Tendo em vista o crescente uso do óleo essencial do orégano com diferentes finalidades terapêuticas, testes de toxicidade pré-clínica são imprescindíveis. No presente trabalho o potencial genotóxico deste óleo essencial foi testado através do teste de micronúcleos em medula óssea de ratos Wistar (Rattus norvergicus). Grupos de 5 ratos machos e 5 fêmeas foram tratados com o óleo essencial do orégano, por via oral em três doses: 2000, 1000 e 500 mg.kg-1 respectivamente, um controle negativo utilizando o veículo da administração do óleo, Tween 80 (0,001%), um controle positivo utilizando ciclofosfamida, substância sabidamente mutagênica (25 mg.kg-1) e um controle positivo utilizando os compostos majoritários encontrados no óleo testado. Em todas as doses utilizadas, com exceção do GC+, a frequência de micronúcleos foi avaliada após 3 dias de administração. A citotoxicidade foi avaliada pela relação entre eritrócitos policromáticos e eritrócitos normocromáticos (EPC/ENC) e a frequência de eritrócitos micronucleados. O óleo essencial, nas doses testadas, não afetou o desenvolvimento ponderal de ratos machos e fêmeas tratados. Os resultados revelaram através da proporção de EPC/ENC, que o óleo essencial do orégano e o controle positivo com os compostos majoritários causaram uma leve toxicidade na medula óssea de ratos Wistar, por meio de uma leve depressão na medula óssea. Não houve um aumento estatisticamente significativo (Kruskal-Wallis p > 0,01) de frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos nas 3 doses do óleo essencial do orégano, mas aumentou a frequência de EPCMN do controle positivo com os compostos majoritários induzindo assim genotoxicidade nos eritrócitos dos ratos. Com base nos resultados é possível sugerir que através deste teste citogenético o óleo essencial do orégano utilizado neste experimento, não apresenta atividade genotóxica nas doses utilizadas. / Given the increasing use of essential oil of oregano with different therapeutic effects, toxicity tests are essential pre-clinical. In this work the genotoxic potential of essential oil was tested by the micronucleus test in bone marrow of rats (Rattus norvegicus). Groups of 5 males and 5 female rats were treated with the essential oil of oregano orally in three doses: 2000, 1000 and 500 mg.kg-1 respectively, a negative control using the vehicle for administering the oil, Tween 80 (0.001%), a positive control using cyclophosphamide, a substance known to be mutagenic (25 mg.kg-1) and a positive control using the major compounds found in oil tested. At all doses, except for GC +, the frequency of micronuclei was evaluated after 3 days of administration. Cytotoxicity was evaluated by the ratio of polychromatic erythrocytes and erythrocytes normochromatic (EPC / ENC) and the frequency of micronucleated erythrocytes. The essential oil in the doses tested, did not affect the growth of male and female rats treated. The results revealed by the ratio of EPC / forward, that the essential oil of oregano and the positive control with the major compounds caused a mild toxicity in the bone marrow of rats, through a slight depression in the bone marrow. There was a statistically significant increase (Kruskal-Wallis p> 0.01) frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes in 3 doses of essential oil of oregano, but increased the frequency of MNPCE positive control with the major components thus inducing genotoxicity in erythrocytes mice. Based on the results is possible to suggest that through this cytogenetic test the essential oil of oregano used in this experiment does not show genotoxic activity at the doses used.

O selênio (Se) é um nutriente essencial para o funcionamento adequado do organismo humano e também interfere na fisiopatologia de diversas doenças, principalmente daquelas que possuem o estresse oxidativo nas suas bases patológicas. Esse é o caso da doença de Parkinson (DP), que causa diversos distúrbios do movimento e afeta principalmente indivíduos idosos no mundo todo. Além do estresse oxidativo, vários outros fatores contribuem para a patogênese da DP, entre eles a exposição ao pesticida paraquat (PQ). Por causar a morte seletiva dos neurônios dopaminérgicos da substância negra do mesencéfalo, que é considerada a neurodegeneração característica da DP, o PQ pode ser utilizado para induzir modelos animais da doença. Neste contexto, o objetivo deste trabalho é investigar os efeitos do Se sobre a neurotoxicidade, genotoxicidade, função locomotora e alterações teciduais em ratos Wistar submetidos a um modelo experimental da DP induzido por PQ. Ainda, uma ampla revisão bibliográfica sobre os efeitos do Se sobre a DP também foi conduzida. Os principais resultados experimentais deste estudo indicaram que o PQ induziu danos no DNA dos leucócitos dos animais testados, mas não às células do encéfalo, sendo que o uso do Se protegeu contra os danos no DNA encontrados nos leucócitos (dados obtidos com a aplicação do Ensaio Cometa). O PQ causou dano locomotor nos animais, que também foram evitados através do uso do Se (conforme indicou os dados do Teste da Barra Estreita). Com a realização de análises histopatológicas verificou-se que o PQ ocasionou alterações teciduais no tecido pulmonar dos ratos, mas não no fígado, testículos e cerebelo. Os efeitos tóxicos do PQ ao pulmão foram minimizados pelo Se. Através de análise histomorfométrica, não foi encontrada diferença significativa na espessura da camada granular do cerebelo entre os grupos experimentais testados. De forma integrada, os resultados obtidos experimentalmente neste trabalho associados à pesquisa bibliográfica realizada indicaram que o uso do Se é promissor para combater os efeitos tóxicos do PQ. Ainda, sugeriram que o mineral possui potencial para ser usado no tratamento dietoterápico da DP e em estratégias de prevenção da mesma em indivíduos com histórico familiar da doença. / Selenium (Se) is an essential nutrient for the proper functioning of the human body, and interferes in the pathophysiology of various diseases, particularly those that have oxidative stress in their pathological bases. This is the case of Parkinson's disease (PD), which causes movement disorder and affects mainly elderly individuals worldwide. In addition to oxidative stress, several other factors contribute to the pathogenesis of PD, including exposure to pesticide paraquat (PQ). By causing the selective death of dopaminergic neurons in the substantia nigra of the midbrain, which is considered the characteristic neurodegeneration of PD, PQ can be used to induce animal models of the disease. In this context, the aim of this study is to investigate the effects of Se on neurotoxicity, genotoxicity, locomotor function and tissue changes in Wistar rats submitted to an experimental model of PD induced by PQ. Still, a broad literature review on the effects of Se on PD was conducted. The main experimental results of this work indicated that the PQ induced DNA damage in leukocytes of the animals tested, but not in the brain cells, and the use of Se protected against DNA damage found in leukocytes (data obtained using the Comet Assay). The PQ caused locomotor damage in the animals, which was also avoided by the use of Se (as indicated by the data from Narrow Beam Test). By performing histopathological analysis, it was found that PQ caused injury in the lung tissue of rats, but not in liver, testis, and cerebellum. Se attenuated the toxic effects of PQ to the lung. By histomorphometric analysis, there was no significant difference in the thickness of the granular layer of the cerebellum between the tested experimental groups. In an integrated manner, the results obtained experimentally in this work associated to the performed literature review indicated that the use of Se is promising to combat the toxic effects of PQ. Also suggested that the mineral has the potential to be used in the dietary treatment of PD and in prevention strategies of the disease in individuals with a family history of the PD.

A genotoxicidade do SnCl2 foi avaliada nos ensaios Salmonella/Microssoma, WP2 Mutoxiteste e com a utilização de linhagens haplóides e diplóides de S. cerevisiae. O presente estudo pôde demonstrar, claramente, que o SnCl2 apresenta um potencial tóxico e uma significativa atividade mutagênica em diferentes ensaios de reversão. O mutante rad52D, deficiente no mecanismo de reparação recombinacional, incapaz de reparar quebras simples e duplas no DNA, foi o mais sensível. As células tratadas com Sn2+ formaram agregados que levaram a uma superestimativa da toxicidade, quando não corretamente desfeitos. Ensaios de inativação corretos, nas doses de 25 mM e 75 mM de SnCl2, foram obtidos através da desagregação das células com EDTA ou tampão fosfato. O Sn2+ induziu reversão na levedura, nos lócus his1-798 (células diplóides), his1-208 e lys-1-1 (células haplóides), bem como mutação no quadro de leitura em células haplóides no lócus hom3-10. Em células diplóides, o SnCl2 induziu recombinação mitótica intragênica, enquanto que a recombinação intergênica não foi significativamente pronunciada. A mutagenicidade do Sn2+ foi demonstrada pelos ensaios de reversão de auxotrofias, mas não pôde ser evidenciada nos ensaios de mutação para a frente. A morte seletiva dos mutantes espontâneos para a canavanina, quando as células são tratadas com SnCl2, sugeriu uma indução de disfunções da membrana das células As células da levedura em fase de crescimento exponencial apresentaram, com apenas 0,1% da concentração de SnCl2, o mesmo perfil de sobrevivência quando comparado com as células em fase de crescimento respiratório, sugerindo um maior envolvimento de parâmetros fisiológicos na resistência ao estresse oxidativo gerado pelo SnCl2 após as células atingirem a fase pós diáuxica. As superoxido dismutases, mas não a catalase, protegeram contra as espécies reativas de oxigênio que o estanho produziu. O mutante sod1D apresentou uma sensibilidade três vezes maior do que a linhagem selvagem, enquanto que o mutante sod2D demonstrou uma sensibilidade pequena ao SnCl2. O duplo mutante sod1Dsod2D mostrou um aumento acentuado na sensibilidade quando comparado com a linhagem selvagem. No teste de Salmonella/Microssoma, o SnCl2 não induziu mutação no quadro de leitura (TA97 e TA98) e nem substituição de pares de bases (TA100), ao passo que uma resposta positiva foi observada com a linhagem TA102 que detecta mutagênicos oxidativos. O SnCl2 também induziu mutação na linhagem IC203 (uvrA oxyR), e não na linhagem IC188 (uvrA). Esses resultados indicaram que o SnCl2 é um agente mutagênico moderado. Provavelmente, o dano ao DNA é causado por espécies reativas de oxigênio e é reparado por um processo recombinacional e por um processo sujeito a erros.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:57:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10263_Dissertação Final Glaucia Cunha de Mello.pdf: 1466515 bytes, checksum: 56df76f8e521b1cfc06c14f68e36a04c (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / O tratamento do esgoto doméstico tem ocasionado a produção de grande quantidade de resíduo sólido, o lodo de esgoto, sendo uma problemática ambiental. Por ser fonte de nutrientes essenciais para o desenvolvimento de plantas de interesse agronômico é, sem dúvida uma das melhores alternativas para sua disposição final. Todavia, a reciclagem do lodo de esgoto deve ocorrer de forma segura à população e ao ambiente, uma vez que o resíduo pode conter compostos orgânicos e inorgânicos, como os metais pesados tóxicos, além de patógenos. Objetivou-se com este estudo analisar o crescimento de mudas de Coffea arabica L. no substrato composto com lodo de esgoto higienizado bem como o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do lodo por meio do bioensaio de toxicidade genética em Allium cepa. O experimento foi conduzido em condições de viveiro. Os substratos utilizados foram: solo (Horizonte B argissolo) nas proporções de 85% para o tratamento T1 acrescido de 15% de esterco bovino, 85% para o tratamento T2 com adição de 15% de lodo de esgoto higienizado, 70% para o tratamento T3 acrescido de 30% de lodo esgoto higienizado, 55% para o tratamento T4 acrescido de 45% de lodo de esgoto higienizado e 40% para o tratamento T5 acrescido de 60% de lodo de esgoto higienizado, perfazendo cinco tratamentos com seis repetições. Foram avaliadas variáveis de crescimento após o período de formação das mudas e, posteriormente, foi realizada a análise de toxicidade dos substratos em células meristemáticas radiculares de Allium cepa, sendo que 5.000 células foram analisadas por tratamento de contato direto e solubilizados das amostras e controles. Todas as variáveis foram afetadas negativamente a partir do incremento de lodo de esgoto higienizado. Os tratamentos com lodo de esgoto por contato direto apresentaram efeito citotóxico, genotóxico e mutagênico. Os tratamentos com lodo de esgoto solubilizado apresentaram efeito genotóxico. O uso de lodo de esgoto higienizado em substratos para formação das mudas de café não foi eficiente por motivos de toxicidade, não favorecendo o seu crescimento.

Corantes são utilizados na coloração de diferentes substratos, incluindo papel, couro e plásticos, mas o uso mais importante é o têxtil e 1 a 5% destes corantes podem ser descartados no ambiente. Em geral, os corantes do tipo azo são tóxicos para os organismos aquáticos e alguns tipos de corantes podem ser mais tóxicos que outros. Mas, embora estes compostos e seus produtos de transformação reduzidos e/ou clorados podem ser encontrados no ecossistema aquáticos, não existem dados sobre genotoxicidade em organismos aquáticos até o momento. Muitos estudos têm demonstrado que avaliar danos ao DNA representa um biomarcador de exposição muito sensível em espécies aquáticas, que pode ser estudado utilizando ensaios in vivo e in vitro, como no caso das linhagens de células de peixe. Os objetivos deste trabalho foram: avaliar a ocorrência de corantes dispersos em amostras ambientais; avaliar a mutagenicidade dessas amostras utilizando o ensaio de Salmonella/microssoma com as linhagens TA98 e YG1041, e a genotoxicidade com o ensaio do cometa em culturas celulares de peixe RTL-W1. HPLC-MS/MS foi utilizada para verificar a ocorrência de corantes em amostras do Rio Piracicaba à montante e à jusante do Ribeirão Quilombo e do descarte de uma Estação de Tratamento de Efluentes (ETE), localizados no Estado de São Paulo, Brasil. Foram detectados seis corantes dispersos nas amostras de águas superficiais e efluentes. O corante Disperse Red 1 foi o composto mais frequente, detectado em 8 das 16 amostras, porém sua contribuição para a mutagenicidade total foi baixa; os corantes Disperse Blue 373 e Disperse Violet 93 foram os que mais contribuíram. A genotoxicidade do Rio Piracicaba, avaliada pelo ensaio de Salmonella/microssoma e ensaio do cometa, aumentou após o lançamento do Ribeirão Quilombo e do efluente ETE, mostrando uma possível contribuição destes na genotoxicidade do Rio Piracicaba. / Dyes are used in the coloration of different substrates, including paper, leather and plastics, but the most important use is on textiles and 1 to 5% of these dyes might be lost into the environment. Azo dyes are the most important class, accounting for over 50% of all commercial dyes, and this class has been the most studied. In general, azo dyes are toxic to aquatic organisms and some types of dyes are more toxic than others. But although these compounds as well as their reduced/chlorinated transformation products can be found in aquatic ecosystems, no mutagenicity data are available until now in aquatic organisms. This remark remains of value, as well, regarding genotoxicity potential of such dyes towards aquatic organisms. Many studies have demonstrated that DNA damage measurement represents a very sensitive biomarker of exposure in aquatic species that can be studied both in vivo and in vitro using for example fish cell lines. The objectives of this work were evaluate the occurrence of disperse dyes in environmental samples; evaluate the mutagenicity of this samples using the Salmonella/microsome assay with strains TA98 and YG1041; evaluate the genotoxicity using the comet assay with fish cell lines RTL-W1. HPLC-MS/MS was used to verify the occurrence of dyes in samples of Piracicaba River upstream and downstream the discharge of Quilombo River and Wastewater Treatment Plant (WWTP) effluent, located in São Paulo State, Brazil. Six dyes were detected in samples of water and effluents. Disperse Red 1 dye was detected in 8 of 16 samples, but its contribution for the mutagenicity was low. Disperse Blue 373 and Disperse Violet 93 were the major contributors for the mutagenicity found in the samples. The genotoxicity of Piracicaba River, evaluated with Salmonella/microsome assay and comet assay, increased after the discharges of Quilombo River and the effluent of WWTP, showing a contribution of this discharges on the river genotoxicity.

Durante as atividades de mineração de carvão, grandes quantidades de cinzas, metais, óxidos e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAP) são liberados ao ambiente. As partículas de carvão e cinzas são quimicamente complexas e têm a capacidade de interagir com mecanismos celulares e não celulares que desencadeiam a ativação de macrófagos, células epiteliais e fibroblastos, a liberação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e expressão de citocinas. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade in vitro, e fisiologia respiratoria in vivo, da exposição a partículas de carvão e cinzas provenientes de Santa Catarina-Brasil. Foram avaliadas quatro amostras, duas de carvão mineral (COAL11 e COAL16) e duas de cinzas produto da combustão de cada carvão (CFA11 e CFA16). Particularmente, a amostra CFA16 é produto da co-combustão com óleo combustível e óleo diesel. Na avaliação in vitro, COAL11, COAL16 e CFA16 foram mais citotóxicas do que a cinza CFA11 como avaliado no ensaio clonogênico. A exposição das células V79 às partículas de carvão e cinzas induziram lesões primárias no DNA detectadas no ensaio Cometa Alcalino. Partículas de COAL16 e CFA16, em maiores concentrações, foram capazes de induzir danos oxidativos no DNA em células V79, como demonstrado no ensaio Cometa Modificado (FPG e ENDOIII). Nos biomarcadores do ensaio CBMN-Cyt os resultados mostraram que as concentrações mais altas de carvão e cinzas induziram efeitos citotóxicos e instabilidade cromossômica. In vivo, camundongos BALB/c foram analisados 24 h após instilação intratraqueal com partículas de carvão e cinzas. Os camundongos expostos a partículas de carvão apresentaram rigidez pulmonar e obstruções das vias aéreas centrais quando comparado com o grupo controle, nos parâmetros da mecânica pulmonar. Quando expostos às partículas de carvão e cinzas, os animais mostraram recrutamento de células, principalmente as mononucleares, e expressão de citocinas, principalmente TNF-α e IL-1β, quando comparado com o grupo controle. Na histologia, não foram encontradas alterações significativas nos alvéolos, nem formação de fibras elásticas e colágenas. Resultados no ensaio Cometa Alcalino mostraram efeitos genotóxicos significativos em células de sangue periférico nos animais expostos a partículas de carvão e cinzas. As análises dos elementos inorgânicos usando o método PIXE, demostraram translocação extrapulmonar de metais ao fígado, baço e encéfalo. Comparativamente, de todas as amostras avaliadas, a CFA11 apresentou o maior diâmetro no tamanho das partículas como avaliado mediante análise de difração de laser. Os resultados demostraram que o processo de combustão altera a toxicidade das partículas de carvão, e o uso de combustíveis adicionais dentro do processo de queima, como foi o caso da amostra CFA16, muda as caraterísticas das partículas geradas quanto ao tamanho e toxicidade das mesmas. Estes resultados in vitro e in vivo estão relacionados com os compostos contidos na superfície das partículas, tais como óxidos, metais e HAP detectados nas amostras. Este conjunto de dados aportam ao estado do conhecimento sobre os riscos da exposição continua a este tipo de partículas. / During the coal mining activities, large amounts of fly ash, metals, oxides and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) are released to the environment. Coal and fly ash particles are chemically complex and are capable of interacting with cellular and non-cellular mechanisms that trigger the release of reactive oxygen species (ROS) and expression of cytokines from activated macrophages, epithelial cells and fibroblasts. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity in vitro, and respiratory physiology in vivo, of exposure to coal and coal fly ash particles from Santa Catarina-Brazil. Four samples were collected, two from coal (COAL11and COAL16) and two from coal fly ash released during combustion (CFA11 and CFA16). Particularly, the CFA16 sample was the product of co-firing with fuel oil and diesel oil. In vitro evaluation, COAL11, COAL16 and CFA16 were more cytotoxic than CFA11sample as assessed in clonogenic assay. The exposure of V79 cells to coal particles and coal fly ash induced primary DNA damage detected in Comet Alkaline test. COAL16 and CFA16 particles, at higher concentrations, were capable of inducing oxidative DNA damage in V79 cells, as demonstrated in the Modified Comet assay (FPG and ENDOIII). Results in the biomarkers CBMN-Cyt test showed that higher concentrations of coal and coal fly ash particles induced cytotoxic effects and chromosomal instability. In vivo, BALB/c mice, were analyzed 24 h after intratracheal instillation with coal and coal fly ash particles. The mice exposed to coal particles showed significant rigidity and obstruction of the central airways when compared with the control group. In addition, the animals showed recruitment of cells, mainly mononuclear cells, and expression of cytokines, particularly TNF-α and IL-1β as compared to the control group. Histologically, there were no significant alterations in the alveoli, or formation of elastic and collagen fibers. Alkaline Comet assay results showed significant genotoxic effects on peripheral blood cells in animals exposed to coal and coal fly ash particles. The analysis of inorganic elements using the PIXE method demonstrated the efficient metal extrapulmonary translocation into the bloodstream to the liver, spleen and brain. When comparing particle size, CFA11showed the largest diameter as assessed by analysis of laser diffraction. The results showed that the combustion process alters the toxicity of coal particles and the use of additional fuel in the firing process, modifies the toxicity and size of the particles, as was the case of the CFA16 sample. These results in vitro and in vivo are associated with the compounds contained in the surface of the particles, such as oxides, metals and PAH detected in these samples. This study contribute to the state of knowledge of the risks of continuous exposure of these particles.

A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-13Bitstream added on 2014-06-13T21:01:39Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_tcc_dr_rcla.pdf: 2200644 bytes, checksum: 409c85d73c03ec2d26288cc8ef322eaa (MD5) / O ramnolipídio é um biossurfactante da classe dos glicolipídios, produzido pela bactéria Pseudomonas aeruginosa. Estudos têm mostrado que, mesmo com um grande potencial de uso do ramnolipídio na indústria cosmética e na área da saúde, este composto é, principalmente, promissor para uso na indústria do petróleo. Apesar dos biossurfactantes serem considerados menos tóxicos e mais biodegradáveis que os surfactantes sintéticos, estes compostos ainda não foram investigados quanto a sua ação genotóxica direta ou indireta sob o material genético de organismos expostos. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi investigar os possíveis danos celulares promovidos pela ação do biossurfactante ramnolipídio e suas implicações no material genético quando utilizado como agente biorremediador de águas impactadas por petróleo, por meio dos bioindicadores Allium cepa, Oreochromis niloticus e as células humanas mantidas em cultura - HepG2. Para a realização da investigação, o biossurfactante ramnolipídio foi produzido em condições de laboratório e a partir da concentração indicada para o uso em processos de biorremediação (1g/L), foram estabelecidas as concentrações utilizadas no estudo. Para avaliar o potencial tóxico, genotóxico e mutagênico das concentrações de ramnolipídio, assim como seu feito sinérgico com o petróleo, foram realizados os testes de germinação de sementes, aberrações cromossômicas e teste do micronúcleo em A. cepa; teste do micronúcleo em eritrócitos circulantes, ensaio do cometa com sangue periférico e células de brânquias e análise ultraestruturais de eritrócitos circulantes em O. niloticus; e teste do MTT, teste do micronúcleo e ensaio do cometa em células HepG2. Nossos resultados mostraram que as concentrações 1g/L e 2g/L de ramnolipídio são tóxicas para A. cepa. No entanto, quando as concentrações 1g/L e 10g/L... / Rhamnolipids belong to the glycolipid class of biosurfactants, which are produced by the bacterium Pseudomonas aeruginosa. Studies have shown that, even being potentially used in the cosmetics industry, this compound is especially promising in the petroleum industry. Although the biosurfactants are considered less toxic and more biodegradable than the synthetic surfactants, these compounds have not yet been investigated when it comes to their either direct or indirect genotoxic action upon the genetic material of exposed organisms. Thus, the purpose of this study was to investigate the possible cell damage promoted by the action of rhamnolipid biosurfactants and their implications for the genetic material when they are used as a bioremediation agent of petroleum-impacted water, by using Allium cepa, Orechromis niloticus and human cells kept in culture – HepG2. In order to carry out this investigation, the rhamnolipid biosurfactant was produced under laboratory conditions, and the recommended concentration for use in bioremediation processes (1g/L) was also used; the concentrations used in the study were established. To assess the toxic, genotoxic and mutagenic potential of rhamnolipid concentrations, as well as their synergy with petroleum, seed germination, chromosome aberration tests and micronucleus test in A. ceppa; micronucleus test in circulating red blood cells, comet assay in the peripheral blood and gill cells, and ultrastructural analysis of circulating blood cells in O. niloticus; and MTT test, micronucleus test and comet assay in HepG2 cells. Our studies showed that the 1 g/L and 2 g/L rhamnolipid concentrations are toxic to A. cepa. However, when 1 g/L and 10 g/L concentrations were used in the bioremediation process, these concentrations did not cause toxic, genotoxic or mutagenic damage besides the ones observed for the cells exposed to soluble petroleum... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-30Bitstream added on 2014-06-13T20:01:19Z : No. of bitstreams: 1 camargo_sea_dr_sjc.pdf: 640663 bytes, checksum: 4cae675acd74b1d6da77301be420d2d3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alguns materiais endodônticos são capazes de liberar componentes tóxicos que podem interagir com o tecido pulpar e/ou periapical. A proposta deste estudo foi avaliar in vitro, em nível molecular, os possíveis efeitos citotóxicos e genotóxicos de materiais endodônticos sobre cultura de células pulpares humanas transformadas (tHPC) e fibroblastos V79. Os espécimes de hidróxido de cálcio (HC, Hydro C, Dentsply, Brasil), MTA cinza (Angelus, Brasil), MTA branco (Angelus, Brasil) e polímero da mamona (POM, Poliquil, Brasil) foram misturados e colocados em meio de cultura (91,6 mm2 superfície /ml) por 24h em 37°C. Vitrebond (3M ESPE) foi utilizado como grupo controle positivo. As tHPC foram expostas aos extratos e diluições dos materiais e após 24h, a sobrevivência celular foi determinada pelo teste de cristal violeta. A liberação de espécies reativas de oxigênio (ROS) em tHPC foram mensuradas após 1h de exposição aos materiais. ROS foram detectados pelo manchamento das células com H2DCF-DA e a fluorescência foi mensurada por citometria de fluxo (FACS). A genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos em células V79 após 24h de exposição ao HC, MTA cinza, POM e etilmetano sulfanato (controle positivo). O atraso do ciclo celular normal de células V79 foi analisado, após a exposição ao MTA cinza, HC, POM e TEGDMA (controle positivo) por FACS. As diferenças entre a taxa de sobrevivência celular, fluorescência, número de micronúcleos e distribuição de células no ciclo celular foram estatisticamente analisadas pelo teste de Mann-Whitney-U (p<0,05). A citotoxicidade em relação ao grupo controle decresceu na seguinte ordem Vitrebond > HC > MTA branco = MTA cinza >>> POM. O POM causou indução da proliferação celular, enquanto o HC diminuiu a sobrevivência celular significativamente (p<0,05)... / Endodontic materials could release toxic components that may interact with pulp or periapical tissues. The purpose of this study was evaluated the cytotoxicity and genotoxicity of endodontic materials on transformed human pulp-derived cells (tHPC) and fibroblasts V79. Specimens of calcium hydroxide (Hydro C, Dentsply- Brazil), MTA gray (Angelus-Brazil), MTA white (Angelus-Brazil), and castor oil bean (COB, Poliquil-Brazil) were mixed and subsequently extracted in culture medium (91,6 mm2 sample surface/ml) for 24h at 37°C. Vitrebond (3M ESPE) served as a positive control. Exposure of tHPCs to dilutions of the extracts was stopped after 24h, and cell survival was determined photometrically after staining the cells with crystal violet. The generation of reactive oxygen species (ROS) was determined after a 1h exposure of the cells to extracts. ROS were detected by staining the cells with H2DCF-DA, and fluorescence was measured by flow cytometry (FACS). The genotoxicity as indicated by the formation of micronuclei was determined in V79 cells after a 24h exposure period. The modification of the normal cell cycle was analyzed by FACS. Differences between cell survival rates and fluorescence levels were statistically analyzed (Mann-Whitney-U test, p<0.05). The ranking of the cytotoxic effects based on EC50 values was as follows: Vitrebond > Hydro C > MTA gray = MTA white >>> COB. Extract of COB even induced cell proliferation, but Hydro C decrease cell survival in a doserelated manner. ROS production was not detected with any experimental material (p>0,05). Vitrebond increased ROS production about sevenfold (p<0,05). The increase in the number of micronuclei and cell cycle delay in V79 cells were not detected with any experimental material in relation to control group. COB and MTA (gray and white) did not negatively influence cell viability and ROS production. HC presented cytotoxic... (Complete abstract, click electronic access below)

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Alpinia zerumbet, conhecida popularmente como colÃnia no Nordeste do Brasil, Ã uma planta medicinal usada amplamente na medicina popular na forma de chÃs e infusÃes para o tratamento de doenÃas cardiovasculares, como a hipertensÃo arterial. O intenso consumo popular dessas infusÃes levou-nos a avaliar o perfil toxicolÃgico e genotoxicolÃgico do extrato aquoso e do Ãleo essencial das folhas de A. zerumbet. Esse estudo foi avaliado pelos ensaios de curta duraÃÃo in vivo e in vitro. Inicialmente foi avaliada a citotoxicidade e o efeito hemolÃtico in vitro, porÃm nÃo houve resposta tÃxica. A DL50 encontrada para o extrato aquoso foi >5 g/Kg, demonstrando que os princÃpios ativos do extrato apresentam baixa toxicidade. Os estudo de genotoxicidade foram realizados in vivo. Os animais foram tratados, por via oral, com trÃs doses do extrato aquoso (2 g/Kg, 3,5 g/Kg e 5 g/Kg) e com a dose de 400 mg/Kg do Ãleo essencial. ApÃs 24h e 48h, o sangue perifÃrico e a medula Ãssea foram coletados. No ensaio do cometa nÃo houve detecÃÃo de nenhum cometa de grau elevado e as anÃlises estatÃsticas demonstraram um P<0,01 (grau de significÃncia: P<0,05) para todas as amostras em relaÃÃo ao controle positivo e um P>0,05 (grau de significÃncia: P<0,05) para as amostras em relaÃÃo ao controle negativo. No ensaio do micronÃcleo, todas as doses do extrato aquoso e do Ãleo essencial tiveram diferenÃa estatisticamente significante em relaÃÃo a ciclofosfamida, um antineoplÃsico citotÃxico, com um P<0,001 e um P>0,05 em relaÃÃo ao controle negativo (significÃncia: P<0,05). Todos esses resultados indicam que o extrato aquoso e o Ãleo essencial das folhas de A. zerumbet nÃo apresentam aÃÃes citotÃxicas nem genotÃxicas nos modelos testados. / Alpinia zerumbet, known ordinarily as colony in Northwestern Brazil, is a medicinal plant widely used in popular medicine as tea and infusions for the treatment of intestinal and cardiovascular illnesses, such as hypertension. Due to the high levels of consumption of such infusions, we have sought to evaluate the toxicological and genotoxicological profile of the tea and essential oil made from A. zerumbet leaves. This study has been evaluated by short term in vivo and in vitro trials. We initially evaluated the cytotoxicity and the hemolytic effect in vitro; however, there was no toxic response. The DL50 found for the tea was of >5 mg/Kg, which demonstrates that the active principles of the tea present low toxicity. The genotoxicity trials were carried out in vivo. The animal received treatment orally, with three doses of the tea (2 g/Kg, 3,5 g/Kg and 5 g/Kg) and with a dosage of 400 mg/Kg of the essential oil. Peripheral blood and bone marrow were collected after 24 and 48 hours. In the comet trial no high level comets were detected and the statistical analyses demonstrate a P<0,01 (significance: P<0,05) for all samples when compared to the positive control and a P<0,05 (significance: P<0,05) for samples in relation to the negative control. In the micronucleus test, all doses of the tea and essential oil presented a statistically significant difference in relation to cyclofosfamide, with a P < 0.001 and a P > 0.05 compared with the negative control (significance: P<0,05). All those results indicate that the tea and essential oil made from A. zerumbet leaves do not present cytotoxic or genotoxic action in the tested models.