Resumo: O objetivo desse trabalho primeiramente foi, comparar as técnicas coproparasitológicas, Sheater (1929) e Faust (1938), nas diferentes populações, felina e canina, provenientes de ambientes com condições sanitárias distintas, analisando concomitantemente dados como sexo e faixa etária. Os isolados positivos, ou seja, aqueles animais que foram observados cistos de Giardia sp. no material fecal, foram isolados, juntamente com os animais negativos as técnicas anteriormente citadas, para serem submetidos à técnica molecular e responder ao outro objetivo do trabalho, ou seja, comparar métodos diagnósticos, coproparasitológicos e moleculares.Tanto na população canina quanto na felina, numericamente a técnica de Faust mostrou-se mais eficiente, porém somente na população felina a diferença foi estatisticamente significativa. A faixa etária mais acometida pelo protozoário nos cães foi a ,de 3 a 6 meses, e nos gatos foi na maior de 6 meses. Quanto ao sexo, os machos da população albergada e as fêmeas da população canina domiciliada obtiveram valores numericamente superiores. Na população felina os machos que mais foram acometidos pela infecção. Ao comparar técnica molecular com coproparasitológica, na população canina não houve diferença estatística, porém numericamente o valor do resultado para técnica coproparasitológica foi superior a molecular. Na população felina observou-se resultado estatístico significativo entre as técnicas moleculares e coproparasitológica., sendo a molecular mais eficiente. O presente trabalho direciona o Médico Veterinário na rotina clínica, tanto na escolha da melhor técnica, diagnóstica, quanto na situação mais apropriada para adoção de medidas profiláticas, tendo em vista a relevância do protozoário pesquisado.

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Milena Araúz Viol / Resumo: Giardia duodenalis é um protozoário flagelado que coloniza o trato intestinal de hospedeiros vertebrados. A caracterização molecular de G. duodenalis revolucionou a compreensão da taxonomia, diversidade genética e epidemiologia da giardíase em seres humanos e animais. Em nosso estudo, realizamos a caracterização molecular de G. duodenalis em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil. Assim, foram colhidas 183 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. Estas amostras foram examinadas por meio da reação em cadeia pela polimerase tipo para amplificação da subunidade menor do gene do RNA ribossômico, todas as amostras positivas por esse gene, foram caracterizadas para amplificação parcial dos genes beta-giardina, glutamato desidrogenase e triosefosfato isomerase. G. duodenalis foi verificada em 6,56% das amostras fecais e por meio da análise das sequências, verificou-se 100% de similaridade genética com "assemblage" E. Esta foi a primeira detecção de G. duodenalis "assemblage" E em bezerros bubalinos no Brasil. / Abstract: Giardia duodenalis is a flagellated protozoan that colonizes the intestinal tract of vertebrate hosts. A molecular characterization of G. duodenalis revolutionized an understanding of the taxonomy, genetic diversity and epidemiology of giardiasis in humans and animals. In our stud, we performed the molecularly characterization of Giardia duodenalis in buffalo calves from State of São Paulo, Brazil. Then, 183 fecal samples of Murrah buffaloes were collected up to six months of age. These samples were examined by nested polymerase chain reaction for parcial amplification of the small subunit of the ribosomal RNA gene. All G. duodenalis-positive samples were characterized by beta-giardin, glutamate dehydrogenase and triosephosphate isomerase genes. G. duodenalis was detected in 6,56% of the faecal samples, and sequence analysis showed 100% genetic similarity with assemblage E. This was the first detection of G. duodenalis assemblage E in buffalo calves in Brazil. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-21Bitstream added on 2014-06-13T19:26:14Z : No. of bitstreams: 1 matos_dj_me_araca.pdf: 760484 bytes, checksum: c06dae3728a9ffd470f98e2c615bdd6d (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em leitões com 45 dias de idade. Amostras fecais de 107 leitões foram colhidas, em três dias alternados, em suinoculturas do Município de Araçatuba, São Paulo, Brasil. A ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp., foi observada em 4,7% (5/107) dos animais usando a técnica de Kinyoun, e a detecção de oocistos de Giardia spp. foi concomitantemente observada em 1,9% (2/107) dos animais pelo método de Faust.. Animais com a presença concomitante de ambos os parasitos apresentaram fezes com aspecto diarréico. A partir dos resultados obtidos é possível inferir que a ocorrência de Cryptosporidium e Giardia foi baixa, o que se atribuiu ao manejo e que a presença destes protozoários não estava associada a todos animais com sintomas diarréicos envolvidos no estudo. / The goal of this research was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in 45-days-old pigs. Fecal samples of 107 pigs were collected at three alternate days in piggeries in Araçatuba, São Paulo, Brazil. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 4.7% (5/107) of animals by means of Kinyoun acid-fast stain and cysts of Giardia spp. were simultaneously observed in 1.9% (2/107) of the animals by the method of Faust. Animals with positivity for the both parasites presented feces with diarrheal aspect. From these results it is possible to infer that the occurrence of Cryptosporidium and of Giardia was low because of the good management practices and both protozoa were not associated the presence of clinical symptoms.

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em leitões com 45 dias de idade. Amostras fecais de 107 leitões foram colhidas, em três dias alternados, em suinoculturas do Município de Araçatuba, São Paulo, Brasil. A ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp., foi observada em 4,7% (5/107) dos animais usando a técnica de Kinyoun, e a detecção de oocistos de Giardia spp. foi concomitantemente observada em 1,9% (2/107) dos animais pelo método de Faust.. Animais com a presença concomitante de ambos os parasitos apresentaram fezes com aspecto diarréico. A partir dos resultados obtidos é possível inferir que a ocorrência de Cryptosporidium e Giardia foi baixa, o que se atribuiu ao manejo e que a presença destes protozoários não estava associada a todos animais com sintomas diarréicos envolvidos no estudo. / Abstract: The goal of this research was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in 45-days-old pigs. Fecal samples of 107 pigs were collected at three alternate days in piggeries in Araçatuba, São Paulo, Brazil. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 4.7% (5/107) of animals by means of Kinyoun acid-fast stain and cysts of Giardia spp. were simultaneously observed in 1.9% (2/107) of the animals by the method of Faust. Animals with positivity for the both parasites presented feces with diarrheal aspect. From these results it is possible to infer that the occurrence of Cryptosporidium and of Giardia was low because of the good management practices and both protozoa were not associated the presence of clinical symptoms. / Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Fernanda Paiva / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:45:15Z : No. of bitstreams: 1 martins_gz_dr_arafcf.pdf: 1489447 bytes, checksum: 0af9b576dfb9149599192bc470b24ff5 (MD5) / Devido ao negligenciamento e ao aumento de números de casos das doenças microbianas e parasitárias no Brasil, o aprimoramento da investigação científica e tecnológica na área de plantas medicinais faz-se indispensável para à busca de novos produtos antimicrobianos e antiparasitários. A Solanum lycocarpum St. Hill. (Solanaceae) é uma planta medicinal tradicionalmente utilizada na forma de polvilho de lobeira como terapia complementar para o tratamento do Diabetes Mellitus, hipocolesterolêmico e na hipertensão. Os efeitos terapêuticos são atribuídos aos dois glicoalcaloides predominantes nas espécies do gênero Solanum, a solamargina e a solasonina. Em face ao exposto o objetivo desta pesquisa foi o isolamento de solasonina e solamargina de frutos maduros de S. lycocarpum e o screening de atividades antimicrobiana, antiparasitária, antioxidante e citotóxica do extrato etanólico 96 % bruto, frações e dos glicoalcaloides. O extrato etanólico 96 % bruto foi obtido por refluxo utilizando como solvente etanol 96 ºGL e seco sobre pressão reduzida. O isolamento dos glicoalcalóides foi realizado por meio de sequência de técnicas cromatográficas. Foram analisadas as atividades, antimicrobiana (E. faecalis, S. salivarius, S. sobrinus, S. mutans, S. mitis, S. sanguinis, L. casei, B. subtilis, P. aeruginosa, Salmonella enterican, E. faecalis, S. aureus, E. coli, C. albicans, A. niger, A. flavus e Fusarium sp.), antiparasitária (Giardia lamblia, Leishmania infantum, Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei), antioxidante e citotóxica. No processo de purificação foram obtidas 6 frações e nas sub-frações 2.5 e 2.7 foram isolados os glicoalcalóides solasonina (Rf = 0,46) e solamargina (Rf = 0,57), respectivamente. Apresentaram atividade parasitária para Giardia lamblia (extrato etanólico 96 % (v/v) bruto, fração etanólica 40 % (v/v) frações F1 e F2), Leishmania infantum... / The neglect and increased of the numbers of cases of microbial and parasitic diseases in Brazil and the improvement of scientific and technological research in the medicinal plants has contributed for the search of new antimicrobials and antiparasitic. The Solanum lycocarpum St. Hill. (Solanaceae) is a medicinal plant traditionally used as complementary therapy for the treatment of Diabetes Mellitus, hypocholesterolemic and hypertension. The therapeutic effects are attributed to the two predominant glycoalkaloids in Solanum species, the solamargine and the solasonina. In view of the above, the objective of this research was to isolate solasonina and solamargine of ripe fruits of S. lycocarpum and screening of antimicrobial, antiparasitic, antioxidant and cytotoxicity activities of crude extract 96% ethanol, fractions and glycoalkaloids. The crude extract 96% ethanol was obtained by reflux with as solvent ethanol 96 º GL and reduced pressure dried. The isolation of glycoalkaloids was performed by chromatographic techniques. We analyzed the activity, antimicrobial (E. faecalis, S. salivarius, S. sobrinus, S. mutans, S. mitis, S. sanguinis, L. casei, B. subtilis, P. aeruginosa, Salmonella enterican, E. faecalis, S. aureus, E. coli, C. albicans, A. niger, A. flavus and Fusarium sp.), antiparasitic (Giardia lamblia, Leishmania infantum, Trypanosoma cruzi and Trypanosoma brucei), antioxidant and cytotoxicity. In the purification process were obtained six fractions and the in the sub-fractions 2.5 and 2.7 were isolated the glycoalkaloids, solasonina (Rf = 0.46) and solamargine (Rf = 0.57). Showed activity for parasite Giardia lamblia (crude extract 96% ethanol, ethanol fraction 40%, fractions F1 and F2), Leishmania infantum (crude extract 96% ethanol, ethanol fraction 40%, fractions F1, F2 and F3)... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Cleopatra da Silva Planeta / Coorientador: Raquel Regina Duarte Moreira / Banca: Regina Maria Barreto Cicarelli / Banca: Fernanda Scarmato De Rosa / Banca: João Aristeu da Rosa / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Resumo: Devido ao negligenciamento e ao aumento de números de casos das doenças microbianas e parasitárias no Brasil, o aprimoramento da investigação científica e tecnológica na área de plantas medicinais faz-se indispensável para à busca de novos produtos antimicrobianos e antiparasitários. A Solanum lycocarpum St. Hill. (Solanaceae) é uma planta medicinal tradicionalmente utilizada na forma de polvilho de lobeira como terapia complementar para o tratamento do Diabetes Mellitus, hipocolesterolêmico e na hipertensão. Os efeitos terapêuticos são atribuídos aos dois glicoalcaloides predominantes nas espécies do gênero Solanum, a solamargina e a solasonina. Em face ao exposto o objetivo desta pesquisa foi o isolamento de solasonina e solamargina de frutos maduros de S. lycocarpum e o screening de atividades antimicrobiana, antiparasitária, antioxidante e citotóxica do extrato etanólico 96 % bruto, frações e dos glicoalcaloides. O extrato etanólico 96 % bruto foi obtido por refluxo utilizando como solvente etanol 96 ºGL e seco sobre pressão reduzida. O isolamento dos glicoalcalóides foi realizado por meio de sequência de técnicas cromatográficas. Foram analisadas as atividades, antimicrobiana (E. faecalis, S. salivarius, S. sobrinus, S. mutans, S. mitis, S. sanguinis, L. casei, B. subtilis, P. aeruginosa, Salmonella enterican, E. faecalis, S. aureus, E. coli, C. albicans, A. niger, A. flavus e Fusarium sp.), antiparasitária (Giardia lamblia, Leishmania infantum, Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei), antioxidante e citotóxica. No processo de purificação foram obtidas 6 frações e nas sub-frações 2.5 e 2.7 foram isolados os glicoalcalóides solasonina (Rf = 0,46) e solamargina (Rf = 0,57), respectivamente. Apresentaram atividade parasitária para Giardia lamblia (extrato etanólico 96 % (v/v) bruto, fração etanólica 40 % (v/v) frações F1 e F2), Leishmania infantum... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The neglect and increased of the numbers of cases of microbial and parasitic diseases in Brazil and the improvement of scientific and technological research in the medicinal plants has contributed for the search of new antimicrobials and antiparasitic. The Solanum lycocarpum St. Hill. (Solanaceae) is a medicinal plant traditionally used as complementary therapy for the treatment of Diabetes Mellitus, hypocholesterolemic and hypertension. The therapeutic effects are attributed to the two predominant glycoalkaloids in Solanum species, the solamargine and the solasonina. In view of the above, the objective of this research was to isolate solasonina and solamargine of ripe fruits of S. lycocarpum and screening of antimicrobial, antiparasitic, antioxidant and cytotoxicity activities of crude extract 96% ethanol, fractions and glycoalkaloids. The crude extract 96% ethanol was obtained by reflux with as solvent ethanol 96 º GL and reduced pressure dried. The isolation of glycoalkaloids was performed by chromatographic techniques. We analyzed the activity, antimicrobial (E. faecalis, S. salivarius, S. sobrinus, S. mutans, S. mitis, S. sanguinis, L. casei, B. subtilis, P. aeruginosa, Salmonella enterican, E. faecalis, S. aureus, E. coli, C. albicans, A. niger, A. flavus and Fusarium sp.), antiparasitic (Giardia lamblia, Leishmania infantum, Trypanosoma cruzi and Trypanosoma brucei), antioxidant and cytotoxicity. In the purification process were obtained six fractions and the in the sub-fractions 2.5 and 2.7 were isolated the glycoalkaloids, solasonina (Rf = 0.46) and solamargine (Rf = 0.57). Showed activity for parasite Giardia lamblia (crude extract 96% ethanol, ethanol fraction 40%, fractions F1 and F2), Leishmania infantum (crude extract 96% ethanol, ethanol fraction 40%, fractions F1, F2 and F3)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Anete Pereira de Souza. / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:07:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Durigan_Mauricio_D.pdf: 7600085 bytes, checksum: 74ae2337a73b6edfb14a403af4ffa590 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Giardia duodenalis é um protozoário flagelado que parasita o homem e diversos animais domésticos e selvagens. Este parasito causa a doença giardiose que é uma das mais prevalentes doenças parasitárias de veiculação hídrica do mundo, responsável por aproximadamente 280 milhões de casos anualmente. Existe uma considerável variabilidade genética em G. duodenalis, de modo que seus isolados foram divididos em oito grupos genéticos (A-H), dois dos quais (A e B) são encontrados tanto em humanos quanto em animais. Os demais grupos (C-H) parasitam outros animais e apresentam maior especificidade a determinados hospedeiros não humanos. A contaminação ambiental por Giardia tem sido amplamente descrita embora esses estudos, em sua maioria, são realizados no nível de identificação de espécie. Há falta de estudos que correlacionam a contaminação ambiental e infecções clínicas na mesma região. O presente trabalho teve como objetivo principal contribuir para o conhecimento da diversidade genética da espécie Giardia duodenalis. Primeiramente, foi realizada a genotipagem multilocos dos principais grupos genéticos de G. duodenalis na região metropolitana de Campinas. Foram encontrados grupos genéticos associados principalmente a infecções humanas bem como isolados com potencial zoonótico em amostras ambientais e obtidas de outros animais. Foi encontrado um alto percentual (25%) de amostras com grupos genéticos mistos e um elevado número de haplótipos distintos, indicando grande diversidade genética do parasito nessa região. Na segunda parte deste trabalho, foi realizado um estudo populacional com amostras clínicas de Giardia provenientes de hospital, creche e centro de controle de zoonoses e amostras ambientais de esgoto hospitalar, efluente de estação de tratamento de esgoto e amostras hídricas de importantes rios e córregos urbanos. As análises populacionais, com exceção das amostras caninas, evidenciaram grande similaridade genética entre essas populações de Giardia. Na terceira parte do presente trabalho, foi realizada uma busca por repetições microssatélites (SSRs) nos genomas publicados de Giardia para desenvolvimento, caracterização e avaliação de polimorfismo de novos marcadores microssatélites. Foram encontrados 506, 438, 402 e 507 microssatélites correspondentes aos genomas AI, AII, B e E, respectivamente. Foram selecionados 80 SSRs específicos aos grupos genéticos A, B e E (40, 20 e 20, respectivamente), além de 36 SSRs compartilhados entre os três genomas. A análise de amplificação confirmou a existência de marcadores específicos aos grupos genéticos A, B e E, além de marcadores compartilhados entre os grupos. A caracterização dos SSRs permitiu a detecção de 12 locos SSRs polimórficos do grupo genético A e sete locos SSRs polimórficos do grupo genético B. Dentre os marcadores compartilhados, o loco GduABE01 apresentou polimorfismo. Os locos polimórficos podem servir para futuros estudos populacionais e os marcadores desenvolvidos podem ser utilizados para identificação dos principais grupos genéticos de G. duodenalis em amostras clínicas e ambientais. Os resultados apresentados contribuem para um melhor entendimento sobre a diversidade genética do parasito bem como sobre a presença de grupos com potencial zoonóticos inter-relacionados em diferentes regiões. Os novos marcadores moleculares disponibilizados podem contribuir para novos estudos populacionais, promovendo melhor discriminação entre os genótipos e possibilitando assim identificar a contaminação e promover o rastreamento da doença / Abstract: Giardia duodenalis is a flagellate protozoan that that parasites humans and several domestic and wild animals. This parasite causes giardiasis, one of the most common waterborne diseases in the world responsible for, approximately 280 million cases per year. There is a great genetic diversity in this species and its isolates have been grouped into eight distinct genetic assemblages (A-H). While groups A and B parasitize different hosts and have zoonotic potential, groups C, D, E, F, G and H usually found in animals and show greater specificity to the parasitized host. Environmental contamination for Giardia has been widely reported however, most of these studies have been performed only at species level. The present study aimed to contribute to the knowledge of the genetic diversity of the species Giardia duodenalis. In the first chapter of this document, multilocus sequence-based genotyping using three gene loci assigned most of the samples as belonging to human genotypes although isolates with zoonotic potential have also been identified in environmental and non-human clinical samples. A high percentage (25%) of mixed assemblages and a high number of different haplotypes were detected, which indicates high genetic diversity of this parasite in this region. In the second chapter, a population genetics study was performed with clinical samples from hospital, day-car center and a center for zoonosis control of the city and environmental samples from hospital sewage, effluent of a wastewater treatment plant and important water samples from rivers and urban streams. With the exception of the canine population, population genetic analysis showed consistent similarity between clinical and environmental populations. In the last chapter, we performed a search for microsatellites (SSRs) in the published genomes of Giardia to develop and characterize the polymorphism of new microsatellite markers. Our group identified 506, 438, 402 and 507 microsatellites of the genomes AI, AII, B and E, respectively. We have selected 80 markers specific to the genetic assemblages A, B and E (40, 20 and 20, respectively) and 36 shared SSRs between the three genomes. Analysis of amplification reactions confirmed the existence of specific loci of each genetic assemblage as well as shared loci among assemblages. Characterization of all loci allowed the detection of 12 polymorphic loci for group A and seven polymorphic loci for group B. Among the shared markers, GduABE01 presented polymorphism. The polymorphic markers can be used in future population genetic studies and the developed markers can contribute to the identification of the main genetic assemblages of G. duodenalis in clinical and environmental samples. The results presented here contribute to a better understanding of the genetic diversity of the parasite as well as the presence of zoonotic potential genotypes, related in different regions. The new molecular markers provided can contribute with population genetic studies in a high level of discrimination that allows identifying the source of contamination and molecular tracking of the disease / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica e Biologia Molecular