Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The modern dentistry emphasizes the importance of the control of the dental biofilm to improve the oral health. The use in the odontologic therapeutics rinses has a crucial paper in the reduction of the biofilm. The effectiveness of these substances was appraised extensively in several studies. The pharmacologic research of medicinal plants is necessary due to its therapeutic capacity and use. Essential oils and extracts of plants have been used for several applications in the popular medicine, among them as antimicrobial and antiseptic topics. There are several methods described inside the literature for size the antimicrobial activity of the essential oils. However the measure of this activity is hindered by the absence of standardized methods, what dificults the comparison among the studies. Besides, disables its reproduction. The present work researched in vitro the susceptibility of Streptococcus mutans to the Hyptis pectinata essential oil. It presents antimicrobial activity equivalent to the chlorhexidine, what demonstrates the use of this oil as promising alternative in the regiments of oral health. Validating the antimicrobial properties of the Hyptis pectinata essential oil, an experiment was developed using the diffusion technique in disk with some variations in the diluents of the oil, among them Tween 20 and Tween 80 are the most suitable for the emulsification of the Hyptis pectinata oil. The obtained data emphasize a considerable interest for the development of reliable methods for evaluation and comparison of the activity antimicrobial of essential oils. / A odontologia moderna enfatiza a importância do controle do biofilme dental para melhorar a saúde oral. O uso na terapêutica odontológica de colutórios tem um papel crucial na redução do biofilme. A eficácia destas substâncias foi extensivamente avaliada em vários estudos. A pesquisa farmacológica de plantas medicinais é necessária diante de sua capacidade terapêutica e da sua larga utilização. Óleos essenciais e extratos de plantas há muito tempo têm sido base para diversas aplicações na medicina popular, entre elas como antimicrobianos e anti-sépticos tópicos. Existem vários métodos descritos na literatura para mensurar a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais. Entretanto, a ausência de métodos padronizados, faz com que a comparação entre os estudos seja praticamente impossível, além de incapacitar sua reprodutibilidade. O presente trabalho pesquisou in vitro a eficácia do óleo essencial Hyptis pectinata frente ao Streptococcus mutans. Este apresenta atividade antimicrobiana equivalente à clorexidina, o que demonstra o uso deste óleo como alternativa promissora nos regimentos de saúde oral. Validando as propriedades antimicrobianas do óleo essencial de Hyptis pectinata, desenvolveu-se um experimento utilizando a técnica de difusão em disco, com algumas variações nos diluentes do óleo, dos quais, o Tween 20 e o Tween 80 são os mais indicados para a emulsificação do óleo de Hyptis pectinata. Os dados obtidos ressaltam um considerável interesse pelo desenvolvimento de métodos confiáveis para avaliação e comparação da atividade antimicrobiana de óleos essenciais.

Medicinal plants are one of the most important sources of drugs used in the pharmaceutical industry. Among traditional medicinal plants of the Brazilian northeastern, Lippia gracilis Schauer (Verbenaceae) had been used for several medicinal purposes. Therefore, the present study aimed to determine the chemical composition of the leaf essential oil (EO) of L. gracilis, as such to evaluate it in vitro and in vivo anticancer potential. For that, the leaf essential oil (EO) of L. gracilis was prepared using hydrodistillation followed by GC MS analysis. The cytotoxic effects of EO and its components (thymol, p-cymene, γ-terpinene and myrcene) have been assessed in HepG2, K562 and B16-F10 tumor cells as such in non- tumoral (PBMC). The effects of EO on cell proliferation and apoptosis induction were investigated in HepG2 cells. Furthermore, mice bearing Sarcoma 180 tumor cells were used to confirm its in vivo effectiveness. The results showed that the EO composition was characterized by the presence of thymol as major constituent which exhibited promising cytotoxicity against the all tumor cells tested, whereas its investigated components presented low cytotoxic potential. Moreover, EO treatment caused G1 arrest in HepG2 cells accompanied by the induction of DNA fragmentation without affecting cell membrane integrity. Cell morphology consistent with apoptosis and a remarkable activation of caspase-3 were also observed, suggesting induction of caspase-dependent apoptotic cell death. In vivo antitumor study showed tumor growth inhibition rates of 38.5 41.9%. In conclusion, the EO, which has thymol as its major constituent, possesses significant in vitro and in vivo antitumor activity. These data suggest that leaf essential oil of L. gracilis is a potential medicinal resource, which may ultimately be used in cancer treatment. / As plantas medicinais são uma das mais importantes fontes de medicamentos para a indústria farmacêutica. Entre as plantas utilizadas na medicina popular no nordeste do Brasil, a Lippia gracilis Schauer (Verbenaceae) é uma das mais tradicionais e tem sido usada para diversos propósitos. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo geral avaliar o potencial anticâncer do óleo essencial (OE) das folhas de L. gracilis em modelos experimentais in vitro e in vivo. O OE foi extraído por hidrodestilação e a análise química foi feita por CG/EM. Os efeitos citotóxicos do OE e dos seus componentes, timol, p-cimeno, γ-terpineno e mirceno, foram avaliados em células tumorais das linhagens HepG2, B16-F10 e K562, bem como em células não-tumorais (PBMCs). O efeito do OE na proliferação celular e na indução de apoptose foram investigados nas células HepG2. Além disso, camundongos transplantados com células do tumor Sarcoma 180 foram usados para confirmar sua eficácia in vivo. Os resultados mostraram que o OE apresentou o timol como composto químico majoritário e demonstrou promissora citotoxidade contra todas as células tumorais testadas. Por outro lado, os seus componentes investigados, apresentaram efeito citotóxico pouco potente. Além disso, o tratamento com o OE acarretou parada do ciclo celular das células HepG2 na fase G1, acompanhada por indução de fragmentação do DNA, sem afetar a integridade da membrana. Morfologia celular consistente com apoptose e uma notável ativação de caspase-3, também foram observadas, sugerindo indução de morte celular por apoptose dependente de caspase. O estudo da atividade antitumoral in vivo mostrou inibição do crescimento tumoral com taxas de 38,5% 41,9%. Assim, o OE apresentou o timol como principal constituinte e demonstrou significativa atividade antitumoral in vitro e in vivo. Os resultados obtidos sugerem que o OE das folhas de L. gracilis é um potencial recurso medicinal, que pode vir a ser empregado no tratamento do câncer.

Patchouli is an aromatic species of Asian origin that has been cultivated in various parts of the world for the extraction of essential oil of its leaves. The essential oil is used by the perfume, cosmetic and food industries. Patchouli is an economically important species need to have its genetic material preserved. In this context, the aim of this study was to develop protocols for micropropagation and in vitro conservation of three accessions of patchouli. For the experiments of micropropagation MS medium supplemented with different concentrations of kinetin and IAA or NAA were tested. For the acclimatization assays different mixtures of coconut coir and vermiculite supplemented with NPK fertilizer and limestone were tested. For callus induction, different doses of 2,4-D were combined with BAP and kinetin. For the in vitro conservation assays different growth temperatures, osmotic regulators and/or inhibitors of growth were tested. The different accessions showed shoot regeneration via direct organogenesis. Accession POG002 can be propagated using 0.5 mg.L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, accession POG014 using 2.0 mg L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, and accession POG021 using 1.0 mg.L-1 kinetin and 0.5 mg.L-1 IAA. The acclimatization of accessions POG002, POG014 and POG021 can be performed with the substrate coconut coir + NPK (3-12-6) fertilizer (12 g.L-1) + limestone (1 g.L-1). The larger sizes of calluses were obtained using: 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP and 0.110 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP for accession POG014; 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L -1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG021; and 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG002. The conservation of accession POG002 can be realized using 0.5 mg.L-1 abscisic acid for three months at 18°C; accession POG014 can be conservated for three months using 0.5 mg.L-1 of abscisic acid at 18°C; and POG021 can be maintained for six months using sucrose 10 g.L-1 and sorbitol 5 g.L-1 at 25°C. / O patchouli é uma espécie aromática de origem asiática que tem sido cultivada em diversas partes do mundo para extração de óleo essencial de suas folhas. Este óleo essencial é empregado nas indústrias de perfumes, cosmética e alimentícia. Por se tratar de uma espécie de importância econômica local e mundial o patchouli necessita ter seu material genético preservado. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi desenvolver protocolos de micropropagação e conservação in vitro de três acessos de patchouli. Para os experimentos de micropropagação foi testado meio MS suplementado com diferentes concentrações de cinetina e as auxinas AIA ou ANA. Nos ensaios de aclimatização testou-se diferentes misturas de pó de coco e vermiculita suplementado com adubo NPK formulado e calcário. Para indução de calos, doses distintas de 2,4-D foram combinadas com as citocininas BAP e cinetina. Nos ensaios de conservação in vitro testou-se diferentes temperaturas de cultivo, reguladores osmóticos e/ou inibidores de crescimento. Os diferentes acessos apresentaram regeneração de brotos via organogênese direta. O acesso POG002 pode ser propagado na presença de 0,5 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; o acesso POG014 com 2,0 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; e o acesso POG021 com o emprego de 1,0 mg.L-1 de cinetina e 0,5 mg.L-1 de AIA. A aclimatização dos acessos POG002, POG014 e POG021 pode ser realizada com o substrato pó de coco + NPK (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1). Os maiores tamanhos de calos foram obtidos nos seguintes meios: 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP, e 0,110 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP para o acesso POG014; 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG021; e 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG002. A conservação do acesso POG002 pode ser realizada com 0,5 mg.L-1 ácido abscísico por três meses a 18°C; o acesso POG014 pode ser conservado por três meses empregando 0,5 mg.L-1 de ácido abscísico a 18°C; e o acesso POG021 pode ser mantido por seis meses com uso de sacarose 10 g.L-1 e sorbitol 5 g.L-1 a 25°C.

As biotécnicas da reprodução animal, amplamente difundidas no Brasil, tem possibilitado maior controle em relação à transmissão de agentes patogênicos, porém, a transmissão de doenças continua a ser uma preocupação justificável para a busca de melhores meios de controle. O objetivo do trabalho foi o de avaliar a diminuição da replicação viral (BoHV-1 Colorado) em embriões murinos após tratamentos com Produtos Naturais (PN). Trabalhamos com 3 grupos de PN, totalizando 18 tratamentos: Oléos Essenciais (OE) de Chamomilla recutita, Allium sativum, Zingiber officinale, Syzygium aromaticum, Illicium verum Hook f., Punica granatum e Melissa officinalis; Extratos Etanólicos (EE) das mesmas plantas anteriores com acréscimo de Pterodon emarginatus (casca e semente) e Extrato Aquoso (EA) de Própolis e Agaricus blazei. Inicialmente encontramos concentrações não tóxicas em células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney) relacionada a cada PN (ampla sintonia) para posteriormente verificarmos as concentrações não tóxicas para os zigotos/embriões murinos (sintonia fina). Após encontrarmos as concentrações não tóxicas, os zigotos foram divididos em quatro grupos: G1 (Controle), G2 (expostos aos vírus BoHV-1 Colorado à 108 TCID50/mL), G3 (expostos aos PN) e G4 (expostos aos vírus e PN). Os grupos foram mantidos a 37,5 ºC em meio TCM199 (100 μL) com 10% de soro fetal bovino em estufa a 5% de CO2 e 95% de umidade. Após 24h, analisamos a taxa de clivagem (Teste Exato de Fisher_p<0,05), a morfologia (por microscopia óptica), a n-PCR e a titulação dos embriões em co-cultura com células MDBK após mais 72h do tratamento com os PN (Teste de Mann Whitney_ p<0,05). Dentre as 18 análises, os embriões murinos tratados com EA de Própolis, EE de Punica granatum e de Pteron emarginatus (Casca) apresentaram resultados satisfatórios: sem alterações morfológicas, taxa de clivagem semelhante aos controles e apesar da constatação da partícula viral junto aos embriões pela n-PCR, houve diminuição da concentração viral após tratamentos com estes extratos, o que sugere interferência destes tratamentos no ciclo viral do BoHV-1 Colorado. / The biotech Animal reproduction widespread in Brazil, has allowed greater control over the transmission of pathogens, however, the disease transmission remains a justifiable concern for the pursuit of the best means of control. The aim of this study was to evaluate the reduction of viral replicarion (Colorado BoHV-1) in murine embryos after treatments with natural products (NP). We work with groups \'3 \'PN, totaling 18 treatments: essential oils (EO) of Chamomilla recutita, Allium sativum, Zingiber officinale, Syzygium aromaticum, Illicium verum Hook f., Melissa officinalis and Punica granatum; ethanol extracts (EE) of the same plants prior to adding Pterodon emarginatus (skin and seed) and Aqueous Extract (EA) Propolis and Agaricus blazei. Initially we find non-toxic concentrations in MDBK (Madin Darby Bovine Kidney) related to each PN (broad line) then we check for the non-toxic concentrations for zygotes / embryos murine (fine tuning). After finding the non-toxic concentrations, zygotes were divided into four groups: G1 (control), G2 (exposed to viruses BoHV-1 at 108 Colorado TCID50/mL), G3 (exposed to PN) and G4 (exposed to viruses and PN .) The groups were maintained at 37.5 °C in TCM199 (100 mL) with 10% fetal bovine serum in an incubator at 5% CO2 and 95% humidity. After 24h, we analyzed the cleavage rate (Exact Test Fisher_p <0.05), morphology (light microscopy), the n-PCR and titration of embryos in co-culture with MDBK cells after 72 h of treatment with more NPs (Mann Whitney_ p <0.05). Among the 18 analyzes, murine embryos treated with EA Propolis, EE Punica granatum and Pteron emarginatus (bark) showed satisfactory results: no morphological changes, cleavage rate similar to controls, and despite the finding of the viral particle with the embryos by n-PCR, decreased the viral concentration after treatment with these extracts, suggesting interference of these treatments in the viral cycle of BoHV-1 Colorado.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Lucimari Romana Dipe de Faria.pdf: 314985 bytes, checksum: e1af9bd84f61c9e4f4ae004b8e226bcb (MD5) Previous issue date: 2005-03-15 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / The Rosmarinus officinalis L (rosemary) is widely used in popular medicine The objective of this paper was o study the essential oil of this species (ROEO) on inflammatory and hyperalgesic models in vivo in order to detect the possible involvement of its active principles on the inflammatory and algesic responses and analyze its ulcerogenic potential The following experimental models were used rat paw edema granuloma test vascular permeability ear erythema by croton oil writhing test in mouse formalin test hot plate and gastric ulcer by stress The yield of the essential oil extracted by hydrodestilation of the aerial parts from Rosmarinus officinalis was 1.4% With the oral administration in rats and mice of the doses (50 100 200 500 1000 2000 and 5000 mg/kg) it was not possible to determine the median lethal dose (LD50) With the oral doses of 50 100 200 and 300 mg/kg on the rat paw edema the ROEO produced dose-dependent effect of which the lineal correlation coefficient was r = 0.9986 (y = -13.93 + 0.30) and the median effective dose (ED50) was 212 mg/kg In the writhing test in mice the oral doses of ROEO 10 50 100 200 300 and 400 mg/kg produced dose-dependent effect with a correlation coefficient of r = 0.93095 (y = 30.54 + 0.073) and ED50 of 261 mg/kg The daily administration of ROEO (300 mg/kg, orally) for 6 days inhibited the granulomatous tissue formation in 59% (p <0.001 Student t test) In the ear erythema by croton oil the ROEO in the oral dose of 300 mg/kg provoked the significant inhibitory effect of 77% (p <0.05) In the vascular permeability test the oral treatment with ROEO antagonized the response to histamine thus inhibiting the vascular permeability in 50% (p <0.05, Student t test) The oral treatment with ROEO (300 mg/kg) inhibited phase I of the hyperalgesic process by formalin in 40% (p <0.05 Student t test) while phase II was inhibited in 48% In the hot plate test ROEO (300 mg/kg, orally) produced more latency times than basal times the difference however was not significant In the gastric ulcer trial the ROEO-treated group inhibited in 44% the number of gastric lesions by stress when compared with the control group The results suggest that ROEO shows antiinflammatory activity in both acute and chronic inflammatory processes exhibits analgesic activity and provokes little harmful interference on the gastric mucosa / O Rosmarinus officinalis L (alecrim) é muito utilizado na medicina popular Este trabalho teve como objetivo estudar o óleo essencial desta espécie (OERO) em modelos inflamatórios e hiperalgésicos in vivo a fim de detectar o possível envolvimento de seus princípios ativos na resposta inflamatória algésica e analisar o potencial ulcerogênico Para tanto foram utilizados os seguintes modelos experimentais edema de pata de rato teste do granuloma permeabilidade vascular eritema de orelha por óleo de croton teste de contorções em camundongos teste da formalina placa quente e úlcera gástrica por estresse O rendimento do óleo essencial extraído por hidrodestilação das partes aéreas de Rosmarinus officinalis foi de 1,4% Em ratos e camundongos com a administração das doses (50 100 200 500 1000 2000 e 5000 mg/kg) por via oral (v o) não foi possível determinar a dose letal média (DL50) Com as doses de 50 100 200 e 300 mg/kg v o sobre o edema de pata de rato o OERO produziu efeito dose-dependente cujo coeficiente de correlação linear obtido foi r = 0.9986 (y = -13,93 vezes + 0,30) e a DE50 determinada foi de 212 mg/kg No teste de contorções em camundongos as doses do OERO de 10 50 100 200 300 e 400 mg/kg v o produziram efeito dose-dependente com coeficiente de correlação de r = 0,93095 (y = 30,54 vezes + 0,073), e DE50 de 261 mg/kg A administração diária de 300 mg/kg v o do OERO durante 6 dias, inibiu a formação do tecido granulomatoso em 59% (p < 0,001, teste t de Student) No eritema de orelha por óleo de croton o OERO na dose de 300 mg/kg v o provocou efeito inibitório significativo de 77% (p < 0.05) No teste de permeabilidade vascular o tratamento por via oral com o OERO antagonizou a resposta à histamina inibindo a permeabilidade vascular em 50% (p < 0.05 teste t de Student) O tratamento com o OERO (300 mg/kg v o) produziu inibição de 40% (p < 0.05, teste t de Student) da fase I do processo hiperalgésico induzido por formalina enquanto a inibição da fase II foi de 48% No teste de placa quente o OERO (300 mg/kg v o) produziu tempos de latência maiores que os tempos basais Entretanto tal diferença não foi significativa No ensaio de úlcera gástrica o grupo tratado com o OERO inibiu em 44% o número de lesões gástricas por estresse quando comparado ao grupo controle A partir dos resultados obtidos sugere-se que o OERO apresenta atividade antiinflamatória sobre os processos inflamatórios agudo e crônico e atividade analgésica Entretanto provoca pouca interferência danosa sobre a mucosa gástrica

Listeria monocytogenes é conhecida como um importante patógeno causador de doenças transmitidas por alimentos na última década. Apesar do número de casos por ano ser relativamente baixo, a infecção pode ser grave, com mortalidades acima de 30%. Pesquisas realizadas no Brasil relataram uma incidência de 32% em amostras de produtos cárneos, e o microrganismo foi encontrado em 80% das amostras lingüiças frescal de carne suína. Apesar dos recentes avanços nas tecnologias de controle de patógenos em alimentos, os consumidores têm procurado alimentos \"naturais\", isto é, submetidos a tratamentos menos agressivos e isentos de conservadores químicos. Antimicrobianos naturais são uma opção interessante, mas sua aplicação requer uma melhor compreensão de sua funcionalidade nos alimentos. Os óleos essenciais e seus compostos fenólicos estão se tornando agentes antimicrobianos naturais bastante populares, assim como a nisina, uma bacteriocina produzida por Lactococcus lactis subsp. lactis. Esta pesquisa foi desenvolvida para avaliar o efeito de óleo essencial de orégano (O.E.O.) e de nisina, individualmente ou em combinação, na inibição da multiplicação de Listeria monocytogenes Scott A in vitro (meio de cultura) e in situ -(lingüiça frescal suína). A atividade inibitória foi testada pela metodologia de difusão em poços, e os halos de inibição foram medidos 24 horas após a incubação à 37ºC. Foram testadas as concentrações 0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4% e 0,5% (v/v) de O.E.O. e 0, 100, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 e 2000 ppm de nisina. Quando o óleo essencial foi usado em combinação com a nisina foi observado um efeito sinérgico na inibição de L. monocytogenes. As concentrações que apresentaram o maior efeito contra o patógeno nos testes in vitro, ou seja 0,5% (v/v) O.E.O. com 200 ppm de nisina, foram utilizadas nos experimentos com três formulações diferentes lingüiça frescal, contendo pernil de porco, sal (2%), nitrito (0,015%), condimentos, emulsificantes e antioxidantes, experimentalmente contaminadas com L. monocytogenes Scott A (106 UFC/g). A multiplicação do patógeno foi monitorada no produto refrigerado a 5oC por até 10 dias, através da contagem em placas. Controles sem antimicrobianos também foram estudados. Os resultados indicaram que o O.E.O., usado isoladamente, não conferiu proteção ao alimento. A nisina causou uma redução de 2 log imediatamente após o contato com o microrganismo, mas durante o armazenamento, as células sobreviventes apresentaram a mesma taxa de multiplicação que na lingüiça controle (??0,05), mantendo as contagens 2 log inferiores as do controle por até 9 dias. Quando os dois antimicrobianos foram usados em combinação, a redução imediata após o contato foi de 4 log, e, quando comparado ao controle, a taxa de multiplicação durante o armazenamento a 5oC foi significativamente mais altas que no controle (??0,05). Entretanto, as amostras de lingüiça contendo esses antimicrobianos nas concentrações testadas não foram aprovadas nos testes sensoriais de aceitação (??0,05). Esses resultados indicam que a combinação desses antimicrobianos pode ser utilizada como uma barreira adicional para a multiplicação de L.monocytogenes em lingüiça frescal suína, mas os atributos sensoriais que conferem ao produto podem limitar sua aplicação. / Listeria monocytogenes has been recognized as an important foodborne pathogen for the past decade. Although the number of cases per annum is relatively low, the infections can be acute, with mortality up to 30%. In Brazil, some works reported that 32% of dairy meat products were contaminated with L. monocytogenes, and this organism was found in 80% of fresh pork sausage. In spite of modern improvements in food production techniques, the consumers are seeking for \"natural\" food products, i.e., not submitted to aggressive treatments or added of chemical preservatives. Natural antimicrobials are a promising option, but their application requires a better understanding of their functionality in foods. Naturally occurring antimicrobial agents, such as essential oils and their phenolic components, are becoming increasingly popular as preservation agents. Other compound with increased application in foods is nisin, a bacteriocin produced by Lactococcus lactis subsp. lactis. This study aimed to evaluate the antimicrobial effect of oregano essential oil (O.E.O.) and nisin, individually or in combination, on the inhibition of growth of Listeria monocytogenes Scott A in vitro (agar culture medium) and in situ (fresh pork sausage). The inhibitory activity was tested by the well diffusion method, measuring the inhibition halos after 24hours incubation at 37ºC. The concentrations tested were 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5% (v/v) for OEO and 0, 100, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 and 2000 ppm for nisin. When the essential oil was used in combination with nisin, a synergistic effect was observed for L. monocytogenes, i.e., the oil enhanced the activity of the bacteriocin. The combination 0.5% (v/v) O.E.O. with 200 ppm nisin presented the best results and was used to test the functionality in fresh pork sausage prepared with three different formulations, containing deboned minced pork meat, 2% salt and 0.015% nitrite, plus spices, emulsifier and antioxidant, and experimentally contaminated with L. monocytogenes Scott A (106 CFU/g). The growth of the pathogen was monitored in the refrigerated product (5oC) up to 10 days, by means of plate counting. Controls without antimicrobials were included in the experiments. Results indicated that O.E.O., used alone, was not effective. Nisin alone caused a 2-log reduction immediately after contact, but during storage the surviving cells presented the same multiplication rate as in the control (? ? 0.5), keeping the counts 2 log lower up to 9 days. When used in combination, the two antimicrobials caused a 4-log count reduction immediately after addition and, when compared to the control, the multiplication rate of the surviving cells during storage under refrigeration up to 10 days was significantly higher (? ? 0.5). However, samples containing these antimicrobials in the tested concentrations failed the sensorial acceptance tests (? ? 0.5). These results indicate that the combination of these antimicrobials can be an additional hurdle for the control of L. monocytogenes in fresh pork sausages, but the final sensorial attributes of the product may hamper their application.

Não consta resumo na publicação. / Abstract not available.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antifúngico contra o fungo Aspergillus flavus, dos extratos de folhas de Eucalyptus staigeriana F. Muell., preparados a partir de folhas frescas, liofilizadas e secas ao ambiente, sob diferentes tempos de extração e por diferentes solventes extratores, tais como metanol, etanol e água a temperatura ambiente e água a 60ºC. Para mensurar o potencial antifúngico foi utilizada a técnica de poisoned food em meio BDA e o crescimento radial fúngico foi avaliado por seis dias. O percentual de inibição foi avaliado comparando-se as medidas do diâmetro radial de crescimento fúngico dos extratos com as placas controle contendo apenas os solventes. Como controle positivo foi utilizado o óleo essencial de E. staigeriana. Os extratos metanólicos apresentaram o melhor potencial antifúngico, seguido pelos extratos etanólicos e aquosos. A utilização das folhas frescas mostrou-se a melhor forma de preparação e não houve diferença significativa entre os tempos de extração 1h e 24h, indicando como processamento mais viável a extração em 1h. A Concentração Inibitória Mínima (MIC) foi mensurada para o extrato de melhor desempenho pela técnica de micropoços, aonde o crescimento fúngico foi monitorado por fluorescência derivada da reação da esterase fúngica com o diacetado de fluorescina. E o extrato que obteve o melhor resultado foi o extrato metanólico, com 1h de extração, a partir de folhas liofilizadas de E. staigeriana, e sua MIC foi de 26,75 L/mL, enquanto a do seu óleo essencial foi de 12,5 L/mL, demonstrando a eficiência relativa da extração com solventes extratores e sua praticidade e operacionalidade, quando se comparam com a extração de óleos essenciais. / This study aimed to evaluate the antifungal potential of Eucalyptus staigeriana F. Muell. leaf extracts against Aspergillus flavus. The extracts were prepared using fresh, lyophilized, and air-dried leaves, different extraction times, and different solvents, such as methanol, ethanol, water at room temperature, and water at 60ºC. To measure the antifungal potential, the poisoned food technique was used in PDA medium, and the radial growth of the fungus was evaluated for six days. The percentage of inhibition was assessed by comparing the measurements of the radial growth diameter of the fungus in the extracts with the control plates containing only the solvents. The essential oil of E. staigeriana was used as a positive control. The methanolic extracts presented the best antifungal potential, followed by the ethanolic and aqueous extracts. The use of fresh leaves was the best type of preparation and no statistically significant difference between 1-h and 24-h solvent extraction was found, indicating the 1-h extraction process as the most feasible. The extract presenting the best performance using the microwell technique had the minimum inhibitory concentration (MIC) measured, and the fungal growth was monitored by fluorescence derived from the fungal esterase reaction with fluorescein diacetate. The extract that achieved the best result the methanolic extract, with 1-h extraction from lyophilized leaves of E. staigeriana, and the MIC was 26.75 L/mL, while the essential oil was 12.5 L/mL, demonstrating the relative efficiency of the solvent extraction and its practicality and easy implementation when compared with the extraction of essential oils.

A novel chromatographic method was devised that makes use of the superb group separation power of normal phase supercritical fluid chromatography (SFC) combined with a fast second separation by a resistively heated gas chromatograph (GC). The SFC was operated isothermally with stopped flow to provide the time required for the GC analysis. The GC analysis had a typical cycle time of 1 minute. During this time the GC column was independently heated at a rate of 450°C/min to 250°C and actively cooled down again to -50°C before the next GC injection takes place. This was achieved with an in-house designed, resistively heated, temperature programmable gas chromatograph. Various temperature measurement circuits were also evaluated. An interface was developed that allows transfer between the SFC and the GC in such a way that the entire eluent from the first separation is analysed by the second separator. Chromatographic resolution was not lost during the transfer process from the first to the second separation stages. The interface also allows for the exchange of the carrier gas used in the second gas chromatographic separation to provide for the maximum separation speed. In the first separation, a silica gel packed column and the novel application of a silica gel porous layer open tubular capillary column was used for SFC group separation. The SFCxGCftp was applied to petrochemical samples and essential oils and the results were compared to that obtained with a commercially available GCxGC system. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2003. / Chemistry / unrestricted

Les problèmes d’hyperpigmentation cutanée sont caractérisés par l’apparition de taches brunes foncées, distribuées irrégulièrement sur la peau, généralement sur les zones photo-exposées. Ce problème largement répandu est la conséquence de plusieurs perturbations cutanées d’une ampleur autant physiologique qu’esthétique. Les rayonnements ultraviolets (UV) jouent un rôle important dans la mélanogenèse mais sont aussi à l’origine de plusieurs dérèglements physiologiques des mélanocytes induisant ainsi leur mal-fonctionnement.L’application d’un écran solaire est un moyen très efficace pour la protection contre les UV et la prévention des problèmes d’hyperpigmentation cutanée. Pour la première fois, nous avons pu mettre en place une nouvelle méthode in vitro pour la détermination du facteur de protection solaire (SPF) d’un écran en utilisant le film Gafchromic® EBT3 comme substrat et en se basant sur le changement de couleur du substrat. La variation de couleur est évaluée par spectroscopie ultraviolet-visible et est rapportée à l’absorbance du film après son exposition à un simulateur de soleil.En plus, nous nous sommes intéressés à la recherche de principes actifs extraits de plantes pour la régulation des problèmes d’hyperpigmentation cutanée. Pour ce, des huiles essentielles (HE) ont été extraites à partir de cinq plantes indigènes ou endémiques au Liban et leur composition analysée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS). Leurs effets moléculaires sur les structures cutanées ont été déterminés par analyses in tubo et in vitro. Les analyses enzymatiques in tubo ont permis de détecter une activité anti tyrosinase importante des deux HE d’Origanum syriacum et Origanum ehrenbergii. Cette activité a été liée à la composition phytochimique de chaque HE et a été attribuée au composé majoritaire, le carvacrol. Les études in vitro sur des cultures de mélanocytes ont permis de déterminer une diminution significative de la production de la mélanine en présence des HE et du carvacrol. Nous avons pu établir un lien entre les deux études pour déterminer le mécanisme d’action du carvacrol. Il s’agit d’une inhibition compétitive où le carvacrol se lie à la tyrosinase pour suivre une série d’oxydations enzymatiques bloquant ainsi l’oxydation de la tyrosine et causant un dérèglement de la mélanogenèse.Notre étude est la première à démontrer l’activité anti tyrosinase des HE d’O. syriacum et d’O. ehrenbergii. La complémentarité entre les tests d’efficacité et les analyses GC-MS nous a permis d’attribuer l’activité anti tyrosinase au carvacrol qui agit par inhibition compétitive.Ainsi, l’application de protecteur solaire associée à l’application cutanée de régulateurs de la mélanogenèse pourrait être une solution efficace pour les problèmes d’hyperpigmentation cutanée. / Hyperpigmentation disorders are characterized by an irregular distribution of dark spots on the skin, mainly on photo-exposed skin areas. This widespread problem is the result of several skin disorders leading to many physiological and aesthetic perturbations. Ultraviolet (UV) radiations play an important role in melanogenesis. However, they are also the source of several physiological disorders that induce a malfunctioning of melanocytes.The application of sunscreen is a very effective UV protection method and it is considered a main factor in the prevention of skin hyperpigmentation problems. One of the novelties in our research is that, for the first time, we were able to establish a new in vitro method for the determination of the sun protection factor (SPF) of a sunscreen, using EBT3 Gafchromic® film as a substrate. Our method relied on the color change of the substrate that was evaluated by UV-visible spectrophotometric measurements and valued by the absorbance of the film exposed to a solar simulator.In addition, we were interested in discovering new plant-derived active ingredients for the regulation of skin hyperpigmentation disorders. For this process, five essential oils (EO) of indigenous or endemic plants to Lebanon were extracted and their composition was studied by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). We studied as well their molecular effects on cutaneous structures by in tubo and in vitro analysis. In tubo enzymatic analysis allowed us to identify an important anti tyrosinase activity of the two EO of Origanum syriacum and Origanum ehrenbergii. This activity was linked to the phytochemical composition of the EO and was assigned to the presence of their main component, carvacrol. In vitro cell cultures of melanocytes enabled us to determine a significant reduction in the melanin production in the presence of the EOs and carvacrol. Furthermore, we were able to define the mechanism of action of carvacrol by linking both in tubo and in vitro studies: carvacrol binds to tyrosinase and undergoes a series of oxidation reactions, thus preventing the oxidation of tyrosine. This mechanism is called competitive inhibition and it disturbs the regular pathway of melanogenesis.Our study is the first to demonstrate the anti tyrosinase activity of the EO of O. syriacum and O. ehrenbergii. The complementarity between efficacy tests and the phytochemical GC-MS analysis was our tool to discover that tyrosinase inhibition is mainly due to the presence of carvacrol that acts by competitive inhibition.Thus, the application of a sunscreen paired with the application of cutaneous melanogenesis regulator could be an effective solution for skin hyperpigmentation disorders.