Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. 2006. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Faculdade de Ciências da Saúde. Universidade Fernando Pessoa

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Doctora en Ciencias de la Ingeniería, Mención Química / Los vectores virales son un sistema de transferencia génica muy efectivo. Es por esto su amplio uso para terapia génica. Dentro del desarrollo de una terapia génica un punto muy importante a considerar es la producción y purificación de los vectores virales que transportarán dicha terapia. Su producción y purificación debe ser escalable para lograr su uso en las distintas fases de los ensayos clínicos y su posterior comercialización. El presente estudio aborda distintas etapas de la producción y purificación de vectores virales adenovirus y adenoasociados, centrándose en su uso para una terapia génica contra el alcoholismo. Se realizó la purificación de los vectores adenovirales rAd5V que contenían la secuencia de ARN antisentido de la enzima ALDH2, y se desarrolló un pre-diseño de la purificación como base para la producción de estos vectores a mayor escala para ensayos pre-clínicos. Se pudo concluir que la columna CIM QA1 tiene rendimientos tan buenos como la columna Q-Sepharose, la que ha sido muy usada para esta aplicación. Sin embargo, la columna CIM QA1 puede usar flujos hasta 10 veces mayores que la columna Q-Sepharose XL, manteniendo su rendimiento. Esto implica en una reducción del tiempo de la purificación en forma considerable. Además, se desarrolló la producción y purificación de un vector alternativo para la terapia contra el alcoholismo, el vector usado fue el vector viral Adenoasociado AAV para sus serotipos 2 y 8. Se realizó la producción de los vectores AAV2 y AAV8 y su purificación se realizó usando la columna monolítica CIM QA-1.Se pudo determinar la capacidad de la columna para cada uno de los serotipos de AAV, con una capacidad de 5,2x108 vg/ml para AAV2 y 1,8x1010vg/ml para AAV8. También se desarrolló un método simplificado para la producción de vectores AAV. El nuevo método simplificado utiliza una doble transfección en una línea celular recombinante de HEK293F, la que puede ser específica para cada terapia génica. Para este estudio, se desarrolló un prototipo del nuevo método utilizando el gen de la proteína GFP como gen de interés. Se logró desarrollar una línea celular HEK293F recombinante. Se logró producir vectores AAV2 y AAV8 con el nuevo método de doble transfección. Sin embargo, la producción fue 40 y 24 veces menor para AAV2 y AAV8 que el método convencional. A pesar que la visualización con TEM no entregó señales claras de problemas en la cápside, los vectores producidos con el nuevo método no fueron infectivos. Esto puede ser por una mala encapsidación de los vectores virales en el momento de la producción. Además, es necesario optimizar el método de producción con la proporción correcta de los tres elementos esenciales para la producción de AAV (ITR-Gen, Rep/Cap y genes ayudantes).

Doctor en Ciencias de la Ingeniería, Mención Ingeniería Química y Biotecnología / El alcoholismo es un grave problema socio-económico. El costo asociado al abuso del alcohol se ha estimado en 1.300 millones de dólares para la economía chilena y en 185 billones para Estados Unidos, costo que se debe principalmente a la perdida de la productividad, tratamientos médicos y costos sociales. El etanol es metabolizado en el hígado en dos pasos. El primero depende de la enzima Alcohol deshidrogenasa (ADH) y el segundo de la enzima Aldehído deshidrogenasa (ALDH2). En individuos de la población asiática existe una alta prevalencia de una mutación en el gen de la ALDH2, por lo que tienen una capacidad reducida para metabolizar el acetaldehído, produciendo fuertes efectos como mareos, hipotensión, palpitaciones, etc. Esto resulta en un rechazo al consumo de etanol y protección frente al alcoholismo. Este fenómeno sugiere que la modulación de la expresión de la ALDH2 mediante tecnologías genéticas puede resultar en un fenotipo similar. Por lo tanto, la terapia génica se presenta como una alternativa atractiva para el tratamiento del alcoholismo, simulando el fenotipo asiático, mediante la inhibición específica de la enzima ALDH2, utilizando vectores virales codificantes de un shRNA como herramienta silenciadora. Los virus adeno-asociados (AAV) han sido utilizados como poderosas herramientas para la transferencia de genes en estudios in vivo, en modelos animales y en ensayos clínicos en humanos, con resultados prometedores. La única terapia génica aprobada en el mundo occidental para comercialización es Glybera y está formulada con vectores AAV. En este trabajo se utilizaron vectores scAAV2 que codifican un ALDH2 shRNA, para silenciar la expresión del gen de ALDH2 en líneas celulares humanas. Las líneas celulares HEK-293 y HepG2 se infectaron con el virus scAAV2/shRNA resultando en una reducción de la expresión de ALDH2 a nivel de RNA y proteínas en las dos concentraciones virales probadas (1x104 y 1x105 vg/cel) cada una probada en dos periodos de tiempos. En ambas líneas celulares los niveles de RNA de ALDH2 se redujeron en un 90% y la expresión a nivel proteico se inhibió en un 90% y 52% respectivamente, cinco días después de la infección. Las células HepG2 VL17A (ADH+) tratadas y expuestas a etanol mostraron un aumento de hasta el 50% en los niveles de acetaldehído. Estos resultados sugieren que la terapia génica puede ser una herramienta útil para el tratamiento del alcoholismo, a través del silenciamiento de la expresión de ALDH2 utilizando tecnología shRNA entregada las células por vectores AAV.

La diabetes de tipo 1 resulta de la destrucción autoinmune de las células ß pancreáticas, que conduce a una falta en la producción de insulina y la consiguiente hiperglucemia. La terapia sustitutiva con inyecciones subcutáneas de insulina permite a los pacientes llevar un vida activa, sin embargo esta terapia es imperfecta y no evita la aparición de graves complicaciones secundarias. El transplante de páncreas o islotes pancreáticos se ha realizado con éxito en algunos pacientes, sin embargo la escasez de donantes impide que esta terapia se pueda aplicar a todos los individuos diabéticos. Por ello, una gran cantidad de esfuerzos se han centrado en la diferenciación de células madre, embrionarias o adultas, en células ß. Las células de la médula ósea (BMC) poseen propiedades de célula madre adulta y además son fáciles de obtener, por ello se han propuesto como una fuente alternativa para la formación de nuevas células ß. El factor de crecimiento a la insulina de tipo I (IGF-I) participa en la regeneración muscular e incrementa la atracción y diferenciación de BMC en el músculo dañado. Además, la expresión de IGF-I específicamente en células ß de ratones diabéticos es capaz de regenerar la masa de células ß. Así, el primer objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de la expresión de IGF-I en las células ß para atraer y diferenciar las BMC en nuevas células ß, tanto en ratones sanos como en ratones diabéticos. Con esta finalidad se transplantó la médula ósea de ratones transgénicos que expresaban la proteína verde fluorescente (GFP) constitutivamente, en los ratones transgénicos para IGF-I. Los resultados obtenidos demostraron que ni la sobreexpresión de IGF-I en células ß, ni la inducción de diabetes mediante estreptozotocina fueron causa suficiente para atraer y diferenciar las BMC en células ß pancreáticas in vivo. Estos datos sugerían que la regeneración del páncreas endocrino observada en los ratones transgénicos para IGF-I no era mediada por las BMC, indicando que la replicación de células ß preexistentes o bien la diferenciación a partir de precursores no hematopoyéticos son los mecanismos que actuarían en la regeneración de las células ß mediada por IGF-I.La diabetes se ha intentando curar mediante estrategias de terapia génica, sin embargo hasta el momento no se ha conseguido ninguna terapia efectiva. La recuperación completa del paciente diabético de tipo 1 requeriría la regeneración de las células ß. Una aproximación para conseguir este objetivo es la manipulación genética del páncreas endocrino in vivo, con la finalidad de expresar factores que induzcan replicación o neogénesis de las células ß y además contrarrestar la respuesta inmune. Sin embargo, el riesgo de inducir pancreatitis al manipular el páncreas es elevado, y por tanto se han realizado escasos intentos de modificar genéticamente este órgano hasta la fecha. Por ello, nuevas aproximaciones de transferencia génica in vivo son necesarias para avanzar en el desarrollo de nuevas aproximaciones de terapia génica para la diabetes. En este trabajo hemos estudiado la eficiencia de diferentes vectores virales y diferentes vías de administración para transducir el páncreas in vivo, tanto en ratones como en perros. En primer lugar, observamos que las células ß pancreáticas fueron transducidas eficientemente por adenovirus inyectados vía sistémica en ratones a los cuales se les había cerrado la circulación hepática. Este resultado obtenido con vectores adenovirales de primera generación también se obtuvo cuando usamos vectores adenovirales de última generación, también llamados gutless. Además de vectores adenovirales, también se estudio la capacidad de transducir el páncreas de los vectores adenoasociados de serotipo 8 (AAV8). Así, se demostró que la vía de administración de los vectores AAV8 por el conducto pancreático era más efectiva que la administración de estos vectores por vía endovenosa o intraperitoneal.El páncreas del perro presenta una estructura lobular y una vascularización similar al humano, por tanto constituye un buen modelo para ensayar estrategias de transferencia génica a páncreas. En este trabajo se estudió la capacidad de los vectores adenovirales para transferir genes a páncreas in vivo en animales sometidos a un clamp circulatorio de los vasos pancreáticos. Adenovirus con el gen marcador de la ß-galactosidasa se inyectaron en la vena pancreaticoduodenal y el clamp se mantuvo durante 10 minutos. Usando esta técnica se consiguió transducir células acinares, ductales y también islotes pancreáticos sin evidencias de daño pancreático. Esta técnica también se ensayó con éxito en un perro diabético.Por consiguiente, la metodología descrita en este trabajo puede ser usada para transducir el páncreas in vivo, ya sea en ratones o en perros, con la finalidad de estudiar la biología de las células ß o bien para desarrollar nuevas aproximaciones terapéuticas para la diabetes mellitus y otras enfermedades pancreáticas. / Type 1 diabetes is characterized by progressive destruction of pancreatic ?-cells, resulting in insulin deficiency and hyperglycemia. Insulin replacement therapy allows diabetic patients to lead active lives, but this therapy is imperfect and does not prevent development of severe secondary complications. Transplantation of pancreatic tissue or islets has been performed successfully in a limited numbers of patients. However, the shortage of donors is a primary obstacle that prevents this treatment from becoming more widespread. Therefore, many efforts have been focused on differentiating embryonic or adult stem cells into ß-cells. Bone marrow cells (BMCs) are an important source of easily procurable adult stem cells and have been proposed as an alternative source of ß-cells. Insulin-like growth factor-I (IGF-I) participates in skeletal muscle regeneration and enhances the recruitment of BMCs at the sites of muscle injury. In addition, IGF-I expression in ß-cells of diabetic transgenic mice regenerates pancreatic ß-cell mass. Therefore one of the objectives of this study was to investigate whether IGF-I expression in ß-cells could increase BMC recruitment and differentiation into ß-cells under steady-state conditions or after STZ treatment. To this end, BMCs from ß-actin/GFP transgenic donor mice were transplanted into IGF-I transgenic mice. Our experiments have demonstrated that IGF-I overexpression or STZ-induced pancreatic damage were not sufficient to recruit and differentiate GFP-labelled BMCs into ß-cells in vivo, indicating that these cells did not contribute to the endocrine pancreas regeneration observed in IGF-I transgenic mice. These data suggest that replication of pre-existing ß-cells and/or differentiation from non-BMC precursors is the most likely mechanism for IGF-I-mediated regeneration.Diabetes mellitus has long been targeted, as yet unsuccessfully, as being curable with gene therapy. Recovery from type 1 diabetes requires ß-cell regeneration. One approach to do so is by genetically engineering the endocrine pancreas in vivo to express factors that induce ß-cell replication and neogenesis and counteract the immune response. However, the pancreas is difficult to manipulate and pancreatitis is a serious concern, which has made effective gene transfer to this organ elusive. Thus, new approaches for gene delivery to the pancreas in vivo are required. In this study we have examined different viral vectors and routes of administration in rodents and also in large animals, to determine the most efficient method to deliver exogenous genes to the pancreas. First, we observed that pancreatic ß-cells were efficiently transduced to express ß-galactosidase after systemic injection of adenoviral vectors in mice with clamped hepatic circulation. This was true both for first generation as well as for helper-dependent adenoviral vectors. In addition to adenoviruses, we have compared the ability of AAV vectors to transduce the pancreas in vivo after intravascular, intraperitoneal or intraductal delivery, being the last the most efficient route of administration. Like the human pancreas, the canine pancreas is compact, with similar vascularization and lobular structure. It is therefore a suitable model in which to assess gene transfer strategies. Here we examined the ability of adenoviral vectors to transfer genes into the pancreas of dogs in which pancreatic circulation has been clamped. Adenoviruses carrying the ß-galactosidase (ß-gal) gene were injected into the pancreatic-duodenal vein and the clamp was released 10 min later. These dogs showed ß-gal-positive cells throughout the pancreas, with no evidence of pancreatic damage. ß-gal was expressed mainly in acinar cells, but also in ducts and islets. ß-gal expression in the exocrine pancreas of a diabetic dog was also found to be similar to that observed in healthy dogs. Thus, the methodology described herein may be used to transfer genes of interest to murine and canine pancreas in vivo, both for the study of islet biology and to develop new gene therapy approaches for diabetes mellitus and other pancreatic disorders.

Lepidium meyenii Walp (maca) (Brassicaceae), es empleada tradicionalmente por sus diversas propiedades, entre las que destacan la mejora en el desempeño sexual en humanos, ratas y ratones, además de mejorar la espermatogénesis. Sin embargo, el mecanismo de como la maca influye sobre la espermatogénesis es aún desconocido En el presente estudio, ratones machos de edad adulta fueron tratados con el extracto acuoso de maca, durante periodos de 7, 14 y 21 días; al final de cada tratamiento se midieron los pesos, concentración espermática y se evaluó la expresión de ciclina A1 (Ccna1), citocromo P450 17α-hidroxilasa/17,20-liasa (Cyp17), protamina 2 (Prm2) y la proteína reguladora de esteroidogénesis aguda (StAR), genes involucrados en el proceso de espermatogénesis. En los resultados se observó que la maca incrementó significativamente (p menos 0.05) la concentración espermática en los 3 grupos tratados; además la expresión de los genes Ccna1, Cyp17 y Prm2 no fue afectada significativamente a diferencia de StAR, que muestra una regulación negativa en su expresión en los grupos de 7 y 14 días de tratamiento. Estos resultados sugieren que el mecanismo por el cual la maca incrementa la concentración espermática, no está relacionado al incremento de la actividad meiótica, ni a la síntesis de testosterona, sino mas bien a la respuesta de algún componente con actividad androgénica presente en el extracto acuoso de maca, evidenciado por el efecto negativo sobre la expresión de StAR. Estos resultados revalidan la importancia de maca como potenciador reproductivo, sin el riesgo del incremento de andrógenos, contraindicados para los casos de cáncer de próstata. / Lepidium meyenii Walp. (maca) (Brassicaceae) is widely used as a folk medicine, for the ability to enhance the sexual performance in humans, rats and mice, besides to improve the spermatogenesis. However, the way maca acts on spermatogenesis still unclear. In this study, adult male mice were treated with maca aqueous extract during periods of 7, 14 and 21 days, after each treatment, physiological parameters were measured and the expression of cyclin A1 (Ccna1), cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase (Cyp17), protamine 2 (Prm2) and steroidogenic acute regulatory protein (StAR) (genes involved in spermatogenesis), were recorded. The results shows that maca increased significantly (p less than 0.05) sperm concentration in the three treatment groups, plus Ccna1, CYP17 and Prm2 expression were not significantly affected, while StAR, shows a negative regulation on their expression in groups of 7 and 14 days of treatment. These results suggest, that the mechanism maca increases sperm concentration is not related to increased meiotic activity, or the synthesis of testosterone, but rather the response of a component with androgenic activity present in the aqueous extract of maca, evidenced by the negative effect on StAR expression. These results re-enact the importance of maca as reproductive enhancer without running the risk of increased androgen contraindicated in cases of prostate cancer.

En esta tesis, se ha caracterizado reproductivamente una línea de conejo seleccionada por velocidad de crecimiento (línea R), evaluando las pérdidas a lo largo de la gestación y sus posibles causas. El documento se ha estructurado en dos bloques: (i) formado por dos experimentos, en los que se han determinado las pérdidas en las diferentes etapas gestacionales, así como los niveles hormonales de progesterona, 17?-estradiol e IGF-I en distintos momentos de la gestación, y la influencia que los genotipos embrionario y materno tienen sobre las pérdidas, y (ii) formado por tres experimentos, donde se estudió la expresión relativa de diferentes genes relacionados con los fenómenos de desarrollo embrionario y de implantación. Los resultados obtenidos en el primer experimento fueron que la línea R presenta una baja respuesta a la inducción de la ovulación, además de elevadas pérdidas implantacionales (31%), fetales (40%) y perinatales (15%), pese a presentar tasas de ovulación, de fecundidad y de desarrollo embrionario hasta las 48 horas similares a las observadas en otras líneas de conejo. Una posible explicación de estas pérdidas gestacionales es, tal vez, como consecuencia de unos bajos niveles de 17?-estradiol a 12 y a 24 días de gestación que implican una menor producción de progesterona a 24 días. Por su parte, los elevados niveles de IGF-I observados a 12 días de gestación, podrían poner de manifiesto alteraciones metabólicas en esta línea, pudiendo influir en las elevadas pérdidas gestacionales. En el segundo experimento, se estudió el efecto de los genotipos embrionario y materno en las pérdidas. Los resultados mostraron que, tanto la supervivencia embrionaria (hasta los 14 días de gestación) como el peso de la placenta fetal dependen de ambos genotipos, mientras que la supervivencia fetal (a los 25 días de gestación) y el peso fetal dependen únicamente del genotipo embrionario. / Llobat Bordes, MD. (2012). Estudio de los factores materno-embrionario que determinan la fertilidad y prolificidad en una línea de conejo seleccionada por velocidad de crecimiento [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/14640 / Palancia

La tesis tiene como objetivo central el estudio de la maduración del fruto, proceso fisiológico escasamente conocido a nivel molecular. Para ello se han aislado y caracterizado varias mutaciones de clementino, los cuales han sido empleados para la identificación de rutas bioquímicas y genes importantes en el proceso de maduración. Además, se ha estudiado el proceso de degradación del ácido cítrico en los frutos, centrándose en la función de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa. OBJETIVOS 1- Selección y caracterización de nuevos genotipos de Clementina con alteraciones en la maduración interna. 2- Identificación de genes alterados en estos genotipos mediante micromatrices de cDNA específicas de cítricos. 3- Correlación simultánea de los genes alterados en los mutantes con los parámetros de maduración para identificar genes involucrados en el proceso de maduración. 4- Detección de genes delecionados en mutantes irradiados de Clementina mediante CGH y FISH-BAC. 5- Estudio de la degradación de ácido cítrico en los frutos y análisis de la participación en el proceso del gen que codifica para la proteína fosfoenolpiruvato carboxiquinasa. METODOLOGÍA A DESTACAR: Se han empleado técnicas de biología molecular (hibridación de micromatrices de cDNA, RT-PCR semicuantitativa). La detección de genes delecionados se ha realizado por CGH y FISH-BAC. También se han utilizado técnicas bioquímicas como el suplemento de ácido cítrico frio y marcado con 13C y el análisis de GC-MS. RESULTADOS LOGRADOS: Se han caracterizado cinco genotipos de Clementina con alteraciones en la maduración. Se han identificado 161 genes implicados en la maduración. Los datos indican que la acumulación de ácido cítrico se relaciona con la inhibición de la ruta GABA mientras que la reducción en acidez depende de la inhibición de la síntesis y metabolismo del citrato. Los resultados sugieren que la degradación de ácido cítrico se produce por la ruta de GABA. / Ibáñez González, V. (2012). Selección y caracterización de mutantes en Clementina. Cambios del transcriptoma asociados a la maduración del fruto de los cítricos y análisis de la expresión del gen fosfoenolpiruvato carboxiquinasa [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/14672 / Palancia

Lepidium meyenii Walp (maca) (Brassicaceae), es empleada tradicionalmente por sus diversas propiedades, entre las que destacan la mejora en el desempeño sexual en humanos, ratas y ratones, además de mejorar la espermatogénesis. Sin embargo, el mecanismo de como la maca influye sobre la espermatogénesis es aún desconocido En el presente estudio, ratones machos de edad adulta fueron tratados con el extracto acuoso de maca, durante periodos de 7, 14 y 21 días; al final de cada tratamiento se midieron los pesos, concentración espermática y se evaluó la expresión de ciclina A1 (Ccna1), citocromo P450 17α-hidroxilasa/17,20-liasa (Cyp17), protamina 2 (Prm2) y la proteína reguladora de esteroidogénesis aguda (StAR), genes involucrados en el proceso de espermatogénesis. En los resultados se observó que la maca incrementó significativamente (p menos 0.05) la concentración espermática en los 3 grupos tratados; además la expresión de los genes Ccna1, Cyp17 y Prm2 no fue afectada significativamente a diferencia de StAR, que muestra una regulación negativa en su expresión en los grupos de 7 y 14 días de tratamiento. Estos resultados sugieren que el mecanismo por el cual la maca incrementa la concentración espermática, no está relacionado al incremento de la actividad meiótica, ni a la síntesis de testosterona, sino mas bien a la respuesta de algún componente con actividad androgénica presente en el extracto acuoso de maca, evidenciado por el efecto negativo sobre la expresión de StAR. Estos resultados revalidan la importancia de maca como potenciador reproductivo, sin el riesgo del incremento de andrógenos, contraindicados para los casos de cáncer de próstata. / Lepidium meyenii Walp. (maca) (Brassicaceae) is widely used as a folk medicine, for the ability to enhance the sexual performance in humans, rats and mice, besides to improve the spermatogenesis. However, the way maca acts on spermatogenesis still unclear. In this study, adult male mice were treated with maca aqueous extract during periods of 7, 14 and 21 days, after each treatment, physiological parameters were measured and the expression of cyclin A1 (Ccna1), cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase (Cyp17), protamine 2 (Prm2) and steroidogenic acute regulatory protein (StAR) (genes involved in spermatogenesis), were recorded. The results shows that maca increased significantly (p less than 0.05) sperm concentration in the three treatment groups, plus Ccna1, CYP17 and Prm2 expression were not significantly affected, while StAR, shows a negative regulation on their expression in groups of 7 and 14 days of treatment. These results suggest, that the mechanism maca increases sperm concentration is not related to increased meiotic activity, or the synthesis of testosterone, but rather the response of a component with androgenic activity present in the aqueous extract of maca, evidenced by the negative effect on StAR expression. These results re-enact the importance of maca as reproductive enhancer without running the risk of increased androgen contraindicated in cases of prostate cancer. / Tesis

Las Repeticiones Cortas en Tandem (STR) son marcadores genéticos distribuidos en todo el genoma, se han venido utilizando en estudios de ligamiento genético de enfermedades, identificación humana y genética de poblaciones debido a su alto grado de polimorfismo. En este trabajo se presentan los resultados obtenidos en una muestra de 35 individuos no emparentados de la población de Yungay (Ancash-Perú), mediante la determinación de los alelos de los STRs: HumTH01 (Tirosina hidroxilasa) y HumTPOX (Tiroidea peroxidasa) con la técnica de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa), electroforesis en geles de poliacrilamida al 6% 7M urea y visualizados con la tinción con nitrato de plata. En la población de Yungay se detectaron los alelos 6, 7 y 9.3 para el marcador HumTH01 con un valor de heterocigosidad de 0.5429 y de homocigosidad de 0.4571. Mientras para el marcador TPOX se detectaron los alelos 8, 9, 11 y 12 con un valor de heterocigosidad de 0.3429 y de homocigosidad de 0.6571. La distribución de frecuencias para el marcador HumTH01 para el alelo 6 igual a 0.3286, alelo 7 igual a 0.5143 y alelo 9.3 igual a 0.1571; y para el marcador TPOX para el alelo 8 igual a 0.7571, alelo 9 igual a 0.0143, alelo 11 igual a 0.2143 y alelo 12 igual a 0.0143. La población se encontró en equilibrio de Hardy-Weinberg para ambos marcadores y, además, no existe diferencia significativa entre las frecuencias alélicas de ambos marcadores de la población de Yungay y la hispanoamericana reportadas por Steven et al. (1998). / ---Short tandem repeats (STRs) are genetic markers distributed throught the whole genome. Over the last years, they have been used to study the genetic linkage of diseases, human identification and populations genetic due to its high degree of polymorphism. In this work, the results presented were obtained in the allele determination with the STRs: HumTH01(Human tyrosine hydroxylase gene) and HumTPOX (Human thyrid peroxidase gene) in the population sample constituted by 35 non-related individuals from Yungay (Ancash-Peru). The technique used were PCR, 7M urea 6% poliacrylamide gel electroforesis and visualized with silver nitrate staining. In Yungay's population, we found 3 alleles 6, 7 and 9.3 for HumTH01 with a value of heterozigocity of 0.5429 and homocigocity of 0.4571, and for marker HumTPOX 4 alleles 8, 9, 11 and 12with a value of heterozigocity of 0.3429 and homocigocity of 0.6571. The frequency distribution for marker HumTH01 for allele 6 equal to 0.3286, allele 7 equal to 0.5143 and allele 9.3 equal to 0.1571; and for marker TPOX for allele 8 equal to 0.7571, allele 9 equal to 0.0143, allele 11 equal to 0.2143 and allele 12 equal to 0.0143. The population is found in Hardy-Weinberg equilibrium, and there are no significant differences between the allelic frequencies of both markers between Yungay's population and the Hispano-American reported by Steven et al. (1998)