Tuberculose (TB) é um grave problema de saúde pública, sendo a segunda maior causa de morte entre doenças infecto contagiosas. Em 2014, 9,6 milhões de casos e, aproximadamente, 1,5 milhão de mortes foram reportados. O Programa Nacional de Controle da Tuberculose preconiza para o tratamento a administração simultânea de quatro medicamentos. Contudo, casos de tratamento inadequado favorecem o surgimento de cepas multirresistentes e extensivamente resistentes aos medicamentos disponíveis. Diante disso, torna-se urgente a necessidade de investigar novos alvos moleculares e desenvolver novos fármacos que sejam úteis e eficazes para o tratamento da infecção. As proteínas tirosina fosfatases (PTPs) constituem uma grande família de enzimas responsáveis pela hidrólise do fosfato ligado aos resíduos de tirosina em proteínas. A importância destas fosfatases reside no fato de estarem envolvidas na regulação de uma série de funções celulares, tais como crescimento, interação intercelular, metabolismo, transcrição, motilidade e resposta imune. A partir da análise do genoma do Mycabacteirum tuberculosis, foram identificadas duas proteínas tirosinas fosfatases (PtpA e PtpB), responsáveis pela sua sobrevivência nos macrófagos do hospedeiro. Ambas as enzimas têm sido exploradas como alvo molecular para o desenvolvimento de novos fármacos para a tuberculose. Nessa dissertação, as sequências gênicas que codificam para as enzimas PtpA e PtpB de M. tuberculosis foram clonadas com sucesso nos vetores de expressão. A expressão solúvel das proteínas permitiu o estabelecimento de um protocolo padronizado de purificação. Ensaios de cristalização foram conduzidos e cristais de proteínas obtidos tiveram os dados cristalográficos coletados. Para a enzima PtpB foi possível determinar a estrutura cristalográfica em alta resolução em complexo com um grupo fosfato no sítio catalítico. Essa estrutura foi então utilizada na etapa posterior de descoberta de novos candidatos a inibidores. Os trabalhos computacionais conduzidos incluíram uma combinação de estratégias para a identificação de pontos de interação relevantes para o processo de reconhecimento molecular e ligação bem como para a construção de modelos farmacofóricos 3D específicos para cada enzima. Esses dados foram utilizados para a seleção de um conjunto de 8 candidatos a inibidores da PtpA e 5 candidatos a inibidores da PtpB. Portanto, estudos de biologia molecular estrutural e química medicinal foram empregados com sucesso para o estabelecimento de uma plataforma produtiva dos alvos selecionados bem como para a seleção de novos candidatos a inibidores. / Tuberculosis (TB) is a serious public health problem and the second leading cause of death among infectious diseases. In 2014, 9.6 million cases, and approximately 1.5 million deaths were reported. The National Program for Tuberculosis Control recommends the simultaneous administration of four drugs as treatment for the disease. However, inadequate treatment determines the emergence of multidrug- and extensively-resistant strains to available drugs. Therefore, new molecular targets and drugs are urgently needed for the treatment of the infection. The protein tyrosine phosphatases (PTPs) are a large family of enzymes responsible for the hydrolysis of phosphate group bound to tyrosine residues in proteins. The importance of these molecules is related to the regulation of a number of cellular functions, including growth, intercellular interaction, metabolism, transcription, motility and immune response. Based on Mycabacteirum tuberculosis genome analysis, two protein tyrosine phosphatases (PTPA and PtpB) were related to mycobacterium survival in host macrophages. Both enzymes have been explored as a molecular target for the development of new drugs for TB. In this dissertation, the gene sequences encoding the enzymes PtpA and PtpB from M. tuberculosis were successfully cloned in expression vectors. The soluble expression of the proteins allowed the establishment of a standardized purification protocol. Crystallization assays were conducted, protein crystals were obtained, and crystallographic data were collected. We determine the crystallographic structure of PtpB in complex with a phosphate group in the catalytic site at high resolution. This structure was then used in the subsequent step for the discovery of new inhibitor candidates. Computational studies included a combination of strategies for identifying interaction points relevant to the process of molecular recognition and binding as well as the construction of 3D pharmacophore models specific for each enzyme. These data were used to select a set of 8 and 5 compounds as PtpA and PtpB inhibitor candidates, respectively. Therefore, structural molecular biology and medicinal chemistry studies have been successfully conducted for the establishment of a platform aimed to the production of the selected targets as well as for the selection of new inhibitor candidates.

Aspergillus fumigatus é um fungo patogênico oportunista capaz de infectar pacientes imunocomprometidos causando eventualmente infecções disseminadas difíceis de serem controladas e com alta taxa de mortalidade dos indivíduos infectados.. Para um melhor entendimento de como esse fungo age no hospedeiro é importante saber como as vias de sinalização que regulam esses fatores de virulência são orquestradas. Proteínas fosfatases são centrais em uma grande variedade de vias de transdução de sinal. Neste trabalho, nós caracterizamos a proteína fosfatase 2A SitA, a proteína homóloga de Sit4 em Saccharomyces serevisiae. O gene sitA não é essencial e por isso fomos capazes de construir um mutante nulo em A. fumigatus. A cepa ?sitA apresenta aumento na fosforilação da MpkA, é mais sensível à agentes que causam dano na parede celular, tem um aumento na quantidade de ?-1,3 glicano e quitina, e também tem problemas na adesão e formação de biofilme. O mutante ?sitA é mais sensível a vários metais e íons, como MnCl2, CaCl2, LiCl, entretanto é mais resistente à ZnSO4. O mutante ?sitA é avirulento em modelo de aspergilose pulmonar invasiva em camundongos. Esses resultados revelam que a fosfatase SitA está envolvida na via de integridade da parede celular de A. fumigatus possivelmente modulando a atividade de PkcA/MpkA / Aspergillus fumigatus is an opportunistic pathogenic fungus able to infect immunocompromised patients causing eventually disseminated infections that are difficult to be controlled, and lead to high mortality rates. It is important to understand how are orchestrated the signalling pathways that regulate these factors involved in virulence. Protein phosphatases are central to numerous signal transduction pathways. Here we characterize A. fumigatus protein phosphatase 2A SitA, the S. cerevisiae Sit4p homologue. The sitA gene is not an essential gene and we were able to construct an A. fumigatus null mutant. The ?sitA strain had increased MpkA phosphorylation, was more sensitive to cell wall damaging agents, had increased ??1,3?glican and chitin, and was impaired in biofilm formation. The ?sitA strain is more sensitive to several metals and ions such as MnCl2, CaCl2, and LiCl, however, it is more resistant to ZnSO4. The ?sitA strain was avirulent in a murine model of invasive pulmonary aspergillosis. These results stress the importance of A. fumigatus SitA as a possible modulator of PkcA/MpkA activity and its involvement in the cell wall integrity pathway

Introdução e Objetivos. Fosfatases são enzimas promissoras para aplicação na degradação de organofosforados. Por exemplo, a enzima paraoxonase 1 (PON1), associada à lipoproteína de alta densidade (HDL), hidrolisa lactonas, ésteres aromáticos e compostos organofosforados (OP) neurotóxicos. \"Módulos de ligação a carboidrato\" (CBM) têm diversas aplicações biotecnológicas. Nosso objetivo é a obtenção de proteínas quiméricas contendo fosfatases ligadas a um módulo de ligação de celulose, o que possibilitaria a imobilização dessas enzimas em suportes de celulose. Resultados. Como prova de conceito, uma proteína quimérica contendo uma \"fosfatase ácida\" (appA) de E.coli e CBM familia 2 (CBM2) de uma celulase de Xanthomonas axonopodis pv citri foi montada e produzida em E. coli como uma proteína recombinante solúvel. appA-CBM2 purificada demonstrou ser totalmente funcional exibindo atividade de ligação à celulose microcristalina (Avicel PH101) e atividade de fosfatase sobre p-nitrofenil fosfato. A ligação à Avicel evidenciou um comportamento de saturação descrito por uma \"constante de ligação\" (Kb) de 26 mg e um \"máximo de ligação\" (Bmax) de 4,45 U/µg. Além disso, a ligação de appA-CBM2 em Avicel foi maior em pH 2,5 e diminuiu acima de pH 6,5, como observado anteriormente para CBM2. Finalmente, o efeito de concentração de p-nitrofenil fosfato na atividade catalítica de appA-CBM2 e appA foi idêntico, exibindo um Km de 2,8 mM. Portanto, esses dados mostram que o conceito de uma proteína que combina as propriedades da fosfatase e do domínio de ligação à celulose é possível e funcional. De forma similar, os segmentos de DNA que codificam para o CBM2 e para a PON1 de Homo sapiens, foram fusionados resultando em um segmento que codifica para uma proteína quimérica (PON1-CBM2). PON1 nativa e PON1-CBM2 foram produzidas na forma solúvel e ativa em E.coli cepa Arctic. Embora não tenha sido viável sua purificação, estas enzimas foram caracterizadas. PON1-CBM2 liga-se em Avicel PH101 com um comportamento de saturação, descrito por uma constante de ligação (Kb) de 27 mg, valor idêntico àquele observado para appA-CBM2, o que sugere que o domínio CBM2 é igualmente funcional nestas duas enzimas quiméricas. PON1-CBM2 também exibe atividade paraoxonásica com Km similar àquele observado para PON1 nativa (1,3 mM), sugerindo que o \"domínio\" PON1 encontra-se totalmente funcional na enzima quimérica. Conclusão. Uma estratégia para a construção e expressão heteróloga em E. coli de PON1 e das enzimas quiméricas appA-CBM2 e PON1-CBM2 foi desenvolvida. As enzimas quiméricas mostraram-se totalmente funcionais e conservaram as propriedades de seus \"domínios\" constituintes. / Introduction and Aims. Phosphatases are promising enzymes for application in the degradation of organophosphates, whereas carbohydrate binding module has significant and demonstrated biotechnological applications. The high-density lipoprotein-associated enzyme paraoxonase 1 (PON1) hydrolyzes lactones, aromatic esters, and neurotoxic organophosphorus (OP) compounds. Our aim is to obtain chimeric proteins containing a phosphatase domain linked to a carbohydrate binding module (CBM), which could be immobilized on a cellulose supports. Results. As a proof of concept, a chimeric protein combining an acid phosphatase (appA) from E.coli and a CBM family 2 (CBM2) from Xanthomonas axonopodis pv. citri was assembled and produced in E.coli as a recombinant soluble protein. Purified appA-CBM2 was fully functional, was bound to microcrystalline cellulose and exhibited phosphatase activity upon p-nitrophenyl phosphate. The binding to microcrystalline cellulose Avicel PH101 exhibited saturation with a binding constant (Kb) of 26 and a maximum binding (Bmax) of 4,45 U/µg. In addition, the binding was higher at pH 2.5 and decreased above pH 6.5, as previously observed for CBM2. Finally, effect of p-nitrophenyl phosphate concentration on appA-CBM2 and native appA activities were identical, exhibiting a Km of 2.8 mM. Taken together, these data show that the conceptual design of a protein combining the properties and biotechnological advantages of phosphatases and cellulose binding domains is possible and functional. Similarly, DNA segments coding for CBM2 and for PON1 from Homo sapiens combined resulting in a segment coding for a chimeric protein (PON1-CBM2). Native PON1 and PON1-CBM2 were produced as recombinant protein in E. coli Arctic. Although purification was not accomplished, these enzymes were characterized. PON1-CBM2 binds to microcrystalline cellulose, exhibiting a saturation behavior described by a Kb of 27 mg. PON1 and PON1- CBM2 have the same Km for paraoxon (1.3 mM), indicating that the phosphatase domain was fully functional. Conclusion. An effective strategy for heterologous expression of the native PON1 and chimeric appA-CBM2 and PON1-CBM2 in E. coli was attained. The chimeric enzymes were fully functional and maintained the properties of their original domains

Resumo: A capacidade de bactérias endofíticas em solubilizar fosfato inorgânico é alvo de grande interesse por parte dos microbiologistas, uma vez que as fosfatases são responsáveis por hidrolisar compostos orgânicos produzindo fósforo solúvel. Dessa forma, a fosfatase ácida ligada à membrana (MBAP) foi obtida a partir de Enterobacter sp. isolada de raízes de Cattleya walkeriana (Orchidaceae) e identificada pelo seqüenciamento do gene 16S rRNA. A expressão da enzima mostrou-se estritamente regulada pelo fósforo (expressão ideal em 7 mm). O pH ótimo aparente (3,5) não foi afetado pela concentração de p-nitrofenilfosfato. Em pH 3,5, a enzima é uma fosfomonidrolase inespecífica capaz de hidrolisar os substratos PNPP (61,2 U/mg), ATP (19,7 U/mg), e o pirofosfato (29,7 U/mg), com K0.5 de 0,06 mM, 0,11 mM e 0,08 mM, respectivamente. A enzima exibi cinética "Michaelina" para o pNPP (n=1,2). Para o ATP e o pirofosfato interações sítio-sítio foram observadas com n=1,6 e 2,3, respectivamente. Os íons de magnésio foram potentes estimuladores (K0.5=2,2 mM), enquanto o arsenato e o fosfato foram potentes inibidores competitivos. A atividade PNPPase foi inibida pelo EDTA, mas não pelo cálcio, levamisol, zinco, cobalto e phidroximercuribenzoato. A entalpia de inativação térmica foi da ordem de 77,5 kcal.mol- 1. Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida ligada à membrana representa um mecanismo de solubilização do fosfato mineral aumentando a disponibilidade de nutrientes para as plantas / Abstract: The ability of endophytic bacteria in solubilizing inorganic phosphate is of great interest by microbiologists since phosphatases are responsible for catalyzing the hydrolysis of organic compounds producing soluble phosphorus. Thus, the membranebound acid phosphatase (MBAP) was obtained from Enterobacter sp. isolated from Cattleya walkeriana (Orchidaceae) roots and identified by the 16S rRNA gene sequencing analysis. The enzyme expression was demonstrated to be strictly regulated by phosphorus (optimal expression at 7 mM). The enzyme was obtained by centrifugation at 100.000g for 1 h at 4ºC. The apparent optimal pH (3.5) was not affect by p-Nitrophenyl phosphate concentration. At pH 3.5, the enzyme showed a broad substrate specificity hydrolyzing different substrates such as PNPP (61.2 U/mg), ATP (19.7 U/mg), and pyrophosphate (29.7 U/mg), with K0.5 values of 0.06 mM, 0.11 mM and 0.08 mM, respectively. The hydrolysis of PNPP by the enzyme exhibited "Michaelian" kinetics with n= 1.2. For ATP and pyrophosphate site-site interactions were observed with n= 1.6 and 2.3, respectively. Although magnesium ions were stimulatory (K0.5= 2.2 mM), arsenate and phosphate were a powerful competitive inhibitor. The PNPPase activity was inhibited EDTA but not by calcium, levamisole, zinc, cobalt and phydroxymercurybenzoate. The ΔH for thermal inactivation was 77.5 kcal.mol-1. Our results suggest that the production of a membrane-bound acid phosphatase might be one mechanism of mineral phosphate solubilization turn it's nutrients availability to plants / Orientador: João Martins Pizauro Junior / Coorientador: Cecília Maria Costa do Amaral / Banca: Mariana Carina Frigieri / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Mestre

Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Coorientador: Patrícia Rosa de Oliveira / Banca: Gervasio Henrique Bechara / Banca: Erik Daemon de Souza Pinto / Resumo: Carrapatos são ectoparasitas obrigatoriamente hematófagos que podem transmitir diversas doenças aos hospedeiros durante o seu processo de alimentação. Ao lesionar mecanicamente o tecido acabam induzindo respostas inflamatórias na pele, local onde se fixam. Na tentativa de minimizar a ação destes sobre os hospedeiros tem-se recorrido ao controle químico por meio da utilização de diversos produtos, dentre estes a selamectina, princípio ativo de muitos acaricidas, inclusive do Revolution® (Pfizer), uma lactona macrocíclica capaz de causar danos neurotóxicos no carrapato. Foi objetivo deste trabalho analisar, por meio de técnicas histológica, histoquímica, detecção da atividade da fosfatase ácida (enzimas hidrolíticas responsáveis pela detecção de morte celular autofágica) e microscopia confocal de varredura a laser, a ocorrência de alterações morfofisiológicas na pele de coelhos hospedeiros expostos à selamectina e infestados por Rhipicephalus sanguineus adultos. Os coelhos (n=12) foram expostos ao produto nas concentrações de 100% (grupo de tratamento I - GTI) e de 80% (grupo de tratamento II - GTII) e posteriormente infestados apresentaram no exame histológico diminuição da espessura da camada córnea do epitélio, o qual sofreu diminuição da quantidade de camadas celulares (adelgaçamento), processo este acompanhado pela formação acentuada de edemas subepidérmicos (com aumento de exudato), o que provocou a desorganização das fibras colágenas do tecido conjuntivo da camada dérmica. Os testes histoquímicos revelaram forte marcação PAS positiva nos folículos pilosos e em algumas regiões da derme e ressíntese de fibras colágenas demonstrada por meio da técnica do tricômico de Mallory. Os resultados obtidos para a detecção da atividade da fosfatase ácida nos indivíduos expostos às... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ticks are ectoparasites obligatorily hematophagous that can transmit various diseases to their hosts during the feeding process. By mechanically injured in the tissue eventually inducing inflammatory responses in the skin where they attach. In an attempt to minimize their action on the host has recourse to chemical control through the use of various acaricides, among these selamectin, the active principle of many acaricides, including the Revolution ® (Pfizer), a macrocyclic lactone capable of causing neurotoxic damage. This study aimed to analyze, using histological techniques, histochemical, detection of acid phosphatase activity (hydrolytic enzymes responsible for the detection of autophagic cell death) and confocal laser scanning, the occurrence of morphophysiological changes in the skin of hosts rabbits exposed to the selamectin and infested by adults of Rhipicephalus sanguineus. The rabbits (n=12) exposed to the product at concentration of 100% (treatment group I - TGI) and 80% (treatment group II - TGII) and infested showed, in histologic examination, a partial and/or complete decrease in the stratum corneum of epithelium, which suffered a decrease in the amount of cell layers with consequent reduction of stratification (thinning) of the epithelium and marked subepidermal edema formation (with increase of exudates) which caused the disorganization of the collagen fibers of the connective tissue of the dermal layer. Histochemical tests showed strong staining PAS positive in hair follicles and in some regions of the dermis, and the resynthesis of collagen fibers has been demonstrated by Mallory trichrome technique. The confocal images corroborate the results of the histological analysis, showing the thinning of the epithelium of the individuals' skin of the treatment groups I and II (TGI and TGII), where this layer... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Renato de Mello Prado / Banca: Anice Garcia / Banca: Lívia Cordaro Galdiano Chicone / Resumo: O manejo adequado do P é importante na cana-de-açúcar podendo interferir em todo o desenvolvimento da cultura, elevando, portanto os retornos econômicos com o seu cultivo. Objetivou-se avaliar o efeito de fontes de P e torta de filtro na cana-planta, a partir de avaliações do teor de P no solo e na planta, acúmulo do nutriente na folha, colmo e parte aérea (folha e colmo), trocas gasosas, fosfatase ácida, produção de colmos. O experimento foi realizado em um Latossolo Vermelho Amarelo Distrófico, textura média, no munícipio de Itajobi-SP. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com três repetições, dispostos em esquema fatorial 3x4x2 sendo três fontes de P (superfosfato triplo, fosfato natural reativo Bayóvar e fosfato natural de Araxá), quatro doses (0, 90, 180 e 360 kg de P2O5 ha-1), na ausência e na presença da torta de filtro (7,5 t ha-1, base seca). O efeito das doses de fósforo no aumento do teor de P no solo, na folha, no acúmulo na planta destaca-se na presença da torta de filtro em relação a sua ausência. No entanto, o uso da torta de filtro sem a adubação fosfatada foi suficiente para propiciar a maior produção de colmos da cana-planta. O uso da maior dose de superfosfato triplo ou a associação da torta de filtro com esta fonte propiciou as maiores reduções na atividade da fosfatase ácida. O uso da maior dose de fósforo aumentou a atividade da fotossíntese, condutância estomática e transpiração nas plantas de cana-de-açúcar / Abstract: Proper management of phosphorus is important in cane sugar and may interfere with the whole development of culture, raising therefore the economic returns to its cultivation. This study aimed to evaluate the effect of sources of phosphorus and filter cake on the cane, from assessments of P content in soil and plant P, accumulation in leaves, stalks and canopy (leaf and stalk), gas exchange, acid phosphatase stalk production. The experiment was conducted on a Dystrophic Red Yellow Latosoil, medium texture, in the city of Itajobi-SP. The experimental design was a randomized block design with three replications in a factorial 3x4x2 with three phosphorus sources (triple superphosphate, natural Bayóvar reactive phosphate and natural Araxá phosphate), four doses (0, 90, 180 and 360 kg of P2O5 ha-1) in the absence and in the presence of filter cake (7,5 t ha-1, dry basis). The effect of increasing doses of phosphorus in the P content in soil, leaf, accumulation in the plant stands out in the presence of the filter cake in relation your absence. However, the use of filter cake without phosphorus was sufficient to provide the highest stalks yield of sugarcane. The use of higher dose of triple superphosphate or the combination of the filter cake with this source provided the greatest reductions in acid phosphatase activity. The use of higher dose of phosphorus increased the activity of photosynthesis, stomatal conductance and transpiration in plants of cane sugar / Mestre

Orientador: Renato de Mello Prado / Coorientador: Cassiano Garcia Roque / Banca: Estevão Vicari Mellis / Banca: Aguinaldo José Freitas Leal / Banca: Mara Cristina Pessôa da Cruz / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Resumo: O acréscimo da torta de filtro na adubação da cana-planta pode substituir e/ou aumentar a eficiência de fertilizantes fosfatados naturais e acidulados beneficiando a atividade microbiológica do solo, a absorção de P e a produtividade da cana-de-açúcar. Objetivou-se avaliar a resposta da primeira soqueira da cana-de-açúcar cultivada em sistema sem despalha a fogo, em função do efeito residual da aplicação de doses e fontes de fósforo, na presença e na ausência da torta de filtro em Argissolo e Latossolo. Os experimentos foram desenvolvidos na primeira soqueira de cana-de-açúcar, em duas classes de solo: Argissolo e Latossolo. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com três repetições, em esquema fatorial 3x4x2, correspondendo a três fontes de fósforo (superfosfato triplo, fosfato natural de Araxá e fosfato natural reativo Bayóvar®), quatro doses de P2O5 (0; 90; 180 e 360 kg ha-1 solúvel em ácido cítrico a 2%), na ausência e na presença de torta de filtro (7,5 t ha-1 de torta de filtro, em base seca). Avaliaram-se os atributos químicos dos solos, indicadores microbiológicos e atividade enzimática no solo, diagnose nutricional, atividade da fosfatase ácida foliar, acúmulo de P na planta, crescimento, produtividade de colmos e de palhada, e qualidade tecnológica. A aplicação de fósforo, independentemente da solubilidade do fertilizante, apresentou efeito residual na primeira soqueira da cana-de-açúcar, proporcionando aumento nos teores de P no solo, na nutrição e na ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: - The addition of filter cake for sugarcane-plant fertilization can replace and/or increase the efficiency of natural and acidified phosphate fertilizers, benefiting soil microbiological activity, P uptake and sugarcane productivity. The objective of this study was to evaluate the response of the first sugarcane stalks cultivated in a system without leaf burning, in function of the residual effect of phosphorus sources and rates, in the presence and absence of filter cake in Argisol and Latosol. The experiments were carried out in the first sugarcane ratoon, in two soil classes: Argisol and Latosol. The experiment was set up in a randomized complete block design with three replicates, in a 3x4x2 factorial scheme, corresponding to three sources of phosphorus (triple superphosphate, Araxá natural phosphate and natural Bayóvar® reactive phosphate), four P2O5 rates (0, 90, 180 and 360 kg ha-1 dissolved in 2% citric acid), in the absence and presence of filter cake (7.5 t ha-1 filter cake, dry basis). Soil chemical attributes, microbiological indicators and enzymatic activity of the soil, nutritional diagnosis, foliar acid phosphatase activity, P accumulation in the plant, growth, stalk and straw productivity, and technological quality were evaluated. The application of phosphorus, regardless of fertilizer solubility, showed residual effect in the first sugarcane ratoon, providing an increase in soil P, nutrient and productivity levels of this crop cultivated in Argisol and Latosol. Application of the natural Bayóvar and Araxá phosphates and filter cake increased the microbiological activity of the Argisol and the Latosol. The acid phosphatase activity in the soil decreased with the P rates. The two foliar diagnosis recommendations presented similar results. Foliar acid phosphatase activity showed to be an efficient method for nutritional diagnosis of phosphorus in ... (Complete abstract click electronic a / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-24Bitstream added on 2014-08-13T18:01:27Z : No. of bitstreams: 1 000747308_20151025.pdf: 50918 bytes, checksum: 2f9471b48a639ddfac8ff68f077cd7c6 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:14Z: 000747308_20151025.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:16Z : No. of bitstreams: 1 000747308.pdf: 853831 bytes, checksum: 3cafe2fda59448cec774287e9b1b29d0 (MD5) / O manejo adequado do P é importante na cana-de-açúcar podendo interferir em todo o desenvolvimento da cultura, elevando, portanto os retornos econômicos com o seu cultivo. Objetivou-se avaliar o efeito de fontes de P e torta de filtro na cana-planta, a partir de avaliações do teor de P no solo e na planta, acúmulo do nutriente na folha, colmo e parte aérea (folha e colmo), trocas gasosas, fosfatase ácida, produção de colmos. O experimento foi realizado em um Latossolo Vermelho Amarelo Distrófico, textura média, no munícipio de Itajobi-SP. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com três repetições, dispostos em esquema fatorial 3x4x2 sendo três fontes de P (superfosfato triplo, fosfato natural reativo Bayóvar e fosfato natural de Araxá), quatro doses (0, 90, 180 e 360 kg de P2O5 ha-1), na ausência e na presença da torta de filtro (7,5 t ha-1, base seca). O efeito das doses de fósforo no aumento do teor de P no solo, na folha, no acúmulo na planta destaca-se na presença da torta de filtro em relação a sua ausência. No entanto, o uso da torta de filtro sem a adubação fosfatada foi suficiente para propiciar a maior produção de colmos da cana-planta. O uso da maior dose de superfosfato triplo ou a associação da torta de filtro com esta fonte propiciou as maiores reduções na atividade da fosfatase ácida. O uso da maior dose de fósforo aumentou a atividade da fotossíntese, condutância estomática e transpiração nas plantas de cana-de-açúcar / Proper management of phosphorus is important in cane sugar and may interfere with the whole development of culture, raising therefore the economic returns to its cultivation. This study aimed to evaluate the effect of sources of phosphorus and filter cake on the cane, from assessments of P content in soil and plant P, accumulation in leaves, stalks and canopy (leaf and stalk), gas exchange, acid phosphatase stalk production. The experiment was conducted on a Dystrophic Red Yellow Latosoil, medium texture, in the city of Itajobi-SP. The experimental design was a randomized block design with three replications in a factorial 3x4x2 with three phosphorus sources (triple superphosphate, natural Bayóvar reactive phosphate and natural Araxá phosphate), four doses (0, 90, 180 and 360 kg of P2O5 ha-1) in the absence and in the presence of filter cake (7,5 t ha-1, dry basis). The effect of increasing doses of phosphorus in the P content in soil, leaf, accumulation in the plant stands out in the presence of the filter cake in relation your absence. However, the use of filter cake without phosphorus was sufficient to provide the highest stalks yield of sugarcane. The use of higher dose of triple superphosphate or the combination of the filter cake with this source provided the greatest reductions in acid phosphatase activity. The use of higher dose of phosphorus increased the activity of photosynthesis, stomatal conductance and transpiration in plants of cane sugar

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T13:39:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 275606.pdf: 853570 bytes, checksum: 50269ed2684028793a3cff119091cf3d (MD5) / Foram sintetizados dois novos complexos binucleares de valência mista de AlIIIMII com uma estrutura contendo o núcleo AlIII(µ-OH)MII, onde o MII = Zn e Cu. O ligante utilizado para tal é o ligante não-simétrico H2bpbpmp que já é amplamente conhecido e bem caracterizado na literatura. Estes novos complexos possuem uma estrutura inspirada no sítio ativo de uma metalohidrolase, a Fosfatase Ácida Púrpura (PAP). Sabe-se que modelos biomiméticos inspirados no sítio ativos das PAP´s possuem atividade catalítica frente a hidrólise de ésteres de fosfato, proteínas e DNA. Logo se propõe neste trabalho o estudo destes complexos frente à hidrólise dos ésteres de fosfato bis(2,4-dinitrofenil)-fosfato e do 2,4-dinitrofenil-fosfato, onde estes mostraram possuir atividade catalítica. Para estes estudos foi utilizado o modelo de cinética enzimática de Michaelis-Menten e determinados seus parâmetros cinéticos.

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Coorientador: Fernando Hercos Valicente / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Luis Garrigós Leite / Resumo: Helicoverpa armigera é uma praga altamente polífaga e ataca culturas de grande importância agrícola em diversos países do mundo. O controle desta praga é realizado primariamente por inseticidas químicos. Porém, o uso indiscriminado do controle químico levou a resistência de populações desta praga a maioria dos inseticidas químicos usados para seu controle, dificultando o seu manejo no campo. Além do controle químico, o controle de H. armigera tem sido realizado com uso de plantas transgênicas que expressam a proteína Cry1Ac de Bacillus thuringiensis (Bt) ou por bioinseticidas que contem esta e outras proteínas. No entanto, estudos têm demonstrado uma diminuição significativa na susceptibilidade de H. armigera às proteínas Cry com o aumento de seu desenvolvimento larval. O mecanismo de resistência mais comum dos insetos às proteínas Cry é a redução de ligação da proteína aos receptores presentes na membrana, levando a uma menor afinidade de ligação da proteína aos receptores intestinais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a susceptibilidade de lagartas de diferentes ínstares de H. armigera à Cry1Ac e correlacionar com a capacidade de ligação da proteína Cry1Ac às microvilosidades apicais das células colunares do intestino médio (BBMVs) isoladas de todos ínstares larvais. Além disso, por meio de ensaios de imunoprecipitação e análise por cromatografia líquida acoplada a espectrofotometria de massa, identificar as proteínas envolvidas na interação com a proteína ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Helicoverpa armigera is a highly polyphagous pest and attacks important crops worldwide. The control of this pest is carried out primarily by chemical insecticides. However, the indiscriminate use of chemical control, led to pest populations to develop resistance to most of the chemical insecticides used for their control, making it difficult to management in the field. In addition to chemical control, H. armigera has been done by transgenic crops expressing Cry1Ac toxin from Bacillus thuringiensis (Bt) or by biopesticides that contains Cry1Ac or other toxins. However, studies have demonstrated a susceptibility decrease of H. armigera to Cry toxins with their larval development increase. The most common mechanism of resistance used by insects against Cry toxins is the reduced toxin binding to receptors present on the membrane, leading to a lower binding affinity of the toxin to intestinal receptors. Thus, the objective of this work was to evaluate the susceptibility of different instar larvae of H. armigera to Cry1Ac toxin and to correlate with the Cry1Ac toxin binding capacity to BBMV isolated from all larval instar. Furthermore, by pull-down techniques and liquid chromatography coupled to mass spectrometry analysis, to identify the proteins involved in the Cry1Ac toxin interaction in the second and fifth instars of H. armigera. A significant reduction in the susceptibility of the late instars of H. armigera to Cry1Ac toxin was observed compared to early instars. LC50 estimated values ranged from 31.1 to 2525.7 ng of toxin/cm2 of diet in first and sixth instar larvae, respectively. These results point a difference of 80-fold in the susceptibility to Cry1Ac toxin from late to first larval instar. In the ELISA binding assays results to BBMV of the diffe... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre