500 vezes para as amostras de água e 25 vezes para as de sedimento. Os extratos foram analisados em LC/MS/MS e confirmaram a presença dos herbicidas e fungicidas utilizados na região do estudo conforme dados oficiais de comercialização no período das coletas. Os resultados mais expressivos nas amostras de água foram do herbicida Atrazina, 0,030 μg L-1 e do fungicida Carbendazim, 0,178 μg L-1. No sedimento os maiores valores encontrados foram para os fungicidas Carbendazim 26,8 μg L-1 e Azoxistrobina, 0,712 μg L-1, ambos na terceira coleta no ponto de coleta 3. / Water quality and conservation of aquatic environments assumed a leading condition for sustainability, not only related to the supply, but also the preservation of these ecosystems. The use of water, especially for supply to urban centers and irrigation in agriculture has favored upon the decrease of the reserves of clean water and therefore less dilution of pollutants, including pesticides. Pesticides are among the group of pollutants that can generate significant impacts on environments in which they are entered, some of which impacts are not yet fully known. Due to the growing demand for food and the consequent need to achieve greater productivity, pesticide use has increased significantly favoring the increase f these impacts. This agricultural production system is prevalent in the world and results in the presence of such pollutants in various aquatic environments, especially the surface regions, near of crop areas. In this context, monitoring of these pollutants in the field indicates its fate in the environment near its application showing more accurately its behavior in field, and provides reference information for program monitoring and evaluation of pesticides in these environments. This study examined samples of water and sediment Piquiri River, located in a region of high production of wheat, soybeans and corn in the state of Paraná, Brazil. This river is under direct influence of the application of pesticides of the region. Water samples were extracted with a mixture of dichloromethane:hexane and sediment samples with acetone:hexane and was concentrated 500 times for water and 25 times for sediment. The extracts were analyzed by LC / MS / MS and confirmed the presence of herbicides and fungicides used in the study region according to official data of the marketing period of the collections. The most impressive results in the water samples were the herbicide Atrazine, 0,030 μg L-1 and the fungicide Carbendazim, 0,178 μg L-1. In the sediment, the highest values were found for the fungicide Carbendazim, 26.8 μg L-1 and Azoxystrobin, 0.712 μg L-1, both in the third collection at the collection point 3.

CAPES / Neste trabalho foi investigado a composição química de metabólitos voláteis extraídos de quatro plantas Pimenta pseudocaryophyllus (Myrtaceae), Psidium cattleyanum (Myrtaceae), Hedychium coronarium (Zingiberaceae) e Costus spiralis (Zingiberaceae) através da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/MS). São apresentados resultados relativos à composição química sazonal do óleo essencial obtido das folhas de Pimenta pseudocaryophyllus, em amostras coletadas bimestralmente de janeiro a novembro de 2009. Em novembro foram observadas as maiores concentrações relativas aos constituintes majoritários do óleo essencial das folhas dessa espécie, sendo o chavibetol (70,90%) e metileugenol (20,70%). Além disso, foram avaliadas as atividades antimicrobianas do óleo essencial das folhas de P. pseudocaryophyllus através de técnicas de difusão com discos e microdiluição em caldo. O chavibetol, composto majoritário mostrou-se o responsável pela maior atividade antifúngica. São apresentados também a sazonalidade do óleo essencial obtido do rizoma de Hedychium coronarium, em amostras coletadas bimestralmente de março a janeiro de 2012 a 2013. Em março foram observadas as maiores concentrações relativas aos constituintes majoritários do óleo essencial do rizoma dessa espécie, sendo β- pineno (31,82%) e 1,8 cineol (28,30%). O estudo populacional dos metabólitos voláteis das folhas do Psidium cattleyanum coletados em Curitiba-PR identificou vinte e oito componentes sendo majoritário o lavander lactona (12,26%). Por outro lado, trinta e um compostos foram identificados no óleo essencial dessa mesma espécie em ecossistema de restinga, sendo majoritário o α-tujeno (25,20%). A extração de metabólitos voláteis das flores H. coronarium e brácteas da C. spiralis foi efetuada através do processo de aeração, fornecendo o linalol (43,58%) e o β- pineno (23,25%), respectivamente como os compostos majoritários. / In this work we investigated the chemical composition of volatile metabolites extracted from four plants Pepper pseudocaryophyllus (Myrtaceae), Psidium cattleyanum (Myrtaceae), Hedychium coronarium (Zingiberaceae) and Costus spiralis (Zingiberaceae) by gas chromatography-mass spectrometry (GC / MS). Results are presented relative to seasonal chemical composition of the essential oil obtained from the leaves of Pepper pseudocaryophyllus in samples collected bimonthly from January to November 2009. In November showed the highest concentrations on the major constituents of the essential oil from the leaves of this species, being chavibetol (70.90%) and methyleugenol (20.70%). Furthermore, we evaluated the antimicrobial activity of essential oil from the leaves of P. pseudocaryophyllus through techniques of diffusion disk and broth microdilution. The chavibetol, major compound was shown to be responsible for the greatest antifungal activity. We present also the seasonality of the essential oil obtained from the rhizome of Hedychium coronarium in samples collected bimonthly from March to January 2012-2013. In March the highest concentrations were observed on the major constituents of the essential oil of the rhizome of this species, and β-pinene (31.82%) and 1,8 cineole (28,30%). The population study of volatile metabolites from the leaves of Psidium cattleyanum collected in Curitiba identified twenty-eight components, the majority being lavander lactone (12.26%). Conversely, thirty-one compounds were identified in the essential oil of the species ecosystem in restinga provided the major constituent being the α-tujeno (25.20%). The extraction of volatile metabolites of flowers H. coronarium and bracts of C. spiralis was effected through the aeration process, providing linalool (43.58%) and β-pinene (23.25%), respectively as the major compounds.

A qualidade da água e preservação dos ambientes aquáticos assumiu papel fundamental para a sustentabilidade, não só relacionado ao abastecimento, mas também à preservação destes ecossistemas. O uso da água, especialmente para abastecimento dos centros urbanos e irrigação na agricultura tem favorecido a tendência à diminuição das reservas de águas limpas e consequentemente a menor diluição de poluentes presentes, entre eles os pesticidas. Os pesticidas fazem parte do grupo de poluentes que podem gerar impactos significativos nos ambientes em que são inseridos, impactos dos quais alguns ainda não são totalmente conhecidos. Em função do crescente aumento da demanda por alimentos e sua consequente necessidade de se obter maior produtividade, o uso de pesticidas tem aumentado significativamente favorecendo o aumento destes impactos. Este modelo agrícola de produção é predominante em todo o mundo e resulta na presença destes poluentes nos mais diversos ambientes aquáticos, especialmente os superficiais próximos a regiões de cultivo. Neste contexto, o monitoramento destes poluentes em campo indica seu destino nos ambientes próximos à sua aplicação demonstrando mais fielmente seu comportamento neles, bem como fornece informações de referência para programas de monitoramento e avaliação de pesticidas nestes ambientes. O presente estudo avaliou amostras de água e sedimento do Rio Piquiri, localizado em uma região de alta produção de trigo, soja e milho, no estado do Paraná, Brasil. Este rio sofre influência direta da aplicação de pesticidas das lavouras da região. As amostras de água foram extraídas com uma mistura de diclorometano:hexano e as amostras de sedimento com uma mistura de acetona:hexano, tendo sido concentradas 500 vezes para as amostras de água e 25 vezes para as de sedimento. Os extratos foram analisados em LC/MS/MS e confirmaram a presença dos herbicidas e fungicidas utilizados na região do estudo conforme dados oficiais de comercialização no período das coletas. Os resultados mais expressivos nas amostras de água foram do herbicida Atrazina, 0,030 μg L-1 e do fungicida Carbendazim, 0,178 μg L-1. No sedimento os maiores valores encontrados foram para os fungicidas Carbendazim 26,8 μg L-1 e Azoxistrobina, 0,712 μg L-1, ambos na terceira coleta no ponto de coleta 3. / Water quality and conservation of aquatic environments assumed a leading condition for sustainability, not only related to the supply, but also the preservation of these ecosystems. The use of water, especially for supply to urban centers and irrigation in agriculture has favored upon the decrease of the reserves of clean water and therefore less dilution of pollutants, including pesticides. Pesticides are among the group of pollutants that can generate significant impacts on environments in which they are entered, some of which impacts are not yet fully known. Due to the growing demand for food and the consequent need to achieve greater productivity, pesticide use has increased significantly favoring the increase f these impacts. This agricultural production system is prevalent in the world and results in the presence of such pollutants in various aquatic environments, especially the surface regions, near of crop areas. In this context, monitoring of these pollutants in the field indicates its fate in the environment near its application showing more accurately its behavior in field, and provides reference information for program monitoring and evaluation of pesticides in these environments. This study examined samples of water and sediment Piquiri River, located in a region of high production of wheat, soybeans and corn in the state of Paraná, Brazil. This river is under direct influence of the application of pesticides of the region. Water samples were extracted with a mixture of dichloromethane:hexane and sediment samples with acetone:hexane and was concentrated 500 times for water and 25 times for sediment. The extracts were analyzed by LC / MS / MS and confirmed the presence of herbicides and fungicides used in the study region according to official data of the marketing period of the collections. The most impressive results in the water samples were the herbicide Atrazine, 0,030 μg L-1 and the fungicide Carbendazim, 0,178 μg L-1. In the sediment, the highest values were found for the fungicide Carbendazim, 26.8 μg L-1 and Azoxystrobin, 0.712 μg L-1, both in the third collection at the collection point 3.

CAPES / Neste trabalho foi investigado a composição química de metabólitos voláteis extraídos de quatro plantas Pimenta pseudocaryophyllus (Myrtaceae), Psidium cattleyanum (Myrtaceae), Hedychium coronarium (Zingiberaceae) e Costus spiralis (Zingiberaceae) através da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/MS). São apresentados resultados relativos à composição química sazonal do óleo essencial obtido das folhas de Pimenta pseudocaryophyllus, em amostras coletadas bimestralmente de janeiro a novembro de 2009. Em novembro foram observadas as maiores concentrações relativas aos constituintes majoritários do óleo essencial das folhas dessa espécie, sendo o chavibetol (70,90%) e metileugenol (20,70%). Além disso, foram avaliadas as atividades antimicrobianas do óleo essencial das folhas de P. pseudocaryophyllus através de técnicas de difusão com discos e microdiluição em caldo. O chavibetol, composto majoritário mostrou-se o responsável pela maior atividade antifúngica. São apresentados também a sazonalidade do óleo essencial obtido do rizoma de Hedychium coronarium, em amostras coletadas bimestralmente de março a janeiro de 2012 a 2013. Em março foram observadas as maiores concentrações relativas aos constituintes majoritários do óleo essencial do rizoma dessa espécie, sendo β- pineno (31,82%) e 1,8 cineol (28,30%). O estudo populacional dos metabólitos voláteis das folhas do Psidium cattleyanum coletados em Curitiba-PR identificou vinte e oito componentes sendo majoritário o lavander lactona (12,26%). Por outro lado, trinta e um compostos foram identificados no óleo essencial dessa mesma espécie em ecossistema de restinga, sendo majoritário o α-tujeno (25,20%). A extração de metabólitos voláteis das flores H. coronarium e brácteas da C. spiralis foi efetuada através do processo de aeração, fornecendo o linalol (43,58%) e o β- pineno (23,25%), respectivamente como os compostos majoritários. / In this work we investigated the chemical composition of volatile metabolites extracted from four plants Pepper pseudocaryophyllus (Myrtaceae), Psidium cattleyanum (Myrtaceae), Hedychium coronarium (Zingiberaceae) and Costus spiralis (Zingiberaceae) by gas chromatography-mass spectrometry (GC / MS). Results are presented relative to seasonal chemical composition of the essential oil obtained from the leaves of Pepper pseudocaryophyllus in samples collected bimonthly from January to November 2009. In November showed the highest concentrations on the major constituents of the essential oil from the leaves of this species, being chavibetol (70.90%) and methyleugenol (20.70%). Furthermore, we evaluated the antimicrobial activity of essential oil from the leaves of P. pseudocaryophyllus through techniques of diffusion disk and broth microdilution. The chavibetol, major compound was shown to be responsible for the greatest antifungal activity. We present also the seasonality of the essential oil obtained from the rhizome of Hedychium coronarium in samples collected bimonthly from March to January 2012-2013. In March the highest concentrations were observed on the major constituents of the essential oil of the rhizome of this species, and β-pinene (31.82%) and 1,8 cineole (28,30%). The population study of volatile metabolites from the leaves of Psidium cattleyanum collected in Curitiba identified twenty-eight components, the majority being lavander lactone (12.26%). Conversely, thirty-one compounds were identified in the essential oil of the species ecosystem in restinga provided the major constituent being the α-tujeno (25.20%). The extraction of volatile metabolites of flowers H. coronarium and bracts of C. spiralis was effected through the aeration process, providing linalool (43.58%) and β-pinene (23.25%), respectively as the major compounds.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:58:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EdsonJCS_DISSERT.pdf: 1649413 bytes, checksum: 32339cc7487693336b6710eaa3e1c93c (MD5) Previous issue date: 2013-07-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Many applications require that the plasma discharge is produced apart from the surface to be processed, thus preventing damage caused by bombardment and/or plasma radiation. In the post-discharge regime in various applications thermally sensitive materials can be used. In this work, active species produced by discharge and post-discharge hollow cathode were diagnosed by optical emission spectroscopy and mass spectrometry. The discharge was produced with the gases Ar and Ar - N2 gas flow ranging from 1 to 6 cm3/min and electric current between 150 to 600 mA. It was estimated that the ion density inside the hollow cathode, with 2 mm diameter ranged between 7.71 and 14.1 x 1015 cm-3. It was observed that the gas flow and the electric current changes the emission intensity of Ar and N2 species. The major ionic species detected by quadrupole mass spectrometry were Ar+ and N2+. The ratio of optical emission intensities of N2(1 +)/Ar(811 nm) was related to the partial pressure of N2 after the hollow cathode discharge at low pressure / Muitas aplica??es de plasma exigem que a descarga seja produzida distante da superf?cie a ser processada, evitando assim danos causados pelo bombardeamento e/ou radia??o do plasma. Nesse regime de p?s-descarga v?rias aplica??es em materiais termicamente sens?veis podem ser utilizadas. Neste trabalho esp?cies ativas produzidas por descarga e p?s-descarga de catodo oco foram diagnosticadas por espectroscopia de emiss?o ?ptica e espectrometria de massa. A descarga foi produzida com os gases Ar e mistura Ar - N2 com fluxo de g?s variando de 1 a 6 cm3/min e corrente el?trica entre 150 a 600 mA. Estimou-se que a densidade de ?ons no interior do c?todo oco, com 2 mm de di?metro, variou entre 7,71 e 14,1 x 1015 cm-3. Observou-se que o fluxo de g?s e a corrente el?trica alteram a intensidade de emiss?o das esp?cies de Ar e N2. As principais esp?cies i?nicas detectadas por espectrometria de massa quadrupolar foram de Ar+ e N2+. A raz?o das intensidades de emiss?o ?tica de N2 (1 +)/Ar(811 nm) foi relacionada com a press?o parcial de N2 na p?s-descarga de c?todo oco em baixa press?o

O fumarato de fesoterodina (FESO) é um potente fármaco antimuscarínico recentemente desenvolvido para o tratamento da síndrome da bexiga hiperativa, também conhecida como incontinência urinária. A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico, como estabilidade e controle de qualidade dos produtos comercializados. Nenhum relato de determinação quantitativa e de estudos de estabilidade do fármaco em comprimidos foi encontrado na literatura. No presente trabalho, a caracterização da substância química de referência de FESO foi realizada por espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear de hidrogênio. Métodos analíticos por espectrofotometria derivada, cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), eletroforese capilar e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial foram desenvolvidos para determinação qualitativa e quantitativa de FESO em comprimidos de liberação prolongada. Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez e limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os resultados obtidos através destes métodos foram comparados estatisticamente por ANOVA, que indicou não haver diferenças estatisticamente significativas entre os mesmos. A cinética de fotodegradação da FESO também foi avaliada utilizando o método por CLAE, na qual foi obtido um modelo de ordem zero. Um método por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi aplicado para análise de FESO e de seus produtos de degradação, possibilitando identificar os íons moleculares destes e propor a rota de fragmentação do fármaco. Além disso, desenvolveu-se e validou-se um método de dissolução de FESO em comprimidos. Através deste método, foi observado que a formulação possui uma cinética de dissolução de acordo com o modelo de Higuchi. Desse modo, estabeleceram-se procedimentos que podem ser aplicados para aprimorar o controle da qualidade dos medicamentos comercializados, bem como contribuir para garantir a segurança e eficácia no uso terapêutico. / Fesoterodine fumarate (FESO) is a potent antimuscarinic drug recently developed for the treatment of overactive bladder, a lower urinary tract disorder characterized by urinary urgency. The drug analysis is necessary in all steps of the pharmaceutical development, as stability and quality control tests of marketed products. The absence of the reports in the literature of quantitative determination and stability studies of the drug in pharmaceutical formulation were observed. In the present study, the characterization of the FESO reference substance was performed by mass spectrometry and proton nuclear magnetic resonance techniques. Analytical methods by derivative spectrophotometry, liquid chromatography (LC), capillary electrophoresis and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry were developed for qualitative and quantitative determination of FESO in extended-release tablets. The procedures were validated, evaluating the parameters of specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, and limit of detection and quantitation, whose results have met the requirements recommended. The results obtained through these analytical methods were compared by ANOVA, which showed no significant statistically difference between them. The photodegradation kinetic of FESO was also evaluated using the validated LC method, following the zero-order kinetics. A liquid chromatography coupled to mass spectrometry method was applied for analysis of FESO and its degradation products, enabling to identify the respective molecular ions and propose the drug photodegradation pathway. Besides, a dissolution method for FESO extended-release tablets was developed and validated. It method allowed to observe that the kinetics of drug release of the presented pharmaceutical formulation was better described by the Higuchi model. Then, the established procedures can be applied to improve the quality control of the commercialized pharmaceutical formulations, as well as to contribute for assure the safety and therapeutic efficacy of the drug.

Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

Neste trabalho, a decomposição por via úmida em sistema fechado assistida por radiação micro-ondas (MW-AD) e a decomposição por via úmida em sistema fechado assistida por radiação micro-ondas e ultravioleta (MW-UV) foram avaliadas para amostras comerciais de biodiesel para posterior determinação de Ba, Co, Cr, Cu, Mn, Mo, Ni, Pb, Sr, V e Zn por espectrometria de massa com setor eletromagnético com plasma indutivamente acoplado (SF-ICP-MS). A MW-AD empregando ácido diluído foi primeiramente avaliada sendo possível a decomposição de até 700 mg de biodiesel com HNO3 7 mol L-1 e 2 mL de H2O2 30% (m/m). As soluções finais apresentaram teor de carbono residual (RCC) de 8,7% e acidez residual (RA) de 4%. Posteriormente, com o objetivo de obter maior eficiência de decomposição, o método MW-UV foi avaliado para a decomposição de biodiesel. Com o emprego deste método até 950 mg de amostra foram decompostas com HNO3 7 mol L-1 e soluções finais com RCC de 17,4% e RA de 19,3% foram obtidas. As soluções finais, para ambos os métodos, foram adequadas para a determinação de elementos traço por SF-ICP-MS. Possíveis interferências na etapa de determinação dos analitos, causadas pela presença de carbono residual, foram estudadas através do emprego de padrão interno 115In e de ensaios de recuperação de analito para monitorar a formação de espécies poliatômicas no plasma. Os resultados obtidos mostraram a necessidade da utilização de padrão interno, sendo o instrumento operado no modo de baixa resolução para a determinação da maioria dos analitos, com exceção de 52Cr, para o qual o instrumento foi operado no modo de média resolução. A exatidão dos métodos propostos foi avaliada mediante a análise de material de referência certificado, obtendo-se resultados concordantes, com nível de confiança de 95% (teste t-student), com os valores certificados para a maioria dos elementos. Ensaios de adição de analito também foram feitos para a avaliação da exatidão e recuperações de 92 à 109% foram obtidas. Os limites de detecção (LD) obtidos para o método MW-UV foram inferiores aos obtidos para MW-AD, na faixa de 0,08 a 6,9 ng g-1 e 1,0 a 14 ng g-1, respectivamente. / In this work, the microwave-assisted digestion (MW-AD) and microwave-assisted ultraviolet digestion (MW-UV) were evaluated for commercial biodiesel samples for subsequent determination of Ba, Co, Cr, Cu, Mn, Mo, Ni, Pb, Sr, V and Zn by sector field inductively coupled plasma mass spectrometry (SF-ICP-MS). Using the MW-AD method with diluted acid up to 700 mg of biodiesel were digested with 7 mol L-1 HNO3 and 2 mL of 30% (w/w) H2O2. Final solutions presented residual carbon content (RCC) of 8.7% and residual acidity (RA) of 4%. In order to improve the digestion efficiency, the MW-UV method was evaluated for biodiesel digestion. Using MW-UV method up to 950 mg of sample were digested with 7 mol L-1 HNO3 and the final solutions with RCC of 17.4% and RA of 19.3% were obtained. The final solutions obtained for both methods were suitable for the determination of trace elements by SF-ICP-MS. Interferences in the determination step were studied using 115In as internal standard and analyte recovery to monitor the formation of polyatomic species in the plasma. The low resolution mode was used for the determination of almost of the analytes with the exception of 52Cr that was determine using medium resolution mode. Accuracy of the investigated methods were evaluated by analysis of certified reference material and the values obtained were in agreement with 95% confidence level (t-student test) with the certified values for all elements. Analyte recovery was also performed to evaluate the accuracy and recoveries of 92 to 109% were obtained. The limits of detection (LOD) obtained by the MW-UV method were lower than MW-AD method and are in the range of 0.08 to 6.9 ng g -1 and 1.0 to 14 ng g -1, respectively.

A espectrometria de massas, acoplada ou não a outras técnicas, tem sido de grande utilidade na determinação de novos compostos, produtos de transformação/degradação, metabólitos e na quantificação em nível de traços nas mais diferentes matrizes, devido à grande versatilidade dessa técnica, especialmente em relação aos modos de análise. Neste trabalho foi sistematizada uma metodologia para a aplicação das técnicas de espectrometria de massas na identificação de produtos de transformação/degradação de fármacos de uso humano e veterinário. Ferramentas da química computacional foram utilizadas para auxiliar na elucidação das estruturas dos compostos formados. A metodologia foi empregada para a identificação e quantificação dos produtos de transformação/degradação da rosuvastatina, gerados durante o processo de fotocatálise heterogênea com ZnO, para a identificação dos produtos de transformação/degradação gerados durante a fotólise em meio aquoso do sulfamentoxazol, ciprofloxacino e norfloxacino, e para a quantificação da amoxicilina transferida ao leite bovino. A viabilidade de se realizar a identificação de metabólitos da amoxicilina presentes no leite bovino por meio do mesmo processo de preparo de amostra e de análise utilizado para a quantificação também foi avaliada. Foram identificados dez principais produtos de transformação/degradação da fotocatálise da rosuvstatina, dez principais produtos de transformação/degradação da fotólise em meio aquoso do sulfametoxazol, quinze principais produtos de transformação/degradação da fotólise em meio aquoso do ciprofloxacino e quinze principais produtos de transformação/degradação da fotólise em meio aquoso do norfloxacino. A metodologia empregada para a quantificação da amoxicilina em leite bovino se demostrou adequada, mas estudos adicionais são necessários para que seja possível identificar os seus metabólitos nessa matriz. Os resultados dos cálculos ab initio que foram utilizados para o estudo dos produtos de transformação/degradação da rosuvastatina e sulfametoxazol mostram que essa técnica pode ser bastante útil na elucidação estrutural dos compostos que são formados. / Mass spectrometry, coupled or not with other techniques, is very useful for the determination of new compounds, transformation/degradation products, metabolites and quantification at trace levels in many different matrices, due to the versatility of such a technique, specially regarding to analysis modes. In the present work a methodology was systematized for the application of mass spectrometry techniques in order to identify metabolites and transformation/degradation products for human and veterinary drugs usage. Computational chemistry tools were used to assist in the elucidation of the structure of the compounds formed during the process. The methodology was employed for identification and quantification of rosuvastatin transformation/degradation products generated during the heterogeneous photocatalysis process with ZnO, for the identification of sulfamethoxazole, ciprofloxacin and norfloxacion transformation/degradation products generated during the photolysis in aqueous medium and for quantifying amoxicillin transferred to bovine milk. The feasibility of identification of amoxicillin metabolites present in bovine milk using the same sample preparation procedure exploited for the quantification analysis was also assessed. Ten main transformation/degradation products of rosuvastatin photocatalysis were identified, as well as ten main transformation/degradation products of sulfamethoxaxole photolysis in aqueous medium, fifteen main transformation/degradation products of ciprofloxacin photolysis in aqueous medium and fifteen main transformation/degradation products of norfloxacin photolysis in aqueous medium. The methodology applied for the bovine milk amoxicillin quantification was demonstrated to be adequate, but additional studies are needed to identify amoxicillin metabolites in the milk matrix. The results of ab initio calculations utilised for the study of rosuvastatin and sulfamethoxazole transformation/degradation products show that this technique can be very useful for the structural elucidation of chemical compounds which are formed.