Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ArquivoTotalDeborah.pdf: 2268171 bytes, checksum: 77a443346e386730d186259d1b23aa35 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cancer, a complex genetic disease is usually the result of a multifactor process which leads to successive gene changes affecting proliferation, differentiation, and cell death. Natural products are widely used in cancer therapy, and they continue to be a promising source for new anticancer agents. Croton polyandrus Spreng., known popularly as croton de tabuleiro is rarely (either in of phytochemical or pharmacological terms) reported in the literature. Recent studies have shown its antifungal activity, but no in vitro antitumor effects for the leaf s essential oil (whose major component is p-cymene), have been reported. The present study aimed to evaluate the essential oil, extracted from the leaves of C. polyandrus (O.E.C.) for in vivo antitumor activity and toxicity. Hemolysis assay with mouse erythrocytes obtained a CH50 value of 141.0 μg/mL, suggesting moderate cytotoxicity for non-tumor cells that are typically affected during cancer therapy. In acute toxicological testing with mice, the estimated LD50 was 447.18 mg/kg. When O.E.C. was acutely administrated, CNS depressive effects were observed as well as reductions in the body weights of the animals with dosages at 250 and 375 mg/kg. Although not displaying in vitro antitumor activity, as also demonstrated for ascites carcinoma cells in the Ehrlich cytotoxicity assay (IC50 = 270.6μg/ml), O.E.C. showed significant in vivo activity, in the same cell line after nine days of treatment with 100 and 150 mg/kg oil, this considering the parameters of volume, weight and tumor cell viability. There was no significant difference between the effect produced by the oil at doses of 100 and 150 mg/kg, and that produced by 5-FU (the standard drug treatment) at 25 mg/kg. There was a significant increase in the percentage of cells found in either late apoptosis or necrosis after nine days of treatment using both doses of oil. While analyzing the distribution of cells during differing phases of the cell cycle, it was observed that O.E.C. induced cycle arrest at the G0/G1 phase, and increased the sub-G1 fraction, suggesting an induction of cell death through apoptosis. There was also an increase in the median survival rate for the animals with transplanted Ehrlich tumor. The toxicological analyzes revealed (after nine days of treatment) reductions in body weight, increased activity of transaminases (AST and ALT), and hematological changes suggestive of anemia. A decrease was seen in the leukocyte and lymphocyte counts, and a thymus index reduction, which together suggest the immunosuppressive effects commonly observed after anticancer therapy. Histopathologic analysis confirmed O.E.C. hepatotoxicity at 150 mg/kg. However, the damage was moderate and reversible, and O.E.C. did not induce an increase in micronucleated erythrocytes, implying non-genotoxicity. The results for O.E.C. indicate antitumor activity in vivo with moderate toxicity, thus suggesting further preclinical study. / O câncer é uma doença genética complexa, geralmente resultado de um processo multifatorial, que ocasiona alterações sucessivas em genes relacionados à proliferação, diferenciação e morte celular. Produtos naturais são amplamente utilizados na terapia do câncer e continuam representando uma fonte promissora para a descoberta de novos agentes antineoplásicos. Croton polyandrus Spreng. é conhecida popularmente como croton de tabuleiro e é pouco relatada na literatura tanto do ponto de vista fitoquímico como farmacológico. Dados recentes mostram que o componente majoritário do óleo essencial das folhas dessa espécie é o p-cimeno, e que o referido óleo apresenta atividade antifúngica, mas não possui efeito antitumoral in vitro. Esse trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antitumoral in vivo e toxicidade do óleo essencial das folhas de C. polyandrus (O.E.C.). No ensaio de hemólise em eritrócitos de camundongos foi obtido um valor de CH50 de 141,0 μg/mL, o que sugere moderada citotoxicidade nesse tipo de célula não tumoral, que é comumente afetada na terapia antineoplásica. No ensaio toxicológico agudo em camundongos o valor estimado da DL50 foi 447,18 mg/kg. Após administração aguda do O.E.C. foram observados efeitos depressores do SNC, bem como redução no peso corporal dos animais tratados com 250 e 375 mg/kg do óleo. Apesar de não apresentar atividade antitumoral in vitro, como também demonstrado no ensaio de citotoxicidade em células de carcinoma ascítico de Ehrlich (CI50 = 270,6 μg/mL), O.E.C. mostrou significante atividade in vivo na mesma linhagem celular, após nove dias de tratamento com 100 e 150 mg/kg do óleo, considerando-se os parâmetros volume, peso e viabilidade das células tumorais. Não houve diferença significante entre o efeito produzido pelo óleo nas doses de 100 e 150 mg/kg e àquele produzido pelo 5-FU (droga padrão) - 25 mg/kg. Houve um aumento significante na porcentagem de células em apoptose tardia/necrose após o tratamento de nove dias com ambas as doses do óleo. Na análise da distribuição das células nas diferentes fases do ciclo celular, foi observado que O.E.C. induziu parada do ciclo na fase G0/G1 e aumento da fração sub-G1, o que sugere indução de morte celular por apoptose. Observou-se ainda, aumento na média de sobrevida dos animais transplantados com tumor de Ehrlich. As análises toxicológicas indicam que, após nove dias de tratamento com O.E.C. foi observado redução no peso corporal, aumento da atividade das transaminases (AST e ALT) e alterações hematológicas sugestivas de anemia. Ainda, foi observada diminuição na contagem de leucócitos e linfócitos, bem como redução no índice de timo, dados esses que em conjunto sugerem imunossupressão, efeito comumente observado após terapia antineoplásica. A análise histopatológica confirmou o indício de hepatotoxicidade, especialmente para a dose de 150 mg/kg do O.E.C., entretanto, os danos foram considerados moderados e reversíveis. O.E.C. não induziu aumento na quantidade de eritrócitos micronucleados, no ensaio do micronúcleo, o que indica ausência de genotoxicidade. Portanto, é possível inferir que o O.E.C. apresenta atividade antitumoral in vivo com moderada toxicidade, o que não representa um fator limitante para a continuação de seus estudos pré-clínicos.

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:49:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 801635 bytes, checksum: 261f730c2041a0e20295da7ba9b8fbe5 (MD5) Previous issue date: 2011-10-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The search for alternative compounds to develop a rational use in food conservation in order to answer to a customers demand for safer, more natural and resistant products has attracted a massive scientific interested on the investigation of various medicinal and aromatic plants and condiments due to their high potential as natural agents. In special, the essential oils have received a great attention because of their proven antimicrobial property. The aim of this study was to investigate the chemical composition of the essential oil Croton rhamnifolioides Pax & Hoffm. and its inhibitory effect in the development of strains of bacteria of interest in in vitro food and in food matrix. The identification and quantification of the essential oil compounds was done through a gas chromatography mass spectrometry (CG-MS). The preliminary analysis of antimicrobial activity was done through the diffusion in solid technique, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined through the technique of macrodilution while the interference of different concentrations of the essential oil through the microbial viability was realized through the viable cell count. It was also evaluated the effectiveness of the oil in inhibit the microbiota of fresh cheese during a fifteenday period. The CG-MS analysis presented 1,8-cineol (46,32%) as the prevailing compound in this essential oil, followed by 1-phellandrene (16,70%), p-cymene (10,21%), sabinene (8,14%) and trans-cariophyllene (4,81%). The MIC and CBM values of the essential oil oscillate from 2,5 - 20 μL/mL and 5 - 40 μL/mL, respectivelly. The essential oil of Croton rhamnifolioides in concentration whose references are MIC and MIC/2 affected the cellular viability of all bacteria tested along 12 hours. When inserted in the composition of the fresh cheese, the essential oil in concentrations that were superior from 1% showed the inhibition capacity of its microbiota related to its control. These results demonstrate that the essential oil of Croton rhamnifolioides presents an antimicrobial activity that transforms it in a good alternative for use, along with other conservation methods on the control of pathogenic and deteriorative micro-organisms growth in food. / A busca de compostos alternativos para um emprego racional na conservação de alimentos a fim de atender a demanda de consumidores por produtos mais seguros, naturais e com vida de prateleira prolongada, tem atraído um grande interesse científico para a investigação de várias espécies de plantas aromáticas, medicinais e condimentares, em função do seu potencial como fonte de agentes naturais. Em especial, os óleos essenciais, tem recebido grande atenção devido a sua comprovada propriedade antimicrobiana. O objetivo deste estudo foi investigar a composição química do óleo essencial de Croton rhamnifolioides Pax & Hoffm. e o efeito inibitório sobre o crescimento de cepas de bactérias de interesse em alimentos in vitro e em matriz alimentar. A identificação e quantificação dos componentes do óleo essencial foram realizadas através de cromatografia gasosa espectrometria de massa (CG-EM). A análise preliminar da atividade antimicrobiana foi realizada através da técnica de difusão em meio sólido, a Concentração Inibitória Mínima-CIM foi determinada através da técnica de macrodiluição, enquanto a interferência de diferentes concentrações do óleo essencial sobre a viabilidade microbiana foi realizada através da contagem de células viáveis. Foi avaliado, ainda, a efetividade do óleo em inibir a microbiota do queijo minas frescal ao longo de 15 dias. A análise de CG-EM mostrou 1,8-cineol (46,32%) como o composto prevalente no óleo essencial ensaiado, seguido por 1-felandreno (16,70%), p-cimeno (10,21%), sabineno (8,14%) e trans-cariofileno (4,81%). Os valores de CIM e CBM do óleo essencial oscilaram de 2,5 - 20 μL/mL e 5 - 40 μL/mL, respectivamente. O óleo essencial de Croton rhamnifolioides em concentrações referentes ao CIM e CIM/2 afetou a viabilidade celular de todas as bactérias ensaiadas ao longo de 12 horas. Quando inserido na composição do queijo minas frescal, o óleo essencial em concentrações superiores a 1% mostrou capacidade de inibição da sua microbiota, em relação ao controle. Estes resultados demonstram que o óleo essencial de Croton rhamnifolioides apresenta atividade antibacteriana, o que o torna uma alternativa para uso, em conjunto com outros métodos de conservação, no controle do crescimento de microorganismos patogênicos e deterioradores em alimentos.

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:49:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.PDF: 979332 bytes, checksum: c4950a804d69e6793ee808b811fb0317 (MD5) Previous issue date: 2011-10-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Considering the search on new antimicrobial substances from natural fonts, the Croton blanchetianus Baill (marmeleiro) appears as an aromatic plant distributed on tropical and subtropical regions and it possess some biological activities. In this study, the essential oil from the Croton blanchetianus Baill leaves was evaluated with the objective of identifying its chemicals constituents and analyse its antibacterial activity in vitro against micro-organisms, and in model food (pieces of meat). The extraction of the essential oil from Croton blanchetianus Baill was realized through the process of hydrodistillation and chemical composition analysis by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). To the physicalchemical characterization of the essential oil was determined the relative density, refractive index, solubility in alcohol, color and appearance. The evaluation of antibacterial activity of this essential oil against micro-organisms of interest on food was realized through the plate diffusion method with inhibition zones and determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was shown through the technique of broth macrodilution, while the interference of the essential oil in the in vitro microbial death kinetics and its model meat was realized through a count of viable cellular. It was identified 14 constituents in a complex mixture of monoterpenes (59.43%) and sesquiterpenes (40.56%). The main components found on the leaves were limonene (25.70%), α-pinene (16.32%) and bicyclogermacrene (13.00%). The antibacterial evaluation showed an activity against three strains L. monocytogenes, A. hydrophila and S. Enteritidis. The values of MIC and MBC of the essential oil oscillated from 1.25 to 40 μg.mL-1 and 2.5 to 80 μg.mL, respectively. The results found in the death kinetics showed a bactericidal effect to Aeromonas hydrophila and Listeria monocytogenes and bacteriostatic to Salmonella Enteritidis. It was observed a bacteriostatic effect in all concentration of the essential oil tested on contaminated meat with L. monocytogenes. These results show the potentiality of the essential oil extracted from the leaves of C. Blanchetianus Baill as an alternative font of a natural antimicrobial for use in food conservation system. / Considerando a busca por novas substâncias antimicrobianas a partir de fontes naturais, o Croton blanchetianus Baill (marmeleiro) surge como uma planta aromática distribuída nas regiões tropical e subtropical e possui algumas atividades biológicas. No presente estudo, o óleo essencial das folhas de Croton blanchetianus Baill, foi avaliado com o objetivo de identificar os constituintes químicos e analisar a sua atividade antibacteriana in vitro frente a micro-organismos e em modelo alimentar (pedaços de carne). A extração do óleo essencial do Marmeleiro (Croton blanchetianus Baill) foi realizada através do processo de hidrodestilação e a análise da composição química por cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massas (CG-EM). Para a caracterização físico-química do óleo essencial foram determinados: densidade relativa 20d20, índice de refração 20 nd, solubilidade em álcool, cor e aparência. A avaliação da atividade antibacteriana do óleo essencial do Marmeleiro frente a microorganismos de interesse em alimentos foi realizada através do método de difusão em placas com zonas de inibição, e a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada através da técnica de macrodiluição em caldo, enquanto que a interferência do óleo essencial na cinética de morte microbiana in vitro e em modelo cárneo foi realizada através da contagem de células viáveis. Foram identificados 14 constituintes em uma mistura complexa de monoterpenos (59,43 %) e sesquiterpenos (40,56 %). Os principais componentes encontrados nas folhas foram limoneno (25,70 %), α-pineno (16,32 %) e biciclogermacreno (13,00 %). A avaliação antibacteriana exibiu atividade contra três estirpes L. monocytogenes, A. hydrophila e S.Enteritidis. Os valores de CIM e CBM do óleo essencial oscilaram de 1,25 - 40 μg.mL-1 e 2,5 - 80 μg.mL, respectivamente. Os resultados encontrados na cinética de morte mostram um efeito bactericida para Aeromonas hydrophila e Listeria monocytogenes e bacteriostática para Salmonella Enteritidis. Observou-se efeito bacteriostático em todas as concentrações do óleo essencial testadas em carne contaminada com L. monocytogenes. Estes resultados mostram a potencialidade do óleo essencial das folhas de C. Blanchetianus Baill como fonte alternativa de antimicrobiano natural para uso na conservação de alimentos.

Orientador: Tatiane Maria Rodrigues / Resumo: A morfologia, histoquímica e ultraestrutura dos tricomas glandulares têm sido estudadas em muitas espécies vegetais. Entretanto, alguns aspectos têm sido pouco abordados, como o envolvimento do citoesqueleto na morfologia e funcionamento glandular. Estudo recente demonstrou a relação entre a predominância de filamentos de actina e microtúbulos em células secretoras e a composição da secreção em tricomas glandulares. Além disso, pesquisas têm comprovado o envolvimento dos elementos do citoesqueleto na origem e manutenção dos tricomas tectores em plantas, sem informações para os tricomas glandulares. Sabe-se que o funcionamento do citoesqueleto está relacionado com a disponibilidade do cálcio, sendo que baixas concentrações desse íon podem prejudicar processos modulados por microtúbulos e actina. Apesar da presença de tricomas glandulares representar um caráter constitutivo em diversas espécies vegetais, fatores exógenos podem influenciar o desenvolvimento e o funcionamento glandular. Estudos têm mostrado que o ataque de herbívoros induz a formação de tricomas glandulares, levando a produção de substâncias com potencial repelente ou inseticida. Os objetivos desse trabalho foram investigar o papel do citoesqueleto na morfogênese e funcionamento de tricomas glandulares e no transporte lipídico em células secretoras de óleo, além de investigar a influência da herbivoria no desenvolvimento e funcionamento de tricomas glandulares. Foram estudadas duas espécies de Lamiaceae (Hyptis v... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The morphology, histochemistry and ultrastructure of glandular trichomes have been studied in many plant species. However, some aspects have been poorly approached, such as the involvement of the cytoskeleton on the gland morphology and functioning. Recent study demonstrated a relation between the predominance of actin filaments and microtubules in secretory cells and the secretion composition in glandular trichomes. In addition, researches have proven the involvement of the cytoskeletal elements in the origin and maintenance of non-glandular trichomes in plants, with no information for glandular trichomes. It is known that the cytoskeleton functioning is related with calcium availability and that low concentration of this ion can harm process modulated by actin filaments and microtubules. Despite the presence of glandular trichomes is a constitutive character in several plant species, exogenous factors can influence their development and functioning. Studies have showed that herbivore attacks induce the glandular trichomes formation, leading to the production of substances with repellent and insecticide potential. This work aimed to investigate the role of cytoskeleton in the glandular trichome morphogenesis and functioning, and in the lipid transport in oil secretory cells, in addition to investigate the influence of herbivory in the glandular trichomes formation and functioning. We studied two Lamiaceae species (Hyptis villosa and Ocimum gratissimum) and the model species ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O gênero Eupatorium (Asteraceae), amplamente distribuído no Rio Grande do Sul, foi investigado visando o estabelecimento da composição química de óleos voláteis obtidos por hidrodestilação das folhas e inflorescências frescas, bem como pela técnica de headspace. Foram coletadas, em diversas localidades do Estado do Rio Grande do Sul, 33 espécies, distribuídas em oito seções. Duas espécies de outro gênero estreitamente relacionado, Symphyopappus, foram também analisadas. A composição química dos óleos e da fração volátil foi determinada por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas. Os óleos voláteis das espécies analisadas apresentaram um padrão qualitativo recorrente, com compostos acíclicos ou de núcleo pinano e p-mentano entre os monoterpenos majoritários e de compostos de núcleo cariofilano, germacrano, aromadendrano e cadinano entre os sesquiterpenos. Além desses, foram observados esporadicamente sesquiterpenos de núcleo bisabolano, santalano, elemano e compostos alifáticos entre os principais constituintes dos óleos. As variações quantitativas observadas entre os óleos foram relevantes, com muitas diferenças tanto na proporção entre monoterpenos e sesquiterpenos, como entre sesquiterpenos hidrocarbonados e oxigenados. A fração volátil analisada por headspace foi composta principalmente por monoterpenos, sendo majoritários os mesmos componentes observados na fração monoterpênica dos óleos voláteis. Adicionalmente, foram avaliadas as atividades antioxidante e anticolinesterásica dos óleos obtidos. A ação antioxidante foi determinada por bioautografia frente ao radical 1,1-difenil-2-picrilidrazila (DPPH). A grande maioria dos óleos avaliados apresentou resultado positivo, sendo este bem pronunciado para o óleo de E. laevigatum, do qual foi isolado o sesquiterpeno furânico levigatina, também apresentando marcada atividade. A ação anticolinesterásica dos óleos voláteis foi avaliada por bioautografia frente à enzima Acetilcolinesterase. Muitos óleos voláteis exerceram atividade inibitória, especialmente aqueles contendo grande percentual de monoterpenos. / The Eupatorium genus (Asteraceae), widely distributed in Rio Grande do Sul State, was investigated with the aim of determining the chemical composition of volatile oils obtained by hydrodistillation from fresh leaves and flowers, as well as by the headspace technique. Thirty-three species, ascribed to eight sections were collected at several localities in the Rio Grande do Sul State. Two other species from a closely related genus, Symphyopappus, were also analyzed. The chemical composition of essential oils and of the volatile fraction was determinated by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The essential oils from the analyzed species showed a recurrent qualitative pattern, with acyclic monoterpenes or such ones bearing pinane or p-menthane nucleus among the main monoterpenes, and with compounds bearing caryophyllane, germacrane, aromadendrane and cadinane nuclei among the sesquiterpenes. Beyond these, it was sporadically observed sesquiterpenes bearing a bisabolane, santalane or elemane nucleus, or still some aliphatic ones among the majority compounds. Quantitative variations observed among the oils were relevant, with several differences as much in the proportion within the monoterpenes and sesquiterpenes, as to among hydrocarbon and oxygenated sesquiterpenes. The volatile fraction analyzed in headspace was mainly composed by monoterpenes, being majoritarian the same compounds observed in the monoterpenic fraction of the essential oils. Additionally, antioxidant and anticholinesterasic activities were performed with the obtained oils. The antioxidant action of essential oils was determinated in a bioautographic assay against 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Most evaluated oils showed positive result, especially pronounced for E. laevigatum essential oils, from which the isolated furan sesquiterpene laevigatin also showed strong activity. Anticholinesterasic activity of essential oils was also evaluated by bioautographic assay against Acetylcholinesterase enzyme. Many essential oils exerted inhibitory activity on the enzyme, especially those ones containing high percentage of monoterpenes.

O estudo teve como objetivos avaliar a ação antifúngica in vitro e in vivo do óleo essencial do Origanum vulgare (orégano), determinar a composição química dos óleos estudados e verificar a toxicidade em ratos Wistar. Inicialmente, oito amostras de O. vulgare foram extraídas por hidrodestilação e os óleos essenciais analisados por cromatografia gasosa, sendo posteriormente testados in vitro para escolha do óleo para os ensaios in vivo. Os testes in vitro seguiram as normas estabelecidas pelo CLSI-M27-A2, sendo utilizados sete isolados de Sporothrix schenckii e 16 isolados de Candida spp. A toxicidade do O. vulgare foi avaliada em 30 ratos wistar, fêmeas, tratadas via oral e vaginal com óleo a 3%, por 30 dias, através de parâmetros clínicos, hematológicos e histopatológicos. Para o teste in vivo, foram utilizados 48 ratos wistar, machos, distribuídos em quatro grupos: T1:óleo (1,5%); T2:óleo (3%); T3:fluconazol (10mg/Kg/dia); T4:controle negativo (emulsão); os óleos foram emulsionados com 0,001% de Tween 80. Para a reprodução experimental da candidíase sistêmica foi utilizado isolado canino e o inóculo (106céls/mL deC. albicans) foi administrado pela veia lateral da cauda em todos os animais. Os fármacos e o diluente foram administrados diariamente por via oral, com auxílio de sonda oro-gástrica, durante 30 dias. Foi realizada avaliação clínica semanal e pesagem dos animais, e após a necropsia foi realizada análise macroscópica, pesagem dos órgãos e retroisolamento de C. albicans. O óleo essencial do O. vulgare utilizado nos testes in vitro apresentou como componentes majoritários o 4-terpineol, carvacrol, timol e α-terpineol. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do O. vulgare para S. Schenckii foi de 0,25% (250μL/mL-1) para todos os isolados testados. Para Candida spp. os resultados foram expressos em CIM e CFM (Concentração Fungicida Mínima), obtendo-se CIM de 2,72μL mL-1 e CFM de 5μL mL-1 para C.albicans isolada de animais; CIM de 2,97μL mL-1 e CFM 3,54μL mL-1 para cepas padrões e CIM igual 2,10μL mL-1 e CFM igual 2,97μL -1mL para espécies não-albicans. A utilização do óleo essencial de O. vulgare a 3%, uma vez ao dia, 30 dias, por via oral e vaginal, não causou toxicidade nos ratos wistar. Na candidíase experimental sistêmica, os animais tratados com óleo a 3% e com fluconazol resultaram em menor freqüência de alterações clínicas. Não houve diferenças entre os grupos quanto a alterações macroscópicas nos órgãos, com exceção dos rins, onde o grupo T3 diferiu dos demais grupos (T1,T2,T4) sendo aquele com menor alterações. Quanto ao retroisolamento, foi obtido menor quantidade de Unidades Formadoras de Colônias no grupo T3 e maior no T4. Dessa forma é possível concluir que o óleo essencial do O. vulgare possui atividade in vitro frente ao S. schenckii e Candida spp. e que sua composição química interfere nos resultados. A utilização do óleo à 3%, via oral e vaginal por 30 dias não causou alterações toxicológicas relevantes em ratas Wistar. O uso do óleo a 3% demonstrou bons resultados no tratamento da candidíase experimental sistêmica, porém são necessários maiores estudos que possibilitem introduzir esta substância como opção terapêutica para candidíase. / The aims of this study were to evaluate the in vitro antifungal activity of the essential oil Origanum vulgare (oregano), to determine the chemical composition of the oils tested and to verify their toxicity to rats. Eight samples of Origanum were extracted by hydrodestilation, and the composition of the essential oils was determined by gaseous chromatography. In vitro antifungal sensitivity was performed with CLSI-M27-A2 protocol. Seven isolates of Sporothrix schenckii and 16 isolates of Candida species were tested. The animal model consisted of female wistar rats, which were treated orally and vaginally with 3% oil for 30 days. Animals were analyzed by clinical, hematological and hystopathologic parameters. For the in vivo test, 48 rats wistar were used, distributed in four groups: T1/n=12: oil 1,5%; T2/n=12:oil 3%; T3/n=12: Fluconazole 10mg/Kg; T4/n=12: Control (emulsion); the oils had been emulsified with 0,001% of Tween 80. The experimental disease was carried with one canine isolate, which was prepared with a suspension of C. albicans (106 céls/mL), and inoculated for the lateral vein of the tail. The drugs and diluent had been administered daily orally during 30 days. Weekly clinical evaluation and weighing of the animals were performed, and to at the end of experiment autopsies were done with macroscopic analysis, weighing of the tissues and retro isolation of C. albicans. The O. vulgare essential oil used in the tests in vitro showed 4-terpineol, carvacrol, timol and alfa-terpineol as majority component. The Minimum Inhibitory Concentration (CIM) of the O. vulgare for S. schenckii was 0,25% (250μL/mL), for all the isolates tested. For Candida spp. the results had been express in CIM and CFM (Concentration Fungicidal Minimum), showing CIM 2,72μL mL-1 and CFM 5μL mL-1 for C.albicans isolates from animals; CIM 2,97μL mL-1 and CFM 3,54μL mL-1 for standards strains and CIM 2,10 μL mL-1 and CFM 2,97μL -1mL for species non-albicans. The use of the 3% essential oil, daily for 30 days, orally and vaginally, did not cause toxicity in the rats. In systemic experimental candidiasis, animals treated with 3% oil and fluconazole showed lesser frequency of clinical alterations. Differences between the groups weren’t observed in the organs macroscopic alterations, with exception of the kidneys that presented more lesions in the group T3. The retro isolation was higher in the T4 group and in the group T3 was of minor. Thus, we conclude that the O. vulgare essential oil have activity in vitro against S. schenckii and Candida spp. and its chemical composition intervenes in the results. The use of the 3% oil for 30 days does not cause oral and vaginal significative alterations in wistar rats. The use of the 3% oil demonstrated good results in the treatment of systemic experimental candidiasis, however other studies are necessary to introduce this substance as a therapeutic option for candidiasis.

Phytophthora spp are responsible for a major disease of citrus crops. The difficulties of control and the impact caused by the use of agrochemicals have led the search for alternative control methods. Thus, this study aimed to evaluate the control of Phytophthora sp using natural products, thermotherapy, and Trichoderma spp rhizobacteria. Experiments were performed to evaluate the effect of manipueira, Ecolife ®, neem oil, eucalyptus oil, citronella oil, oil of Piper aduncum and fungicide (metalaxyl + mancozeb) at different concentrations, as well as the effect of rhizobacteria and Trichoderma spp, on the inhibition of mycelial growth of the pathogen in potato-dextrose-agar medium. Orange fruits variety pêra inoculated with a suspension of the pathogen (20 sporangia/fruit) were sprayed with oils and plant extracts (5 mL/fruit) or underwent thermotherapy in a water bath, at different temperatures, to assess the ability of the treatments decrease in the percentage of injured areas. Seeds of cravo lemon were microbiolized and sown in test tubes containing water-agar and incubated at 28 °C under constant light, to assess the ability of microorganisms to colonize the root system. In another experiment, microbiolized seeds were sown in pots and infested autoclaved substrate, kept in a greenhouse for 45 days. The incidence of the disease and the promotion of growth were measured at the end of the incubation period. In all tests were used a randomized design and means were compared by Tukey test (5%). Among the concentrations of oils, extracts and the fungicide concentrations stood out: manipueira 20%, citronella oil 1.5%, eucalyptus oil 1.0%, oil of Piper aduncum 0.5%, Ecolife ® 1.0%, neem oil 1.5% and fungicide 2.5 g. L-1 showed that the percentage of inhibition of mycelial growth of the pathogen, ranging from 73.8% to 100%. Some of rhizobacteria and Trichoderma spp tested were able to inhibit the mycelial growth of the pathogen. Treatment with oil of Piper aduncum presented the injured areas in the smaller fruits with an average of 8.57%. The disease control was obtained treating orange fruits variety pêra at 52 °C for three minutes and 50 °C, 51 ºC, 52 ºC and 53 °C for five minutes. The isolates of rhizobacteria have the ability to colonize the roots of citrus, but Trichoderma spp didn‟t show this behavior. All isolates studied had the ability to control the severity of disease caused by Phytophthora sp under controlled conditions. Alternative methods showed promise in control of Phytophthora sp. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / Phytophthora spp são responsáveis por uma das principais doenças da cultura dos citros. As dificuldades de controle e o impacto causado pelo uso de agroquímicos têm levado a procura de métodos alternativos de controle. Assim, este trabalho teve por objetivo avaliar o controle de Phytophthora sp, utilizando produtos naturais, termoterapia, Trichoderma spp e rizobactérias. Foram realizados experimentos visando avaliar o efeito da manipueira, Ecolife®, óleo de nim, óleo de eucalipto, óleo de citronela, óleo de pimenta-de-macaco e fungicida (metalaxyl + mancozeb) em diferentes concentrações, bem como o efeito de rizobactérias e Trichoderma spp, sobre a inibição do crescimento micelial do patógeno em meio batata-dextrose-ágar. Frutos de laranja pêra inoculados com uma suspensão do patógeno (20 esporângios/fruto) foram pulverizados com os óleos e extratos vegetais (5 mL/fruto) ou foram submetidos à termoterapia em banho-maria, sob diferentes temperaturas, para avaliar a capacidade dos tratamentos em diminuir a porcentagem das áreas lesionadas. Sementes de limão cravo foram microbiolizadas, semeadas em tubos de ensaio contendo Ágar-Água e incubados a 28°C sob luz constante, para avaliar a capacidade dos microrganismos em colonizar o sistema radicular. Em outro ensaio, as sementes microbiolizadas foram semeadas em vasos contendo substrato autoclavado e infestado, mantidos em telado por 45 dias. A incidência da doença e a promoção de crescimento foram avaliados ao final do período de incubação. Em todos os ensaios foi utilizado delineamento inteiramente casualizado e as médias comparadas pelo teste de Tukey (5%). Dentre as concentrações de óleos, extratos e do fungicida destacaram-se as concentrações: manipueira 20%, óleo de citronela 1,5%, óleo de eucalipto 1,0%, óleo de pimenta-de-macaco 0,5%, Ecolife® 1,0%, óleo de nim 1,5% e fungicida 2,5 g. L-1 que apresentaram porcentagem de inibição de crescimento micelial do patógeno, variando de 73,8% a 100%. Algumas das rizobactérias testadas e Trichoderma spp foram capazes de inibir o crescimento micelial do patógeno. O tratamento com óleo de pimenta-de-macaco foi o que apresentou as menores áreas lesionadas nos frutos com média de 8,57%. O controle da doença foi obtido tratando-se os frutos de laranja pêra a 52ºC por três minutos e 50ºC, 51ºC, 52ºC e 53ºC por cinco minutos. Os isolados de rizobactérias possuem a capacidade de colonizar as raízes de citros, mas Trichoderma spp não apresentaram esse comportamento. Todos os isolados estudados apresentaram a capacidade de controlar a severidade da doença causada por Phytophthora sp sob condições controladas. Métodos alternativos se mostraram promissores no controle de Phytophthora sp.

The high prevalence of people affected by any anxiety disorder associated with the side effects of long-term pharmacotherapy has made possible and motivated the search for new therapies. As complementary and alternative therapy, tisanes obtained from leaves, bark and flowers of many species of the genus Citrus are used by the population in order to minimize emotional disorders and are recommended in the treatment of anxiety. Nocontexto the search for new compounds anti-anxiety drugs and hypnotic sedatives, the present study aimed to investigate the mechanism of action anxiolytic and hypnotic-sedative in vivo activity of essential oil of fruit rinds of Citrus limon (OECl). The experimental procedures were performed with the essential oil in the form in which it is marketed (Ferquima IND. e com. Ltda, São Paulo). Were used Swiss mice (n = 8), adults, males, weighing 25-35 g, from the Vivarium of the Federal University of Alagoas. Tests for potentiation of sleep induced by barbiturate-in order to evaluate its effect on sleep – besides the maze in high cross (LCE) and light and dark (CCE) agonists and antagonists using the tracks and/or Gabaergic neurotransmission-in order to evaluate the anxiolytic action mechanism; as well as the evaluation of a possible compromise engine, through the testing of rotary bar and catalepsy, were carried out in the laboratory of Pharmacology and immunity. The potentiation of sleep, oral treatment with OECl at a dose of 300 mg/kg decreased latency and increased the total time of sleep (p < 0.001). In experimental models of anxiety, the OECl (in doses of 100 and 300 mg/kg) induced an increase in the number of entries and the percentage of time in with open arms and, consequently, reduced the same parameters to the arms closed when compared to vehicle group in the ICE. In addition, these same doses increased the number of transitions and the percentage of time in the area clear in CCE, compared to the control group (p < 0.001). The anxiolytic action mechanism of OECl has been investigated through the pre-treatment with flumazenil, NAN-190 and ketanserin in same models of anxiety. The anxiolytic effect was antagonized by pretreatment with only flumazenil. In the evaluation of motor performance, there were no prejudice on motor function of animals in the testing of rotary bar and catalepsy. The results suggest that oral treatment with OECl induces a behavior anxiolytic in mice suggestively modulated by binding site on the GABAA receptor benzodiazepine or by increased Gabaergic transmission neuro, so there is no compromise of locomotive system. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A alta prevalência de pessoas acometidas por algum distúrbio de ansiedade associada aos efeitos colaterais da farmacoterapia a longo prazo tem possibilitado e motivado a procura por novas terapias. Como terapia complementar e alternativa, infusos obtidos de folhas, cascas e flores de muitas espécies do gênero Citrus são utilizados pela população no sentido de minimizar distúrbios emocionais e são recomendados no tratamento da ansiedade. Nocontexto da busca por novos compostos ansiolíticos e hipnótico-sedativos, o presente estudo objetivou investigar o mecanismo de ação ansiolítico e a atividade hipnótico-sedativa in vivo do óleo essencial das cascas do fruto de Citrus limon (OECl). Os procedimentos experimentais foram realizados com o óleo essencial na forma em que é comercializado(Ferquima Ind. e Com. Ltda, São Paulo). Foram utilizados camundongos Swiss (n = 8), adultos, machos, pesando 25-35 g, provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Alagoas. Os testes de potencialização do sono induzido por barbitúrico – objetivando avaliar seu efeito sobre o sono – além do labirinto em cruz elevado (LCE) e a caixa claro e escuro (CCE), utilizando agonistas e antagonistas das vias GABAérgica e/ou serotoninérgica – a fim de se avaliar o mecanismo de ação ansiolítico; bem como a avaliação de um possível comprometimento motor, através dos testes da barra giratória e catalepsia, foram realizados no Laboratório de Farmacologia e Imunidade. No teste de potencialização do sono, o tratamento oral com OECl na dose de 300 mg/kg diminuiu a latência e aumentou o tempo total de sono (p < 0,001). Nos modelos experimentais de ansiedade, o OECl (nas doses de 100 e 300 mg/kg) induziu um aumento no número de entradas e na porcentagem de tempo nos braços abertos e, consequentemente, reduziu os mesmos parâmetros para os braços fechados quando comparado ao grupo veículo no LCE. Além disso, essas mesmas doses aumentaram o número de transições e a porcentagem de tempo na área clara na CCE, comparando-se ao mesmo grupo controle (p < 0,001). O mecanismo de ação ansiolítico do OECl foi investigado através do pré-tratamento com flumazenil, NAN-190 e ketanserina nos mesmos modelos de ansiedade. O efeito ansiolítico foi antagonizado apenas pelo pré-tratamento com flumazenil. Na avaliação da performance motora, não foi observado nenhum prejuízo na função motora dos animais nos testes da barra giratória e catalepsia. Os resultados sugerem que o tratamento oral com OECl induz um comportamento ansiolítico em camundongos sugestivamente modulado pelo sítio de ligação benzodiazepínico no receptor GABAA ou pelo aumento da neuro transmissão GABAérgica, de modo que não há comprometimento do aparelho locomotor.

Estudos revelam que o extrato de orégano possui muitas funções na fisiologia animal. Resultados positivos de desempenho e produção foram encontrados em aves e suínos. Em ruminantes, alguns estudos foram conduzidos de forma a avaliar seus efeitos no rúmen, mas são inexistentes os que abordam seu efeito sobre o comportamento animal. No extrato de orégano, há predominância dos óleos essenciais carvacrol e timol. Este estudo objetivou avaliar as modificações no consumo e no comportamento ingestivo e social de novilhas recebendo diferentes doses de extrato de orégano (EO) na dieta. Foram utilizadas 34 novilhas holandesas mantidas em pastejo, com idade de 18,4 ± 4,2 meses e peso 424,2 ± 94,4 Kg, distribuídos em quatro tratamentos: C = controle - sem adição do extrato de orégano; EO 2,5 = 2,5 gramas; EO 5 = 5,0 gramas e EO 7,5 = 7,5 gramas/dia de extrato de orégano. O experimento teve duração de 77 dias, sendo os primeiros 21 de adaptação e constou de avaliações comportamentais focais feitas visualmente em um período de 8 horas, das 10:00 até às 18:00 horas (GMT -3:00). Os valores de consumo e as variáveis do comportamento ingestivo e mudanças posturais foram submetidas à análise de variância e regressão (PROC MIXED e PROC REG), adotou-se o nível 5% de significância. Consideraram-se os efeitos de dia, tratamento, interação tratamento e dia, as medidas realizadas no período pré-experimental foram utilizadas como covariáveis. As variáveis do comportamento social foram transformadas em respostas binárias e submetidas à análise logística (PROC LOG) pelo SAS Enterprise Guide 5.1. Não houve alteração no consumo e no comportamento ingestivo dos animais. Houve interação tratamento x dia para tempo gasto em decúbito, havendo um aumento linear no 46° dia após o início da suplementação. A chance de ocorrência de eventos de dominância aumentou em 1,12 vezes para cada 2,5 gramas de extrato de orégano adicionado à dieta (P=0,0496), enquanto a chance de ocorrência de eventos de submissão não foi alterada. A inclusão de até 7,5 gramas/dia de extrato de orégano não altera o consumo e comportamento ingestivo, porém aumenta os eventos de dominância e pode aumentar o tempo em decúbito de novilhas da raça Holandesa. / Oregano extract has many functions in animal’s physiology. Positive results on performance and production were found in poultry and swine. In ruminants, studies were conducted to evaluate the effects on the rumen metabolism, but few have addressed the effect on animal behavior. In the oregano extract, carvacrol and timol essential oils are prevalent. This study aimed to evaluate changes in ingestive and social behavior in heifers receiving oregano extract (OE) in the diet. Thirty-four Holstein heifers kept in grazing, aged between 18.4 ± 4.2 months and with 424.2 ± 94.4 kg BW were distributed into four treatments: C = control - without addition of oregano extract; OE 2.5 = 2.5 grams; 5 OE = 5.0 grams and OE 7.5 = 7.5 grams/day of oregano extract. The experiment lasted 77 days, with 21 days of adaptation. Behavior evaluation was performed through visual and focal observations of the animals during 8 hours for the day, from 10:00 to 18:00 h (GMT -3:00). Data about intake and ingestive behavior and change in posture were submitted to analysis of variance and regression (PROC MIXED e PROC REG), significance was settled at 0.05. Testing the effects of day, treatment, interaction between treatment and day, and the pre experimental measurements were used for adjustment by covariance. The variables of social behavior were transformed into binary answers and submitted to logistic regression (PROC LOGISTIC) using the SAS Enterprise Guide 5.1. No differences in the feed intake and ingestive behavior of the heifers were detected between treatments. etected. On the 46° day after the beginning of OE supplementation, time spent lying increased with OE addition into the diet. The risk of occurrence of dominance events increased by 1.12 times for each 2.5 grams of the oregano extract added in the diet (P=0.0496), while OE did not change the risk of occurrence of submission events. Inclusion of up to 7.5 grams/day of oregano extract does not change feed intake and ingestive behavior, however increases the chance of occurrence of dominance events and may increase the time spent lying of Holstein heifers.

No presente trabalho avaliaram-se os efeitos do óleo essencial do orégano (Origanum vulgare L.) sobre a fertilidade, desenvolvimento ponderal de ratos Wistar, potencial teratogênico, bem como o desenvolvimento físico, motor e comportamental das progênies. A dosagem inicial do óleo essencial foi obtida através de ensaio in vitro frente a linhagens de isolados de Candida spp. O óleo foi extraído pelo processo arraste de vapor e analisado por cromatografia GC/MS. Constituíram-se cinco grupos experimentais com 10 machos e 30 fêmeas cada, um grupo controle negativo (GC-) que recebeu o veículo da emulsão do óleo de orégano (água destilada + Tween 80 0, 001%) um grupo controle positivo (GC+) que recebeu os compostos majoritários do óleo, timol 3% e terpine-4-ol 3%, e três grupos tratados com a emulsão contendo óleo essencial do orégano contendo 3% V / V (GO1), 9% V/ V (GO2) e 27% V / V (GO3). Os animais foram tratados diariamente por via oral usando sonda oro-gástrica flexível, com mesmo volume (10 mg / mL). Os machos foram tratados durante 91 dias, sendo 70 dias antes do acasalamento e 21 dias de acasalamento, após este período, os machos foram eutanasiados para coleta de órgãos para análise histopatológica, coleta de sangue e processamento dos órgãos sexuais para contagens espermáticas. As fêmeas foram tratadas antes (14 dias) e durante o acasalamento, gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Metade das fêmeas prenhes sofreu cesariana no 21º dia de gestação, e os fetos foram usados para a avaliação de teratogenia. O restante das fêmeas pariu a termo, tiveram o comportamento maternal avaliado e as suas proles foram avaliadas a partir do nascimento, quanto às características de desenvolvimento e testes reflexos. Na puberdade, aos 65 dias, um filhote de cada sexo por ninhada foi eutanasiado para avaliação histopatológica e contagens espermáticas e aos 75 dias de idade um macho de cada ninhada teve seu comportamento testado em campo aberto. Na idade adulta a prole formou casais não consaguineos para a realização do comportamento sexual. Os resultados mostram que a administração do óleo essencial nas diferentes doses não interferiu no desenvolvimento ponderal de machos e fêmeas tratados nem das suas progênies (ANOVA p > 0,05). Nos machos, o óleo essencial de orégano interferiu diminuindo o número de células espermáticas, o número total de espermatozóides armazenados na cauda do epidídimo e os níveis de testosterona plasmática, na morfologia espermática o óleo aumentou o percentual de malformações espermáticas nos grupos tratados, de forma dose dependentes, igualmente no controle positivo. Nas fêmeas a taxa de acasalamento apresentou diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo controle negativo nas duas doses mais altas de óleo essencial (9% e 27%). Na dose mais alta houve perdas pós-implantação, diferentes estatisticamente do GC-. Na avaliação esquelética dos fetos, houve diferença estatisticamente significativa no percentual geral de fetos com anomalias esqueléticas, em relação ao controle negativo, em 3%, 9% e GC+. Com relação às progênies, não houve alterações estatísticamente significativas nos grupos, no que se refere ao desenvolvimento ponderal, nos testes reflexos, nas contagens espermáticas e dosagem de testosterona plasmática realizadas na puberdade, no teste de campo aberto e no teste de comportamento sexual. Com base nos resultados obtidos, é possível concluir que a dose inicial (3%), considerada terapêutica, é segura para a reprodução de ratos Wistar, no entanto quando esta dose é aumentada para 9% e 27%, alterações nas variáveis reprodutivas dos machos podem acontecer. / In the present study were evaluated the effects of the essential oil of oregano (Origanum vulgare L.) on fertility and weight development of rats on the teratogenic potential as well as the physical, motor and behavioral of the progenies. The initial dose was obtained by in vitro against strains of Candida isolates spp. The oil was extracted by the process of steam drag chromatography and analyzed by GC / MS. Constituted five experimental groups with 10 males and 30 females each, a negative control group (GC-) who received vehicle emulsion emulsion of oil of oregano (distilled water + Tween 80 0, 001%) a positive control group (CG + ) receiving the major compounds from the oil, thymol 3% and terpine-4-ol 3% and three groups treated with the emulsion containing essential oil of oregano containing 3% V / V (GO1 ), 9% V / V (GO2) and 27% V / V (GO3). The animals were treated daily orally using orogastric tube flexible, with the same volume (10 mg / ml). Males were treated for 91 days with 70 days prior to mating and during mating 21 days, after this period, males were euthanized to collect organs for histopathology, blood collection and processing of sexual organs for sperm counts. Females were treated before (14 days) and during mating, gestation (21 days) and lactation (21 days). Half of pregnant females underwent cesarean section on day 21 of gestation, and the fetuses were used for the evaluation of teratogenicity. The rest of the females gave birth at term, had evaluated whether maternal behavior and their offspring were evaluated from birth, for the development traits and reflex tests. At puberty, 65 days, a pup of each sex per litter was euthanized for histopathological assessment and sperm counts at 75 days of age a male from each litter had tested their behavior in the open field. In adulthood the offspring formed consaguineos couples not to perform sexual behavior. The results showed that administration of essential oil at different doses did not affect the weight development of males and females treated or their progeny (ANOVA p> 0.05). In males, the essential oil of oregano interfered decreasing the number of sperm cells, total number of sperm stored in the cauda epididymis and plasma testosterone levels on sperm morphology oil increasing the percentage of sperm abnormalities in the treated groups in a dose dependent manner, equally positive control. In females mating rate was statistically significantly different compared to negative control group in the two higher doses of essential oil (GO2 and GO3). At the higher dose (GO3) losses occurred before and after deployment, the GC-statistically different. In assessing skeletal fetuses of females who underwent cesarean section, there was a statistically significant difference in the overall percentage of fetuses with skeletal anomalies, relative to the negative control in GO1, GO2 and GC +. Regarding progenies, no significant statistics changes in groups, with regard to weight development, testing reflexes, sperm counts and measurement of plasma testosterone at puberty, in open field test, in the test of sexual behavior Based on these results, we conclude that the initial dose (3%), considered therapy is safe for reproduction of rats, however when this dose is increased to 9% and 27%, changes in the male reproductive variables can occur.