The work carried out during this Thesis is framed within the field of Numerical Cosmology and focused on several broad lines intimately related which deal with the theoretical and numerical study of galaxy clusters: (i) the halo-finding problem, (ii) new improvements in cosmological simulations, and (iii) the formation and evolution of galaxy clusters. In spite of the achievements reached by Computational Cosmology in the last years, present-day hydrodynamics/N-body simulations still present important discrepancies with the observations, especially in the inner regions of massive galaxy clusters. Among these discrepancies we can cite, for instance, the breaking up of the self-similar scaling relations or the cooling flow problem. These discrepancies have motivated the idea that, besides gravity and adiabatic gas dynamics, non-gravitational processes related with the baryonic component of the Universe need to be included in our simulations. Within this context, in a complementary way to the different non-gravitational processes being included in simulations, it is crucial to properly describe different gravitational processes inherent to the hierarchical formation of cosmic structures itself. In this sense, the objective of the present work is to describe, in a consistent way, some of the heating processes associated with the hierarchical evolution of galaxy clusters in a full cosmological context. To identify the different cosmological structures and analyse their evolutionary histories, an Eulerian cosmological code and a grid-based halo finder have been used. The cosmological code used during this Thesis, MASCLET (Quilis, 2004), is an Eulerian code based on an adaptive mesh refinement (AMR) scheme able to model the coupled evolution of the dark matter and the baryonic components of the Universe. To analyse the outputs of these complex simulations, a new halo finder based on the spherical overdensity method (SO) has been developed (ASOHF, Planelles & Quilis, 2010). This finder allows us to extract the dark matter haloes (numerical counterpart of galaxies and galaxy clusters) and analyse, in a precise way, their main physical properties. Making use of these numerical tools, MASCLET and ASOHF, the role played by galaxy cluster mergers, as well as by the cosmological shock waves developed during these events, as sources of heating of the intracluster medium (ICM) has been analysed in a full cosmological context. In order to do so, two simulations have been performed with the MASCLET code. In these simulations, the unique relevant feedback mechanism considered is the gravitational, that is, the inherent to the hierarchical evolution of the Universe. Analysing these simulations it has been demonstrated that galaxy cluster mergers and cosmological shock waves play a crucial role, not only on galaxy cluster properties, but on the thermalization of the ICM. In particular, it has been demonstrated that galaxy cluster mergers have a direct influence on the existence of cool cores in the centre of massive galaxy clusters as well as on the scatter observed in the self-similar scaling relations (Planelles & Quilis, 2009). On the other hand, shock waves are also crucial in galaxy cluster properties contributing very efficiently to the virialization of haloes and the thermalization of the Universe. Moreover, it has been observed that the strength of shocks within the virial radius of galaxy clusters shows some correlation with their virial masses, being directly related with their dynamical histories. / La presente Tesis se centra en varias líneas de investigación íntimamente relacionadas que tratan con el estudio teórico y numérico de los cúmulos de galaxias: (i) el problema de encontrar los halos de materia oscura, (ii) nuevas mejoras en simulaciones cosmológicas y, (iii) la formación y evolución de los cúmulos de galaxias. Las simulaciones hidrodinámicas/N-cuerpos actuales todavía presentan importantes discrepancias con las observaciones, especialmente en las regiones internas de los cúmulos de galaxias más masivos. Entre estas discrepancias podemos citar, por ejemplo, la ruptura de las relaciones de la escala auto-semejantes o el problema de los flujos de gas frío. Estas discrepancias han motivado la idea de que, además de gravedad y dinámica de gases adiabática, procesos no gravitacionales relacionados con la componente bariónica del Universo deben ser incluidos en las simulaciones. En este contexto, de forma complementaria a diferentes procesos no gravitacionales, es crucial describir de forma adecuada los distintos procesos gravitacionales inherentes a la propia formación jerárquica de la estructuras cósmicas. En este sentido, el objetivo del presente trabajo es describir, de forma auto-consistente, algunos de los procesos de calentamiento asociados a la propia evolución jerárquica de los cúmulos de galaxias en un contexto puramente cosmológico. Para ello, se ha hecho uso de un código cosmológico euleriano (MASCLET, Quilis, 2004) y un buscador de halos basado en el método de sobredensidad esférica (ASOHF, Planelles y Quilis, 2010). Haciendo uso de estos códigos, se ha analizado el papel que juegan las fusiones de cúmulos de galaxias y las ondas de choque generadas durante estos eventos como fuentes de calentamiento del medio intracúmulo en un contexto puramente cosmológico. En este sentido, se ha comprobado que las fusiones de cúmulos de galaxias influyen directamente en la existencia de núcleos fríos en el centro de los cúmulos más masivos, así como en la dispersión observada en las relaciones de escala auto-semejantes (Planelles y Quilis, 2009). Por otra parte, también se ha comprobado que las ondas de choque contribuyen eficientemente a la virialización de los halos y a la termalización del Universo.

In the last decade have appeared in the Spanish market new products based on mixtures of fruit juices and milk as well as beverages mixtures of fruit and/or vegetables, which have a good acceptance by consumers and with a high nutritional value largely due to its high content in bioactive compounds as well as antioxidant capacity. Traditionally, liquid food such as fruit and/or vegetables juices, as well as milk, have been preserved by thermal treatment such as pasteurization and sterilization. However these processes can cause loss of compounds responsible for the organoleptic and nutritional quality of food. Currently there is a growing demand by the consumer for minimally processed food and which in turn are safe from the microbiological point of view, a fact that is driving the development of new conservation methods. Nonthermal processes such as high hydrostatic pressure, pulsed electric fields and ultrasound, which can be used with this goal without affecting the quality of food. Although the effectiveness of these treatments is known for safe food, is now when is possible to produce the greater technological advances for it to marketing. In the present doctoral thesis, the main objective is to establish the conditions of nonthermal processing to obtain beverages with a high content in bioactive compounds as well as antioxidant capacity. In addition it is important to compare the effects of these treatments on the organoleptic and nutritional characteristics, with those occurring after the implementation of a traditional heat treatment. Subsequently, also it was studied the degree of permeability of the cell membranes of blueberries using the extent of the impedance, to optimize the parameters of processing and use thermal and nonthermal processing in the extraction of bioactive compounds with antioxidant capacity. / En la última década han aparecido en el mercado español nuevos productos basados en mezclas de zumos de frutas y leche así como bebidas mezclas de vegetales, que presentan una buena aceptación por parte del consumidor y con un gran valor nutricional, debido en gran parte a su alto contenido en compuestos bioactivos así como capacidad antioxidante. Tradicionalmente los alimentos líquidos como zumos de fruta y/o vegetales, así como la leche, han sido conservados mediante técnicas por calor como la esterilización. Sin embargo estos procesos pueden provocar una pérdida de compuestos responsables de la calidad organoléptica y nutricional de los alimentos. Actualmente existe una demanda creciente por parte del consumidor de alimentos mínimamente procesados y que a la vez sean seguros desde el punto de vista microbiológico, hecho que está impulsando el desarrollo de nuevos métodos de conservación. Procesos no térmicos como las altas presiones hidrostáticas, pulsos eléctricos de alta intensidad y ultrasonidos, pueden utilizarse con este objetivo sin que se vea afectada la calidad de los alimentos. Aunque la eficacia de estos tratamientos se conoce para obtener alimentos seguros, es ahora cuando se están produciendo los mayores avances tecnológicos para hacer posible su comercialización. En la presente tesis doctoral, el objetivo principal es establecer las condiciones de procesado no térmico para obtener bebidas con un alto contenido en compuestos bioactivos así como capacidad antioxidante. Además se comparan los efectos de estos tratamientos sobre las características nutricionales y organolépticas con los que se producen tras la aplicación de un tratamiento térmico tradicional. Posteriormente, se estudia el grado de permeabilidad de las membranas celulares de arándanos utilizando la medida de la impedancia, para optimizar los parámetros del procesamiento y poder utilizar los tratamientos térmicos y no térmicos en la extracción de compuestos bioactivos con capacidad antioxidante.

En la presente Tesis Doctoral se han abordado dos objetivos: el estudio de la contribución de la enzima convertidora (ECA) frente a la quimasa mastocitaria en la acumulación leucocitaria inducida por la síntesis endógena de Ang-II in vivo, y el estudio del papel de fractalquina (FRK) en la inflamación sistémica inducida por el extracto de humo de tabaco (EHT). La enzima convertidora de la angiotensina (ECA) es la principal enzima implicada en la formación de Ang-II a partir de Ang-I. Sin embargo, estudios realizados in vitro sugieren que la quimasa mastocitaria es más importante que la ECA en la síntesis de Ang-II en el sistema cardiovascular. Nosotros hemos demostrado que Ang-I induce interacciones leucocito-endotelio en la microcirculación cremastérica de ratón a través de la síntesis de Ang-II mediada por la ECA. El compuesto 48/80 (CMP48/80), desgranulador mastocitario, parece también generar Ang-II pero a través de la liberación de quimasa mastocitaria. Al administrar Ang-I+CMP48/80, se observa aumento de las interacciones leucocito-endotelio superior a la observada con los estímulos por separado, de la expresión del receptor AT1B y de quimasa alrededor de la pared del vaso. Estos resultados junto con la utilización de inhibidores selectivos así como ratones deficientes en mastocitos, sugieren que ambas vías contribuyen a la formación de Ang-II in vivo. Por tanto parece que el empleo de antagonistas de receptores AT1 de Ang-II sea la aproximación clínica más adecuada para inhibir el proceso inflamatorio inducido por Ang-II cuando ambas vías están activadas. El humo de tabaco (HT) ha sido implicado en el desarrollo de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) caracterizada por inflamación pulmonar y sistémica. La FRK (CX3CL1), podría estar relacionada con la acumulación de leucocitos mononucleares en tejidos distantes del pulmón en pacientes con EPOC. La exposición aguda de ratones a HT produjo una moderada inflamación pulmonar e indujo un claro aumento de la adhesión leucocitaria en las vénulas y arteriolas cremastéricas del ratón. La expresión de FRK manifestó un claro papel funcional en arteriolas. En células humanas, la expresión de FRK aumentó en HUAEC pero no en HUVEC expuestas a extracto de HT la cual fue acompañada de acumulación de leucocitos mononucleares, indicando diferencias funcionales entre ambos endotelios. Estos efectos parecen estar mediados por la activación de la NADPH oxidasa y otras vías de señalización redox-sensibles así como por la liberación de TNFalfa. Por tanto, el HT induce expresión de FRK y tanto FRK como su receptor parecen jugar un papel importante en la inflamación sistémica asociada a EPOC. / Angiotensin converting enzyme (ACE) is the main enzyme implicated in generation of Ang-II from Ang-I. In vitro studies suggest that mast cell chymase (MCP) is more important than ACE for generating angiotensin-II (Ang-II) within the cardiovascular system. We investigated in vivo the relative contributions of ACE and MCP to leukocyte recruitment induced by endogenously generated Ang-II. We have demonstrated that Ang-I induces leukocyte-endothelium interactions in the cremasteric microcirculation through ACE-mediated Ang-II generation. CMP48/80 also generates Ang-II but it is mediated by MCP release. When Ang-I+CMP48/80 were co-administered, the leukocyte-endothelium interactions were higher than those observed when each stimulus was administered separately. In addition, AT1B receptor expression was increased and MCP-4 was found surrounding the vessel wall but ACE was detected in the endothelium. These results, together with the results obtained using selective inhibitors and knockout mice, suggest that both pathways contribute to Ang-II generation in vivo. Thus, AT1 receptor antagonists may be more effective than ACE inhibitors for treating on-going Ang-II-mediated vascular inflammation when both pathways are activated. Cigarette smoke (CS) has been implicated in the development of Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD), which is characterized by pulmonary and systemic inflammation. Fraktalquine (FRK) or CX3CL1, could be related to mononuclear leukocyte recruitment in distant tissues from lungs in COPD patients. Acute CS exposure in mice caused moderate pulmonary inflammation and induced an increase in leukocyte arterial and venular adhesion in the cremasteric microcirculation of mice. FRK expression showed a clear functional role in arterioles. FRK expression was accompanied by an increase of mononuclear leukocytes in Human Umbilical Endothelial Cells from arterioles (HUAEC), but not in cells from venules (HUVEC). This suggests functional differences between the two endothelia types. These effects appeared to be mediated through the activation of NADPH oxidase and other redox-sensitive signalling pathways such as p38 MAPK, ERK1/2 and NFқB and the release of TNFalfa. Therefore, CS induces FRK expression and FRK and its receptor appear to play an important role in systemic inflammation associated to COPD.

Esta Tesis se enmarca en la teoría sobre valoración de activos financieros y su objetivo principal es investigar y cuantificar los factores de riesgo que intervienen actualmente (enero 1993-diciembre 2004) en la valoración de los activos españoles desde una perspectiva doméstica (considerando tan sólo la inversión en el mercado bursátil español), e internacional (bajo el supuesto de un mercado bursátil integrado en el que se incluyen los activos financieros negociados en la Zona Euro y en el Reino Unido). El análisis conjunto e integrado de los resultados empíricos permite exponer cuáles son los factores que están interviniendo en la valoración de los activos desde los contextos nacional y europeo, y cuantificar los errores económicos de una valoración exclusivamente doméstica, que no considera los efectos de la apertura de nuestro mercado hacia el exterior, y de una valoración exclusivamente internacional, que asume que los mercados español y del resto de los países de la zona euro y Reino Unido está completamente integrado. Los principales resultados de esta Tesis son los siguientes. Desde una perspectiva doméstica, el modelo de tres factores de Fama y French (1993) es el modelo que mejor describe los rendimientos de sección cruzada de activos españoles, siendo el impacto económico conjunto de los factores tamaño y ratio book-to-market significativo en 4 (sobre 6) carteras sectoriales y de 9 (sobre 9) carteras agrupadas por tamaño y ratio book-to-market. Aunque, dada la externalización del mercado español hacia Europa, una valoración exclusivamente doméstica supone la sobrevaloración significativa de 3 (sobre 6) carteras sectoriales y de 8 (sobre 9) carteras agrupadas por tamaño y ratio, y la infravaloración de 1 cartera sectorial y 1 cartera agrupada por tamaño y ratio. Desde una perspectiva internacional, los mercados de capitales europeos pagan una prima significativa por los riesgos de tipo de cambio e inflación, y el impacto económico de estas primas se ha incrementado con la adopción de la moneda única. Una valoración basada en el modelo ICAPM supone la infravaloración significativa de 2 (sobre 10) carteras sectoriales por efecto de la premia asociada al tipo de cambio en el periodo pre-euro, y la infravaloración significativa de 7 (sobre 10) carteras sectoriales por los efectos de premias de inflación y tipo de cambio y de 1 (sobre 9) cartera de la agrupación por tamaño y ratio por efecto de la premia de tipo de cambio en el periodo post-euro. Es interesante señalar, que la evolución temporal de la prima de inflación durante el periodo post-euro explica (en parte) la prima de riesgo doméstica y, por lo tanto, podemos decir que la inflación es un indicador de los riesgos de no-integración que, además, tiene impacto sobre el nivel de integración futuro. En términos económicos, la valoración exclusivamente internacional supone la sobrevaloración significativa de 3 (sobre 10) carteras sectoriales y de 3 (sobre 9) carteras agrupadas por tamaño y ratio. / This thesis is framed in the theory of asset pricing and its main aim is to investigate and quantify the risk factors involved in pricing assets both from a domestic perspective (considering only the investment in the Spanish stock market) and from an international one (under the assumption of an integrated stock market which includes the Euro Zone and the United Kingdom) for the period from January 1993 to December 2004. The integrated analysis of the empirical results enable us to show the factors that are intervening in the pricing of assets from a national and European point of view, and to quantify the economic error of a valuation purely domestic, which does not consider the effects of opening of our market to the outside, or one exclusively international, which assumes that the Spanish and the rest of the countries of the Euro Zone and United Kingdom are fully integrated. The main results are as follows. From a domestic perspective, the three-factor model of Fama and French (1993) is the model that best describes the cross-sectional returns. However, due to the opening of the Spanish stock market to Europe and the relevance of an international significant premia, a domestic valuation implies overestimate/underestimate significantly 3 (of 6) sector and 8 (of 9) size-book portfolio excess returns. From an international perspective, European capital stock market pays a significant premium for the exchange rate and inflation risks and the economic impact of these premiums have increased with the adoption of the single currency. A valuation exclusively based on the ICAPM model implies overestimate/underestimate significantly some portfolios excess returns. Moreover, the dynamics of the inflation and currency risk premium in the post-euro explains in part the domestic risk premium and, therefore, the inflation is not only an indicator of the risks of non-integration but also does it have an impact on the level of future integration.

Brian Friel es un dramaturgo norirlandés nacido en 1929. Su obra dramática abarca cinco décadas caracterizadas por la violencia sectaria en Irlanda del Norte. Esta tesis muestra una panorámica de la obra dramática de Friel desde su primer éxito comercial, Philadelphia, Here I Come! de 1964, hasta su última obra dentro del siglo XX, Give Me Your Answer, Do, de 1997, dividida en cuatro etapas. Así mismo se aporta la presentación de la recepción de Friel en España, puesto que una investigación sobre un autor teatral que trata temas tan candentes en nuestra sociedad como el de la imposición de una lengua y una cultura ajenas sobre la lengua y la cultura propias, no puede limitarse a su dramaturgia. Se ha estudiado desde la primera obra que se tradujo en España: Traduccions, de Josep Mª Balanyà, en 1984; hasta la primera obra de Friel representada en Valencia: Molly Sweeney, en 2005, a cargo de la compañía Micalet Teatre. La investigación consta de tres bloques: En primer lugar se contextualiza al autor en su nación, entendiendo como tal tanto Irlanda como Irlanda del Norte; y en el teatro irlandés. Esto permite comprender las diferentes etapas por las que atraviesa la dramaturgia de Friel, quien forma parte de la minoría del Ulster, pero es también ciudadano de la República. La turbulenta historia de Irlanda, ex-colonia del Reino Unido, el conflicto en el Norte, conocido como “the Troubles” y los ineludibles cambios políticos, lingüísticos y culturales que han tenido lugar, influyen de forma determinante en el teatro de Friel. Se presenta también un recorrido por la evolución de la dramaturgia en Irlanda, desde el renacimiento que supuso la fundación de la “National Theatre Society” en 1903 hasta nuestros días, lo que permite observar las influencias que han ejercido otros dramaturgos sobre su obra, así como la importancia que Friel ha ido adquiriendo como ascendente de autores contemporáneos. En segundo lugar se aborda el estudio de sus obras dramáticas, para lo cual, dada la gran variedad de temas culturales, políticos y filosóficos por los que se interesa el autor a lo largo de estas cinco décadas, se ha optado por una perspectiva lo más ecléctica y amplia posible. De especial relevancia son aquí las corrientes críticas poscolonialistas y los aspectos históricos de la memoria: el estudio de la formación de memorias individuales y colectivas en situaciones de conflicto. Se han rastreado también las fuentes en las que Friel se ha inspirado para cada obra: After Babel de George Steiner, La Vida de Oscar Lewis, las publicaciones sobre rituales y “communitas” de Victor Turner, las ideas filosóficas de Ludwig Wittgenstein, etc. Así mismo se recoge la abundante crítica que el mundo académico en lengua inglesa lleva publicada desde 1970. En el tercer y último bloque se trata el aspecto de la repercusión del autor en España. El trabajo de campo incluye entrevistas a directores, productores, actores, traductores, y jefes de prensa de las diferentes producciones. Además de visitas a hemerotecas de Madrid y Barcelona, la biblioteca del Institut del Teatre, y también la red, para extraer la crítica publicada en medios digitales. Se presenta un estudio de las traducciones utilizadas así como de los motivos que llevaron a los implicados a elegir los textos y la forma en que se han llevado a escena. Para cada obra se ha elaborado la ficha técnica y artística. Por último se han analizado las críticas de que han sido objeto las distintas representaciones. / This research shows a view of the drama of Brian Friel (Omagh, Northern Ireland, 1929) from his first successful play, Philadelphia, Here I Come! (1964) to his last twentieth century play, Give Me Your Answer, Do (1997), classified into four stages. We can also find an introduction to Friel’s drama reception in Spain, from the first Spanish translation, Josep Mª Balanyà’s Traduccions (1984), to the first presentation in Valencia, Molly Sweeney (2005), by the company Micalet Teatre. The work consists of three parts: First, the playwright is contextualized in his nation (meaning with this both the Republic and Northern Ireland), and in the Irish theatre. The violent history of Ireland, a former British colony, and the Northern conflict – known as “the Troubles” – as well as the political, linguistic and cultural changes that have taken place during the last centuries on this island, have a decisive influence upon Friel’s drama and must be considered in any comprehensive analysis. Then this study deals with Friel’s plays, making use of the postcolonial, anthropological and historical approaches, mainly in the context of the formation of the individual and collective memory in troubled situations. The sources which inspired the author in each play have also been traced: George Steiner, Oscar Lewis, Victor Turner, Wittgenstein, etc. Furthermore, we can find here the criticism which the playwright has inspired in the academic environment since 1970. Friel’s repercussion in Spain is studied in the last section of this research. The field work includes interviews with directors, producers, actors, translators and press officers of the different productions. The translations used in them are analysed, as well as the criticism originated by the performances

INTRODUCCIÓN: La endometriosis, definida como la presencia de tejido endometrial fuera del útero, es una de las enfermedades ginecológicas benignas más frecuentes. La endometriosis es una entidad multifactorial y poligénica en la que tanto factores endometriales como peritoneales, relacionados con los sistemas de activación del plasminógeno (PA) y de las metaloproteasas (MMPs) y la angiogénesis, pueden estar implicados en esta enfermedad. OBJETIVO: Analizar los niveles de mRNA y proteína de factores angiogénicos (factor de crecimiento del endotelio vascular, VEGF-A y trombospondina-1, TSP-1) y componentes de los sistemas PA (uroquinasa, uPA; inhibidor del PA tipo 1, PAI-1) y de las MMPs (MMP-3; inhibidor de MMPs de tipo 1, TIMP-1) en tejido endometriósico y endometrio de mujeres con y sin endometriosis. También se estudiaron los niveles proteicos de estos componentes en el líquido peritoneal (LP) de pacientes y controles. Por otra parte, se estudiaron los polimorfismos 4G/5G del gen del PAI-1, 5A/6A del gen de la MMP-3 y tres polimorfismos funcionales del gen del VEGF-A (-460C/T, +405G/C y 936C/T) en pacientes y controles y se analizó la influencia de estos polimorfismos en la expresión de PAI-1, MMP-3 y VEGF-A en tejido endometrial y LP. Por último, se evaluó la influencia del LP sobre la expresión de factores proteolíticos y angiogénicos en cultivos de células endometriales procedentes de pacientes y controles. MÉTODOS: Los niveles de mRNA se cuantificaron mediante qRT-PCR en tiempo real y los niveles proteicos mediante ELISA. El polimorfismo 4G/5G del gen del PAI-1 se evaluó mediante PCR con cebadores específicos de alelo. El polimorfismo 5A/6A de la MMP-3 y los polimorfismos del VEGF-A se determinaron mediante PCR-RFLP. Por último, se aislaron y cultivaron células endometriales (de pacientes y controles) y se trataron con LP de pacientes y controles. Posteriormente, se evaluaron los niveles de mRNA y proteína de los factores estudiados. RESULTADOS y CONCLUSIONES: El endometrio y el LP de las mujeres con endometriosis mostró unos niveles de uPA, MMP-3 y VEGF-A superiores a los controles. Este incremento puede facilitar la adhesión del tejido endometrial al peritoneo y ovario, la invasión de la matriz extracelular y la angiogénesis, contribuyendo a la formación de las lesiones endometriósicas tempranas. El tejido endometriósico ovárico mostró unos niveles superiores de PAI-1, TIMP-1 y TSP-1 que el endometrio, lo que podría explicar la presencia del quiste endometriósico con ausencia de invasión al tejido ovárico adyacente. Las frecuencias genotípicas y alélicas del polimorfismo 4G/5G del gen del PAI-1 no difieren entre pacientes y controles, aunque los niveles de PAI-1, en tejido endometrial y LP de controles, parecen estar asociados con este polimorfismo. Las pacientes mostraron una mayor frecuencia del alelo 936T, del gen del VEGF, que los controles. Sin embargo no se encontraron diferencias en la distribución de frecuencias genotípicas y alélicas en los otros dos polimorfismos del VEGF-A (-460C/T, +405G/C) entre pacientes y controles. Estos hallazgos sugieren que el polimorfismo 936C/T puede estar asociado con el riesgo de padecer endometriosis, aunque el incremento en los niveles de VEGF-A, observado en las mujeres con endometriosis, no parece estar asociado con ninguno de los polimorfismos estudiados. Por último, el LP de las mujeres con endometriosis indujo un incremento en los niveles de uPA y VEGF-A en cultivos de células endometriales de pacientes y controles. Los mayores niveles de uPA y VEGF-A se observaron en cultivos de células endometriales de pacientes tratados con LP de mujeres con endometriosis. Por tanto, el LP induce, en las células endometriales, una mayor expresión de factores proteolíticos y angiogénicos que pueden contribuir al desarrollo de las lesiones endometriósicas. / INTRODUCTION: Endometriosis, defined as the presence of endometrium outside the uterus, is one of the most frequent benign gynaecological diseases. It is a multifactorial and polygenic entity in which both endometrial and peritoneal factors, related to plasminogen activator and matrix metalloproteinase systems and angiogenesis, can be implicated. OBJETIVE: To analyze mRNA and protein levels of angiogenic and proteolytic factors in endometriotic and endometrial tissues from patients and controls. The protein levels were also studied in peritoneal fluid (PF). PAI-1 4G/5G, MMP-3 5A/6A and VEGF-A -460C/T, +405G/C and 936C/T polymorphisms were evaluated. Finally, the influence of PF on proteolytic and angiogenic factor expression in endometrial cell cultures (ECCs) was evaluated. METHODS: mRNA and protein levels were quantified by real-time qRT-PCR assay and ELISA, respectively. PAI-1 4G/5G polymorphism was determined by allele–specific PCR. MMP-3 5A/6A and VEGF polymorphisms (-460C/T, +405G/C, and 936C/T) were determined using a PCR-RFLP assay. Finally, ECCs were treated with PF from patients and controls. RESULTS and CONCLUSIONS: Endometrium and PF from patients showed higher uPA, MMP-3 and VEGF-A levels than controls. This increase may facilitate the attachment of endometrial tissue to the peritoneum and ovarian surface. This process would lead to the formation of early endometriotic lesions. Ovarian endometrioma had higher PAI-1, TIMP-1 and TSP-1 levels than endometrium, which could explain the finding of one endometrioma without adjacent tissue invasion. The PAI-1 4G/5G genotypes and allele frequencies did not differ between patients and controls. However, endometrial and peritoneal PAI-1 levels seem to be associated with PAI-1 4G/5G polymorphism in controls. Patients showed a higher VEGF 936T allele frequency than controls. These findings suggest that the VEGF 936C/T polymorphism may be associated with the risk of endometriosis. Finally, PF induced an increase in uPA and VEGF-A levels in ECCs. The highest levels were observed in ECCs from patients with endometriosis treated with PF from women with endometriosis. So, PF induces a higher expression of proteolytic and angiogenic factors in EECs, which could contribute to the development of endometriotic lesions

El cierre dorsal (CD) es uno de los últimos procesos morfogenéticos de la embriogénesis de Drosophila y que consiste en el cierre del agujero más dorsal que presenta el embrión durante el estadio 13 de su desarrollo. Para ello, las capas epiteliales laterales migran mientras que la amnioserosa se contrae e invagina. Este proceso necesita de la coordinación de la epidermis, la amnioserosa y el vitelo, así como de reestructuraciones en el citoesqueleto celular, la polarización de las células epidérmicas más dorsales, la formación de filopodios y lamelipodios y la activación de rutas de transducción de señal como la de las JNKs. El CD es el proceso más estudiado de la extensión y fusión de epitelios y comparte muchas similitudes con el proceso de curación de heridas en vertebrados. cabut (cbt), es un gen que codifica un factor de transcripción necesario para que se produzca el CD. cbt se expresa en la epidermis y el vitelo actuando bajo el control de las JNKs y regulando la expresión del gen decapentaplegic en el leading edge. Las proteínas ortólogas a Cbt en vertebrados pertenecen a la familia de factores de transcripción TIEG, que han sido descritos como inhibidores de la proliferación celular y asociados a diferentes tipos de procesos cancerosos. Cbt está relacionado con otros procesos como el ciclo circadiano, la regeneración de discos imaginales, el control del ciclo celular, el crecimiento celular, la remodelación neuroendocrina y la respuesta a la ecdisona la guía de axones y sinaptogénesis. En esta tesis doctoral se han generado diferentes herramientas genéticas, bioquímicas e inmunológicas para poder realizar diferentes aproximaciones que nos lleven a dilucidar cuales son las funciones de Cbt durante el desarrollo embrionario así como sus dianas transcripcionales y cuales son los dominios funcionales responsables de su actividad. Para ello se generó un anticuerpo que reconoce de forma específica a Cbt y se realizaron ensayos de Inmunodetección así como de Inmunoprecipitación de cromatina (ChIP‐on‐chip). Esto ha permitió realizar un estudio amplio del patrón de expresión embrionario de la proteína, tanto durante el CD como en otros estadios del desarrollo, demostrando que Cbt no solo se expresa en los núcleos de la epidermis, el vitelo y el intestino posterior durante el CD, sino también en los núcleos de la amnioserosa a través de la ruta de las JNKs. Además se han descrito nuevos patrones de expresión de Cbt en embriones tempranos, en el sistema nervioso central y periférico embrionario‐larvario sugiriendo nuevas funciones de esta proteína. A nivel estructural y mediante ensayos en cultivo celular, se ha determinado que la señal de transporte al núcleo de Cbt se encuentra en el N‐terminal y corresponde al motivo 71PNKKPRL77, siendo imprescindibles para este transporte las lisinas K73K74. Además, se ha podido determinar que, al igual que las proteínas TIEG, Cbt puede actuar como activador y/o represora de la transcricpión. Por último, mediante microarrays en embriones mutantes cbt durante el CD, hemos demostrado que la expresión de Cbt en la epidermis está regulada por la ruta de señalización de la ecdisona y que, a su vez, Cbt regula la expresión de más de 1000 genes entre los que se encuentran Tm2, InR, fas y los genes inducibles por ecdisona ImpE1 e ImpL1. Asímismo, los ensayos de ChIP‐on‐chip han mostrado que Cbt es capaz de unirse a varias regiones genómicas entre las que se encuentran su propio promotor y el promotor del gen NPC1a, implicado en el tráfico de lípidos. Estos resultados sugieren que la ecdisona está implicada en el CD, a través de Cbt, y que el transporte de lípidos podría tener un papel importante en el mismo / cabut (cbt) encodes a transcription factor involved in Drosophila dorsal closure (DC), and it is expressed in embryonic epithelial sheets and yolk cells during this process upon activation of the Jun N-terminal kinase (JNK) signaling pathway. Additional studies suggest that cbt may have a role in multiple developmental processes, such as neuroendocrine cell remodeling, ecdysone response, circadian rhythm, axon guidance, synaptogenesis, cell growth and cell cycle. The vertebrate orthologes of Cbt, the family of TIEG transcription factors, are involved in proliferation and cancer. In this thesis, we have generated different genetic, biochemical and immunological tools for the study of the function of Cbt during fly development, its transcriptinal targets and the structural domains responsible for its function. To analyze Cbt subcellular localization throughout embryogenesis, as well as Cbt´s transcriptional targets, we generated a Cbt-specific antibody that allowed us to (1) detect new Cbt expression patterns and (2) perform Chromatin Immunoprecipitation assays followed by microarray analyses (ChIP-on-chip). Immunohistochemical analyses during DC revealed that Cbt is expressed in the yolk, epidermal and amnioserosal cells, which contribute to the DC process. Also, Cbt is expressed in the central and peripheral nervous system. Moreover, cell culture assays have determinated that the 71PNKKPRL77 motif of Cbt functions as a nuclear localization signal (NLS), and that the conserved TIEG´s NLS, is not functional in insects. Direct mutagensis demonstrated that K73 and K74 residues are necessary for Cbt transport to the nucleus. Whole embryo microarray analyses of cbt mutants during DC were performed, and they revealed that Cbt regulates more than 1000 genes during the DC process, such as the 20-hydroxyecdysone hormone (20E)-inducible genes ImpE1 and ImpL1. Indeed, 20E regulates Cbt in the epidermis. Finally, ChIP-on-chip studies showed direct binding of Cbt to genomic regions close to Cbt and NPC1a (Niemann-Pick Type C-1) genes, which regulate trafficking of sterols through endocytic/secretory pathway. Taken together, these results suggest that 20E and lipid trafficking are involved in the DC through Cbt.

La leche materna es el alimento idóneo para satisfacer las necesidades del lactante, durante las primeras etapas de la vida. No obstante, en algunas situaciones se recurre a la alimentación con preparados infantiles, cuya composición en macronutrientes y oligoelementos esenciales (vitaminas y minerales) tiende a ser semejante a la de la leche humana. El ácido siálico y los gangliósidos son componentes bioactivos, presentes en leche que desempeñan un papel fundamental en distintos procesos de reconocimiento celular. Actualmente, con el fin de mejorar la composición de los preparados infantiles, se realizan investigaciones sobre componentes bioactivos esenciales, como ácido siálico y gangliósidos, cuyas cantidades y perfiles difieren entre la leche humana y los preparados infantiles. El objetivo general de esta tesis es conocer la composición en ácido siálico y gangliósidos de preparados infantiles comercializados y compararla con los presentes en leche humana, así como conocer la influencia de la utilización de concentrados proteicos de suero lácteo ricos en estos componentes en preparados infantiles. Para alcanzar este objetivo se ponen a punto y validan dos métodos de determinación de ácido siálico, uno que permite la cuantificación diferenciada de sus formas más abundantes (N-acetil y N-glicolil) por HPLC-fluorescencia y otro que permite la determinación de ácido siálico total por espectrofotmetría de absorción molecular. Atendiendo a los resultados obtenidos, los métodos validados se consideran idóneos para ser aplicados a preparados infantiles y leche humana. Los métodos validados se aplican a la determinación del ácido siálico y gangliósidos en preparados comerciales (para lactantes y de continuación), sueros lácteos a base de -lactoalbúmina y membranas de glóbulos grasos de la leche ricos en ácido siálico y gangliósidos (utilizados en la elaboración de preparados experimentales que contienen estos ingredientes) y leche humana. Los resultados indican que el suero a base de membranas de glóbulos grasos de la leche presenta un mayor contenido de ácido siálico y gangliósidos que el de -lactoalbúmina, con lo que los preparados elaborados con este ingrediente son los que presentan un mayor contenido de ambos componentes bioactivos, si bien sus contenidos son inferiores a los encontrados en la leche humana, y sus perfiles individuales difieren, excepto el perfil de gangliósidos del preparado de continuación experimental. A partir de los contenidos obtenidos de ácido siálico y gangliósidos, en los preparados para lactantes, se calculan sus ingestas diarias; estas no alcanzan las ingestas aportadas por la leche humana durante las primeras semanas de vida (20-30 mg/kg/día vs. 210 mg/kg/día). Se evalúa la bioaccesibilidad de ácido siálico y gangliósidos en la fracción soluble de preparados infantiles y leche humana obtenida tras una digestión gastrointestinal simulada en dos etapas (gástrica e intestinal). La etapa gástrica es la principal responsable de la reducción de la bioaccesibilidad de ambos compuestos, comprobándose que no es debido a una insolubilización de los mismos. En leche humana se obtiene la mayor bioaccesibilidad para el ácido siálico, seguida del preparado para lactantes y de continuación; mientras que en el caso de los gangliósidos el orden, de mayor a menor bioaccesibilidad, corresponde a preparado de continuación, leche humana y preparados para lactantes. Con el fin de iniciar estudios de biodisponibilidad se caracteriza el contenido y perfil de ácido siálico y gangliósidos en la línea celular Caco-2, células diferenciadas y no diferenciadas, evaluándose la citotoxicidad de los principales gangliósidos (GM3 y GD3) a las concentraciones halladas en las fracciones solubles de las muestras analizadas, mediante ensayos de viabilidad celular (azul tripán) e integridad mitocondrial (MTT), no observándose ningún efecto tóxico. / Breast milk is the most suitable food in order to satisfy the needs of the unweaned baby at the earliest stage of its life. However, in some situations infant formulas are used instead. Nowadays, with the aim of improving the composition of infant formulas, research is performed on essential bioactive components, such as sialic acid and gangliosides, whose amounts and profiles differ from human milk and infant formulas, and plays a a fundamental role in different processes of cellular recognition. The main objective of this thesis is to identify the composition of sialic acid and gangliosides in manufactured infant formulas and to compare it with the ones found in human milk, and to discern the influence of the use of whey protein concentrates, rich in components found in infant formulas. Validated methods are applied to the determination of sialic acid and gangliosides in manufacturated preparations (starter and follow-on formulas), whey made of -lactalbumin and milk fat globule membranes rich in sialic acid and gangliosides (utilized in the production of experimental preparations containing these ingredients), and human milk. The results point out that the whey made of milk fat globule membranes presents a higher sialic acid and gangliosides content than the one consisting of -lactalbumin. Therefore, the preparations made with this ingredient are the ones that present a higher content of both bioactive components. However, their contents are lower than the ones found in human milk and their individual profiles differ. Evaluation of the bioaccessibility of sialic acid and gangliosides in the soluble fraction of child food and human milk is performed, both obtained after a two stage simulated gastrointestinal digestion (gastric and intestinal). The gastric stage is the main stage responsible for the reduction of the bioaccessibility of both compounds, showing that it is not due to an insolubilisation of them. In sialic acid the highest bioaccessibility is obtained for human milk, followed by starter formulas and follow-on ones. On the other hand, in the case of gangliosides, the order, from the higher to the lower bioaccessibility, corresponds to the follow-on formulas, human milk and finally, starter formulas

Esta tesis doctoral tiene como punto de partida el estudio del contexto histórico-político de la performance y el surgimiento de movimientos sociales como el feminismo. El marco teórico de esta tesis se nutre de una perspectiva feminista de la diferencia, como la propuesta por Beatriz Preciado desde el postmodernismo francés en su Testo yonqui, así como las de Julia Kristeva o Judith Butler. La hipótesis que nos proponemos demostrar en esta investigación es que Orlan es un paradigma de la performance feminista, por ello realizaremos un análisis de su obra, a través del cual descubriremos que su arte es una arte derivado del arte-carnal. Este tipo de arte estaba ya presente en el arte y en la literatura de Francis Bacon y Antonin Artaud sobretodo, y en Orlan se conforma, como aquí proponemos, en una estética del sacrificio, es decir, una estética en la que el artista se sacrifica por una nueva humanidad post-humana, una identidad híbrida, al igual que el Odiseo (analizado en La dialéctica de la Ilustración por Adorno y Horkheimer) se hace a sí mismo a través de un viaje interior. Una de las ideas clave de esta tesis doctoral es que el yo del artista, como el yo griego, se constituye a través del sacrificio y es así como se construye el sí-mismo a través del arte, recuperando la idea de sacrificio. Hemos estudiado también las políticas de minorías a partir de los postmodernos franceses (Gilles Deleuze, Félix Guattari, Michel Foucault, Jacques Derrida, etc.), para identificar los conceptos que se escenifican en la obra de Orlan. De este modo descubrimos que este tipo de arte performativo busca realizar en el cuerpo del artista un cambio político que surgiría de la estética y que podría crear un cambio social en el orden de los discursos, como si se tratara de un arte político de la resistencia actual. Creemos que lo mítico y el discurso en la obra de Orlan entran en un juego dialéctico en el que es difícil distinguir la realidad de la ficción, por su función de espectáculo teatral, ya que exagerando la realidad se descubre la realidad inherente del mundo o más bien, una realidad concreta enmascarada e inaprehensible, como es la multiciplidad nietzschiana o el horror del cuerpo mostrado por las múltiples transformaciones orlanianas en sus teatros anatómicos / This thesis sets out to study the historical and political context of performance art and the emergence of social movements such as feminism. The theoretical framework of this thesis is drawn from the feminist perspective of difference, as put forward in French Postmodernism by Beatriz Preciado in her ‘Testo Junkie’, as well as by Julia Kristeva and Judith Butler. The hypothesis we aim to demonstate in this research is that Orlan is a paradigm of feminist performance art. We shall make an analysis of her work, through which we will discover that her art is derived from carnal art. This type of art was already present in the art and literature of Francis Bacon and Antonin Artaud especially, and in Orlan's work it is apparent as an aesthetic of sacrifice, as proposed here. That is to say, an aesthetic in which the artist is sacrificed for the sake of a new post-human humanity, a hybrid identity, like that of Odysseus (discussed in Dialectic of Enlightenment by Adorno and Horkheimer) who becomes himself through an inner journey. One of the key ideas of this thesis is that the artist's ego, like the Greek ego, is achieved through sacrifice and this is how we construct the self through art, returning to the idea of sacrifice. We have also studied the politics of minorities, starting with the Postmodern French (Gilles Deleuze, Felix Guattari, Michel Foucault, Jacques Derrida, etc.), so as to be able to identify the concepts that are staged in Orlan's work. We thus discover that this kind of performance art invokes a political shift within the body of the artist, arising from the aesthetic, and so creates social change in the order of discourse, as if it were a political art of resistance today. The mythical and the ideological come together in a dialectic game by way of the theatre. Behind one reality, another one is revealed, masked and elusive.

Las proteínas de la familia Bcl-2 controlan la liberación de citocromo c, y otros factores apotogénicos, desde la mitocondria hacia el citosol. Los miembros proapoptóticos de la familia, como Bax, facilitan dicha liberación probablemente a través de la formación de poros proteolipídicos a nivel de la membrana mitocondrial externa. Por el contrario, los miembros antiapoptóticos, como Bcl-xL, bloquean la acción de Bax. Con el objetivo de mejorar nuestro conocimiento sobre la estructura y formación de poros por parte de Bax así como de la estructura y cinética de los poros inducidos por Bax, optamos por una aproximación reduccionista consistente en el estudio de un dominio activo derivado de la hélice quinta de Bax, Bax5. A través del trabajo desarrollado en este Tesis, hemos encontrado que dicho péptido se une espontáneamente a membranas lipídicas, plegándose en forma de hélice-. Bax5 es capaz de formar dímeros, tanto en micelas de SDS como en membranas de POPC, así como oligómeros mayores en presencia de lípidos mitocondriales. Dicha capacidad de autoensamblaje depende especialmente de la presencia de un residuo de tirosina. Asimismo, Bax5 forma heteroligómeros con polipéptidos derivados de Bcl-xL, si bien dicha interacción no conduce a una inhibición de su capacidad formadora de poros. Un análisis mediante modelado de cuerpo rígido sugieren que la mejor orientación de Bax5 con respecto a la normal de la membrana, compatible con los datos experimentales, corresponde a un dímero esencialmente paralelo a la superficie de la bicapa. La formación de poros en membranas se ha estudiado tanto en poblaciones de vesículas como en liposomas individuales. Hemos puesto a punto métodos para analizar la actividad de los poros a cualquier tiempo tras la mezcla de Bax5 con vesículas, bien mediante la adición de reactivos que extinguen la fluorescencia de los lípidos marcados, o bien a través de la observación de entradas sucesivas de sondas fluorescentes en vesículas individuales gigantes. Como resultado observamos que las vesículas mantienen el estado porado a través del tiempo. Además, el radio de los poros individuales a tiempos largos o en estado de equilibrio es más pequeño (2.3 nm) que el de los poros “cinéticos”, o de tiempo corto. Finalmente, hemos demostrado que la actividad formadora de poros de Bax5 depende de la presencia de lisinas en posiciones específicas de la secuencia peptídica. / Proteins of the Bcl-2 family control the release of cytochrome c, and other apoptogenic factors, from the mitochondria to the cytosol. Proapoptotic members of the family, like Bax, facilitate such release most likely through the formation of proteolipidic pores in the outer mitochondria membrane (MOM). On the other hand, antiapoptotic members, like Bcl-xL, inhibit the permeabilization of the MOM by blocking Bax activation. The structure of membrane-bound species of Bax responsible for the formation of pores as well as the structure and kinetics of Bax-induced pores remain largely unexplored. In order to gain insight into the pore-forming mechanism of Bax, we have characterized the structure, assembly and pore formation properties of a minimal active domain derived from the fifth helix of Bax, Baxα5. We have found that Bax5 binds readily to lipid interfaces where it folds mainly as an α-helix. Both FRET and SDS-PAGE data suggest that Baxα5 is able to self-associate in lipid membranes and lipid-mimetic media, respectively. A detailed analysis of the residues involved in Bax5-Bax5 interactions suggests the presence of a glycophorin-like dimerization motif supplemented with a tyrosine residue. Interestingly, the number of Baxα5 molecules in the oligomers is dependent on the lipid composition, with mitochondrial lipids inducing higher-order oligomeric assemblies. Baxα5 is also able to interact with Bcl-xL-derived polypeptides. However, such heterotypic associations do not inhibit but rather enhance Baxα5-induced leakage from lipid vesicles. The structure of complexes of Baxα5 with membranes has been extensively studied by infrared spectroscopy and X-ray scattering. Two strategies have been used to best interpret the experimental data in terms of the orientation of Bax5 with respect to the membrane normal: an implicit orientational landscape model including distributions of the orientation angles and a rigid body modeling approach. Best fits are achieved using a dimeric starting structure which shows an almost flat alignment of Bax5 in POPC membranes and a more tilted state in DMPC bilayers. Importantly, the orientation displayed by Bax5 depends on lipid properties, such as fluidity and hydrophobic thickness. In turn, Bax5 seems to affect the properties of the surrounding lipid matrix. The pore-forming activity of Bax5 has been addressed both at the ensemble and single-vesicle level. Experiments with suspensions of liposomes allow recording the kinetics of dye release. However, these experiments are restricted to short times. In order to capture the activity of pores at any desired time after peptide/vesicle mixing we have developed two approaches. As a first approach, the quenching of fluorescent lipids by externally added reagents in ensembles of liposomes suggests the presence of pores or membrane defects at long times. Direct visualization of leakage events can be done observing single giant unilamellar vesicles (GUVs) under the fluorescence microscope. Successive leakage events in single GUVs indicate that the vesicle pore-state is maintained over time. Interestingly, individual long-term equilibrium pores have a smaller radius (2.3 nm) than short-term/kinetic pores suggesting that pores shrink with equilibration. Finally we have shown that the leakage activity of Bax5 depends on the presence and location of lysine residues within the primary structure.